JPS5912355A - Multilayer analysis material - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain the multilayer analysis material of high measuring accuracy by such an arrangement wherein a reagent layer of uniform quality can be easily formed by using HEPPSO salt or EPPS salt as a multilayer analysis material containing a buffer agent. CONSTITUTION:In an integral type multilayer analysis material containing at least a developing layer, reagent layer and transparent supporting member, a film base of colorless transparent polyethylene terephthalate for photographic material composing a transparent supporting member is coated with layer of reagent composed of coating liquid containing 9.0g/m<2> of deionized gelatin, 0.2g/m<2> of paranonyl phenoxypolyglycydol, 0.17g/m<2> of ethylene diamine tetraacetic acid sodium acetate and 3.68g/m<2> of HEPPSO salt having a general formula containing disodium hydrogen phosphate, dioerythritol, urease and bisvinyl sulfonyl dimethyl ether and buffered at pH 8.0.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、多層分析材料に関するものである。[Detailed description of the invention] The present invention relates to multilayer analytical materials.

さらに詳しくは、本発明は、水性液体、特に生体に起因
する液体（生体液）に含有されている物質の分析のため
に利用される多層分析材料に関するものである。More specifically, the present invention relates to a multilayer analytical material used for analyzing substances contained in aqueous liquids, particularly liquids originating from living organisms (biological fluids).

水、液状食料品、および生体液（たとえば、全血、血し
よう、血清などの血液、りんば液、髄液、唾液、尿）な
どの水性液体に含有されてｌ／）る物質の定量分析法と
しては様々な原理に基づく方法か知られている。Quantitative analysis of substances contained in aqueous fluids such as water, liquid foodstuffs, and biological fluids (e.g., whole blood, plasma, serum, lymph fluid, cerebrospinal fluid, saliva, urine) Methods based on various principles are known.

そのような分析法としては、たとえば、試料液中の分析
対象の物質（被検物質、あるいは基質）の含有量に比例
した着色物質の生成反応もしくは変性反応を測定系にお
いて進行させて、その発色あるいは変色を測定する方法
などの方法が代表的な方法として知られている。そして
、この方法シ±溶液分析法としてのみでなく、乾式分析
法にも利用されている。すなわち、ｐＨ試験紙などのよ
うに紙あるいは吸収性の支持体に被検物質との接触によ
り発色あるいは変色する試薬を金縁させた形態の乾式の
分析用シートなどの分析材料がその例である。Such an analysis method involves, for example, proceeding in the measurement system a reaction that produces a colored substance or a denaturation reaction that is proportional to the content of the substance to be analyzed (analyte or substrate) in the sample solution, and the resulting color development. Alternatively, a method of measuring discoloration is known as a representative method. This method is used not only as a solution analysis method but also as a dry analysis method. An example of such an analysis material is a dry analysis sheet in which a reagent that develops or changes color upon contact with a test substance is attached to a paper or absorbent support such as a pH test paper with a gold border.

また、上記のような乾式の分析シートの形態を基本的に
利用し、かつ、その構成を変えて各種の物質を定量する
ことのできるようにされた多層構成を有する分析材料、
すなわち多層分析材料、が一体型もしくは分、？７　ｏ
ｆ能型なと各種のタイプを含めて既に開発されており、
その改良についても様々な提案がされている。In addition, an analysis material having a multilayer structure that basically utilizes the form of the dry analysis sheet as described above and can change the structure to quantify various substances;
In other words, multi-layer analysis material, integrated or integrated? 7 o
It has already been developed, including f-type and various types.
Various proposals have been made for its improvement.

この内、−・体型多層分析材料は、そのノみ木構成とし
てＩｊ％開層、試薬層および透明支持体を含むものであ
る。Among these, the --type multilayer analysis material includes an Ij% open layer, a reagent layer, and a transparent support as its Nomiki structure.

試薬層は一般に、被検試料との接触、反応（錯体形成あ
るいは弱い相互作用なども含む）などにより発色あるい
は変色する指示薬、もしくは、指示薬および、被検試料
（基質）と接触した場合に反応（錯体形成あるいは弱い
相互作用なども含む）して、指示薬に対して発色もしく
は変色など生起させる反応性の物質を発生させる試薬（
本明細書では基質分解性物質と名付ける）を含有して°
いる。後者の場合において指示薬と基質分解性物質は単
一層からなる試薬層に混在させる場合もあるが、必要に
応じて、それぞれを別々の層、たとえば、指示薬含有層
および基質分解性物質含有層として二層に分離する。試
薬層を二層以上設ける場合には、必要に応じて、各層の
間に分離用の層を設けることもできる。The reagent layer generally contains an indicator that develops or changes color upon contact with the test sample or a reaction (including complex formation or weak interaction), or an indicator that reacts (or reacts) when it comes into contact with the indicator and the test sample (substrate). A reagent that generates a reactive substance (including complex formation or weak interaction) that causes color development or discoloration with respect to the indicator.
herein referred to as substrate-degradable substances).
There is. In the latter case, the indicator and the substrate-degradable substance may be mixed in a single reagent layer, but if necessary, they may be separated into separate layers, for example, an indicator-containing layer and a substrate-degradable substance-containing layer. Separate into layers. When two or more reagent layers are provided, a separation layer may be provided between each layer, if necessary.

ＪＭ開層は一般に、試薬層の上面に設けられる多孔性の
層で、たとえば特開昭５５−１６４３５６り公報、特開
昭５７−１４０５３２号公報なとに開示されているよう
な織物、あるいは特開昭５３−２１６７７号公報、特開
昭５５−９０８５９号−公報なとに開示されているよう
な非繊維等方的多孔性物質などのような液体透過性の材
料から構成される。この展開層上に被検試料を含有する
水性液体試料を少量点着させると、その水性液体試料は
、展開層の面方向に点着量にほぼ比例した面積になるよ
うにして略円形に拡がり、展開層の中位面積に対して実
質的に均一な星を維持しながら、展開層の下側に設けら
れていて展開層と液体的に接触している実質的に均一な
厚さの試薬層中に浸入（この現象を「展開」という）し
、試薬層中に含有されている試薬との接触により発色も
しくは変色反応などが発生する。そして、一定時１ＩＪ
Ｉ経過後にその発色もしくは変色などを比色分析法また
は蛍光光度分析法により測定し、水性液体試料中の被検
物質の濃度を知ることが可能となる。The JM open layer is generally a porous layer provided on the top surface of the reagent layer, and is made of, for example, a fabric as disclosed in JP-A-55-164356 and JP-A-57-140532. It is composed of a liquid-permeable material such as a non-fibrous isotropic porous material as disclosed in Japanese Patent Application Laid-open No. 53-21677 and Japanese Patent Application Laid-Open No. 55-90859. When a small amount of an aqueous liquid sample containing a test sample is spotted on this spreading layer, the aqueous liquid sample spreads in an approximately circular shape in the surface direction of the spreading layer with an area approximately proportional to the amount of spotting. , a substantially uniform thickness of the reagent disposed on the underside of the spreading layer and in fluid contact with the spreading layer while maintaining a substantially uniform star over the median area of the spreading layer. It penetrates into the layer (this phenomenon is called "development"), and upon contact with the reagent contained in the reagent layer, a coloring or color change reaction occurs. And at a certain time 1IJ
After the lapse of time, color development or discoloration is measured by colorimetric analysis or fluorescence photometry, making it possible to determine the concentration of the test substance in the aqueous liquid sample.

透明支持体は一般に、比色分析または蛍光光度分析に用
いられる可視光または紫外線に対して透明な樹脂材料を
フィルムまたはシート状に成形したもので、試薬層の下
側（展開層が付設されている側と反対側）に旧設される
。この透明支持体は、多層分析材料の支持体として機能
するが、試薬層の発色あるいは変色の分光分析を、多層
分析材料を分解することなく行なうことを可能にするよ
うに１通常は、光透過性の材料から形成されている。A transparent support is generally a film or sheet formed from a resin material that is transparent to visible light or ultraviolet light used in colorimetric analysis or fluorescence analysis. (on the opposite side). This transparent support functions as a support for the multilayer analytical material, and is usually made to transmit light so that spectroscopic analysis of color development or color change of the reagent layer can be performed without decomposing the multilayer analytical material. It is made of synthetic material.

このような基本構成を有する一体型多層分析材料につい
ては、既に様々な提案がなされている。Various proposals have already been made regarding integrated multilayer analysis materials having such a basic configuration.

たとえば、特公昭４９−３３８００号公報、特開昭４９
−５３８８８号公報、特開昭５０−１３７１９号公報、
特開昭５１−４０１９１号公報、特開昭５２−３４８８
号公報、特開昭５３−８９７９６号公報、特開昭５３−
１３１０８９号公報などの刊行物には、支持体上に単層
または複層の試薬層が設けられ、さらにその上に非ｍ維
質等方的多孔性展開層が積層された構成からなる−・体
型多層分析材料が開示されている。For example, Japanese Patent Publication No. 49-33800, Japanese Patent Publication No. 49-33800,
-53888 publication, JP-A-50-13719 publication,
JP-A-51-40191, JP-A-52-3488
No. 1, JP-A-53-89796, JP-A-53-89796, JP-A-53-89796.
Publications such as No. 131089 disclose a structure in which a single or multilayer reagent layer is provided on a support, and a non-fibrous isotropic porous spread layer is further laminated thereon. A body shape multilayer analysis material is disclosed.

