JPS5933222A - Antitumor agent containing synthetic deoxyribonucleic acid as active component - Google Patents
Antitumor agent containing synthetic deoxyribonucleic acid as active componentInfo
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- JPS5933222A JPS5933222A JP14339882A JP14339882A JPS5933222A JP S5933222 A JPS5933222 A JP S5933222A JP 14339882 A JP14339882 A JP 14339882A JP 14339882 A JP14339882 A JP 14339882A JP S5933222 A JPS5933222 A JP S5933222A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
薬として許容される塩を有効成分とすることを特徴とす
る抗腫瘍剤に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to an antitumor agent characterized by containing a pharmaceutically acceptable salt as an active ingredient.
本発明者等は先に結核菌から得られる抗腫瘍活性物質に
ついて広範な検討を加えた結果、結核菌の細胞質成分か
ら得られる加熱変性デオキシリボ核酸が宿主介在性の強
力な抗腫瘍活性を有し、かつ毒性および抗原性が極めて
低いことを初めて見い出し特許（特願昭５６−２３６６
９）を出願した。The present inventors previously conducted extensive studies on antitumor active substances obtained from Mycobacterium tuberculosis, and found that heat-denatured deoxyribonucleic acid obtained from cytoplasmic components of Mycobacterium tuberculosis has strong host-mediated antitumor activity. It was discovered for the first time that it has extremely low toxicity and antigenicity.
9) was filed.
従来よりデオキシリボ核酸の抗腫瘍活性に関しては、そ
の報告例は含んど見られず、わずかに動物細胞由来のデ
オキシリボ核酸が抗腫瘍活性を有するという報告が１９
６５年頃（Ｓｃｉｅｎｃｅ１４９。Until now, there have been no reports regarding the antitumor activity of deoxyribonucleic acid, and there have been only a few reports that deoxyribonucleic acid derived from animal cells has antitumor activity19.
Around 1965 (Science 149.
９９７、１９６５）より散見されるのみである。しかし
ながら、それらの抗腫瘍活性は低く、かつデオキシリボ
核酸と標的たる腫瘍細胞には種特異性が必要とされてい
る。捷だ、その作用機序は腫瘍細胞の代謝を変えること
により腫瘍細胞を致死せしめる作用、即ち腫瘍細胞に対
する直接傷害作用と考えられた（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ ２７，２３４１１９６７、Ｐｒｏｃｅｅｄ
ｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅ
ｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６１，２０７．１９
６８）。997, 1965). However, their antitumor activity is low, and species specificity is required for the deoxyribonucleic acid and the target tumor cells. The mechanism of action was thought to be that it kills tumor cells by altering their metabolism, that is, it is a direct damaging effect on tumor cells (Cancer Res).
27, 23411967, Proceed
ings of the National Academy
my of Science 61,207.19
68).
また、上記のデオキシリボ核酸は、いずれも細胞よりの
抽出物であり、抗腫瘍剤としての応用にはいくつかの問
題点を有している。Furthermore, the above-mentioned deoxyribonucleic acids are all extracts from cells and have several problems when applied as antitumor agents.
例えば、■これらはいずれもヒトにとって異種生物の高
分子物であるため、副作用としてアレルギー反応の生ず
る可能性が全くは否定できないこと、■細胞よりの抽出
物であるため再現性良く同一物を得ることが困難である
ことなどがそれである。For example, ■ Since these are polymeric substances that are foreign to humans, the possibility of allergic reactions occurring as a side effect cannot be completely ruled out; ■ Because they are extracts from cells, the same products can be obtained with good reproducibility. For example, it is difficult to do something.
本発明者らは低毒性で副作用の少ない合成化合物の抗腫
瘍活性物質を得ることを目的として鋭意検討を重ねた結
果、種々の一本鎖、あるいは二本鎖合成ポリデオキシリ
ボヌクレオチド（合成デオキシリボ核酸）が強力な抗腫
瘍活性を有することを見い出し、本発明を完成するに至
った。本発明者らは本発明の有効成分の抗腫瘍スペクト
ルを調べたところ、後に示すようにマウスの同系腫瘍で
あるＩＭＣ力ルチノーマ、ＭｅｔｈＡフィプロザルコー
マ、ルイス、ランク、カルチノーマ（ＬＬＣ）ならびに
モルモツトの同系腫瘍ライン１０等の腫瘍系に対して本
発明の有効物はいずれも高い抗腫瘍活性を示し、しかも
その毒性および抗原性は極めて低いことが判明した。ま
た、本発明の有効成分を試験管内で腫瘍細胞と培養して
も細胞増殖抑制作用はほとんどみられないことから、本
発明の有効成分はいずれも宿主介在性の抗腫瘍作用を示
すと考えられる。The present inventors have conducted intensive studies with the aim of obtaining anti-tumor active substances of synthetic compounds with low toxicity and few side effects. As a result, various single-stranded or double-stranded synthetic polydeoxyribonucleic acid The present inventors have discovered that the compound has strong antitumor activity, leading to the completion of the present invention. The present inventors investigated the antitumor spectrum of the active ingredient of the present invention and found that it was found to be effective in mice with syngeneic tumors such as IMC lutinoma, MethA fiprosarcoma, and Lewis, Rank, carcinoma (LLC), as well as in guinea pigs. It was found that all of the effective substances of the present invention exhibited high antitumor activity against tumor lines such as syngeneic tumor line 10, and their toxicity and antigenicity were extremely low. Furthermore, even when the active ingredients of the present invention are cultured with tumor cells in vitro, almost no cell proliferation inhibitory effect is observed, so it is considered that all of the active ingredients of the present invention exhibit host-mediated antitumor effects. .
