JPS59159786A - 新規物質アルゴマイシン - Google Patents
新規物質アルゴマイシンInfo
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- JPS59159786A JPS59159786A JP58035663A JP3566383A JPS59159786A JP S59159786 A JPS59159786 A JP S59159786A JP 58035663 A JP58035663 A JP 58035663A JP 3566383 A JP3566383 A JP 3566383A JP S59159786 A JPS59159786 A JP S59159786A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- methanol
- chloroform
- albomycin
- water
- soluble
- Prior art date
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- Pending
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、新規なアンスラサイクリン化合物およびその
製造法に関する。
製造法に関する。
制癌性抗生物質としてのアンスラサイクリン化合物は医
薬として重要な位置を占めており、既に各種のものが提
案されている。一般に、化学物質の生理活性はその化学
構造ないし理化学的性質に依存するところが大きいから
、アンスラサイクリン化合物についてもそのアグリコン
部分及び糖鎖部分の糖の種類または置換基において既存
のものと異なる化合物ないし既存のものと異なる理化学
的性質を有する化合物に対しては不断の希求があるとい
えよう。
薬として重要な位置を占めており、既に各種のものが提
案されている。一般に、化学物質の生理活性はその化学
構造ないし理化学的性質に依存するところが大きいから
、アンスラサイクリン化合物についてもそのアグリコン
部分及び糖鎖部分の糖の種類または置換基において既存
のものと異なる化合物ないし既存のものと異なる理化学
的性質を有する化合物に対しては不断の希求があるとい
えよう。
発明の概要
本発明は、上記の希求に応えるものである。
すなわち、本発明によるアンスラサイクリン化合R’/
J 7 /L/ゴマイシンは、下記の理化学的性質を有
するものである。
J 7 /L/ゴマイシンは、下記の理化学的性質を有
するものである。
本発明によるアンスラサイクーリン化合物アルボマイシ
ンの製造法は、適当な培地にストレプトミセス属のアル
ボマイシン生成能を有する菌株を好気的に培養し、培養
物から下記の理化学的性質を有するアンスラサイクリン
化合物アルボマイシンを採取すること、を特徴とするも
のである。
ンの製造法は、適当な培地にストレプトミセス属のアル
ボマイシン生成能を有する菌株を好気的に培養し、培養
物から下記の理化学的性質を有するアンスラサイクリン
化合物アルボマイシンを採取すること、を特徴とするも
のである。
(1)色、性状 :橙色粉末
(2)融点 :207〜213℃(分解)(3)比
旋光度 :〔αl) ’6”’ −+ 112°(C=
0.1、クロロホルム:メタノール−9=1) (4)元素分析値 C: 56.2% (実験値)H: 6.9% 0 : 35.1係 N:1.8係 (5)紫外部可視部吸収スペクトル 第1図に示した通りである。
旋光度 :〔αl) ’6”’ −+ 112°(C=
0.1、クロロホルム:メタノール−9=1) (4)元素分析値 C: 56.2% (実験値)H: 6.9% 0 : 35.1係 N:1.8係 (5)紫外部可視部吸収スペクトル 第1図に示した通りである。
CH30Hλmax (E”)
0m
235 (363)、258(167)、292 (6
1)、476 (104)0 、 INHCl +CH
30H 235(387)、258(159)、292(61)
、468 (110)0 、 lNNaOH+CHaO
H 239、(302)、294(41)、523 (88
)(6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定
)第2図に示した通りである。
1)、476 (104)0 、 INHCl +CH
30H 235(387)、258(159)、292(61)
、468 (110)0 、 lNNaOH+CHaO
H 239、(302)、294(41)、523 (88
)(6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定
)第2図に示した通りである。
(力溶剤に対する溶解性
クロUホルムーメタノール混液、ジメチルスクロロホル
ム、メタノール、酢酸エチル、メチ水に難溶。
ム、メタノール、酢酸エチル、メチ水に難溶。
(8)薄層クロマトグラフィー
(メルク社しシリカゲル60F254Jプレート使用)
展開溶媒 Rf値ジクロロホルム
メタノール 0.20=8:1:0.1 クロロポルム:メタノール:酢酸 0.30=
8:1:0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.26=
7:2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(40pメガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。
展開溶媒 Rf値ジクロロホルム
メタノール 0.20=8:1:0.1 クロロポルム:メタノール:酢酸 0.30=
8:1:0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.26=
7:2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(40pメガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。
アンスラサイクリン化合物アルボマイシン化学構造
本発明によるアンスラサイクリン化合物アルボマイシン
は、下記の式(A)で示される化学構造を有するアグリ
コンに構造不明の糖がグリコシド結合したものである。
は、下記の式(A)で示される化学構造を有するアグリ
コンに構造不明の糖がグリコシド結合したものである。
この化学構造は、下記のようにして決定された。
すなわち、アルゴマイシ/を0.4N塩酸に溶解し、1
8;5+ ’Cで0.5時間加水分解を行なうことによ
り、アグリコン部分と糖部分とが得られた。アグリコン
部分は、薄層クロマトグラフィー、紫外部吸収スペクト
ル、マススペクトル及び核磁気共鳴スペクトル等の解析
により、Wi 1eyXP、F、らが報告(J。
8;5+ ’Cで0.5時間加水分解を行なうことによ
り、アグリコン部分と糖部分とが得られた。アグリコン
部分は、薄層クロマトグラフィー、紫外部吸収スペクト
ル、マススペクトル及び核磁気共鳴スペクトル等の解析
により、Wi 1eyXP、F、らが報告(J。
Am 、Chem 、 Sac 、 99.542〜5
49 (1977) ) しているノガラマイシン(
Nogalamycin )のアグリコン部分であるノ
ガラロール(Nogalarol) テ1>ることか判
った。
49 (1977) ) しているノガラマイシン(
Nogalamycin )のアグリコン部分であるノ
ガラロール(Nogalarol) テ1>ることか判
った。
理化学的性質
アンスラサイクリン化合物アルボマイシンの理化学的性
質は、下記の通りである。
質は、下記の通りである。
(1)色、性状 :橙色粉末
(2)融点 =207〜213°C(分解)、
25− (3)比旋光度 、〔α)、、−+112°(C= 0
