JPS59159798A - Measurement of humoral components - Google Patents

Abstract

PURPOSE:A divalent copper ion compound and a surface active agent and/or a cyanide are made to act on to reduce or avoid the interference of bilirubin to the reactions for measuring humoral components with an oxidase. CONSTITUTION:When a variety of humoral components such as serum, urea or the like, are measured with oxidases, the samples are combined with a divalent copper ion compound such as copper sulfate or cupric chloride, a surface active agent such as sodium dodecylsulfate or taurocholic acid and/or a cyanide such as potassium or sodium cyanide beforehand, then the measurement is effected according to customary manner.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、公知の方法により酸化酵素を用いて生体体液
成分を測定するに際し、あらかじめ試料に２価の銅イオ
ン化合物と界面活性剤および／またはシアン化物を反応
させたのちの試料を検液とすることを特徴とする生体体
液成分の測定法に関する。さらに詳しくは、２価の銅イ
オン化合物と界面活性剤および／またはシアン化物を試
料中に含まれるビリルビンに反応せしめることによりこ
れを減少又は消失せしめ、酸化酵素を用いた生体体液成
分測定反応に対するビリルビンの干渉を回避又は軽減す
ることを特徴とする生体体液成分の測定法である。本発
明法において生体体液とは血清、尿などであり、また測
定される成分はグルコース、コレステロール、尿酸、中
性脂肪、遊離脂肪酸、リン脂質などである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides a method in which a divalent copper ion compound is reacted with a surfactant and/or cyanide in advance when measuring biological body fluid components using an oxidase by a known method. This invention relates to a method for measuring biological fluid components, which is characterized by using a later sample as a test solution. More specifically, bilirubin contained in a sample is reduced or eliminated by reacting a divalent copper ion compound, a surfactant, and/or cyanide with bilirubin contained in a sample, and bilirubin is used in a reaction to measure biological fluid components using an oxidase. This is a method for measuring biological fluid components, which is characterized by avoiding or reducing the interference of In the method of the present invention, biological body fluids include serum, urine, etc., and the components measured include glucose, cholesterol, uric acid, neutral fats, free fatty acids, and phospholipids.

近年、臨床化学分析における酵素的分析法の進歩はめざ
ましく、前述の各種生体体液成分の測定のためにグルコ
ースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ウリ
カーゼ、アシルコニ・ンザイムＡオキシダーゼ、コリン
オキシダーゼ、グリセロール−３−リン酸オキシダーゼ
、ザルコシンオキシダーゼなどの酸化酵素が広範に用い
られている。これら酸化酵素を用いる測定法では、酸化
酵素と生体体液成分との反応で生成した過酸化水素をパ
ーオキシダーゼ−発色性水素供与体を用いる系で比色定
量することによ、す、生体体液成分の含量が求められる
。−例を示すと、β−Ｄ−グルコースはグルコースオキ
シダーゼの作用によりＤ−グルコノ　−δ−ラクトンと
過酸化水素に変化し、さらに過酸化水素はパーオキシダ
ーゼの作用によりフェノールと４−アミノアンチピリン
を水素供与体としてこれを酸化縮合し、赤色のキノン色
素を生ずる。この色素を光度針で測定することによりグ
ルコースの濃度が求められる。In recent years, there has been remarkable progress in enzymatic analysis methods in clinical chemistry analysis, and glucose oxidase, cholesterol oxidase, uricase, acylconi-enzyme A oxidase, choline oxidase, and glycerol-3-phosphate oxidase are being used to measure the various biological fluid components mentioned above. , sarcosine oxidase, and other oxidizing enzymes are widely used. In these measurement methods using oxidases, hydrogen peroxide produced by the reaction between oxidases and biological fluid components is colorimetrically determined using a peroxidase-chromogenic hydrogen donor system. The content of - To give an example, β-D-glucose is converted into D-glucono-δ-lactone and hydrogen peroxide by the action of glucose oxidase, and hydrogen peroxide is further converted into hydrogen by the action of peroxidase to phenol and 4-aminoantipyrine. Oxidative condensation of this as a donor yields a red quinone dye. By measuring this dye with a photometric needle, the concentration of glucose can be determined.

