JPS59135886A - ビリルビン・オキシダ−ゼの製造法 - Google Patents
ビリルビン・オキシダ−ゼの製造法Info
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- JPS59135886A JPS59135886A JP58010149A JP1014983A JPS59135886A JP S59135886 A JPS59135886 A JP S59135886A JP 58010149 A JP58010149 A JP 58010149A JP 1014983 A JP1014983 A JP 1014983A JP S59135886 A JPS59135886 A JP S59135886A
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- Japan
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- bilirubin
- enzyme
- oxidase
- bilirubin oxidase
- culture
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/001—Oxidoreductases (1.) acting on the CH-CH group of donors (1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y103/00—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3)
- C12Y103/03—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3) with oxygen as acceptor (1.3.3)
- C12Y103/03005—Bilirubin oxidase (1.3.3.5)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はスエヒロタケ属(Schizophyllum
)に属する4@−f−菌をii2 Xし、ビリルビン
・オキシダーゼを制造する15法に関する。
)に属する4@−f−菌をii2 Xし、ビリルビン
・オキシダーゼを制造する15法に関する。
ビリルビンはヘモグロビンより011液中に生成する故
色物質である。II〕[清中のビリルビンを迅速かつI
E確に検出することは、人間の病気(たとえば黄柏)の
状悼を医学的に訪問するのに非常に重要である。即ち音
珀の患者では血清中のビリルビンが異常に増加するので
、血清中のビリルビンを測定することにより黄柏の程度
が診断可能である。
色物質である。II〕[清中のビリルビンを迅速かつI
E確に検出することは、人間の病気(たとえば黄柏)の
状悼を医学的に訪問するのに非常に重要である。即ち音
珀の患者では血清中のビリルビンが異常に増加するので
、血清中のビリルビンを測定することにより黄柏の程度
が診断可能である。
ビリルビン・オキシダーゼに関するI+)初σ、)報告
はアール11プロ5ルセン(R,Brodersen
)おヨヒヒ−”ボルフ ルス(P、Bortel−+q
)によて)でなされ、ビリルビンかモルモットの1I
i4から屯p;iIした不溶11″のビリルビン拳オキ
シターゼによりビリベルジンへ1酸化された(ユアロピ
アン・ジャーナル・Aブーバイオケミストリー(Kur
op。
はアール11プロ5ルセン(R,Brodersen
)おヨヒヒ−”ボルフ ルス(P、Bortel−+q
)によて)でなされ、ビリルビンかモルモットの1I
i4から屯p;iIした不溶11″のビリルビン拳オキ
シターゼによりビリベルジンへ1酸化された(ユアロピ
アン・ジャーナル・Aブーバイオケミストリー(Kur
op。
J、Biocbom ) ¥g 10巻第468 ii
(1969イI)〕。
(1969イI)〕。
ところが般I斤、ミロセシウム;j↓に属するミロセシ
ウム轡ベルカリアMT −1株(M3rrotheci
umVerrucaria、 MT −1)がビリルビ
ン・オキシダーゼを生産すること゛が見出され、培WI
+’液より得られた精製酵素はビリルビンを酸比してビ
リベルジンを生成したことか報告されている〔アグリカ
ルチュラル−アンド・バイオロジカル・ケミストリー(
ABric、Biol、Ohcm )第45巻第238
5頁(1981年)」。