.1、クロロホルム:メタノール=9:1) (4)元素分析値 C: 56.2係 (実験値)H:6.9% 0 : 35.1% N:1.8% (5)紫外部=T視郡部吸収スペクト ル第1図示した通りである。
25− (3)比旋光度 、〔α)、、−+112°(C= 0
.1、クロロホルム:メタノール=9:1) (4)元素分析値 C: 56.2係 (実験値)H:6.9% 0 : 35.1% N:1.8% (5)紫外部=T視郡部吸収スペクト ル第1図示した通りである。
、CH30Hλmax (E1%)
0m
235 (363)、258 (167)、292 (
61)、476(104)0、lNHCl 十〇H30
H 235 (387)、258(159)、292(61
)、468 (110)0 、 lNNaOH+CH3
0H 239(302)、294(41)、523(88)(
6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)第
2図に示した通りである。
61)、476(104)0、lNHCl 十〇H30
H 235 (387)、258(159)、292(61
)、468 (110)0 、 lNNaOH+CH3
0H 239(302)、294(41)、523(88)(
6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)第
2図に示した通りである。
(力溶剤に対する溶解性
クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、メチルエチル
ケトン、ブタノール、酢酸ブチル、5 エタノール1、ア、セ+ンおよび酸性Eに可溶。
ケトン、ブタノール、酢酸ブチル、5 エタノール1、ア、セ+ンおよび酸性Eに可溶。
水に難溶。
(8)薄層クロマトグラフィー
(メルク社「シリカゲル60F254Jプレート使用)
展開溶媒 Rf値 ジクロロホルムメタノール 0.20=8
: 1 : 0.1 クロロホルム:メタノール:6酸0.30=8 :
1 : 0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 帆26=7:
2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。
展開溶媒 Rf値 ジクロロホルムメタノール 0.20=8
: 1 : 0.1 クロロホルム:メタノール:6酸0.30=8 :
1 : 0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 帆26=7:
2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。
ア/L/、ゴマイシンの製造
概要
アンスラサイクリン化合物アルボマイシンは現在のとこ
ろ微生物の培養によってのみしか得られていないが、そ
の糖部分の構造が解明できれば、類縁化合物の合成化学
的または微生物学的修飾によって製造することも、ある
いは全合成化学的に製造することもできよう。
ろ微生物の培養によってのみしか得られていないが、そ
の糖部分の構造が解明できれば、類縁化合物の合成化学
的または微生物学的修飾によって製造することも、ある
いは全合成化学的に製造することもできよう。
微生物の培養による場合の菌株としては、ストレプトミ
セス属に属するアルボマイシン生成能を有するものが使
用される。具体的には本発明者らの分離したストレプト
ミセス・ピオロクロモケネス1089−AV2(892
)株がアルボマイジンを生産することが本発明者らによ
って明らかにされているが、その他の菌株については抗
生物質生産菌単離の常法によって適当なものを自然界よ
り分離する菌を放射線照射その他の処理に付して、アル
ザマイシン生産能を高める余地も残されている。
セス属に属するアルボマイシン生成能を有するものが使
用される。具体的には本発明者らの分離したストレプト
ミセス・ピオロクロモケネス1089−AV2(892
)株がアルボマイジンを生産することが本発明者らによ
って明らかにされているが、その他の菌株については抗
生物質生産菌単離の常法によって適当なものを自然界よ
り分離する菌を放射線照射その他の処理に付して、アル
ザマイシン生産能を高める余地も残されている。
892株
アンスラサイクリン化合物アルボマイシン生産能を有す
るストレプトミセス属の菌株として本発明者らの見出し
ている892株は、下記の内容のものである。
るストレプトミセス属の菌株として本発明者らの見出し
ている892株は、下記の内容のものである。
(1)由来および寄託番号
892株は佐賀県神崎郡基山町の水田で採取した土壌か
ら分離されたものであり、昭和57年12月路日に工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託され−て、「微工研
菌寄第6865号」の番号を得ている。
ら分離されたものであり、昭和57年12月路日に工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託され−て、「微工研
菌寄第6865号」の番号を得ている。
(2)菌学的性状および生理学的性質
(イ)形態
空中菌糸は主軸を長く伸ばし、短板を不規則に多くは房
状に分岐しく単軸分枝)、その先端に胞子鎖を形成する
。胞子鎖は通常to−25個の胞子からなり、密な閉鎖
状螺旋を呈する(径2〜3μ、1〜4回転)。胞子表面
は平滑で径0 、7−0 、9μ、0.5−0.6μの
円筒状または長楕円形である。培地(栄養課天培地)に
よっては基生菌糸上に屈曲した短板を単独または房状に
分岐し、その先端に不規則に曲折した姻子鎖(2〜15
個)を形成することがある。その他の特殊形態は観察さ
れない。全菌体加水分解中にLL型クジアミノピメリン
酸含む。
状に分岐しく単軸分枝)、その先端に胞子鎖を形成する
。胞子鎖は通常to−25個の胞子からなり、密な閉鎖
状螺旋を呈する(径2〜3μ、1〜4回転)。胞子表面
は平滑で径0 、7−0 、9μ、0.5−0.6μの
円筒状または長楕円形である。培地(栄養課天培地)に
よっては基生菌糸上に屈曲した短板を単独または房状に
分岐し、その先端に不規則に曲折した姻子鎖(2〜15
個)を形成することがある。その他の特殊形態は観察さ
れない。全菌体加水分解中にLL型クジアミノピメリン
酸含む。
(ロ)各種培地に2ける生育状態
国際放線菌命名委員会(ISP)の方法便覧(Meth
ods of Manual 1941)にしたがって
観察した。観察結果は、要約して表1に示した。
ods of Manual 1941)にしたがって
観察した。観察結果は、要約して表1に示した。
(ハ)生理的性質および炭素源の同化性生理的性質は表
2に、また炭素源の同化性は表3に、それぞれ示す通り
である。
2に、また炭素源の同化性は表3に、それぞれ示す通り
である。
表2 生理的性質
生育温度範囲 20−42℃生育最適温度
27−37℃ゼラチンの液化
十 スターチの加水分解 十 脱脂牛乳の凝固 − 脱脂牛乳のペプトン化 士 メラニン様色素の生成 チロシン寒天 十 ペストン・イースト・鉄寒天 + トリゾトン・イースト液体培地 土 柱)+:陽性 m:陰性 表3 炭素源の同化性 L−アラビノース + D−キシロース 士 D−グルコース 士 D−フラクトース + シュクロース + イノシトール 士 L−ラムノース − ラフィノース ± D−マンニトール 士 ゾリドハム・ゴツトリーブ寒天培地を使用註)+:良く
生育 ±:わずかに生育 m:生育せず に)考察 本菌株1089−AV2は細胞壁成分としてL型のジア
ミノピメリン酸を含み、10個以上の胞子からなる胞子
鎖を形成することから、ストレプトミセス(Strep
tomyces)属に所属され、次のように特徴づけら
れる。すなわち、a)胞子鎖は密な閉鎖コイル状、b)
胞子鎖表面構造は平滑、c)閑叢色は灰色及び赤色系列
、d)集落の裏面色は淡橙色から明黄色、暗橙色、e)
メラニン様色素の産性は陽性。