さらに、本発明の有効成分のナチュラルキラー活性に及
ぼす作用を調べたところ、それらはいずれも高水準の活
性増強効果を示しだ。近年宿主介在性抗腫瘍活性の担い
手としてのナチーラルキラーの役割が注目さ斤つつある
が、この活性増強作用が少なくとも、本発明の有効成分
の抗腫瘍作用機構の有力な一つの根拠を提示しているも
のと考えられる。Furthermore, when the effects of the active ingredients of the present invention on natural killer activity were investigated, they all showed a high level of activity-enhancing effect. In recent years, the role of natural killer as a carrier of host-mediated antitumor activity has been attracting attention, and this activity-enhancing effect provides at least one strong basis for the antitumor action mechanism of the active ingredient of the present invention. considered to be a thing.
本発明の有効成分は、特許請求範囲の第１項から第１６
項に記載されているが、いずれもが公知の物質であり、
化学的あるいは生化学的に公知の方法で合成される。そ
れ故その合成条件によって本発明の有効物の分子量は様
々であるものの、いずれの有効成分の場合も分子量（ゲ
ル濾過法に依る）は５千以上がその活性発現に望捷しい
が、最も望ましくは分子量が３万〜１０万である。The active ingredients of the present invention are defined in claims 1 to 16 of the claims.
However, all of them are known substances,
It is synthesized by chemically or biochemically known methods. Therefore, although the molecular weight of the active substance of the present invention varies depending on the synthesis conditions, for any active ingredient, a molecular weight (based on gel filtration method) of 5,000 or more is desirable for the expression of its activity, but it is most desirable. has a molecular weight of 30,000 to 100,000.
本発明の医薬は通常の抗腫瘍剤と同様の剤型および投与
方法によりこれを用いることができる。The medicament of the present invention can be used in the same dosage form and administration method as conventional antitumor agents.
例えば、経口投与剤としては、カプセル剤、顆粒剤、火
剤、細粒剤、錠剤、シロップ剤などとじて用いることが
できる。また、直腸内投与剤としては坐剤が適当である
。注射剤としては、単独であるいは通常用いられる添加
剤、賦型剤を加えて液剤あるいは同時溶解型の凍結乾燥
製剤として、皮下、筋肉内、静脈内膜内または腫瘍内投
与などの投与経路で用いることができる。For example, for oral administration, capsules, granules, gunpowders, fine granules, tablets, syrups, etc. can be used. Suppositories are also suitable as intrarectal administration agents. As an injection, it can be used alone or with commonly used additives and excipients as a liquid or co-dissolved lyophilized preparation for administration routes such as subcutaneous, intramuscular, intravenous, or intratumoral administration. be able to.
さらに、本発明の有効成分は油中水滴型あるいは水中油
滴型のエマルジョンとしても適用可能である。Furthermore, the active ingredient of the present invention can be applied as a water-in-oil or oil-in-water emulsion.
本発明の医薬を抗腫瘍剤として投与することが適当な疾
患としては、例えば胃癌、大腸癌、直腸癌、乳癌、肝癌
、子宮癌などの癌腫、細網肉腫、リンパ肉腫などの肉腫
、白血病などの疾患があり、自覚的または他覚的症状の
改善が期待できる。Examples of diseases for which the medicament of the present invention is suitable for administration as an antitumor agent include carcinomas such as gastric cancer, colon cancer, rectal cancer, breast cancer, liver cancer, and uterine cancer, sarcomas such as reticular sarcoma and lymphosarcoma, and leukemia. disease, and improvement of subjective or objective symptoms can be expected.
本発明の医薬の投与法および剤型は癌（腫瘍）の種類、
患者の状態などに応じて適宜選択することが望ましい。The administration method and dosage form of the medicament of the present invention include the type of cancer (tumor),
It is desirable to select it appropriately depending on the patient's condition.
投与量は経口投与の場合、１日量は１０ｍｐないし１０
０ｍ９、直腸内投与の場合には１０ｍりないし１００ｍ
９、静脈内投与の場合には１ｍｇないし５０■、皮下投
与、筋肉投与捷たは腫瘍内投与の場合には０ 、１ ｍ
９ないし５ ｍ９がそれぞれ適当であるが、これらの投
与量についてはその癌（腫瘍）の種類、患者の状態など
に応じてさらに適当量を選定することが望ましい。まだ
その癌（腫瘍）の種類、患者の状態によっては必要に応
じて他の薬剤を併用することにより、本発明の有効成分
の治療効果を泡大させることも可能である。In the case of oral administration, the daily dose is 10mp to 10mpg.
0m9, 10m to 100m for rectal administration
9. 1 mg to 50 mg for intravenous administration, 0.1 m for subcutaneous, intramuscular, or intratumoral administration
Although 9 to 5 m9 are appropriate, it is desirable to select a more appropriate dose depending on the type of cancer (tumor), patient's condition, etc. However, depending on the type of cancer (tumor) and the condition of the patient, it is possible to enhance the therapeutic effect of the active ingredient of the present invention by using other drugs in combination as necessary.
例をあげれば癌の化学療法剤、例えばアルキル化剤、代
謝拮抗剤などが強力な副作用を持っているので、そのよ
うな薬剤を投与する場合に本発明の有効成分を併用する
ことにより、それらの薬剤の副作用の発現を軽減あるい
は防止せしめ相乗的に治療効果を高めることが期待でき
る。For example, chemotherapy drugs for cancer, such as alkylating agents and antimetabolites, have strong side effects. It can be expected to reduce or prevent the occurrence of side effects of drugs and synergistically enhance therapeutic effects.
