JPS592276B2 - Method for producing virus antibodies - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗体の培養そして特にインビトロ−での生き
ている細胞による抗体の製造に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to the cultivation of antibodies and, in particular, to the production of antibodies by living cells in vitro.

ウィルスの抗原のデターミナントに特異的な抗体の製造
は、逸疫治療および免疫研究の両方のために重要である
。The production of antibodies specific for determinant viral antigens is important for both epidemic treatment and immunological research.

ウィルスの抗原デターミナントに対するモノクローン性
抗体が、ウィルスの感染したひ臓細胞中でインビトロ−
で製造されて来た。Monoclonal antibodies against antigenic determinants of the virus are produced in vitro in virus-infected spleen cells.
It has been manufactured in

現在まで、しかし、ひ臓病巣による抗体の生産は３０か
ら４０日後に減少し９０日後には完全に停止してしまう
６我々は、ここに、抗体を製造する新規技術を開発した
のであって、本発明によれば、特に、遺伝的に安定な新
規セルラインの増殖物は、無限に、培養そして継代培養
されそしてウィルスおよび抗原性デターミナントに対し
て大量の抗体を生産することができる。Until now, however, antibody production by splenic lesions decreases after 30 to 40 days and completely stops after 90 days. In particular, according to the invention, the growth of the new genetically stable cell line can be cultured and subcultured indefinitely and produce large amounts of antibodies against viruses and antigenic determinants.

この新規セルラインは、（ａ）ミエローマ（ｍｙｅｌｏ
ｍａ ）細胞、つまり骨髄の１次腫瘍よりの悪性細胞と
、（ｂ）ウィルス抗体生産細胞なるべくはウィルスでプ
ライムされたひ臓または淋巴節から採取したウィルス抗
体生産性細胞とよりの、融合細胞バイブリドである。This new cell line is characterized by (a) myeloma (myelo
A fusion cell hybrid of ma) cells, i.e., malignant cells from a primary bone marrow tumor, and (b) viral antibody-producing cells, preferably taken from the virus-primed spleen or L. be.

特に有用なセルラインは、ウィルスでプライムされたマ
ウスひ臓細胞とマウスミエローマ細胞とのあいだの融合
細胞バイブリドである。A particularly useful cell line is a fusion cell hybrid between virus-primed mouse spleen cells and mouse myeloma cells.

これらのセルラインは、ヒポキサンチン−アミノプテリ
ン−チミジン選択培地のような培地中に実質的に無限に
維持することができウィルスの抗原デターミナントに特
異的な抗体の生産を続けるのである。These cell lines can be maintained virtually indefinitely in a medium such as hypoxanthine-aminopterin-thymidine selective medium and continue to produce antibodies specific for antigenic determinants of the virus.

これらの細胞は、組織的に許容されつる動物中にインビ
ボ−で発育さすことができ、動物の血清および腹水中に
著量の抗体を蓄積する。These cells can be grown in vivo into tissue-permissive animals and accumulate significant amounts of antibodies in the animal's serum and ascites fluid.

本明細書において使用する「抗体生産性細胞」（ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｅｌｌ ）なる用
語は身体全体を通して循環し、ひ臓およびリンパ節のよ
うな特定の臓器に濃縮蓄積する傾向を有せる唯一つのタ
イプの細胞を意味する。As used herein, "antibody-producing cells" (ant
The term ibody producing cell refers to only one type of cell that circulates throughout the body and has a tendency to accumulate in specific organs such as the spleen and lymph nodes.

従って、これは身体のどこにあっても同じ細胞タイプな
のである。Therefore, this is the same cell type no matter where you are in your body.

ミエローマ細胞は、抗体の特異性はなお知られていない
けれども、細胞が抗体を生産しうる点でそれ自体独特で
ある。Myeloma cells are unique in themselves in that they can produce antibodies, although the specificity of the antibodies is still unknown.

ミエローマ細胞およびひ臓細胞の由来する動物の特定の
種は、ひとつの種の細胞を別の種の細胞に融合させうる
限り、たとえばマウス対ラット、ラット対ヒトの細胞を
融合さすことが可能な限り、不可欠な条件とはならない
。The particular species of animal from which myeloma cells and spleen cells are derived is important insofar as it is possible to fuse cells of one species with cells of another species, e.g. mouse versus rat, rat versus human. , is not an essential condition.

しかし、我々はミエローマ細胞およびウィルス抗体生産
細胞の両方の原料として同じ動物の種を使用するのを有
利とする。However, we have the advantage of using the same animal species as source for both myeloma cells and viral antibody producing cells.

あらかじめ免疫されたＢＡＬＢ／ｃマウスのウィルス抗
体生産性ひ臓細胞とＢＡＬＢ／ｃマウスのミエローマ細
胞との体細胞バイブリドを用いてすぐれた結果かえられ
る。Excellent results are obtained using somatic cell hybrids of virus antibody-producing spleen cells of pre-immunized BALB/c mice and myeloma cells of BALB/c mice.

特に有利なミエローマ細胞は、クローン（Ｐ３×６３Ａ
ｇ８）と称せられるＭＯＰＣ−２１ラインで、Ｋｏｈｌ
ｅｒ等がＮａｔｕｒｅ 、 ２５６巻、４９５−４９７
頁（１９７５）に記載している。Particularly advantageous myeloma cells are clones (P3x63A
Kohl on the MOPC-21 line called
Nature, vol. 256, 495-497.
(1975).

ＢＡＬＢ／ｃひ臓細胞とＢＡＬＢ／ｃミエローマ細胞の
融合細胞バイブリドは、すでに、Ｋｏｈｌｅｒ等がＮａ
ｔｕｒｅ 、 ２５６巻、４９５−４９７頁（１９７５
）およびＥｕｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 ６巻、
５１１−５１９頁（１９７６）に記載している。A fusion cell hybrid of BALB/c spleen cells and BALB/c myeloma cells has already been developed by Kohler et al.
ture, vol. 256, pp. 495-497 (1975
) and Eur, J. Immunol, 6 volumes.
511-519 (1976).

これらのバイブリドは、しかし、ウィルスで免疫された
マウスに由来するのでなく、むしろ羊赤血球細胞で免疫
されたマウスに由来している。These hybrids, however, are not derived from mice immunized with a virus, but rather with sheep red blood cells.