27−37℃ゼラチンの液化
十 スターチの加水分解 十 脱脂牛乳の凝固 − 脱脂牛乳のペプトン化 士 メラニン様色素の生成 チロシン寒天 十 ペストン・イースト・鉄寒天 + トリゾトン・イースト液体培地 土 柱)+:陽性 m:陰性 表3 炭素源の同化性 L−アラビノース + D−キシロース 士 D−グルコース 士 D−フラクトース + シュクロース + イノシトール 士 L−ラムノース − ラフィノース ± D−マンニトール 士 ゾリドハム・ゴツトリーブ寒天培地を使用註)+:良く
生育 ±:わずかに生育 m:生育せず に)考察 本菌株1089−AV2は細胞壁成分としてL型のジア
ミノピメリン酸を含み、10個以上の胞子からなる胞子
鎖を形成することから、ストレプトミセス(Strep
tomyces)属に所属され、次のように特徴づけら
れる。すなわち、a)胞子鎖は密な閉鎖コイル状、b)
胞子鎖表面構造は平滑、c)閑叢色は灰色及び赤色系列
、d)集落の裏面色は淡橙色から明黄色、暗橙色、e)
メラニン様色素の産性は陽性。
上述の5特性を基準にして既知菌種と比較検討した結果
、本菌株はアクチノミセス(ストレプトミセス)ピオロ
クロモゲネス(Ac t inomyces(Stre
ptomyces)violochromogenes
)に最も近縁である。本菌株とA、ビオロクロモゲネス
とを比較するとラムノースおよびラフィノースの利用能
のみが異なり、これは柵を分けるほどの差異とは考えら
れないところから、本菌株は同種に所属されるものとし
た。よって、本菌株はストレプトミセス・ビオロクロモ
ゲネス(Streptomycesviolochro
mogenes)1089−AV2と称する。
、本菌株はアクチノミセス(ストレプトミセス)ピオロ
クロモゲネス(Ac t inomyces(Stre
ptomyces)violochromogenes
)に最も近縁である。本菌株とA、ビオロクロモゲネス
とを比較するとラムノースおよびラフィノースの利用能
のみが異なり、これは柵を分けるほどの差異とは考えら
れないところから、本菌株は同種に所属されるものとし
た。よって、本菌株はストレプトミセス・ビオロクロモ
ゲネス(Streptomycesviolochro
mogenes)1089−AV2と称する。
(3)培養/アルボマイシンの生産
アンスラサイクリン化合物アルボマイシンは、ストレプ
トミセス属に属するアルボマイシン生産菌を適当な培地
で好気的に培養し、培養物から目的物を採取することに
よって製造することができる。
トミセス属に属するアルボマイシン生産菌を適当な培地
で好気的に培養し、培養物から目的物を採取することに
よって製造することができる。
培地は、アルボマイシン生産菌が利用しうる任意の栄養
源を含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭
素源として、グルコース、シュークロース、マルトース
、スターチ、および油脂類などが使用でき、窒素源とし
て大豆粉、綿実粕、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、酵
母エキス、およびコーンスチーゾリカーなどの有@−並
びにアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモ
ニウム、硝酸ナトリウム、および塩化アンモニウム等の
無機物が使用できる。また、必要に応じて、食塩、塩化
カリウム、リン酸塩、重金属塩など無機塩類を添加する
ことができる。発酵中の発泡を抑制する為に、常法に従
って適当な発泡剤、たとえばシリコーンを添加すること
もできる。
源を含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭
素源として、グルコース、シュークロース、マルトース
、スターチ、および油脂類などが使用でき、窒素源とし
て大豆粉、綿実粕、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、酵
母エキス、およびコーンスチーゾリカーなどの有@−並
びにアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモ
ニウム、硝酸ナトリウム、および塩化アンモニウム等の
無機物が使用できる。また、必要に応じて、食塩、塩化
カリウム、リン酸塩、重金属塩など無機塩類を添加する
ことができる。発酵中の発泡を抑制する為に、常法に従
って適当な発泡剤、たとえばシリコーンを添加すること
もできる。
培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度は加℃〜47Cが適当であるが、27℃〜
37°Cが好ましい。この方法でアルボマイシンの生産
量は、振盪培養、通気攪拌培養共に3日〜6日で最高に
達する。
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度は加℃〜47Cが適当であるが、27℃〜
37°Cが好ましい。この方法でアルボマイシンの生産
量は、振盪培養、通気攪拌培養共に3日〜6日で最高に
達する。
このようにしてアルボマイシンの蓄積された培養物が得
られる。培養物中では、アルボマイシンはその大部分は
培養c液中に存在するが、その一部分は菌体中に存在す
る。
られる。培養物中では、アルボマイシンはその大部分は
培養c液中に存在するが、その一部分は菌体中に存在す
る。
このような培養物からアルボマイシンを採取するには、
合目的的な任意の方法が利用可能である。
合目的的な任意の方法が利用可能である。
その一つの方法は、抽出の原理に基くものであって具体
的には、たとえば、培養f液中のアルボマイシンについ
てはこれを水不混オロ性のアルボマイシン用溶媒(前記
参照)例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、
ブタノール等で抽出する方法、あるいは自体内のアルボ
マイシンについては1過、遠心分離等で得た菌体集体を
クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール、メタノール、
エタノール、アセトン、メチルエチルケトン、塩酸溶液
または酢酸溶液などで処理して回収することができる。
的には、たとえば、培養f液中のアルボマイシンについ
てはこれを水不混オロ性のアルボマイシン用溶媒(前記
参照)例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホルム、
ブタノール等で抽出する方法、あるいは自体内のアルボ
マイシンについては1過、遠心分離等で得た菌体集体を
クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール、メタノール、
エタノール、アセトン、メチルエチルケトン、塩酸溶液
または酢酸溶液などで処理して回収することができる。
菌体を分離せずに培養物そのま\を上記の抽出操作に付
すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出
の範噛に入れることができる。
すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出
の範噛に入れることができる。
培養物からアルボマイシンを採取する他の方法の一つは
、吸着の原理に基くものであって、既に液状となってい
るアルボマイシン含有物、例えば培養f液あるいは上記
のようにして抽出操作を行なうことによって得られる抽
出液、を対象として、−適当な吸着剤、例えば活性炭、
アルミナ、シリカゲル、[ダイヤイオンHP20J
(三菱化成製)等、を用いたカラムクロマトグラフィー
、液体クロマトグラフィー、その他によって目的アルボ
マイシンを吸着させ、その後溶離させることによって、
アルボマイシンを得ることができる。このようにして得
