JPS5883260A - Filler for liquid chromatography - Google Patents
Filler for liquid chromatographyInfo
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は液体クロマトグラフィー用充填剤に関する。[Detailed description of the invention] The present invention relates to a packing material for liquid chromatography.
臨床検査技術の進歩に伴ない、血清や尿のような生体液
中の低分子量区分を分離し、測定することが何なわれて
お〉、例えばカテコールアミン、グアニジノ化合物、胆
汁酸、ビタミン、ステロイドホル毫ン、！１−等の分画
が行なわれているｅ従来はこの低分子量成分を分離する
方法として、トリクロル酢酸、過塩素酸等を１１１いて
高分子量の蛋白貧を除き、更に夾雑物の影響を除くため
に゛適当な１０処理を行なった徒、高速液体クロマトグ
ラブイーで分離、定量を行なうことが多い、しかし高分
子量の蛋白質を除去する操作を省略して、そのま＼血清
あるいは尿等の生体液を高速液体りａマドグラフィー用
カラムに導入すると幅広い蛋白質のピークが低分子量成
分のビークＫｌｉなり、低分子量成分の分離定量ができ
なくなつ九り、充填剤に蛋白質が不可逆吸着して充填剤
の寿命が短かくなり、又低分子量成分の分離挙動が変っ
たりする。With advances in clinical testing technology, it has become increasingly difficult to separate and measure low molecular weight fractions in biological fluids such as serum and urine. Wow! Conventionally, as a method to separate these low molecular weight components, trichloroacetic acid, perchloric acid, etc. were used to remove high molecular weight proteins and further remove the effects of impurities. After 10 appropriate treatments, high performance liquid chromatography is often used for separation and quantification. When introduced into a high-performance liquid atomography column, the broad protein peak becomes a peak Kli of low molecular weight components, making it impossible to separate and quantify the low molecular weight components, and the protein is irreversibly adsorbed to the packing material, resulting in The lifetime will be shortened and the separation behavior of low molecular weight components will change.
このため従来の液体りａマドグラフィーでは除蛋白操作
は、省略できないものとされてきた。しかしながら除蛋
白操作ＫＦｉ遠心分臘を２０分以上。For this reason, it has been considered that the protein removal operation cannot be omitted in conventional liquid atomography. However, the protein removal procedure requires KFi centrifugation for more than 20 minutes.
２回繰返す必要があり、操作が繁雑で時間がか＼りすぎ
る欠点があった。 １ｊＫＩＩ＆蛋白操作によに。It had the disadvantage that it had to be repeated twice, making the operation complicated and time-consuming. 1jKII & protein manipulation.
蛋白１Ｒｔ−沈殿として取除くＷｉＫ、低分子量成分が
その沈殿内に取込まれ１回収本が低下しやすい欠点があ
った。特に低分子量成分は極めて微量にしか含まれてい
ないことが多く、除蛋白操作によって回収率が低下し、
検出そのものができなくなつ九り測定精度が悪くなった
シしていた。WiK, which is removed as a protein 1Rt-precipitate, has the disadvantage that low molecular weight components are incorporated into the precipitate, resulting in a decrease in the number of recovered proteins. In particular, low molecular weight components are often contained in extremely small amounts, and the recovery rate decreases with protein removal operations.
Detection itself became impossible and measurement accuracy deteriorated.
本発明は、か＼る除蛋白操作を省略し、しかも低分子量
成分の分離定量ができる液体クロマトグラフィー用充填
剤を提供することを目的とする。An object of the present invention is to provide a packing material for liquid chromatography that can omit such a protein removal operation and allow for the separation and quantification of low molecular weight components.
本発明の婁旨は、疎水性単量体と親水性単量体との共重
合体よシなる多孔性粒子であって、排除眼界値（ＰＬ値
： Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｌ−ロ）がｚ、ｏｏｏ〜６
０、０００の範囲内に存するものであることを特徴とす
る。液体クロマトグラフィー弔充填剤に存する。The gist of the present invention is to provide porous particles made of a copolymer of a hydrophobic monomer and a hydrophilic monomer, which have a permeation threshold (PL value) of z, ooo to 6
It is characterized by being within the range of 0,000. Liquid chromatography packing material.
次に本発明液体クロマトグラフィー弔充填剤に一、：）
イテｌ Ｋ ＄Ｐｌｉ Ｋ Ｉｔ明する。Next, regarding the liquid chromatography packing material of the present invention:)
Itel K $Pli K It will be clear.
本発明における液体クロマトグラフィー弔充填剤は、疎
水性単量体と親水性単量体との共重合体よりなる。疎水
性単量体が共重合成分とされることＶＣよって、液体ク
ロマトグツフィーに際し疎水性部分を有する低分子物質
に対する分離能が付与されることになり、又親水性単量
体が共重合成分とされることＫよって、水系溶離液を用
い九分離が０Ｉ屹となる。疎水性単量体としては、例え
ばスチレン、エチルスチレン、ジビニルベンゼン、ビニ
ルトルエン、ビニルナ７タレン、Ｎ−ビニルカルバゾー
ル等が使用される。The liquid chromatography filler in the present invention is composed of a copolymer of a hydrophobic monomer and a hydrophilic monomer. Hydrophobic monomers are used as copolymerization components VC provides separation ability for low-molecular substances having hydrophobic moieties during liquid chromatography, and hydrophilic monomers are used as copolymerization components. Therefore, nine separations using an aqueous eluent will be 0I. As the hydrophobic monomer, for example, styrene, ethylstyrene, divinylbenzene, vinyltoluene, vinylna-7-talene, N-vinylcarbazole, etc. are used.