羊赤血球抗体生産性細胞とミエローマ細胞とのあいだの
バイブリドは容易に形成されるが、Ｋｏｈｌｅｒ等のバ
イブリドで生産される抗体は羊赤血球細胞に特異的でウ
ィルスには効果を有しない。Hybrids between sheep red blood cell antibody-producing cells and myeloma cells are easily formed, but the antibodies produced by the hybrids of Kohler et al. are specific to sheep red blood cells and have no effect on viruses.

本発明以前には、ウィルス抗体生産性細胞とミエローマ
細胞とのあいだにバイブリドが生成されうるかどうかは
知られていなかった。Prior to the present invention, it was not known whether hybrids could be generated between viral antibody-producing cells and myeloma cells.

つぎに示すのは、インフルエンザウィルスであらかじめ
免疫されたＢＡＬＢ／ｃマウスのひ臓細胞とＢＡＬＢ／
ｃマウスのミニローア細胞との融合で、バイブリド細胞
のセルラインを調製する方法である。The following shows spleen cells of BALB/c mice pre-immunized with influenza virus and BALB/c mice.
c This is a method for preparing a hybrid cell line by fusion with mouse miniloa cells.

この方法はインフルエンザウィルスの特定の株を用いる
が、他のウィルスたとえば狂犬病ウイルス、おたふくか
ぜウィルス、ワクシナウィルスインフルエンザ株６−９
４シミアンウイルス４０ポリオウイルス等も使用しうる
。This method uses a specific strain of influenza virus, but other viruses such as rabies virus, mumps virus, vaccina virus influenza strain 6-9
4 simian virus, 40 poliovirus, etc. may also be used.

（ａ） 融合のためのひ臓細胞の調製 融合のためのひ臓細胞を調製するために、２から３ケ月
前に、精製されたインフルエンザウィルス（Ａ、ＰＲ／
８／３４（ＨＯＮＩ ））の１２５０血球凝集単位を腹
腔注射してプライムしたＢＡＬＢ、／ｃマウスに、同系
統ウィルスの１００血球凝集単位の投与量を静脈注射し
たマウスは７日後に殺し、Ｇｅ ｒ ｈ ａ ｒ ｄ等
がＢｕｒ、Ｊ。(a) Preparation of spleen cells for fusion To prepare spleen cells for fusion, purified influenza virus (A, PR/
BALB,/c mice primed by intraperitoneal injection of 1250 hemagglutinating units of 8/34 (HONI)) were injected intravenously with a dose of 100 hemagglutinating units of the same strain of virus.The mice were killed 7 days later and Ger. H a r d et al. Bur, J.;

Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 ５、７２０−７２５ （１９７５
）に記載した方法でひ臓細胞懸濁液を調製した。Immunol, 5, 720-725 (1975
A spleen cell suspension was prepared by the method described in ).

ひ臓細胞中に存在する赤血球細胞は通常抗体非生産性融
合生成物を導くので、この赤血球細胞をＮＨ，Ｃ１（０
，８３係）中において４度Ｃでインキュベートすること
により融解させた。The red blood cells present in the spleen cells normally lead to non-antibody producing fusion products, so these red blood cells were converted to NH,C1(0
, 83) by incubation at 4°C.

これにより、抗体生産性であるリンパ球細胞のひ臓から
の精製が容易になり、抗体産生融合生成物へと導かれる
。This facilitates the purification of antibody-producing lymphoid cells from the spleen, leading to antibody-producing fusion products.

生ずる細胞懸濁液は、熱不活化牛血清を用いて一度遠心
（８００Ｘ！すして洗い、蛋白不含媒体中（ＲＰＭＩ
１６４０，７．５市ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７，２で緩
衝〕で１度遠ノ印た。The resulting cell suspension was centrifuged once using heat-inactivated bovine serum (800X!
1640.7.5 City M HEPES, buffered with pH 7.2].

（ｂ） 融合のためのミエローマ細胞の調製Ｃｅ５ａ
ｒ ＭｉｌｓｔｅｉｎがＮａｔｕｒｅ 、 ２５６巻、
４９５−４９７頁（１９７５）に記載し、かつ同氏から
入手した、ＭＯＰＣ−２１ラインに由来しそしてＨＰＲ
Ｔ（Ｅ、Ｃ，２，４，２，８）を欠如するＢＡＬＢ／ｃ
（Ｐ ３ Ｘ ６３Ａｇ ８ ）ミエローマ細胞を１
０チ牛脂児血清および１０係馬血清を含有すルイークル
（Ｅａｇｌｅ ）のミニマルエツセンシャル培地（ＭＥ
Ｍ）に継代した、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８のミエローマ細胞の
発育は、選択的ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミ
ジン培地中で阻害した。(b) Preparation of myeloma cells for fusion Ce5a
r Milstein in Nature, vol. 256,
495-497 (1975) and obtained from him, derived from the MOPC-21 line and HPR.
BALB/c lacking T(E,C,2,4,2,8)
(P 3 X 63Ag 8 ) myeloma cells 1
Eagle's Minimal Essential Medium (ME) containing 0.0% tallow serum and 10% horse serum.
The growth of P3X63Ag8 myeloma cells passaged in M) was inhibited in selective hypoxanthine-aminopterin-thymidine medium.

（ｃ） バイブリドの生成 １ｏｏｏ万個のＢＡＬＢ／ｃ（Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８）ミエ
ローマ細胞を、ウィルス感染ＢＡＬＢ／Ｃマウスより得
られた１０８個のひ臓細胞と混合してバイブリドを生成
させた。(c) Generation of hybrids 100 million BALB/c (P3X63Ag8) myeloma cells were mixed with 108 spleen cells obtained from virus-infected BALB/C mice to generate hybrids.

細胞混合物は、８００ ｘｇで遠心し、融合のために、
血清不含のミニマムエツセンシャル培地（ＭＥＭ）中で
希釈した５ｏ ％ （重量／容量）ポリエチレングリコ
ール−１０００（ＰＥＧ）中に再懸垂させた。The cell mixture was centrifuged at 800 x g for fusion.
They were resuspended in 5o% (wt/vol) polyethylene glycol-1000 (PEG) diluted in serum-free minimal essential medium (MEM).

Ｄａｖｉｄｓｏｎ等がＳｏｍａｔ 、 Ｃｅ１１ Ｇｅ
ｎｅｔ。２．１７５−１７６に記載した操作に準じて、
ポリエチレングリコールは、まず、血清不含のＭＥＭで
希釈し、ついで血清で希釈し、それから細胞を、ヒポキ
サンチン−アミンプテリン−チミジン（ＨＡＴ）選択培
地を含有する７５Ｃ７ｒＬのｐｌａｃｏｎフラスコ５個
に接種した。Davidson et al.
net. 2. According to the operations described in 175-176,
Polyethylene glycol was first diluted in serum-free MEM and then in serum, and the cells were then seeded into five 75C7rL placon flasks containing hypoxanthine-aminepterin-thymidine (HAT) selection medium.

