JPS59167549A - 新規抗原およびそれらを含有するワクチン - Google Patents
新規抗原およびそれらを含有するワクチンInfo
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- JPS59167549A JPS59167549A JP18296783A JP18296783A JPS59167549A JP S59167549 A JPS59167549 A JP S59167549A JP 18296783 A JP18296783 A JP 18296783A JP 18296783 A JP18296783 A JP 18296783A JP S59167549 A JPS59167549 A JP S59167549A
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- JP
- Japan
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- peptide
- sequence
- protein
- dna
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、口てい病ウィルス(FMDV)に対する免役
を刺激するのに有効な新規抗原性ポリペプチド、それら
の製造方法、該抗原を含有するワクチンおよび抗原およ
びワクチンをFMDの予防に用いることに関する。
を刺激するのに有効な新規抗原性ポリペプチド、それら
の製造方法、該抗原を含有するワクチンおよび抗原およ
びワクチンをFMDの予防に用いることに関する。
口てい病(FMD)は家畜のもつとも病原性のあるそし
て伝染性のある病気である。この病気は世界のいくつか
の地力での風土病で、アフリカ、アジアおよび南アメリ
カの多くの国に見出た′され、免役計画で稙々の程度に
防〈されている。この病気のない国では、厳隼な輸入お
よび検疫上の規制か行なわれ、病気が発生した時にはと
殺される。
て伝染性のある病気である。この病気は世界のいくつか
の地力での風土病で、アフリカ、アジアおよび南アメリ
カの多くの国に見出た′され、免役計画で稙々の程度に
防〈されている。この病気のない国では、厳隼な輸入お
よび検疫上の規制か行なわれ、病気が発生した時にはと
殺される。
Ffv+DVは、Picornauiridae科のA
phthovirus属に分類されるRNA (リボ核
酸)ウィルスである。
phthovirus属に分類されるRNA (リボ核
酸)ウィルスである。
Cooper、 P、Dl等、■nteruirolo
gy、 10.165−180、1978をみよ。FM
DVには7柚の血清型が既知である。つまり、ヨーロッ
パ血清型A、0およびC1南アフリカ循5AT1.5A
T2および5AT3、およびアジア1型である。これら
の血清型中には、いくつかの遺伝学的に異なるサプクイ
ブが存在する。
gy、 10.165−180、1978をみよ。FM
DVには7柚の血清型が既知である。つまり、ヨーロッ
パ血清型A、0およびC1南アフリカ循5AT1.5A
T2および5AT3、およびアジア1型である。これら
の血清型中には、いくつかの遺伝学的に異なるサプクイ
ブが存在する。
玩在、F’MDの予防には不活性化されたウィルス全粒
子が用いられている。
子が用いられている。
口てい病は一重釦のRNAおよび4個のポリペプチドっ
まりVP□、vi1■3および■4を含有し、これらの
ペプチドがウィルスのキャブジッド蛋白質を形成する。
まりVP□、vi1■3および■4を含有し、これらの
ペプチドがウィルスのキャブジッド蛋白質を形成する。
vp工と称する蛋白質はこの分野のtdj究者によりV
P3、■PThrおよびVP、などとも言われる( B
achrach、 H,L、等、J、■mmunolo
g7゜115+ 1a36−1641 + 1975;
Strohmaier、 K、等、Biochsm、
Bioplxys、Res、Oomm、、 85.1
640−1645+ 1978 ; Bachrach
、 H,L、 e、工nteruirology。
P3、■PThrおよびVP、などとも言われる( B
achrach、 H,L、等、J、■mmunolo
g7゜115+ 1a36−1641 + 1975;
Strohmaier、 K、等、Biochsm、
Bioplxys、Res、Oomm、、 85.1
640−1645+ 1978 ; Bachrach
、 H,L、 e、工nteruirology。
12、65−72.1979 )。ポリペプチドvP□
、VP2およびVP3のそれぞれの分子〜は約26.0
010、他力vp4の分子量は約8,000である。そ
して、ウィルス中にはそれぞれの絢60コピーが存在す
ると考えられている。ウィルスRNAから晶羽d尺され
る他のポリペプチドも恐らくウィルスの複製にある役割
を有しているのであろう。
、VP2およびVP3のそれぞれの分子〜は約26.0
010、他力vp4の分子量は約8,000である。そ
して、ウィルス中にはそれぞれの絢60コピーが存在す
ると考えられている。ウィルスRNAから晶羽d尺され
る他のポリペプチドも恐らくウィルスの複製にある役割
を有しているのであろう。
一−ifQ FMDV RN4 ハ約2.6 ×106
1/) 分子it テ約8000ニュクレオチドに相当
する。そして、ポリペプチドへの翻訳およびRNA合成
の双方のために@型として作用するプラスの極性を有す
る。最初の翻訳生成物のひとつはP88と称する蛋白質
であり、これは切v)1されてキャブジッド蛋白質VP
工からvp、を与える。
1/) 分子it テ約8000ニュクレオチドに相当
する。そして、ポリペプチドへの翻訳およびRNA合成
の双方のために@型として作用するプラスの極性を有す
る。最初の翻訳生成物のひとつはP88と称する蛋白質
であり、これは切v)1されてキャブジッド蛋白質VP
工からvp、を与える。
上記のようにキャブジッド蛋白質vp□は、ウィルスを
トリプシン処理した時に切断されて、FMDVの大部分
の株に46いて感染性は著しく減少する− (Wild
、 T、F6%よびBrown、 F、、 、T、 G
en。
トリプシン処理した時に切断されて、FMDVの大部分
の株に46いて感染性は著しく減少する− (Wild
、 T、F6%よびBrown、 F、、 、T、 G
en。
Virology、 1. 247 − 250.
1967 ) 。 ト リ ゾシ ン処理はまた
、ウィルスかDL体生首を刺隊する能力を減少させる。
1967 ) 。 ト リ ゾシ ン処理はまた
、ウィルスかDL体生首を刺隊する能力を減少させる。
そして、VP工は、FMDVによる感染に対する効釆問
防票をおこしうる1次的免役原となる。それで、ウィル
ス粒子より分けたVP□は中オ目尻体を生成し、ウィル
スに対する効呆的防京を誘免する( Laporte、
J、等、C,RoAcad、、Sc。
防票をおこしうる1次的免役原となる。それで、ウィル
ス粒子より分けたVP□は中オ目尻体を生成し、ウィル
スに対する効呆的防京を誘免する( Laporte、
J、等、C,RoAcad、、Sc。
Paris、 t、 2765erieD+ 3399
−3401.1973;Bachrach、J Lo等
、J、工mmuno1ogy、 115.1636−1
641.1975 )。より安全なワクチンをうるため
に、天然に存在するB’MDVキャブジッド蛋白質、特
に■Plを分けることは、力えい不活化条件の使用が必
要とノZす、最市の免役原性を保ち有効なワクチンを住
良するのに不利であるとされた。
−3401.1973;Bachrach、J Lo等
、J、工mmuno1ogy、 115.1636−1
641.1975 )。より安全なワクチンをうるため
に、天然に存在するB’MDVキャブジッド蛋白質、特
に■Plを分けることは、力えい不活化条件の使用が必
要とノZす、最市の免役原性を保ち有効なワクチンを住
良するのに不利であるとされた。
より最近になって、vPよのある部分か、FMDVのサ
ブタイプでの抗原性の変動を与えるのに升−吸なことが
分った。さらに、と粁らの領域のある音15分に相当す
る短かいペプチドはそれだけで、FMDVに対する免&
)JAとして有効なことか分った(たとヘハ、:r、L
、 Bittle 寿、Natllr’9.1982.
298.30−66 )。
ブタイプでの抗原性の変動を与えるのに升−吸なことが
分った。さらに、と粁らの領域のある音15分に相当す
る短かいペプチドはそれだけで、FMDVに対する免&
)JAとして有効なことか分った(たとヘハ、:r、L
、 Bittle 寿、Natllr’9.1982.