疎水性単量体としては上記のようなフェニル基を有する
ビニル系単量体がｑ遍である。これは゛カテコールアミ
ン、フェニルアラニン、チロシン等の芳香族アミノ酸等
の芳香族系水溶性物質を分離するために＃−１、芳香族
系水溶性物質のフェニル基との相互作用を有することが
叶ましいからである。As the hydrophobic monomer, vinyl monomers having a phenyl group as described above are used. This is because #1, in order to separate aromatic water-soluble substances such as aromatic amino acids such as catecholamines, phenylalanine, and tyrosine, it is desirable to have an interaction with the phenyl group of the aromatic water-soluble substance. It is.
親水性単量体としては、＃えはテトラデシルグリコール
ジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレ
ート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート
、ボリプロビレングリコールジ（メタ）アクリレート、
β−ハイドロキエチルメタアクリレート、ｆＰトツメチ
ロールグロ／唱ン（モノ、ジ、トリ）アクリレート、（
メタ）アクリルアミド、アルコキシメチル（メタ）アク
リルアミド、 Ｎ 、 Ｎ’−ジメチルアミノエチル（
メタ）アクリレートＱＦが使用される。Examples of hydrophilic monomers include tetradecyl glycol dimethacrylate, diethylene glycol dimethacrylate, polyethylene glycol di(meth)acrylate, polypropylene glycol di(meth)acrylate,
β-hydroxyethyl methacrylate, fP totsumethylolguro/shoan (mono, di, tri)acrylate, (
meth)acrylamide, alkoxymethyl(meth)acrylamide, N,N'-dimethylaminoethyl (
Meta)acrylate QF is used.
共重合体における疎水性単量体の共重合成分量が、４０
−９５＠＠％であって、親水性の単量体の共電合成分量
は６Ｇ−ｍｉｌｌｉ％とされるのが好ましい、疎水性単
量体の共重合成分量がｅｓｔ量ｔよりも多量であって親
水性単量体の共重合成分−が１１％よシも少量であると
、共重合体は水に対する濡れが悪くなり、水系溶離液か
らの生体液中の低分子量成分の分離がし難くなる。又、
疎水性単量体の共重合成分量が４０重量鴨よりも少量で
あって製水性単量体の共重合成分量が６００Ｉ屹よにも
多量になると、共重合体は疎水性部分を有する低分量成
分に対する分離能か低いものとなる。The copolymerization content of hydrophobic monomer in the copolymer is 40
-95@@%, and the copolymerization content of the hydrophilic monomer is preferably 6G-milli%, and the copolymerization content of the hydrophobic monomer is larger than the est amount t. However, if the copolymerization component of the hydrophilic monomer is as small as 11%, the copolymer has poor wettability with water, making it difficult to separate low molecular weight components in biological fluids from an aqueous eluent. It becomes difficult. or,
If the copolymerization amount of the hydrophobic monomer is less than 40% by weight and the copolymerization amount of the water-refining monomer is greater than 600I, the copolymer becomes The separation ability for quantitative components will be low.
父、共重合体の溶解度パラメーター＃’ｊ＆４以上のも
のが使用されるのがｑましいが、これは共重合体の水系
Ｓ＊液中での濡れをよくするためである。共重合体の溶
解度パラメーターが８．４よりも小さくなると、共電合
体ｄ水に対する濡れが悪くなり、水系溶離液からの生体
液中の低分子量成分の分離に適さないものとなる。It is preferable to use a copolymer having a solubility parameter of #'j&4 or more, in order to improve the wetting of the copolymer in the aqueous S* liquid. When the solubility parameter of the copolymer is smaller than 8.4, the coelectrolyte has poor wettability with water, making it unsuitable for separating low molecular weight components in biological fluids from an aqueous eluent.
溶解度パラメーター（ＳＰ値： Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ
Ｐａｒａｍｅｔｅｒ ）は、親水性の１度を表わす数値
でありで、密度（Ｐ）、分子量（Ｍ）、凝集エネルギ一
定数（Ｇ）から次の弐によって求められる。Solubility parameter (SP value: Solubility
Parameter ) is a numerical value representing 1 degree of hydrophilicity, and is determined from the density (P), molecular weight (M), and cohesive energy constant (G) by the following 2.
Ｓ Ｐ＝ＦΣＧ／Ｍ 例えば親水性単量体が次式、 ＣＨ，ＯＯＣＨ。S P=FΣG/M For example, the hydrophilic monomer has the following formula: CH, OOCH.
で表わされる物質で、鳳＝１４の場合はテトラデシルグ
リコールジメタクリレートであるが、溶解度、（ラメ−
クーが１６．９であり、疎水性単量体がジビニルベンゼ
ンの場合ｆｌｌ溶解度／クラメーター８０であシ、共重
合体成分としてテトラデシルグリコールジメタクリレー
トを５．０重量層含有する共重合体の溶解度／曵うメー
ターがＬ４となり、水に濡れる程度の親木性と生体液中
の低分子量成分の分離に充分なジビニルベンゼンを含有
するものとなる。In the case of O = 14, it is tetradecyl glycol dimethacrylate, but the solubility, (lame-
of a copolymer containing 5.0 weight layers of tetradecyl glycol dimethacrylate as a copolymer component. The solubility/drilling meter is L4, and it has wood affinity to the extent that it gets wet with water and contains enough divinylbenzene to separate low molecular weight components in biological fluids.
本発明液体クロマトグラフィー用充填剤は、多孔性の粒
子であり、粒子径はＳ−４０ｐｘｘの範囲に存するもの
とされることＫより、液体クロマトグラフィー用充填剤
としてｑ適なものと々る０粒子ａ、水性ｍ濁重合により
共重合体を得たものを更に必＃に応じ分級することによ
りなしうる。又細孔は粒子径により異なるが一般に粒子
の内１１に向って５Ｏ−Ｘ２０００λの範囲内に存する
のが好ましい。The packing material for liquid chromatography of the present invention is porous particles, and the particle size is in the range of S-40pxx. Particles a and copolymers obtained by aqueous turbidity polymerization may be further classified as necessary. Although the pores vary depending on the particle size, it is generally preferable that the pores exist within the range of 5O-X2000λ towards the 11th part of the particle.