られたアルボマイシン溶液を減圧濃縮乾固すれは、アル
ボマイシンの粗標品が得られる。
、吸着の原理に基くものであって、既に液状となってい
るアルボマイシン含有物、例えば培養f液あるいは上記
のようにして抽出操作を行なうことによって得られる抽
出液、を対象として、−適当な吸着剤、例えば活性炭、
アルミナ、シリカゲル、[ダイヤイオンHP20J
(三菱化成製)等、を用いたカラムクロマトグラフィー
、液体クロマトグラフィー、その他によって目的アルボ
マイシンを吸着させ、その後溶離させることによって、
アルボマイシンを得ることができる。このようにして得
られたアルボマイシン溶液を減圧濃縮乾固すれは、アル
ボマイシンの粗標品が得られる。
このようにして得られるアルボマイシンの粗標品をさら
に精製するためには、上記の抽出法および吸着法を必要
に応じて組合せて必要回数行なえばよい。例えば、シリ
カゲル、[ダイヤイオンHP20 Jなどの吸着剤また
はゲル沢過剤を用いたカラムクロマトグラフィー、適当
な溶媒を用いた液体クロマトグラフィー、および向流分
配法を適宜組合わせて実施することができる。具体的に
は、例えば、アルボマイシン粗標品を少量のクロロホル
ムに溶解し、酸性シリカカラムを用いて、適当な溶媒で
展開して活性成分を浴出させ、溶出液を減圧濃縮後、更
に「セファデックスLH20J (ファルマシア社製)
カラムで浴出させると、アルボマイシンが単−物質とし
て分離されるから、これを濃縮乾固すればアルボマイシ
ンを得ることができる。
に精製するためには、上記の抽出法および吸着法を必要
に応じて組合せて必要回数行なえばよい。例えば、シリ
カゲル、[ダイヤイオンHP20 Jなどの吸着剤また
はゲル沢過剤を用いたカラムクロマトグラフィー、適当
な溶媒を用いた液体クロマトグラフィー、および向流分
配法を適宜組合わせて実施することができる。具体的に
は、例えば、アルボマイシン粗標品を少量のクロロホル
ムに溶解し、酸性シリカカラムを用いて、適当な溶媒で
展開して活性成分を浴出させ、溶出液を減圧濃縮後、更
に「セファデックスLH20J (ファルマシア社製)
カラムで浴出させると、アルボマイシンが単−物質とし
て分離されるから、これを濃縮乾固すればアルボマイシ
ンを得ることができる。
アルボマイシンの用途
本発明によるアンスラサイクリン化合物アルボマイシン
は、制癌活性および抗菌活性を有するという点で有用な
化合物である。
は、制癌活性および抗菌活性を有するという点で有用な
化合物である。
生理活性
(1)抗腫瘍性
アルボマイシンは、実験動物の白血病に対して抗腫瘍作
用を示した。例えば、CDF1マウスに対し、P388
白血病細胞の懸濁液1×106ケ/マウスを腹腔内に移
植し、移植後より1日目と5日目にアルボマイシン0
、5mg/k gを投与した。生理食塩水を投与した対
照群のマウスの生存日数を100とした延命率(%)で
効果を示すと、110係であった。
用を示した。例えば、CDF1マウスに対し、P388
白血病細胞の懸濁液1×106ケ/マウスを腹腔内に移
植し、移植後より1日目と5日目にアルボマイシン0
、5mg/k gを投与した。生理食塩水を投与した対
照群のマウスの生存日数を100とした延命率(%)で
効果を示すと、110係であった。
(2)抗菌性
アルボマイシンは主としてダラム陽性囚に対して抗菌作
用を示す物質であり、寒天希釈法により求めた最小増殖
阻止濃度(MIC)は表4の通りであ表4 アルボマイ
シンの最小増殖阻止濃度(抗菌性MIC)1、 Bac
illus 5ubtilis PCI 219
12.5(バチルス・スズチリス) 2、5taphylococcus aureus F
DA209P 12.5(スタフィロコッカス・ア
ウレウス) 3、Micrococcus 1uteus ATC
C934112,5(ミクロコツカス・ルテウス) 4、 Pseudomonas aeruginos
a NCTC10490>100(シュードモナス・エ
ルギノサ) 5、Salmonella typhimurium
IFO12529)100(サルモネラ・チフィムリウ
ム) 6、 Escherichia coli NIHJ
JC−2)100(エシェリキア・コリ) 7、 Saccharomyces cerevisi
ae ATCC9763)100(サツカロミセス・セ
レビシェ) 8、 Candida albicans No、Y
u 1200 >100(キャンディダ・アル
ビカンス) 9、 Candia utilis IFO0396
)100(キャンデイダ・ウティリス) 10、 Aspergil lus fumigat
us IF04400 >100(アスペルギル
ス・フミガッス) 11、 Pen1cil lium chrysoge
num ATCC10002>100(ペニシリウム・
クリソゲヌム) 12、 Trichophyton menlgrop
hytes >100() IJコフイトン・
メンタグロフィテス)(3)急性毒性(LD50) アルボマイシンのマウス腹腔内注射によるLD50は、
1 、75mg/kgであった。
用を示す物質であり、寒天希釈法により求めた最小増殖
阻止濃度(MIC)は表4の通りであ表4 アルボマイ
シンの最小増殖阻止濃度(抗菌性MIC)1、 Bac
illus 5ubtilis PCI 219
12.5(バチルス・スズチリス) 2、5taphylococcus aureus F
DA209P 12.5(スタフィロコッカス・ア
ウレウス) 3、Micrococcus 1uteus ATC
C934112,5(ミクロコツカス・ルテウス) 4、 Pseudomonas aeruginos
a NCTC10490>100(シュードモナス・エ
ルギノサ) 5、Salmonella typhimurium
IFO12529)100(サルモネラ・チフィムリウ
ム) 6、 Escherichia coli NIHJ
JC−2)100(エシェリキア・コリ) 7、 Saccharomyces cerevisi
ae ATCC9763)100(サツカロミセス・セ
レビシェ) 8、 Candida albicans No、Y
u 1200 >100(キャンディダ・アル
ビカンス) 9、 Candia utilis IFO0396
)100(キャンデイダ・ウティリス) 10、 Aspergil lus fumigat
us IF04400 >100(アスペルギル
ス・フミガッス) 11、 Pen1cil lium chrysoge
num ATCC10002>100(ペニシリウム・
クリソゲヌム) 12、 Trichophyton menlgrop
hytes >100() IJコフイトン・
メンタグロフィテス)(3)急性毒性(LD50) アルボマイシンのマウス腹腔内注射によるLD50は、
1 、75mg/kgであった。
実験例
以下において「%」は「W/′V%」である。
実施例1
(1)種母の調製
使用した培地は、下記の組成の成分を1リツトルの水に
溶解して、pH7,0に調帯したものである。
溶解して、pH7,0に調帯したものである。
グルコース 4%
モルト・エクストラクト 10係
イースト・エクストラクト 4饅
ビタミン・コンプレックス 10m1/1なお、ビタ
ミン・コンプレックスは、下記の組成の成分を10m1
の蒸留水に溶解したものである。
ミン・コンプレックスは、下記の組成の成分を10m1
の蒸留水に溶解したものである。
塩酸チアミン 0.5mgリボフラビン
0 、5mgナイアミン
0 、5mg塩酸ピリドキシン 0 、
5mgイノ/トール 0 、5mg、5
ントテン酸カルシウム 0 、5mgノξラ
アミノペンゾイックアシド 0 、5mgビオチン
0.25mg上記培地L5mlを
大型試験管に分注殺菌し、スト時間試験管振盪機にて振
盪(23Orpm) したものを種母とした。
0 、5mgナイアミン
0 、5mg塩酸ピリドキシン 0 、
5mgイノ/トール 0 、5mg、5
ントテン酸カルシウム 0 、5mgノξラ
