JPS59219262A - Disulfide derivative and adjuvant containing the same - Google Patents

Abstract

NEW MATERIAL:The compound of formula (R<1> is acyl obtained by removing hydroxyl group from diene higher fatty acid or triene higher fatty acid; R<2> is H or carbomethoxy having S-configuration). EXAMPLE:N, N'-Dilinoleylcystamine. USE:An immuno-activating agent. It has recovering activity from the immunosuppressive state, increasing action to the immune stimulation below a threshold level, and immunoregulating action, and is effective to infectious diseases, cancer, and rheumatism. PREPARATION:The compound of formula can be prepared by reacting cystamine or L-cystine with the above higher fatty acid in the presence of a condensation agent (preferably N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, etc.). The diene higher fatty acid referred in the definition of R<1> is preferably linoleic acid, and the triene higher fatty acid is preferably alpha-linolenic acid.

Description

【発明の詳細な説明】 ■９発明の背景 技術分野 本発明はジスルフィド誘導体およびそれを用いた免疫賦
活剤に関するものである。本発明によって提供さ才りる
ジスルフィド誘導体は遣１規化合物でるって、免疫賦活
作用を有する。従って、免疫抑制状態の回復作用、閾値
以下の免疫刺戟に対する増強作用、すなわち免疫調節作
用があるので感染症、癌、リュウマチに有効である。Detailed Description of the Invention (9) Background of the Invention Technical Field The present invention relates to a disulfide derivative and an immunostimulant using the same. The disulfide derivatives provided by the present invention are monocyclic compounds and have immunostimulatory effects. Therefore, it is effective against infectious diseases, cancer, and rheumatism because it has an effect of restoring immunosuppression and an effect of enhancing immune stimulation below the threshold, that is, an immunomodulating effect.

先行技術 ジエン高級脂肪酸であるリノール酸およびトリエン高級
脂肪酸であるα−リルン酸はヒトの必須Ｒｈ’　１１）
ｊ酸でめシ重侠な化合物であることは知らｔている。Prior Art Linoleic acid, which is a diene higher fatty acid, and α-lylunic acid, which is a triene higher fatty acid, are essential Rh'11)
It is known that acid is a very powerful compound.

本発明者船はジスルフィド誘導体を種々合成し、それら
の免疫賦活作用を鋭意研究した結果、ジスルフィド誘導
体に抗体産生細胞数を増加させる作用を見い出し本発明
を完成するに至った。As a result of synthesizing various disulfide derivatives and intensively studying their immunostimulatory effects, the present inventor has discovered that disulfide derivatives have an effect of increasing the number of antibody-producing cells, and has completed the present invention.

■１発明の目的 本発明は免疫賦活作用を有するジスルフィドルナ導体お
よびそれを用いた免疫賦活剤を提供することを目的とす
る。免役能の低下している感染症や癌は、成人病の中で
大きな割合を占めておシ、これに対する薬剤の出現が強
く望まれている。(1) Purpose of the Invention The object of the present invention is to provide a disulfide dorna conductor having an immunostimulatory effect and an immunostimulant using the same. Infectious diseases and cancers that cause a decline in immune function account for a large proportion of adult diseases, and there is a strong desire for the development of drugs for these diseases.

本発明はさらに免疫調節の必要なリュウマチに対しても
有用なジスルフィド誘導体を提供することを目的として
いる。A further object of the present invention is to provide disulfide derivatives that are also useful for rheumatism, which requires immunomodulation.

■０発明の詳細な説明 本発明は 一般式 （式中Ｒ１１ｄジ工ン高級脂肪酸またはトリエン高級脂
肪酸からヒドロキシ基を除いたアシル基、Ｒ２は水素原
子または旦装置カルボメトキシ基）で示めされるジスル
フィド誘導体である。Detailed Description of the Invention The present invention is represented by the general formula (wherein R11d is an acyl group obtained by removing a hydroxyl group from a diene higher fatty acid or a triene higher fatty acid, and R2 is a hydrogen atom or a carbomethoxy group). It is a disulfide derivative.

