JPS59213397A - デオキシウリジン誘導体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、５−置換−２′−デオキシウリジン誘導体の
酵素的な製造法に関する。さらに具体的には、本発明は
、このヌクレオシドの塩基部分すなわち５−置換ウラシ
ル化合物と糖部分すなわち２−デオキシリボース化合物
と’ｚ％定の属に属する微生物の酵素作用下に結合させ
て、このヌクレオシＰを製造する方法に関する。

５−置換−２′−デオキシウリ、ノン誘導体は抗腫瘍性
または抗ウィルス注を示すことで知られている一群の化
合−吻であって、それ自身医薬としであるいは医薬原料
として使用しうるＭ用なものである。具体的には、たと
えば、５−フルオロ−２′−デオキシウリジンは抗腫瘍
活性を、５−トＩＪフルオロメチルー２′−デオキノウ
リジンは抗ウィルス活性を、持つものとして１ｌｄｉ瘍
ないしウィルス病の治療の分野での利用が期待されてい
る化合物である。

先行技術 ピリミジンデオキシリポヌクレオンドを対応塩基化合物
と対応デオキシリボース化合１勿との酵素的反応によっ
てつくることは、特開昭５６（０２７９４号公報によっ
て公知である。この公知方法では、酵素は微生物由来の
ものであるところ、この微生物は１０種の特定の属に属
するものである。

また、同様な反応は、特公昭３５−１６４７８号（およ
び特公昭４２−３４９７−Ｑ公報）によっても知らｔし
ている。

発明の概要 本発明は、特定の属に滅する微生物に由来する酵素の作
用の下に対応塩基化合物と対応デオキシリボース化合物
とを反応させて５−置換２′−デオキシウリジン誘得体
を製造する方法に関する。

従って、本発明によるデオキシウリジン誘導体の製造法
は淋）下式（１）で示されるウラシル化合物と（Ｂ）下
記の群から選んだ２−デオキシ１ノボース化合物と金、
（Ｃ）下記の群から選んだ桐に属するイ政生物ニ由来す
るヌクレオシドホスホリラーゼ源の存在下に反応させて
下式（ＩＩ）で示される５−置換−２′−デオキシウリ
ジン誘導体を生成させること、を特徴とするものである
。

（ここで、Ｘはハロゲン、・・ロメチル基、低級アルキ
ル基、低級アルコキシル基、またはニトロ基を、Ｙは水
素または糖残基を、示す）Ｈ （Ｘは、前記と同意義である） （イ）２′−デオキシリポヌクレオシＰ１（ロ）２′−
デオキシリボヌクレオシドおよびその塩ならびに （ハ）２−デオキシリボース−１−りん酸およびその塩 微生物 （１）アクロモノマクター（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅ
ｒ　）属（２）アルテロモナス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａ
ｓ）属（３）アースロパクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ　）属（４）ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属（５）セルロモナス（Ｃｅｌｌｕｌ
ｏｍｏｎａｓ）属（６）コリオ、バクテリウム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａｃｔｅｒ　ｉｕｍ）属（７）フラポノζクテ
リウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）Ｍ（８）クル
チア（Ｋｕｒｔｈｉａ）属 （９）ミクロコツカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属０
０）プロタミノバクタ−（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔ
ｅｒ）属圓８ビモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属０
２）サルシナ（５ａｒｃｉｎａ）　ＫＡ０３）スタフィ
ロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　）属およ
び Ｑ４）ビズリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属 本発明による酵素的製造法の出発原料ないし酵素反応基
質の一つは、前記一般式［１’ｌで表わされるウラシル
化合−吻である。本発明による反応はこのピリミジン塩
基の１−位の窒素原子に２−デオキシリボース化合物の
β−Ｄ−デオキシリポフラノ／ル基を転移させることか
らなるものである。

５−位の置換基は、核酸化学の分野でηり用されうる任
意のものでありうる。具体的には、たとえば、ハロゲン
、ハロメチル基、低級アルキル基、低級アルコキシル基
、ニトロ基、その他かめる。

これらのうちの代表例は、フルオロ、ヨーＰ１　　ブロ
モ、トリフルオロメチル、メチル、メトキシルおよび二
１・口でちる。

１位（の置換基）は、水累または糖残基である。

糖残基は、核酸化学の分野で４１」用されうる任意のも
のでありうる。具体的には、たとえば、リボース残基、
アラビノース残基、キシロース残基なとの五炭糖残基、
その他がある。これらのうち代表例Ｔｄリボース残基で
ある。

従って、本発明で好筐しいウラシル化合物は、下記のｌ
ｌ１１りである。

５−フルオロウラシル（ＦＵｒａ） ５−フルオロウリジン（ＦＵｒｄ） ５−ヨードウラシル（ＩＵｒａ　） ５−ブロモウラシル（ＢｒＵｒａ　） ５−ブロモウリジン（ＢｒＵｒｄ　） ５−トリフルオロメチルウラシル（ＴＦＭＴＪｒ　ａ　
）チミン（Ｔｈｙ　） リボシルチミン（ｒＴｈｄ） ５−メトギシウラシル ５−ニトロウラシル この化合物は、本発明反応においてＭｉ前記ラウシル化
合物の１−位の４素原子に２−デオキシリボース部分を
導入するためのものであるから、２−デオキシリボース
供与体ということができる。

この２−デオキシリボース化合物は、下記の（イ）〜（
ハ）の群から選ばれる。

（イ）２′−デオキシリボヌクレオシド２′−デオキシ
リボヌクレオシドとしては、具体的には、下記のものが
ある。

２′−デオキシウリジン（ｄＵｒｄ） ２′−デオキシシチジン（ｄＣｙｄ） チミ・ノン（Ｔｈｄ） ２′−デオキシアデノシン（ｄＡｄｏ）２′−デオキシ
グアノシン（ｄＧｕｏ）２′−デオキシイノシン（ｄＩ
ｎｏ） （ロ）２′−デオキシリボヌクレオシドおよびその塩２
′−デオキシリボヌクレオチドとしては上記のようなヌ
クレオシドの３′−および（′または）５′−位でのモ
ノ−、ジーまたはトリーりん酸エステルが適当であり、
具体的には下記のものがある。

２′−デオキシウリジン−５′−モノりん酸（ｄＵＭＰ
）２′−デオキシウリジン−５′−ジりん酸（ｄＵＤＰ
）２′−デオキシウリジン−５′−トリりん酸（ｄＵＴ
Ｐ　）２′−デオキシシチジン−５′−モノりん酸（ｄ
　ＣＭＰ　）２′−デオキシシチジン−５′−ジりん酸
（ｄＣＤＰ）２′−デオキシシチジン−５′−トリりん
酸（ｄＣＴＰ）チミジン−５′−モノりん酸（ＴＭＰ）
チミジン−５′−ジりん酸（ＴＤＰ） チミジン−５′−トリりん酸（ＴＴＰ）２′−デオキシ
アデノノン−５′−モノりん酸（ｄ　ＡＭＰ　’２′−
デオキシアデノシンー５′−ジりん酸（ａＡＤＰ）２′
〜デオキシアデノシン−５′−トリりん酸（ｄＡＴＰ）
２′−デオキシグアノシン−５′−モノりん酸（ｄＧＭ
Ｐ）２′−デオキシグアノシン−５′−ジりん酸（ｄＧ
Ｉ）Ｐ）２′−ジオキングアノシン−５′−トリりん酸
（ｄＧＴＰ）２′−デオキシイノシン−５′−モノりん
酸（ｄＩＭＰ）２′−デオキソイノシン−５′−ジりん
酸（ｄＩＤＩ））２′−デオキソイノノン−５′−トリ
りん敵（ｄＩＴＰ）（ハ）２′−デオキシリボース＝１
−りん酸およびその塩 上６己の２′−デオキシリボヌクレオシド葦たは２′−
デオキシリボース−１−りん酸の塩としては、具体的に
は、アルカリ金属塩たとえばナトリウム塩、リチウム塩
およびカリウム塩、アルカリ土類金属塩たとえばカルシ
ウム塩およびマグネシウム塩、アンモニウム塩、アミン
塩たとえばトリエチルアンモニウム塩等がある。本発明
酵素反応は水性系で行なわれるから、上記のりん酸エス
テルの塩は水溶性のものであるべきである。