ウム轡ベルカリアMT −1株(M3rrotheci
umVerrucaria、 MT −1)がビリルビ
ン・オキシダーゼを生産すること゛が見出され、培WI
+’液より得られた精製酵素はビリルビンを酸比してビ
リベルジンを生成したことか報告されている〔アグリカ
ルチュラル−アンド・バイオロジカル・ケミストリー(
ABric、Biol、Ohcm )第45巻第238
5頁(1981年)」。
ビリルビン・オキシダーゼは血清中のヒリ)Iiビン以
外の被検体を分析する場合に測定(il!iの誤差要因
となるビリルビンを除去するのにも有用である。liI
Iち、面清中のグルコースあるいはコレスデD−)しな
と゛を+f’ll 定する1%合、クルコース・オキシ
ダーゼ、コレスプロール−オキシダーゼなどf[n[清
1こ作用さ)J′、生成する過r1つ化水素をパーメキ
シダーゼC捕獲する比色法が日常検査法としてh)も1
1.1川されている。特に4−アミノアンLピリンフエ
/−ルを用いる発色法は簡単かつ迅速の1−1試糖の安
定性の而から、酵素法の主流となってきている。この比
色法は生成する赤rt5キノンQgを500 nm で
測定するのであるが、111■清中のビリルビンの存(
’I:は負の誤差をq・える。そこで、あらかじめビリ
ルビン・オキ・ンダーゼをflitン−11こイ乍用さ
ぜ、ヒ゛リルビンを除去した後、It′11清にグルコ
ース・オキシダーゼあるいはコレステロールψ第1シダ
ーゼを作用させれば、I11+清[4コの正錦なグルコ
ース値あるいはコレステロール値を得るこ々ができる。
外の被検体を分析する場合に測定(il!iの誤差要因
となるビリルビンを除去するのにも有用である。liI
Iち、面清中のグルコースあるいはコレスデD−)しな
と゛を+f’ll 定する1%合、クルコース・オキシ
ダーゼ、コレスプロール−オキシダーゼなどf[n[清
1こ作用さ)J′、生成する過r1つ化水素をパーメキ
シダーゼC捕獲する比色法が日常検査法としてh)も1
1.1川されている。特に4−アミノアンLピリンフエ
/−ルを用いる発色法は簡単かつ迅速の1−1試糖の安
定性の而から、酵素法の主流となってきている。この比
色法は生成する赤rt5キノンQgを500 nm で
測定するのであるが、111■清中のビリルビンの存(
’I:は負の誤差をq・える。そこで、あらかじめビリ
ルビン・オキ・ンダーゼをflitン−11こイ乍用さ
ぜ、ヒ゛リルビンを除去した後、It′11清にグルコ
ース・オキシダーゼあるいはコレステロールψ第1シダ
ーゼを作用させれば、I11+清[4コの正錦なグルコ
ース値あるいはコレステロール値を得るこ々ができる。
本発明者らは1.Z述したビリルビン。オギシター=ゼ
生産菌以外で担子菌の生産するビリルビン・オキシダー
ゼについで検ホjを1Rね、ある種の担子菌ろく培養液
中に強力なビリルビン拳オキシダーゼ発生産することを
知り、本発明を完成した。
生産菌以外で担子菌の生産するビリルビン・オキシダー
ゼについで検ホjを1Rね、ある種の担子菌ろく培養液
中に強力なビリルビン拳オキシダーゼ発生産することを
知り、本発明を完成した。
本2j6明に使用されるLEA T−閑はスエヒロタケ
属にξ1する菌株であり、例えばスエヒロタケ〔シゾフ
ィラム管コミューンK −1,7(Schizophy
llumOommune K、 −17))である。本
菌株は京都市岩倉にて枯木−1−に群生していたf′夷
体より分離され メこ 。
属にξ1する菌株であり、例えばスエヒロタケ〔シゾフ
ィラム管コミューンK −1,7(Schizophy
llumOommune K、 −17))である。本
菌株は京都市岩倉にて枯木−1−に群生していたf′夷
体より分離され メこ 。
本菌株の子実体および+にg子の形態的特徴は以−トの
とおりである。
とおりである。
傘は径が10〜30聰、表面は粗毛を密面し、白色また
は灰色、肉色、褐色などを呈17ている。
は灰色、肉色、褐色などを呈17ている。
ヒゲは白色、灰色、淡い肉色で、その縁は縞に裂け2枚
ずつ重なっているように見える。肉は値質で強靭で、乾
燥すれば収縮するが水分を得れば再び原形にもどる。胞
子文は白色、JJ9d、子は4〜6×1.5〜2声の円
筒+bで平滑である。以上の特徴を伊藤誠也著「日本画
1j′1誌、ip2%第5号J1955年養腎堂出版お
よび今閏六也、本郷次711共著1− ilE・続原色
]」本閃h1図”;j4 Jの;?1ル・1419と比
較すると、本菌はスエヒ「Jタケであることが明瞭であ
る。本1■は工業技やは院南生物工業技体研究所にli