また、特開昭５５−１６４３５６号公報、特開昭５６−
７０４６０号公報、特開昭５７−６６３５９号公報など
の刊行物には、支持体上に単層または複層の試薬層が設
けられ、さらにその」−に織物製展開層か積層された構
成からなる一体型多層分析材料が開示されている。Also, JP-A-55-164356, JP-A-56-
Publications such as JP-A No. 70460 and JP-A No. 57-66359 have a structure in which a single or multilayer reagent layer is provided on a support, and a textile spreading layer is laminated on top of the reagent layer. An integrated multilayer analytical material is disclosed.

また、特願昭５６−３４３７０号明細書には織物展開層
の代りに有機ポリマーｖＡｒａを含有する抄造紙からな
る展開層を有する構成の一体型多層分析材料が開示され
ている。Further, Japanese Patent Application No. 56-34370 discloses an integrated multilayer analysis material having a spreading layer made of paper containing an organic polymer vAra instead of a textile spreading layer.

本発明は、多層分析材料（特に、一体型多層分析材料）
の試薬層もしくは試薬層に液体的に接触する層に含有さ
れる緩衝剤の改良に関するものであり、少なくとも展開
層、試薬層および透明支持体を含む多層分析材料におい
て、試薬層もしくは試薬層に液体的に接触する層にＮ−
２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−ヒドロキ
シプロパン−３−スルホン酸塩およびＮ−２−ヒドロキ
シエチルピペラジンーＮ’−３−プロパンスルホンＭ用
からなる群から選ばれる緩衝剤が少なくとも一種含有さ
れていることを特徴とする多層分析材料を提供するもの
である。The present invention provides a multilayer analytical material (particularly an integrated multilayer analytical material)
This invention relates to the improvement of a buffer contained in a reagent layer or a layer that is in liquid contact with a reagent layer, and in a multilayer analytical material that includes at least a developing layer, a reagent layer, and a transparent support, N- to the layer in contact with the
Contains at least one buffering agent selected from the group consisting of 2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-hydroxypropane-3-sulfonate and N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-3-propanesulfone M. The present invention provides a multilayer analysis material characterized by:

次に本発明を訂しく説明する。Next, the present invention will be explained in detail.

水性液体、特に生体に起因する液体（生体液）に含有さ
れている物質の分析のために利用される多層分析材料の
代表的な種類としては、生体液中に含まれる含窒素化合
物の分析に利用される一体型多層分析材料がある。従っ
て、本発明を、含窒素化合物分析用の多層分析材料を例
にとって説明する。A typical type of multilayer analytical material used for the analysis of substances contained in aqueous liquids, especially liquids originating from living organisms (biological fluids), is used for the analysis of nitrogen-containing compounds contained in biological fluids. There are integrated multilayer analytical materials utilized. Therefore, the present invention will be explained by taking a multilayer analysis material for nitrogen-containing compound analysis as an example.

たとえば、生体液中に含まれ、その含有形態。For example, the form in which it is contained in biological fluids.

含有量などが生体の健康状態の指針となる含窒素化合物
として、尿素窒素、クレアチニン、アンモニア、尿酸な
どが知られている。Urea nitrogen, creatinine, ammonia, uric acid, etc. are known as nitrogen-containing compounds whose content serves as a guide to the health status of living organisms.

この内、生体液中に含まれている尿素窒素、クレアチニ
ン、アンモニアの含有量を測定することは、腎臓病など
の疾患の診断、および疾患の経過のコンＩ・ロールなど
のおいて非常に重要とされてイル。そのような尿素窒素
、クレアチニン、アンモニアの測定を目的とした多層分
析材料は既に提案されており、その例としては、特開昭
５２−３４８８号公報、特願１沼５６−１７６２７４号
明細書、特願昭５６−１７６２７５号明細書に記載され
ている多層分析材料を挙げることができる。Among these, measuring the contents of urea nitrogen, creatinine, and ammonia contained in biological fluids is extremely important in diagnosing diseases such as kidney disease and controlling the course of the disease. It is said that Il. Such multilayer analytical materials for the purpose of measuring urea nitrogen, creatinine, and ammonia have already been proposed, examples of which include Japanese Patent Application Laid-Open No. 52-3488, Japanese Patent Application No. 1 Numa-56-176274, Examples include the multilayer analytical material described in Japanese Patent Application No. 176275/1982.

一方、血液中に含まれている尿酸は、痛風、腎機能の障
害、白血病、高血圧などの症状において増加する傾向が
あり、これらの疾患の診断指標として有効であるとされ
ている。そのような尿酸の測定を目的とした多層分析材
料も既に提案されており、その例としては、特開昭５３
−２６１８８号公報（たとえば、尿酸をウリカーセで分
解して過酸化水素を発生させることにより尿酸の定量を
行なった実施例３）に記載されている多層分析材料１を
挙げることができる。On the other hand, uric acid contained in the blood tends to increase in symptoms such as gout, impaired renal function, leukemia, and hypertension, and is said to be effective as a diagnostic index for these diseases. Multilayer analytical materials for the purpose of measuring uric acid have already been proposed; examples include Japanese Patent Laid-Open No. 53
For example, the multilayer analysis material 1 described in Japanese Patent No. 26188 (for example, Example 3 in which uric acid was determined by decomposing uric acid with uricase to generate hydrogen peroxide) can be mentioned.

これらの含窒素化合物を測定する場合１通常は含窒素化
合物を酵素などで分解するなどにより、これを′Ｍ＃ア
ンモニアあるいは過酸化水素に変換し、このＭＭアンモ
ニアあるいは過酸化水素が、発色性もしくは変色性試薬
に接触することにより発生する発色もしくは変色などを
分光測定して被検物質の含窒素化合物の定量を行なう方
法を基礎としている。When measuring these nitrogen-containing compounds 1. Usually, the nitrogen-containing compounds are decomposed with an enzyme or the like to convert them into 'M# ammonia or hydrogen peroxide, and this MM ammonia or hydrogen peroxide is It is based on a method of quantifying nitrogen-containing compounds in test substances by spectroscopically measuring the color development or discoloration that occurs upon contact with a color-changing reagent.

そのような方法を基礎とする多層分析材料を、尿素窒素
の測定に利用される多層分析材料を例にとって次に説明
する６ 従来、この尿素窒素の測定は、一般に湿式法あるいは溶
液法と呼ばれる方法により行なわれている。この溶液法
としては、尿素をジアセチルモノオキシムと直接反応さ
せ、生成した化合物の色吸収を分光光度計で測定する方
法が知られている。A multilayer analysis material based on such a method will be explained next, taking as an example a multilayer analysis material used for measuring urea nitrogen.6 Conventionally, this measurement of urea nitrogen has generally been carried out using a method called a wet method or solution method. It is carried out by As this solution method, a method is known in which urea is directly reacted with diacetyl monooxime and the color absorption of the resulting compound is measured using a spectrophotometer.

また、尿素にウレアーゼを作用させて、これを炭酸アン
モニウムに分解し、このアンモニアをＭ離させてネスラ
ー試薬と反応させるが、フェノールと次亜塩素酸塩を用
いて着色インドフェノールに変換し、それぞれ生成した
着色反応生成物を比色定量することにより間接的に尿素
量を測定する方法も知られている。これらの溶液法それ
自体は有用な方法であるが、高価な装置が必要であり、
その測定技術は熟練を要し、また測定時間が長いという
欠点もある。In addition, urea is treated with urease to decompose it into ammonium carbonate, and this ammonia is separated from M and reacted with Nessler's reagent, but it is converted to colored indophenol using phenol and hypochlorite, and each A method of indirectly measuring the amount of urea by colorimetrically quantifying the colored reaction product produced is also known. Although these solution methods are useful in themselves, they require expensive equipment and
The measurement technique requires skill and also has the disadvantage that the measurement time is long.

これらの溶液法の欠点を改良し、尿素窒素測定の簡易化
および迅速化を図り、測定者による個人差をなくすため
に、近年、乾式法が種々提案されている（たとえば、奥
田清、臨床検査、２２巻。In recent years, various dry methods have been proposed in order to improve the shortcomings of these solution methods, simplify and speed up urea nitrogen measurement, and eliminate individual differences between measurement operators (for example, Kiyoshi Okuda, Clinical Laboratory , 22 volumes.

１１号、１２０３〜１２１８　（１９７８年）参照；ま
た、ウレアーゼ活性を有する酵素系とｐＨ指示薬と障壁
形成体とを含有する尿素定量用組成物は特開昭５０−９
３４９４号公報に開示されている）。11, 1203-1218 (1978); a composition for quantifying urea containing an enzyme system having urease activity, a pH indicator, and a barrier former is disclosed in JP-A-50-9.
3494).

乾式法を利用する分析材料の代表的な例としては、試薬
層を、ウレアーゼとアルカリ性緩衝剤とを含有する基質
分解性物質含有層と、ガス状アンモニアを検出する指示
薬含有層とを備え、両層の間にガス状アンモニアのみを
選択的に透過させるような選択透過層を挟む形態で一体
化した多層分析材料がある。A typical example of an analysis material using a dry method includes a reagent layer containing a substrate-degradable substance containing urease and an alkaline buffer, and an indicator-containing layer for detecting gaseous ammonia. There is a multilayer analysis material that is integrated with a selectively permeable layer sandwiching between the layers, which selectively allows only gaseous ammonia to pass through.

たとえば、特開昭５２−３４８８号公報には、選択透過
層としてセルロースプロピオネートバレレート、セルロ
ースアセテートブチレート、セルロースアセテートまた
はポリ（メチルメタクリレ−１・）からなる塗布量０．
１０〜３．５ｇ／ｍ’の均質な層で妨害物質、特に水、
に対して均一な不浸透性を備えている層（バリヤ一層）
が設けられている構成を有する一体型の多層分析材料が
開示されている。For example, JP-A-52-3488 discloses a permselective layer consisting of cellulose propionate valerate, cellulose acetate butyrate, cellulose acetate, or poly(methyl methacrylate-1.) in a coating amount of 0.
Interfering substances, especially water, in a homogeneous layer of 10-3.5 g/m'
A layer that is uniformly impermeable to (single barrier layer)
An integrated multilayer analytical material is disclosed having a configuration in which a.