培養物は、９５％空気１５％ＣＯ２の気流中で３７度Ｃ
でインキュベートし、７から１０日毎に、培地は部分的
にＨＡＴ培地（３Ａから％）でおきかえていった。Cultures were grown at 37 degrees C in an air stream of 95% air and 15% CO2.
The medium was partially replaced with HAT medium (3% from A) every 7 to 10 days.

ＰＨ１（これはインフルエンザウィルスであって、常法
により調製され、当業者周知のものである。PH1 (this is an influenza virus, prepared by conventional methods and well known to those skilled in the art).

このウィルスはマウスに抗体を生産させるためマウスの
免疫にのみ使用されている）で免疫したマウスのひ臓細
胞をＰ ３ Ｘ ６３ Ａｇ８細胞と融合させて生じた
培養物を１０から１５日インキュベートすると、ひとつ
の細胞について細胞の発育を観察した。When spleen cells from mice immunized with this virus (which is used only for immunization of mice to induce antibody production) are fused with P3X63Ag8 cells and the resulting culture is incubated for 10 to 15 days, Cell growth was observed for each cell.

ＨＡＴ培地中の発育はすべて、マウスひ臓とマウスミエ
ローマ細胞とのあいだのバイブリド生成がうまくいった
ことを示していた。All growth in HAT medium indicated successful hybridization between mouse spleen and mouse myeloma cells.

ＨＫ−ＰＥＧ−１と称するこれらの細胞は、ＨＡＴ培地
中で連続的に増し継代され限定された希釈度においてミ
クロプレート（Ｌｉｎｂｒｏ ）中でクローン化した。These cells, designated HK-PEG-1, were serially passaged in HAT medium and cloned in microplates (Linbro) at defined dilutions.

他の４個のフラスコについては細胞の発育を示さなかっ
たので、融合後３週で廃棄した。The other four flasks showed no cell growth and were discarded 3 weeks after fusion.

ＨＫ−ＰＥＧ−１と称されるセルライン培養物は、ｔｈ
ｅＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｔｕｒｅ Ｃｏ１
１ｅｃｔｉｏｎに寄託され、番号ＡＴＣＯＣＬ１８９を
受けた。A cell line culture designated HK-PEG-1
eAmerican Type Cuture Co1
1ection and received number ATCOCL189.

ｄ）カリオロジー分析 表１に示すよう（へＰ３Ｘ６３Ａｇ８親細胞は、６３個
の染色体を含有しそしてＢＡＬＢ／ｃひ臓細胞は４０個
の染色体を含有する。d) Karyological analysis As shown in Table 1, P3X63Ag8 parental cells contain 63 chromosomes and BALB/c spleen cells contain 40 chromosomes.

それでＨＫ−ＰＥＧ−１細胞中の９２個の染色体は２つ
の親細胞の染色体の大体の和を示す。The 92 chromosomes in the HK-PEG-1 cell thus represent the approximate sum of the chromosomes of the two parental cells.

バイブリドクローンＨＫ−ＰＥＧ−１およびサブクロー
ンのカリオロジＨま、４ケ月後に調べてみたが、カリオ
タイプには、なんら有意の変緩はなかった。The hybrid clone HK-PEG-1 and the subclone karyology H were examined after 4 months, but there was no significant change in the karyotype.

（ｅ） バイブリド細胞で生産される免疫グロブリン
の分析 ＨＫ−ＰＥＧ−１およびＰ３Ｘ６３Ａｇ８細胞の培養液
について、ラジオイミュノアツセイ（ＲＩＡ）でＰＲ８
と反応する免疫グロブリン（Ｉｇ）の存在について分析
した。(e) Analysis of immunoglobulin produced by hybrid cells. PR8 was analyzed by radioimmunoassay (RIA) on the culture medium of HK-PEG-1 and P3X63Ag8 cells.
The presence of immunoglobulin (Ig) that reacts with was analyzed.

Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８は、ＩｇＧ１．に、 を分泌するこ
とが知られている。P3X63Ag8 is IgG1. It is known to secrete .

表２に示すように、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８培養液は、抗ＰＲ
８反応を有するＩｇを含有しない。As shown in Table 2, P3X63Ag8 culture medium
Contains no Ig with 8 reactions.

対照的に、大量の抗ＰＲ８抗体がＨＫ−ＰＥＧ−１によ
り生産された。In contrast, large amounts of anti-PR8 antibodies were produced by HK-PEG-1.

表３のデータは、バイブリド細胞により生産されるウィ
ルス性抗体（抗−ＰＲ）は、ＰＲ８の抗原（赤血球凝集
原）に特異的であることを示している。The data in Table 3 show that the viral antibodies (anti-PR) produced by hybrid cells are specific for the antigen (hemagglutinogen) of PR8.

このことは、抗体（約４０μｇ／ｃＣ’。が赤血球凝集
原阻害（ＨＩ ）を示すが、なんらの検出されつるノイ
ラミニダーゼ阻害（ＮＩ ）を示さぬことが分る。This shows that the antibody (approximately 40 μg/cC') exhibits hemagglutinogen inhibition (HI) but no detectable neuraminidase inhibition (NI).

表３のデータは、バイブリド細胞により生産されるウィ
ルス性抗体（抗−ＰＲ）はＰＲ８の抗原（赤血球凝集原
）に特異的であることを示している。The data in Table 3 show that the viral antibodies (anti-PR) produced by hybrid cells are specific for the antigen (hemagglutinogen) of PR8.

このことは、抗体（約４０μ９／ ）が赤血球凝集原
阻害（ＨＩ）を示すが、なんらの検出されうるノイラミ
ニダーゼ阻害（ＮＴ）を示さぬことが分る。This shows that the antibody (approximately 40μ9/) exhibits hemagglutinogen inhibition (HI) but no detectable neuraminidase inhibition (NT).

（ｆ） バイブリド細胞のクローン化の出発細胞ＨＫ
−ＰＥＧ−１のクローン化の出発細胞を３個の別々の基
準により試験した。(f) Starting cell HK for hybrid cell cloning
- The starting cells for cloning of PEG-1 were tested by three separate criteria.