298.30−66 )。
今や、治用な免役原性を有するかまたは、それらの組込
まれている大型ペフ0チドまたはボリベフ0チドにそう
した性質を与える、いくつかの新規ペプチドが同定され
たのである。
まれている大型ペフ0チドまたはボリベフ0チドにそう
した性質を与える、いくつかの新規ペプチドが同定され
たのである。
抛1の特徴として、本発明は血清型A240ruzei
ro、 03工ndaialまたは01BFSより分離
されたVP1蛋白員の抗原サイトのアミノ酸配夕1」を
含有することを%似とする新規ペプチドを提供する。
ro、 03工ndaialまたは01BFSより分離
されたVP1蛋白員の抗原サイトのアミノ酸配夕1」を
含有することを%似とする新規ペプチドを提供する。
本発明の範囲に含まれるのは、少なくとも611句のア
ミノ酸を含有するペプチドのフラグメントおよび該ペプ
チドまたはフラグメントの誘導体である。
ミノ酸を含有するペプチドのフラグメントおよび該ペプ
チドまたはフラグメントの誘導体である。
特に、本発明は、第4図に示す番号で、42−61、7
9−85、95−102、129−160(または16
2)、170−176および193−204(0120
9)に相当する領域およびそれらの7ラグメントおよび
誘導体である。
9−85、95−102、129−160(または16
2)、170−176および193−204(0120
9)に相当する領域およびそれらの7ラグメントおよび
誘導体である。
これらのベラ0チドのうちで、79−85.129−1
60(または162)および193−204に相当する
領域か拘利である。
60(または162)および193−204に相当する
領域か拘利である。
42−61および129−160 (−1:たは162
)フラグメントおよびその誘導体に相当するペプチドの
うちで、42−51.56−61.129−147.1
51−L60および143−162に相当するフラグメ
ントおよびそれらの誘導体か特に問題となる。
)フラグメントおよびその誘導体に相当するペプチドの
うちで、42−51.56−61.129−147.1
51−L60および143−162に相当するフラグメ
ントおよびそれらの誘導体か特に問題となる。
本発明範囲内の新規ペプチドには、たとへはっきりもの
がある。
がある。
(a) VVRHgGN (以
下ペプチド1と記す)(1)) AVTHTGK
(ペプチド2)(cl AVK’
HERD (ペプチド3)(cl
) VYNGTSKYAVGGSGRR(ペプチド4
)(el TYTGTTAYTASARR(ペプチ
ド5)(f) VYNGEORYSRNAVPNL
R(ペラ0チド6)(g) GSLAARVVKQ
(ペプチド7)(hl A…L
AAAHARH(ベラ0ナト8)(1) vLpv
Q、pToDRu (ペラ0テド9)
(jl IQ8LSPTHV工 (
ペブ′テド10)(kl VHVSGNQHTL
(ペラ0チド1l)(1) V)I
KDS工(ペプチド12)(m) VPS)ITL
(ペラ0テド16)(n)
ESALLNTS (ペプチド1
4)(o) VSALDN、TA
(ペプチド15)(1)l 工KADA工H(ペ
プチド16)((11VKAETIT
(ペプチド17)(r) GSGRRGDM
GEILAARVVKQLP (ペラ0チド18)(
e) NLRGDLQVLAQKVARTLP
(べ1−y−ド19)(t) ASARRGDLAH
LAAAHAR(ベラ0チド20)(u) ARR
GDLAHLAAAHARHLP (ペプチド21
)(v) VPNLRGDLQVLAQ、KVAR
TLP (ベニ?チド22)(w) ’VLPVQ
PTGDRHKQPL工 (ペプチド26)およ
び少なくとも6個のアミノ酸を含有するそれらのフラグ
メントおよび該ペプチドまたはフラグメントの誘導体I
ノ)ある。
下ペプチド1と記す)(1)) AVTHTGK
(ペプチド2)(cl AVK’
HERD (ペプチド3)(cl
) VYNGTSKYAVGGSGRR(ペプチド4
)(el TYTGTTAYTASARR(ペプチ
ド5)(f) VYNGEORYSRNAVPNL
R(ペラ0チド6)(g) GSLAARVVKQ
(ペプチド7)(hl A…L
AAAHARH(ベラ0ナト8)(1) vLpv
Q、pToDRu (ペラ0テド9)
(jl IQ8LSPTHV工 (
ペブ′テド10)(kl VHVSGNQHTL
(ペラ0チド1l)(1) V)I
KDS工(ペプチド12)(m) VPS)ITL
(ペラ0テド16)(n)
ESALLNTS (ペプチド1
4)(o) VSALDN、TA
(ペプチド15)(1)l 工KADA工H(ペ
プチド16)((11VKAETIT
(ペプチド17)(r) GSGRRGDM
GEILAARVVKQLP (ペラ0チド18)(
e) NLRGDLQVLAQKVARTLP
(べ1−y−ド19)(t) ASARRGDLAH
LAAAHAR(ベラ0チド20)(u) ARR
GDLAHLAAAHARHLP (ペプチド21
)(v) VPNLRGDLQVLAQ、KVAR
TLP (ベニ?チド22)(w) ’VLPVQ
PTGDRHKQPL工 (ペプチド26)およ
び少なくとも6個のアミノ酸を含有するそれらのフラグ
メントおよび該ペプチドまたはフラグメントの誘導体I
ノ)ある。
ここでのペプチドおよびポリペプチドを形成するアミノ
酸は、それぞれ、つき01字で表わす。
酸は、それぞれ、つき01字で表わす。
A アラニン
Cシスティン
D アスパラギン酸
E グルタミンIV
F フェニルアラニン
G グリシン
Hヒスチジン
エ インロイシン
K リジン
L ロイシン
M メチオニン
N アスパラギン
酸
q グルタミン
Rアルギニン
S セリン
T スレオニン
V バリン
W ト リ フ0 ト フ ァ ンY チロシン
本明細薔で使用する1フラダメント“の用語は、上記定
義のペプチドの配列内に見出だされるフラグメント(た
とえは、該ペプチドの部分配列を含む)の配列を有する
、少なくとも6個のアミノ酸乞含有するペプチドのすべ
てをさす。
義のペプチドの配列内に見出だされるフラグメント(た
とえは、該ペプチドの部分配列を含む)の配列を有する
、少なくとも6個のアミノ酸乞含有するペプチドのすべ
てをさす。
上Rc: 定i4iのペプチドのうちで、ペプチド1か
ら9まで、およびそれらのペプチドの7ラグメントが有
利である。
ら9まで、およびそれらのペプチドの7ラグメントが有
利である。
不発明のペプチドはそれら自身、F’MDVへのワクチ
ン処理に用いるための抗原に用いうる。しかし、抗原と
して用いる時に、本発明のペラ0チドを、適当な担体、
なるべくはポリペプチドたとえは十皿清アルゾミン(B
SA)またはキーホールリンベントヘモシアニン(KL
H)と結合さすのか有利である。
ン処理に用いるための抗原に用いうる。しかし、抗原と
して用いる時に、本発明のペラ0チドを、適当な担体、
なるべくはポリペプチドたとえは十皿清アルゾミン(B
SA)またはキーホールリンベントヘモシアニン(KL
H)と結合さすのか有利である。
本発明のさらに別の%tkとして、J:記定義のような
ペプチドを、それに対する担体と結合さすことを含むこ
とを%徴とするFMDVに対する抗原を提供する。
ペプチドを、それに対する担体と結合さすことを含むこ
とを%徴とするFMDVに対する抗原を提供する。
本究明のペプチドは、また、より大型のペプチドおよび
ボリペブ′チドに南Δζすな性質を付与するのにも4(
用である。それで本発明のペラ0チドば、より大型のペ
ラ0チドまたはポリペプチド申に存在しつる。このよう
な犬1rl¥!ペプチドは、ひとつたけまたはいくつか
の追加のアミノ融残基を含有してよいし寸たばより多く
のアミン版残丞を言有しうる。
ボリペブ′チドに南Δζすな性質を付与するのにも4(
用である。それで本発明のペラ0チドば、より大型のペ
ラ0チドまたはポリペプチド申に存在しつる。このよう
な犬1rl¥!ペプチドは、ひとつたけまたはいくつか
の追加のアミノ融残基を含有してよいし寸たばより多く
のアミン版残丞を言有しうる。
このような大型のペラ0チドまたはボリペフ0チドはた
とえね、2個またはそれ以上の本発明のペプチドまたは
ポリペプチドを、直接にかまたは111k11または1
個より多くの追加のアミノrM残基をpl#由して結−
8君゛冶しうる。このような大型のペプチドまたはポリ
ペプチドはII’ItllDVからのキャブジッド蛋白
質のずべてまたは部分、特にVPlを、それたけか、ま
たは、たとえはVP2、VP3、vp4またはp88を
追加して含有する大型の蛋白質の部分として含有する大
型蛋白質としであるVPを含有しうる。ポリペプチドは
、■P1蛋白寅のすべてまたは部分またはそれに類似す
る、類似の抗原特性を有するFM己列を含有するのが有
利である。
とえね、2個またはそれ以上の本発明のペプチドまたは
ポリペプチドを、直接にかまたは111k11または1
個より多くの追加のアミノrM残基をpl#由して結−
8君゛冶しうる。このような大型のペプチドまたはポリ
ペプチドはII’ItllDVからのキャブジッド蛋白
質のずべてまたは部分、特にVPlを、それたけか、ま
たは、たとえはVP2、VP3、vp4またはp88を
追加して含有する大型の蛋白質の部分として含有する大
型蛋白質としであるVPを含有しうる。ポリペプチドは
、■P1蛋白寅のすべてまたは部分またはそれに類似す
る、類似の抗原特性を有するFM己列を含有するのが有
利である。
それで、不発明は別の特徴として、FlφDVに対し免
没原的で、部分配列として上t1ル定敦のようなベン0
チドまたは上記定襲のようなそれのフラグメントビ含有
することを特徴とするペプチドまたはポリペプチドを提
供する。
没原的で、部分配列として上t1ル定敦のようなベン0
チドまたは上記定襲のようなそれのフラグメントビ含有
することを特徴とするペプチドまたはポリペプチドを提
供する。
本発明のペプチドまたはポリペプチドは、ペプチドまた
はポリペプチドを製造するだめのこの方面の技術で知ら
れている方法のいずれかで製造しう る。
はポリペプチドを製造するだめのこの方面の技術で知ら
れている方法のいずれかで製造しう る。
そitで、第1の方法として、個々のアミノ酸、小△ヱ
のベン0チド、またはそれらの組合わせより、歳知の方
法により、ペア′チドまたはボリペフ0チドを合成日9
に製造しうる。
のベン0チド、またはそれらの組合わせより、歳知の方
法により、ペア′チドまたはボリペフ0チドを合成日9
に製造しうる。
カ2の方法として、大型のポリペプチドまたは蛋白質重
切断し、そして場合によっつり型してペプチドおよびポ
リペプチドをうろことができる。
切断し、そして場合によっつり型してペプチドおよびポ
リペプチドをうろことができる。
さらに、不明細壺に参考文献として引用する、Euro
pean、 Patent Publication
No、Q[]48455中にFMDV抗涼に特゛に関し
て記載したような遺伝子工学により製造しつる。
pean、 Patent Publication
No、Q[]48455中にFMDV抗涼に特゛に関し
て記載したような遺伝子工学により製造しつる。
つ寸り本発明は、別の萄・徴として、本発明のペプチド
またはポリペプチドの製造法を提供する。
またはポリペプチドの製造法を提供する。
(aJ (1)不発明のペフ゛チドをコードする二f
i 9 DNA配列または本発明のペプチドをコードす
る配夕υを置市する二氷飼iQ DムA配タリと9(2
)クロン化ビヒクルのDLUA配列と、(3)DNAの
発現のためのイニシエーターおよびターミネータ−を含
有する、組換えLINAで宿主細胞を形りば転換し; (b) FMDベゾチドを発現するに適当な条件で宿