また、特願昭５６−１７６２７４号明細書および特願昭
５６−１７６２７５号明細書には、透明支持体上に（ｉ
）カス状アンモニア用の指示薬層（１１）液体遮断層、
（ｉｉｉ）アルカリ性緩衝剤を含有し必要により基質と
反応してアンモニアを生成することの出来る試薬を有す
る試薬層、および（ｉｖ）展開層がこの順に一体に接着
積層され姓液体試料中のアンモニア又はアンモニア生成
基質分析用一体型多層分析材料において、液体遮断層が
使用条件下に液体試料および水を実質的に遮断しかつガ
ス状アンモニアを透過させる空気孔を構成する層として
メンブランフィルタ、織物または網状物を用いる事を特
徴とする液体試料中のアンモニア又はアンモニア生成基
質分析用−・体４り多層分析材料が開示されている。Furthermore, in Japanese Patent Application No. 56-176274 and Japanese Patent Application No. 56-176275, it is stated that (i)
) indicator layer for scum ammonia (11) liquid barrier layer;
(iii) a reagent layer containing an alkaline buffer and having a reagent capable of reacting with a substrate to produce ammonia if necessary, and (iv) a developing layer that are adhesively laminated together in this order to remove ammonia or In integrated multilayer analytical materials for the analysis of ammonia-forming substrates, the liquid barrier layer is a membrane filter, woven or reticulated layer that substantially blocks liquid sample and water under conditions of use and constitutes air pores that allow gaseous ammonia to pass through. A four-layer multilayer analytical material for analyzing ammonia or ammonia-generating substrates in a liquid sample is disclosed.

上記のような多層分析材料の基質分解性物質含イｊ層層
は、親水性あるいは水溶性のバインダー中に、原木、ク
レアチニンのようなアンモニア生成基質と反応してアン
モニアを生成するウレアーセ、り、レアチニンディミナ
ーゼなとの酵黍を主体とする基質分解性物質、および基
質と試薬との反応を円滑に進行させ、かつ反応により生
成するアンモニアをガス状に効率よ＜’Ｅｔａさせるだ
めのアルカリ性緩衝剤などが含まれている。The substrate-degradable substance-containing layer of the multilayer analysis material as described above is composed of raw wood, urease, which produces ammonia by reacting with an ammonia-producing substrate such as creatinine, etc., in a hydrophilic or water-soluble binder. Substrate-degradable substances mainly composed of yeast such as reatinine diminase, and alkaline buffers that allow the reaction between the substrate and reagent to proceed smoothly and efficiently convert the ammonia produced by the reaction into gaseous form. Contains drugs, etc.

一般に生物化学の研究の領域において、緩衝剤としては
、Ｄａｔａ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ、　Ｒ。Generally, in the field of biochemical research, Data for Biochemical Re
5earch, R.

Ｍ、Ｃ：、　Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａｔ　編、第２版、
　　０ｘｆｏｒｄ　ａｔ　ｔｈｅＣＬＡＲＥＮＤＯＮ　
ＰＲＥＳＳ（１９６９）　ｐ、　４７６〜５０８、に記
載されているような各種の無機化合物よりなるものが使
用されている。しかしながら、それらのプ！に機化合物
よりなる緩衝剤は、多層分析材料の試薬層において緩衝
剤として使用するためには、緩衝作用を有する１）Ｈ領
域の範囲、および試薬層に均一に分散して基質と試薬と
の反応を円滑に進行させ、かつ反応により生成するアン
モニアなどを効率よく遊＃させる機能、あるいは指示薬
の発色もしくは変色などを再現性良く発現させる機能に
おいて充分満足できるとは言い難い。M, C:, edited by Dawson et at, 2nd edition,
0xford at theCLARENDON
Various inorganic compounds such as those described in PRESS (1969) p. 476-508 are used. However, those Pu! In order to be used as a buffer in the reagent layer of a multilayer analysis material, a buffer consisting of a chemical compound must have a buffering effect (1) within the H region and be uniformly dispersed in the reagent layer to maintain the relationship between the substrate and reagent. It cannot be said that the functions of making the reaction proceed smoothly and efficiently releasing ammonia, etc. produced by the reaction, or of making the indicator develop or change color with good reproducibility are not fully satisfactory.

以Ｊ二のような理由から多層分析材軸の試薬層において
作用する緩衝剤としては、通常ｒＴｒｉｓＪと呼ばれて
いるトリス（ヒドロキシメチル）アミ／メタンなどが一
般的に用いられている。しかしながら、こノＴｒｉｓは
、Ｂａｔｅｓ、　ｅｔ　ａｌ、　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　３３．１２８５（１９８０）
などに報告されているように空気中の炭酸ガスを吸収す
る傾向があるため、多層分析材料の保存性および測定値
の精度なとに問題がある。For the following reasons, tris(hydroxymethyl)amino/methane, commonly referred to as rTrisJ, is generally used as a buffering agent that acts in the reagent layer of the multilayer analysis material shaft. However, this Tris, Bates, et al.
Chemistry, 33.1285 (1980)
As reported in et al., there are problems with the storage stability of multilayer analysis materials and the accuracy of measured values because they tend to absorb carbon dioxide gas from the air.

このため、たとえば、多層分析材料の一種である成木窒
素分析用多層分析材料を開示した前述の特開昭５２−３
４８８号公報、特願昭５６−１７６２７４号明細書およ
び特願昭５６−１７６２７５号明細書の各々の実施例に
おいては、通常ＢｉｃｉｎｅとＯｆ′ばれるＮ、Ｎ−ビ
ス（２−ヒドロキシエチル）クリシンか用いられている
。ごのＢｉｃｉｎｅは、一般にグツド（Ｇｏｏｄ）の緩
衝剤として知られておりＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　
Ｖｏｌ、、　Ｎｏ、２．４８７〜４７７　（１９６Ｂ）
に記載されている生物化学の研究において使用され得る
有機化合物系の緩衝剤の−っである。しかし、このＢｉ
ｃｉｎｅもまた、水、特に試薬層もしくは試薬層に液体
的に接触する層の支持構造体となる物質（バインダー）
、たとえは、ゼラチン、ポリアクリルアミドなど、そし
て基質分解性物質および／または指示薬などを含有する
水溶液に対する溶解性が低いとの欠点がある。For this reason, for example, the above-mentioned Japanese Patent Laid-Open No. 52-3 discloses a multilayer analytical material for nitrogen analysis of adult trees, which is a type of multilayer analytical material.
488, Japanese Patent Application No. 56-176274 and Japanese Patent Application No. 56-176275, N,N-bis(2-hydroxyethyl)chrysine, commonly referred to as Bicine, It is used. Bicine is generally known as Good's buffer and is used in biochemistry,
Vol,, No, 2.487-477 (196B)
These are organic compound-based buffers that can be used in biochemical research as described in . However, this Bi
Cine also refers to water, especially a substance (binder) that serves as a support structure for a reagent layer or a layer that is in liquid contact with the reagent layer.
For example, they have the disadvantage of low solubility in aqueous solutions containing gelatin, polyacrylamide, etc., as well as substrate-degradable substances and/or indicators.

試薬層は、通常、そのような支持構造体と各種試薬を含
有する水溶液（または水分散液）を透明支持体の表面に
塗布することにより形成するが、そこに含有させる緩衝
剤の溶解性が充分でないと、試薬層の塗布操作時あるい
は、塗布層の乾燥時などにおいて緩衝剤の局部的な析出
などが発生し、均質な塗布層、すなわち均質な試薬層の
形成を妨げる結果となる。不均質な試薬層は、測定精度
を下げるなど、好ましくない影響を与えるため、そのよ
うな不均質な試薬層の生成を防ぐ必要がある。この理由
から、多層分析材料を製造する工程において、塗布操作
を行なうだめの試薬層形成用塗１ｊｉ溶１合の濃度、温
度、塗′Ｉ＋ｉ操作条件などを厳しくゞに理する必要が
あり、多層分析材料の製造上において大きな障害となる
。The reagent layer is usually formed by applying an aqueous solution (or aqueous dispersion) containing such a support structure and various reagents to the surface of a transparent support, but depending on the solubility of the buffer contained therein. If it is not sufficient, local precipitation of the buffer will occur during the coating operation of the reagent layer or during the drying of the coating layer, resulting in hindering the formation of a homogeneous coating layer, that is, a homogeneous reagent layer. Since a non-uniform reagent layer has undesirable effects such as reducing measurement accuracy, it is necessary to prevent the formation of such a non-uniform reagent layer. For this reason, in the process of manufacturing multilayer analytical materials, it is necessary to strictly control the concentration, temperature, and operating conditions of the reagent layer-forming coating 1ji solution 1 to perform the coating operation. This poses a major obstacle in the production of analytical materials.