製剤の製造方法は一般の抗腫瘍剤において通常よく用い
られる処方および製造方法に従ってよい。The manufacturing method of the preparation may follow the formulation and manufacturing method commonly used for general antitumor agents.
本発明の有効成分の製剤の製造方法の若干を実施例に従
って詳述する。Some of the methods for producing the active ingredient formulations of the present invention will be described in detail according to Examples.
実施例１ 二本鎖ポリデオキシグアニル酸・ポリデオキ
シシチジル酸 ナトリウム塩を有効成分とする錠剤。Example 1 A tablet containing double-stranded polydeoxyguanylic acid/polydeoxycytidylic acid sodium salt as an active ingredient.
二本鎖ポリデオキシグアニル酸・ポリデオキシシチジル
酸 すトリウム塩（ゲル濾過法による分子量９．０〜９
．５万）５ｇ、乳糖５３．！９、トウモロコシデンプン
５０．９およヒ結晶セルロース３５！Ｊをよく混合し、
これをヒドロキシプロピルセルロース５ｇを水１００ｍ
１に溶解した液で練合造粒し７．５０°Ｃで４時間乾燥
する。これにステアリン酸マグネシウム２ｇを加えよく
混合し、打錠機を用い１錠あたり２００ｍ９の重景で打
錠し錠剤を得る。Double-stranded polydeoxyguanylic acid/polydeoxycytidylic acid storium salt (molecular weight 9.0-9 by gel filtration method)
．． 50,000) 5g, lactose 53. ! 9. Corn starch 50.9 and crystalline cellulose 35! Mix J well,
Add 5g of hydroxypropyl cellulose to 100ml of water.
The mixture was kneaded and granulated with the solution dissolved in 1 and dried at 7.50°C for 4 hours. Add 2 g of magnesium stearate to this mixture, mix well, and compress the mixture using a tablet machine at a density of 200 m9 per tablet to obtain tablets.
実施例２ 二本鎖ポリデオキシイノシン酸・ポリデオキ
シシチジル酸 すトリウム塩を有効成分とするカプセル
剤
二本鎖ポリデオキシイノシン酸・ポリデオキシシチジル
酸 ナトリウム塩（ゲル濾過法による分子量９．０〜９
．５万）５！ｊ、乳糖１２４，９．トウモロコシデンプ
ン９０ ｇ 、 結晶セルｏ−スフ ０ ｇオよびステ
アリン酸マグネシウム１１ｇをよく混合する。これをカ
プセル充填機にて硬カプセルに３００ ｍ９宛充填し、
カプセル剤を得る。Example 2 Capsule containing double-stranded polydeoxyinosinic acid/polydeoxycytidylic acid sodium salt as an active ingredient Double-stranded polydeoxyinosinic acid/polydeoxycytidylic acid sodium salt (molecular weight 9.0 by gel filtration method) ~9
．． 50,000) 5! j, lactose 124,9. 90 g of corn starch, 0 g of crystalline cell o-sufu and 11 g of magnesium stearate are mixed well. Fill 300 m9 of this into hard capsules using a capsule filling machine.
Obtain capsules.
実施例３ 二本鎖ポリデオキシアデニル酸・ポリデオキ
シチミジル酸 ナトリウム塩を有効成分とする注射剤
二本鎖ポリデオキシアデニル酸・ポリデオキシチミジル
酸 すｌ・リウム塩（ゲル濾過法による分子ｆｌｉ：９
．０〜９．５万）１．９および塩化ナトリウム０．５
、！７をとりこれを適址の注射用蒸留水に溶解し、全量
を１ｔとし注射剤とする。この注射剤は静脈内投与、皮
下投与、筋肉内または腫瘍内投与に適する。Example 3 Injection containing double-stranded polydeoxyadenylic acid/polydeoxythymidylic acid sodium salt as active ingredient Double-stranded polydeoxyadenylic acid/polydeoxythymidylic acid sulfur/lium salt (molecule fli: 9 by gel filtration method)
．． 0 to 95,000) 1.9 and sodium chloride 0.5
,! 7 and dissolve it in an appropriate amount of distilled water for injection to make a total volume of 1 t to prepare an injection. This injection is suitable for intravenous, subcutaneous, intramuscular or intratumoral administration.
本発明の医薬の有効成分は動物において強力な宿主介在
性の抗腫瘍活性を有し、その毒性は弱く、医薬として極
めて有用である。以下に、このことを試験例をもって説
明する。The active ingredient of the medicament of the present invention has strong host-mediated antitumor activity in animals, has low toxicity, and is extremely useful as a medicament. This will be explained below using test examples.
動物を用いて宿主介在性の抗腫瘍活性を試験するために
は幾つかの実験系が常用されているが、その中で最も代
表的なマウスならびにモルモットの同系腫瘍に対する抗
腫瘍試験の結果を以下に試験例として例示する。Several experimental systems are commonly used to test host-mediated antitumor activity using animals, but the most representative of these are the results of antitumor tests on syngeneic tumors in mice and guinea pigs. This is illustrated as a test example.
尚、以下の説明においては次に示す化合物番号を用いる
が、それらは、ゲル濾過法により決定される分子量が、
一本領化合物の場合は４〜５万、二本鎖化合物の場合は
９〜９．５万のものである。In the following explanation, the following compound numbers are used, but they have a molecular weight determined by gel filtration method.
In the case of single-stranded compounds, it is 40,000 to 50,000, and in the case of double-stranded compounds, it is 90,000 to 95,000.