主細胞を培養し; ((’) 細ノ地培養q>iビ尿取し;そして(CL
) 該ペプチドを分ける ことの、これらの方法は包含する。
i 9 DNA配列または本発明のペプチドをコードす
る配夕υを置市する二氷飼iQ DムA配タリと9(2
)クロン化ビヒクルのDLUA配列と、(3)DNAの
発現のためのイニシエーターおよびターミネータ−を含
有する、組換えLINAで宿主細胞を形りば転換し; (b) FMDベゾチドを発現するに適当な条件で宿
主細胞を培養し; ((’) 細ノ地培養q>iビ尿取し;そして(CL
) 該ペプチドを分ける ことの、これらの方法は包含する。
さらに、あとから定義するよなイニシエーター配列含七
オペロン1.I(よひ、本発明のペプチドを夫質的にコ
ードするニュクレオチド配列またはそのような配列を含
有するニュクレオチドを、オペロンのイニシエーター配
列とターミネータ−配列とのあいだに含有する組換えD
NA分子を(λ供する。
オペロン1.I(よひ、本発明のペプチドを夫質的にコ
ードするニュクレオチド配列またはそのような配列を含
有するニュクレオチドを、オペロンのイニシエーター配
列とターミネータ−配列とのあいだに含有する組換えD
NA分子を(λ供する。
本会明はまた、イニシェークー配列およびターミネータ
−配列を有するオペロン、および、オペロンのイニシエ
ーター配列とターミネータ−配列とのあいたに仁政する
、不発明のペプチドを笑質的にコードするニュクレオチ
ド配列を含有する、不発明のペプチドのすべてまたは部
分を発現しうる、組換えDNAクロン化ビヒクルを提供
する。
−配列を有するオペロン、および、オペロンのイニシエ
ーター配列とターミネータ−配列とのあいたに仁政する
、不発明のペプチドを笑質的にコードするニュクレオチ
ド配列を含有する、不発明のペプチドのすべてまたは部
分を発現しうる、組換えDNAクロン化ビヒクルを提供
する。
本発明はさらに別の特徴として、上記定義のような組換
えDNAクロン化ビヒクルおよび(また(・ま)組換え
DllAを含有する宿主細胞を提供する。
えDNAクロン化ビヒクルおよび(また(・ま)組換え
DllAを含有する宿主細胞を提供する。
本発明は、また、前記定義のような組換え′DNAクロ
ン化ビヒクルで転換された宿主細胞により注意された、
前記定義のようなりNA分子の発現により製造される本
発明のペプチドを含有する、哺乳m*においてFMDV
に対する抗体産生を刺激するための抗原を提供する。
ン化ビヒクルで転換された宿主細胞により注意された、
前記定義のようなりNA分子の発現により製造される本
発明のペプチドを含有する、哺乳m*においてFMDV
に対する抗体産生を刺激するための抗原を提供する。
本発明は、また、
(a) FMDV −g鎖RIJAを分離し;(b)
このll’lφDA RNAの一重鎖に相補的な第
一の一里釦DNA順とし; (C) この第一の−M aDNA鎖に相補的で水素
結合した第2の一重鎖り矧へを1周製し、二重鎖DNA
とすることを恒常する、本発明のペプチドを実質的にコ
ードするl)Nへ分子の製造方法を提供する。
このll’lφDA RNAの一重鎖に相補的な第
一の一里釦DNA順とし; (C) この第一の−M aDNA鎖に相補的で水素
結合した第2の一重鎖り矧へを1周製し、二重鎖DNA
とすることを恒常する、本発明のペプチドを実質的にコ
ードするl)Nへ分子の製造方法を提供する。
そのように製昂した二重鎖DNAをクロン化ビヒクルに
挿入する。つまり、クロン化ビヒクル?制眠エンドニュ
クレアーゼで消化し、クロン化ビヒクルの末端をDNA
分子に結合させ組換えクロン化ビヒクルとする。
挿入する。つまり、クロン化ビヒクル?制眠エンドニュ
クレアーゼで消化し、クロン化ビヒクルの末端をDNA
分子に結合させ組換えクロン化ビヒクルとする。
本明卸11中に用いる用胎はつきの意味をン角する。
ニュクレオテド:据’Hl1分(ペントース)、ホスフ
ェートおよび室糸惟へテロ壌塩基を含凋するDNAまた
はRNA単位。塩基(・工、クリコシド炭糸(ペントー
スの1′炭糸)を経由して糖に結合し、そして塩基がニ
ュクレオチドを特徴づける。4つのDNA塩基ハ、アデ
ニン(A) 、グアニン(G)、シトシン(0)および
チミン(T)である。4イ固のRNA塩基は、ハ、G、
、Oおよびウラシル(U)である。
ェートおよび室糸惟へテロ壌塩基を含凋するDNAまた
はRNA単位。塩基(・工、クリコシド炭糸(ペントー
スの1′炭糸)を経由して糖に結合し、そして塩基がニ
ュクレオチドを特徴づける。4つのDNA塩基ハ、アデ
ニン(A) 、グアニン(G)、シトシン(0)および
チミン(T)である。4イ固のRNA塩基は、ハ、G、
、Oおよびウラシル(U)である。
組換えDNA :天然に存在しない第一の配列を第二の
配列とあわせて含有する、少なくとも2′)iの二重鎖
DNAニュクレオチド配列を名南するハイブリドニ重鎖
DNA配夕1」。
配列とあわせて含有する、少なくとも2′)iの二重鎖
DNAニュクレオチド配列を名南するハイブリドニ重鎖
DNA配夕1」。
クロン化ビヒクル:単細胞微生寂・中に入れた時に複製
されうる非クロモシーム性二重鎖DNAシラスミド:ウ
ィルスまたは細凶に由来するクロン化ビヒクル。
されうる非クロモシーム性二重鎖DNAシラスミド:ウ
ィルスまたは細凶に由来するクロン化ビヒクル。
偽造遺伝子:特定のボリベフ′チドに特徴的なアミノ配
列をコードするDNAニュクレオチド゛配列。
列をコードするDNAニュクレオチド゛配列。
イニシエーター配列:転写または翻訳の開始をjl?j
1(j するDNAニュクレオチド配列。
1(j するDNAニュクレオチド配列。
ターミイ・−ター配列:転写または翻訳を1苧止させる
DNAニュクレオテドの自己夕J。
DNAニュクレオテドの自己夕J。
転写:メツセンシャ−1(NAを形成するIJNA配列
に沿ってRNAポリメラーゼを移動させる過程闘訳:メ
ッセンジャーRNAよりポリペプチドを製造するための
課程。
に沿ってRNAポリメラーゼを移動させる過程闘訳:メ
ッセンジャーRNAよりポリペプチドを製造するための
課程。
オペロンニイニシェークー配列が先行しそしてターミ4
−ター配列が続く、ポリペプチド発現のための構造遺伝
子。
−ター配列が続く、ポリペプチド発現のための構造遺伝
子。
光現:構蹟遺伝子よりポリペプチドを産生ずることに含
まれる課程。
まれる課程。
本発明を図面によりさらに説明する。
第1図において、配列に用いるフラグメントか1ト丸で
示しである。ここで、 ・ 」はデベルさ「 れた末端を示1′。ラベルされた末端を生成するための
用いた制限耐糸も示しである。制限酵素のサイトは、つ
きのように略記する。A 、 Avail ; B 。
示しである。ここで、 ・ 」はデベルさ「 れた末端を示1′。ラベルされた末端を生成するための
用いた制限耐糸も示しである。制限酵素のサイトは、つ
きのように略記する。A 、 Avail ; B 。
BamHI ; J Ecol(I ; G、 Bgl
ll ; H,Hlndlll ;sA、 Sma
I; P、 Pst I; (P)、 Pstlと予想
されるが、わつかムエキソニュクレアーゼの混入で失わ
れたらしい; R+ Msal + b + bs t
l o各領域でコードされるポリペプチドも示しであ
る。
ll ; H,Hlndlll ;sA、 Sma
I; P、 Pst I; (P)、 Pstlと予想
されるが、わつかムエキソニュクレアーゼの混入で失わ
れたらしい; R+ Msal + b + bs t
l o各領域でコードされるポリペプチドも示しであ
る。
第2図に、(al A24 cruzelro、 (b
) C3工ndaial 。
) C3工ndaial 。
(C) QIB11’SのVP (節kに対するニュク
レオチドおよび示されるアミノ飽配列が示しである。
レオチドおよび示されるアミノ飽配列が示しである。
(a) A、、、におけるVPiの最初の11のコドン
は失なわれているとした。
は失なわれているとした。
(’b) pFo、 301プラスミド中で、*CはT
として絖まれたか、親シラスミドpFc 3r 3
中ではCと仮定される。
として絖まれたか、親シラスミドpFc 3r 3
中ではCと仮定される。
(C)アンダーラインさ才した閂己夕14 fl−、p
B’01℃351 およびpFo1r2 の両刃のフ
0ラスミドに由来する。
B’01℃351 およびpFo1r2 の両刃のフ
0ラスミドに由来する。
十〇はpFQ lr 2に由来し、pB 01 tJ
51で&i Tによりおきかえられ、メチオニン残端を
示すであろう。
51で&i Tによりおきかえられ、メチオニン残端を
示すであろう。
第6図で% (al Al1 r A24およびA1
Or (bl A1 o l 03および0IBFS、
(c) O□BFSおよびOIKのあいたのアミン版
配列が比較しである。アミノ酸は相同性が最大になるよ
うに配列されて、できるたけ少なくしたか、−で示すギ
ャップか尋人しである。VPl甲の谷位置は、ギャップ
を含めて1から216まで査れるか、pFo□t351
中にはメチオニンが示唆される。
Or (bl A1 o l 03および0IBFS、
(c) O□BFSおよびOIKのあいたのアミン版
配列が比較しである。アミノ酸は相同性が最大になるよ
うに配列されて、できるたけ少なくしたか、−で示すギ
ャップか尋人しである。VPl甲の谷位置は、ギャップ
を含めて1から216まで査れるか、pFo□t351
中にはメチオニンが示唆される。
第4図でA10”I C3工ndaialおよび0IB
FSの変動性か示しである。(aC)はA□。、C3ま
たは01の親水性でプロットしてあり、(d)は免役原
性について調べたペプチドを緑葉に表現しである。ブロ
ットの谷邪は、各点か、5個の各群の中火(つまり6査
目)馨衣わずとして、配夕IJ中の5個の位置のスコア
を合わせてつくり出したもので゛ある。変動性・ノ)プ
ロット(−)は、それぞれの位置についての同じ比較の
すべてについて0のスコアを用い、それぞれの位置の異
なる比較については1のスコアを用いている。それで、
5つの位置の谷位置については最大スコア6七なり、各
杵については15となる。−6,4から+6.0までの
範囲の、各アミ位tθのそれぞれの硅について、最大コ
スア15および最小スコアー17を与える。2つの70
ロツトを廉ぺるために、変動性プロットに用いた第61
囚中の相応する配夕1」中のギヤツノに対応して親水性
プロットに尋人した。主な親水性ビークには1がら5の
番号を付した。
FSの変動性か示しである。(aC)はA□。、C3ま
たは01の親水性でプロットしてあり、(d)は免役原
性について調べたペプチドを緑葉に表現しである。ブロ
ットの谷邪は、各点か、5個の各群の中火(つまり6査
目)馨衣わずとして、配夕IJ中の5個の位置のスコア
を合わせてつくり出したもので゛ある。変動性・ノ)プ
ロット(−)は、それぞれの位置についての同じ比較の
すべてについて0のスコアを用い、それぞれの位置の異
なる比較については1のスコアを用いている。それで、
5つの位置の谷位置については最大スコア6七なり、各
杵については15となる。−6,4から+6.0までの
範囲の、各アミ位tθのそれぞれの硅について、最大コ
スア15および最小スコアー17を与える。2つの70
ロツトを廉ぺるために、変動性プロットに用いた第61
囚中の相応する配夕1」中のギヤツノに対応して親水性
プロットに尋人した。主な親水性ビークには1がら5の
番号を付した。
(dJ 免疫原1ゴペゾチド、−−−−一非免
投原性ペフ”チド。トリフ0シンで生ずる(A、B)ペ
プチド;マウス和下崩、フ0ロチアーゼで生ずる(0.