上記パーオキシダーゼ−発色性水素供与体系を用いる方
法では、試料中に存在する種々の還元物質、投与薬剤、
生体色素などにより干渉を受けることが知られているが
、それらのうちビリルビンによる干渉機序については次
のようなことが言われている（臨床化学　第８巻、６３
−７２ページ、１９７９年）。In the method using the peroxidase-chromogenic hydrogen donor system, various reducing substances present in the sample, administered drugs,
It is known that biological pigments cause interference, and the following is said about the interference mechanism caused by bilirubin (Clinical Chemistry Vol. 8, 63).
-72 pages, 1979).

（１）ビリルビンの特異吸収（４６Ｏｎｍ付近）による
直接的影響 （２）ビリルビンがパーオキシダーゼの水素供与体とな
る （３）生成された呈色色素に直接的に作用して分解する 以上のうち（２）による影響が最も大きいとされている
。(1) Direct effect due to bilirubin's specific absorption (near 46 Onm) (2) Bilirubin acts as a hydrogen donor for peroxidase (3) Decomposes by directly acting on the generated color pigment ( 2) is said to have the greatest impact.

ビリルビンの血清中での濃度は、正常人では１ｍｇ　／
　ｄｌ以下であるが、病的には２０■／ｄ１に達するこ
ともあり、臨床検査上その影響は重大な問題である。The concentration of bilirubin in serum is 1 mg /
dl or less, but pathologically it can reach 20 µ/d1, and its influence is a serious problem in clinical tests.

これらの問題に関する公知技術としては、例えばフェロ
シアン化物、アスコルビン酸、’ＥＤＴＡ−鉄錯体又は
ビリルビン特異性菌性酵素組成物を反応系に添加する方
法などが知られている（特公昭５５−２５８４０号公報
、特開昭５５−１３８６５６号公報、特開昭５５−２９
７１８号公報、特開昭５７−７１３９８号公報、特開昭
５４−１５１１９３号公報およびクリニカルケミストリ
ー第２６巻、２２７−２３１ページ、１９８１年）。し
かし、これら従来の方法はいずれも欠点があり、十分満
足できる方法とはいえない。Known techniques related to these problems include, for example, a method of adding ferrocyanide, ascorbic acid, an EDTA-iron complex, or a bilirubin-specific fungal enzyme composition to the reaction system (Japanese Patent Publication No. 55-25840 No. 55-138656, Japanese Patent Application Laid-open No. 55-29
718, JP-A-57-71398, JP-A-54-151193, and Clinical Chemistry Vol. 26, pages 227-231, 1981). However, all of these conventional methods have drawbacks and cannot be said to be fully satisfactory methods.

本発明者らは、上述のような酸化酵素を用いた生体体液
成分の測定において、あらかじめ２価の銅イオン化合物
と界面活性剤および／またはシアン化物を試料に作用さ
せることにより、試料中に含まれるビリルビンがほぼ無
色の生成物に変化するとともにパーオキシダーゼの水素
供与体となることもないため、ビリルビンによる干渉が
回避できることを知り本発明を完成した。In the measurement of biological body fluid components using an oxidizing enzyme as described above, the present inventors have discovered that the components of biological fluids can be contained in a sample by allowing a divalent copper ion compound, a surfactant, and/or cyanide to act on the sample in advance. The present invention was completed based on the knowledge that interference by bilirubin can be avoided because the bilirubin produced by the bilirubin changes into an almost colorless product and does not become a hydrogen donor for peroxidase.