本発明者は、公知の多数の緩衝剤を検討した結果、その
内で特に、一般式： ［］ （ただし、Ｍはリチウム、ナトリウム、カリウムなどの
アルカリ金属イオンあるいはアルカリ土類金属イオンを
表わす）を有するＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン
−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパン−３〜スルホン酪（Ｈ
ＥＰＰＳＯ）塩、およ（たたし、Ｍは」二記と同義）を
有するＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３
−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）塩が、それぞれ多層
分析材Ｉｔにおける試薬層もしくは試薬層に液体的に接
触する層を形成するためのパインター溶油に溶解性が高
く、かつ、多くの多層分析材料の試薬層において緩衝剤
として使用するために適当な緩衝ＰＨ領領域あるｐＨ７
〜９の緩衝領域を有し、試薬層もしくは試薬層に液体的
に接触する層に均一に分散して、基質と試薬との反応を
円滑に進行させ、さらには、試薬層を基質分解性物質含
有層と指示薬含有層に分割した構成の多層分析材料にお
いては、基質分解性物質含有層にて分解反応により生成
するアンモニアなどを効率よく遊離させて指示薬含有試
薬層にそれを移動させる機能においても充分満足できる
ことを見いだし、本発明に到達したものである。As a result of studying a large number of known buffering agents, the present inventor found that among them, the general formula: [] (where M represents an alkali metal ion or an alkaline earth metal ion such as lithium, sodium, or potassium) N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-hydroxypropane-3-sulfonbutyric (H
EPPSO) salt, N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-3
- Propane sulfonic acid (EPPS) salts are highly soluble in Painter's oil for forming the reagent layer or the layer in liquid contact with the reagent layer in the multilayer analytical material It, respectively, and in many multilayer analytical materials. pH 7 with a suitable buffering pH range for use as a buffer in the reagent layer
It has a buffer region of ~9 and is uniformly dispersed in the reagent layer or a layer in liquid contact with the reagent layer to facilitate the reaction between the substrate and the reagent, and furthermore, the reagent layer is coated with a substrate-degradable substance. In a multilayer analytical material that is divided into a containing layer and an indicator-containing layer, the function of efficiently liberating ammonia, etc. generated by a decomposition reaction in the substrate-degradable substance-containing layer and transferring it to the indicator-containing reagent layer is also important. We have found that this is completely satisfactory and have arrived at the present invention.

本発明の多層分析材料において緩挿１剤として用いるＨ
ＥＰＰＳＯおよびＥＰＰＳは、ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１０４　、３００〜３１０（
１９８０）に記載されている公知の化合物である。H used as a slow insertion agent in the multilayer analysis material of the present invention
EPPSO and EPPS are AnalyticalB
iochemistry, 104, 300-310 (
It is a known compound described in (1980).

本発明の緩挿（剤を含む多層分析材料は、Ｑｊｒに、ア
ンモニア生成基質と基質分解性物質との反応により生成
するアンモニア、あるいは過酸化水素生成基質と基質分
解性物質との反１心により生成する過酸化水素を４１１
１定することによりアンモニア生成）、（質あるいは過
酸化水素生成基質を間接的に測定するのに有利に使用す
ることができる。The multilayer analysis material containing a slow insertion agent of the present invention has Qjr containing ammonia generated by the reaction between an ammonia-generating substrate and a substrate-degradable substance, or by an anti-uniform reaction between a hydrogen peroxide-generating substrate and a substrate-degradable substance. The hydrogen peroxide produced is 411
It can be advantageously used to indirectly measure the quality of ammonia production (or hydrogen peroxide production) by determining the amount of hydrogen peroxide produced.

そのようなアンモニア生成基質と基質分解性物質との紹
合せとしては、たとえば、尿素／ウレアーゼ（ＥＣ３，
５，１’、５）、　クレアチニン／クレアチニンデイミ
ナーゼ（ＥＣ３，５，４゜２１）、アミノ醇／アミノ酸
デヒドロゲナーセ（ＥＣ１，４，１，５）、　　アミノ
酸／アミノ酸オキシダーセ（ＥＣ１，４，３，２）、ア
ミノ酸／アンモニアリアーゼ（ＥＣ４，３，１に属する
酵素）、アミン／アミンオキシダーゼ（ＥＣ１，４，３
，４；１．４．３．６）、　　ジアミン／アミンオキシ
ダーゼ（ＥＣ１，４，３，４，１，４，３，６）、グル
コースおよび燐アミタート／燐アミダートヘキンース燐
トランスフェラーセ（ＥＣ２，７，１，６２）、ＡＤＰ
／刀ルパミン酸塩キナーゼ（ＥＣ２，７，２，２）およ
び燐酸カルバモル、酸アミド、ヌクレオシ（ζ／デアミ
ナーゼ（ＥＣ３，５，４に属する酵素）、ヌクレオチド
／デアミナーゼ（ＥＣ３，５，４に属する酵素）、グア
ニン／グアナーゼ（ＥＣ３，５，４，３）などを挙げる
ことができる。すなわち、「アンモニア生成基質」とは
、特定の試薬（基質分解性物質）と反応して、それ自体
からアンモニアを生成するか、あるいは複数個の反応系
を経由してアンモニアを生成するような化合物もしくは
化合物群を意味する。Examples of the combination of such an ammonia-producing substrate and a substrate-degradable substance include urea/urease (EC3,
5,1',5), creatinine/creatinine deiminase (EC3,5,4゜21), amino acid/amino acid dehydrogenase (EC1,4,1,5), amino acid/amino acid oxidase (EC1,4,3,2 ), amino acid/ammonia lyase (enzyme belonging to EC4,3,1), amine/amine oxidase (EC1,4,3
, 4; 1.4.3.6), Diamine/Amine Oxidase (EC1,4,3,4,1,4,3,6), Glucose and Phosphorus Amitate/Phosphorus Amitate Hequinose Phosphorus Transferase (EC2 ,7,1,62),ADP
/ lupamate kinase (EC2, 7, 2, 2) and carbamole phosphate, acid amide, nucleosinase (ζ/deaminase (enzyme belonging to EC 3, 5, 4), nucleotide/deaminase (enzyme belonging to EC 3, 5, 4) ), guanine/guanase (EC3, 5, 4, 3), etc. In other words, an "ammonia-producing substrate" is a substance that reacts with a specific reagent (substrate-degradable substance) to remove ammonia from itself. A compound or a group of compounds that generate ammonia or that generate ammonia through multiple reaction systems.

また、過酸化水素生成基質と基質分解性物質との組合せ
としては、たとえば、尿酸／ウリカーゼ（ＥＣ１，７，
３，３）、サルコシン／サルコシンオキシダーゼ（ＥＣ
１，５，３，１）、Ｎ−メチルアミノ酸／Ｎ−メチルア
ミノ耐オキシダーゼ（ＥＣ１，５，３，２）、Ｎ６−メ
チル−Ｌ−リジン／Ｎ６−メチル−Ｌ−リシンオキシダ
ーゼ（ＥＣｌ　、　５　、３　、４）などを挙げること
ができる。すなわち、「過酸化水素生成基質」とは、特
定の試薬（基質分解性物質）と反応して、それ自体から
過酸化水素を生成するか、あるいは複数個の反１心系を
経由して過酸化水素を生成するような化合物もしくは化
合物群を意味する。In addition, examples of combinations of hydrogen peroxide-generating substrates and substrate-degradable substances include uric acid/uricase (EC1, 7,
3,3), sarcosine/sarcosine oxidase (EC
1,5,3,1), N-methylamino acid/N-methylamino resistance oxidase (EC1,5,3,2), N6-methyl-L-lysine/N6-methyl-L-lysine oxidase (ECl, 5 , 3, 4), etc. In other words, a "hydrogen peroxide-generating substrate" means that it reacts with a specific reagent (substrate-degradable substance) to generate hydrogen peroxide itself, or that it reacts with a specific reagent (substrate-degradable substance) to generate hydrogen peroxide, or that it reacts with a specific reagent (substrate-degradable substance) to generate hydrogen peroxide, or that it reacts with a specific reagent (substrate-degradable substance) to generate hydrogen peroxide, or that it reacts with a specific reagent (substrate-degradable substance) to generate hydrogen peroxide, or that it generates hydrogen peroxide via multiple anti-uniform systems. A compound or a group of compounds that produce hydrogen oxide.

指示薬としては、′Ｍ＃アンモニアあるいは′Ｍ離通過
酸化水素反応（錯体の形成反応なども含む）して、その
吸収波長に変化を生じるような単一の化合物または複数
の化合物の組合わせ（以下、発色前駆体という）を用い
る。As an indicator, a single compound or a combination of multiple compounds (hereinafter referred to as ``M# ammonia'' or ``M#'') that undergoes a hydrogen oxide reaction (including complex formation reactions) and causes a change in its absorption wavelength. , color precursor) is used.

遊離アンモニアと反応する発色前駆体の例としては、ロ
イコシアニン染料、ニトロ置換ロイコ染料およびロイコ
フタレイン染料のようなロイコ染料、ブロムフェノール
ブルー、プロムクレソールグリーン、ブロムチモールブ
ルー、キノリンブルーおよびロソール酸のようなｐＨ指
示薬；トリアリールメタン系染料前駆体；ロイコベンジ
リデン色素；ジアゾニウム塩とアゾ染料カプラー；塩基
漂白可能染料などを挙げることができる。Examples of color precursors that react with free ammonia include leuco dyes such as leucocyanine dyes, nitro-substituted leuco dyes and leucothalein dyes, bromophenol blue, bromocresol green, bromothymol blue, quinoline blue and rosolic acid. pH indicators such as; triarylmethane dye precursors; leucobenzylidene dyes; diazonium salts and azo dye couplers; and base-bleachable dyes.

遊＃過酸化水素と反応する発色前駆体の例としては、ペ
ルオキシダーゼ（ＥＣｔ、ｔｉ、ｉ。Examples of color precursors that react with free hydrogen peroxide include peroxidase (ECt, ti, i.