D)チド(Brtt(e c+ cLl、、 +992
)。
投原性ペフ”チド。トリフ0シンで生ずる(A、B)ペ
プチド;マウス和下崩、フ0ロチアーゼで生ずる(0.
D)チド(Brtt(e c+ cLl、、 +992
)。
不発明のさらに別の%歓をつきに笑施例で示す。
これらはR発明のためのもので、不発「力を制限するわ
げでない。
げでない。
?111
(al n’ylDV RNAのY 製Eagle
4地中で゛調製したての1イ’MDVタイグA240r
uzeiroの約1Qmt、を、約10””K21 f
ji胞単7Mを含冶するROux Q<んのそれぞれに
加えた。培地中で30分おだやかに撮ってから培地をぐ
いしやして除g、2Qmb苑の新しいi@地をそれぞれ
のO・んにカロえた。ウィルスの感染で帷胞牟層か破撤
されなら(6−4時間)、培地をけ、いしやして除き、
12.000χIで15分間4°Cで遠心して府j廊残
脣を除いた。4℃で1時間90,000 X、9で遠心
してウィルスをベレット状にした。つ龍緩衝液(10m
ル1トリスH○l (pH7゜5 ) 150mM
封aclおよび1mM EDTA (エチレンジアミノ
テトラ酢酸)の2 ml中にウィルスベレットを再懸濁
させ、懸濁液は、約5,000 xyで20℃で10分
遠心して澄明化した。澄明化上清はナトリウムドデシル
スルフニー ) (BDS)中1%w/vとし、TN
xm’tfrii&、 (100mM)リス−H0I、
pi−i 7.t5 、’lQ[1mM NaC!l
)中にあらかじめ形成させたクラゾエント(スクロー
ス15−45%w/v)に加えた。そして100.O[
]Ox、9で10℃で211.ImJ遠心した。1ml
宛の分画な260 nullで゛調べ、ウィルスを冨肩
する分画を寺各煽テのフェノール:りロロポルム(1:
1 )テ抽出し、水相を2′8量のエタノールを加え
、マイナス2000に1夜放直し、沈殿させた。RNA
沈殿物を、4°0で30分で5,000 xiで埋めし
て]−(NAを沈殿させた。上74をすて、ベレットを
除水し、05 )ne の TNES Rmij &
(10]コqM Tri θ −)401 ρ
1」7.6.15Q mM NaU土、1n+M ED
TAおよび0.2%W/vSU−)S)に浴mした。R
−i ’R欠は、あらかじめ生成させたスクロースダラ
シエン) (TNEs 中5から25%)に加え、2(
、J℃で6.5時間、200,000x9で遠心した。
4地中で゛調製したての1イ’MDVタイグA240r
uzeiroの約1Qmt、を、約10””K21 f
ji胞単7Mを含冶するROux Q<んのそれぞれに
加えた。培地中で30分おだやかに撮ってから培地をぐ
いしやして除g、2Qmb苑の新しいi@地をそれぞれ
のO・んにカロえた。ウィルスの感染で帷胞牟層か破撤
されなら(6−4時間)、培地をけ、いしやして除き、
12.000χIで15分間4°Cで遠心して府j廊残
脣を除いた。4℃で1時間90,000 X、9で遠心
してウィルスをベレット状にした。つ龍緩衝液(10m
ル1トリスH○l (pH7゜5 ) 150mM
封aclおよび1mM EDTA (エチレンジアミノ
テトラ酢酸)の2 ml中にウィルスベレットを再懸濁
させ、懸濁液は、約5,000 xyで20℃で10分
遠心して澄明化した。澄明化上清はナトリウムドデシル
スルフニー ) (BDS)中1%w/vとし、TN
xm’tfrii&、 (100mM)リス−H0I、
pi−i 7.t5 、’lQ[1mM NaC!l
)中にあらかじめ形成させたクラゾエント(スクロー
ス15−45%w/v)に加えた。そして100.O[
]Ox、9で10℃で211.ImJ遠心した。1ml
宛の分画な260 nullで゛調べ、ウィルスを冨肩
する分画を寺各煽テのフェノール:りロロポルム(1:
1 )テ抽出し、水相を2′8量のエタノールを加え
、マイナス2000に1夜放直し、沈殿させた。RNA
沈殿物を、4°0で30分で5,000 xiで埋めし
て]−(NAを沈殿させた。上74をすて、ベレットを
除水し、05 )ne の TNES Rmij &
(10]コqM Tri θ −)401 ρ
1」7.6.15Q mM NaU土、1n+M ED
TAおよび0.2%W/vSU−)S)に浴mした。R
−i ’R欠は、あらかじめ生成させたスクロースダラ
シエン) (TNEs 中5から25%)に加え、2(
、J℃で6.5時間、200,000x9で遠心した。
358で洗牌するRIIIA含有分画(0,5ml )
集メ、フェノール−クロロホルムで1度抽出し、エタ
ノール沈殿、揚酢丹1することは、上孔ウィルスの場合
と同様である。生ずる浴液はエタノール沈殿させ、最後
に丙蒸留水の0.05m1に8浴解した。俗液をエタノ
ール沈殿させ、鼓佐に2回蒸留水の0.05廐に溶解さ
せた。
集メ、フェノール−クロロホルムで1度抽出し、エタ
ノール沈殿、揚酢丹1することは、上孔ウィルスの場合
と同様である。生ずる浴液はエタノール沈殿させ、最後
に丙蒸留水の0.05m1に8浴解した。俗液をエタノ
ール沈殿させ、鼓佐に2回蒸留水の0.05廐に溶解さ
せた。
同様に、FMDVタイ71″C5工ridaialおよ
び0IBF’SよりもFMDV RNAを得た。
び0IBF’SよりもFMDV RNAを得た。
(b) 二重知相袖的DIJA (DI9cDNA
)の合成FtvDv RNA (10p& ’)と、オ
リゴ−dT(12−18)グライーq −(Q、5 μ
j9 ; Co11aborative Re5ear
ch)かまたは牛胸腺DNA I)NA a eeI消
化物とを、0゜4mMジチオスレイトール3 mM I
Ag、+12.5QmM )リス−J(C1、pki8
.1.148mM Na1l 、0,2111M dA
TP(2,50i/mモ/L/ / ” p / dA
TPXRadiochemicalCentre、 A
mershamより)、0.2 mM dTTP 、
0.2mM dOTP 、 0.2 mP dGT
P 、 4 mM Na4P2O7および28率位AM
V逆転写酵% (Dr、’J、 Beard、 Lif
eSciences社、Florida捷供)官有最終
容量100μm中で606Cで2時間消化した。EDT
A (2QmM )およびSDS (0,2%w/v)
を加え反応を止めた。反応停止混合物の試Q (2%
)を、2,5cmDE81ベーパーディスク(What
man )にスポットした。
)の合成FtvDv RNA (10p& ’)と、オ
リゴ−dT(12−18)グライーq −(Q、5 μ
j9 ; Co11aborative Re5ear
ch)かまたは牛胸腺DNA I)NA a eeI消
化物とを、0゜4mMジチオスレイトール3 mM I
Ag、+12.5QmM )リス−J(C1、pki8
.1.148mM Na1l 、0,2111M dA
TP(2,50i/mモ/L/ / ” p / dA
TPXRadiochemicalCentre、 A
mershamより)、0.2 mM dTTP 、
0.2mM dOTP 、 0.2 mP dGT
P 、 4 mM Na4P2O7および28率位AM
V逆転写酵% (Dr、’J、 Beard、 Lif
eSciences社、Florida捷供)官有最終
容量100μm中で606Cで2時間消化した。EDT
A (2QmM )およびSDS (0,2%w/v)
を加え反応を止めた。反応停止混合物の試Q (2%
)を、2,5cmDE81ベーパーディスク(What
man )にスポットした。
5%(w/v) Na2HPO4申で十分に洗い、kフ
悄水で短時間(5分)抗い、乾燥し、シンチレーション
カウントした。このつり、作で、約2μyのCDNAの