（ｉ）ａ−ＰＥＧ−１培養塊より得られた濃縮Ｉｇ（表
３の説明をみよ）を、等霊的ホーカシング（ｆｏｃｕｓ
ｉｎｇ ）に処した。(i) Concentrated Ig obtained from a-PEG-1 culture mass (see explanation in Table 3) was subjected to spiritual focusing.
ing).

ＩｇＧ１重鎮デターミナントを有する抗ＰＲ８抗体は、
限定されたｐＨ範囲に蓄積した。The anti-PR8 antibody with an IgG1 heavy determinant is
Accumulated over a limited pH range.

（ｉｉ）ＰＨ１に対して抗原的に改変されることの知ら
れている種々のウエルスに対する交叉反応性について、
ＲＩＡにより抗体を試験した。(ii) Regarding cross-reactivity to various wells known to be antigenically modified for PH1,
Antibodies were tested by RIA.

ＰＨ１の血球凝集原（ＨＡ）デターミナントに対して特
異的であることが分った。It was found to be specific for the hemagglutinogen (HA) determinant of PH1.

しかしＰＲ８インフルエンザＡウィルスに対する抗体産
生させるためにプライムされたラットのひ臓からのＢ細
胞の２０％から２５係が、この株特異的抗ＨＡ（ＰＨ１
）反応性を示す。However, 20% to 25% of B cells from the spleen of rats primed to produce antibodies against PR8 influenza A viruses were found to be resistant to this strain-specific anti-HA (PH1) virus.
) shows reactivity.

それで抗体反応性のみでは、ＨＫ−ＰＥＧ−１１のモノ
クローン性を決定するにはむしろ弱い標準となる。Therefore, antibody reactivity alone is a rather weak standard for determining the monoclonality of HK-PEG-11.

θＩＤ 抗ウイルス抗体を生産する細胞がバイブリド
細胞集団のほんの１部を占めるだけであるという可能性
を除くために、ＨＫ−ＰＥＧ−１バイブリドラインの１
２イ固のクローンに由来する培養液を、抗ＰＲ８抗体の
存在およびそれの特異性について検定した。θID One of the HK-PEG-1 hybrid lines to exclude the possibility that cells producing antiviral antibodies account for only a small fraction of the hybrid cell population.
Cultures from two unique clones were assayed for the presence of anti-PR8 antibody and its specificity.

表４に示すように、１２個のクローンのうちの１１個が
抗ＰＲ８抗体を生産した、さらにこれらの抗体は、ＰＲ
８ウィルスのＨＡのデターミナントに対して特異的であ
る。As shown in Table 4, 11 out of 12 clones produced anti-PR8 antibodies, and these antibodies
It is specific for the HA determinant of 8 viruses.

（ａ） ミクロリッタープレートをウィルスで被覆し
、このウィルスをグルタルアルデヒドによりプレートに
固定する： （ｂ） このプレートを次に凹部１個当り約２００マ
イクロリツターの牛胎児血清またはガンマグロブリンを
含有しない馬血清で被覆し、０．５時間インキュベート
し、その後、洗浄する： （ｃ） このプレートに細胞培養上澄液またはその他
の潜在性抗体源を入れ（約５０マイクロリツター）、約
２時間インキュベートし、その後プレートを蒸留水で洗
浄する： （ａ） 各凹部に放射性物質で標識した抗体、１２５
１Ｆ （ａ ｂ’）２を約５０，０００力ウント／凹部
の量で加れ、次に約２時間インキュベートする；（ｅ）
次いで、これらのミクロ凹部を洗浄し、切り取り、
ガンマシンチレーション計数器で分析する。(a) coat a microliter plate with virus and fix the virus to the plate with glutaraldehyde; (b) then coat the plate with about 200 microliters per well of fetal bovine serum or gamma globulin-free Coat with horse serum, incubate for 0.5 hours, then wash: (c) Add cell culture supernatant or other potential antibody source to the plate (approximately 50 microliters) and incubate for approximately 2 hours. and then wash the plate with distilled water: (a) radioactively labeled antibody in each well, 125
Add 1F (a b')2 at about 50,000 force unds/well and then incubate for about 2 hours; (e)
These micro-recesses are then cleaned and cut out.
Analyze with gamma scintillation counter.

１分間当りのカウント（ｃｐｍ）は抗体の存在または不
存在を示す。Counts per minute (cpm) indicate the presence or absence of antibody.

（ω バイブリド細胞の腫瘍原性 バイブリド細胞の腫瘍原性を測定するために、ＢＡＬＢ
Ａ成熟マウスの腹壁に、ＨＫ−ＰＥＧ−１細胞（１×１
０７個）またはＰ３Ｘ６３Ａｇ８細胞（１ｘｔｏ７）細
胞を皮下注射した。(ω) Tumorigenicity of hybrid cells To measure the tumorigenicity of hybrid cells, BALB
A: HK-PEG-1 cells (1 × 1
07 cells) or P3X63Ag8 cells (1xto7) cells were injected subcutaneously.

表５に示すように、接種してから１０から１２日後に、
ＨＫ−ＰＥＧ−１細胞注射マウスでは５１５のマウスに
そしそ親のＰ３Ｘ６３Ａｇ８細胞注射マウスでは３１５
のマウスに接種部位に腫瘍を発生した。As shown in Table 5, 10 to 12 days after inoculation,
515 in mice injected with HK-PEG-1 cells and 315 in mice injected with parental P3X63Ag8 cells.
of mice developed tumors at the inoculation site.

第２の実験では、バイブリド細胞接種後の４１５のマウ
スに、そしてｐ ３ Ｘ６３Ａｇ８細胞接種後の３１５
のマウスに腫瘍を発生した。In the second experiment, 415 mice were inoculated with hybrid cells and 315 mice were inoculated with p3X63Ag8 cells.
tumors developed in mice.

細胞を腹腔注射（表５、実験３）すると、腹腔に塊状に
腫瘍を生じた。When the cells were injected into the peritoneal cavity (Table 5, Experiment 3), a mass of tumor was generated in the peritoneal cavity.

腹水を生ずるためには、完全フロイントアジユバノドに
再懸濁させた腫瘍細胞をマウスに注射する必要があった
。To generate ascites, mice had to be injected with tumor cells resuspended in complete Freund's adjuvant.

第４の実験で・は、プリステーン（ｐｒｉｓｔａｎｅ
） （サメ由来の（鉱油）を腹腔内投与してプライムさ
れたマウスが、ＨＫ−ＰＥＧ−１クローンの細胞を腹腔
接種したあとで、腹水を生じた。In the fourth experiment, pristane
(Mice primed with shark-derived (mineral oil) intraperitoneally developed ascites after intraperitoneal inoculation with cells of the HK-PEG-1 clone.