化合物番号ｌニー重鎖、ポリデオキシグアニル酸ナトリ
ウム塩
゛化合物番号２ニ一本鎖、ポリデオキシフチジル酸ナト
リウム塩
化合物番号３ニ一本鎖、ポリデオキシチミジル酸ナトリ
ウム塩
化合物番号４ニ一本鎖、ポリデオキシアデニル酸ナトリ
ウム塩
化合物番号５ニ一本鎖、ポリデオキシイノシン酸ナトリ
ウム塩
化合物番号６：二本鎖、ポリデオキシアデル酸・ポリデ
オキシシチジル酸 ナトリウム塩化合物番号７二一本領
、ポリ（デオキシグアニル酸−デオキシシチジル酸）ナ
トリウム塩化合物番号８：二本鎖、ポリ（デオキシグア
ニル酸−デオキシシチジル酸）ナトリウム塩化合物番号
９：二本鎖、ポリデオキシアデニル酸・ポリデオキシシ
チジル酸 ナトリウム塩化合物番号ｌＯニー重鎖、ポリ
（デオキシアデニル酸−デオキシチミジル酸）ナトリウ
ム塩化合物番号１１：二本鎖、ポリ（デオキシアデニル
酸−デオキシチミジル酸）ナトリウム塩化合物番号１２
：二本鎖、ポリデオキシイノシン酸・ポリデオキシシチ
ジル酸 ナトリウム塩化合物番号１３ニ一本鎖、ポリ（
デオキシイノシン酸−デオキシシチジル酸）ナトリウム
塩化合物番号１４：二本鎖、ポリ（デオキシイノシン酸
−デオキシシチジル酸→ナトリウム塩試験例１． マ
ウスＭｅｔｈＡフィブロガルコーマに対する抗腫瘍活性
：
本発明の有効成分のマウスＭｅｔｈＡフィブロザルコー
マに対する抗腫瘍活性を調べた。試験系は次の通りであ
る。Compound No. 1 double heavy chain, polydeoxyguanylate sodium salt Compound No. 2 single chain, polydeoxyphtidylic acid sodium salt Compound No. 3 double chain, polydeoxythymidylic acid sodium salt Compound No. 4 double chain , polydeoxyadenylic acid sodium salt Compound No. 5 double-stranded, polydeoxyinosinic acid sodium salt Compound No. 6 double-stranded, polydeoxyadelic acid/polydeoxycytidylic acid sodium salt Compound No. 721 main chain, poly( Deoxyguanylic acid-deoxycytidylic acid) sodium salt Compound No. 8: Double-stranded, poly(deoxyguanylic acid-deoxycytidylic acid) sodium salt Compound No. 9: Double-stranded, polydeoxyadenylic acid/polydeoxycytidylic acid Sodium salt Compound No. 1O knee heavy chain, poly(deoxyadenylic acid-deoxythymidylic acid) sodium salt Compound No. 11: double chain, poly(deoxyadenylic acid-deoxythymidylic acid) sodium salt Compound No. 12
: Double-stranded, polydeoxyinosinic acid/polydeoxycytidylic acid sodium salt compound number 13, single-stranded, poly(
Deoxyinosinic acid-deoxycytidylic acid) sodium salt Compound No. 14: Double-stranded, poly(deoxyinosinic acid-deoxycytidylic acid) → sodium salt Test Example 1. Antitumor activity against mouse MethA fibrogalcoma: Effectiveness of the present invention The antitumor activity of the ingredients against mouse MethA fibrosarcoma was investigated.The test system was as follows.
Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／Ｃ系雌性マウス（１群ｌＯ匹）の側腹
部皮肉に２×１０５個の同系腫瘍ＭｅｔｈＡフィブロザ
ルコーマ細胞を移植し、移植後４日後から１回おきに計
６回実施例３に示された方法で調整した製剤を１回あだ
りＯ、ｌ ｍｌずつ腫瘍内に投与した。2 x 105 syngeneic tumor MethA fibrosarcoma cells were transplanted into the flank of BAL B/C female mice (10 mice per group), and carried out every other time for a total of 6 times starting 4 days after transplantation. The preparation prepared according to the method shown in Section 3 was administered intratumorally in an amount of 0.1 ml per dose.
移植後２５回目に腫瘍を摘出し、その重畦を測定した。The tumor was removed 25 times after transplantation, and its height was measured.
結果は第１表のとおりであった。The results are shown in Table 1.
第１表 ＭｅｔｈＡフィブロザルコーマに対スる抗腫瘍
作用
＊Ｐ（０，０５、４て＊Ｐ（０，旧
後述の検定を含めて平均腫瘍重量および治癒例数の出現
頻度の有意差検定にはそれぞれスチーーデントのｔ検定
法（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔ）と、フィッシ
ャーの検定法（Ｆｉｓｃｈｅｒ’ｓ ｔｅｓｔ）を用
いた。Ｔ／Ｃは対照群の平均腫瘍重量に対する投与群の
平均腫瘍重量のパーセント比でアル。Table 1: Antitumor effect of MethA on fibrosarcoma*P(0,05,4*P(0, former test for significant difference in average tumor weight and frequency of cured cases, including the test described below) Student's t-test and Fisher's test were used, respectively. T/C is the percentage of the average tumor weight of the treated group to the average tumor weight of the control group. Al in ratio.
また対照としては生理食塩液を用いた（後述の試験の場
合も同様）゛。Physiological saline was used as a control (the same applies to the tests described below).