葉状し・をイ(1′だ。反応?J、゛1合物の残りはフ
ェノールークOロホルム#il f:HL 、そして、
エタノール沈殿させたか、これは上記のようである。し
っ)シ、エタノール控加の前に、0.2H余度となるよ
うに、酢酸ナトリウムをjJIJえた。乾燥ベレットは
100ρIU、 I M NaOHK 俗解し、20分
70°Cでインキュベートし、鋳ハリ、つまり、FMD
VパNAを除いた。
悄水で短時間(5分)抗い、乾燥し、シンチレーション
カウントした。このつり、作で、約2μyのCDNAの
葉状し・をイ(1′だ。反応?J、゛1合物の残りはフ
ェノールークOロホルム#il f:HL 、そして、
エタノール沈殿させたか、これは上記のようである。し
っ)シ、エタノール控加の前に、0.2H余度となるよ
うに、酢酸ナトリウムをjJIJえた。乾燥ベレットは
100ρIU、 I M NaOHK 俗解し、20分
70°Cでインキュベートし、鋳ハリ、つまり、FMD
VパNAを除いた。
イ合欣は酔り゛中第1」シ、ビード−でフェノール−ク
ロロホルムのカラム(100x 15+u+)を通して
分解RNAよりcDNAを分りた。乾・譲ベレットな、
51 mM Tris −k[;l Pr18゜6.2
0 mMジチオスレイトール、 j IJu+M Mg
Oユ2、[1,4mM dOTP 、 Q、4 mM
doTp 10.4 mM (iATP (5,5a1
//I11mo1e732P/dATP;上(a(ii
Ockl、tllical CC+n tr61 、
Amereham ) 、 Q 、4
mMdTTPおよび66単位AMV逆転与酪索中再懸濁
させて90鳳の取終芥菫とした。45°Cで4時1−’
diインキュベートしてからEDTA (20mM)お
よび5DS(0,2%/v )を加えて反応を止めた。
ロロホルムのカラム(100x 15+u+)を通して
分解RNAよりcDNAを分りた。乾・譲ベレットな、
51 mM Tris −k[;l Pr18゜6.2
0 mMジチオスレイトール、 j IJu+M Mg
Oユ2、[1,4mM dOTP 、 Q、4 mM
doTp 10.4 mM (iATP (5,5a1
//I11mo1e732P/dATP;上(a(ii
Ockl、tllical CC+n tr61 、
Amereham ) 、 Q 、4
mMdTTPおよび66単位AMV逆転与酪索中再懸濁
させて90鳳の取終芥菫とした。45°Cで4時1−’
diインキュベートしてからEDTA (20mM)お
よび5DS(0,2%/v )を加えて反応を止めた。
混合9り1はフェノール−クロロホルム抽出したあト、
Na1lを加えて0.2Mとし、マイナス20°Cで1
夜をかけ、2容重倍のエタノールを加え沈殿させた。乾
燥ペレットは、5Q mM Na1l、Q、 1 %
W/V SDSの200μlに栴@濁させ、5epha
dex C)jQQ カラムを通した。これは、前記し
たようである。浴出されたピークは、200μyのクリ
コーデン担体の存在でエタノール沈殿させた。DE81
ペーパーディスク分析を上記のように実施した。このこ
とから、二厘知台成は、理論値の60%であることか分
った。エタノール沈殿よりの乾燥ベレットは、’:i:
L 後側a (25mM pH4,6酢fh Gf (
ki液、150た。残り(試料B)は5単位のS□ニュ
クレアーゼ(Sigma社)と67°Cで30分インキ
ュベートした。フェノール−クロロホルムで抽出して反
応を止め、水イ・−をエタノールで沈殿させた。乾燥さ
ぜたベレットは20/lLtのり、oに置部r=させた
。二車%)3 CDNA中の猿を除(S1ニユクレアー
セ゛処理の効果をみるためにβ武制AおよびBの少知(
2矛)をioo’cで6分加熱し、60’Cに冷却し種
々の時INJ(D、θ、25.1および14時1d1)
に6単位のSlを加え、37°Cで60分インキュベー
ションした。81に対する抵抗性は、上記のようにD’
m81ペーパーディスクパインディングで分ソ「シた。
Na1lを加えて0.2Mとし、マイナス20°Cで1
夜をかけ、2容重倍のエタノールを加え沈殿させた。乾
燥ペレットは、5Q mM Na1l、Q、 1 %
W/V SDSの200μlに栴@濁させ、5epha
dex C)jQQ カラムを通した。これは、前記し
たようである。浴出されたピークは、200μyのクリ
コーデン担体の存在でエタノール沈殿させた。DE81
ペーパーディスク分析を上記のように実施した。このこ
とから、二厘知台成は、理論値の60%であることか分
った。エタノール沈殿よりの乾燥ベレットは、’:i:
L 後側a (25mM pH4,6酢fh Gf (
ki液、150た。残り(試料B)は5単位のS□ニュ
クレアーゼ(Sigma社)と67°Cで30分インキ
ュベートした。フェノール−クロロホルムで抽出して反
応を止め、水イ・−をエタノールで沈殿させた。乾燥さ
ぜたベレットは20/lLtのり、oに置部r=させた
。二車%)3 CDNA中の猿を除(S1ニユクレアー
セ゛処理の効果をみるためにβ武制AおよびBの少知(
2矛)をioo’cで6分加熱し、60’Cに冷却し種
々の時INJ(D、θ、25.1および14時1d1)
に6単位のSlを加え、37°Cで60分インキュベー
ションした。81に対する抵抗性は、上記のようにD’
m81ペーパーディスクパインディングで分ソ「シた。
そのボ古朱60°Cにすぐに冷却してからSlとインキ
ュベーションした時に、試料Aの56%以上かS1消化
に抵vL性で、他方試料Bの2%以下か抵仇1」二であ
る。試料* 600cとしてから0.251、T間抜に
Slを加えると、これらの数字は81%および15%と
なった。それで第2の鎖合成後に存在する環は、最初の
81処理で効果的に切れることfJ)分った。
ュベーションした時に、試料Aの56%以上かS1消化
に抵vL性で、他方試料Bの2%以下か抵仇1」二であ
る。試料* 600cとしてから0.251、T間抜に
Slを加えると、これらの数字は81%および15%と
なった。それで第2の鎖合成後に存在する環は、最初の
81処理で効果的に切れることfJ)分った。
(c) ”y″ラスミドよび二爪鉛cDNA (ds
cDNA )のホモ斥台体によるテーリング (1) ベクターの(IG−テーリング ベクタ一つ
まりプラスミドpAT153の約7μgは、酵素の供給
者(Boehringer )の推薦する条件でPst
1エンドニュクレアーセ゛で処理した。反応は酢酸ナト
リウムを0.6Mを加えて反応を止め、エタノール沈殿
させる。乾燥ベレットは100μmのdG、−7−−!
/ングearJI数(100mMのカニ7 シルp −
4(C1、pi−17,1)、5 mMly−g012
.50 l’jj/ml牛皿清アルブミ7’jcjよひ
1 mM aGTP (2Q OmCi/3−”h/d
GTP/m mole)甲に得意74(Iさせた。これ
に、2μm(68単位)のターミナルトラスフエラーセ
゛(TT)を加え、37°Cでインキュベートした。2
.5.5および10分[1」]に試料を採取した。それ
ぞれについて水冷しそしてEDTAを2QmMを7jD
えて反応を止めた。それぞれの5μIK科のトリクロル
酢酸沈殿を分析すると、2.5分佐にはもにや3Hcl
GMPは取り込まれない。
cDNA )のホモ斥台体によるテーリング (1) ベクターの(IG−テーリング ベクタ一つ
まりプラスミドpAT153の約7μgは、酵素の供給
者(Boehringer )の推薦する条件でPst
1エンドニュクレアーセ゛で処理した。反応は酢酸ナト
リウムを0.6Mを加えて反応を止め、エタノール沈殿
させる。乾燥ベレットは100μmのdG、−7−−!