アミノペンゾイックアシド 0 、5mgビオチン
0.25mg上記培地L5mlを
大型試験管に分注殺菌し、スト時間試験管振盪機にて振
盪(23Orpm) したものを種母とした。
(2)培養
使用した培地は、下記の組成の成分を1リツトルの水に
溶解して、p)17.0に調整したものである。
溶解して、p)17.0に調整したものである。
澱粉 2.5%
大豆粉 1.5係乾燥酵母
0.2%炭酸カルシウム(沈降性)
O−、4%上記培地111リツトルを100m
1ずつ500m1の三角フラスコに分注殺菌したものへ
、上記種母2mlを添加し、ロータリーシェカー(23
0rpm)を用い(3)アルボマイシンの採取 培養後、培養液を濾過し、得られた培養1液1リツトル
をpl(2,0に調整した後、ダイアイオンHP20に
吸着させ、これを水で、続いて50%メタノールで洗浄
し、100%メタノールで溶出する。
0.2%炭酸カルシウム(沈降性)
O−、4%上記培地111リツトルを100m
1ずつ500m1の三角フラスコに分注殺菌したものへ
、上記種母2mlを添加し、ロータリーシェカー(23
0rpm)を用い(3)アルボマイシンの採取 培養後、培養液を濾過し、得られた培養1液1リツトル
をpl(2,0に調整した後、ダイアイオンHP20に
吸着させ、これを水で、続いて50%メタノールで洗浄
し、100%メタノールで溶出する。
これを、減Ff!濃縮後、クロロホルムで抽出する。
このクロロホルム層を減圧乾固して、赤色粉末1gを得
る(アルボマイシン粗粉末)。
る(アルボマイシン粗粉末)。
実施例2
実施例1で得られたアルボマイシン粗粉末1gをクロロ
ホルム:メタノール−20=1の溶液に溶解し、酸性シ
リカ500gをクロロホルム:メタノール=20:1で
平衡化したカラム6 X 60cmにのせ、クロロホル
ム:メタノール=20:1で溶出する。
ホルム:メタノール−20=1の溶液に溶解し、酸性シ
リカ500gをクロロホルム:メタノール=20:1で
平衡化したカラム6 X 60cmにのせ、クロロホル
ム:メタノール=20:1で溶出する。
得られた活性画分を減圧乾固した後、更にクロロホルム
:メタノール−1=1の溶液に溶解し、クロロホルム:
メタノール=1:1で平衡化した[セファデックスLH
20Jカラムにのせ、クロロホルム:メタノール=1=
1で溶出する。得られた活性画分を減圧乾固し、橙色の
アルボマイシン粉末100mgを得た。
:メタノール−1=1の溶液に溶解し、クロロホルム:
メタノール=1:1で平衡化した[セファデックスLH
20Jカラムにのせ、クロロホルム:メタノール=1=
1で溶出する。得られた活性画分を減圧乾固し、橙色の
アルボマイシン粉末100mgを得た。
第1図は、アルボマイシンの紫外部可視部吸収スペクト
ルを模写したものである。 1 メタノール中 2 メタノール+HCI中(HCI :0.IN )3
メタノール+Na OH中(Na OH: 0.I
N )第2図は、アルボマイシンの赤外吸収スペクトル
を模写したものである。 第3図は、アルボマイシンの1)(−NMRスペクトル
を模写したものである。 出願人代理人 猪 股 清 手続補正書 昭和犯年8月よ2 日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 1、事件の表示 昭和58年特許願第35663号 2、発明の名称 新規物質アルザマイシン 3、補正をする者 事件との関係 q−、y許出願人 鎮麟麦酒株式会社 7、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄および「特許請求の
範囲」の欄 8、補正の内容 (11特許請求の範囲を、別紙の通りに補正する。 (2)明細書の下記の個所のr 523(88月を、r
543(88)Jと補正する。 (イ)第7頁第16行 (ロ)第11頁第3行 (3)明細書第9頁第1行〜第10頁第4行「アンスラ
サイクリン化合物アルゴマイシン〜判った。」を、下記
の通りに補正する。 化学構造 本発明によるアンスラサイクリン化合物アルボマイシン
は、下記の式+11で示される化学構造を有する。 C0OH この化学構造は、下記のようにして決定された。 アルボマイシンを40係蟻酸に溶解し、85″Cで40
分間加水分解を行うことにより、アグリコン部分と糖部
分とが得られた。アグリコン部分は、薄層クロマトグラ
フィー、紫外部吸収スペクトル、マススペクトルおよび
核磁気共鳴スペクトル等の解析にLす、Wiley、
P、F、らが報告(J、 Am、Chem、 Soc、
、 99,542〜549 (1977) )している
ノガラマイシンのアグリコン部分であるノガラロール(
Nogalarol)であることが判明した。 糖部分は、1)(−NMRスペクトルのデカップリング
により、ジギノース、デシロニトロースおよび2−デオ
キシフコースを構成糖とするものであると判明した。 アルボマイシンの13C−NMRスペクトルに於いて、
アグリコンの4.6.7.2′および4′位のシグナル
をセレクテイプ・デカップリングなどにより帰属し、こ
れらのシグナル゛のケミカルシフトを文献値(J、Am
、 Chem、 Soc、、99..542(1977
) )と比較することにより、アルボマイシンはアグリ
コンの4′位および7位にそれぞれ糖鎖Rニオ、1:
ヒR2を有していることが判明した。 顯 アルボマイシンを5 ’% Pd−BaSO4にて水素
気流下で接触還元に付すことにより、7位の結合が切れ
て赤色の化合物(イ)と無色の化合物(ロ)とが得られ
る。(イ)および(ロ)の各物質は、各々 C−NMf
tスペクトル、’H−Nll/IRスペクトル、および
マススペクトルを解析することにより、以下の構造を有
することが判明した。 物質(イ)と物質(ロ)との7位における結合はαであ
ることがIH−NMRスペクトルにより判明しているの
で、アルボマイシンの構造は式(1)のように決定され
た。」 (4)同第12頁第11行 「その糖部分の構造が解明できれば」を削除。 (5)明細書の下記の個所に「QO)分子量(SIMS
)m/z 1694 (M+H)jを加入する。 (イ)第8頁下から第2行と第1行との間(ロ)第12
頁第6行、と第7行との間(6)明細(の下記の個所の
1(4)元素分析値〜1.8饅」を、 「(4)元素分析値(@:CI(ON 実験値 56.2 6.9 35.1 1.8理論
値 56.7 6.7 34.9 1.7 jと補正
する。 (イ)第7頁第5〜8行 (ロ)第1O頁第12〜15行 1、下記の理化学的性質を有するアンスラサイクリン化
合物アルボマイシン。 (1)色、性状 :橙色粉末 (2)融点 :207〜213℃(分解)(31比
旋i[: (ct)25=+n2’ (cmo、t、
りo 。 Iホルム:メタノール=9:1) (実験値) 56.2 6.9 35.1 1.8
(5)紫外部可視部吸収スペクトル 第1図に示したとおりである。 Cl430FL λ <91%)max c
m 235 (363)、258 (167)、292(6
1)、476(104)0 、1NHCI +CH30
H 235(387)、258(159)、292(61)
、468(110)0 、 lNNaOH+CHaOH 239(302)、294 (41)、543(88)
(6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)
第2図に示した通りである。 (力落剤に対する溶解性 クロロホルム−メタノール混液、ジメチルスル7オキシ
ド、ピリジンおよび塩基性水に易溶。 クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、メチルエチル
ケトン、ブタノール、酢酸ブチル、エタノール、アセト
ンおよび酸性水に可溶。 水に難溶。 (8)薄層クロマトグラフィー (メルク社「シリカゲル60F (254)Jプレート
使用) 展開溶媒 Rf値 ジクロロホルムメタノール 0.