銅イオン化合物のばかビリルビンに作用する化合物とし
てコバルト、フェリシアンおよび過沃素酸の各イオン化
合物にその能力の有ることを知ったが、これらイオン化
合物は前述酸化酵素を用いる反応系へも影響を及ぼすた
め本発明の目的には使用できない。また、鉄、カルシウ
ム、スズ、マグネシウ°ム、マンガン、タングステン酸
、モリブデン酸、ストロンチウム、亜鉛、ジルコニウム
、リチウム、ニッケル、ビスマスおよびフェロシアンの
各イオン化合物についても検討したが、ビリルビンへの
作用は認められなかった。I learned that the ionic compounds of cobalt, ferricyanide, and periodic acid have the ability to act on bilirubin, but these ionic compounds also affect the reaction system using the oxidase mentioned above. Therefore, it cannot be used for the purpose of the present invention. We also investigated ionic compounds of iron, calcium, tin, magnesium, manganese, tungstic acid, molybdate, strontium, zinc, zirconium, lithium, nickel, bismuth, and ferrocyan, but no effects on bilirubin were found. I couldn't.

本発明法において用いる２価の銅イオン化合物（以下Ｃ
ｕｚ＋ともいう）は硫酸銅、塩化第二銅、酢酸第二銅、
リン酸第二銅などの塩の形で用いることができる。１価
の銅イオン化合物はビリルビンに作用せず、まＴｈＣｕ
２＋単独ではビリルビンに対する反応は極めて弱い。し
かしＣｕ２＋に加え界面活性剤またはシアン化物を併用
することによりビリルビンとの反応がすみやかに進むよ
うになる。界面活性剤およびシアン化物はＣｕ２＋のビ
リルビンに対する反応を促進する作用を持つもので、好
ましい例として、界面活性剤としてはドデシル硫酸ナト
リウム、コール酸ナトリウム、タウロコール酸、Ｐ−）
ルエンスルホン酸、トリトンＸ−１００など、またシア
ン化物としてはシアン化カリウム、シアン化ナトリウム
などが例示される。これらは一種だけ使用してもよいが
、二種以上あるいは界面活性剤とシアン化物の両者を同
時に使用することもできる。特に界面活性剤とシアン化
物を同時に使用することは、極めて反応が速やかに進む
ため好ましい。Divalent copper ion compound (hereinafter referred to as C) used in the method of the present invention
(also called uz+) is copper sulfate, cupric chloride, cupric acetate,
It can be used in the form of a salt such as cupric phosphate. Monovalent copper ion compounds do not act on bilirubin, and ThCu
2+ alone has an extremely weak response to bilirubin. However, by using a surfactant or cyanide in addition to Cu2+, the reaction with bilirubin can proceed quickly. Surfactants and cyanides have the effect of promoting the reaction of Cu2+ to bilirubin. Preferred examples of surfactants include sodium dodecyl sulfate, sodium cholate, taurocholic acid, and P-).
Examples of the cyanide include luenesulfonic acid and Triton X-100, and potassium cyanide and sodium cyanide. One type of these may be used, but two or more types or both a surfactant and a cyanide may be used simultaneously. In particular, it is preferable to use a surfactant and cyanide at the same time because the reaction proceeds extremely quickly.

本発明法を実施するにはＣｕ２＋と界面活性剤および／
またはシアン化物をビリルビンを含む試料に添加し常温
ないし４０℃程度の恒温槽中で反応させることにより、
ビリルビンは減少、消失しほぼ無色の生成物となる。Ｃ
ｕ”十の添加濃度は反応液中で約０．０１〜１０　ｍ　
ＭＡ＜好ましい。界面活性剤、シアン化合物の添加量は
特に限定されず、それぞれ反応液中で約１％以下、約Ｉ
　９ｍＭ以下の適当量を加えればよい。To carry out the method of the present invention, Cu2+, surfactant and/or
Alternatively, by adding cyanide to a sample containing bilirubin and reacting in a constant temperature bath at room temperature to about 40°C,
Bilirubin decreases and disappears, leaving an almost colorless product. C
The concentration of u”10 added is approximately 0.01 to 10 m in the reaction solution.
MA<preferred. The amount of surfactant and cyanide compound added is not particularly limited, and each is about 1% or less in the reaction solution, and about I
An appropriate amount of 9mM or less may be added.