また、本発明は 一般式 （式中Ｒ１はジエン高級脂肪酸またはトリエン高級脂肪
酸からヒドロキシ基を除いたアシル基、Ｒ２は水素原子
または旦装置カルボメトキシ基）で示めされるジスルフ
ィド誘導体を用いた免疫賦活剤である。Furthermore, the present invention provides immunization using a disulfide derivative represented by the general formula (wherein R1 is an acyl group obtained by removing a hydroxyl group from a diene higher fatty acid or a triene higher fatty acid, and R2 is a hydrogen atom or a carbomethoxy group). It is an activator.

本発明によって提供される前記一般式で示されるジスル
フィド誘導体において　Ｒ１の定義としてのジエン高級
脂肪酸はりソール酸であることが好ましく、トリエン高
級脂肪酸はα−リルン酸が好ましい。In the disulfide derivative represented by the general formula provided by the present invention, the diene higher fatty acid as defined by R1 is preferably lysolic acid, and the triene higher fatty acid is preferably α-lylunic acid.

本発明の前記式で示めされるジスルフィド誘導体は、シ
スタミンあるいはＬ−シスチンと該高級脂肪酸とを縮合
剤の存在下で反応させることにより得られる。縮合剤の
例としては、Ｎ。The disulfide derivative represented by the above formula of the present invention can be obtained by reacting cystamine or L-cystine with the higher fatty acid in the presence of a condensing agent. Examples of condensing agents include N.

り Ｎ′−ジシテロへキシルカルボジイミド、２−クロロ−
１−メチルピリジニウムＰ−）ルエンスルホン酸塩等が
挙げられる。N'-dicyterohexylcarbodiimide, 2-chloro-
Examples include 1-methylpyridinium P-)luenesulfonate.

本発明のジスルフィド誘導体は免疫賦活剤または抗すュ
マチ剤として使用され、投与量は成人１日ｆＵ１００〜
２０００ダであり、必要によ９１〜３回に分けて投与す
る。投与方法は経口投与が望ましいが静注も可能である
。The disulfide derivative of the present invention is used as an immunostimulant or an anti-inflammatory agent, and the dosage range is 100 to 100 fU per day for adults.
The dose is 2,000 Da, which is divided into 91 to 3 doses if necessary. Oral administration is preferable, but intravenous injection is also possible.

本発明の化合物は通常の方法で製剤担体あるいは賦形剤
と混合され、錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤に製剤化
され、担体あるいは賦形剤の例としては炭酸カルシウム
、リン酸カルシウム、でんぷん、蔗糖、乳粉ｉ、メルク
、ステアリン酸マクネシウム等があけられる。The compound of the present invention is mixed with a pharmaceutical carrier or excipient in a conventional manner and formulated into a tablet, powder, capsule, or granule. Examples of the carrier or excipient include calcium carbonate, calcium phosphate, starch, and sucrose. , Milk Powder I, Merck, Magnesium Stearate, etc.

次に実施例および試販例を示して本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらにイ０」ら限定されるも
のではない。Next, the present invention will be explained in more detail by showing examples and trial sales examples, but the present invention is not limited to these examples.

実施例１ アルゴン雰囲気下、リノール酸２２５３〜を、無水１．
２−ジクロルエタン３５ｍ１に溶解し、水冷下Ｎ−メチ
ルー２−クロルピリジニウムＰトルエンスルホン１ｔ４
２８８８　ｍｇ、　）　ＩＪエチルアミン４０９５〜を
加え２０分攪拌する。つづいてシスタミン塩酸塩２５３
１〜を加え水冷下に２５分ついで室温にて５５分反応さ
せた後Ｎ−メチル−２−クロルヒリシニウムＰトルエン
スルホン＆４４８１りを追加しさらに室温３５分反応さ
せた。反応抜水を加えジクロルメタ／で２回抽出水洗し
た。Example 1 Under an argon atmosphere, linoleic acid 2253~ was mixed with anhydride 1.
Dissolved in 35 ml of 2-dichloroethane, cooled with water, and dissolved in 1 t4 of N-methyl-2-chloropyridinium P toluenesulfone.
2888 mg, ) IJ Ethylamine 4095 ~ was added and stirred for 20 minutes. Next, cystamine hydrochloride 253
1 to 1 were added, and the mixture was reacted for 25 minutes under water cooling, and then for 55 minutes at room temperature, and then N-methyl-2-chlorohyricinium P-toluenesulfone & 4481 was added, and the mixture was further reacted at room temperature for 35 minutes. The reaction water was added, and the mixture was extracted twice with dichloromethane and washed with water.