７）と３，３°、５．５”−テトラメチルヘンシジンと
の組合せ、ペルオキシダーゼと４．５−ヒス（ｐ−ジメ
チルアミノフェニル）−２−（３’、５゛−ジメトキシ
フェニル）イミダゾールとの組合せ、ペルオキシダーゼ
、フェノール類もしくはナフトール類（たとえば、フェ
ノール、１．７−シヒドロキシナフタレンなど）、およ
び４−アミノアンチピリン類（たとえば、４−７ミノア
ンチピリン、４−アミノ−２，３−ジメチル−１−（２
，４，６−ドリクロロフエニル）−３−ピラノリン−５
−オンなど）からなる組合せなどを挙げることができる
。7) and 3,3°,5.5”-tetramethylhensidine, peroxidase and 4,5-his(p-dimethylaminophenyl)-2-(3′,5′-dimethoxyphenyl)imidazole. peroxidase, phenols or naphthols (e.g., phenol, 1,7-hydroxynaphthalene, etc.), and 4-aminoantipyrines (e.g., 4-7minoantipyrine, 4-amino-2,3-dimethyl- 1-(2
,4,6-drichlorophenyl)-3-pyranoline-5
-on, etc.).

なお、指示薬は、基質もしくは基質の分解生成物と反応
して、その分光特性が変化するものであればよく、たと
えば、基質もしくは基質の分解生成物と反応して蛍光を
発生するなどの特性を有する指示薬を用いることもでき
る。The indicator may be one that changes its spectral characteristics by reacting with the substrate or a decomposition product of the substrate. For example, it may react with the substrate or a decomposition product of the substrate and generate fluorescence. It is also possible to use an indicator with a

本発明の緩衝剤を含有する層は試薬層もしくは試薬層と
液体的に接触している層である。The buffer-containing layer of the present invention is a reagent layer or a layer in liquid contact with the reagent layer.

試薬層は基質分解性物質および／または指示薬を含イ１
する層であり、中−の層あるいは二以」二の層から形成
される層である。試薬層を二以上の層とする場合は、た
とえば、基質分解性物質含有層と指示薬含有層のように
分けることもできる。また、試薬層を二以」二の層から
構成する場合には、たとえば液体遮断層をそれらの複数
の層の間に設けることもできる。The reagent layer contains a substrate-degradable substance and/or an indicator.
It is an intermediate layer or a layer formed from two or more layers. When the reagent layer is composed of two or more layers, it can be divided into, for example, a substrate-degradable substance-containing layer and an indicator-containing layer. Further, when the reagent layer is composed of two or more layers, a liquid barrier layer can be provided between the plurality of layers, for example.

試薬層と液体的に接触している層とは、試薬層そのもの
ではないか、本発明の多層分析材料が被検液あるいは水
などの液体と接触した場合に、重ね合わされた層の間で
多層分析材料の中を、液体および液体中に溶解もしくは
分散している成分が通過することができ、その液体を介
して試薬層と接触する関係になり得る層である。たとえ
ば、多層分析材料の試薬層に積層された層あるいは展開
層などに緩衝剤を含有させておき、これを被検液と接触
させた場合にその緩衝剤が被検液を介して試薬層に移動
するようにしておくことができる。The layer that is in liquid contact with the reagent layer may be the reagent layer itself, or when the multilayer analysis material of the present invention comes into contact with a test liquid or a liquid such as water, the layer that is in liquid contact with the reagent layer may form a layer between the superimposed layers. It is a layer through which a liquid and components dissolved or dispersed in the liquid can pass through the analysis material, and which can come into contact with a reagent layer via the liquid. For example, if a layer laminated to the reagent layer of a multilayer analytical material or a spreading layer contains a buffer, and this is brought into contact with a test solution, the buffer will flow through the test solution into the reagent layer. You can keep it moving.

基質分解性物質と指示薬とを試薬層に含有させる場合に
は、−緒に単一の試薬層に含有させるか、あるいは、そ
れぞれを基質分解性物質含有層と指示薬含有層（この場
合には、双方の層を総称して試薬層という）とに別々に
含有させる。あるｌ、％は本発明の緩衝剤、すなわちＨ
ＥＰＰＳＯ塩および／またはＥ　Ｐ　Ｐ　Ｓ　ｉｌｌは
、前者の単一層の場合には、その単一層に含有させ、後
者の場合には、ノ＆質分解性物質含有層の指示薬含有層
のいずれか一方のみ、あるいは基質分解性物質含有層と
指示薬含有層の双方に含有させる。When a substrate-degradable substance and an indicator are contained in a reagent layer, either they are contained together in a single reagent layer, or they are contained in a substrate-degradable substance-containing layer and an indicator-containing layer (in this case, Both layers are collectively referred to as the reagent layer). A certain l,% is the buffer of the present invention, i.e. H
In the case of the former single layer, the EPPSO salt and/or the EPPSO salt and/or the EPPSO salt are contained in the single layer, and in the latter case, the EPPSO salt and/or the EPPSO salt and/or the EPPSO salt are contained in the single layer, and in the latter case, the EPPSO salt and/or the EPPSO salt are contained in either the indicator-containing layer or the degradable substance-containing layer. It may be contained only in the substrate-degradable substance-containing layer and in the indicator-containing layer.

本発明の緩衝剤は緩衝目的の系をｐＨ７〜９の範囲に緩
衝するのに特に適している。従って、本発明の多層分析
材料が含有する緩衝剤の蟻は、分析系のｐＨを７〜９に
維持することを可能とする亀であることが好ましい。そ
のような１１１＋ｉ剤の好適な含有量は、多層分析材料
に含まれている試薬の種類、邦、そして分析対象系など
によ・り変動するが、一般には０．１〜２０　ｇ　／　
ｍ’　（緩衝剤含有層の面積当り）の範囲であり、好ま
しくは０．２〜Ｌｏｇ／ｒｎ’の範囲である。The buffering agents of the invention are particularly suitable for buffering systems to a pH range of 7-9. Therefore, it is preferable that the buffer agent contained in the multilayer analytical material of the present invention is a tortoise that makes it possible to maintain the pH of the analytical system at 7 to 9. The suitable content of such 111+i agent varies depending on the type of reagent contained in the multilayer analysis material, the country, and the system to be analyzed, but generally it is 0.1 to 20 g /
m' (per area of the buffer-containing layer), preferably in the range of 0.2 to Log/rn'.

試薬層は一般に、各種の試薬と水溶性／くインターとの
混合水性溶液あるいは分散液を透明支持体」二に塗布す
ることにより形成する。The reagent layer is generally formed by coating a transparent support with a mixed aqueous solution or dispersion of various reagents and a water-soluble filter.

本発明において使用することのできる水溶性／久インタ
ーの例としては、ゼラチン、変性ゼラチン、カゼイン、
変性カゼインなどの蛋白質系ポリマー類；アガロース、
変性アガロースなどの多糖類；メチルセルロース、エチ
ルセルロース、プロピルセルロースなどのアルキルセル
ロース類；ポリアクリルアミド、ポリビニルピロリドン
、ポリビニルアルコール、ポリ無水マレイン酸などの合
成ビニル重合体またはこれらの共重合体を挙げることが
できる。Examples of water-soluble/long-term interpolators that can be used in the present invention include gelatin, modified gelatin, casein,
Protein-based polymers such as denatured casein; agarose,
Examples include polysaccharides such as modified agarose; alkyl celluloses such as methylcellulose, ethylcellulose, and propylcellulose; synthetic vinyl polymers such as polyacrylamide, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, and polymaleic anhydride, or copolymers thereof.

なお、試薬層には所望により、他の添加剤を添加するこ
ともできる。Note that other additives may be added to the reagent layer if desired.

本発明の多層分析材料の透明支持体は、このような多層
分析材料の構成要素として従来より一般的に知られてい
る各種の透明支持体を用いることができる。そのような
透明支持体の例としては、ポリエチレンテレフタレート
、ビスフェノールＡのポリカーボネート、ポリスチレン
、セルロースエステル類、ポリアクリレート類なとの透
明性の高い合成樹脂からなる透明支持体を挙げることが
できる。なお、多層分析材料の展開層、試薬層などの透
明支持体以外の層が単独で、あるいは共同して自己支持
性を有する場合には、それらの層が単独もしくは共同し
て透明支持体を兼ねることもできる。As the transparent support for the multilayer analysis material of the present invention, various types of transparent supports that have been generally known as constituent elements of such multilayer analysis materials can be used. Examples of such transparent supports include transparent supports made of highly transparent synthetic resins such as polyethylene terephthalate, bisphenol A polycarbonate, polystyrene, cellulose esters, and polyacrylates. In addition, when the layers other than the transparent support, such as the spreading layer and the reagent layer of the multilayer analysis material, singly or jointly have self-supporting properties, those layers, singly or jointly, also serve as the transparent support. You can also do that.