:’(手動・受託州寸哉工(+Jf菌寄v+<6s2s
号として’iFf託されでいる。本閑はl’M成的(こ
ビリルビン・オキシダーゼを生成する能力を(i して
いる。
ずつ重なっているように見える。肉は値質で強靭で、乾
燥すれば収縮するが水分を得れば再び原形にもどる。胞
子文は白色、JJ9d、子は4〜6×1.5〜2声の円
筒+bで平滑である。以上の特徴を伊藤誠也著「日本画
1j′1誌、ip2%第5号J1955年養腎堂出版お
よび今閏六也、本郷次711共著1− ilE・続原色
]」本閃h1図”;j4 Jの;?1ル・1419と比
較すると、本菌はスエヒ「Jタケであることが明瞭であ
る。本1■は工業技やは院南生物工業技体研究所にli
:’(手動・受託州寸哉工(+Jf菌寄v+<6s2s
号として’iFf託されでいる。本閑はl’M成的(こ
ビリルビン・オキシダーゼを生成する能力を(i して
いる。
本発明を更に詳しく説明ずれは、培1iB、にIJll
える栄養it@は使用する閑(l[8うく利11Jシ得
るものであればよく、炭素源としては例えはグリセリン
、グルコース、デンプン、シュクロース、マルトース、
ラクl−−−−ス、デキストリン、油脂1〕゛j、糖蜜
などが利用でき、窒素源としては61′1寸エキス、ペ
プトン、コーンスディープリカー、脱脂大(j、大豆粉
、肉エキスなどが適当である。その他にリンil? l
工x、カリウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、損鉛塩IS
どの無機質および金属塩類を廂えてもよく、咀にはビタ
ミン類、生長促進因子を卯えてもよい。
える栄養it@は使用する閑(l[8うく利11Jシ得
るものであればよく、炭素源としては例えはグリセリン
、グルコース、デンプン、シュクロース、マルトース、
ラクl−−−−ス、デキストリン、油脂1〕゛j、糖蜜
などが利用でき、窒素源としては61′1寸エキス、ペ
プトン、コーンスディープリカー、脱脂大(j、大豆粉
、肉エキスなどが適当である。その他にリンil? l
工x、カリウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、損鉛塩IS
どの無機質および金属塩類を廂えてもよく、咀にはビタ
ミン類、生長促進因子を卯えてもよい。
担子菌を培養するにあ!こり、ビリルビン・オキシダー
ゼの生産litは培養条件により大きく変動するが、一
般に培イIC温度は20〜35゛C1培地のpH4〜7
が良く、3〜10目間(7) 1lTj ’K fW打
培養でビリルビン・オキシダーゼの生産はIi季高に達
する。培養条件は使用する菌株、培+(i!、組成など
に応じ、ビリルビン拳オキシダーゼの生産喰が醍大にな
るように設定するのは当然であ2、。
ゼの生産litは培養条件により大きく変動するが、一
般に培イIC温度は20〜35゛C1培地のpH4〜7
が良く、3〜10目間(7) 1lTj ’K fW打
培養でビリルビン・オキシダーゼの生産はIi季高に達
する。培養条件は使用する菌株、培+(i!、組成など
に応じ、ビリルビン拳オキシダーゼの生産喰が醍大にな
るように設定するのは当然であ2、。
本発明の曲によって生成されたビリルビン−オキシダー
ゼは培養液中にあり、培養p液にイ1機溶媒例えはアル
コール、アセトンなどを50〜80 v/v%加えるこ
と(こよt′)、あるいは沈殿剤例えは硫安、塩化カル
シラi、 y:、iとを20〜80w/v%1111え
ることに2しり沈殿・とじて分離される。
ゼは培養液中にあり、培養p液にイ1機溶媒例えはアル
コール、アセトンなどを50〜80 v/v%加えるこ
と(こよt′)、あるいは沈殿剤例えは硫安、塩化カル
シラi、 y:、iとを20〜80w/v%1111え
ることに2しり沈殿・とじて分離される。
得られた沈殿物より透析あるいはセファデックス処理に
よって脱塩し、粗酵素液を得る。得られた粗酵素液を1
′〜製するには、あらかじめ01Mリン酸緩衝液(pH
7,0) ”C:0衝化したセファデックスG−75の
カラムでゲルM’h%を行ない、活性区分を集める。次
にこの活性区分をあらかじめ0.1Mリン酸緩衝液(p
H7,0)で緩衝化した:o、ycAg−セファデック
ス(Δ−50)のカラムに1吸着させ、吸着物をQ、
3 M IJン酸緩衝液(pH7、O)で溶出して活性
区分を集める。次にこの活性区分を0.01 Mのリン
酸緩衝液(TIH7,0)に透析し、T%析内液をコロ
ジオン++tSで濃縮後ン束結乾燥し、精製酵素粉末を