以上の操作によりビリルビンが減少または消失した生体
体液試料は以降、前述の酸化酵素を用いる方法によって
測定される。ただしＣｕ２＋が発色試薬に作用する場合
は、エチレンジアミン四酢酸（以下ｒＥＤＴＡＪという
）などのキレート剤を添加して錯塩を形成させればその
影響を防止できる。The biological fluid sample in which bilirubin has been reduced or disappeared through the above operations is then measured by the method using the oxidase described above. However, if Cu2+ acts on the coloring reagent, this effect can be prevented by adding a chelating agent such as ethylenediaminetetraacetic acid (hereinafter referred to as rEDTAJ) to form a complex salt.

以上本発明法により、あらかじめ試料にＣｕ２＋と界面
活性剤および／またはシアン化物を作用せしめビリルビ
ンを減少または消失させた後の試料を検液とし、前述の
酸化酵素を用いた生体体液成分の測定をしたところ、ビ
リルビンの影響がほとんど無視できることがわかった。As described above, according to the method of the present invention, the sample is treated with Cu2+, a surfactant, and/or cyanide to reduce or eliminate bilirubin, and then the sample is used as a test solution, and the biological fluid components are measured using the aforementioned oxidase. They found that the effect of bilirubin was almost negligible.

実施例１　グルコースの測定 硫酸銅０．５ｍＭ１よびドデシル硫酸ナトリウム０．１
５％を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ）ｌ　７．５＞　
２．０−を試験管に取り、そこへ試料として１０，２０
．３０および４０ｍｇ１ｄｉのビリルビンを含むグルコ
ース水溶液（２００ｍｇ／　ｄｉ　）各々２０越を加え
３７°Ｃ１１０分反応した。次いでグルコースオキシダ
ーゼ（大野製薬社製）５０　ｕ、／ｍ、パーオキシダー
ゼ（ベーリンガー社製）　１．Ｏｕ／＋＋＋ｆ、　４−
アミノアンチピリン１．２酵およびフェノール４５ｍＭ
並びにＥ　Ｄ　Ｔ　Ａ　２７ｍＭを含む０．１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７，５）　１．０　ｍｌ！を加え３７°Ｃ
ｌ２Ｏ分反応させたのち、反応液の５０５ｎｍにおける
吸光度を測定した。一方、比較として硫酸銅、ドデシル
硫酸ナトリウムおよびＥＤＴＡを除いて同様の操作を行
った。Example 1 Measurement of glucose Copper sulfate 0.5mM 1 and sodium dodecyl sulfate 0.1
0.1M phosphate buffer (p)l containing 5% 7.5>
Take 2.0- into a test tube and add 10,20- as a sample there.
．． More than 20 aqueous glucose solutions (200 mg/di) containing 30 and 40 mg/di of bilirubin were added and reacted at 37°C for 110 minutes. Next, glucose oxidase (manufactured by Ohno Pharmaceutical) 50 u/m, peroxidase (manufactured by Boehringer) 1. Ou/+++f, 4-
Aminoantipyrine 1.2 ferment and phenol 45mM
and 1.0 ml of 0.1M phosphate buffer (pH 7.5) containing 27mM EDT A! and 37°C
After reacting for 120 minutes, the absorbance of the reaction solution at 505 nm was measured. On the other hand, for comparison, the same operation was performed except that copper sulfate, sodium dodecyl sulfate, and EDTA were used.