本発明の多層分析材料には必要により、特開昭４９−５
３８８８号公報に開示されている透析層、特開昭４９−
５３８８８号公報、特開昭５１−４０１９１号公報、特
開昭５５−２６４２８号公報、特開昭５５−２６４２９
号公報、特開昭５５−１６４３５６号公報などに開示さ
れている光反射層、光遮断層または光ブロンキング層、
特開「１／」５５−１６４３５６号公報、特開昭５７−
６６３５９号公ｆ’ｌｉ！、特願昭５６−３４３７０号
明細書などに開示されている展開層を接着するための接
着層、特開昭５１−４０１９１号公報、特開昭５３−１
３１０８９号公報、特開昭５４−２６７９３号公報、特
開昭５４−２９７００号公報などに開ノ１＼されている
媒染層、検出層また−は生成した着色物質のミグレーシ
ョン防止層などを、これらの公ＩＩＪもしくは明細書に
開示の方法に従って、ｍｌみ込むことにより、それらを
も多層分析材料の構成要素とすることができる。さらに
、生体液などの試料液に微少遣含有される被検物質の定
量用多層分析材料を目的とする場合には、実開昭５７−
４２９５１号公報に開示されている液体試料一定面積展
開型の液体試ネ゛１点着供給用ポーラス体（パッチ）を
展開層の代りに設けることもできる。If necessary, the multilayer analysis material of the present invention may include JP-A No. 49-5
Dialysis layer disclosed in Publication No. 3888, JP-A-49-
53888, JP 51-40191, JP 55-26428, JP 55-26429
A light reflecting layer, a light blocking layer or a light bronking layer disclosed in Japanese Patent Application Laid-open No. 55-164356, etc.
Japanese Unexamined Patent Publication No. 1/55-164356, Japanese Unexamined Patent Publication No. 1983-
No. 66359 f'li! , an adhesive layer for adhering a spreading layer disclosed in Japanese Patent Application No. 56-34370, etc., JP-A-51-40191, JP-A-53-1
The mordant layer, the detection layer, or the migration prevention layer for the produced colored substance, etc., which have been disclosed in JP-A No. 31089, JP-A-54-26793, JP-A-54-29700, etc. They can also be made into constituent elements of a multilayer analytical material by incorporating ml according to the method disclosed in these documents. Furthermore, when the purpose is a multilayer analytical material for the quantitative determination of test substances contained in sample liquids such as biological fluids,
A porous body (patch) for supplying a single liquid sample, which is a liquid sample fixed area spreading type disclosed in Japanese Patent No. 42951, may be provided in place of the spreading layer.

また、試薬層を二層以上から構成する場合にほの、それ
らの各層の間には、液体遮断層、たとえば、液体の透過
を遮断する一方、ガス状の′Ｍ遊離ンモニア、遊離過酸
化水素を透過させる透過孔を有するメンブランフィルタ
−または織り状もしくは編み状物なとからなる液体遮断
層層を設けることが好ましい。そのようなメンブランフ
ィルタ−にからなる液体遮断層については特願昭５６−
１７６２７５号明細書に記載があり、そして、織り状も
しくは編み状物などからなる液体遮断層については特願
昭５６−１７６２７４吋明細書に記載かある。また、前
述の特開昭５２−３４８８号公報に開示されているセル
ロースエステル類あるいはポリ（メチルメタクリレート
）からなり、塗布ｌ−０、ｌ　Ｏ〜３　、５　ｇ／ｍ’
、好ましくは０．２０〜１．Ｏｇ／ｍ’の均質層を液体
遮断層とすることも可能である。In addition, when the reagent layer is composed of two or more layers, a liquid barrier layer is provided between each layer, for example, to block the permeation of liquid, and to prevent gaseous free ammonia, free hydrogen peroxide, etc. It is preferable to provide a liquid barrier layer made of a membrane filter or a woven or knitted material having permeable pores that allow the liquid to pass therethrough. Regarding a liquid barrier layer made of such a membrane filter, Japanese Patent Application No. 1986-
There is a description in Japanese Patent Application No. 176275, and a liquid barrier layer made of a woven or knitted material is described in Japanese Patent Application No. 176274/1983. Also, it is made of cellulose esters or poly(methyl methacrylate) disclosed in the above-mentioned Japanese Patent Application Laid-Open No. 52-3488, and the coating rate is l-0, lO~3, 5 g/m'.
, preferably 0.20 to 1. It is also possible to use a homogeneous layer of Og/m' as a liquid barrier layer.

これまでに述べたように本発明の多層分析材Ｉｔの試薬
層は、使用条件下において生体液などに含まれる多くの
基質を反応させて指示薬の発色あるいは変色などの分光
特性変化を引起こす反応に好適なｐＨ領域であるｐＨ７
〜９に緩衝領域を有し、該試薬層は均質に形成されるた
め、ノル質と試薬との反応が円滑に進行し、さらには、
試薬層をノに質分解性物質含有層と指示薬含有層とに分
割した場合、基質分解性物質含有層における反応により
生成するアンモニアなどの反応性物質を、効率よく遊離
させて指示薬含有層にそれを移動させる機能においても
充分満足できるものである。As described above, the reagent layer of the multilayer analysis material It of the present invention is capable of reacting with many substrates contained in biological fluids under the conditions of use, causing changes in spectral characteristics such as color development or discoloration of the indicator. pH 7 is a suitable pH range for
9 has a buffer region, and the reagent layer is formed homogeneously, so that the reaction between the normate and the reagent proceeds smoothly, and furthermore,
When the reagent layer is divided into a substrate-degradable substance-containing layer and an indicator-containing layer, reactive substances such as ammonia generated by reactions in the substrate-degradable substance-containing layer are efficiently liberated and transferred to the indicator-containing layer. It is also fully satisfactory in terms of its ability to move objects.

次に本発明を実施例および比較例により説明する。Next, the present invention will be explained with reference to Examples and Comparative Examples.

［実施例１〜５−　比較例］ 緩衝剤および／またはバインダーを下記のように各種変
えた試薬層形成用塗布液を写真材料用の無色透明なポリ
エチレンテレフタレー・ト（ＰＥＴ）フィルムベースに
塗布することにより、透明支持体と試薬層からなる多層
分析材料の構成部材（多層分析材料要素）を調製した。[Examples 1 to 5 - Comparative Example] Reagent layer forming coating solutions with various buffering agents and/or binders as shown below were applied to a colorless and transparent polyethylene terephthalate (PET) film base for photographic materials. By doing so, a component of a multilayer analytical material (multilayer analytical material element) consisting of a transparent support and a reagent layer was prepared.

この透明支持体と試薬層からなる部材の試薬層の表面に
、その表面に対して垂直な方向から相対湿爪７０％の空
気を風速５ｍ／秒の速度にて２４時間連続して吹イ１け
、その後、目視により試薬層からの緩衝剤の析出を観察
し、ついで、散乱晃積分ＡＩす先人へイズメーターで試
薬層のヘイズ度（にごり）を測定した。その結果を第１
表に示す。Air with a relative humidity of 70% was blown onto the surface of the reagent layer of the member consisting of the transparent support and the reagent layer from a direction perpendicular to the surface at a wind speed of 5 m/sec for 24 hours continuously. Thereafter, the precipitation of the buffer from the reagent layer was visually observed, and then the degree of haze (cloudiness) of the reagent layer was measured using a scattering integrated AI haze meter. The result is the first
Shown in the table.

［比較例］：９．Ｏｇ／ｍ’の脱イオンゼラチン、０．
２ｇ／ｍ’のパラノニルフェノキシポリグリシドール、
０．１７ｇ／ｍ’のエチレンジアミンテトラ酢酸四ナト
リウム、２　、２４ｇ／ｍ’　（１３。[Comparative example]:9. Og/m' of deionized gelatin, 0.
2 g/m' paranonylphenoxy polyglycidol,
0.17 g/m' of tetrasodium ethylenediaminetetraacetate, 2, 24 g/m' (13.

７ミリモル／ｍ’）　ノＢｉｃｉｎｅ　［Ｎ　、　Ｎ−
’ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン］、０．１１
５ｇ／ｍ′の燐酸水素二ナトリウム、０．９ｍｇ／ｍ’
のジチオエリスリトール、３６　、　ＯＯＯＵ／ｍ’の
ウレアーセ、および５４．　ｍ　ｇ　／　ｍ’のビスビ
ニルスルホニルメチルエーテルを含むｐＨ８，０で緩衝
させた塗！σ液からなる試薬層（層厚＋１０１０１Ｌと
ＰＥＴフィルムベースからなる構成部材。7 mmol/m') ノBicine [N, N-
'bis(2-hydroxyethyl)glycine], 0.11
5 g/m' disodium hydrogen phosphate, 0.9 mg/m'
dithioerythritol of 36, OOOU/m' of urease, and 54. A coating buffered at pH 8.0 containing m g/m' of bisvinylsulfonyl methyl ether! A reagent layer consisting of σ liquid (layer thickness +10101L and a constituent member consisting of a PET film base.

［実施例１］　；比較例１において、　Ｂｉｃｉｎｅの
代りに、３　、４５ｇ／ｍ’　（１３、７ミリモル／ｍ
′）のＥＰＰＳφＮａ［Ｎ−２−ヒドロギシェチルピペ
ラジンーＮ′−３−プロパンスルポン醇すトリウム塩］
を用いた以外は同様に調製した塗布液からなる試薬層（
層厚：１０ルｍ）とＰＥＴフィルムベースからなる構成
部材。[Example 1]; In Comparative Example 1, instead of Bicine, 3.45 g/m' (13.7 mmol/m
') EPPSφNa [Thorium salt of N-2-hydrogiethylpiperazine-N'-3-propanesulfone]
A reagent layer (
Layer thickness: 10 lm) and a PET film base.

［実施例２〕　：比較例１において、Ｂｉｃｉｎｅの代
りに、３．６８ｇ／ｍ″（１３，７ミリモル／ｍ′）の
ＨＥＰＰＳＯ−Ｎａ　ＥＮ−２−ヒドロキシエチルピペ
ラシン−Ｎ”−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン
酸のナトリウム塩］を用いた以外は同様に調製した塗布
前からなる試薬層（層厚：１０　Ｊｔ　ｍ　）とＰＥＴ
フィルムヘースからなる構成部材。[Example 2]: In Comparative Example 1, 3.68 g/m'' (13,7 mmol/m') of HEPPSO-Na EN-2-hydroxyethylpiperacine-N''-2-hydroxy was used instead of Bicine. A reagent layer (layer thickness: 10 Jt m) before coating prepared in the same manner except that sodium salt of propane-3-sulfonic acid was used and PET
A component made of film hese.

