JPS589060A - 電気泳動法による細胞の検査方法 - Google Patents

電気泳動法による細胞の検査方法

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JPS589060A
JPS589060A JP56107399A JP10739981A JPS589060A JP S589060 A JPS589060 A JP S589060A JP 56107399 A JP56107399 A JP 56107399A JP 10739981 A JP10739981 A JP 10739981A JP S589060 A JPS589060 A JP S589060A
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cells
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「よし」汲 親雄
Chikao Yoshikumi
Kenichi Matsunaga
謙一 松永
Haruhisa Hayashi
治久 林
Yoshiharu Oguchi
小口 義春
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Kureha Corp
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    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416Systems
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は電気泳動法による細胞物に白血球。
リンパ球の検査方法に係る。
最近、細胞性免疫を検査する一手段として細胞電気泳動
法が注目され始めている。
細胞電気泳動法の一方法は、サボpヴイック勢の方法で
ある( D、 8abolovle @t al、 *
 ”Ce1lK1@ctrophor@sls : C
l1nical AppHcation andM@t
hodologys ” IN8KRM 87mP@1
1umA11*1979年)、仁の方法祉手動式で一定
に長時間を要し、生きた細胞を多数測定するに°は好ま
しいものではない。
他の方法は、スタイナー等のレーザードツプラー法であ
る( D、 8t@1nor @t al、 e Eu
rop@anJournal of Canc@r、 
151275〜1280 (1979) )eこの方法
でも、電気泳動パターンの分離能の点で充分満足すべき
もので紘ない。
以上のような状況の下で、高性能且つ迅速な測定が可能
である装置及び方法の開発が望まれていた。
本発@蝶、細胞特に末梢血又はリンパ系組織中のリンパ
球の電気泳動度を全自動型電気泳動装置を用いて一定し
、電気泳動バメーンの変化から細胞の状態変化を検査す
る方法を*撫することを間約とする。
本発明によると、非常に分離能の良い電気泳動法でリン
パ球の電気泳動度を測定することKよル。
その電気線動パターンの変化から従来得られなかつた情
報を得られる。
本発明は以下の点を主たる轡黴とする。
(1)  短時間に多数の細胞が測定でき得ること。
(2)電界を反転し1個々の細胞の平均電気泳動度を測
定できるので測定値の精度が高いこと、(31血小板、
混入物等微小浮遊物、凝集した細胞勢は一定されないこ
と、 (4)泳動用細胞浮遊液として生理的条件のメディウム
(イオン強度1−0.1!S)を使用することができる
こと。
41に、(4)にりいて、これtでの報告では装置上及
び一定上の問題から細胞浮遊液の電気伝導度を下けるた
めに生理的条件よυも低い条件(1−0,005〜0.
1)での測定例が多いが、生きた細胞を一定するという
観点からみて、生理的条件を満泳動装置(Parmoq
uant−1m東独カールツアイス゛社製、以下PQ−
1と略称する)は電界反転によp多数O細胞について個
々OI/AjIIIO平均電気泳動度を正確K11l定
し、これから泳動度に対するヒストグラムを求めるもO
であるが1画像魁理の関係で試料O細胞員度を0、S〜
20X10・個/d、且つ細胞浮遊液のイオン強度を0
.11〜0.21好ましくは0.13〜0.17の範1
1に調整する。
しかしながら、本発明に係る一定装置としては、上述の
全自動顕微鏡製電気泳動装置に@定されるものではなく
、上記4点が満足畜れる一定装置であればレーザード°
ツプラー法、レーザーグレーテインダ法、フリー7m−
法勢も使用可能である。
上記の装置で得られ良電気泳動パターンによる検査法を
、03H/H@’tウス胸腺リンパ球の正常細胞とl1
lIIl腫瘍X S 56$ 011[11O1111
1K)イテ詳述する。
第1111m乃至−にその結果を示す、横軸は電気泳動
度を表し 横軸は制度を表す、aは正常S+麿。