試験例２． マウスＩＭＣカルチノーマに対する抗腫
瘍作用：
本発明の有効成分のマウスＩＭＣ力ルチノーマに対する
抗腫瘍活性を調べだ。試験系は次のとおりである。Test example 2. Antitumor activity against mouse IMC carcinoma: The antitumor activity of the active ingredient of the present invention against mouse IMC carcinoma was investigated. The test system is as follows.
ＣＤＦ１系雌性マウス（１群１０匹）の側腹部皮肉に５
×１０５個の同系腫瘍ＩＭＣ力ルチノーマ細胞を移植し
、移植後４回目から１日おきに実施例３に示された方法
で調整した製剤を１回あたり０．１ｍｅずつ腫瘍内に投
与した。移植後３５日後目に腫瘍を摘出し、その重量を
測定した。結果は第２表のとおりであった。Flank region of CDF1 female mice (10 mice per group)
×105 syngeneic tumor IMC rutinoma cells were transplanted, and from the fourth time after transplantation, the preparation prepared according to the method shown in Example 3 was administered into the tumor at a dose of 0.1 me every other day. 35 days after transplantation, the tumor was excised and its weight was measured. The results were as shown in Table 2.
第２表 ＩＭＣカルシノーマに対する抗腫瘍作用
試験例３． マウス、ルイス、ラング、カルチノーマ
に対する抗腫瘍作用：
本発明の有効成分のマウス、ルイス、ラング、カルチノ
ーマに対する抗腫瘍作用を調べた。Table 2 Antitumor effect test example 3 on IMC carcinoma. Antitumor effect on mice and Lewis Lang carcinoma: The antitumor effect of the active ingredient of the present invention on mouse Lewis Lang carcinoma was investigated.
試験系は次のとおりである。The test system is as follows.
Ｃ５□ＢＬ／６系雌注マウス（１群１０匹）の側腹部皮
肉に５×１０個の同系腫瘍ルイス、ラング、カルチノー
マ（Ｌｅｗｉｓ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ珊胞
を移植し、移植後１，４．８，１１，１５．１８日目に
実施例３に示された方法で調製した製剤を１回当り０．
２ｍｌずつ腫瘍内に投与した。移植後２６日目にｌ１ｌ
Ｔｉ瘍を摘出し、その重量を測定するとともに、肺にお
ける転移巣の数も調べた。結果は第３表に示しだ。5 x 10 syngeneic tumor Lewis, Lang, carcinoma (Lewis lung carcinoma) tumors were transplanted into the flanks of C5□BL/6 female mice (10 mice per group), and 1,4.8 days after transplantation. On days 11, 15, and 18, the preparation prepared by the method shown in Example 3 was administered at 0.00000000000000000000000000000000000000000000000000000 type type type type type form type form type form type form type form.
2 ml each was administered intratumorally. l1l on day 26 after transplantation
The Ti tumor was excised, its weight was measured, and the number of metastatic foci in the lungs was also examined. The results are shown in Table 3.
試験例、４ ストレイン２モルモットのライン】０ヘ
パＩ・−マに対する抗腫瘍作用：
本発明の有効成分のストレイン２モルモノトノライン１
０ヘパ］・−マに対する抗腫瘍作用を調べた。試験系は
次のとおりである。Test Example 4 Strain 2 guinea pig line] Antitumor effect against HepaI-Ma: Strain 2 mol monotonoline 1 of the active ingredient of the present invention
The antitumor effect against 0hepa]・-ma was investigated. The test system is as follows.
■×ｌＯ個のライン（ｌｉｎｅ） ｌ Ｏヘパトーマ腫
瘍細胞を同系のストレイン（ｓｔｒａｉｎ）２モルモッ
ト（１群６匹）の側腹部皮肉に移植し、移植後の１回目
から１日おきに計８回実施例３に示された方法で調製し
た製剤を１回当り０．４ｍｌずつ腫瘍内に投与した。移
植後８０日目に生存例数、治癒例数、所属リンパ節への
転移の有無を調べた。結果は第４表に示しだ。■×lO lines lO hepatoma tumor cells were transplanted into the flanks of two syngeneic strain guinea pigs (6 animals per group), 8 times in total every other day from the first time after transplantation. The preparation prepared by the method shown in Example 3 was administered intratumorally in an amount of 0.4 ml each time. On the 80th day after transplantation, the number of surviving cases, the number of cured cases, and the presence or absence of metastasis to regional lymph nodes were examined. The results are shown in Table 4.
第４表 ストレイン２モルモットのラインＩＯヘハト−
マに対する抗腫瘍作
用
＊Ｐ（０，０５
試験例１〜４に示した如く本発明の有効成分はマウスお
よびモルモットの同系腫瘍に対して強力な抗腫瘍作用を
示した。Table 4 Strain 2 Guinea pig line IO hehat
Antitumor effect against mice *P (0.05) As shown in Test Examples 1 to 4, the active ingredient of the present invention exhibited a strong antitumor effect against syngeneic tumors in mice and guinea pigs.
以上示された本発明の有効成分の抗腫瘍作用が腫瘍細胞
に対する直接阻害作用であるのか、あるいは宿主介在性
のものかを調べるため次の試験を行なった。The following tests were conducted to examine whether the antitumor effect of the active ingredient of the present invention shown above is a direct inhibitory effect on tumor cells or a host-mediated effect.
試験例５．細胞増殖直接阻害作用：
本発明の有効成分のＩＭＣ力ルチノーマ細胞なラヒにＭ
ｅｔｈＡフィブロザルコーマ細胞の増殖に対する直接阻
害作用を調べだ。試験系は次のとおりである。Test example 5. Direct inhibition of cell proliferation: The IMC effect of the active ingredient of the present invention is effective against rutinoma cells.