粒子内の細孔容量は粒子容量の暴〜ＳＯ％を占めるもの
とされるのが誓適である。この場合には粒子内１ｉｉｉ
積が増加し、生体液中の低分子量成分と共重合体との疎
水性相互作用が大きくなり、その結果低分子緻成分の分
離がよくなる。しかしながら細孔容量が粒子容量のｇｏ
％よりも大きくなると、粒子が軟かくな砂すぎて＊ａ、
収縮を生ずるおそれがあり、又Ｓ％よにも少なくなると
低分子を成分と共重合体との疎水性相互作用が低下し。It is preferred that the pore volume within the particles accounts for ~SO% of the particle volume. In this case, intraparticle 1iii
The hydrophobic interaction between the copolymer and the low molecular weight components in the biological fluid increases, resulting in better separation of the low molecular weight components. However, the pore volume is smaller than the particle volume go
If it is larger than %, the particles are too soft sand*a,
There is a risk of shrinkage, and if the S% is too low, the hydrophobic interaction between the low molecular weight component and the copolymer will decrease.
低分子量成分の分離が充分にできないものとなりやすい
。Separation of low molecular weight components tends to be insufficient.
粒子内の細孔容量の測定は、水銀圧λ法を適用して行な
うことができ、ディラドメーター中の試料に真空状態で
水銀を含浸しえのち、圧力容器中で圧力をかけ鍼糾中へ
の水銀の侵入による体積減少を測定して求めるこ七がで
き、この細孔容量を粒子容量に対する割合で表示する。The pore volume within particles can be measured by applying the mercury pressure λ method, in which the sample in a diradometer is impregnated with mercury in a vacuum state, and then pressure is applied in a pressure vessel and the sample is placed into an acupuncture chamber. This can be determined by measuring the volume reduction due to the intrusion of mercury, and this pore volume is expressed as a percentage of the particle volume.
粒子の細孔容量の調整は、水性懸濁重合によに充填剤粒
子を得るに際し、有機溶媒の種類１組合せ、使用量＃＃
釡変えることによりなしうる。The pore volume of the particles can be adjusted by using one combination of organic solvents and the amount used when obtaining filler particles by aqueous suspension polymerization.
This can be done by changing the pot.
未発明における液体りａマトグクフイー用充填剤は、排
除限界値（ＰＬ値）がｚｏｏｏ 〜ｓｏ、。The uninvented filler for liquid liquid amatogokufu has a exclusion limit value (PL value) of zooo to so.
００の範囲内に存するものとされる。It shall be within the range of 00.
排除限界値とは、標準試料としてポリスチレンのテトラ
ヒドロフラン溶液を用い、溶離液としてテトラヒドラ７
ランを使用し、液体クロマトグツフィーＫかけた際Ｋ、
充填剤粒子の細孔に込抄込まないものとなる前記標準試
料の分子量をいう。The exclusion limit value is defined as using a polystyrene solution in tetrahydrofuran as the standard sample and using tetrahydra 7 as the eluent.
When using liquid chromatography K,
This refers to the molecular weight of the standard sample that does not enter the pores of the filler particles.
そしてこの排除限界値は、換言すれば、充填剤粒子が有
する細孔の大きさを標準試料となるポリスチレンの分子
量の大きさに換算して表現したものである。In other words, this exclusion limit value is expressed by converting the size of the pores of the filler particles into the size of the molecular weight of polystyrene serving as a standard sample.
排除限界値の測定ＫＦｉ、分子量がわかっておりしかも
種々相違するポリスチレンのテトラヒドロフラン溶液を
用い、溶離液としてテトラヒドロフランを使用し、液体
クロマトグラフィーにかけて充填剤粒子の細孔に保持さ
れないものとなるポリスチレンの分子量を求めればよい
、充填剤の排除限界値がλ０００〜・１１，０００の範
囲内に存するものとされるのけ、生体液中の蛋白質成分
は、アルブミン（分子量６． Ｓ万）１着蛋白（分子量
６万〜３０万）、リボ蛋白（分子量３０万〜３００万）
、補体（分子量７万〜４０万）、免疫グロブリン（分子
１ｔｏ万〜１０（１万）、アイプリノーダン（分子１ｌ
Ｉ３４万）等であり、これらは充填剤の排除限界値を６
万よりも穴壽くすることＫよって粒子の細孔に入り込ま
ないものとすることができ、又低分子１ｉｔｉ、分はカ
テコールアミン（分子１ｋ １５０）、グアニジノ化合
物（分子量ｔｏｏ−ｗｏｏ）、アミノ酸（分子量ｉｏｏ
−ｗｏｏ）、ビタミン（分１ｍ１ｍ！ｌ−一■ととＫよ
って粒子の細孔に保持されるものとすることができるか
らである。排除限界値がｚ、 ｏ ｏ ｏ〜ａ ｏ、ｏ
ｏ ｏの範囲内に存するものとされることによって、
充填剤の粒子の孔に蛋白質は保持されず、細孔外を通っ
て早く溶出し、低分子Ｉｉ酸成分細孔により保持される
ため蛋白質よりも遅れて溶出される。又低分子量成分間
では疎水性の違いにより分離がなされる。Measurement of exclusion limit value KFi, the molecular weight of polystyrene that is not retained in the pores of the filler particles when subjected to liquid chromatography using tetrahydrofuran solutions of polystyrene of known molecular weight and different types, and using tetrahydrofuran as the eluent. Although the exclusion limit value of the filler is assumed to be within the range of λ000 to 11,000, the protein component in the biological fluid is albumin (molecular weight 6.S), a single-bound protein ( (molecular weight: 60,000 to 300,000), riboprotein (molecular weight: 300,000 to 3,000,000)
, complement (molecular weight 70,000 to 400,000), immunoglobulin (molecule 1 to 10 (10,000), ipurinodan (molecule 1 liter)
I340,000), etc., and these limit the exclusion limit of the filler to 6
By making the pores smaller than 10,000, it is possible to prevent them from entering the pores of the particles, and low molecular weight compounds such as catecholamines (molecules 1k 150), guanidino compounds (molecular weight too-woo), amino acids (molecular weight ioo
-wooo), vitamins (minute 1m1m!l-1■ and K) can be retained in the pores of the particles.The exclusion limit value is z, o o o~a o, o
By being deemed to exist within the scope of o o,
Proteins are not retained in the pores of the particles of the filler, but are quickly eluted through the outside of the pores, and are retained by the pores of the low molecular weight acid component, so they are eluted later than the proteins. Furthermore, low molecular weight components are separated due to differences in hydrophobicity.