得る。
よって脱塩し、粗酵素液を得る。得られた粗酵素液を1
′〜製するには、あらかじめ01Mリン酸緩衝液(pH
7,0) ”C:0衝化したセファデックスG−75の
カラムでゲルM’h%を行ない、活性区分を集める。次
にこの活性区分をあらかじめ0.1Mリン酸緩衝液(p
H7,0)で緩衝化した:o、ycAg−セファデック
ス(Δ−50)のカラムに1吸着させ、吸着物をQ、
3 M IJン酸緩衝液(pH7、O)で溶出して活性
区分を集める。次にこの活性区分を0.01 Mのリン
酸緩衝液(TIH7,0)に透析し、T%析内液をコロ
ジオン++tSで濃縮後ン束結乾燥し、精製酵素粉末を
得る。
本発明により得られるビリルビン・オキシダーゼの特徴
的な性質は次のとおりである、(1)作用 本へと明の酵素がビリルビンに作用した114合、ビリ
ベルジンが生成さオ]る。寸た、ビリベルジンをも酸化
して未知の淡紮(!!、物17を生成する。即ち、次の
ような2段階の反応をflIJ!媒する。
的な性質は次のとおりである、(1)作用 本へと明の酵素がビリルビンに作用した114合、ビリ
ベルジンが生成さオ]る。寸た、ビリベルジンをも酸化
して未知の淡紮(!!、物17を生成する。即ち、次の
ような2段階の反応をflIJ!媒する。
ビリルビン+=(12−−> ビリベルジン+H20(
1)1+ + ] ビリへ/l/ ’/ 7 +02−一→’11紫色’I
’Q’lf −1−H*O(2)(2)至適pHおよび
pH安定性 本酵素の至11〜pHは第1図の曲線で表わされるとと
< TIH5,5〜6.0付近に極めて高い活性を有し
ている。4(酵素を4パCにおいてヒれ(’れのpHで
7日間処理したときのpH安定性を第3図に示した。第
3図より明らかなように本酵素はpH1’(で安定であ
る。
1)1+ + ] ビリへ/l/ ’/ 7 +02−一→’11紫色’I
’Q’lf −1−H*O(2)(2)至適pHおよび
pH安定性 本酵素の至11〜pHは第1図の曲線で表わされるとと
< TIH5,5〜6.0付近に極めて高い活性を有し
ている。4(酵素を4パCにおいてヒれ(’れのpHで
7日間処理したときのpH安定性を第3図に示した。第
3図より明らかなように本酵素はpH1’(で安定であ
る。
(3)至適温度および1;^安定性
本酵素の至適温度は第2図の曲線で表わされるごと<
50 C付近に至iN温度を有している。本酵素をpH
(i、oにおいてそれぞれの温度で10分間処理したと
きの熱安定性を第4図に示した。本酵素は45°Cまで
安定であった。
50 C付近に至iN温度を有している。本酵素をpH
(i、oにおいてそれぞれの温度で10分間処理したと
きの熱安定性を第4図に示した。本酵素は45°Cまで
安定であった。
(4)分子は
セファデックスG−100を用いたゲルj濾過により求
めた本酵素の分子■は約58000であった。
めた本酵素の分子■は約58000であった。
(5)等電点
焦点112気泳動より求めた本酵素の等得点は6.0〜
6.1であった。
6.1であった。
(6)阻害剤
本酵素はFe 5NaN3、KON、アスコルビン醪
すI・リウム、Cu2+、o−フェナントロリン、α、
α1−ジピリジル、還元型グルタチオン(各1mM1こ
、にり阻害された。
すI・リウム、Cu2+、o−フェナントロリン、α、
α1−ジピリジル、還元型グルタチオン(各1mM1こ
、にり阻害された。
(7)酵素活性測定法
酵素活性のA111定はビリルビンの460 nmの吸
収の減少より求めた。、Ifllら、オメガ高ビリルビ
ンコントロール血清(米国)\ライド社’t+!J)8
■、リン酸fliMNiifV (pH6,0) 30
0 zmolおよび4当に稀釈1.た酪g液(1,1m
e、反1jれ、滝川3、 Oml!−7E 37°C、
10分間1’Z 15 サl−、ヒ” IJ #ビン(
こ基づ(460nmo>lI’711v、減’、りを測
定した。
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ビリルビン@号オシターゼ1−t]q(<tは37°C
で1分間に460 nmに−1; +:Iる吸’Ig
’i1.0 (l iA少させる酊X jl(:とじて
表示した。
で1分間に460 nmに−1; +:Iる吸’Ig
’i1.0 (l iA少させる酊X jl(:とじて
表示した。
以下に本発明によるビリルビン・オキシダーゼの製造方
法を実施例をもって示すか、本発明が以下の実施例の範
囲のみに限定されるものではない。
法を実施例をもって示すか、本発明が以下の実施例の範