〔リヌクレオンＰホスホリラーゼ源 １）定義 不発明において「ヌクレオシドホスホリラーゼ」とは、
２′−デオキシリボヌクレオシドをりん酸イオン供与体
の存在下、加りん酸分解して２−デオキシリース−１−
りんばと核酸塩基とを与える作用および（または）２−
デオキシリボース−１−りん酸と核酸塩基とから２′−
デオキシリボヌクレオシドを会成する１乍用命担う酵素
をいう。この場合に必要なりん敵は基質またはヌクレオ
シドホ、スホリラーゼ源である微生物一体から供給する
ことができるが、基質またすよヌクレオシドホスホリラ
ーゼ源がりん酸を含゛まないものである揚台には外部か
らりん酸を供給することが必要である。

１−ヌクレオシドホスホリラーゼ源」とは、ウラシル化
付物（Ａ）と２−デオキシリボース化合＋１（Ｂ）との
反応系にヌクレオシドホスホリラーゼの酵素作用を及ぼ
しうるヌクレオシドホスホリラーゼ含有物質を、斂味す
る。これは、具体的には、使用微生物の培養物、生菌体
または菌体処理物（詳細後記）からなるものである。ま
た、ヌクレオシドホスホリラーゼ源は、ヌクレオ７Ｆホ
スホリラーゼ源外の酵素を含んでいてもよく、これが微
生物の培養物、生菌体−！たは菌体処理物の形態である
場合はこのような他種酵素をも含んでいることがむしろ
ふつうである。この場合の・他種酵素は、本発明の反応
に際して、たとえば原料化合物に作用してヌクレオシド
ホスホリラーゼの基質を生成する等の点で不発明の反応
に、両極的に塊与する酵素であるか、あるいは本発明の
反応を阻一群しないｅ素でありうる。反応に積極的に関
与する酵素としては、２−デオキシリポース化合物とし
て２−デオキシリボヌクレオチ）　ｅ　ｊＬ用した場合
のホスファターゼを例示することができる。

本発明で使用する「ヌクレオシド、ホスホリラーゼ源」
は、特定の属に属する微生物に由来するものである。こ
のようなところから、本発明で好ましいヌクレオ７Ｆホ
スホリラーゼ源は、微生物の培養物、生菌体または菌体
処理物（詳細後記）からなるものである。

２）微生物 前記のようなヌクレオシドホスホリラーゼ源を与える微
生物は、下記の１４ｉの属に属するものである。

（１）アクロモバクタ−（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
）属（２）アルテロモナス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）
属（３）アースロパクタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃ　ｔｅ
ｒ）属（４）プレピノＺクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ）属（５）セルロモナス（Ｃｅｌｌｕｌｏ
ｍｏｎａｓ）属（６）コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎ
ｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属（カフラボノ々クテリウム（
Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属（８）クルチア（Ｋ
ｕｒｔｈｉａ）属 （９）ミクロコツカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属（
１０）プロタミノｄクター（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃ
ｔｅｒ）属・（１１）シュウ−モナス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ）属（１２１サルシナ（Ｓａｒｃｉｎａ）属（
１３）スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ）属（Ｉ４）ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属 これらの属に属する菌株の具体例を皐げれば、下ｄ己の
通りである。

（１−１）アクロモバクタ−・ユウリデイセ　ＢＥ−３
−３微工研菌寄第６３０４号 （Ａｃ　、ｅ　ｕ　ｒｙｄ　ｉ　ｃｅ　）（２−１）ア
ルテロモナス・ゾトレファシエンスＡＴＣＣ８０７１ （ＡＩ　、ｐｕｔ、ｒｅｆａｃｉｅｎｓ）（２−２）同
上　　　ＡＴＣＣ８０７２（２−３）同上　　　ＡＴＣ
Ｃ８０７３（３−１）アースロパクター・シトレウス　
ＩＦＯ２９５７ （Ａｒ、ｃｉｔｒｅｕｓ） （３−２１アースロパクター・グロビフオルミスＩＦＯ
１２１，３７ （Ａｒ、ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ） （３−：３）７−スロハクター・シンプレックスＩＦＯ
１２０６９ （Ａｒ　、　ｓ　ｉｍｐ　ｌ　ｅｘ） （４−１）ブレビバクテリウム・インペリアレＡＴＣＣ
８３６５ （Ｂ、　ｊｍｐｅｒｊａｌｅ） （４−２）ブレビバクテリウム・アセチリカムＡＴ−６
−７微工研萌を第６３０５号 （Ｂ、ａｃｅｔｙｌ　ｉｃｕｍ） （４−３）同上　　　ＡＴＣＣ９５４ （５−１）＋＃ｏモナスー　７ラビゲナＩＦＯ３７４７
、ＡＴＣＣ４８６ （Ｃｅ　、ｆ　ｌａｖｉｇｅｎａ） （５−２）同上　　　ＩＦＯ１２６８０（６−１）コリ
ネバクテリウム・エクイ　ＩＡＭ　１０３８（Ｃｏ、ｅ
ｑｕｉ） （７−１）フンポパクテリウム・アルボレセンスＩＦＯ
３７５０，ＡＴＣＣ４３５８ （Ｆ、ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ） （７−２）フラホハクテリウム・ニステロアロマティク
ムＩＦＯ３７５１ （Ｆ、ｅ＋＋ｔｅｒｏａｒｏｍａｔｉｃｕｍ）（８−１
）クルチア−シフイー　ＩＦＯ１２０８３（Ｋ、ｚｏｐ
ｆｉｉ） （８−２）同上　　　ＩＦＯ１２０８４（９−１）ミク
ロコツカス・ロゼウス　ＩＦＯ３７６８、ＡＴＣＣ１８
６ （Ｍ、ｒｏｓｅｕｓ） （９−２）ミクロコツカス・ヴアリアンスＩＦＯ３７６
５、ＡＴＣＣ３９９ （Ｍ、ｖａｒｉａｎｓ） （９−３）ミクロコツカス・ルテウス　ＩＡＭ　１０５
６、ＩＦＯ３３３３、ＡＴＣＣ４６９８ （Ｍ、１ｕｔｅｕｓ） （９−４）同上　　　ＩＡＭ　１１５７（１０−１）グ
ロタミノパクター・アルボフラバスＩＦＯ：３７０７＋ （Ｐｒ、ａｌｂｏｆｌａｖｕｓ） （１１，−１）シュウトモナス・デスモリチカ　Ｊ−４
−２微工研菌寄第６３０７号 （Ｐｓ、ｄｅｓｍｏｌｙｔｉｃａ） （１１，−２）シュウトモナス・シューリキリエンシス
ＩＡＭ　、１０５１ （Ｐｓ、５ｈｕｙｌｋｉｌｌｔｅｎｓｉｓ）（１１−３
’ｌシユウトモナス・オパリス　ＩＡＭ　１００２（Ｐ
ｓ、ｏｖａｌｉｓ） （１２−１）サルシナ・マルギナータ　ＩＡＭ　１１３
０微工研菌寄第６５３９号 （Ｓａ、ｍａｒｇｉｎａｔａ） （１３−１）スタフィロコッカス・アウレウス　ＩＡＭ
０１１ （Ｓｔ　、ａｕｒｅｕｓ） （１３−２）同上　　　ＩＦＯ３０６０（］、４−１　
＞ビブリオ・アンギララムＩＦＯ１３２６６（Ｖ、ａｎ
ｇｕｉｌｌａｒｕｍ） 苦本菌株は、ＴＦＭＵｒａとｄＵｒ　ｄとから対応ＴＦ
ＷＵｒｄを生成させる能力は不元分であった。