/ングearJI数(100mMのカニ7 シルp −
4(C1、pi−17,1)、5 mMly−g012
.50 l’jj/ml牛皿清アルブミ7’jcjよひ
1 mM aGTP (2Q OmCi/3−”h/d
GTP/m mole)甲に得意74(Iさせた。これ
に、2μm(68単位)のターミナルトラスフエラーセ
゛(TT)を加え、37°Cでインキュベートした。2
.5.5および10分[1」]に試料を採取した。それ
ぞれについて水冷しそしてEDTAを2QmMを7jD
えて反応を止めた。それぞれの5μIK科のトリクロル
酢酸沈殿を分析すると、2.5分佐にはもにや3Hcl
GMPは取り込まれない。
ここぽでのホモ重合体テールの平均長は25ニユクレオ
チドである。2.5分餓科の残りはTEi側敢(1Q
mM Tris −Hclpi−48,Q 、1mM
EDTA )で布釈し100μmとした。等容mのTE
−飽和フ工ノールで1度抽出した。水相はエーテルで4
度抽出した。酢絃ナトリウムを0.6Mまで刀口えて試
料をエタノール沈殿させた。乾燥ベレットは4Uμm0
に一120中に4与&i h6さ→J−マイツース10
°Gに貯1紙した。
チドである。2.5分餓科の残りはTEi側敢(1Q
mM Tris −Hclpi−48,Q 、1mM
EDTA )で布釈し100μmとした。等容mのTE
−飽和フ工ノールで1度抽出した。水相はエーテルで4
度抽出した。酢絃ナトリウムを0.6Mまで刀口えて試
料をエタノール沈殿させた。乾燥ベレットは4Uμm0
に一120中に4与&i h6さ→J−マイツース10
°Gに貯1紙した。
こり最終浴1代中でのDRA仏、を度は15μVmlで
゛あった。
゛あった。
(il)decDIVIAのdo−テーリング dC−
チーリンダAI2’1k11(Il、(I C1OmM
カコジル(Mf ト’) ”)LHC’ (pH7,1
)、imcoa12、U。i znM D1’T 、
5014/m’の生血前アルブミン、Q、 5 +n1
u′’HacTP (6QQmCi、15−F′H/−
0TP/mmole )巾約0.4ttjJのdscJ
)IQA ’21μITT (19単位)とインキュベ
ートした。2および5労使試料を取り、5μl試料をT
CA沈殿させ取り込み付分析した。それから2分後で約
70ニユクレオチドまで、そして5分後1・60ニユク
レオナドの半均ホモ1合体の平均永となることが分った
。これら2試料をブールし、11象フェノール抽出し、
4回エーテル拙出゛シ、エタノール沈殿させ、50μl
)120中に書浴牌し、マイナス10゛Cで冷却した
。
チーリンダAI2’1k11(Il、(I C1OmM
カコジル(Mf ト’) ”)LHC’ (pH7,1
)、imcoa12、U。i znM D1’T 、
5014/m’の生血前アルブミン、Q、 5 +n1
u′’HacTP (6QQmCi、15−F′H/−
0TP/mmole )巾約0.4ttjJのdscJ
)IQA ’21μITT (19単位)とインキュベ
ートした。2および5労使試料を取り、5μl試料をT
CA沈殿させ取り込み付分析した。それから2分後で約
70ニユクレオチドまで、そして5分後1・60ニユク
レオナドの半均ホモ1合体の平均永となることが分った
。これら2試料をブールし、11象フェノール抽出し、
4回エーテル拙出゛シ、エタノール沈殿させ、50μl
)120中に書浴牌し、マイナス10゛Cで冷却した
。
((11アニーリングされたプラスミドおよびdecD
14Aを用いた形質転換 絢0.12μgの(11)−テールテラスミドp、AT
153(0,[J 5 pmole )および0.1
μjJ do−テール(1BCD111A(肌2−口、
4 pmole )を、10clμlTNg稜イ@B
(1Q mM Tris −01pH8,Q
、 2 0 0 mMNail 、 1mM
EDTA )中で65°O,[1,5時tfJjインキ
ュベートした。インキュベーション渦ルニは4時間をか
けて20℃まで序々に冷却させた。ついで急速に0℃と
した。この溶成は、最終的に、15mMTris −)
(C1pi′I7.5.1QQ mM Na1l、1Q
mM MgO12、i[,1mM (Ear12、Q、
5mM EDTA含有の200 μl K希釈した。L
i 00に約3時曲保った。
14Aを用いた形質転換 絢0.12μgの(11)−テールテラスミドp、AT
153(0,[J 5 pmole )および0.1
μjJ do−テール(1BCD111A(肌2−口、
4 pmole )を、10clμlTNg稜イ@B
(1Q mM Tris −01pH8,Q
、 2 0 0 mMNail 、 1mM
EDTA )中で65°O,[1,5時tfJjインキ
ュベートした。インキュベーション渦ルニは4時間をか
けて20℃まで序々に冷却させた。ついで急速に0℃と
した。この溶成は、最終的に、15mMTris −)
(C1pi′I7.5.1QQ mM Na1l、1Q
mM MgO12、i[,1mM (Ear12、Q、
5mM EDTA含有の200 μl K希釈した。L
i 00に約3時曲保った。
土、三三: HBlolの形質転換用培養物をうるのに
、1ntlの靜止相培養物を、65mτL−グロス(1
%Difco Bacto Tryptone、 Q、
5%DifCOBacto Yeast Extrac
tおよび0.5%Na1l pH7,2)に接種し67
℃で約6時間振った。A650は0.4であった。3,
000 X!9で5分間4℃で遠心しベレットとした。
、1ntlの靜止相培養物を、65mτL−グロス(1
%Difco Bacto Tryptone、 Q、
5%DifCOBacto Yeast Extrac
tおよび0.5%Na1l pH7,2)に接種し67
℃で約6時間振った。A650は0.4であった。3,
000 X!9で5分間4℃で遠心しベレットとした。
細胞は25MのQ、’l M MgO1゜(0’C)に
再懸l蜀させ、再ペレットとした。ベレットQ:]、2
mllのQ、1M 0aO12(QoC)で再悲淘さ
せ0°Cで60分放寵した。転侯用M胞の0.2m1.
を(J、’1tn13のアニーリングされたpAT 1
53/dscDNAとおだやかに混合し、0℃に3θ分
放置し、42’0で2分、最後に0 ’Oに60分放置
した。これに11n14のL−ブロスを加えた。転惨混
合物はついで25 分67 ’Cテ4 ン+ユヘ−)
シタ。Q 、1 m13 +’) Nl’1科10イ同
を、L −Tcブレート(L−プロス、1.5%寒天、
15μj7 / m13テトラサイクリン(シグマ社)
にそれぞれ拡げた。これら10枚のブレートより150
個のテトラサイクリン抵抗荘のコロニーを倚だ。それの
約87%はアンピシリン感受1生(100μy;シグマ
)で、pAT 153のPat1サイトにcJJNAが
挿入されたことを示す。
再懸l蜀させ、再ペレットとした。ベレットQ:]、2
mllのQ、1M 0aO12(QoC)で再悲淘さ
せ0°Cで60分放寵した。転侯用M胞の0.2m1.
を(J、’1tn13のアニーリングされたpAT 1
53/dscDNAとおだやかに混合し、0℃に3θ分
放置し、42’0で2分、最後に0 ’Oに60分放置
した。これに11n14のL−ブロスを加えた。転惨混
合物はついで25 分67 ’Cテ4 ン+ユヘ−)
シタ。Q 、1 m13 +’) Nl’1科10イ同
を、L −Tcブレート(L−プロス、1.5%寒天、
15μj7 / m13テトラサイクリン(シグマ社)
にそれぞれ拡げた。これら10枚のブレートより150
個のテトラサイクリン抵抗荘のコロニーを倚だ。それの
約87%はアンピシリン感受1生(100μy;シグマ
)で、pAT 153のPat1サイトにcJJNAが
挿入されたことを示す。
(83組決えプラスミドの大規俟調製
50Qmto−)L−ブロスに10解の静止培養物を倭
打し、67℃で約4時mj振とうしてA390が約1.
0となるまでとすることにより、フ0ラスミド宮准私」
央物を大知培養した。りAフェニコール(シグマ社)を
[]、1my / at;まで加え、ろ7°Cで1伎’
Efj貢した。増殖段階のあと、5分間、4℃で5.0
00 Xgで遠心し細胞をベレットとした。上宿は奴困
じてすてた。細胞のベレットは12m1の”RYij畝
(50mM Tris−401(p+−18−0)、4
0iallEDTA M 25%スクロース)甲に、i
l4.懸濁させた。
打し、67℃で約4時mj振とうしてA390が約1.
0となるまでとすることにより、フ0ラスミド宮准私」
央物を大知培養した。りAフェニコール(シグマ社)を
[]、1my / at;まで加え、ろ7°Cで1伎’
Efj貢した。増殖段階のあと、5分間、4℃で5.0
00 Xgで遠心し細胞をベレットとした。上宿は奴困
じてすてた。細胞のベレットは12m1の”RYij畝
(50mM Tris−401(p+−18−0)、4
0iallEDTA M 25%スクロース)甲に、i
l4.懸濁させた。
LysosymeおよびEDTAをそれぞれ1.4 m
にl/me 、60ILIMに力nえ、忽濁δダを5分
間氷上に放置した。この16成に5Qm!;のTrit
Onミックス(0,1%Tritcn X−100,6
2,5mM [DTA、 5QmM Trie −MO
l、pH8,CI)を加え、退合物は約10分またはR
5aAI化するまで放置した。4℃で15分48,00
0Xトで遠心して澄明とした。上宿は注意してけいしや
して除き、0.95 、?の0sC1および10〃l?
/mtのエチシ゛ウムブロマイドの0.1 dを加えた
。
にl/me 、60ILIMに力nえ、忽濁δダを5分
間氷上に放置した。この16成に5Qm!;のTrit
Onミックス(0,1%Tritcn X−100,6
2,5mM [DTA、 5QmM Trie −MO
l、pH8,CI)を加え、退合物は約10分またはR
5aAI化するまで放置した。4℃で15分48,00
0Xトで遠心して澄明とした。上宿は注意してけいしや
して除き、0.95 、?の0sC1および10〃l?