囲のみに限定されるものではない。
実施例 1
グルコース2%、エビオス05%および寒天1.5%(
エビオス培地)の組成の斜面培地にシゾフィラム−コミ
ューンに−17を接種し、25°Cにて1週間静置培養
して種菌とした。グリセリン3%、酵母エキス0.3%
、ペプトン1%、KHtPO40,3%およびMg5O
4・7 H2O0,1%の組成の培地10 (l ml
を500 me容の三角フラスコに分注し、120°C
で20分間殺菌後、冷却し、これに上記の種菌をかきと
り接種して、27 ”Cで7日間、毎分120回転で振
盪培養した。培置終丁後、7濾過して菌体を除き、2戸
液を得た。このビリルビン書オキシダーゼ活性は1.5
屯位/meであった。
エビオス培地)の組成の斜面培地にシゾフィラム−コミ
ューンに−17を接種し、25°Cにて1週間静置培養
して種菌とした。グリセリン3%、酵母エキス0.3%
、ペプトン1%、KHtPO40,3%およびMg5O
4・7 H2O0,1%の組成の培地10 (l ml
を500 me容の三角フラスコに分注し、120°C
で20分間殺菌後、冷却し、これに上記の種菌をかきと
り接種して、27 ”Cで7日間、毎分120回転で振
盪培養した。培置終丁後、7濾過して菌体を除き、2戸
液を得た。このビリルビン書オキシダーゼ活性は1.5
屯位/meであった。
実施例 2
実施例1のエビオス培地で培養したシゾフィラム・コミ
ューンに−17を、クリセリン3%、酵母エキス03%
、ペプトン1%、KH2PO+(1,3%およびMg5
Ot * 7H200,1%組成の培地100m1を分
注して殺菌(120°Cl2O分間)シタ500 me
容の三角フラスコに接種し、27’Cで5日間培養して
、種培養液とした。グリセリン3%、酵母エキス0.3
%、ペプトン0.5%、コ−ンステイーブリカー1%、
脱脂大豆1%、KHgPOa O,3%、MgSO4e
7 H2O0,1%オヨヒ?n i’rJ剤(H本油
脂社111aB−442)0.03%ノ組成ノ”1地1
5 tを3ot容のジャーツアーメンタ−(こ入れ、1
20″Cで20分間殺菌した。冷却後、−I−記の穐培
t ?I’f、を100 ml 接I’llし、27℃
で6ト1間、毎分1()tの通気速度と毎分20゜[1
M転の撹拌速度の条件で培養した。培養終了後、沖過1
−2で菌体を除き、p液を得た。このビリルビン−オキ
シダーゼ活性は6.5 、ip位/ ml (2あっブ
、二。この培−19/riン今131(こ(砲酔丁ンL
ニウノ、をまず50%飽、和になるように加えて不紳1
物を沈殿と17て陰火]、た。その後、その十清イタに
さらに硫酸アンモニウムを70%飽和になるように加え
“C1−昼怜1jF置後、得た齢安沈殿物を大晴の蒸留
水に対しc−・昼夜透析した。透析内2mを凍結乾・操
して得た乾燥粉末を0.1. M IJン酸緩衝液0)
H7,O)に溶解し、同緩衝illで緩山化したセフ7
デツクスG −75CD カラA (5,OX 70印
)でゲル沖過を行なった。活性区分を集め、アl”+
カシメO,JM IJ 71”!81rJ lliン(
’i (pI17.0 ) (”J 様衝化したJ)
[1;Δ[1:−セフ7デツクス(Δ−5())のカラ
ム(5,0X 20αうに吸着さリ−1IIIり青物・
り0、3 M IJン酸にυ雨滴(pH7゜0)で溶出
した。この活″ト14区6)を(1,01MリンC・叩
糸l?棹11り(pH7,0)に対[7て透析後、透析
内液をコロジAン膜で4縮し、凍結乾Ire! +、て
、粕興1酵朱粉木320 ”1gを得た1、この粉末の
比活′11゛けQ :) 、il/。位/rtqであっ
た。
ューンに−17を、クリセリン3%、酵母エキス03%
、ペプトン1%、KH2PO+(1,3%およびMg5
Ot * 7H200,1%組成の培地100m1を分
注して殺菌(120°Cl2O分間)シタ500 me
容の三角フラスコに接種し、27’Cで5日間培養して
、種培養液とした。グリセリン3%、酵母エキス0.3
%、ペプトン0.5%、コ−ンステイーブリカー1%、
脱脂大豆1%、KHgPOa O,3%、MgSO4e
7 H2O0,1%オヨヒ?n i’rJ剤(H本油
脂社111aB−442)0.03%ノ組成ノ”1地1
5 tを3ot容のジャーツアーメンタ−(こ入れ、1
20″Cで20分間殺菌した。冷却後、−I−記の穐培
t ?I’f、を100 ml 接I’llし、27℃
で6ト1間、毎分1()tの通気速度と毎分20゜[1
M転の撹拌速度の条件で培養した。培養終了後、沖過1