これらの研究の結果は、マウスミエローマと正常ひ臓細
胞とのあいだのバイブリド細胞は、悪性腫瘍原性を抑え
ることなく、悪性の親と同様に振舞うことが分る。The results of these studies indicate that hybrid cells between mouse myeloma and normal spleen cells behave similarly to their malignant parents without suppressing malignant tumorigenicity.

注射後様々の間隔で腫瘍を有するマウスより得られた血
清および腹水について、ＲＩＡを用いて、抗ＰＲ抗体の
濃度を測定した。Concentrations of anti-PR antibodies were measured using RIA in serum and ascites obtained from tumor-bearing mice at various intervals after injection.

結果を表６に示す。ＨＫ−ＰＥＧ−ＩＭ胞を皮下注射さ
れたマウスの血清（実験ｌおよび２）は、■から３１ｆ
１ｇ／ＣＣの濃度に抗体を含有した。The results are shown in Table 6. Serum from mice subcutaneously injected with HK-PEG-IM cells (experiments 1 and 2) was
Antibodies were contained at a concentration of 1 g/CC.

Ｐｉ、ＰＲ８抗体は、バイブリド細胞を腹腔注射したマ
ウスの腹水中にも見出だされた（実験４つｏ但し、抗体
の濃度は血清中における量に対しＸからにである。Pi, PR8 antibodies were also found in the ascites of mice injected intraperitoneally with hybrid cells (4 experiments). However, the concentration of the antibody was from X to the amount in serum.

ＨＫ−ＰＥＧ−１の腫瘍を有するマウスより得られた血
清の電気泳動は、３個の主要なＩｇ−集団を示した。Electrophoresis of serum obtained from mice bearing HK-PEG-1 tumors revealed three major Ig-populations.

ひとつは親の（Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８）ＩｇＧＩに相当しひ
とつは、ＩｇＧ３の特徴を有し、第３のものは２つのも
のの中間である。One corresponds to the parent (P3X63Ag8) IgGI, one has characteristics of IgG3, and the third is intermediate between the two.

免疫グロブリンのいずれの種類に抗ウイルス抗体が結合
しているかを測定するために、腹水をブリステンでプラ
イムされたマウス２０頭より集め、プールし、それより
免疫グロブリンを分離した。To determine which type of immunoglobulin an antiviral antibody binds to, ascites fluid was collected from 20 mice primed with Bristen, pooled, and immunoglobulin was isolated from it.

つぎのようにして分離を行なった。Separation was carried out as follows.

マウスより集めた腹水をプールし、リン酸緩衝食塩水（
ＰＢＳ）で中和した。Ascites fluid collected from mice was pooled and diluted with phosphate buffered saline (
Neutralized with PBS).

等容量の飽和硫酸アンモニウムを４度Ｃで添加し、沈殿
蛋白質をＰＢＳに溶解し、ｐＨ８，０の０．ＯＩＭｌ−
リス緩衝液に対して透析した。An equal volume of saturated ammonium sulfate was added at 4°C, and the precipitated protein was dissolved in PBS at 0.5°C, pH 8.0. OIMl-
Dialyzed against Lys buffer.

１夜透析したあとに生ずる沈殿をＰＢＳに再溶解し０．
ＯＩＭｌ−ＩＪス緩衝液（ｐＨ８，０）に対して透析し
て再沈殿させた。After overnight dialysis, the precipitate formed was redissolved in PBS and diluted to 0.00%.
It was dialyzed against OIMl-IJ buffer (pH 8,0) and reprecipitated.

透析物の上清は、ｐＨ８，０の０．０１Ｍトリス緩衝液
で平衡させたＤ Ｅ −５２（Ｗｈａ ｔｍａｎ ）カ
ラムに吸着させ、直線状ＮａＣ１のグラジェント（０，
０１Ｍトリス、ｐＨ８，０中０．５から０．１５Ｍまで
）を用いて溶出させた。The supernatant of the dialysate was adsorbed onto a DE-52 (Whatman) column equilibrated with 0.01 M Tris buffer, pH 8.0, and a linear NaCl gradient (0,
0.5 to 0.15M in 01M Tris, pH 8.0).

０、ＯＩＭ）ＩＪス緩衝液に対して透析して１ｇＧ３を
沈殿させてからの残留する上清は、電気泳動で、分画前
の腹水プール中に見られた成分のひとつを欠如した。The remaining supernatant after dialysis against IJS buffer to precipitate 1gG3 was electrophoretically devoid of one of the components found in the ascites pool before fractionation.

このものをＤＥ−５２でクロマトグラフィーしても、残
存する成分は完全には分離していない。Even when this product was chromatographed on DE-52, the remaining components were not completely separated.

しかし、個々の分画を電気泳動すると、２個の主要な成
分の存在を示した。However, electrophoresis of the individual fractions showed the presence of two major components.

ひとつは、親（Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８）のＩｇＧ１に相当し
、他は、Ｉ ｇＧｌとＩｇＧ３との中間のバイブリドＩ
ｇを示した。One corresponds to the parent (P3X63Ag8) IgG1, and the other is a hybrid I between IgGl and IgG3.
g.

これは、ＨＫ−ＰＥＧ−１腫瘍を有するマウス（上記を
みよ）にも観察された。This was also observed in mice bearing HK-PEG-1 tumors (see above).

抗ＰＲ８抗体の濃度を１２５１−抗Ｆ（ａｂ’）２Ｇ用
いるＲＩＡで測定した。The concentration of anti-PR8 antibody was measured by RIA using 1251-anti-F(ab')2G.

そして、抗ＰＲ８比活性は、抗Ｐ ｋ３．８ （ｒＩＵ
ｊ／ ｃｃつ２■ｇ（Ｉｒ１９／ＣＣ）の比として計算
した。And, the anti-PR8 specific activity is anti-P k3.8 (rIU
Calculated as the ratio of j/cc x 2g (Ir19/CC).

後者は、マウスＩｇの吸収値（１％。ｌ ｃｍ ）を１
４．０と仮定し０Ｄ２８０の測定で計算した。The latter has a mouse Ig absorption value (1%. l cm ) of 1
It was calculated by measuring 0D280, assuming that it is 4.0.

低い塩濃度の沈殿で測定した抗ＰＲ８比活性は、ＤＥ−
５２クロマトグラフイーの抗ＰＲ８活性のピーク（０，
０６、分画２１）の約２倍の高さである。Anti-PR8 specific activity measured in low salt precipitation was determined by DE-
52 chromatography anti-PR8 activity peak (0,
06, about twice as high as fraction 21).