20=8:1 りOOホルム:メタノール=29%アンモニア水 0.
25=8:1:0.1 クロロホルム:メタノール:Il!2 0
.30=8:1:0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.
26=7:2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。 (lO)分子量(SIMS) rv/Z 1694 (M十H) 2、適当な培地にストレプトミセス属のアンスラサイタ
リン化合物アルザマイシン生成能を有する菌株を好気的
に培養し、培養物から下記の理化学的性質を有するアン
スラサイクリン化合物アルボマイシンを採取することを
特徴とするアンスラザイクリン化合物アルゴマイシンの
製造法。 tl)色、性状 :橙色粉末 (2)融点 :207〜213℃(分解)(3)比
旋光度 :〔α)”=+112°(C=0.1、クロロ
ホルム:メタノール=9:1) (4)元素分析値(%):CHON (実験値)56.2 6.9 35.1 1.8(5
)望外部可視部吸収スペクトル 第1図に示したとおりである。 CH30Hλ (81%) maX cm 235 (363)、258(167)、292(61
)、476(104)0、lNHCl+CH30H 235(387)、258(159)、292(61)
、468(110)0 、 lNNaOH+ CH30
H 239(302)、294(41)、543 (88)
(6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)
第2図に示した通りである。 (力溶剤に対する溶解性 クロロホルム−メタノール混液、ジメチルスルフオキシ
ド1.ピリジンおよび塩基性水に易溶。 クロロホルム、メタノール、酢酸フチル、エタノール、
アセトンおよび酸性水に可溶。 水に難溶。 (8)薄層クロマトグラフィー (メルク社[シリカゲル60F (254)jプレート
使用) 展開溶液 Rf値クロロホルム:
メタノール 0.20=8=1 クロロホルム:メタノール: −
0,2529係アンモニア水 =8:1:0.1 クロロホルム:メタノール:酢酸 0.3
0=8:1:0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.
26=7 : 2 : 2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。 (101分子量(SIMS) m/z 1694 (M + H) 手続補正書 昭和59年4月80 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 1、事件の表示 昭和58年 特 許願第35663号 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 鎮麟麦酒株式会社 Z補止−1旬宕 (1)昭和58年8月四日付手続補正書第2頁第7行〜
第7頁第4行口3)〜決定された」」を削除して、明g
t書第9頁第1行〜第10頁第4行の記載を元へ戻す。 (2)明細書第9頁第1行〜第10頁第4行「アンスラ
サイクリノ化合物アルゴマイン7〜判った。」を、下記
の通りに補正する。 化学(i4造 本発明によるアンスラサイクリ/化合物アルゴマインン
は、下記の式(I)で示される化合構造この化学構造は
、下記のようにして決定された。 アルゴマイア/を40%蟻酸に母解し、85℃で40分
間加水分解を行うことにより、アグリコン部分と糖部分
とが得られた。アグリコン部分は、薄層クロマトグラフ
ィー、紫外部吸収スペクトル、マススペクトルおよび核
磁気共鳴スペクトル等の解析により、後記の式(A)で
示される化学構造を有するものであることが判明した(
ただし、式中のR□およびR2は、それぞれ水素な示す
)。 糖部分は、1H7NMRスペクトルのデカップリングに
より、ジギノース、デ/7ロニトロースよび2−デオキ
ノフコースを構成糖とするものであると判明した。 アルゴマイア/の C−NMRスペクトルに於いて、ア
グリコ/の4.6.7.2′および4′位のシグナルを
セレクティブ・デカップリングなどにより帰属し、これ
らのシグナルのケミカルジフトをアグリコンの対応する
データと比較することにより、アルボマイシンはアグリ
コンの4′位および7位にそれぞれ糖鎖R□およびR2
を有してV≧ることが判明した。 2 アルボマイシンを5%pa−BaSO4にて水素気流下
で接触還元に付すことにより、7位の結合が切れて赤色
の化合物(イ)と無色の化合物(ロ)とが得られる。(
イ)および仲)の各物質は、各々 C−間スペクトル、
”H−NIIIIRスペクトル、およびマススペク
トルを解析することにより、以下の構造を有することが
判明した。 A13+ ( 物質(イ)と物質−)との7位における結合はαである
ことが1H−NMRスペクトルにより判明しているので
、アルゴマイア/の構造は式(I)のように決足された
。」 (3)明細!を第5頁な、下記の通りに補正する。 行 補正前 補正後 11 4% 0.4% 12 10% 1.0% 134% 0.4% 19 ナイアミン ナイア7/受託番号変
更届 昭和9年2月JZ日 特許庁長官若杉和夫殿 1、事件の表示 昭和58年特許願第35663号 2、発明の名称 新規物質アルボマイシン 3、手続をした者 事件との関係 特許出願人 鎮麟麦酒株式会社 4、代理人 工業技術院微生物工業技術研究所 6、旧受託番号 微工研菌寄第6865号 9、添付書類の目録
ルを模写したものである。 1 メタノール中 2 メタノール+HCI中(HCI :0.IN )3
メタノール+Na OH中(Na OH: 0.I
N )第2図は、アルボマイシンの赤外吸収スペクトル
を模写したものである。 第3図は、アルボマイシンの1)(−NMRスペクトル
を模写したものである。 出願人代理人 猪 股 清 手続補正書 昭和犯年8月よ2 日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 1、事件の表示 昭和58年特許願第35663号 2、発明の名称 新規物質アルザマイシン 3、補正をする者 事件との関係 q−、y許出願人 鎮麟麦酒株式会社 7、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄および「特許請求の
範囲」の欄 8、補正の内容 (11特許請求の範囲を、別紙の通りに補正する。 (2)明細書の下記の個所のr 523(88月を、r