The direct inhibitory effect of ethA on the proliferation of fibrosarcoma cells was investigated. The test system is as follows.
ＩＭＣ力ルチノーマ細胞（ＩＸＩＯ５個）ならびにＭｅ
ｔｈＡフィブロザルコーマ細胞（ＩＸＩＯ５個）をそれ
ぞれ１０％牛脂児血清添加ＲＰＭ１１６４０培地に浮遊
せしめ、本発明の有効成分を１ｍｙ／ｍ／！の最終濃度
に加え３７°Ｃ，５％炭酸ガス大気下で７２時間培養し
た。培養開始後４８時間目ならびに７２時間目にトリバ
ンプルー染色により生細胞数を測定した。結果は第５表
に示しだ。IMC force rutinoma cells (IXIO5) and Me
thA fibrosarcoma cells (5 IXIO) were suspended in RPM11640 medium supplemented with 10% tallow serum, and the active ingredient of the present invention was added at 1 my/m/! In addition to the final concentration of , the cells were cultured for 72 hours at 37°C under a 5% carbon dioxide atmosphere. The number of living cells was measured by Trivan blue staining at 48 and 72 hours after the start of culture. The results are shown in Table 5.
第５表 細胞増殖直接阻害作用
第５表にみられる如く本発明の有効成分は、細唯増殖直
接阻害作用を有しないことが明らかにされた。このこと
は本発明の有効成分の抗腫瘍作用は宿主介在性のもので
あることを示している。Table 5 Direct cell growth inhibition effect As shown in Table 5, it was revealed that the active ingredients of the present invention do not have a cell proliferation direct inhibition effect. This indicates that the antitumor effect of the active ingredient of the present invention is host-mediated.
続いて宿主介在性の抗腫瘍作用の担い手として、近年注
目されているナチーラル・キラー細胞の活性に対する本
発明の有効成分の作用を調べた。Next, we investigated the effect of the active ingredient of the present invention on the activity of natural killer cells, which have been attracting attention in recent years as a carrier of host-mediated antitumor effects.
試験例６． ナチーラル・キラー活性に対する作用：試
験法は次のとおりである。Test example 6. Effect on natural killer activity: The test method is as follows.
生理食塩液（対照）、又は実施例３に示された方法で調
製され゛だ製剤を６週令のＣ５□ＢＩ、／６系雌性マウ
スに１匹あたり０．Ｉｍｅ腹腔腹腔再投与その４８時間
後に腹腔浸出細胞を採取した。採取液中の細胞数を１０
％牛脂児血清添加ＲＰＭ１１６４０培地で２×１０６個
／ｍｌに調整した後、プラスチックシャーレに移して３
７℃、５％炭酸ガス大気下で９０分間インキ−ベートし
、シャーレに非付着性の細胞を得た。非付着性細胞５×
１０５個と Ｃｒで揉識したマウス白血病細胞ＹＡＣ−
１，１，Ｘ１０’個を３７℃、５％炭酸ガス大気下で１
０％、牛胎児添加ＲＰＭ１１６４０培地を用いて４時間
培養した。Physiological saline (control) or the formulation prepared by the method described in Example 3 was administered to 6-week-old C5□BI, /6 female mice at 0.0. 48 hours after re-administration of Ime peritoneum, peritoneal exudate cells were collected. Reduce the number of cells in the collection solution to 10
After adjusting to 2 x 106 cells/ml with RPM11640 medium supplemented with % tallow baby serum, transfer to a plastic petri dish and
Incubation was performed for 90 minutes at 7°C under a 5% carbon dioxide atmosphere to obtain cells that did not adhere to the Petri dish. Non-adherent cells 5x
Mouse leukemia cells YAC-105 and Cr-disinfected
1,1,X10' pieces at 37℃ under 5% carbon dioxide atmosphere
The cells were cultured for 4 hours using RPM11640 medium supplemented with 0% bovine fetus.
その培養上清に遊離されだ Ｃｒの放射能をオートガン
マ−カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ製）で測定し、腹腔浸
出細胞油来非伺着細胞のＹＡＣ−１ｉ￥１１１胞に対す
る細胞障害作用（ナチュラルキラー細胞）を調べた。結
果は第６表に示した。The radioactivity of Cr released in the culture supernatant was measured using an autogamma counter (manufactured by Packard), and the cytotoxic effect on YAC-1i cells (natural killer cells) of peritoneal exudate cells and non-adherent cells was determined. I looked into it. The results are shown in Table 6.
第６表 ナチュラルキラー細胞の活性増強作用１
３７６
３ ３６８
５ ４３．１
９ ３７８
１０ ３６．５
１１ ４１．４
１２ ４４．６
１３ ４１．５
１４ ４０．２
第６表にみられる如く、本発明の有効成分はいずれも強
力なナチーラルキラー活性増強作用をあられした。この
ことは、本発明の有効成分の抗腫瘍作用の機作の１つに
は、ナチュラルキラー細胞がかかわっていることを示し
ているものと言える。Table 6 Natural killer cell activity enhancement effect 1
376 3 368 5 43.1 9 378 10 36.5 11 41.4 12 44.6 13 41.5 14 40.2 As shown in Table 6, all of the active ingredients of the present invention strongly enhance natural killer activity. It worked. This can be said to indicate that natural killer cells are involved in one of the mechanisms of the antitumor action of the active ingredient of the present invention.