本発明液体クロマトグラフィー用充填剤は、疎水性単量
体と親木性単量体を懸濁重合させることにより得られる
が、水性懸濁重合を行なわせるＫは、疎水性単量体と親
木性単量体の混合物を溶解するが、共重合体を溶解しな
い有機溶媒の存在Ｆに共重合反応を行なわせる。上記有
機溶媒としては例えばトルエン、キシレン、ジエチルベ
ンゼン。The packing material for liquid chromatography of the present invention can be obtained by suspension polymerization of a hydrophobic monomer and a woody monomer. The copolymerization reaction is carried out in the presence F of an organic solvent that dissolves the mixture of wood monomers but does not dissolve the copolymer. Examples of the organic solvent include toluene, xylene, and diethylbenzene.
ドデシにベンゼン等の芳香族炭化水嵩類、ヘキサン、ヘ
ゲタン、オクタン、デカン等の飽和炭化水素類、インア
ミルアルコール、ヘキシルアルコール、オクチルアルコ
ール等のアルコール類がアケられる。Aromatic hydrocarbons such as benzene, saturated hydrocarbons such as hexane, hegetane, octane, and decane, and alcohols such as amyl alcohol, hexyl alcohol, and octyl alcohol are added to dodecyl.
有機溶媒により前記混合物は均一に溶解されて、前記混
合物が水性ｌＩ！ｆＩ４菖合されるので、＃ｌられた電
合体粒子中に有機溶媒が分散して存在しており、直合終
了後上記有機嬉厳を粒子中から取り除くことにより多孔
性で球状の共重合体が得られる。The mixture is uniformly dissolved by the organic solvent, so that the mixture becomes aqueous! Since fI4 is combined, the organic solvent is dispersed in the #l electropolymer particles, and after the completion of the combination, the organic solvent is removed from the particles to form a porous and spherical copolymer. is obtained.
又水性ａｍ重合は、九とえば前記有機溶媒ｋ。Also, in aqueous am polymerization, for example, the above-mentioned organic solvent k.
前記混合物及びラジカル発生触媒を溶解し、得られた溶
液をポリビニルアルコール、リン酸カルシウム等の懸濁
重合安定剤の分散され九水相に添加し攪拌しながら５ｏ
−ｘｏ６ｔ：に加熱することＫより行なわれる。The mixture and radical generating catalyst were dissolved, and the resulting solution was added to an aqueous phase in which a suspension polymerization stabilizer such as polyvinyl alcohol and calcium phosphate was dispersed.
-xo6t: Heating is performed by K.
Ｅ記うジカル発生触厳は反応聞始削としてラジカルを発
生する触媒であるが、該触媒としてはたとえばベンゾイ
ル／４−オキナイド、クメンノー−オキサイド等の有機
過酸化物、過酸化水素、過硫酸カリ９ム、過硫−アンモ
ニウム等の無機過酸化物、アゾビスイソブチロニトリル
、アゾビスイソブチロアミド等のアゾ化合物など公知の
任意のラジカル発生触媒がｌｌ１ｊｌ！される。The radical-generating catalyst described in E is a catalyst that generates radicals at the beginning of the reaction, and examples of such catalysts include organic peroxides such as benzoyl/4-oquinide and cumeno-oxide, hydrogen peroxide, and potassium persulfate. Any known radical generating catalyst such as inorganic peroxides such as ammonium persulfate, azo compounds such as azobisisobutyronitrile and azobisisobutyramide can be used! be done.
上記本性ＪＩＩＩ１重合によって重合された共重合体粒
子は加熱等Ｋｊシ乾燥され粒子中の有機溶媒が放出され
るととＫよって多孔性で球状の共重合体となされ、液体
クロマトグラフィー用光填剤となされるのである。The copolymer particles polymerized by the above-mentioned original JIII1 polymerization are dried by heating or the like to release the organic solvent in the particles, and are made into a porous and spherical copolymer, which is used as an optical filler for liquid chromatography. This is how it is done.
排除限界値の調整を行なうには、水性ＩＩｌ陶菫合によ
り疎水性単量体と親木性単量体を共重合させるに際し、
共重合体の溶解度／（ラメ−ターと近似する溶解度パラ
メーターの有機溶媒を使用することによりなしうる。ｎ
、ｔはテトラデシルエチレングリコールジメタクリレー
トの共重合成分量が５．０重量％であり、又ジビニルベ
ンゼンの共重合成分量が９ｓ、、０１１ｍ％である共重
合体の溶解度）囃りメーターｉｊ ＠、 ４であるが、
ここで有機溶媒として溶解度バクメーターがＩＬ９であ
るトルエンを選択して水性懸濁重合を行なうと、排除限
界値がｔ ｏ、ｏ ｏ 。In order to adjust the exclusion limit value, when copolymerizing a hydrophobic monomer and a woody monomer by aqueous IIl polymerization,
This can be achieved by using an organic solvent with a solubility parameter similar to the solubility of the copolymer/(rameter).