/mtのエチシ゛ウムブロマイドの0.1 dを加えた
。
BeckII!an 50Ti o−ター甲で1200
0X&で20℃で40時mJ遠心した。プラスミドは長
波長U、V’。
0X&で20℃で40時mJ遠心した。プラスミドは長
波長U、V’。
螢九で−Ia!化し、チューブの側聞にシリンジを指し
込み取り出した。プラスミドDNAは、第2のC!so
l/M化エチジウムグラジェント中で遠心して平衡させ
た。生ずるバンドはNa1lおよび水で飽オロさせたプ
ロパン−2−オールで4度抽出した。
込み取り出した。プラスミドDNAは、第2のC!so
l/M化エチジウムグラジェント中で遠心して平衡させ
た。生ずるバンドはNa1lおよび水で飽オロさせたプ
ロパン−2−オールで4度抽出した。
エタノールで沈殿させ、TE中に再溶解させそして再沈
殿さぜた。最終乾沫ベレツ) 200RτTE緩衝故に
再)論畠lさせ4°Cで保存した。
殿さぜた。最終乾沫ベレツ) 200RτTE緩衝故に
再)論畠lさせ4°Cで保存した。
(f+ 組換え生成物のスクリーニング上記に得られ
た転換細胞は、コロニーハイブリダイゼーシE 7’(
Manahan and MeselOn、 Gene
乱63−67 (1980) )でスクリーニングした
。
た転換細胞は、コロニーハイブリダイゼーシE 7’(
Manahan and MeselOn、 Gene
乱63−67 (1980) )でスクリーニングした
。
C3およびA□2組侠えグラスミドで転換された細胞は
、■P3およびvp□の両方の大部分をおおう、Alo
61に由来するDNA配列を官有する、pFA□。t7
6のPvullフラダメント(Boothroyd等、
Gene17、153−161(1982) )でグロ
ーブした。0□転換細胞は、プラスミドpF01 t
2:51(BOOth r o7d等、Nature、
290.6口0−802 (1981) )に由来し
VPiの61禾躊を含壱する、pFO1t351の小型
九a’/HinfIフラグメントでグローブした。
、■P3およびvp□の両方の大部分をおおう、Alo
61に由来するDNA配列を官有する、pFA□。t7
6のPvullフラダメント(Boothroyd等、
Gene17、153−161(1982) )でグロ
ーブした。0□転換細胞は、プラスミドpF01 t
2:51(BOOth r o7d等、Nature、
290.6口0−802 (1981) )に由来し
VPiの61禾躊を含壱する、pFO1t351の小型
九a’/HinfIフラグメントでグローブした。
それらのグラスミドDNAの制限マツピングにより、f
易14コロニーをさらにスクリーニングした。
易14コロニーをさらにスクリーニングした。
これらのマツプは、A1o61のcDNA配列(Boo
th−rOyd等Nature、 2.90.800−
802 (1981) )およびA12119のcDN
A (Kleid等、5cience、 214゜11
25−1129 (1981))およびOユK(Kur
z等、Nucleic Ac1d Re5earch、
9.1919 1931(1981))のCDNAと
の類推から、FMDVケツムの蛋白寅コード年位の直線
状マツプと並べた。場合により、あいまいさを解決する
のに、過当な制限フラグメントの5outhern b
lottingか必要であった。
th−rOyd等Nature、 2.90.800−
802 (1981) )およびA12119のcDN
A (Kleid等、5cience、 214゜11
25−1129 (1981))およびOユK(Kur
z等、Nucleic Ac1d Re5earch、
9.1919 1931(1981))のCDNAと
の類推から、FMDVケツムの蛋白寅コード年位の直線
状マツプと並べた。場合により、あいまいさを解決する
のに、過当な制限フラグメントの5outhern b
lottingか必要であった。
配夕1」の決定および配列データの分析DNAの配列は
、Boothroyd 等(Gene、 17.153
−161 (1982) )記載のように、1φaxa
mおよびt)ilbertの方法(Methodsin
Knzymology Vol 65゜499−56
0. ()rossman、 L、およびMO工dav
e、 K。
、Boothroyd 等(Gene、 17.153
−161 (1982) )記載のように、1φaxa
mおよびt)ilbertの方法(Methodsin
Knzymology Vol 65゜499−56
0. ()rossman、 L、およびMO工dav
e、 K。
(ljds)、 Academic Press、 N
ew York 、)で決定した。
ew York 、)で決定した。
制限サイトのDNA配列を調べそして相当する蚤白負の
配列を知るためにApplelコンピューターを用いた
。LarsonおよびMessingのプログラム(N
ucleic Ac1ds Re5earch、 10
.39−49(1982))を変型して用いた。それは
、KyteおよびDOOli ttlsにおけるプログ
ラム(:rlmol、 Biol、、 157.1Q5
−132 (1982) )を用いて親水性グロットを
作るのにも用いた。5tadenのフ0ロダラム(Nu
CleiCAcids hesearch 4.403
7 4051 (1977)およびNucleia A
Cids hesearch、 8.3673 369
4(1980))を用い、ジニュクレオチドの頻度およ
びコドンの1史用を街1]定するのにPDP lミニコ
ンピユータ−を用いた。
配列を知るためにApplelコンピューターを用いた
。LarsonおよびMessingのプログラム(N
ucleic Ac1ds Re5earch、 10
.39−49(1982))を変型して用いた。それは
、KyteおよびDOOli ttlsにおけるプログ
ラム(:rlmol、 Biol、、 157.1Q5
−132 (1982) )を用いて親水性グロットを
作るのにも用いた。5tadenのフ0ロダラム(Nu
CleiCAcids hesearch 4.403
7 4051 (1977)およびNucleia A
Cids hesearch、 8.3673 369
4(1980))を用い、ジニュクレオチドの頻度およ
びコドンの1史用を街1]定するのにPDP lミニコ
ンピユータ−を用いた。
6髄の血清型A24 C3およびO,、BFSについて
の■Plコード配列をこのようにして決定し、示唆され
たアミノ酸配列を、既知の6個のVP1配列A1゜(B
oothroyd寺Gene 17.155 161
(1982) )、A12(hleia 等、5cie
nce 214.1125−1129(1981) )
およびCIIK (Kurz ”J=、Nucleia
Ac1ds1−tesearch、 9.1919−
1961 (1981) )と比較した。
の■Plコード配列をこのようにして決定し、示唆され
たアミノ酸配列を、既知の6個のVP1配列A1゜(B
oothroyd寺Gene 17.155 161
(1982) )、A12(hleia 等、5cie
nce 214.1125−1129(1981) )
およびCIIK (Kurz ”J=、Nucleia
Ac1ds1−tesearch、 9.1919−
1961 (1981) )と比較した。
結果をJ、2図および第6図に示す。
アミノ酸配タリの比較
6つの血清型A24、C3およびO□BFSよりのVP
lについてのアミノ取配列を、第2図に示したように、
上記決足ニュクレオチド配列より示した。配列は3つの
他の系統についてのVPlの既知のアミノ酸配列と比較
した。
lについてのアミノ取配列を、第2図に示したように、
上記決足ニュクレオチド配列より示した。配列は3つの
他の系統についてのVPlの既知のアミノ酸配列と比較
した。
配列が最大の相同性を有するように並べるには、ギヤラ
グ(点線で示す)の尋人か必女であったか、それらは最
小に留めた。(b) 2M々の血@共’< (AIOz
c3、olBFS)のあいた、(a)同じ血清型の種々
のサブタイプ(Aよ。、A□2、A24)および(b)
同じサブタイプの種々の分離物(01BFS 、 O
□K)のあいたの比較かできるように並べた。介在する
配列もあるか、VP□のみに番号を付した。種々の配列
のあいだの一員・註ヲ保つために、番号を付するシステ
ムにはキ゛ヤツゾを入れた。結果を第3図に示す。
グ(点線で示す)の尋人か必女であったか、それらは最
小に留めた。(b) 2M々の血@共’< (AIOz
c3、olBFS)のあいた、(a)同じ血清型の種々
のサブタイプ(Aよ。、A□2、A24)および(b)
同じサブタイプの種々の分離物(01BFS 、 O
□K)のあいたの比較かできるように並べた。介在する
配列もあるか、VP□のみに番号を付した。種々の配列
のあいだの一員・註ヲ保つために、番号を付するシステ
ムにはキ゛ヤツゾを入れた。結果を第3図に示す。
免役原注のアミノ酸配列の決定
FMDVの1里々の系統よりのvp工閂己タ1jを上ヒ
較してみると、いくつかの変動する領域か保存された領
域のあいたにあった。免役原注の堰板は、強いとうた圧
のも とで、宿主の免役系を逃がれるために変化したよ
うである。それで、変動汀碩域のいくつかが免投涼性で
あるようである。免役原性の領域かウィルスの表面に存
在することはほとんどた1−かなので、それらはそれら
自体親水性であるか東たは親水性/pM域に近く存在し
ているようである。第41′y、1は、A、。、C3,
0□ヨリノvP1 ノK hi性のフ゛ロット土に、3
つの血清型のそれぞれよりの1示された工Jl水快VP
1の調べられたグロットを里ねてi if、このことが
ら、オーバララフoした親水1.+:領領域イJし、そ
れゆえに免役原性であるらしい変動1午の領域を示した
。
較してみると、いくつかの変動する領域か保存された領
域のあいたにあった。免役原注の堰板は、強いとうた圧
のも とで、宿主の免役系を逃がれるために変化したよ
うである。それで、変動汀碩域のいくつかが免投涼性で
あるようである。免役原性の領域かウィルスの表面に存
在することはほとんどた1−かなので、それらはそれら
自体親水性であるか東たは親水性/pM域に近く存在し
ているようである。第41′y、1は、A、。、C3,
0□ヨリノvP1 ノK hi性のフ゛ロット土に、3
つの血清型のそれぞれよりの1示された工Jl水快VP
1の調べられたグロットを里ねてi if、このことが
ら、オーバララフoした親水1.+:領領域イJし、そ
れゆえに免役原性であるらしい変動1午の領域を示した
。
例 2
ペプチドフラグメント
44 & US(IRR()DMGsLAAf(VVK
Q:LPを有するA240ruzeiro VP□の
領域143−162に対応するべブチドフラクメントを
、目止り合成装置屯を月づい、クロルメチルポリスチレ
ン上で、同相法で合成した。
Q:LPを有するA240ruzeiro VP□の
領域143−162に対応するべブチドフラクメントを
、目止り合成装置屯を月づい、クロルメチルポリスチレ
ン上で、同相法で合成した。
tBOc−pro−Resinはシグマ社( Pool
e, England)より[1人した。すべてのカッ
プリング反応で6倍輩のtbocアミノ酸およびシシク
ロヘキシルクルボシイミドを用いた、ニンヒドリン(1
1)で試験した。反応か99%完結しなかった時に、カ
ップリング操作を反復した。
e, England)より[1人した。すべてのカッ
プリング反応で6倍輩のtbocアミノ酸およびシシク
ロヘキシルクルボシイミドを用いた、ニンヒドリン(1
1)で試験した。反応か99%完結しなかった時に、カ