なお、本発明の特定の属に属する菌株、時に上記の代表
的劇株、から紫外線、Ｘ紛、γ線等の照射による物理的
処理もしくはニトロソグアニジンなどによる薬剤処理な
どの一般的変異誘導法による誘発突然変異または、自然
の原因に起因する自然突然変異によって誘導された変異
株も、ヌクレオシトホスホリラーゼ源としての酵素活性
を失シー）ない限り、本発明で定義したヌクレオシド４
てプント１ノラーゼ源に包含されるものとする。また、
ｑｉ［己のような好適な菌株から得られたヌクレオシド
ホスホリラーゼ源としての酵素の遺伝子力；前自己特定
の属以外の微生物に取り込まれてそのような形質力Ｓ発
現するに至った場合は、このような微生ζ勿は前記！ｈ
定の属に域する微生物と均等とみなされるべきであって
、そのような微生物の培養９勿、生菌体または菌体処理
物を本発明の目的に使用する方法は本発明（特許請求の
範囲を解釈する場合を含む）の技術的範囲に含まれるも
のである。

３）ヌクレオシドホスホリラーぜ源の調製ヌクレオシド
ホスホリラーゼ源の調製は、少なくとも微生物の培養か
らなる。

（３−１，）ｆ＠養 培養のための培地および培養法は、所与の微生物が生育
する限り、時に限定されない。

培地としては、これらの微生物７５ユ貸イヒ可官旨な炭
素源および窒素源を適当量含有し、必要に応じて無機塩
、微量発育促進物質、消泡剤などを添加したものが使用
される。具体的には、炭素源としては、グルコース、フ
ラクトース、マルトース、リボース、サッカロース、澱
粉、澱粉加水分解物、糖蜜、廃糖蜜などの糖類もしくは
その脂肪酸エステルなどの誘導体、麦、飯、米などの天
然炭水化４勿、マンニトール、メタノール、エタノール
ナトのアルコール類、グルコン酸、ピルビン酸、酢酸、
クエン酸などの脂肪酸類、ノルマル・ξラフイン、ケロ
シンなどの炭化水素類、グリシン、クルタミン敵、グル
タミン、アラニン、アスノξラギンなどのアミノ酸類な
ど、一般的な炭素源より使用微生物の貸化性全考慮して
一種または二種以上全適宜に選択して使用すｔばよい。

窒素源としては、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、乾
燥酵母、大豆加水分解物、大豆粉、ミルクカゼイン、カ
ザミノ酸、各種アミノ酸、コーンステイープリカー、コ
ツトンシードミールないしその加水分解物、フィツシュ
ミールないしその加水分解物、その他の動物、植物、微
生物の加水分解物などの有機窒素物質、アンモニア、（
ｌｔ’ｌ　ＷＪｔアンモニウム、硫酸アンモニウム、塩
化アンモニウム、すん酸アンモニウム、炭酸アンモニウ
ム、酢酸アンモニウムなどのアンモニウム塩、硝１ｉセ
ナトリウムなどの硝酸塩、尿素など無機窒素化合・：勿
上り団用微生物の貧化性を考慮して一種または二種以上
を適宜に選択して使用すればよい。さらに、無機塩とし
て微量のマグネンウム、マンガン、鉄、亜鉛、り同、ナ
トリウム、カル７ウム、カリウムなどのりん酸塩、塩酸
塩、硫酸塩、炭１伎塩、硝酸塩、１作液塩などの一種ま
たは二他以上を適宜添加し、必辰に応じて植物油、界面
后匪剤などの消泡剤、ビタミンＢ０、Ｂ２、ニコチン酸
、パントテン酸、ビオチン、ｐ−アミン安息香１文など
の微−計元育促進物質を添加してもよい。栄誉要求を同
時に示す微生物を使用する場合は、当然その生育を満足
させる物質を培地に添加しなければならない。

培養は、前記培地成分を含有する液体培地中で振盪」音
養、通気撹拌培養、静置増養、連成培養などの通常の培
養法より使用微生物に適した培養法を選択して行なう。

培養条件は、使用微生物および培地の柚頓により適宜選
択すればよいが、通常は培養開始のｐＨを約６〜８に調
整し、約５〜３５℃の温度条件下で培養を行なう。培＃
期間は使用微生物の生育に十分な時間であればよく、通
常１〜３日間である。

（３−２）酵累源の調製 以上のように微生イ勿を培養したのち、得られた培養物
、あるいは培養物から遠心分離、沈降分離、凝集分離な
どの通常の方法によって果閑した生菌体、あるいは生菌
体に適宜な処理を施して得られる菌体処理物、全本発明
におけるヌクレオシドホスホリラーゼ源として１史用す
ることができる。ここで、「培養物」とは培養後の培地
と培養歯体が未分離の状態のものをいう。「生菌体」と
は、培養物から分離されたのち未だ下記のような処理を
受けていない菌体をいう。−！た、「菌体処４！物」と
は、乾燥菌体、細胞膜および（または）細胞壁変性菌体
、破砕菌体、固定化固体、菌体抽出物、本発明の目的と
するヌクレオシドホスホリラーゼ源としての酵素活性を
有する菌体抽出物の蛋白質画分もしくはそのイｎ製物、
蛋白質画分もしくはその４製吻の固定化物などを相称す
る。

菌体処理物を得るための方法のいくつかを例示すれば下
記の洩りである。すなわち、（イ）生菌体に対して、物
理的処理手段たとえば凍結融解処理、凍結乾燥処理、通
風乾燥処理、アセトン乾燥処理、ｒ俊性ないしアルカリ
性下における加温処理、磨砕処理、超音波処理、浸透圧
差処理など、あるいは化学的ないし生物化学的処理手段
たとえはリゾチーム、ＩＩＩＩｉｌ胞壁溶解酵素などの
酵素処理、トルエン、キシレン、ブチルアルコール（フ
タノール）などの浴媒もしくは界面活性剤との接触処理
など、を単独もしくは組み台せて施す方法、（ロ）菌体
抽出物に対して、酵素分離梢製＋段たとえば塩析処理、
専一点沈澱処理、Ｍ機浴媒沈澱処理、各錘クロマトグラ
フ処理、透析処理などを単独もしくは組み付せで施す方
法、および（ハ）生菌体、菌体抽出物もしくはその精製
物に酵素１ｍｌｍ比定段たとえば包括処理、架倫処理、
担体への吸着処理などを施す方法、である。

〔Ｄ〕本発明による酵素反応 本発明による酵素反応は、前記のウランル化合＊（Ａ）
と２−デオキソリボース化合物（Ｂ）と葡ヌクレオシＰ
ホスホリラーゼｕ％　（Ｃ）の存在下に反応させること
からなる。

酵素源（Ｃ）は微生物の培養物でありうるから、酵素源
（Ｃ）の存在下ということはこの微生物の培養中に出発
原料（Ａ）および（Ｂ）を共存させておいてこの酵素反
応全行なわせること矛も包含するのであるが、好ましい
反応方式は微生物培養工程が実質的に終了してから培養
物（または生菌体もしくは菌体処理物）を出発原料囚お
−よび（Ｂ）の反応系に存在させることからなるもので
ある。

１）反応基質溶液 本発明の酵素反応に使用される／Ｉ￥質溶媒は、基本的
には反応示質、すなわち前記の出発原料（Ａ）および（
Ｂ八が水性媒体に溶解もしくは懸濁した水性液である。