１２５■−抗ＩｇＧ１を用いるＲＩＡでの試料の分析は
、低い塩濃度での沈殿中の抗ＰＲ８抗体の約１５係がＧ
ｌデクーミナントを表わすことを示した。Analysis of samples in RIA using 125■-anti-IgG1 indicates that approximately 15% of the anti-PR8 antibody in the precipitate at low salt concentration is
It was shown that l represents the decouminant.

これと対照的に、ＤＥ−５２のクロトグラフィーの種々
の分画で、１２５Ｉ−抗Ｆ（ａｂ’）２は抗ＰＲ８抗体
の定量に同様に有効である。In contrast, 125I-anti-F(ab')2 is equally effective in quantifying anti-PR8 antibodies in various fractions of DE-52 chromatography.

別の一連の実験を狂犬病ウィルスを用いて実験した。Another series of experiments was conducted using rabies virus.

ＢＡＬＢ、／ｃマウスを不活化狂犬病ウィルス（ＥＲＡ
株）を含有するワクチンでプライムし、１ケ月後、同じ
ワクチン静注する。BALB,/c mice were infected with inactivated rabies virus (ERA).
strain) and, one month later, the same vaccine is administered intravenously.

それから３日後マウスを殺し、前記のようにひ臓細胞を
Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８ミエローマ細胞と融合させてバイブリ
ド細胞とした。Three days later, the mice were sacrificed and spleen cells were fused with P3X63Ag8 myeloma cells to generate hybrid cells as described above.

多数のこれらのバイブリド細胞が抗狂犬病ウィルス抗体
を生産した対照的に、静注後１０１ＥＩ？こ殺した場合
には、抗狂犬病抗体を生産するバイブリド細胞の数はき
わめて低かった。In contrast, a large number of these hybrid cells produced anti-rabies virus antibodies after i.v. When animals were sacrificed, the number of hybrid cells producing anti-rabies antibodies was extremely low.

この操作を用いて、表７，８および９に示す試験のため
のハイブリドーマを得た。Using this procedure, hybridomas for the tests shown in Tables 7, 8 and 9 were obtained.

つぎの試験で用いられた狂犬病ウィルス株は、この方面
で知られている株である。The rabies virus strain used in the following tests is a strain known in this field.

たとえばＥＲＡ株は、なかんずく、アメリカ合衆国特許 ３．４２３，５０５および３，５８５，２６６に記載さ
れている。For example, the ERA strain is described in US Pat. Nos. 3,423,505 and 3,585,266, among others.

ＨＥＰ−Ｆｌｕｒｙはなかんずくアメリカ合衆国特許２
，７６８，１１４に、ＳＡＤはＣａｎ、Ｊ。HEP-Flury has, among other things, a US patent 2
, 768, 114, SAD Can, J.

ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 ６ｔ ６０６（
１９６０）に記載されている。of Microbiology, 6t 606 (
1960).

同様に用いた分析法もこの方面の技術でよく知られてい
る。Analytical methods similarly used are well known in this field.

放射免疫分析（ＲＩＡ）で測定された抗狂犬病ウィルス
抗体を産生ずる５２種のハイブリドーマを３種の狂犬病
ウィルス株、つまり、ＥＲＡ、ＣＶＳおよびＨＥＰ−Ｆ
ｌｕｒｙ株に対して試験した。Fifty-two hybridomas producing anti-rabies virus antibodies determined by radioimmunoassay (RIA) were combined with three rabies virus strains, namely ERA, CVS and HEP-F.
lury strain.

さらに４種の異なる分析、ウィルス中和（ＶＮ）細胞毒
試験（ＣＴ）、膜螢光（Ｍ）、ニュクレオカプシド螢光
（ＮＣ）を用いた。Additionally, four different assays were used: virus neutralization (VN), cytotoxicity test (CT), membrane fluorescence (M), and nucleocapsid fluorescence (NC).

結果は表７に示す。表７は、ひとつの株と反応した抗体
は、狂犬病ウィルスの他の株とは反応しないことのある
ことを示している。The results are shown in Table 7. Table 7 shows that antibodies that reacted with one strain may not react with other strains of rabies virus.

表７に示すように、狂犬病ウィルス抗体を分泌する５２
個のバイブリド細胞のうち、９個が、ウィルス中和、細
胞毒および膜免疫螢光の点で、ＥＲＡ、ＣＶＳおよびＨ
ＥＰ−Ｆｌｕｒｙの３株のすべてと反応した。As shown in Table 7, 52 that secrete rabies virus antibodies
Of the 2 hybrid cells, 9 showed ERA, CVS and H
It reacted with all three strains of EP-Flury.

１５個はＥＲＡおよびＨＥＰ株と反応し、２個はＥＲＡ
およびＣＶＳと反応し、３個はＥＲＡのみと、１個はＨ
ＥＰウィルスのみと反応した。15 reacted with ERA and HEP strains, 2 with ERA
and CVS; 3 react with ERA only and 1 with H
Reacted only with EP virus.

２８個のバイブリド培養物が、３個のウィルス株すべて
のニュクレオカプシドと反応する抗体を生産した。Twenty-eight hybrid cultures produced antibodies that reacted with the nucleocapsids of all three virus strains.

これらのうち２３個は、ニュクレオカプシドのみと反応
し、他のウィルス成分とは反応しなかった。Of these, 23 reacted only with nucleocapsids and did not react with other viral components.

狂犬病ウィルスの野生株（街上株、５ｔｒｅｅｔｓｔｒ
ａｉｎ ）と固定法の抗原関係を、さらに追加して１０
種の地理的由来の異なる株で調べてみた。Wild strain of rabies virus (street strain, 5treetstr.
ain) and the antigen relationship between the fixation method and the additional 10
We investigated strains with different geographical origins.

ＥＲＡを用い上記のようにハイブリドーマを製造した。Hybridomas were produced as described above using ERA.

表９に示す結果は、固定株Ｋｅ１６ｙウィルスは１個の
ハイブリドーマ（Ａｌ ２０ ）の分泌する抗体によっ
てのみ中和され、最近発見された南アフリカ野生株（Ｄ
ｕｖｅｎｈａｇｅ ）は２個のハイブリドーマにより生
産される抗体によってのみ中和された、これに対照的に
、Ａ １９３の抗体とは反応しなかったようにみえるＡ
Ｆ株を除いて、すべての野性ウィルス株はＶＮにおいて
交叉反応性を有するようである。The results shown in Table 9 show that the fixed Ke16y virus was neutralized only by antibodies secreted by one hybridoma (Al 20 ), and the recently discovered South African wild strain (D
uvenhage) was only neutralized by antibodies produced by the two hybridomas, in contrast to A193, which did not appear to react with antibodies from A193.
With the exception of strain F, all wild virus strains appear to be cross-reactive in VN.