次に、本発明の医薬の有効成分の毒性試験について試験
例７にこれを示す。Next, Test Example 7 shows a toxicity test for the active ingredient of the medicament of the present invention.
試験例７ 静脈内投与による急性毒性：１群１０匹の５
週令ｄｄＱ雄性マウス（平均体重２３ン）に本発明の有
効成分を生理食塩液に溶解し７て体重Ｉ Ｋｙあたり１
ｇを静脈内投与した。本発明の有効成分は、いずれも投
与後１週間の観察期間中、体重増加の抑制を示さず、死
亡例もなかった。この結果から本発明の有効成分の静脈
内投与における５０％致死用量ＬＤ５ｏは１ｇ／Ｋｙ以
上と考えられる。Test Example 7 Acute toxicity due to intravenous administration: 5 of 10 animals in 1 group
The active ingredient of the present invention was dissolved in physiological saline and administered to week-old ddQ male mice (average body weight 23 kg) at 1 kg per body weight I Ky.
g was administered intravenously. None of the active ingredients of the present invention showed suppression of body weight gain during the observation period of one week after administration, and there were no cases of death. From this result, the 50% lethal dose LD5o in intravenous administration of the active ingredient of the present invention is considered to be 1 g/Ky or more.
次に本発明の医薬の有効成分の抗原性について試験例８
にこれを示す。Next, Test Example 8 regarding the antigenicity of the active ingredient of the medicine of the present invention
This is shown in
試験例８．抗原性：
生理食塩液に溶解した本発明の有効成分を１群６匹のハ
ートレー系雌性モルモット（平均体重３５０．９）に１
匹あたり１ｍｇずつ週３回合計６回皮内投与して感作し
た。最終値昨日から２週間経過後本発明の有効成分を生
理食塩液に溶解して体重Ｋｙあたり１０ｍｇあるいは２
ｍ９を静脈内投与した。Test example 8. Antigenicity: The active ingredient of the present invention dissolved in physiological saline was administered once to a group of 6 female Hartley guinea pigs (average weight 350.9).
Sensitization was carried out by intradermally administering 1 mg per animal three times a week for a total of six times. Final value After 2 weeks from yesterday, dissolve the active ingredient of the present invention in physiological saline and give 10 mg or 2 mg per body weight Ky.
m9 was administered intravenously.
チャレンジ前後のモルモットの行動観察により本発明の
有効成分は、いずれも前配役４ 駄では全くアナフィラ
キシ−ショックを誘発し７なかった。Observation of the behavior of guinea pigs before and after challenge revealed that the active ingredients of the present invention did not induce any anaphylactic shock in the pre-challenge.
本発明の医薬の有効成分は試験例で示したように医薬と
しての有効性の面では抗腫瘍剤としての活性が強力であ
り、かつ、医薬としての安全性の面でも優れているもの
と考えられ、いずれの面においても極めて有用な薬剤で
ある。As shown in the test examples, the active ingredient of the medicine of the present invention is considered to have strong activity as an antitumor agent in terms of effectiveness as a medicine, and is also excellent in terms of safety as a medicine. It is an extremely useful drug in all aspects.
特許出願人 三井東圧化学株式会社Patent applicant: Mitsui Toatsu Chemical Co., Ltd.
Claims (1)
その医薬として許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤
。 ２、合成してなる２重鎖ポリデオキシリボ核酸捷たけそ
の医薬として許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤。 ３、有効成分が１本鎖ポリデオキシグアニル酸（ｐｏｌ
ｙ（ｄＧ））またはその医薬ζして許容される塩である
特許請求の範囲第１項記載の抗腫瘍剤。 ４、有効成分が１本鎖ポリデオキシシチジル酸（ｐｏｌ
ｙ（ｄＣ））ｔたはその医薬として許容される塩である
特許請求の範囲第１項記載の抗腫瘍剤。 ５、有効成分が１本鎖ポリデオキシチミジル酸〔ｐｏｌ
ｙ（ｄＴ）〕またはその医薬として許容される塩である
特許請求の範囲第１項記載の抗腫瘍剤。 ６ 有効成分が１本鎖ポリデオキシアデニル酸（ｐｏｌ
ｙ（ｄＡ））まだはその医薬として許容される塩である
特許請求の範囲第１項記載の抗腫瘍剤。 ７、 有効成分が１本鎖ポリデオキシイノシン酸（ｐｏ
ｌｙ（ｄＩ））またはその医薬として許容される塩であ
る特許請求の範囲第１項記載の抗腫瘍剤。 ８、有効成分が１本鎖ポリ、（デオキシグアニル酸−デ
オキシシチジル酸）（ｐｏｌｙ（ｄＧ−ｄＣ）〕または
その医薬として許容される塩である特許請求の範囲第１
項記載の抗腫瘍剤。 ９、 有効成分が１本鎖ポリ（デオキシアデニル酸−デ
オキシチジル酸）（ｐｏｌｙ（ｄＡ−ｄＴ） ）または
その医薬として許容される塩である特許請求の範囲第１
項記載の抗腫瘍剤。 【０ 有効成分が１本鎖ポリ（デオキシイノシン酸−デ
オキシシチジル酸）（ｐｏｌｙ（ｄｒ −ｄＣ））−ｊ
たはその医薬として許容される塩である特許請求の範囲
第１項記載の抗腫瘍剤。 １１ 有効成分が２本鎖ポリデオキシグアニル酸・ポ
リデオキシシチジル酸（ｐｏｌｙ（ｄＧ）・ｐｏｌｙ（
ｄＣ））またはその医薬として許容される塩である特許
請求の範囲第２項記載の抗腫瘍剤。 】２．有効成分が２本鎖ポリ（デオキシグアニル酸−デ
オキシ７チジル酸）（ｐｏｌｙ（ｄＧ−ｄＣ））ｆ、：
／’ｔはその医薬として許容される塩である特許請求の
範囲第２項記載の抗腫瘍剤。 １３、有効成分が２本鎖ポリデオキシアデニル酸・ポリ
デオキシシチジル酸（ｐｏｌｙ（ｄＡ）・ｐｏｌｙ（ｄ
Ｔ））まだはその医薬として許容される塩である特許請
求の範囲第２項記載の抗腫瘍剤。 １４ 有効成分が２本鎖ポリ（デオキシアデニル酸−
デオキシチミジル酸）（ｐｏｌｙ（ｄＴ−ｄＴ））また
はその医薬として許容される塩である特許請求の範囲第
２項記載の抗腫瘍剤。 １５、 有効成分が２本鎖ポリデオキシイノゾン酸・
ポリデオキシシチジル酸Ｃｐｏｌｙ（ｄＩ）・ｐｏｌｙ
（ｄＣ）） またはその医薬として許容される塩である
特許請求の範囲第２項記載の抗腫瘍剤。 １６ 有効成分が２本鎖ポリ（デオキシイノシン酸−
デオキシシチジル酸）ＣｐＯｌｙ（ｄＩ ４ｄＣ）、）
またはその医薬として許容される塩である特許請求の範
囲第２項記載の抗腫瘍剤。[Scope of Claims] 1. An antitumor agent containing a synthetic single-stranded polydeoxyribonucleic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. 2. An antitumor agent containing a pharmaceutically acceptable salt of a synthesized double-chain polydeoxyribonucleic acid cleavage as an active ingredient. 3. The active ingredient is single-chain polydeoxyguanylic acid (pol