結果を第１図に示す。同図において（−〇−）は本実施
例の結果を、（→−）は比較例をそれぞれ表す。本発明
法により、試料に共存するビリルビンの影響が無視でき
ることがわかった。The results are shown in Figure 1. In the figure, (-〇-) represents the results of this example, and (→-) represents the comparative example. It was found that by the method of the present invention, the influence of bilirubin coexisting in the sample can be ignored.

実施例２　血清中のグルコースの測定 Ｃｕｚ＋として硫酸銅、塩化第二銅、酢酸第二銅または
リン酸第二銅の各０．５ｍＭおよびドデシル硫酸ナトリ
ウム　０．１５％を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｌ＋
　７．５）並びに試料として血清を用い実施例１と同様
に操作したところ、グルコース濃度は第１表に示すとお
りであった。Example 2 Measurement of glucose in serum Cuz+: 0.1M phosphate buffer containing 0.5mM each of copper sulfate, cupric chloride, cupric acetate, or cupric phosphate and 0.15% sodium dodecyl sulfate. liquid (pl+
7.5) and using serum as a sample and operated in the same manner as in Example 1, the glucose concentration was as shown in Table 1.

第１表 一方、比較のためＣｕ２＋、ドデシル硫酸ナトリウムお
よびＥＤＴＡを除いて同様に操作したところ、９３．６
ｍｇ／　ｄＪであった。なお使用した試料中の総ビリル
ビンの濃度は１２．５ｍ’ｇ／ｄ１であった。Table 1 On the other hand, for comparison, when the same operation was performed except for Cu2+, sodium dodecyl sulfate and EDTA, the result was 93.6
mg/dJ. The concentration of total bilirubin in the sample used was 12.5 m'g/d1.

実施例３　血清中グルコースの測定 Ｃｕ２＋として硫酸銅０．５ｍＭ、界面活性剤としてコ
ール酸ナトリウム、タウロコール酸、Ｐ−）ルエンスル
ホン酸またはトリトンＸ−１００の各０．５％を含む０
．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）を用い実施例１と同
様に操作し、血清試料中のグルコースを求めたところ、
第２表に示すとおりであった。Example 3 Measurement of serum glucose 0.5mM of copper sulfate as Cu2+ and 0.5% each of sodium cholate, taurocholic acid, P-)luenesulfonic acid or Triton X-100 as surfactants.
．． Glucose in the serum sample was determined using the same procedure as in Example 1 using 1M phosphate buffer (pH 7,5).
It was as shown in Table 2.

第２表 実施例４　血清中グルコースの測定 Ｃｕ２＋として硫酸銅０．５ｍＭ、シアン化物としてシ
アン化カリウムまたはシアン化ナトリウム各０．１ｍＭ
を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）を用い実施
例１と同様に操作し、血清試料中のグルコースを求めた
ところ、シアン化カリウムの場合９７．７ｍｇ／ｄ１、
シアン化ナトリウムの場合９８．０ｍｇ／ｄ１．であっ
た。Table 2 Example 4 Measurement of serum glucose Cu2+: copper sulfate 0.5mM, cyanide: potassium cyanide or sodium cyanide each 0.1mM
In the same manner as in Example 1 using a 0.1M phosphate buffer (pH 7.5) containing
In the case of sodium cyanide, it is 98.0 mg/d1. Met.

実施例５　血清中グルコースの測定 Ｃｕ２＋とじて硫酸銅ＱＪｍＭ、界面活性剤としてドデ
シル硫酸ナトリウム０．１％およびシアン化物としてシ
アン化カリウム　０．１ｍＭを含む０．１Ｍリン酸緩衝
液（’ｐＨ７，５）を用い実施例１と同様に操作して血
清試料中のグルコースを求めたところ、９７．９□ｇ／
ｄｌであった。Example 5 Measurement of serum glucose 0.1M phosphate buffer ('pH 7,5) containing copper sulfate QJmM as Cu2+, 0.1% sodium dodecyl sulfate as surfactant, and 0.1mM potassium cyanide as cyanide. When the glucose in the serum sample was determined in the same manner as in Example 1, it was found to be 97.9□g/
It was dl.