−2で菌体を除き、p液を得た。このビリルビン−オキ
シダーゼ活性は6.5 、ip位/ ml (2あっブ
、二。この培−19/riン今131(こ(砲酔丁ンL
ニウノ、をまず50%飽、和になるように加えて不紳1
物を沈殿と17て陰火]、た。その後、その十清イタに
さらに硫酸アンモニウムを70%飽和になるように加え
“C1−昼怜1jF置後、得た齢安沈殿物を大晴の蒸留
水に対しc−・昼夜透析した。透析内2mを凍結乾・操
して得た乾燥粉末を0.1. M IJン酸緩衝液0)
H7,O)に溶解し、同緩衝illで緩山化したセフ7
デツクスG −75CD カラA (5,OX 70印
)でゲル沖過を行なった。活性区分を集め、アl”+
カシメO,JM IJ 71”!81rJ lliン(
’i (pI17.0 ) (”J 様衝化したJ)
[1;Δ[1:−セフ7デツクス(Δ−5())のカラ
ム(5,0X 20αうに吸着さリ−1IIIり青物・
り0、3 M IJン酸にυ雨滴(pH7゜0)で溶出
した。この活″ト14区6)を(1,01MリンC・叩
糸l?棹11り(pH7,0)に対[7て透析後、透析
内液をコロジAン膜で4縮し、凍結乾Ire! +、て
、粕興1酵朱粉木320 ”1gを得た1、この粉末の
比活′11゛けQ :) 、il/。位/rtqであっ
た。
この精製酵亨苓、オメガ高ビリルビンコントロール血清
に作用さ仕た141合、ビリルビン1こ基づ< 460
nm(J)IIs収減少(△A460nm)におよは
1−反I心時間(精製酊青0.2 、eV使使用と酊孝
は(反応時間10分)との関係を検討17た。
に作用さ仕た141合、ビリルビン1こ基づ< 460
nm(J)IIs収減少(△A460nm)におよは
1−反I心時間(精製酊青0.2 、eV使使用と酊孝
は(反応時間10分)との関係を検討17た。
反ii’、i時間6)1 △A 46 (l nm
酵素)f’t()i9) △A 4 n Qnml
oo、048 0.2 0.0
4720 0.093 (1
,40,0912300,1350,60,135 400,168住8 0.170 このように精製酵宋はビリルビンに作用した場合、ビリ
ルビンを減少さぜる性″hを有していた。次1rl 、
精I(櫂酵素を、オメガ高ビリルビンコントロール11
1[清に作用された場合のIJ!&収スペクトル(第5
図とクロロホルム:メタノール−1:1の溶ηρを用い
るI・9層り[17トグノーフイー (第6図の結果か
ら、ビリルビンの酸化物′111 ビリベルジンの生成
が認められた。それ故、本酵素はビリルビンをt%セ化
してヒリ・\ルジンを生11見するビリルビン0オー)
・シダーゼてあった。また、本酵素はビリベルジンをも
1″1夕化しc1未知の淡紫色物質を生成するij4
”j!tをaしていた( 、’、57 F’sに吸収ス
ペクトルを示す′)。
酵素)f’t()i9) △A 4 n Qnml
oo、048 0.2 0.0
4720 0.093 (1
,40,0912300,1350,60,135 400,168住8 0.170 このように精製酵宋はビリルビンに作用した場合、ビリ
ルビンを減少さぜる性″hを有していた。次1rl 、
精I(櫂酵素を、オメガ高ビリルビンコントロール11
1[清に作用された場合のIJ!&収スペクトル(第5
図とクロロホルム:メタノール−1:1の溶ηρを用い
るI・9層り[17トグノーフイー (第6図の結果か
ら、ビリルビンの酸化物′111 ビリベルジンの生成
が認められた。それ故、本酵素はビリルビンをt%セ化
してヒリ・\ルジンを生11見するビリルビン0オー)
・シダーゼてあった。また、本酵素はビリベルジンをも
1″1夕化しc1未知の淡紫色物質を生成するij4
”j!tをaしていた( 、’、57 F’sに吸収ス
ペクトルを示す′)。
第1図は本゛チ明(こより得られるビリルビン・オキシ
ダー(−のpl+と活性の関係をHわし、第21図は温
バフ1と活性の14゛、i係を表わ1゜弔3!−゛1は
ビリルビン・オキシダーゼを4℃においてそれぞれのp
■■で7ト1間処理した後のpI(と活1・1、の関係
を表わし、第4図はpH(i、0においてそれぞれの温
度で10分間処理した後の温度と活性の関係を表わす。 4′fS5図日本酊素を刊メが高ビリ・トビンコントロ
ール血)7(に作用さ1シた+4合の1段数スペクトル
の変化を表わす。第6図は木酢−Kをオメガ高ビリルビ
ンコントCI−ル1!11清に作用させた場合の反応生
成物の−ず・6層り■]7トカーラフイーを表わす。 第7図は本酵素をビリベルジン(テ二作用さlた場合の