芒不肖乾燥後溶媒を留去し残渣３．４２１を得た。これ
をシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーに付し、
ベンゼン・酢酸エチル２：１溶出部より　Ｎ　；　Ｎ’
−ジリルイルミスタミン１６２６　ｒｎｇを得た。After drying, the solvent was distilled off to obtain a residue 3.421. This was subjected to column chromatography using silica gel,
From the benzene/ethyl acetate 2:1 elution part N; N'
- Dilylylmistamine 1626 rng was obtained.

このものの物理化学的テークは以下の通シであり、その
楊造を支持するものである。The physicochemical theory of this phenomenon is as follows, which supports Yangzo's theory.

ＸＲｖ’、’：：ｔ３ｃｍ　’　：　３４５０　、３３
３０　、１６７ＯＮＭＲ（ＣＤＣｔｓ　）δ（ｐＰｍ）
　：　０．８９　（６Ｈ、ｂｔ　Ｊ＝７Ｈｚ）２．０８
　（４Ｈ、ｔＪ＝７Ｈｚ）　、　２．７８　（８Ｈ、ｔ
Ｊ＝７Ｈｚ）３．５５（４Ｈ、ｑＪ＝７Ｈｚ）　、　５
．３１（８Ｈ、ｍ　）ｍａｓｓ　ｍ／ｅ　　：　６７６
分子イオンビーク実施例２ アルゴン雰囲気下αニリルン酸８２３　ｒｒｑ　＊、無
水１，２−ジクロルエタン１５−に溶解し、水冷下Ｎ−
メｆルー２−１’ロルヒリシニウムＰトルエンスルホン
酸塩１０６２〜．トリエチルアミン８６４〜を加え２０
分攪拌した。つづいてシスタミン塩酸塩３９９■を加え
て、水冷下２０分ついで室温で６．５時間反応させた。XRv','::t3cm': 3450, 33
30, 167ONMR(CDCts)δ(pPm)
: 0.89 (6H, bt J=7Hz) 2.08
(4H, tJ=7Hz), 2.78 (8H, t
J=7Hz) 3.55 (4H, qJ=7Hz), 5
．． 31 (8H, m) mass m/e: 676
Molecular Ion Beak Example 2 α-Nylylunic acid 823 rrq * under argon atmosphere, dissolved in anhydrous 1,2-dichloroethane 15- and N- under water cooling.
Mehru 2-1' lorhyricinium P toluenesulfonate 1062~. Add triethylamine 864～20
The mixture was stirred for a minute. Subsequently, 399 μm of cystamine hydrochloride was added, and the mixture was allowed to react for 20 minutes under water cooling, and then for 6.5 hours at room temperature.

反応抜水を加えジクロルメタンで２回抽出、水洗した。The reaction water was added, extracted twice with dichloromethane, and washed with water.

芒硝乾燥後、溶媒を留去し残渣１２６５〜を得た。これ
をシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーに伺しベ
ンゼン・酢酸エチ／ｌ／４：１溶出部よりＮ　、　Ｎ’
−ジα−リルニルミスタミン６２０　ｒｎｇを得た。After drying the Glauber's salt, the solvent was distilled off to obtain a residue 1265~. This was subjected to column chromatography using silica gel, and N and N' were detected from the benzene/ethyl acetate/l/4:1 eluate.
620 rng of -diα-lylnyrmistamine was obtained.