この水性液中には少なくともウラシル化合物（Ａ）およ
び２−デオキシリボース化合！吻（Ｂ）の−棟捷たは二
伸１以上が存在するが、この水性液はこれらの反応基質
のほかに、心安に応じてりん酸イオン供与系、南イ幾溶
媒、界面活性剤、金属塩類、補酵素類、酸、塩基、糖類
など酵素反応を促進する物質、妨著酵素活性を阻害する
物質、反応基質の溶解性を同上させる吻ケ４、酵素と反
応基質の接触を向上させる４勿質等全含有していてもよ
い。また、１更用微生物か貢化しつるｒｊｔＪ記のよう
な培地成分を含有していてもよい。

水性媒陣としては、水ｌ／ヒｃ；Ｌ酵素反応に好適な各
柿緩１而液（りん酸緩１碩液、イミダゾール−塙酸猛刷
７ｉ′Ｊｊ、、べＴ７ナールー塩酸緩衝液、トリス−塩
酸緩ｌ１１Ｉｊ液など）を用いることができる。

りん虚イオンｔｔＣ与系としては、水性媒体中でりん；
−レイ万ンに解離しつるもののいずれを用いてもよく、
／ヒとえは遊離型りん酸そのもの、無機りん酸」も　た
とえばナトリウム、カリウムなどのアルカリ金１．・為
、カルシラノ・、マグネノウムなどのアルカリ土４Ｊｉ
　釜属、アンモニウムとの塩が好適に使用される。才だ
、りん酸イオン供鳥系としては、酵素反応の基質溶液中
でりん竣イオンを遊離しうる系、たとえば各種りん酸エ
ステル誘導体とホスファターゼの組み合せ、ヌクレオチ
ドとヌクレオチダーゼの組み合せ、もしくは核酸塩基お
よびリボース−１−りん酸などを利用することができる
。

以上のようなりん酸供与系は酵素反応に際して糸外から
添加されたものであってもよく、使用微生物の成分とし
て含有されているものであってもよい。すなわち、酵素
反応に利用しうる形態である限り、上記の物質の単独も
しくは二種以上全組み合せた系を、または上記の物質を
含有する微生′ω菌体もしくはその菌体処理物を本党明
の茸素反応に際して反応液に別途添加してもよく、ヌク
レオシドホスホリラーゼ源に含有さ几てぃりこれらの吻
買をそのま１利用してもよい。

４！−機溶媒としては、たとえばメタノール、エタノー
ル、フロノぐノール、フタノール、アセトン、メチルエ
チルケトン、酢酸エチル、トルエン、テトラヒドロフラ
ン、ノオキサン、ジメチルスルホキシＰ１　ジメチルア
セトアミド、ジメチルホルムアミド、２−エトキシエタ
ノールなどが例示される。

２）反応方法 本発明の反応は、１１Ｊ記の酵素源（すなわちヌクレオ
ンドホスホリラーゼ源）と反応基質とを水性媒体中で接
触させることにより達成される。

接触方法は、酵素源の形態に応じて適ｆに選択すればよ
いが、通常はイ）酵素源を反応基質溶液に２茜ｌ蜀もし
くは浴解し、好寸しくは刀ＩＪ温しなから↑・覚拌もし
くは帳盪するパッチ方式、または口）酵素源を心安に応
じて適当な担体、助剤または吸着剤と７昆４［」するか
これらに４旦持させて充填カラム、流動層タンク、多段
タンク、フィルム装填タンク、攪拌タンク、その他に入
れ、反応泰質冶欣全通液するバイオリアクタ一方式（連
続フロ一方式）などが通用される。なお、パッチ方式の
場合には反応後、酵素源を濾過（加圧（Ｉ、々過、真空
濾過などを含む）、遠心分離、沈降分離、凝集分離など
通菖の方法によって回収ないし來菌し、これを再度反応
基・濱溶液と接触させることによって礫り返し使用する
ことができる。固定化ヌクレオシドホスホリラーゼ源に
よるバイオリアクタ一方式の場合は酵素源の分離操作は
不要であり、リアクターは昧り返しであるいは連続的に
酵素反応に使用することができる。

３）反応基質および酵素源の濃１ｔ′もしくは添加故一
般に、反応基質溶液の基買磯兆は時に制限されるもので
はなく、反応温度における使用水性媒体に対する各基質
の飽オＵ濃度以下の偽当な濃度がＪＩ■冨採用される。

しかし、反応恭賀溶液に冷〃口された前記のＭ機溶媒な
どによ＋７基質濃ｊ史を瑠太さぜることも、反応基質浴
液中に飽和濃１１ｊ以上の各基質を懸濁状態で存在させ
て反応の進行に従って各基質を溶解させることも、可能
である。捷だ、各基質を反応中に逐次添加して遍当仏縫
度を維持することもでさる。

具体的には、５−フルオロウシシル２よび５−トリフル
オロメチルウラシルについてｌ−ｊ反応恭賀溶液中のそ
の濃度は１〜２００　ｍＭ程鍵、好ましくは５〜１００
ｍＭ程度であり、２−デオキシリボース化合物について
は１〜３００　ｍＭ　８　問、好捷しくは５〜１５０ｍ
Ｍ程度である。

なお、酵素源の使用量は微生物の種部、その使用形態、
反応効率、経済性などを考慮し、当業者が予備実験前に
よって容易に決定できるものである。

４）反応中性 本発明の反応の条件は、反応基質が酵素源の作用によっ
て反応して効率よく目的ヌクレオシドが生成１−る条件
であれば１史用ｌＮｉ１’：素源做生物の非増焔条′１
−１−下であれ満“舶昶１′１：下であれ特に１沢疋さ
れない。

しかしながら、使用微生物の非増殖未件下における反応
が的に効率が良い。

微生物の−Ｉｌ−珀殖乗件下でこれ全反応に供する方法
としてＱ、↓、（イ珀う、素）又応温呟紫・１史用微生
物が瑠焔でさない偏置範囲（たたし、本発明の反応に関
与するｔｆｌ素が失活しないイ１６（度範囲）に設雉す
る方法、（ロ）裸用倣生吻蘭体をあらかじめ前記のとお
り物理的、化学的ないし生物化学的に処理することＫよ
って微生物を増殖できない状態にしたのち、反応に供す
る方法、（ハ）反応に際して、たとえばトルエンなどの
使用微生物の増殖を阻害する物質を反応基質溶液に添加
する方法など、を単独にあるいは組み合せて採用すれば
よい。これらのうちでは、反応温度を操作する方法が最
も効果的で闇便である。

本発明の反応は一般に２８〜８０℃の範囲において進行
するが、実用性金考感すれば３７〜７０℃の範囲が好ま
しく、時に４０〜６５゛Ｃが最〕ｊ通である。

なお、反応基質（Ｂ）がデオキ７ビリミジンヌクレオシ
ドの場合は、４５℃前後の温度が吾に適当である。

反応基質溶液の液性は、通常ｐＨ４〜１０．好筐しくは
ｐＨ６〜８、の範囲に保たれればよい。反応中にｐＨが
変動するときは、塩１竣、鎖酸、りん酸などの酸または
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア水、ア
ンモニアガスなどのアルカリを用いて好せしいｐＨ範囲
に補正すれはよい。

反応時間は、反応基質の目的吻への賀侯率を確認しなが
ら決定すればよいが、２ル常バッチ方式でｔよ２〜４５
時間程１α、好ましくは２４〜３６時間程度反応させれ
ばよい。バイオリアクタ一方式では、パッチ方式に準じ
て適当な条件を設定して反応させればよい。