［実施例３］　：比較例１において、Ｂｉｃｉｎｅの代
りに、２．０８ｇ／’ｍ’　（８，２２ミリモル／ｍ′
）のＥＰＰＳ−Ｎａと１．４７ｇ／ｍ’　（５，４８ミ
リモル／ｍ’、）ｃ７）ＨＥＰＰＳＯ’Ｎａと（７）　
ｙ＝合物［ＥＰＰＳ＠Ｎａ：ＨＥＰＰＳＯ・Ｎａ　（モ
ル比）＝６：４］を用いた以外は同様に調製した塗布液
からなる試薬層（層厚：１０ｐｍ）とＰＥＴフィルムベ
ースからなる構成部材。[Example 3]: In Comparative Example 1, 2.08 g/'m' (8.22 mmol/m'
) with EPPS-Na and 1.47 g/m' (5,48 mmol/m', )c7) with HEPPSO'Na (7)
y = component consisting of a reagent layer (layer thickness: 10 pm) consisting of a coating solution prepared in the same manner except that the compound [EPPS@Na:HEPPSO・Na (molar ratio) = 6:4] and a PET film base were used. .

［実施例４］　：比較例１において、脱イオンゼラチン
の代りに、同州のヒドロキシエチル変性アカロース（商
標名：　５ＥＡＰＲＡＱＵＥ、ＦＭＣコーポレーション
製）を用いた以外は同様に調製した塗布液からなる試薬
層（層厚：５用ｍ）とＰＥＴフィルムベースからなる構
成部材。[Example 4]: A reagent layer consisting of a coating solution prepared in the same manner as in Comparative Example 1, except that hydroxyethyl-modified acarose from the same state (trade name: 5EAPRAQUE, manufactured by FMC Corporation) was used instead of deionized gelatin. (layer thickness: 5 m) and a PET film base.

［実施例５］　：比較例１において、脱イオンゼラチン
の代りに、同量のポリアクリルアミド（平均分子量：５
００〜６００万）を用いた以外は同様に調製した塗布液
からなる試薬層（層厚：４μｍ）とＰＥＴフィルムベー
スからなる構成部材。[Example 5]: In Comparative Example 1, the same amount of polyacrylamide (average molecular weight: 5) was used instead of deionized gelatin.
A structural member consisting of a reagent layer (layer thickness: 4 μm) made of a coating solution prepared in the same manner except that 0.000 to 6.000 million) was used, and a PET film base.

第１表 塗布直後　風乾後　　塗布直後　風乾後比較例　　僅少
　　顕著　　　　４．５％　　　３０％実施例 ■　　　　　　　ｓ　　　　　　イヘシ少　　　　　　
　　　０．３％　　　　　３．９％２　　　無　　　僅
少　　　　ｏ、ｏ　　　３．。Table 1 Immediately after application After air-drying Immediately after application After air-drying Comparative example Slightly Significant 4.5% 30% Example■ s Slightly
0.3% 3.9%2 None Slight o, o 3. .

３　　　　　無　　　　　僅少　　　　　　　ｏ、３ｘ
　　　　　２．０％４　　　　　　　無　　　　　　イ
吊少　　　　　　　　　０．５％　　　　　５．２％５
　　　無　　　僅少　　　　ｏ、７ｙ、　　　？、！Ｊ
［実施例６］ 次のようにして多層分析材料を形成した。3 None Slight o, 3x
2.0%4 None Low hanging 0.5% 5.2%5
None slightly o, 7y, ? ,! J
[Example 6] A multilayer analysis material was formed as follows.

（１）指示薬含有層の形成 ブロモクレゾールグリーン　　　ｓ、ｔｇ酢酸ビニル・
アクリル酸エステル共重合体ラテックス（セビアンＡ　
−５８２１、タイセル味商標）　　　　　　　　５１０
ｇクエン酸　　　　　　　　　　　　４．５３水　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５５０ｍ文の組
成からなる塗布液を乾燥膜厚８用ｍとなるように透明Ｐ
ＥＴフィルムベース（実施例１で用いたものと同一のも
の）」二に塗布した。(1) Formation of indicator-containing layer bromocresol green s, tg vinyl acetate.
Acrylic ester copolymer latex (Sevian A
-5821, Tycel Flavor Trademark) 510
g citric acid 4.53 water
A coating solution with a composition of 550m was coated with transparent P so that the dry film thickness was 8m.
An ET film base (same as that used in Example 1) was coated.

（２）液体遮断層の形成 ２％シリコーン（Ｉ・−レシリコーン５Ｈ−８０１１、
東し■商標）ヘキサン溶液に、セルロース・ジおよびト
リアセテートより製造されたメンブランフィルタ−（富
士ミクロフィルター　ＦＭ−１２０、厚さ１４０　ＪＬ
ｍ、空孔率７５％、平均孔体１．２用ｍ）を浸漬後、乾
燥した。(2) Formation of liquid barrier layer 2% silicone (I・-Resilicone 5H-8011,
Membrane filter made from cellulose di- and triacetate (Fuji Microfilter FM-120, thickness 140 JL) in hexane solution
After soaking, a sample (m) with a porosity of 75% and an average pore size of 1.2 was dried.

前記の指、示薬含有層（乾燥塗膜）の上に、」−記の処
理を行なったメンブランフィルタ−を圧着ラミネートロ
ールを用いて積層した。A membrane filter treated as described above was laminated on the finger and indicator-containing layer (dry coating) using a pressure laminating roll.

（３）基質分解性物質含有層の形成 ９．０ｇ／ｍｌ’の脱イオンゼラチン、０．２ｇ／ｍ’
ノパラノニルフエノキシボリグリシドール、０　、１７
　ｇ／ｍ’ノエチレンジアミンテトう酢酸四ナトリウム
、３．４５ｇ／ｍ’（１３，７ミリモル／ｍ’）ｃ７）
ＥＰＰＳ　串Ｎａ、ｏ、１１５ｇ／ｍ’の燐酸水素二ナ
トリウム、０．９ｍｇ／ｍ’のジチオエリスリトール、
３６，０ＯＯＵ／ｍ’のウレアーゼおよび５４　ｍ　ｇ
　／　ｍ’のビスビニルスルホニルメチルエーテルを含
むＰＨ８，０で緩衝させた塗布液（実施例１で用いた塗
布液と同し）を」、記（２）で形成した液体遮断層の」
二に乾燥膜厚１０＃Ｌｍになるように塗布した。(3) Formation of substrate-degradable substance-containing layer: 9.0 g/ml' of deionized gelatin, 0.2 g/m'
Noparanonyl phenoxy boriglycidol, 0, 17
g/m'tetrasodium noethylenediaminetetoacetate, 3.45 g/m' (13,7 mmol/m') c7)
EPPS skewer Na, o, 115 g/m' disodium hydrogen phosphate, 0.9 mg/m' dithioerythritol,
36,0 OOU/m' of urease and 54 mg g
/ m' of a coating solution buffered at pH 8.0 containing bisvinylsulfonyl methyl ether (same as the coating solution used in Example 1), and the liquid barrier layer formed in step (2).
Second, it was applied to a dry film thickness of 10 #Lm.

（４）光反射層の形成 二酸化チタン粉末　　　　　　　　４０ｇゼラチン　　
　　　　　　　　　　４０ｇパラノニルフェノキシ ポリグリシドール　　　　　　１．５ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　４００ｍ文の組成から
なる塗布液を前記の基質分解性物質含有層（乾燥塗膜）
の上に乾燥膜圧６ｇｍになる様に塗布した。(4) Formation of light reflective layer Titanium dioxide powder 40g gelatin
40g paranonylphenoxy polyglycidol 1.5g water
The coating solution having the composition of
It was coated onto the film to give a dry film thickness of 6 gm.

（５）接着層の形成 セラチン　　　　　　　　　　　　２５ｇ水　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　５００ｍ文パラノニ
ルフェノキシ ポリグリシドール　　　　　　１．５ｇの組成からなる
塗布液を前記の光反射層（乾燥塗膜）の上に乾燥膜厚２
ＪＬｍになるように塗布した。(5) Formation of adhesive layer Ceratin 25g water
A coating solution consisting of 1.5 g of 500m paranonylphenoxy polyglycidol was applied to the above light-reflecting layer (dry coating) to a dry film thickness of 2.
It was applied so that it became JLm.

（６）展開層の形成 に記の（１）〜（５）の工程により接着層まで一体積層
された分析材料要素にさらにパラノニルフェノキシポリ
グリシドールｏ、ｏ２ｆ＜量％水溶液を塗布し、これを
短時証加熱することにより膨潤させたのち、ブロード織
り綿布を圧着ラミネートして尿素窒素分析用の一体型多
層分析材料を製造した。(6) For the formation of a spreading layer, an aqueous solution of paranonylphenoxy polyglycidol o, o2f<% by weight is further applied to the analysis material element which has been laminated up to the adhesive layer in steps (1) to (5) described above. After being swollen by short-term heating, the broadweave cotton fabric was pressure laminated to produce an integrated multilayer analytical material for urea nitrogen analysis.

ここで製造した一体型多層分析材料に種々の尿素窒素含
有量を有するコントロール血清（それらの尿素窒素含有
量はウレアーゼ［株］インドフェノール法により本測定
と同時に測定した）１０ｇｕを点希し、３７°Ｃで６分
温置したのち、その発色の光学濃度を分光光度計を用い
て波＆６００　ｎ　ｍにて測定し、その測定値から検量
線を作成した。得られた検量線を第１図に示す。10 gu of control serum with various urea nitrogen contents (the urea nitrogen contents were measured at the same time as the main measurement using the indophenol method of Urease Co., Ltd.) was added to the integrated multilayer analysis material manufactured here, and 37 After incubating at °C for 6 minutes, the optical density of the developed color was measured using a spectrophotometer at a wavelength of 600 nm, and a calibration curve was created from the measured values. The obtained calibration curve is shown in FIG.