このものの物理化学的データは以下の通りである。　　
′ ＩＲを社：’３ａｎ　’：　３４５０　．３３３０　．
１６６５ＮＭＲ（ＣＤＣｔ３）δ（ｐｐｍ）　１１　ｏ
、９６（６Ｈ，ｔＪ＝７．５Ｉ（ｚ）２．１°２（４Ｈ
、ｔＪ＝８Ｈｚ）　、　２．８０（１２Ｈ、ｂｔ　Ｊ＝
７Ｈｚ）　、　３．５６（４Ｈ、ｑＪ＝７Ｈｚ）　、　
５．３５（１２Ｉ（。The physicochemical data of this product are as follows.
'IR wosha: '3an': 3450. 3330.
1665NMR (CDCt3) δ (ppm) 11 o
,96(6H,tJ=7.5I(z)2.1°2(4H
, tJ=8Hz), 2.80(12H, bt J=
7Hz), 3.56 (4H, qJ=7Hz),
5.35(12I(.

ｍ） ｍａｓｓ　　ｍ／ｅ　：　６７２　　分子イオンビーク
実施例３ アルゴン雰囲気下リノール酸１４９１〜を無水１．２−
ジクロルエタン２５ｍ１に溶解し、室温にてＮ−メチル
−２−クロルピリジニウムＰ−）ルエンスルホン酸塩１
９１３　ｍｆ、シスチンジメチルエステル塩酸塩１８０
９■、トリエチルアミン１８０３■を順に加えて攪拌し
た。m) mass m/e: 672 Molecular ion beak Example 3 In an argon atmosphere, linoleic acid 1491~ was converted to anhydride 1.2-
1 of N-methyl-2-chloropyridinium P-)luenesulfonate dissolved in 25 ml of dichloroethane at room temperature.
913 mf, cystine dimethyl ester hydrochloride 180
9 ■ and triethylamine 1803 ■ were added in this order and stirred.

室温で２時間反応後、水冷下、水と氷片を加え０．５Ｎ
−シュウ酸により弱酸性としてからジクロルメタンで３
回抽出、水洗した〇 芒硝乾燥後溶媒を留去し、残ｉ　２５２３〜を得た。こ
れを７リカゲルによるカラムクロマトグラフィーに付し
ベンゼン・酢酸エチル９：１溶出部よ、９　Ｎ　、　Ｎ
’−シリルイルシスチンジメチルエステル９８０ηを得
た。After reacting at room temperature for 2 hours, add water and ice pieces under water cooling to 0.5N
-Make it weakly acidic with oxalic acid, then add 3 dichloromethane to make it weakly acidic.
After extraction, washing with water and drying of mirabilite, the solvent was distilled off to obtain residue i2523. This was subjected to column chromatography using 7-silica gel, and the benzene/ethyl acetate 9:1 eluate was 9 N, N
'-Silylycystine dimethyl ester 980η was obtained.

このものの物理化学的テークは以下の通りである・ ＩＲｕ：＝ａｃｎ１”　：　３４３０　、１７４７　、
１６８２　＋５０２ ＮＭＲ（ＣＤＣｔ３　）δ（ｐｐｍ）　：　０．８９（
６Ｈ、ｂｔ　Ｊ　＝６Ｈｚ）２．７５（４Ｈ、ｂｔ　Ｊ
＝５Ｈｚ）　、　３．１８（４Ｈ、ｄ　Ｊ＝５．５Ｈｚ
）　、　３．７４（６Ｈ、ｓ　）　、　４．８３（２Ｈ
、ｄｔＪ＝−７，５、５，５Ｈｚ）　、　５．３１　（
８Ｈ、ｍ　）ｍａｓｓ　　ｍ／ｅ　：　７９２　分子イ
オンビーク実施例４ アルゴン雰囲気下α−リルン酸１６７３〜を無水１，２
−ジクロルエタン２５コに溶解し、室温にてＮ−メチル
−２−クロルピリジニウムＰトルエンスルホンｉｆｆ　
２１６２　ｒｎｇ、シスチンジメチルエステル塩酸塩１
２３１η、トリエチルアミン２０４５ｍｇを順に加え攪
拌した。室温で２時間反応後、水冷下水と氷片を加え０
．５Ｎ−シュウ酸によシ弱畝性としてからジクロルメタ
ンで３回抽出水洗した。The physicochemical take of this is as follows: IRu:=acn1”: 3430, 1747,
1682 +502 NMR (CDCt3) δ (ppm): 0.89 (
6H, bt J = 6Hz) 2.75 (4H, bt J
=5Hz), 3.18(4H, d J=5.5Hz
), 3.74 (6H, s), 4.83 (2H
, dtJ=-7,5,5,5Hz), 5.31 (
8H, m) mass m/e: 792 Molecular ion beak Example 4 α-lylunic acid 1673 ~ in an argon atmosphere was converted to anhydride 1,2
-N-methyl-2-chloropyridinium P toluenesulfone iff dissolved in 25 volumes of dichloroethane at room temperature
2162 rng, cystine dimethyl ester hydrochloride 1
231η and 2045 mg of triethylamine were added in this order and stirred. After reacting at room temperature for 2 hours, add water and ice pieces under water cooling.
．． It was made into weak ridges with 5N-oxalic acid, extracted with dichloromethane three times, and washed with water.