５）分離＃製 反応後、心安に応じて酵素源を濾過、遠ル分離、沈降分
離または凝集分離などの常法によって分離除去して、生
成デオキシウリジン誘専体の分離植装工程に供する。

デオキシウリジン誘４す体の分離植装は、公９旧の方法
育たばこれを応用した方法によって行えばよい。たとえ
ば、イオン文例クシマドグラフィー、吸涜クロマトグラ
フィー、分配クロマトゲランイー、ゲル薊過法など各種
のクロマトグラフィー、向流分配、向ｉ！＋ｔｃ　ｊ＋
Ｉｊ出など二液イ山ｌＪの分配を４１」用する方法、濃
縮、冷却、有機溶媒添加など溶解層の差を利用する方法
などの一般的な分離謂装法ｆｃ単独で、あるいは適亘に
組み合せて行えばよい。

ＣＥＩ代衣代表的生物の説明 前記の例示倣生物のうち、工Ｆ０４号、ＩＡＩＶｉ番号
およびＡＴＣＣ番号を付された菌株はいずれも公知菌株
であり、当業者であれば当該寄託機関よりこねらの菌株
を容易に入手することができる。

微工研寄託番号（微工研萌ｄ）だけ全村された菌株は、
本発明者らによって自然界から分離、同定された菌株で
あり、工業技術院微生物工業技術研死所（微工研）に寄
託されている。当業者は一足の条件の下にこれらの寄託
菌株を人手することができる。

上記の分離菌株とは千葉県誂子市西ζ苺鹿島町の土壌よ
り分離されたＪ　−４，−２株、兵庫県西−′市の甲子
−球場の砂より分１碓ぜれたＡＴ−６−７株および千葉
県銚子市新生町の土壌より分離さｎたＢＥ−３−３株で
ある。これらの菌株のし肴学的性質等は、下記の通りで
ある。

１’１Ｊ−４−’２株 （ａ）形態 （［）細施の形態および太ぎさ：＃秋、０．７〜０．８
×２．０〜３．０μｍ （２）運動性、鞭毛の青虫状態：運動性あり、極１史毛 １（３）胞子の形成：なし く／１）ダラム染色性：陰性 （ｂ）各種培地における生育状態 （１）肉汁９１−大平板培養（２８’Ｃ，４８？ｉｊｇ
ｉ　）■集落の形状：円形（Ｃ４ｒｃｕｌａｒ）■集落
表面の***：***状（Ｒａｉｓｅｄ）ないし中心凸状（
Ｕｍｂｏｎａｔｅ） （り大きさ：２〜４　ｍｍ Ｉ、り色調：湿γ閏で灰色ないし鈍黄色（２）肉汁寒天
斜面培養（ｚｂ’ｃ、　　４８時ｌｉｉ’ｊ　）（Ｌ）
庄Ｈ：良好 （２）生付の形：糸状（１’ｉ　ｌ　ｉ　ｆ　ｏ　ｒｍ
）でゃや拡布状（Ｓｐｒｅａｄｉｎｇ） （３）色糸の生成：不ψＪ （３）肉汁成体培養（あ”Ｇ、　　７２時１樹）生育：
膜のル成なく、余液混濁し、やや沈澱を生じる。

（４）肉汁ゼラチン芽刺培誉（２ｔ）℃、６日間）：液
化しない。

（５）リドマスミルク培地（２８℃、４日１司）：変化
しない。

（ｃ）生理的性質 （１）硝酸塩の還元（２８°Ｃ１５日間）：還元１生あ
り。

（２）硫化水素の生成（２８℃、５日間）：生成する。

（３）＃粉の加水分解二分解カなし。

（４）カタラーゼ：陽性 （５）インドールの生成＝１嬉性 （６）ヘプトンおよびアルギニンがらのアンモニアの生
成：陰性 （７）メチルレッドテスト：陰性 （８）　Ｖ　−、Ｐテスト：陽性 （９）酸素に対する態度：好気的 （１０）Ｏ−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ　Ｌｅｊｆｓｏｎ法に
よる）二〇型（０ｘｉｄａｔ　１ｏｎ） （ｌυ糖類から酸の生成 陽性ニゲルコース、マンノース、フジクトース、マルト
ース、サッカロース、 トレハロース、マンニット 陰性：アラビノース、キシロース、ガラクトース、ラク
トース、ノルビット、 イノジット、グリセリン （１２Ｊ生育ｐＨ範囲：　ｐａｌ　６．Ｃ）−９，０（
１３）生育最適温度二５〜３５°Ｃ ２）ＡＴ−，６−７株 （ａ）形態 （１）ｒＭｌ胞の形態および大きさ：短稈状、０．８〜
１．０Ｘ１．Ｑ〜１．２μｍ （２）胞子の形成：なし く３）ダラム染色性：陽性 Ｃｂ）各捜培地における生育状態 （１）肉汁寒天平板培養（２８℃、４８時間）■集落の
形状：円形（Ｃｉｒｃｕｌａｒ）（２）集落狭量の***
二扁平状（Ｆｌａｔ）、平滑（Ｓｍｏｏｔｈ） ■大きさ：２〜４　ｍｒｎ ■色調：黄色ないし桃黄色 （２）肉汁寒天斜Ｔｌ１Ｉ培養（２８℃、４８時−ｊ）
■生育：良好 ■生育の形：症状（Ｅｃｈｉｎｕｌａｔｅ）（３）肉汁
液体培養（２８°ｃ１４８時田」）生育：表面に菌環（
Ｒｉｎｇ）　ｆ形成し、やや沈渣（Ｓｅｄｉｍｅｎｔ　
）　ｆ生じる。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養（２０℃、６日間）：層状
（Ｓｔｒａｉｔｉｆｏｒｍ）に液化する。

（５）リドマスミルク培地（２８℃、４Ｂ＋１ｔ１）：
わずかに凝固し、ペゾトン化も見られる。

（ｃ）生理的性質 （１）硝酸塩の還元（２８℃、５日間）：還元性なし。

（２）硫化水木（Ｄ　生Ｘ　（２８°Ｃ，５Ｂ１８１　
）　：　生ｔＪＸシない。

（別殿粉の加水分解：分解性あり。

（４）カタラーゼ：陽性 （５）インドールの生成：生成しない。

（６）ペゾトン寂よびアルギニンがらのアンモニアの生
成：陰性 （７）メチルレッドテスト：陰性 （８１Ｖ−ｐテスト：陽性 （９）酸素に対する態度：好気的 （ｌ［Ｉ）　Ｏ−ＦテストｆＨｕｇｈ　Ｌｅｉｆｓｏｎ
法による）：　Ｆ型（Ｆｅｒｒｎｅｎｔａｊ　１ｏｎ）
０１）糖類からの酸の生成 陽性ニゲルコース、マンノース、フラクトース、マルＩ
・−ス、サッカロース、 トレハロース 陰性：アラビノース、キシロース、ガラクトース、ラク
トース、ソルビット、 イノジット、グリセリン （Ｉ２）生育ｐｒＩ範囲：　ｐ）（６，０〜９．０（１
３＋生付最適温度＝２５〜３７℃ （ａ）形態 （１）細胞の形態および大きさ：桿状、０．８〜０．９
×１．４〜１．８μｍ （２）胞子の形成：なし く３）ダラム染色性：ｌ裟註 （ｂ）各抽培地に抄ける生育状態 （１）肉汁寒天平板培養（２８°Ｃ１４８時間）■集落
の形状：仮恨状ＣＲｈ１ｚｏｉｄ）で切裂状（Ｌａｃｅ
ｒａｔｅ） ■集落表向の***：扁平状（Ｆ’１ａｔ）で平滑（Ｓｍ
ｏｏｔｈ） ■大きさ：５〜９　ｍｍ ■色調：淡灰出色ないし青灰色 （２）肉汁寒天斜面培養（あ°Ｃ１４８時間）■生育：
良好 ■生育の形：糸状（Ｆｉｌｉｆｏｒｍ）（３）肉汁液体
培養（２８°Ｃ１４８時間）生育：余液混濁し、沈渣（
Ｓｅｄｉｍｅｎｔ）　ｆ生しる。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養（２０℃、６日間）：液化
しない。