543(88)Jと補正する。 (イ)第7頁第16行 (ロ)第11頁第3行 (3)明細書第9頁第1行〜第10頁第4行「アンスラ
サイクリン化合物アルゴマイシン〜判った。」を、下記
の通りに補正する。 化学構造 本発明によるアンスラサイクリン化合物アルボマイシン
は、下記の式+11で示される化学構造を有する。 C0OH この化学構造は、下記のようにして決定された。 アルボマイシンを40係蟻酸に溶解し、85″Cで40
分間加水分解を行うことにより、アグリコン部分と糖部
分とが得られた。アグリコン部分は、薄層クロマトグラ
フィー、紫外部吸収スペクトル、マススペクトルおよび
核磁気共鳴スペクトル等の解析にLす、Wiley、
P、F、らが報告(J、 Am、Chem、 Soc、
、 99,542〜549 (1977) )している
ノガラマイシンのアグリコン部分であるノガラロール(
Nogalarol)であることが判明した。 糖部分は、1)(−NMRスペクトルのデカップリング
により、ジギノース、デシロニトロースおよび2−デオ
キシフコースを構成糖とするものであると判明した。 アルボマイシンの13C−NMRスペクトルに於いて、
アグリコンの4.6.7.2′および4′位のシグナル
をセレクテイプ・デカップリングなどにより帰属し、こ
れらのシグナル゛のケミカルシフトを文献値(J、Am
、 Chem、 Soc、、99..542(1977
) )と比較することにより、アルボマイシンはアグリ
コンの4′位および7位にそれぞれ糖鎖Rニオ、1:
ヒR2を有していることが判明した。 顯 アルボマイシンを5 ’% Pd−BaSO4にて水素
気流下で接触還元に付すことにより、7位の結合が切れ
て赤色の化合物(イ)と無色の化合物(ロ)とが得られ
る。(イ)および(ロ)の各物質は、各々 C−NMf
tスペクトル、’H−Nll/IRスペクトル、および
マススペクトルを解析することにより、以下の構造を有
することが判明した。 物質(イ)と物質(ロ)との7位における結合はαであ
ることがIH−NMRスペクトルにより判明しているの
で、アルボマイシンの構造は式(1)のように決定され
た。」 (4)同第12頁第11行 「その糖部分の構造が解明できれば」を削除。 (5)明細書の下記の個所に「QO)分子量(SIMS
)m/z 1694 (M+H)jを加入する。 (イ)第8頁下から第2行と第1行との間(ロ)第12
頁第6行、と第7行との間(6)明細(の下記の個所の
1(4)元素分析値〜1.8饅」を、 「(4)元素分析値(@:CI(ON 実験値 56.2 6.9 35.1 1.8理論
値 56.7 6.7 34.9 1.7 jと補正
する。 (イ)第7頁第5〜8行 (ロ)第1O頁第12〜15行 1、下記の理化学的性質を有するアンスラサイクリン化
合物アルボマイシン。 (1)色、性状 :橙色粉末 (2)融点 :207〜213℃(分解)(31比
旋i[: (ct)25=+n2’ (cmo、t、
りo 。 Iホルム:メタノール=9:1) (実験値) 56.2 6.9 35.1 1.8
(5)紫外部可視部吸収スペクトル 第1図に示したとおりである。 Cl430FL λ <91%)max c
m 235 (363)、258 (167)、292(6
1)、476(104)0 、1NHCI +CH30
H 235(387)、258(159)、292(61)
、468(110)0 、 lNNaOH+CHaOH 239(302)、294 (41)、543(88)
(6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)
第2図に示した通りである。 (力落剤に対する溶解性 クロロホルム−メタノール混液、ジメチルスル7オキシ
ド、ピリジンおよび塩基性水に易溶。 クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、メチルエチル
ケトン、ブタノール、酢酸ブチル、エタノール、アセト
ンおよび酸性水に可溶。 水に難溶。 (8)薄層クロマトグラフィー (メルク社「シリカゲル60F (254)Jプレート
使用) 展開溶媒 Rf値 ジクロロホルムメタノール 0.
20=8:1 りOOホルム:メタノール=29%アンモニア水 0.
25=8:1:0.1 クロロホルム:メタノール:Il!2 0
.30=8:1:0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.
26=7:2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。 (lO)分子量(SIMS) rv/Z 1694 (M十H) 2、適当な培地にストレプトミセス属のアンスラサイタ
リン化合物アルザマイシン生成能を有する菌株を好気的
に培養し、培養物から下記の理化学的性質を有するアン
スラサイクリン化合物アルボマイシンを採取することを
特徴とするアンスラザイクリン化合物アルゴマイシンの
製造法。 tl)色、性状 :橙色粉末 (2)融点 :207〜213℃(分解)(3)比
旋光度 :〔α)”=+112°(C=0.1、クロロ
ホルム:メタノール=9:1) (4)元素分析値(%):CHON (実験値)56.2 6.9 35.1 1.8(5
)望外部可視部吸収スペクトル 第1図に示したとおりである。 CH30Hλ (81%) maX cm 235 (363)、258(167)、292(61
)、476(104)0、lNHCl+CH30H 235(387)、258(159)、292(61)
、468(110)0 、 lNNaOH+ CH30
H 239(302)、294(41)、543 (88)
(6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)
第2図に示した通りである。 (力溶剤に対する溶解性 クロロホルム−メタノール混液、ジメチルスルフオキシ
ド1.ピリジンおよび塩基性水に易溶。 クロロホルム、メタノール、酢酸フチル、エタノール、
アセトンおよび酸性水に可溶。 水に難溶。 (8)薄層クロマトグラフィー (メルク社[シリカゲル60F (254)jプレート
使用) 展開溶液 Rf値クロロホルム:
メタノール 0.20=8=1 クロロホルム:メタノール: −
0,2529係アンモニア水 =8:1:0.1 クロロホルム:メタノール:酢酸 0.3
0=8:1:0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.