y(dG)) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 4. The active ingredient is single-chain polydeoxycytidylic acid (pol
The antitumor agent according to claim 1, which is y(dC))t or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 5. The active ingredient is single-chain polydeoxythymidylic acid [pol
y(dT)] or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 6 The active ingredient is single-chain polydeoxyadenylic acid (pol
y(dA)) is a pharmaceutically acceptable salt thereof. 7. The active ingredient is single-chain polydeoxyinosinic acid (po
ly(dI)) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 8. Claim 1, wherein the active ingredient is a single-chain poly(deoxyguanylic acid-deoxycytidylic acid) (poly(dG-dC)) or a pharmaceutically acceptable salt thereof
Anti-tumor agent as described in section. 9. Claim 1, wherein the active ingredient is single-chain poly(deoxyadenylic acid-deoxytidylic acid) (poly(dA-dT)) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Anti-tumor agent as described in section. 0 The active ingredient is single-chain poly(deoxyinosinic acid-deoxycytidylic acid) (poly(dr -dC))-j
or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 11 The active ingredient is double-chain polydeoxyguanylic acid/polydeoxycytidylic acid (poly(dG)/poly(
dC)) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. ]2. The active ingredient is double-stranded poly(deoxyguanylic acid-deoxy7tidylic acid) (poly(dG-dC)) f,:
The antitumor agent according to claim 2, wherein /'t is a pharmaceutically acceptable salt thereof. 13. The active ingredient is double-chain polydeoxyadenylic acid/polydeoxycytidylic acid (poly(dA)/poly(d
T)) The antitumor agent according to claim 2, which is still a pharmaceutically acceptable salt thereof. 14 The active ingredient is double-stranded poly(deoxyadenylic acid-
The antitumor agent according to claim 2, which is deoxythymidylic acid (poly(dT-dT)) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 15. The active ingredient is double-chain polydeoxyinosonic acid.
Polydeoxycytidylic acid Cpoly(dI)・poly
(dC)) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 16 The active ingredient is double-stranded poly(deoxyinosinic acid-
deoxycytidylic acid)CpOly(dI 4dC),)
The antitumor agent according to claim 2, which is a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14339882A JPS5933222A (en) | 1982-08-20 | 1982-08-20 | Antitumor agent containing synthetic deoxyribonucleic acid as active component |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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Publications (2)
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| JPS5933222A true JPS5933222A (en) | 1984-02-23 |
| JPH0534338B2 JPH0534338B2 (en) | 1993-05-21 |
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ID=15337834
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14339882A Granted JPS5933222A (en) | 1982-08-20 | 1982-08-20 | Antitumor agent containing synthetic deoxyribonucleic acid as active component |
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|---|---|
| JP (1) | JPS5933222A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994018987A1 (en) * | 1993-02-19 | 1994-09-01 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Drug composition containing nucleic acid copolymer |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10590384B2 (en) | 2014-01-14 | 2020-03-17 | Luterion Co., Ltd. | Luterial and method for isolating and culturing the same |
| JP6862182B2 (en) | 2014-01-14 | 2021-04-21 | チョイ ウォンチョルＣＨＯＩ， Ｗｏｎ Ｃｈｅｏｌ | Luterial, and its separation and culture methods |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57145815A (en) * | 1981-03-04 | 1982-09-09 | Sanraku Inc | Antitumor agent |
| JPS5855499A (en) * | 1981-09-28 | 1983-04-01 | Sanraku Inc | Preparation of modified deoxyribonucleic acid having antitumor action |
-
1982
- 1982-08-20 JP JP14339882A patent/JPS5933222A/en active Granted
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| JPS57145815A (en) * | 1981-03-04 | 1982-09-09 | Sanraku Inc | Antitumor agent |
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| JPH0534338B2 (en) | 1993-05-21 |
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