, t is the solubility of a copolymer in which the amount of copolymerization of tetradecyl ethylene glycol dimethacrylate is 5.0% by weight and the amount of copolymerization of divinylbenzene is 9s, 011m%) , 4, but
If toluene, which has a solubility bacterometer of IL9, is selected as the organic solvent and aqueous suspension polymerization is carried out, the exclusion limit values are to, o o.
の充填剤粒子を得ることができる。filler particles can be obtained.
本発明液体クロマトグラフィー用充填剤によれば、血清
や尿等の生体液中のカテコールアミン。According to the packing material for liquid chromatography of the present invention, catecholamines in biological fluids such as serum and urine.
グアニジノ化合物１ｍ汁酸、ビタミン、ステロイドホル
モン、薬物等の低分子量酸分を蛋白質等の高分子成分か
ら分離し定量する性能がすぐれており、除蛋白操作を省
略するととにより掃作時開、一定時間を短縮することが
できる。Guanidino Compound 1M has excellent performance in separating and quantifying low molecular weight acids such as sucrose, vitamins, steroid hormones, and drugs from high molecular weight components such as proteins. It can save time.
次に本発明の実施例を記す。Next, examples of the present invention will be described.
貞總何１
冷却器、員拌機、温度肚および滴下ロートの設置された
２１セ／鳴ラブルフラスコに４１量％のポリビニルアル
コール水溶液４０Ｇ−とテトラデシルエチレングリコー
ルジメタアクリレート１０＃、ジビニルベンゼン＠Ｏｆ
、）ルエン１００＃およびベンゾイルパーオキナイドＬ
ｌｌｉｔよシなる混合液を供給しえ１次Ｋ ４ Ｇ Ｏ
ｆｐｍの攪拌適度で攪拌しながら５ｏ１６（昇温し１０
時闇電合反応を行って冷却した。冷却後重合生成物を母
波分離し喪黴、熱水及びアセトンで洗浄して粒子径が１
−ｘｓｐ厘の多孔性で球状の共重合体を得え。1. In a 21-cell/measuring flask equipped with a condenser, stirrer, temperature control, and dropping funnel, add 40G of 41% polyvinyl alcohol aqueous solution, 10# of tetradecyl ethylene glycol dimethacrylate, and divinylbenzene@ Of
,) Luene 100# and benzoyl peroxinide L
llit, supply a mixture of primary K 4 G O
5o16 (heated to 10
The mixture was subjected to an electric combination reaction and cooled. After cooling, the polymerization product is separated into mother waves and washed with mold, hot water and acetone to reduce the particle size to 1.
- Obtain a porous and spherical copolymer of xsp.
得られ九多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子及び組
粒子を取Ｗｋｈて粒子長８〜１０μ譚の範囲のものを使
用し友、この共重合体の共重合成分量はテトラデシルエ
チレングリコールジメタアクリレートが参〇０重量％ｈ
シ、ジビニルベンゼンの共直合成分量が１０重量鳴であ
った。Among the resulting porous and spherical copolymers, fine particles and grouped particles with particle lengths ranging from 8 to 10 μm were used. The copolymerization content of this copolymer was tetradecyl Ethylene glycol dimethacrylate is 300% by weight
The amount of co-orthotically synthesized ingredients of divinylbenzene was 10% by weight.
父、共重合体の溶解度パラメーターｉｊ ８．１１であ
り、粒子内の細孔容量は粒子容量の３５％を占めるもの
であった。The solubility parameter of the copolymer was 8.11, and the pore volume within the particles accounted for 35% of the particle volume.
かくして得られた充填剤４０−をｌｏｏｌＩＩｇのテト
ラヒドロフラン／パークロルエチレン（１／ｌ ）混合
液に分散し、ステンレスカラム（直径７．９■、長さ５
０ ｅｘ ） Ｋ高圧定流量ポンプによりテトラヒドロ
７ラン／パークロルエチレン（１／１）の混合液で１５
ｄ ／分の速度で圧送して充填しマドグツ７に接続し
、溶離液としてテトラヒドロ７クンを用い、Ｉｌ準試料
としてポリスチレンを使用して排除ｉｌｌｌｌ上値め九
結果１０．００（１であった。The thus obtained packing material 40- was dispersed in loolIIg of a tetrahydrofuran/perchloroethylene (1/l) mixture, and a stainless steel column (diameter 7.9 cm, length 5
15 with a mixture of tetrahydro7ran/perchlorethylene (1/1) using a K high-pressure constant flow pump.
The sample was filled by pumping at a rate of 2/min and connected to the MAGODUTSU 7, using tetrahydro-7 as the eluent and polystyrene as the Il quasi-sample.
父、水／メタノール（１／ｌ）ｓ合液に分散し。Disperse in a mixture of water/methanol (1/l).
ステンレスカラム（直ａＳ■、長さ２５ ｃｍａ ）
Ｋ高圧定流量ポンプにより水／メタノール（１／１）の
混合液で２５ ｍｌ ／分の適度で圧送して充填した。Stainless steel column (direct aS, length 25 cm)
A mixture of water/methanol (1/1) was pumped and filled at a rate of 25 ml/min using a K high-pressure constant flow pump.
得られたカラムを高速液体クロマトグラブに接続し、溶
離液としてＱ、１Ｍリン酸−カリクム水溶液ＣｐＨｘ、
ｏ＞／メチルアルコール（８７２）混合液を用い、試料
として標準力テコ−１１１５２３種（ノルアドレナリン
、アトルナリン、ドーノ曵ミン）を添加し九標準血清を
用いて分離を行なった。その結果を第１図に示す。Ｐ。The obtained column was connected to a high performance liquid chromatograph, and the eluent was Q, a 1M phosphoric acid-potassium aqueous solution CpHx,
Using a mixture of o>/methyl alcohol (872) and adding 111,523 types of standard serum (noradrenaline, atrnaline, and donohmin) as samples, separation was performed using nine standard serums. The results are shown in FIG. P.