ップリング操作を反復した。
ベヒチドは担体よりはつしそして5 m13のアニソー
ルをスカベンジャーに加えた2 0 inl;のフッ化
7に一g hよび2.5廐のエチルメチルスルファイド
(これはメチオニンを保護する)を除保^した(4°0
160分)。フッ化7に累は室索派で除いた。ペン0テ
゛ドおよび樹脂は減圧で乾床し、痕跡紺の)iFをすべ
てを味いた。ついでエーテルで洗いアニソールおよびエ
チルメチルスルファイドを除いた。樹脂は風曳しエーテ
ルを除いた。
ルをスカベンジャーに加えた2 0 inl;のフッ化
7に一g hよび2.5廐のエチルメチルスルファイド
(これはメチオニンを保護する)を除保^した(4°0
160分)。フッ化7に累は室索派で除いた。ペン0テ
゛ドおよび樹脂は減圧で乾床し、痕跡紺の)iFをすべ
てを味いた。ついでエーテルで洗いアニソールおよびエ
チルメチルスルファイドを除いた。樹脂は風曳しエーテ
ルを除いた。
ペプチドは10%酢酸で抽出した。純度は、アばノ畝分
タ丁およびHPLO ( 0.1%トリフルオル液オよ
ひ0から60%のアセトニトリルダラシエントを用いる
Zorb.qx C8(DuPont )の逆第1:1
カラム)で分析した。ペプチドはSephadex G
1Q上で脱塙し、蒸発乾こし、必要生成物とした。
タ丁およびHPLO ( 0.1%トリフルオル液オよ
ひ0から60%のアセトニトリルダラシエントを用いる
Zorb.qx C8(DuPont )の逆第1:1
カラム)で分析した。ペプチドはSephadex G
1Q上で脱塙し、蒸発乾こし、必要生成物とした。
(bl Q□J:lF8 1860 vPlの143−
162領域に対応する、配列NLRGDLQVLAQK
VARTLP配列を肩するぺyチドフラグメントを同様
に製造した。
162領域に対応する、配列NLRGDLQVLAQK
VARTLP配列を肩するぺyチドフラグメントを同様
に製造した。
第1図はフィジカルマッグおよび用いた配夕U決定の手
順を示す。 第2図は、FMDVの31向の血清型のVP□領域につ
いての、ニュクレオチドおよびT’i4 ”Mされるア
ミン取を示す。 第6図は、第2図のアミノ酸自已夕1j馨、vPlにつ
いての3つの報告されている配列とあわせて示す。 脂4図は、 − ゛二゛ー
■Plの配列の61向の変わり方を示す。 代理人 浅 村 晧 図6+lのif+冴(内容に変更なし)戊 し5 實湧 北 實η 詳ヨ 已5 吊
し手 8♀ 陀 ご定 =己oく くく
Φく Q工 ΦΦ o((JJ ()−Q[L
(Σ くく ヒ」助禮5H市園1閤酩固匪珀尼 Cl2R,1/19) 優先権主張 @1982年12月3日の)イギリス(G
B)■8234638 (l 明 者 アンドリュー・ジョセフ・マコフ イギリス国エスダブリュ16ノー ベリイ・メルローズ・アベニュ 62 手続補正書(方式) 昭和17年り月72日 特許庁長官殿 ]、事件の表示 昭和2年特許願第1υ277号 3、補正をする者 事件との関係 特r[出願人 4、代理人 5、補正命令の日付
順を示す。 第2図は、FMDVの31向の血清型のVP□領域につ
いての、ニュクレオチドおよびT’i4 ”Mされるア
ミン取を示す。 第6図は、第2図のアミノ酸自已夕1j馨、vPlにつ
いての3つの報告されている配列とあわせて示す。 脂4図は、 − ゛二゛ー
■Plの配列の61向の変わり方を示す。 代理人 浅 村 晧 図6+lのif+冴(内容に変更なし)戊 し5 實湧 北 實η 詳ヨ 已5 吊
し手 8♀ 陀 ご定 =己oく くく
Φく Q工 ΦΦ o((JJ ()−Q[L
(Σ くく ヒ」助禮5H市園1閤酩固匪珀尼 Cl2R,1/19) 優先権主張 @1982年12月3日の)イギリス(G
B)■8234638 (l 明 者 アンドリュー・ジョセフ・マコフ イギリス国エスダブリュ16ノー ベリイ・メルローズ・アベニュ 62 手続補正書(方式) 昭和17年り月72日 特許庁長官殿 ]、事件の表示 昭和2年特許願第1υ277号 3、補正をする者 事件との関係 特r[出願人 4、代理人 5、補正命令の日付
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 (1)血清型A2.0ruzeiro、 03工ncL
aialまたばo。 BFSよりユ醪択したVP1蛋白質の抗原サイト、それ
の7ラグメントおよびg4体のアミノ酸配列を含泡する
ことを特徴とする、ペプチド。 (2) 42−’61 ; 79−85 ; 95−1
02 ;129−160(またば162) : 170
−176;193−204(または206)より選択し
た、vPlのすべてまたは部分に対応することを特徴上
する、上記(1)項記載のペプチド。 (3J 79−85;129−160(または162
)および193−204(または209)より1と択し
たVP□の部分に対応することを特徴とする、上記(1
)または(2)現記ILのペプチド。 (4) 42−51 ;56−61 ; 1
29−147 715’l−160および143−16
2より選択したvPlの部分にxvj;exすることを
%徴とする、上記(1)から(3)項までのいずれかに
記載のペプチド。 (5)上記(1)から(41項までに記載した、(a)
VVRHEGN (bl AVTHT()K (c) AVKHERD (a) VYNGTSKYAVGGSGRR(e)
、TYTGTTAYTASSARR(f) VYl
iGEORYSRNAVPNLR(g) G8LAA
:RVVKQ (hJ AHLAAARARFi (リ vLpvQp:GD、ua l) 工Q、5ILSPTHV工 (k) V)iVsGNQHT]L (1) V)iKDs工 (ml VP8HTL (nJ ESALLNTS (q) VKAET工T (r) GSGRRGDMGSLAARVVKQLP
(s) IJLRGDLQVLAQ、KVARTLP
(t) AEIARRGDLAHLAAAHAI((
u) ARRGDLAHLAAA)iARHLP(
v) VPNLRGDLQVLaQKVARTLP
(wl VLPVQPTGDRHKQ、PL工より
選択したペプチド。 (6J GSGRR()DMG S LAAl(VV
KQLP自己列を有するペプチド。 (t) NLRGDLQVLAQKVARTLP配列
を有するペプチド。 +8Jm3図に示ず、FMDV血清MA240ruze
iro。 C3工ndaial または○、BFSのVP1構造を
有する蛋白質。 (9) 担体に結合した、上記(1)から(8)項ま
でのいずれかに定義のペプチドを官有する免疫原。 uOJ 上り附1)から(81Mまでのいずれかに定
義のベン0チドまたは上記(9)項に定義の免疫原な、
それらに対する薬剤とじで許容されうる担体とあわせて
官有するワクチン。 (1υ A、11印々のアミノ酸、小型ペプチド結合ま
たはそれらの組合わせよりの既知技術による合成的調製
; B、より大きなボリペフ0チドまたは蛋白質の切断、そ
して場合によりつつく変型;または、C,(a) (
1)上記(1)から(8)項までのいずれかに定義の蛋
白質またはペプチドをコードする二1(鎖DNA配列才
たはそれらをコードする配列を言上する二重S DNA
配列と、(2)クロン化ビヒクルDNA配列と、(3+
DNA発現のためのイニシエーターおよびターミネー
タ−を含Mする組換えDNAで宿主細胞を形質転換し く’b) 該宿主細胞をFMDペフ゛チド発現に通農
な条件で培養し; (C) 細紀培養物を採取し;そして(d) yペ
プチドを分服することの、これらA、B、Oを包1゛す
る、上記(1)から(8)項までのいずれかに定義のペ
ラ0ナトまたは蛋白質の製造方法。 贈 上記(1)から(8)項までのいずれかに定義の蛋
白質またはペプチドに対応するニュクレオチド配夕1]
を含有するD’NA分子または上記(tJから(8)項
までのいずれかに定義のペプチドまたは蛋白質を含有す
るポリペプチドをコードするDNA分子。 旧 本明細書に定義のような、イニシエーター配列を翁
するオペロン、オペロンのイニシエーター配列とターミ
ネータ−配列とのあいだに存在する、上Nc;(1)か
ら(8)狽テでのいずれかに定俄の蛋白質またはペプチ
ドを実質的にコー−するニュクレオテド配列またはその
ような配列を含冶するニュクレオチド配列を包含した組
換えDNA分子。 (貝イニシエーター配列およびターミネータ−配夕1]
を南するオペロン、および、上記(1)から(8)項ま
でのいずれかにホ1先の蛋白質またはペプチドを実質的
にコードする、オペロンのイニシエーター配列とターミ
ネータ−配列とのあいだに存在する、ニュクレオチド配
夕1」を包含する、それらの蛋白質またはペプチドのず
へてまたは部分を発現しうる、組換えDNAクロン化ビ
ヒクル。 (15)上TJ(”= (12Jから圓項までのいずれ
かに泥波のA■侯えDNAクロン化ビヒクルおよび(−
1:たば)m換えDNA分子を金力するイd主細胞。 (I6)本明細薔に定義するような組換えDNAクロン
化ビヒクルで形質転換された宿主細胞により生性される
ところの、本明細書に定畿のようなりNA分子の発現で
製造された、上記(1)から(8)項までのいずれかに
定義のような蛋白質またはペプチドを含有する、呻乳動
物におけるFMDVに対する抗体産生を刺倣する抗原。 (17) (a) FMDA −1鎖RNAを分離し
;(b) FMDV I(NA I) −M、 HK
相補的に’) DNA ノ第一の一1順を調製し;そし
て (C)第一の一重鎖に相補的でそれに水素結合する第二
の一重鎖を調製して二z 鎖DNAとすることを包含す
る、上記(])から(8)項までのいずれかに定義の、
ペプチドを実質的にコードするDNA分子の表か方法。 、181 治療に用いるための、上日己(1)から(
8)項までのいずれかに定義のペプチド。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB8227860 | 1982-09-30 | ||
GB8227860 | 1982-09-30 | ||
GB8234638 | 1982-12-03 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS59167549A true JPS59167549A (ja) | 1984-09-21 |
Family
ID=10533264
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP18296783A Pending JPS59167549A (ja) | 1982-09-30 | 1983-09-30 | 新規抗原およびそれらを含有するワクチン |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS59167549A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07143888A (ja) * | 1985-04-04 | 1995-06-06 | Univ Georgetown | 型特異的乳頭腫ウイルスdna配列およびペプチド |
-
1983
- 1983-09-30 JP JP18296783A patent/JPS59167549A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07143888A (ja) * | 1985-04-04 | 1995-06-06 | Univ Georgetown | 型特異的乳頭腫ウイルスdna配列およびペプチド |
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