+p4 +IVスペクトルの変化を表わす。 特訂出1幀人 )゛<11・lI造株式会化l賜1 第5図 第61 −467− 第7図 波長(nm)
ダー(−のpl+と活性の関係をHわし、第21図は温
バフ1と活性の14゛、i係を表わ1゜弔3!−゛1は
ビリルビン・オキシダーゼを4℃においてそれぞれのp
■■で7ト1間処理した後のpI(と活1・1、の関係
を表わし、第4図はpH(i、0においてそれぞれの温
度で10分間処理した後の温度と活性の関係を表わす。 4′fS5図日本酊素を刊メが高ビリ・トビンコントロ
ール血)7(に作用さ1シた+4合の1段数スペクトル
の変化を表わす。第6図は木酢−Kをオメガ高ビリルビ
ンコントCI−ル1!11清に作用させた場合の反応生
成物の−ず・6層り■]7トカーラフイーを表わす。 第7図は本酵素をビリベルジン(テ二作用さlた場合の
+p4 +IVスペクトルの変化を表わす。 特訂出1幀人 )゛<11・lI造株式会化l賜1 第5図 第61 −467− 第7図 波長(nm)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、 スエヒロタケ属 シダーゼ生産1ffitを培養し、培養物よりビリルビ
ンΦオキシダーゼを採取することを特徴とするビリルビ
ン−オキシダーゼの1堺清法。
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP58010149A JPS59135886A (ja) | 1983-01-25 | 1983-01-25 | ビリルビン・オキシダ−ゼの製造法 |
GB08400674A GB2134116B (en) | 1983-01-25 | 1984-01-11 | Production of bilirubin oxidase |
US06/570,027 US4569912A (en) | 1983-01-25 | 1984-01-11 | Production of bilirubin oxidase |
CA000445892A CA1207261A (en) | 1983-01-25 | 1984-01-23 | Production of bilirubin oxidase |
FR8401031A FR2539757B1 (fr) | 1983-01-25 | 1984-01-24 | Procede de production de bilirubine-oxydase |
DE3402504A DE3402504C2 (de) | 1983-01-25 | 1984-01-25 | Verfahren zur Gewinnung von Bilirubinoxidase |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP58010149A JPS59135886A (ja) | 1983-01-25 | 1983-01-25 | ビリルビン・オキシダ−ゼの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS59135886A true JPS59135886A (ja) | 1984-08-04 |
Family
ID=11742216
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP58010149A Pending JPS59135886A (ja) | 1983-01-25 | 1983-01-25 | ビリルビン・オキシダ−ゼの製造法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4569912A (ja) |
JP (1) | JPS59135886A (ja) |
CA (1) | CA1207261A (ja) |
DE (1) | DE3402504C2 (ja) |
FR (1) | FR2539757B1 (ja) |
GB (1) | GB2134116B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012153791A1 (ja) | 2011-05-11 | 2012-11-15 | 天野エンザイム株式会社 | 染色剤及びその用途 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS59198971A (ja) * | 1983-04-28 | 1984-11-10 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 |