実施例６　血清中の総コレステロールの測定硫酸銅０．
５１およびシアン化カリウム０．５ｍＭを含む０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）　２．Ｏｒｎｆ！を試験管
に取り、そこへ血清試料２０４を加え３７℃、１０分反
応した。次いでコレステロールエステラーゼ（天野製薬
社１！Ｊ）３ｕ／ｍβ、コレステロールオキシダーゼ（
同）６ｕ／ｍｆｆ１、パーオキシダーゼ（ベーリンガー
社製）　１８０ｕ／−１４−アミノアンチピリン１．２
ｍＭ、フェノール４５ｍＭおよびトリトンＸ　４０００
．３％並びにＥＤＴＡ　２７ｍＭを含む０．１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７，５）　１．ＯｍｒＲを加え３７°Ｃｌ
２Ｏ分反応したのち、反応液の５０５ｎｍにおける吸光
度を測定した。この吸光度と、あらかじめ標準コレステ
ロール水溶液を検液として、上記と同様に操作して作成
した検量線とを対比して本試料中のコレステロール濃度
を求めたところ、１８０　ｍｇ／　ｄｉであった。Example 6 Measurement of total cholesterol in serum Copper sulfate 0.
51 and 0.1M containing potassium cyanide 0.5mM
Phosphate buffer (pH 7,5) 2. Ornf! was placed in a test tube, serum sample 204 was added thereto, and the reaction was carried out at 37°C for 10 minutes. Next, cholesterol esterase (Amano Pharmaceutical Co., Ltd. 1!J) 3u/mβ, cholesterol oxidase (
Same) 6u/mff1, peroxidase (manufactured by Boehringer) 180u/-14-aminoantipyrine 1.2
mM, phenol 45mM and Triton X 4000
．． 0.1M phosphate buffer (pH 7,5) containing 3% and 27mM EDTA 1. Add OmrR and 37°Cl
After reacting for 20 minutes, the absorbance of the reaction solution at 505 nm was measured. The cholesterol concentration in this sample was determined by comparing this absorbance with a calibration curve prepared in advance using a standard cholesterol aqueous solution as a test solution in the same manner as above, and found to be 180 mg/di.

一方、比較として硫酸銅、シアン化カリウムおよびＥＤ
ＴＡを除いて同様に操作したところ１７２ｍｇ／ｄ１で
あった。On the other hand, for comparison, copper sulfate, potassium cyanide and ED
When the same operation was performed except for TA, the result was 172 mg/d1.

実施例７　血清中の中性脂肪の測定 塩化第二銅０．５　ｍＭおよびコール酸ナトリウム０．
１５％を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｉ（７，５）　
２．０飢を試験管に取り、そこへ血清試料２ｈＪ！を加
え３７℃、１０分反応した。次いでリポプロティンリパ
ーゼ（大野製薬社製）　６００ｕ／ｍＥ、グリセロール
キナーゼ（同）　１．Ｏｕ／ｍｆｆ、グリセロール−３
−リン酸オキシダーゼ（同）　　１２ｕ／ｍｌ！、パー
オキシダーゼ（ベーリンガー社製）６ｕ／ｍβ、４−ア
ミノアンチピリン　１．２ｍＭ　、フェノール　４５ｍ
Ｍ、アデノシン三リン酸　２．４ｍＭおよびトリトンＸ
−１０００，，３％並びにＥ　Ｄ　Ｔ　Ａ　２７ｍＭを
含む０．１Ｍ　）リス塩酸線マ析液（ｐｉｌ　７．５）
　１．０−を加え３７°Ｃｌ２Ｏ分反応させたのち反応
液の５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。Example 7 Measurement of neutral fats in serum Cupric chloride 0.5 mM and sodium cholate 0.5 mM.
0.1 M phosphate buffer containing 15% pi(7,5)
Take 2.0 starvation in a test tube and add 2hJ of serum sample to it! was added and reacted at 37°C for 10 minutes. Next, lipoprotein lipase (manufactured by Ohno Pharmaceutical) 600u/mE, glycerol kinase (same) 1. Ou/mff, glycerol-3
-Phosphate oxidase (same) 12u/ml! , peroxidase (manufactured by Boehringer) 6u/mβ, 4-aminoantipyrine 1.2mM, phenol 45m
M, adenosine triphosphate 2.4mM and Triton X
-1000,,3% and 0.1M containing EDTA 27mM) Liss hydrochloric acid ray analysis solution (Pil 7.5)
After adding 1.0- and reacting for 37°C12O minutes, the absorbance of the reaction solution at 505 nm was measured.