芒硝乾燥後溶媒を留去し、残治３１２０■を得た。これ
をシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーに付しベ
ンゼン・酢酸エチル９：１溶出部よ、ｊ）　Ｎ　、　Ｎ
’−ジα−リルニルシスチンジメチルエステル１５２５
ｍｒを得た。このものの物理化学的データは以下の通シ
である。After drying the sodium sulfate, the solvent was distilled off to obtain a residue of 3120 cm. This was subjected to column chromatography using silica gel, and the benzene/ethyl acetate 9:1 eluate was obtained.j) N, N
'-dialpha-lylnylcystine dimethyl ester 1525
I got mr. The physicochemical data of this product are as follows.

ＩＲｖ：’：：’３ｃｍ　”　　：　３４２５．１７５
０．１６８０　。IRv:'::'3cm'': 3425.175
0.1680.

５０５ ＮＭＲ（ＣＤＣＡｓ　）δ（ｐＰｍ）　：　０．９３（
６Ｈ，ｔＪ＝７．５Ｈｚ）　、　２．７７（８Ｈ、ｂｔ
　Ｊ＝５Ｈｚ）　、　３．１８（４Ｈ。505 NMR (CDCAs) δ (pPm): 0.93 (
6H, tJ=7.5Hz), 2.77(8H, bt
J=5Hz), 3.18 (4H.

ｄ　Ｊ＝５Ｈｚ）　、　３．７２（６Ｈ、ｓ　）　、　
４．８３（２Ｈ。dJ=5Hz), 3.72(6H,s),
4.83 (2H.

ｄｔ　Ｊ＝７　、５Ｈｚ）　、　５．３０（１２Ｈ、ｍ
　）ｍａｓｓ　ｍ／ｅ　：　７８８　　分子イオンピー
ク試験例 抗体産生賦活作用 実験は、所謂キュニングノ・ム（Ｃｕｎｎｉｇｈａｍ）
のプラーク法〔イムノロジー（１ｍｍｕｎｏｔｏｇｙ）
、月。dt J=7, 5Hz), 5.30 (12H, m
) mass m/e: 788 Molecular ion peak test example Antibody production activation effect experiment was conducted using the so-called Cunningham
plaque method [immunology (1mmunology)]
,Month.

５９９　（１９６８）　）によシ抗体産生能を測定した
。599 (1968)), the antibody production ability was measured.

９〜１０週令ＢＡＬＢ／’Ｃ雌マウスに１×１０８個の
ヒツジ赤血球（５ＲＢＣ）を腹腔内投与直後サンプルを
腹腔内投与する。感作４日後に牌臓を摘出し、牌細胞を
イーグル（Ｅａｇｌｅ　）　ＭＥＭ培養液中に分散する
。牌細胞希釈液２モルモット補体、ヒツジ赤血球を混ぜ
キュニングハム（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ　）チャンバー
に充填し、３７℃で６０分間保温する。プラーク数を測
定し、牌臓当シの抗体産生細胞数を算出する。結果を第
１表に示す。Immediately after intraperitoneal administration of 1 x 108 sheep red blood cells (5 RBCs) to 9-10 week old BALB/'C female mice, the sample is intraperitoneally administered. Four days after sensitization, the spleens are removed and the spleen cells are dispersed in Eagle MEM culture medium. Two guinea pig complements and sheep red blood cells were mixed in a diluted tile cell solution, filled into a Cunningham chamber, and incubated at 37°C for 60 minutes. Measure the number of plaques and calculate the number of antibody-producing cells in the spleen. The results are shown in Table 1.