（５）！ｌマスミルク培地（２８℃、４日間）：はとん
と変化しない。

＜ｃ）生理的性質 （１）硝酸塩の還元（２８℃、５出司）：還元性なし （２）イ（Ｉｆｃ化水素の生成（２８℃、５日＋ｄ１）
：生成する。

（３）澱粉の加水分解性：なし く４）カタラーゼ：陽性 （５）インドールの生成：生成しない。

（６）ペゾトンおよびアルギニンがらのアンモニアの生
成：陰性 （７）メチルレッドテスト：陰性 ｔ８１Ｖ−Ｐテスト：陰性 （９）酸素に対する態度：好気的 （１０）Ｏ−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ　Ｌｅｉｆｓｏｎ法に
よる）：０鴎リ　（ＯｘｉｄａＮｏｎ） 圓糖用からの酸の生成 陽性ニゲルコース、マンノース、フラクトース、トレハ
ロース 陰性：アラビノース、キシロース、ガラクトース、ラク
トース、マルトース、 ザツカロース、ノルビット、イノジ ット、グリセリン （１２）生付ｐＨ範囲：　６．０〜９．００３）最適生
育範囲＝２５〜３７℃ 以上の蘭学的性質を、バーシーズ・マニュアル・オズ・
ディタミネーディズ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ
’ｓ　Ｍａｎｎａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖ
ｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第７版（１９５７年）の
分類基準により検索した。その剣来、Ｊ−４−２味は直
短桿爾で、ダラム陰性であり、極鞭毛全有し、胞子形成
化がなく、グルコースｆ：酸化するなどの諸性質よりシ
ュウトモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）属に属する
菌株と同定し、シュウトモナス・デスモリチ力（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａａｄｅｓｍｏｌｙｔｉｃａ）　　Ｊ　−
４−２と命名した。ＡＴ−６〜７株はｅｌとんど球菌に
近い短桿菌で、ダラム陽註であり、フィラメントを形成
せず、炭水化物より酸を生成することよりブレビバクテ
リウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌
株と同足し、ブレビバクテリウム・アセチリカム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｊｅｒｉｕｍａｃｅｔｙｌｉｃｕｍ）　Ａ
　Ｔ　−６−７と命名した。ＢＥ−３−３株は、ダラム
陰性であり、ヘキソースより戚を生成し、硫化水素を生
成し、細ノ荊が桿状であることによりアクロモバクタ−
（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　）ｊ川に叫する菌株と
同定し、アクロモバクタ−・ユウリデイセ（Ａｃｈｒｏ
ｍｏｂａｃｔｅｒ　ｅｕｒｙｄｉｃｅ）　Ｂ　Ｅ　−３
−３と命名した。

なお、以上の三菌株の同定帰属はパーシーズ・マニュア
ル・オプ・デイタミネーテイブ・バクテリオクジ−４フ
版によるものであり、分類基準の変更などにより、！＋
４なる分類基準によってとｉｚらの菌株の同定帰・萬が
行われた場合には、他イ虫あるいは他属に４ｒＪ４する
こともあり得るが、本発明において上記のように命名さ
′１ｔた做生書勿は、少なくとも本発明の目的に合致す
るヌクレオンドホスホリラーゼを生Ｐｆｚシ、かつ前１
己の菌学的性質もしくはこれと均等の菌学的性智、全有
する微生物を包ざし、時短され得るものである。

これら三閑株は昭；１ｕｓ６年泄商並栗省舌示第１７８
号Ｖこ健って工業技術院做生物工業技術研究所に昭和５
７年１月１３日付けで受託されて、次のとおり受比企号
が何カされている。

（１）シュウトモナス・デスモリチカＪ−４−２微工研
函寄第６３０７号（ＦＥＭ　Ｐ−６３０７）（２）ブレ
ビバクテリウム・アセチリカムＡＴ−６−７微工研菌寄
、Ａ　６３０５号（ＦＥＢＭ　Ｐ−６３０５）（３）ア
クロモバクタ−・ユウリティセＢＥ−３−３彼工研菌寄
第６３０４号（ＦＥＲＭ　Ｐ−６：３０４　）実施例 以下の実験例において、反応液中の５−フルオロ−２７
−デオ千ノウリジン（ＦｄＵｒｄ）および５−トリフル
オロメチル−２′−デオギシウリジン（ＴＦＭｄＵｒｄ
）は、１％速液体クロマトグラフィーによって分析した
。

装置：島津筒速液体りロマトグラフＬＣ−３Ａ型力ラム
二マイクロ・ボンダノミツク０ｊ３ＯＮＤＡＩ）ＡＫ　
）Ｃ１８，４，６ｍｍＸ２５０ｍｍ（日本ウォーターズ
リミテッド社製） 流４　：　ｌ　ｍｌ／ｍ１ｎ ＦｄＵｒｄ反応液 を合出剤：０．５Ｍりん戚−カリウム溶液測足波長：２
６０ｎｍ 保持時間：　ＦＵｒａ　　　　３．９１分Ｆｄ□Ｕｒｄ
、ｉ　　２０．２８分 ＴＦＭｄ　Ｕ　ｒ　ｄ反応液 溶出剤：５チアセトニトリルを含む２０ｍＭトリス−塩
酸緩衝液 （ｐＨ７，５） 測定波長：　２６０ｎｍ 保持時１ｆｓ’ｌ　：　ＴＦＭＵｒａ　　　８．４９分
子ＦＭｄＵｒｄ　　１３．４９分 実施例１ １．５チ酵母エキス培地（ｐＨ７，０）　４　ｍｌに下
表に示す各閣法を植菌し、あ°Ｃで調時間培養した。培
養液より遠心分離によって４萌した。

２０　ｍＭ　ＦＵｒａもしく　ｉ’１２０　ｍＭ　ＴＦ
ＭＵｒ　ａ　、　３０　ｍＭｄＵｒｄおよび３１Ｊ　ｍ
Ｍりん１浚−カリウムヲ言有する浴液（ｐｈｉ　７．０
）　　２　ｍｌ　Ｋ前記菌体を加え、４５℃で一晩反応
させた。