は血清蛋白、Ｐ、はカテコールアミンの吸光度ピークで
あり、血清蛋白は単一ピークとして溶出され、その後に
３＠のカテコールアミンがＭ−位１１に＠出された。＊
＊図では分子量分割能のみで蛋白質とカテコールアミン
が分離しているため、蛋白質Ｆ！排除阪界値の位置（Ｖ
ｏ）ＩＣ溶出され、又３種のカテコールアミンは分子量
が殆んど同一であるので、同一位置に溶出されている。is serum protein, P is the absorbance peak of catecholamine, serum protein was eluted as a single peak, and then 3@ catecholamine was released at M-position 11. *
*In the figure, protein and catecholamine are separated only by molecular weight resolution, so protein F! The position of the excluded Hankai value (V
o) The three types of catecholamines are eluted by IC, and since the molecular weights of the three catecholamines are almost the same, they are eluted at the same position.
更に低分子量成分である８種のカテコールアミンを夫々
分離するため１に、溶離液として０１Ｍリン酸−カリク
ム水溶液（ＰＨｍ、ｏ）を使用して分離した。その結果
１１２図に示すように血清蛋白（Ｐｍ ）は排除限界値
の位置（Ｖ・）Ｋ＃１出され、ノルアドレナリン（Ｐａ
）、アドレナリン（Ｐｉ）、ドーパミン（Ｐａ）Ｆｉ
逆相分配によって夫々分かれて溶出された。Furthermore, in order to separate each of the eight types of catecholamines, which are low molecular weight components, in step 1, a 01M aqueous phosphoric acid-potassium solution (PHm, o) was used as an eluent. As a result, as shown in Figure 112, serum protein (Pm) is released at the exclusion limit position (V・)K#1, and norepinephrine (Pa)
), adrenaline (Pi), dopamine (Pa)Fi
They were each eluted separately by reverse phase partitioning.
実施例２
ジビニルベンゼン８０＃、β−ハイドロキシエチルメタ
アクリレ−）！Ｏ＃、）ルエン１００ｔ、ベンゾイル／
（−オキサイ）Ｌｓｔよりなる温合液を使用し、実施例
１と同様にして水性懸濁重合を行ない多孔性で球状の共
重合体を得た。Example 2 Divinylbenzene 80#, β-hydroxyethyl methacrylate)! O#,) 100t of luene, benzoyl/
Aqueous suspension polymerization was carried out in the same manner as in Example 1 using a warm mixture of (-oxy)Lst to obtain a porous and spherical copolymer.
得られ九多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子及び粗
粒子を除き１粒子ｌ１６〜９μ厘のものを使用した。Of the obtained nine-porous, spherical copolymer, one having a particle size of 16 to 9 μm, excluding fine particles and coarse particles, was used.
この共重合体の共直合区分量はジビニルベンゼンが８０
重鰍鴨であ〉、β−ハイドロキシエチルメタアクリレー
トが！Ｏ重量嘔であった。The amount of copolymerization in this copolymer is 80% of divinylbenzene.
It's a heavy duck, and it's β-hydroxyethyl methacrylate! The patient had severe vomiting.
又、共重合体の溶解度／１ラメ−ターはａＳであり、粒
子内の細孔容量は粒子容量の２４％を占めるものであっ
た。Further, the solubility/1 rameter of the copolymer was aS, and the pore volume within the particles accounted for 24% of the particle volume.
かくして得られた充填剤を水／１セトニトリル（１／３
）混合１［３０ｄＫ分散させ、ステンレスカラム（直径
５■、長さ２ Ｓ ｔｘ ）に高圧定流量ポンプにより
、水／１セトニトリル（７７ｓ）Ｓ合献を２．５ ｍ
／分の適度で圧送して充填した。The filler thus obtained was mixed with water/1 setonitrile (1/3
) Mixing 1 [Dispersed at 30 dK, 2.5 m of water/1 setonitrile (77 s) S was added to a stainless steel column (diameter 5 mm, length 2 S tx ) using a high-pressure constant flow pump.
It was filled by pressure feeding at a moderate rate of 1/min.
得られたカラムを実施例Ｉにおいて使用し九高速液体り
ロマトグテフに接続し、実施例１と同様にして排除限界
値を求め九とζろ２へ０００であった。を九溶離液とし
て水／アセトニトリル（７ム１混合液を喝い、試料とし
てプール血清に抗てんかん剤であるフエノパルビクール
のメタノール溶液を添加したものを用いて分離を行なっ
た。その結果を第３ＷＡＫ示すｓＰｆは血清蛋白の吸光
度ピークでｈ）、排除限界値の位置（Ｖｏ）に溶出した
。Ｐ・はフェノパルビクールの吸光度ピークであシ、血
清蛋白とは完全に分離した。The obtained column was used in Example I and connected to a nine high-performance liquid filter, and the exclusion limit value was determined in the same manner as in Example 1, and it was 000 to 9 and ζ filter 2. A mixture of water/acetonitrile (7 parts and 1 part) was used as the eluent, and a methanol solution of phenoparvicul, an antiepileptic drug, was added to pooled serum as the sample. sPf, which indicates the third WAK, was eluted at the absorbance peak of serum protein h) and at the exclusion limit position (Vo). P. is the absorbance peak of phenoparvicur, which was completely separated from serum proteins.