この吸光度と、あらかじめ標準トリオレイン溶液を検液
として、上記と同様に操作して作成した検量線とを対比
して本試料中の中性脂肪濃度を求めたところ、トリオレ
インとして７８．６ｍｇ／　ｄｉであった。一方、比較
として塩化第二銅、コール酸ナトリウムおよびＥ’Ｄ　
Ｔ　Ａを除いて同様に操作したところ、７３．８ｍｇ／
ｄ１であった。The neutral fat concentration in this sample was determined by comparing this absorbance with a calibration curve prepared in advance by using the standard triolein solution as a test solution and operating in the same manner as above. It was di. On the other hand, for comparison, cupric chloride, sodium cholate and E'D
When the same operation was performed except for TA, 73.8mg/
It was d1.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第１図はグルコースの測定におけるビ１ノルビンの影響
を表す図であり、同図中＜−ｏ−目土本発明法の効果を
、（→−）は比較例をそれぞれ表す。 特許出願人　天野製薬株式会社 第　１　図 ０　　　　１０　　　２０　　　３０　　　’″４０４
０ビリルビン儂度／ｄｌ）FIG. 1 is a diagram showing the influence of bi-1-norbin on glucose measurement, and in the figure, <-o- represents the effect of the method of the present invention, and (→-) represents a comparative example. Patent applicant Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Figure 1 0 10 20 30 '''404
0 bilirubin degree/dl)

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １　酸化酵素を用いて生体体液中の成分を測定する方法
において試料に２価の銅イオン化合物と界面活性剤およ
び／またはシアン化物のを作用せしめたのちの試料を検
波とすることを特徴とする生体体液成分の測定法。 ２２価の銅イオン化合物が硫酸銅、塩化第二銅、酢酸第
二銅またはリン酸第二銅である特許請求の範囲第１項記
載の生体体液成分の測定法。 ３　界面活性剤がドデシル硫酸ナトリウム、コール酸ナ
トリウム、タウロコール酸、Ｐ−トルエンスルホン酸ま
たはトリトンＸ−１００である特許請求の範囲第１項記
載の生体体液成分の測定法。 ４　シアン化物がシアン化カリウムまたはシアン化ナト
リウムである特許請求の範囲第１項記載の生体体液成分
の測定法。[Scope of Claims] 1. In a method for measuring components in biological body fluids using oxidase, a divalent copper ion compound, a surfactant, and/or cyanide are applied to a sample, and then the sample is subjected to detection. A method for measuring biological fluid components. 2. The method for measuring biological fluid components according to claim 1, wherein the 22-valent copper ion compound is copper sulfate, cupric chloride, cupric acetate, or cupric phosphate. 3. The method for measuring biological body fluid components according to claim 1, wherein the surfactant is sodium dodecyl sulfate, sodium cholate, taurocholic acid, P-toluenesulfonic acid, or Triton X-100. 4. The method for measuring biological fluid components according to claim 1, wherein the cyanide is potassium cyanide or sodium cyanide.