■１発明の作用効果 本発明によれは、免疫賦活効果を有するジスルフィド誘
導体が提供される。(1) Effects of the Invention The present invention provides a disulfide derivative having an immunostimulatory effect.

本発明の上記化合物は、マウス牌細胞のプラーク形成細
胞（ＰＦＣ）応答を著明に促進するので、感染症、癌等
の免疫抑制状態にある疾患に対し第　　　１　　　表 て有効に使用することができる。また、本発明の上記化
合物の如き免疫賦活作用を有する化合物は濃度により免
疫抑制作用を示すという両面性が広く認められているの
で、免疫調節の必要とされる該化合物はリュマチに対し
ても有効に使用す°ることかできる。The above-mentioned compounds of the present invention markedly promote the plaque-forming cell (PFC) response of mouse tile cells, and therefore can be effectively used against diseases in which immunosuppression is present, such as infectious diseases and cancer. can. In addition, it is widely recognized that compounds with immunostimulatory effects such as the above-mentioned compounds of the present invention exhibit immunosuppressive effects depending on the concentration, so these compounds, which require immunomodulation, are also effective against rheumatoid arthritis. Can be used for.

さらに、本発明によれば、上記ジスルフィド誘導体の製
造方法が提供される０ 出願人　　テルモ株式会社Furthermore, according to the present invention, a method for producing the above-mentioned disulfide derivative is provided.0 Applicant: Terumo Corporation

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] （１）一般式 （式中Ｒ１はジエン高級脂肪酸またはトリエン高級脂肪
酸からヒドロキシ基を除いたアシル基、Ｒ２は水素原子
または旦装置カルボメトキシ基）で示されるジスルフィ
ド誘導体。(1) A disulfide derivative represented by the general formula (wherein R1 is an acyl group obtained by removing a hydroxyl group from a diene higher fatty acid or triene higher fatty acid, and R2 is a hydrogen atom or a carbomethoxy group). （２）ジエン高級脂肪酸がリノール酸である特許請求の
範囲第１項記載のジスルフィド誘導体。(2) The disulfide derivative according to claim 1, wherein the diene higher fatty acid is linoleic acid. （３）トリエン高級脂肪酸がα−リルン酸である特許請
求の範囲第１項記載のジスルフィド誘導体。(3) The disulfide derivative according to claim 1, wherein the triene higher fatty acid is α-lylunic acid. （４）一般式 （式中Ｒ１はジエン高級脂肪酸またはトリエン高級脂肪
酸からヒドロキシ基を除いたアシル基。 Ｒ２は水素原子または旦装置カルボメトキシ基）で示さ
れるジスルフィド誘導体を用いた免疫賦活剤。(4) An immunostimulant using a disulfide derivative represented by the general formula (wherein R1 is an acyl group obtained by removing a hydroxyl group from a diene higher fatty acid or a triene higher fatty acid; R2 is a hydrogen atom or a carbomethoxy group). （５）ジエン高級脂肪酸がリノール酸である特許請求の
範囲第４項記載のジスルフィド誘導体を用いた免疫賦活
剤。(5) An immunostimulant using a disulfide derivative according to claim 4, wherein the diene higher fatty acid is linoleic acid. （６）トリエン高級脂肪酸がα−リルン酸である特許請
求の範囲第４項記載のジスルフィド誘導体を用いた免疫
賦活剤。(6) An immunostimulant using a disulfide derivative according to claim 4, wherein the triene higher fatty acid is α-lylunic acid.