CA1279207C (en) * | 1986-02-27 | 1991-01-22 | William R. Stott | Method and apparatus for trace sample collection |
US4746606A (en) * | 1986-05-27 | 1988-05-24 | Eastman Kodak Company | Bilirubin-specific enzyme and its analytical use |
JP2578430B2 (ja) * | 1987-06-10 | 1997-02-05 | 旭化成工業株式会社 | 新規なビリルビン.オキシダーゼおよびその製造法 |
DE4406379A1 (de) * | 1993-03-24 | 1994-09-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Bilirubinoxidase aus Alfalfa und Verwendung des Enzyms |
JP3734115B2 (ja) * | 1997-02-28 | 2006-01-11 | 日東紡績株式会社 | ビリルビン画分の測定方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4211844A (en) * | 1978-05-19 | 1980-07-08 | Eastman Kodak Company | Bilirubin-specific fungal enzyme preparation |
JPS6012031B2 (ja) * | 1981-03-30 | 1985-03-29 | 天野製薬株式会社 | ビリルビンオキシダ−ゼの製造法 |
DE3239236A1 (de) * | 1982-02-18 | 1983-09-01 | Amano Pharma Co Ltd | Verfahren zur quantitativen bestimmung von physiologischen komponenten in biologischen fluessigkeiten oder gasen |
-
1983
- 1983-01-25 JP JP58010149A patent/JPS59135886A/ja active Pending
-
1984
- 1984-01-11 GB GB08400674A patent/GB2134116B/en not_active Expired
- 1984-01-11 US US06/570,027 patent/US4569912A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-01-23 CA CA000445892A patent/CA1207261A/en not_active Expired
- 1984-01-24 FR FR8401031A patent/FR2539757B1/fr not_active Expired
- 1984-01-25 DE DE3402504A patent/DE3402504C2/de not_active Expired
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012153791A1 (ja) | 2011-05-11 | 2012-11-15 | 天野エンザイム株式会社 | 染色剤及びその用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA1207261A (en) | 1986-07-08 |
DE3402504A1 (de) | 1984-07-26 |
GB2134116A (en) | 1984-08-08 |
US4569912A (en) | 1986-02-11 |
DE3402504C2 (de) | 1986-09-18 |
GB2134116B (en) | 1986-02-12 |
GB8400674D0 (en) | 1984-02-15 |
FR2539757A1 (fr) | 1984-07-27 |
FR2539757B1 (fr) | 1986-04-25 |
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