b、Q及びdは夫々移殖後5日、10日及び15日の調
定結果である。
第1図から明らかなように、担癌マウスは5日後にメイ
ンピークの変化が認められ、10日及び15日11には
正常細胞の泳動パターンとは全く異なるパターンを示し
た。
電気泳動パターンを数値化する方法としては。
メインビークの位置(泳動度)%電気泳動度をいくつか
に区分けし九領域に属する細胞の比率又は平均泳動度な
どがある。
第1Eaの泳動パターンから大ピークと小ピークの境界
0.70 am/ l@ll /V /es以上の細胞
は全体の20.5−であった、これに対し第11Qb、
・及び4社大々24.2%、51.991及び68.4
%であ〕、癌移殖後の経過日数とともに泳動度の大きい
(0,70at/ see /V/am以上)細胞の比
率が正常細胞のそれよ〕4饅〜48−増加した。又、上
記の0.70国/yr@e/V/ls以上の細胞の比率
を正常細胞のそれで割ると夫々1.18.2.49及び
3.34となつえ、尚、大ビータと小ピークの境界の電
気泳動度及び正常動物の高泳動度の細胞の比率は動物の
種、系統1遍令*によって着干異なる。
又、第1図a(正常縁It)0電気泳動パターンの2つ
のピークの平均泳動度は夫々0.52a+/s・・/ 
V /am及び0.1135+/ s@a /V/am
テあ)、同様に第1図す、e及びdについて2つのピー
クの平均泳動度は夫々[0,5B、 0.97)、 (
0,62,0,98)及び(0,6B、 1.03 )
であり九。2つのピークについて正常細胞の値で割ると
、夫々(1,12,1,02)。
(1,19,1,03)及び(1,31,1,08)と
なシ、泳動度の小さいピークは1.12〜1.31、泳
動度の大きいビータは1.02〜1.08といずれも泳
動度の大きい側ヘシフトしていた。
本発明の方法と従来の方法とを比較するために。
腫瘍重量、遅延型足踏反応、抗体産生能及びリンパ球細
胞障書の測定結果な鮪2図(1)乃至(41に示す。
第2図で、横軸は経時日でおり、縦軸は夫々腫瘍重量、
遅延型足踏反応における厚みの増加、抗体産生能(力価
)及びリンパ球細胞障害(細胞毒性)を表す、第2図か
ら明らかなように、5〜10日目から生ずる電気泳動パ
ターンと対応して異常値が表れてくることがわかる。
以上の事実は各種実験動物に於ても同様に認められ、い
ずれも担癌によって高泳動度の細胞の比率は正常細胞の
それに比較して4〜7091増加し友。
又、担癌細胞の高泳動度の細胞の比率を正常細胞のそれ
で割った値はl、05〜8.00であった。
同様に担癌細胞のピークの平均泳動度を対応する正常細
1のピークの平均泳動度で割り九値は1.02〜1.6
0であった。
これらOことから本発明は従来の免疫能一定結果と嵐い
対応を示し、その迅速さからよシ優れた以上胸腺リンパ
球について述べたが、末梢血リンパ球についても担癌に
よって電気振動パターンの変化がみられるが、胸腺リン
パ球の場合とは逆に担癌によって泳動度の低い細胞の比
率が増加する傾向がみられ、電気泳動パターンのピーク
から2つの群に分けえ場合、高泳動度の比率が4111
〜70−低下した。
又、担癌の高泳動度の細胞の比率を正常細胞のそれで割
った値はO,SO〜0.95であった。同11に担癌の
ピータの平均泳動度を対応する正常細胞のピークの平均
泳動度で割った値は0.60〜1.00であった。
本発明の方法は、上記O如(動物O免疫担轟細胞OII
定に有用であるのみならず、人間に関しても有力な検査
手段となる。
以下実施例について本g11@を更に詳述する。
実施例I ICRマウス(9,8遍令)左腋下部位に腫瘍細ml(
Sar@am −180)を10個移植後、25日Iに
屠殺、胸腺細胞を摘出、ビンセットで細膓を単一、メッ
シユを通して遊離細胞を得た。低脹処履により赤血球を
除去、ICafljs MIMで2回洗浄後、細胞一度
406〜10’@/dになるようにイーグル箪に懸濁し
た。
別KLISunltと謙るようにヘパリンナトリウムl
lICN@マ・社製)を注射筒にと〉、壁画を漏らした
後、腹部大静脈よ〕静脈血を採取した。直ちにHBSI
Ei (Hams ’ Ba1ana@d 8alt 
5olution )で2倍に希釈し、よ〈I&和した
後、試験管中のFl・all −PaqtI@II (
Phanmeia F1n* chmica1社製、フ
ィコール 40G、ジアドリゾエートナトリウムの混合
*を比重1.077)3mjO上層に約1sllJを外
画を乱さないように重層した。400G  30分間達
6し、Fi*oll −Paqu・液と血漿との憂面に
あるリンパ球゛層をパスツールピペットにて採取し、H
88gを用いて2110G  10分間、遠心洗浄した
。更にHB88を用いて1回、Eagl@s’ MEM
にて1回、1800 10分間遠心洗浄を行った。上清
除去後5〜l0XIO個/―の細胞all変となるよう
に陶l・・/ MIMを加えた。