ハイブリドーマの抗体は、ウィルスの固定法を用いるＶ
Ｎ分析では、きわめて不均質であるようにみえた。Hybridoma antibodies can be produced using virus immobilization methods.
The N analysis appeared to be highly heterogeneous.

たとえば、ＰＭおよびＣＶＳ株は共にＰａ５ｔｅｕｒ株
に由来しているが、Ｐａ５ｔｅｕｒ株とも、また、相互
にも反応が異なっていた。For example, although the PM and CVS strains are both derived from the Pa5teur strain, they reacted differently to the Pa5teur strain and to each other.

逆に、 ＳＡＤウィルスおよびそれに由来するＥＲＡは
、同じハイブリドーマにより分泌される抗体と同じ様式
で反応した。Conversely, the SAD virus and its derived ERA reacted in the same manner as antibodies secreted by the same hybridoma.

最後に、非病原性のＨＥＰは、＊ １２０抗体を用いる
ＶＮで、ＫｅｌｅＶ株と交叉反応性であった。Finally, non-pathogenic HEP was cross-reactive with the KeleV strain in VN using the *120 antibody.

しかし、さらに追加して、ＨＥＰは、３個の他のハイブ
リドーマの分泌する抗体により中和された。However, HEP was additionally neutralized by antibodies secreted by three other hybridomas.

１７１− 由来によらずすべてのウィルスは、固定しハイブリドー
マ１０４の生産する抗体にさらしたあとで細胞質内螢光
を示した（ＮＣ分析）、しかし７、それらウィルスのい
ずれも、ＶＮにおいては、同じパイブリドーマと反応し
なかった。171- All viruses, regardless of their origin, showed intracytoplasmic fluorescence after fixation and exposure to antibodies produced by hybridoma 104 (NC analysis), but 7 none of these viruses exhibited the same It did not react with pubidoma.

表７および８の結果は、抗狂犬病ウィルス抗体生産性の
バイブリド細胞は、研究および分析の目的に非常に有用
であることを示す。The results in Tables 7 and 8 indicate that the anti-rabies virus antibody-producing hybrid cells are very useful for research and analytical purposes.

狂犬病ウィルス中和抗体を分泌するバイブリド培養物は
狂犬病ウィルスの致死効果に対してマウスを保護した。Hybrid cultures secreting rabies virus-neutralizing antibodies protected mice against the lethal effects of rabies virus.

ハイブリドーマ大量培養物Ｃ−１およびＢ−１およびク
ローン１１０−５の細胞（表９をみよ）をＢＡＬＢ／ｃ
マウスの皮下に接種した、Ｃ−１および１１０．−５の
ハイブリドーマを接種してから２週間のうちに得られた
血清は、同じハイブリドーマの組織培養物よりの培地よ
りも１００倍高い狂犬病ウィルス抗体を示した。Cells of hybridoma bulk cultures C-1 and B-1 and clone 110-5 (see Table 9) were transferred to BALB/c
C-1 and 110. inoculated subcutaneously into mice. Sera obtained within 2 weeks after inoculation of the -5 hybridoma showed 100-fold higher rabies virus antibodies than medium from tissue cultures of the same hybridoma.

パイブリドーマ接種後５田こ、マウスにＰＭ狂犬病ウィ
ルスの致死量を脳内接種した。Five days after inoculation with the pibridoma, mice were intracerebrally inoculated with a lethal dose of PM rabies virus.

表９に示すように、ＶＮ抗体を分泌するハイブリドーマ
培養物を接種したマウスは、生存した。As shown in Table 9, mice inoculated with hybridoma cultures secreting VN antibodies survived.

しかし、ＶＮ抗体を分泌しないハイブリドーマを接種し
たマウスは防禦されえなかった。However, mice inoculated with hybridomas that do not secrete VN antibodies were not protected.

本発明のセルラインは、正常のひ臓およびミエローマの
両方の親細胞の特徴を示すバイブリド培養物を表わし、
そして単一の融合現象に由来しているようにみえる。The cell lines of the invention represent hybrid cultures that exhibit characteristics of both normal splenic and myeloma parental cells;
And it appears to originate from a single fusion phenomenon.

細胞の性質は次の理由からバイブリドである。The nature of the cell is hybrid for the following reasons.

（ａ） このセルラインは、親のＰ３Ｘ６３Ａｇ８ミ
エローマ細胞の発育を阻止するが正常のひ臓細胞の発育
は阻止しない選択的なＨＡＴ中に数ケ月発育した。(a) This cell line developed for several months during selective HAT, which arrests the development of parental P3X63Ag8 myeloma cells but not normal spleen cells.

ところで、正常のひ臓の細胞はインビローで４から５週
以上は恐らくは生存しないはづなのである。By the way, normal spleen cells are unlikely to survive in vitro for more than 4 to 5 weeks.

（ｂ） バイブリド細胞中の染色体の数は、正常のマ
ウスおよびミエローマの親細胞の和に近い。(b) The number of chromosomes in hybrid cells is close to the sum of normal mouse and myeloma parental cells.

（ｃ） ＨＫ−ＰＥＧ−１バイブリドは、Ｐ３Ｘ６３
Ａｇ８によっても分泌されるＩ ｇＧｌのみならずＩｇ
Ｇ３をも生成する。(c) HK-PEG-1 hybrid is P3X63
Not only IgGl secreted by Ag8 but also Ig
It also generates G3.

そして恐らくはバイブリド分子である。And it's probably a hybrid molecule.

（ｄ） バイブリドは抗ウィルス活性のある抗体を生
成する。(d) Virid produces antibodies with antiviral activity.

ところでＰ３Ｘ６３Ａｇ８は生成しない。By the way, P3X63Ag8 is not produced.

抗体はバイブリドセルラインをインビトロ−で増殖させ
て生成さすのがもつとも良いが、バイブリドセルライン
を組織的に許容されうる動物に注射しそしてインビボ−
に抗体を生成されこともできる。Antibodies can be produced by growing hybrid cell lines in vitro, but they can also be produced by injecting hybrid cell lines into tissue-tolerated animals and producing them in vivo.
Antibodies can also be generated.