反応波、遠心分離によって菌体を尿去し、反応生成物を
尚速液体クロマトグラフィーによって分析したところ、
下表に示す辿りであった。なお、表中１生成率」とある
のは原料の５−置換ウラシルＶこ対する生成した５−置
換デオキシウリジン全意味のモル百分率である。−！た
、１−ＦｄＵｒｄＪおよび［ＴＦＭｄＵｒｄｊは、それ
ぞれ５−フルオロ−２′−デオキシウリ・ジンおよび５
−トリフルオロメチル−２′−デオキシウリジン全意味
する！アク・モパクター・−ウリデイセ　３９．３３　
４８．６８ＢＥ−３−３微工研菌寄第６３０４号 アルテロモナス・プトレファシエンス　２７．９７　　
０ＡＴＣＣ８０７１ 同上ＡＴＣＣ８０７２３９，３２３３，２１同上ＡＴＣ
Ｃ８０７３３６，３４２０，９９アースロパクター・ゾ
トレウス　　４７．９０　４２．８１１ＦＯ１２９５７ アースロパクター・グロビクオルミス　５１．２３　　
０ＩＦＯ１２１３７ アースロハクター・シンプレックス　　５１゜６６　２
３．２９ＩＦＯ１２０６９ ブレビバクテリウム・インペリアレ３６．５５　　９．
０２ＡＴＣＣ８３６５ ブレビバクテリウム・アセチリカム　１３．５１　３６
．７７ＡＴ−６−７微工研函寄第６：う０５号同上ＡＴ
ＣＣ９５４０３，７６ セルロモナス・フラビゲナ　　　２９．０１　　６．５
２ＩＦＯ３７４７ 同上ＩＦＯ１２６８０４１，０２５，９４コリネバクテ
リウム・エクイ３５．８３　　３．８３ＩＡＭ　１０３
８ フラボバクテリウム・アルボレセンス４４．８２　　８
．９６ＩＦＯ３７５０ フラボバクテリウム・ニステロアロマティクム３４．９
５　　６．３９ＩＰ’０　３７５１ クルチア・シフイー　　　　　５７．１９　４７゜８８
ＩＦＯ１２０８３ ミクロコツカス・ロゼウス　　　２４．７３　１３．５
５ＩＦＯ３７６８ ミクロコツカス・ヴアリアンス３２．８３　３５．５４
ＩＦ’０３７６５ ミクロコツカス・ルテウス　　　３０゜１２　１４．８
０ＩＡＭ　　１．０５６ 同上ＩＡＭ　１１５７　　　３９．１５−−−−一プロ
タミノバクター・アルボイラパス　　１１．６０　　０
ＩＦＯ３７０７ シュウドモナス・デスモリチカ　３４．０６　０Ｊ−４
−２微工研函寄第６３０７号 シュウトモナス・シューリキリエンシス３４．８８　１
０．３６Ｉ入Ｍ　　１０５１ シュウドモナス・オパリス　　　３６．５７　１８．８
０１ＡＭ　　１００２ サルシナ・マルギナータ　　　　３９．３４　１２゜９
２ＴＡＭ　　１１３０ 微工研菌寄第６５３９号 スタフィロコッカス・アウレウス　　　　１４．９７　
１０．４８ＩＡＭＩＯＩＩ スタフィロコッカス・エビデノベデス　１８．４１　２
１．７６ＩＦＯ３０６０ ビブリオ・アンギララム　　　　４５．６７　１２．１
０ＩＦＯ１３２６６ 実施例２ クルチア・シフイー　ＩＦｏ　１２０８４を１．。５％
酵母エキス培地で２８℃で２２時間培養した。培４液か
ｍｌから遠心分離によって湿菌体を得た。この湿菌体に
’ａｒｎＭ　ＦＵｒａ、　３０ｍＭの下表に示す各２−
デオキシリボース化合物および３０　ｍＭ　Ｆ）ん酸−
カリウムを含む基質溶液（ｐＨ７，０）１０　ｍｌを加
え、４５℃で２０時間反応させた。反応液より菌体を除
去後、高速液体クロマトグラフィーで〜ＦｄＵｒｄの生
成率を測定し、下表に示した。

ｄＵｒｄ　　　　　　　　　６１．６０ｄＵＭＰ　　　
　　　　　　４９’、８．１ａｃｙａ　　　　　　　　
　６５．２２ｄｃＭＩ）　　　　　　　　　６０・２８
Ｔｈｄ　　　　　　　　　　７４．８５ＴＭＰ　　　　
　　　　　　１８　、４４ｄＡｄｏ　　　　　　　　　
　１．８３ｄＡＭＰ　　　　　　　　　　Ｏ，７８ｄＧ
ｕ　ｏ　　　　　　　　　　２　、１８ｄＧＭＰ　　　
　　　　　　　　　２．０６ｄＩｎｏ’　　　　　　　
　　　　　３．６０ｄＩＭＰ　　　　　　　　　　　　
２．７５実施例３ クルチア・シフイーＩＦ０１２０８３に実施例２と同様
の方法で培養し、培養液２リツトルがら湿菌体を遠心分
離した。

ＦＵｒａ　５．２　ｇＸｄＵｒｄ　１３．７ｇおよびり
ん酸−カリウム８．２ｇを水に溶解し、ｐＦ■７．ｏに
調整した基質溶液に前記の閑体業加え、きらに水を肌え
て２リツトルとして、反応に供した。反応は、４５°Ｃ
で２日間行なうた。反応液を分析したところ、ＦｄＵｒ
ｄの生成率は７５．３８９ｂであった。

反応液からｉ体を除去し、Ｉ）Ｈ２，Ｏに調整後、５リ
ツトルに希釈した。この浴液全活性炭１リツトルカラム
に吸着させ、水洗液、０−ＩＮアンモニア浴液で溶出さ
せた。溶出液を濃縮し、ｐＨ９，０に調整後、アニオン
父換明脂「ダウエックス１×２」　（商品名。ダウ・ケ
ミカル社製；蟻酸型）５００ｍｌカラムへ吸着させた。

各区分を高速頭体クロマトグラフィーで分析し、ＦｄＵ
ｒｄ区分を合せて（与び５００　ｍｌの活性炭カラムに
吸着させた。水洗後、０゜ＩＮアンモニア溶液で溶出さ
せ、濃縮乾固した。こルに酢ｆ１！２エチルを力０え、
結晶を析出させたのち、酢酸エチルから再結晶させて、
ＦｄＵｒｄ５．８１ｇ　　をイ尋た。

実施例４ クルチア・シフイーＩＦＯ１２０８４’ｃ実施例２と同
様の方法で培養し、培う２液４リツトルがら湿菌体を辿
心分離した。

ＴＦＭＵｒａ　３．６　ｇ　ＸｄＵｒｄ　６．９ｇおよ
びりん酸−カリウム４．１ｇを水に浴解し、ｐＨ７，０
，、に調１１にした杓（簀浴ｌ夜にりＩＪＮ己の［屑イ
本を刀■え、さらに水をカ［１えて１リツトルとして、
反応に供した。反応は、４５℃で２０１１信司行１つ／
こ。反応液を分析したところ、ＴＦＭｄＵｒｄの生成率
は５ｏ。１２％であった。

反応液から菌体を除去し、ｐＨ２゜０に調整後、活性炭
６００ｍ１　カラムに吸着させ、水洗後、０．０１Ｎア
ンモニア−１０％エタノール浴液１２リツトルで浴出さ
せた。溶出液を濃縮後、逆相クロマトグラフィー（装置
：ウォーターズ、プレツブＬＣ／システム５００Ａ０カ
ラム：プレツブ５００／Ｃ１８゜移動相：水および１０
％メタノール）を行なった。

ＴＦＭｄＵｒｄ区分を濃縮乾固し、エーテルをカロえて
攪拌したのち、Ｐ取した。これにエタノールを加えて浴
解し、濃縮後、エーテルを加えて再結晶させて、ＴＦＭ
ｄＵｒｄ　２．８ｇを得た。

実施例５ クルチア・シフイーＩＦ０１２０８３を１．５％酵母エ
キス培地（ｐＨ７，０）４　ｍｌに植菌後、２８”Ｃで
一晩培養した。

遠心分離して得た菌体に、下表に示す１０　ｍＭのウラ
シル化合物、１５ｍＭの２′−デオキシウリジンおよび
１５　ｍＭのりん酸−カリウム金含む基質を１ｍｌ加え
て、４５℃で２２４間反応させた。