試料懸濁箪2−をPQ−IK注入し、Dark Fie
ld照明法、対物レンズ25倍、泳動電@ 1 G m
、完全自動棚定法によシミ気泳―測定を行った。
結果はプリンターにヒストグラム及び平均泳動度を打出
させ丸。
同様に癌を移植しない!ウスについても測定しえ。
第311 mに示しえように正常マウス0IIIIIり
ンバ球の電気泳動パターン社O0・−/−・V′v/1
21IK大ピーク、OS偏/ I@(1/V/−に小ピ
ークを有する二峰性Oパターンになるのに対し、第31
1bに示したようKmmママウスは泳動度の大きい側に
ピークがシフトしブロードなパター/となった。
又、第4図1及びbに示し九ように末梢血リンパ球の電
気泳動パターンの場合、正常細am(第4111m)に
比べて担癌細ji!I(第4図b)では泳動度Q低い細
胞の比率が増えパターンはプp−ドになっていた。
実施例2 ICRffクス(♀、8遍令)の腹腔内に腫瘍細胞8a
rema −180及びErhrlehを夫々5X1G
’個移植し、8日後の胸腺リンパ球を実施例1と同様の
方法によって採堆し泳動測定を行った。
正常マウス(第!S図a)に比較して、8aream−
180(第5図b ) 、 Erhrich (第5図
a)とも泳I11度の高い#l胞の割合が増加し、パタ
ーンがブロードになった。
実施例3 C3H/H・マウス(8,8週令)腹腔内に腫瘍細胞M
H−134及びMH−102を夫々106個移植し、M
H−134移植!ウスは6日月MH−102移植!ウス
社8日目に実施例1と同様に胸腺リンパ球及び末梢血リ
ンパ球を採取し、電気泳動測定を行った。
胸腺リンパ球の場合を1s6図、末梢血リンパ球の場合
を第7図に示した。第6図及び第1図で、1は正常細胞
、baMH−134、eaMH−102である。図から
明らかなように、正常細jlIO電気泳動パターンに比
べて担癌マウスのパターンの変化の傾向は実施例1と同
様であった。
実施例4 CB ?BL/6Y?x(8、’811令) 皮下KI
IJIJll胞−ルイス肺瘉、Ca −755及びB−
18を夫々10@個移植し、実施例1と同様に98目に
胸腺リンパ球及び15日liK末梢血リンパ球を採取し
、電気泳動測定を行った。
胸腺リンパ球の場合を第8図(aは正常細胞、bはルイ
ス肺癌)、末梢血リンパ球の場合を第9図(aは正常細
胞、bはCm−751S、aldB−16)橿七ヒーー
ー÷に示した。実施例1と同様の変化がみられた。
実施例5 採血量1−につ12.5圃itとなるようにヘパリンナ
トリウム液(Novo社製)を注射筒に取如実施例1と
同様にリンパ球を採取、分離し、イーグル液を加えて5
〜l0XIO個/dの試料を作成した。
健常人6例(a:35オ♂、b:ao才♂、C;25才
♀、d:18才♀、・:19オ♂、f:40才♀)の末
梢血から前述の方法でリンパ球を得、PQ−1を用いて
細胞電気泳動を行った。第10図に示したように、6例
と40.8 ts/ I@@/V/二及び1−0 ”/
 @ee /V /amに二峰性のピークを示す電気泳
動パターンが得られた。
実施例6 実施例5と同様に、&:結腸癌患者(49才6)、b=
直腸癌患者(68オ♂)、儂:胃癌患者(72オ♂)、
d;乳癌患者(50才♀)、・;食道癌再発患者(49
オ♂)、f:乳癌再発患者(50才♀)、g:膵癌再発
患者(62オ8)7例から末梢リンパ球を得、PQ−1
を用いて細胞電気泳動を行った。第11図に示したよう
に、健常人とは全く異な〉、電気泳動度の小さいリンパ
球が増加し、パターンの乱れが生じた。
【図面の簡単な説明】
代理人  川  口  幌  雄 ’IK *h /II (cm/s@c/v/cm)(
3)         、、、   (4)日    
                   日0 020
406 0111.0 1.2  +41K170* 
(cm/sec/v/cm)At!l嵐(cm/uc/
v/cm)   −泳勧歳(cm7sec7v7cm) 珠動* 1cml5@c7v7cm) j水勧度(cm7sec7v7cm )濠動rIL(c
m7sec7v7cm)  jOG20.4.0.60
.8 1OL2 1.4A重カ度(cm/s@c/v/
an) OG204 G608  ID 12  L4派勧良(
cm7’露/v/cm)

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 末梢血又はリンパ系組織中のリンパ球を全自動型電気泳
    動装置を用いて電気泳動度をIll定し、測定パターン
    の変化よシ細胞の状態を検査する事を畳徴とする細胞の
    検査方法。
JP56107399A 1981-07-09 1981-07-09 電気泳動法による細胞の検査方法 Pending JPS589060A (ja)

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