実施例３
ジビニルベンゼン９０＃、アクリルアＥＦＩＯｔ、トル
エン１００＃、ペンゾイルパーオキデイドＬｓ＃よりな
る温合液を使用し、実施例１と同様にして水性懸濁重合
を行＆−多孔性で球状の共重合体を得た。Example 3 Aqueous suspension polymerization was carried out in the same manner as in Example 1 using a warm mixture of divinylbenzene 90#, Acrylica EFIOt, toluene 100#, and penzoyl peroxide Ls#. A copolymer was obtained.
得られた多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子及び粗
粒子を除き、粒子径１０〜１３μ鱈のものを使用した。Among the porous and spherical copolymers obtained, fine particles and coarse particles were excluded, and those having a particle size of 10 to 13 μm were used.
この共重合体の共重合成分量はりビニルベンゼンが９０
重量鴨であ＃）、アクリルアミドが１０重量へであった
。又共重合体の溶解度ノ嘴ラメ−ターけＬ７であり、粒
子内の細孔容量は粒子容量の１６％を占めるもので６つ
九。The copolymerization content of this copolymer is 90% vinylbenzene.
The amount of acrylamide was 10% by weight. In addition, the solubility of the copolymer is L7, and the pore volume within the particles is 6.9, accounting for 16% of the particle volume.
かくして得られた充填剤を水／メタノール（１／ｌ）の
混合液に分散させ、ステンレスカラム（電機５■、長さ
２５ ｅｘ ） Ｋ ｊｉ圧定連流ポンプにより、水／
メタノール（１／ｌ）の滉壺濠をｌ ｍ ｍｌ ／分の
速度で圧送して充填しえ。The thus obtained packing material was dispersed in a mixture of water/methanol (1/l), and water/methanol was added to the stainless steel column (electric 5 mm, length 25 ex) using a constant pressure continuous flow pump.
Fill the pot with methanol (1/l) by pumping it at a rate of lmml/min.
得られた充填剤の排除限界値を夷ｔＩＩＡ例１と同様に
して求めたと仁ろス亀ＯＯＯで多つ九。The exclusion limit value of the obtained filler was determined in the same manner as in tIIA Example 1 and was determined by Niros Kame OOO.
又実施例１と同じ高速液体クロマトグラフＫかけ、試料
としてブール血清Ｋ１１ｌ準胆汁酸（クルンダオキシコ
ール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール
Ｉｌりのエタノール溶液を添加したものを用いて分離を
行ない、蛍光光度計で検出した。七の結果を第４図に示
す。Separation was also carried out using the same high-performance liquid chromatograph K as in Example 1, using as a sample Boer serum K11l quasi-bile acids (culundaoxycholic acid, cholic acid, chenodeoxycholic acid, and ethanolic solution of lithocol Il added). , was detected using a fluorometer.The results of the seventh experiment are shown in FIG.
Ｐ−は血清蛋白の蛍光度ピークであり、排除限界値の位
置（Ｖｏ）ＫｔＪｌ出し九ａ ＰＩＯはクルソダオキシ
コール陵、Ｐｌｔ ｕコール酸、Ｐｕｔｊケ／ダオキシ
コール酸、Ｐｌｌはりトコール酸の蛍光度ピークであり
、４種の胆汁酸はそれぞれ分離した。P- is the fluorescence peak of serum protein, and the position of the exclusion limit (Vo) The four bile acids were separated from each other.
比較例１
実施例１においてトルエン１０ Ｏｔ Ｏ代ｔ） Ｋ
１１−オクチルアルコールを１００＃を使用した以外は
実施例１と崗様にして水性懸濁重合を行ない、多孔性で
球状の共重合体を得た。Comparative Example 1 In Example 1, toluene 10 Ot Ot) K
Aqueous suspension polymerization was carried out in the same manner as in Example 1 except that 100 #11-octyl alcohol was used to obtain a porous and spherical copolymer.
得られた多孔性で球状の共重合体のうち、微粒子＆び粗
粒子を除き、粒子径８〜１ＯｐＨ１のものを使用し良。Among the porous and spherical copolymers obtained, those having a particle size of 8 to 1 OpH1, excluding fine particles and coarse particles, may be used.
コノ共重合体の共重合成分量はテトラデシルエチレング
リコールジメタ１クリレートが１０３１量１であシ、ジ
ビニルベンゼンの共電合成分量が９０重量鳴であり九、
又共重合体の溶解度−噛テメーターｄＬ９で番り、粒子
内の細孔容量は粒子容量の３２％を占めるものであった
。The amount of copolymerization of the copolymer is 1,031 by weight of tetradecyl ethylene glycol dimethacrylate, and the amount of co-electrolytic synthesis of divinylbenzene is 90 by weight.
Also, the solubility of the copolymer was measured using a dL9 lattice meter, and the pore volume within the particles accounted for 32% of the particle volume.
次いでこの光ＪＸ剤を実施例１と同様忙してステンレス
カラムに充填し、実施例１と同様にして＃除限界値を求
めたところ４ｏへ０００であった。Next, this Hikari JX agent was packed into a stainless steel column in the same manner as in Example 1, and the # division limit value was determined in the same manner as in Example 1, and it was found to be 4o to 000.
更に実施例１と同様にしてｌＩ準カテコールアミンを添
加し九標準血清を用いて分離を行なった。Furthermore, in the same manner as in Example 1, lI quasi-catecholamine was added and separation was performed using nine standard serums.
その結果を第５図に示す＠Ｐ１４は血清蛋白−ＰＳＩは
ツルアＦレナリン、Ｐ１６はアドレナリン、ＰｌｌＦｉ
Ｆ−Δミンの吸光度ピークであるがカテコールアミンは
幅広いピークと重なり定量できなかツｆｒニー、コノ幅
広ｒヒークＳ分を分取してアセテート膜で電気泳動分析
を行なった結果、血清蛋白であるｒ−グロブリンが検出
されえ。The results are shown in Figure 5. @P14 is serum protein, PSI is Turua F renarin, P16 is adrenaline, PllFi
This is the absorbance peak of F-Δamine, but catecholamine overlaps with a wide peak and cannot be quantified.As a result of fractionating the wide r-heak S fraction and performing electrophoretic analysis on an acetate membrane, it was found that it is a serum protein. - Globulin can be detected.