たとえば、比較的安価な動物であるマウスに、本発明に
よる、マウスに由来する抗体生産性細胞を注射して、血
清および腹水中に採取しつる抗体を生成させうる。For example, mice, which are relatively inexpensive animals, can be injected with mouse-derived antibody-producing cells according to the invention to produce antibodies collected in serum and ascites fluid.

前記論理の表６は、このような条件で得られる抗体の量
を示す。Table 6 of the above logic shows the amount of antibody obtained under these conditions.

バイブリドにより生成される抗体は標準技術を用いて採
取しうる。Antibodies produced by hybrids can be harvested using standard techniques.

そして血液試料および培地中のウィルス性抗原の同定の
ために分析医学的研究に使用しうる。and can be used in analytical medical research for the identification of viral antigens in blood samples and media.

インビトロ−で生成される抗体は、均質で、ウィルス性
抗原に対して高度に特異的である。Antibodies produced in vitro are homogeneous and highly specific for viral antigens.

それぞれ特定の抗原に対して高度に特異的な種々な均質
の抗体の供給は、抗原の特異性をすみやかに測定しそし
て（または）ウィルス性抗原を特徴づけることを可能と
する。The provision of a variety of homogeneous antibodies, each highly specific for a particular antigen, allows the specificity of the antigen to be readily determined and/or to characterize viral antigens.

さらに、抗体は、病気の克服を助けるために、罹病動物
に投与されうる。Additionally, antibodies can be administered to diseased animals to help overcome the disease.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １ ひ臓または淋巴節に見出されるタイプのウィルス抗
体生産性細菌胞とミエローマ細胞との融合細胞バイブリ
ドを調製し、該バイブリドを培養し、そしてウィルス抗
体を採取することからなる、ウィルス抗体の製造方法。 ２ 該バイブリドをインビトロ−で培養する、特許請求
の範囲第１項に記載の方法。 ３ 該バイブリドをクローン化し、ヒポキサンチン−ア
ミノプテリン−チミジン含有培地中に培養する１、特許
請求の範囲第２項に記載の方法。 ４ 該バイブリドを組織的に許容される動物に注射しそ
してインビボ−で培養する、特許請求の範囲第１項に記
載の方法。 ５ 該バイブリドがクローンである、特許請求の範囲第
４項に記載の方法。 ６ 該ウィルス抗体生産性細細胞がひ臓細胞および淋巴
節細胞より成る群より選択した細胞である、特許請求の
範囲第１項に記載の方法。 １ 該ウィルス抗体生産性細胞がひ臓細胞である、特許
請求の範囲第１項に記載の方法。 ８ 該ひ臓がマウスのひ臓で該ミニ−ローマがマウスミ
エローマである、特許請求の範囲第６項に記載の方法。 ９ 該ミエローマがＭＯＰＣ−２１ラインに由来する（
Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８）である、特許請求の範囲第１項に記
載の方法。 １０該ウィルス抗体生産性細胞を、ウィルスで免疫した
動物よりうる、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 １１ 該ウィルス抗体生産性細胞をウィルスで免疫した
動物よりうる、特許請求の範囲第２項に記載の方法。 １２該ウィルス抗体生産性細胞を、ウィルスで免疫した
マウスよりうる、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 １３該ウイルスがインフルエンザウィルスである、特許
請求の範囲第１１項に記載の方法。 １４該ウイルスが狂犬病ウィルスである、特許請求の範
囲第１２項に記載の方法。 １５ＢＡＬＢ／ｃマウスにウィルスを注射して、該マウ
スのひ臓細胞による抗体産生を誘導させ、該ウィルス抗
体生産性ひ臓細胞とＭＯＰＣ−２１ラインに由来するＢ
ＡＬＢ／ｃミエローマ セルクローン（Ｐ３Ｘ６３Ａｇ
８）との融合細胞ハイブリドを形成させ、選択的ＨＡＴ
培地中でインビトロ−で該バイブリドを培養し、生成抗
体を採取することからなる特許請求の範囲第１項に記載
の方法。 １６該ウイルスがインフルエンザウィルスである。 特許請求の範囲第１５項に記載の方法。 １７該ウイルスがインフルエンザウィルス６−９９４株
である、特許請求の範囲第１５項に記載の方法。 １８該ウイルスがシミアン（５１ｍ１ａｎ ）ウィルス
４０である。 特許請求の範囲第１５項に記載の方法。１９該ウイルス
が狂犬病ウィルスである、特許請求の範囲第１５項に記
載の方法。[Scope of Claims] 1. A method consisting of preparing a fused cell hybrid of myeloma cells and a viral antibody-producing bacterial sac of the type found in the spleen or myeloma, culturing the hybrid, and collecting the viral antibody. Method for producing virus antibodies. 2. The method according to claim 1, wherein the hybrid is cultured in vitro. 3. The method according to claim 2, wherein the hybrid is cloned and cultured in a medium containing hypoxanthine-aminopterin-thymidine. 4. The method of claim 1, wherein the hybrid is injected into a tissue-tolerant animal and cultured in vivo. 5. The method of claim 4, wherein the hybrid is a clone. 6. The method according to claim 1, wherein the virus antibody-producing cell is a cell selected from the group consisting of spleen cells and lichen cells. 1. The method according to claim 1, wherein the virus antibody-producing cells are spleen cells. 8. The method of claim 6, wherein the spleen is a mouse spleen and the mini-roma is a mouse myeloma. 9 The myeloma is derived from the MOPC-21 line (
P3X63Ag8). 10. The method according to claim 1, wherein the virus antibody-producing cells are obtained from an animal immunized with a virus. 11. The method according to claim 2, wherein the virus antibody-producing cells are obtained from an animal immunized with a virus. 12. The method according to claim 1, wherein the virus antibody-producing cells are obtained from a mouse immunized with a virus. 13. The method of claim 11, wherein the virus is an influenza virus. 14. The method of claim 12, wherein the virus is rabies virus. 15 BALB/c mice were injected with the virus to induce antibody production by the mouse's spleen cells, and the virus antibody-producing spleen cells and B derived from the MOPC-21 line were
ALB/c myeloma cell clone (P3X63Ag
8) to form a fused cell hybrid with selective HAT
2. The method according to claim 1, which comprises culturing the hybrid in vitro in a medium and collecting the produced antibodies. 16 The virus is an influenza virus. A method according to claim 15. 17. The method according to claim 15, wherein the virus is influenza virus strain 6-994. 18 The virus is Simian (51m1an) virus 40. A method according to claim 15. 19. The method of claim 15, wherein the virus is rabies virus.