すなわち、この一体型多層分析材料により尿素窒素含有
量と光学濃度とが優れた比例関係を示す検量線あり得ら
れていることが確認された。In other words, it was confirmed that a calibration curve showing an excellent proportional relationship between the urea nitrogen content and the optical density was obtained using this integrated multilayer analysis material.

［実施例７］ 基質分解性物質含有層形成用の塗布液の調製において、
３．４５ｇ／ｍ’（１３，７ミリモル／　ｍ’）のＥＰ
ＰＳ−Ｎａｃ７）代りに３．６８ｇ／ｍ’（１３，７ミ
リモル／ｍ′）のＨＥＰＰＳＯ−Ｎａを配合した以外は
、実施例６と同様にして塗布液（実施例２で用いた塗布
液と同じ）を調製した。[Example 7] In preparing a coating solution for forming a layer containing a substrate-degradable substance,
EP of 3.45 g/m' (13,7 mmol/m')
A coating solution (same as the coating solution used in Example 2) was prepared in the same manner as in Example 6, except that 3.68 g/m' (13.7 mmol/m') of HEPPSO-Na was blended instead of PS-Nac7). The same) was prepared.

上記の塗布液を用いて基質分解性物質含有層の形成を行
なった以外は、実施例６と同様にして尿素窒素分析用の
一体型多層分析材料を製造した。An integrated multilayer analytical material for urea nitrogen analysis was produced in the same manner as in Example 6, except that the substrate-degradable substance-containing layer was formed using the above coating liquid.

ここで製造した一体型多層分析材料に種々の尿素窒素含
有量を有するコントロール血清（それらの尿素窒素含有
量はウレアーゼ・インドフェノール法により本測定と同
時にＡ１１定した）１０．文を点着し、３７°Ｃで６分
温置したのち、その発色の光学濃度を分光光度計を用い
て波長６００ｎｍにてｌ’１ｌ１１定し、その測定値か
ら検量線を作成した。得られた検量線を第２図に示す。Control sera with various urea nitrogen contents were added to the integrated multilayer analytical material manufactured here (the urea nitrogen contents were A11 determined at the same time as the main measurement using the urease-indophenol method)10. After spotting and incubating at 37°C for 6 minutes, the optical density of the developed color was determined using a spectrophotometer at a wavelength of 600 nm, and a calibration curve was created from the measured values. The obtained calibration curve is shown in FIG.

すなわち、この一体型多層分析材料により尿素窒素含有
量と光学濃度とが優れた比例関係を示す検量線が得られ
ていることが確認された。That is, it was confirmed that a calibration curve showing an excellent proportional relationship between the urea nitrogen content and the optical density was obtained using this integrated multilayer analysis material.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図および第２図は、それぞれ本発明の実施例の多層
分析材料を用いてコントロール血清中の尿素窒素の測定
を行なった際に得られた検量線である。 特許出願人　富士写真フィルム株式会社代理人　　　ゴ
Ｔ理士　　　柳川泰男FIGS. 1 and 2 are calibration curves obtained when urea nitrogen in control serum was measured using the multilayer analytical material of the example of the present invention, respectively. Patent applicant Fuji Photo Film Co., Ltd. Agent Yasuo Yanagawa

Claims (1)

【特許請求の範囲】 ｌ。少なくとも展開層、試薬層および透明支持体を含む
多層分析材料において、試薬層もしくは試薬層に液体的
に接触する層にＮ−２〜ヒドロキシエチルピペラジン−
Ｎ゛〜２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸塩およ
びＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン〜Ｎ’−３−プ
ロパンスルポン酸塩からなる群から選ばれる緩衝剤が少
なくとも一種含有されていることを特徴とする多層分析
材料。 ２゜多層分析材料が一体とされていることを特徴とする
特許請求の範囲第１項記載の多層分析材料。 ３゜該緩衝剤の一部もしくは全部が多層分析材料の試薬
層に含有されていることを特徴とする特許請求の範囲第
１項もしくは第２項記載の多層分析材料。 ４゜該緩衝剤の含有量が、使用条件下においてその緩＃
ｉ系をｐＨ７〜９に維持することのできる都であること
を特徴とする特許請求の篩囲第１項乃奎第３項のいずれ
かの項記載の多層分析材料。 ５゜緩衝剤が、Ｎ−２−ヒｌ；　ｏキシエチルピペラジ
ン−Ｎ′−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸塩
およびＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−３
−プロパンスルホン酸塩の混合物であることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項乃至第４項のいずれかの項記載
の多層分析材料。 ６゜試薬層か、基質分解性物質と指示薬とを含有するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第５項のいず
れかの項記載の多層分析材料。 ７゜試薬層が、それぞれ独立した基質分解性物質含有層
と指示薬含有層とからなることを特徴とする特許請求の
範囲第１項乃至第６項のいずれかの項記載の多層分析材
料。 ８゜基質分解性物質含有層と指示薬含有層との間に液体
遮断３層が設けられていることを特徴とする特許請求の
範囲＃５７項記載の多層分析材料。 ９゜基質分解性物質含有層にＮ−２−ヒドロキシエチル
ピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパン−３−スル
ホン酸塩およびＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジンー
Ｎ°−３−プロパンスルホン酸塩からなる群から選ばれ
る緩衝剤の少なくとも一種が含有されていることを特徴
とする特許請求の範囲第６項もしくは第８項記載の多層
分析材料。 ｌＯ，基質分解性物質が酵素であることを特徴とする特
許請求の範囲第６項乃至第９項のいずれかの項記載の多
層分析材料。 １１、基質分解性物質が、アンモニア生成基質と反応し
てアンモニアを生成させることのできる酵素であること
を特徴とする特許請求の範囲第６乃至１０項のいずれか
の項記載の多層分析材料。 １２゜アンモニア生成基質が尿素であり、該基質と反応
してアンモニアを生成させることのできる基質分解性物
質がウレアーゼであることを特徴とする特許請求の範囲
第１１項記載の多層分析材料。 １３゜アンモニア生成基質がクレアチニンであり、該基
質と反応してアンモニアを生成させることのできる試薬
がクレアチニンデイミナーゼであることを特徴とする特
許請求の範囲第１１項記載の多層分析材ネ゛ｌ。 １４゜基質分解性物質が、過酸化水素生成基質と反応し
て過酸化水素を生成させることのできる酵素であるこ２
を特徴とする特許請求の範囲第６乃至１０項のいずれか
の項記載の多層分析材料。 １５゜過酸化水素生成基質が尿酸であり、該基質と反応
して過酸化水素を生成させることのできる試薬がウリカ
ーセであることを特徴とする特許請求の範囲第１４項記
載の多層分析材料。[Claims] l. In a multilayer analytical material comprising at least a developing layer, a reagent layer, and a transparent support, the reagent layer or a layer in liquid contact with the reagent layer has N-2 to hydroxyethylpiperazine-
Contains at least one buffer selected from the group consisting of N-2-hydroxypropane-3-sulfonate and N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-3-propanesulfonate. Multilayer analysis material. 2. The multilayer analytical material according to claim 1, characterized in that the multilayer analytical material is integrated. 3. The multilayer analytical material according to claim 1 or 2, wherein part or all of the buffer is contained in a reagent layer of the multilayer analytical material. 4゜The content of said buffering agent is
A multilayer analytical material according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the i-system can be maintained at pH 7 to 9. 5° buffers are N-2-Hyl;
- The multilayer analytical material according to any one of claims 1 to 4, which is a mixture of propane sulfonates. 6. The multilayer analytical material according to any one of claims 1 to 5, characterized in that it contains a 6° reagent layer, a substrate-degradable substance, and an indicator. 7. The multilayer analytical material according to any one of claims 1 to 6, wherein the 7° reagent layer consists of a substrate-degradable substance-containing layer and an indicator-containing layer that are independent of each other. 8. The multilayer analytical material according to claim #57, characterized in that three liquid-blocking layers are provided between the substrate-degradable substance-containing layer and the indicator-containing layer. 9゜The substrate-degradable substance-containing layer consists of N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-hydroxypropane-3-sulfonate and N-2-hydroxyethylpiperazine-N°-3-propanesulfonate. The multilayer analytical material according to claim 6 or 8, characterized in that it contains at least one kind of buffering agent selected from the group consisting of: 10. The multilayer analytical material according to claim 6, wherein the substrate-degradable substance is an enzyme. 11. The multilayer analytical material according to any one of claims 6 to 10, wherein the substrate-degradable substance is an enzyme capable of producing ammonia by reacting with an ammonia-producing substrate. 12. The multilayer analytical material according to claim 11, wherein the 12° ammonia-producing substrate is urea, and the substrate-degradable substance capable of reacting with the substrate to produce ammonia is urease. 13. The multilayer analytical material according to claim 11, wherein the ammonia-producing substrate is creatinine, and the reagent capable of reacting with the substrate to produce ammonia is creatinine deiminase. . 14゜The substrate-degradable substance is an enzyme that can react with the hydrogen peroxide-generating substrate to generate hydrogen peroxide.2
A multilayer analysis material according to any one of claims 6 to 10, characterized by: 15. The multilayer analytical material according to claim 14, wherein the substrate for producing hydrogen peroxide is uric acid, and the reagent capable of reacting with the substrate to produce hydrogen peroxide is uricase.