26=7 : 2 : 2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。 (101分子量(SIMS) m/z 1694 (M + H) 手続補正書 昭和59年4月80 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 1、事件の表示 昭和58年 特 許願第35663号 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 鎮麟麦酒株式会社 Z補止−1旬宕 (1)昭和58年8月四日付手続補正書第2頁第7行〜
第7頁第4行口3)〜決定された」」を削除して、明g
t書第9頁第1行〜第10頁第4行の記載を元へ戻す。 (2)明細書第9頁第1行〜第10頁第4行「アンスラ
サイクリノ化合物アルゴマイン7〜判った。」を、下記
の通りに補正する。 化学(i4造 本発明によるアンスラサイクリ/化合物アルゴマインン
は、下記の式(I)で示される化合構造この化学構造は
、下記のようにして決定された。 アルゴマイア/を40%蟻酸に母解し、85℃で40分
間加水分解を行うことにより、アグリコン部分と糖部分
とが得られた。アグリコン部分は、薄層クロマトグラフ
ィー、紫外部吸収スペクトル、マススペクトルおよび核
磁気共鳴スペクトル等の解析により、後記の式(A)で
示される化学構造を有するものであることが判明した(
ただし、式中のR□およびR2は、それぞれ水素な示す
)。 糖部分は、1H7NMRスペクトルのデカップリングに
より、ジギノース、デ/7ロニトロースよび2−デオキ
ノフコースを構成糖とするものであると判明した。 アルゴマイア/の C−NMRスペクトルに於いて、ア
グリコ/の4.6.7.2′および4′位のシグナルを
セレクティブ・デカップリングなどにより帰属し、これ
らのシグナルのケミカルジフトをアグリコンの対応する
データと比較することにより、アルボマイシンはアグリ
コンの4′位および7位にそれぞれ糖鎖R□およびR2
を有してV≧ることが判明した。 2 アルボマイシンを5%pa−BaSO4にて水素気流下
で接触還元に付すことにより、7位の結合が切れて赤色
の化合物(イ)と無色の化合物(ロ)とが得られる。(
イ)および仲)の各物質は、各々 C−間スペクトル、
”H−NIIIIRスペクトル、およびマススペク
トルを解析することにより、以下の構造を有することが
判明した。 A13+ ( 物質(イ)と物質−)との7位における結合はαである
ことが1H−NMRスペクトルにより判明しているので
、アルゴマイア/の構造は式(I)のように決足された
。」 (3)明細!を第5頁な、下記の通りに補正する。 行 補正前 補正後 11 4% 0.4% 12 10% 1.0% 134% 0.4% 19 ナイアミン ナイア7/受託番号変
更届 昭和9年2月JZ日 特許庁長官若杉和夫殿 1、事件の表示 昭和58年特許願第35663号 2、発明の名称 新規物質アルボマイシン 3、手続をした者 事件との関係 特許出願人 鎮麟麦酒株式会社 4、代理人 工業技術院微生物工業技術研究所 6、旧受託番号 微工研菌寄第6865号 9、添付書類の目録
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ■、下記の理化学的性質を有するアンスラサイクリン化
合物アルボマイシン。 (1)色、性状 :橙色粉末 (2)融点 :207〜213℃(分解)(3)比
旋光度 :〔α’:l”5=+112’ (C= 0.
1、クロロホルム:メタノール−9=1) (4)元素分析値: C: 56.2チ(実験値)H:
6.9% 0 : 35.IL% N:1.8% (5)紫外部可視部吸収スペクトル 第1図に示したとおシである。 CH30HλmaX(FJ3:) 235 (363)、258(167)、292(61
)、476(104)0 、 INHCl +CH30
H 235(387)、258 (159)、292(61
)、468(110)0 、 lNNaOH+CH30
H 239(302)、294(41)、523(88)(
6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)第
2図に示した通シである。 (7)溶剤に対する溶解性 クロロホ代ムーメタノール混液、ジメチルスルフオキシ
P1ピリジンおよ研縫性水に易溶。 クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、メチルエチル
ケトン、ブタノール、酢酸メチル、エタノール1、アセ
トノおよび酸性水に可溶。 水に難溶。 (8)薄層クロマトグラフィー (メルク社[シリカゲル60FC25411プレート使
用)展開だ媒 Rf値ジクロロホ
ルムメタノール 0.20=8:1 =8 : 1 : 0.1 クロロホルム:メタノール:酢酸0.30=8:1:0
.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.26=
7:2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。 2、適当な培地にストレプトミセス属のアンスラサイク
リン化合物アルボマイシン生成能を有する菌株を好気的
に培養し、培養物から下記の理化学的性質を有するアン
スラサイクリン化合物アルボマイシンを採取することを
特徴とするアンスラサイクリン化合物アルボマイシンの
製造法。 (1)色、性状 :橙色粉末 (2)融点 =207〜213℃(分解)(3)比
旋光度 :〔α〕”=+112°(C=0.1、りロロ
ホルム:メタノール=9:1) (4)元素分析値: c : 56.2チH:6.9チ 0 : 35.1% N:1.8チ (5)紫外部可視部吸収スペクトル 第1図に示したとおりである。 CH30Hλmax(81%) グm 235(363)、258(167)、292(61)
、476(104)0 、1 NHC1+ CH30H 235(387)、258(159)、292(61)
、468(110)0 、 I NNaOH+CH30
H 239(302)、294(41)、523(88)(
6)赤外線吸収スペクトル(臭化カリウム法で測定)
第2図に示した通りである。 (7)溶剤に対する溶解性 クロロホルム−メタノール混液、ジメチルスルフオキシ
ド、ピリジンおよび塩基性水に易溶。 クロロホルム、メタノール、酢酸ブチル、エタノール、
アセトンおよび酸性水に可溶。 水に難溶。 (8)薄層クロマトグラフィー (メルク社[シリカゲル60 F (254)Jプレー
ト使用)展開溶媒 旦l クロロホルム:メタノール 0.20=8:
1 クロロホルム:メタノール: 0.2529
チアンモニア水 =8:l:0.1 クロロホルム:メタノール:酢酸0.30=8 : 1
: 0.1 クロロホルム:ベンゼン:メタノール 0.26
=7:2:2 (9)核磁気共鳴スペクトル(400メガヘルツ、重ク
ロロホルム−重メタノール中) 第3図に示した通りである。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP58035663A JPS59159786A (ja) | 1983-03-04 | 1983-03-04 | 新規物質アルゴマイシン |
US06/583,180 US4598146A (en) | 1983-03-04 | 1984-02-24 | Compound, arugomycin |
CA000448598A CA1207693A (en) | 1983-03-04 | 1984-03-01 | Compound, arugomycin |
DE8484102290T DE3468029D1 (en) | 1983-03-04 | 1984-03-03 | Novel compound, arugomycin |
EP84102290A EP0121121B1 (en) | 1983-03-04 | 1984-03-03 | Novel compound, arugomycin |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP58035663A JPS59159786A (ja) | 1983-03-04 | 1983-03-04 | 新規物質アルゴマイシン |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS59159786A true JPS59159786A (ja) | 1984-09-10 |
Family
ID=12448105
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP58035663A Pending JPS59159786A (ja) | 1983-03-04 | 1983-03-04 | 新規物質アルゴマイシン |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
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EP (1) | EP0121121B1 (ja) |
JP (1) | JPS59159786A (ja) |
CA (1) | CA1207693A (ja) |
DE (1) | DE3468029D1 (ja) |
Family Cites Families (1)
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---|---|---|---|---|
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-
1983
- 1983-03-04 JP JP58035663A patent/JPS59159786A/ja active Pending
-
1984
- 1984-02-24 US US06/583,180 patent/US4598146A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-03-01 CA CA000448598A patent/CA1207693A/en not_active Expired
- 1984-03-03 DE DE8484102290T patent/DE3468029D1/de not_active Expired
- 1984-03-03 EP EP84102290A patent/EP0121121B1/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0121121B1 (en) | 1987-12-09 |
CA1207693A (en) | 1986-07-15 |
EP0121121A3 (en) | 1984-12-12 |
US4598146A (en) | 1986-07-01 |
DE3468029D1 (en) | 1988-01-21 |
EP0121121A2 (en) | 1984-10-10 |
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