反応ｃ液をＨＰＬＣによって分析した精米は、下表に示
した通りであった。

基質　　　　　反応生成物　拠随城率（幅５−）ごロウ
ラシル　５−フロロデオキシ　５７．５６　％ウリジン ５−クロロウラシル　５−クロロデオキシ　５８．９６
％ウリジン チミン　　　　　チミジン　　　　　７６．５１％リボ
シルチミン　　　チミジン　　　　　　３３．０３％出
願人代理人　　猪　　股　　　　　漕手　続　宥ｎ　ｊ
Ｆ　　閣） 昭和５９年８月２０日 特許庁長官　志賀　　学　殿 １　事件の表示 昭和５８年　待訂願　第８８９１　／１号２　発明の名
称 デオキシウリジン誘導体の製造法 ３　補止をづる者 事件との関係　　υＩＦｆ出願人 （６７７）　　Ａ７マザ暫浦株式会社 ４　　代　　理　　人 東京都千代口］区丸の内三丁］」２番３号宙詰東京（２
Ｎ）２３２１大代表 ｇ　補正の内容 ／）特許請求の範囲の記載を別紙のとおり訂正する。

コ）明細書第グ頁第９〜７０行目の「抗腫瘍性」を「抗
腫瘍活性」と訂正する。

３）明細書箱グ頁第１Ｏ行目の「抗ウイルス性」を「抗
ウィルス活性」と訂正する。

リ　明細書第５頁第一行目の「ラウシル化合物」を「ウ
ラシル化合物」と訂正する。

Ｓ）明細書簡９負第ｇ行目と同第９行目との間に行を改
めて「Ｓ−クロロウラシル（ＣＩＵｒａ）Ｊを加入する
。

６）８Ａ細誓書第１／第１３行目のｒ、２’Ｊを１．２
」と訂正する。

７）明細書第１／頁第１Ｓ〜／乙行目の１ａ′−デオキ
シリボース−７−りん酸Ｊを「コープオキシリボース−
／−りん酸」と訂正する。

ざ）明細書箱１３負第ｉｓ〜／６行目の「−一デオキシ
リボヌクレオチド」を「−′−デオキシリボヌクレオチ
ド」と訂正する。

？）明細書簡、２グ頁第１６行目の「基質溶媒」を「基
質溶液」と訂正する。

１０）明細書簡、２６頁第に−Ａ行目の「もしくは核酸
塩基およびリポース−／−りん酸」を削除する。

／／）明細書第侵頁第ｑ行目の１ＭａｎｎａｌＪを［Ｍ
ａｎｕａｌＪ　と訂正する。

／：１）明細書箱１１．コ頁第７行目の「および」を「
、」と訂正する。

／３）明細書第グコ頁第９行目のｒ　（ＴＦＭｄ　Ｕｒ
ｄ）　Ｊの後に「、タークロロー−′−デオキシウリジ
ン（ＣＩｄＵｒｄ）およびチミジン（Ｔｙ）Ｊを加入す
る。

／り明細書第１Ｉｇ頁末行に「・・・・・・吸着させた
。」とあるのを［・・・・・・吸着させ、水洗後、ｏ　
、ｏｒＭ蟻酸ナトリウム溶液で溶出させた。」と訂する
。

基　　質　　　　反応生成物　　反応生泌壱札５−フル
オロウラ　　５−フルオロ−２’−５７，５６シル（Ｆ
Ｕｒａ）　　　　デオキシウリジン（ＦｄＵｒｄ　） ５−クロロウラシ　　５−クロロ−２’−５８，９６ル
（ＣＩＵｒａ　）　　　　デオキシウリジン（ｃｌｄＵ
ｒｄ　） チミン（Ｔｈｙ　）　　　　チミ・ジン（Ｔｈｄ　）　
　　　７６．５１すメシルチミン　　　チミジン（Ｔｈ
ｄ　）　　　　３３．０３（ｒＴｈｄ　） ２　特許請求の範囲 １（Ａ）下式（Ｉ）で示されるウラシル化合物と（Ｂ）
下記の群から選んだコープオキシリボース化合物とを、
（Ｃ）下記の群から選んだ属に属する微生物に由来する
ヌクレオシドホスホリラーゼ源の存在下に反応させて下
式（Ｉｔ）で示されるよ一置換一一′−デオキシウリジ
ン銹導体を生成させることを特徴とする、デオキシウリ
ジン誘導体の製造法。

ウラシル化合物 （ここで、又はハロゲン、ハロメチル基、低級アルキル
基、低級アルコキシル基、またはニトロ基を、Ｙは水素
または糖残基を、示す） Ｓ−置換−ａ′−デオキシウリジン誘導体（Ｘは、前記
と同意義である） （（）　　２’−デオキ７リボヌクレオシド、（ロ）２
′−デオキ７リボヌクレオチドおよびその塩ならびに （ハ）　−一デオキシリボース−ｌ−りん酸およびその
塩 微生物 （１）アクロモバクタ−（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
）属（２）アルテロモナス（ＡＩ’ｔｅｒｏｍｏｎａｓ
）属（３）アースロバフタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ）属（４）ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｅｔ
ｅｒｌｕｍ）属（５）セルロモナス（Ｃａ　１１ｕ　ｌ
　ｏｍｏｎａｓ　）属（６）コリネバクテリウム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｅｔｅｒｌｕｍ）属（７）フラボバクテリ
ウム（Ｆｌａｖｏｂａｅｔ＠ｒｉｕｍ）属（８）クルチ
ア（Ｋｕｒｔｈｉａ）属 （９）ミクロコツカス（Ｍｌ　ｃｒｏｃｏｅｅｕｓ）属
ａＩＩＩプロタｊツノくフタ−（Ｐｒｏｔａｍｌｎｏｂ
ａｅｔ＠ｒ）属ｕシュウトモナス（Ｐ、ｉｅｕｄｏｍｏ
ｎａｇ　）属０サルシナ（Ｓａｒｅｌｎａ）属 ０スタフイロコツカス（Ｓｔｍｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕａ
）属および ａ４ビブリオ（Ｖｉｂｒｌｏ）属 ユヌクレオシドホスホリラーゼ源力１、当該微生物の培
養物、生菌体また＆ま菌体処理物力・らなる、特許請求
の範囲第１項記載のデオキシウリジン誘導体の製造法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、（Ａ）下式（Ｉ）で示されるウラシル化合物と（Ｂ
   ）下記の群から選んだ２−デオキシリボース化合物とを
   、（Ｃ）下記の群から選んだ属に属する微生物に由来す
   るヌクレオシドホスホリラーゼ源の存在下に反応させて
   下式（Ｉｆ）で示される５−置換−２′一デオキシウリ
   ジン誘導体を生成させることを特徴とする、デオキシウ
   リジン誘導体の製造法。 （ここで、Ｘはハロゲン、ハロメチル基、低級アルキル
   基、低級アルコキシル基、またはニトロ基を、Ｙは水素
   または糖残基を、示す）（Ｘは、前記と同意義である） ２−デオキシリボース化合物 （イ）２′−デオキシリボヌクレオシド、（ロ）２′−
   デオキシリボヌクレオチドおよびその塩ならびに （ハ）２−デオキシリボース−１−りん酸およびその塩 微生物 （１）アクロモパ六りター（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅ
   ｒ）属　／　宇１１！ＩＷｐ（２）アルテロモナス（Ａ
   ｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）属（３）アースロパクク−（Ａ
   ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属（４）ブレビバクテリウム
   （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属（５）セルロモナ
   ス（Ｃｅ　ｌ　ｌｕ　ｌｏｍｏｎａｓ　）属（６）コリ
   ネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属
   （カフラボ、にクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉ
   ｕｍ）属（８）クルチア（Ｋｕｒｔｈｉａ　）属（９）
   ミクロコックス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　）属００）
   プロタミノバクタ−（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ
   　）属０υシュウトモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
   属（１２１ザルシナ（５ａｒｃｉｎａ）属（１３）スタ
   フィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属お
   よび ０４）ビズリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属 ２、ヌクレオシドホスホリラーゼ源が、当該微生物の培
   養物、生菌体または菌体処理物からなる、特許請求の範
   囲第１項記載のデオキシウリジン誘導体の製造法。