第１図は実施例１におけるカテコールアミン添加ｔＩＡ
＃血清のクロマトグラム、餡２図は実施例１において、
カテコールアミンを分離したクロマトグラム、ＩＩ３図
は実施例２における抗てんかん剤添加プール血清のクロ
マトグラム、ＩＩａ図Ｆｉ夷譲Ｎｓにおける標準胆汁酸
添加プール血清のクロマトグラム、第５凶は比較ｆｌＩ
４１におけるカテフールアミン添加株準血清のクロマト
グラムである。
特許出願人
積水化学工業株式会社
代量者藤沼基利
才 １ＥＪ
ｉ１Ｅ神４１
才 ２ 店
帰行）量
才３因
ｆ手 ｍ
ｒ嗜
帰５Ｘ−ｔ。Figure 1 shows catecholamine-added tIA in Example 1.
#Serum chromatogram, Figure 2 is in Example 1,
Chromatogram separating catecholamines, Figure II3 is the chromatogram of the pooled serum supplemented with anti-epileptic drugs in Example 2, Figure IIa is the chromatogram of the pooled serum supplemented with standard bile acids in Fi yield Ns, and the fifth one is the comparison flI
Fig. 41 is a chromatogram of quasi-serum of catefylamine-added strain in No. 41. Patent applicant Sekisui Chemical Co., Ltd. Quantity agent Mototoshi Fujinuma 1EJ i1E God 41 years old 2 Return to store) Quantity 3 factors f hand m r return 5X-t.
Claims (1)
多孔性粒子であって、排除限界値（ＰＬ値）が２．００
０〜６へ０００の範囲内に存するものであることを特徴
とする。液体クロマトグラフィー用充填剤 ２共重合体における疎水性単量体の共重合成分量が４０
〜９５重置１であり、親水性単量体の共重合成分量が６
０〜５重量鴨である、特許請求の範１１！１１項記旗の
液体クロ臂トゲラフイー用充填剤 親疎水性単量体が、フェニル基を有するビニル系単量体
である、特許請求の範囲第１項又Ｆｉ第２項記載の液体
クロ１トゲラフイー用充填削４、共重合体の溶解度バク
メーター（ＳＰ値）が８．４以上である。特ＩＩＦ請求
の範囲１１１項から第３項のいずれか記載の液体クロマ
トグツフィー出光Ａ１１ｌ１ ５、粒子径がＳ〜４０ｐ簿である、特許請求の範囲１１
１項から１１ｇ４項のいずれか記載の液体クロ臂トゲラ
フイー用充填剤 ６、粒子内の細孔容量が、粒子容量の５〜５０％を占め
るものでちる、特許請求の範囲第１項から１１５項のい
ずれか記載の液体クロマトグラフィー用充填剤[Claims] 1. Porous particles made of a copolymer of a hydrophobic monomer and a hydrophilic monomer, which have an exclusion limit value (PL value) of 2.00.
It is characterized by being within the range of 0 to 6,000. The copolymerization content of hydrophobic monomer in the filler 2 copolymer for liquid chromatography is 40
~95 superposition 1, and the amount of copolymerization of hydrophilic monomer is 6
Claim 11, which is a weight duck of 0 to 5 weight! Claim No. 1, wherein the filler hydrophilic and hydrophobic monomer for liquid black-legged frogfish described in item 11 is a vinyl monomer having a phenyl group. The solubility bag meter (SP value) of the liquid chlorine 1 filler cutter for thornfish described in item 1 or Fi item 2 and the copolymer is 8.4 or more. Claim 11, wherein the liquid chromatography Idemitsu A11115 according to any one of Claims 111 to 3 of the Patent IIF has a particle size of S to 40p.
Claims 1 to 115, wherein the filler 6 for liquid black-legged sparrowfish according to any one of Items 1 to 11g and Item 4, wherein the pore volume within the particles accounts for 5 to 50% of the particle volume. A packing material for liquid chromatography according to any one of
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56182022A JPS5883260A (en) | 1981-11-12 | 1981-11-12 | Filler for liquid chromatography |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56182022A JPS5883260A (en) | 1981-11-12 | 1981-11-12 | Filler for liquid chromatography |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5883260A true JPS5883260A (en) | 1983-05-19 |
| JPH0151779B2 JPH0151779B2 (en) | 1989-11-06 |
Family
ID=16110967
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|---|---|---|---|
| JP56182022A Granted JPS5883260A (en) | 1981-11-12 | 1981-11-12 | Filler for liquid chromatography |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5883260A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115487543A (en) * | 2022-10-18 | 2022-12-20 | 河北大学 | Single-column two-phase liquid chromatography monolithic column and preparation method and application thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5013525A (en) * | 1973-05-01 | 1975-02-13 | ||
| JPS54103396A (en) * | 1978-01-31 | 1979-08-14 | Sekisui Chemical Co Ltd | Bulking agent for liquid chromatograph |
-
1981
- 1981-11-12 JP JP56182022A patent/JPS5883260A/en active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5013525A (en) * | 1973-05-01 | 1975-02-13 | ||
| JPS54103396A (en) * | 1978-01-31 | 1979-08-14 | Sekisui Chemical Co Ltd | Bulking agent for liquid chromatograph |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115487543A (en) * | 2022-10-18 | 2022-12-20 | 河北大学 | Single-column two-phase liquid chromatography monolithic column and preparation method and application thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0151779B2 (en) | 1989-11-06 |
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