JPS585657A - 免疫測定用エレメントおよびそれを用いた測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫測定用エレメントおよびそれを用いた測定
法に関する。

従来よシ抗原抗体反応およびこれに類する反応を定量的
Ｋｌｌ定する手段は数多く知られている。

このような方法は主として血液、尿などの体液中に微量
に存在する成分の定量、定性などに応用されて来た。微
量の成分としては、生体成分としての種々のホルモンな
どの生理活性物質、生体内の酵素、投与された薬物、微
生物に対する特異的抗体これらの代謝物など種々の生体
内に存在する微量成分があげられる。

そのような微量成分は主として抗原抗体反応ま九はこれ
に類する反応、例えばホルモンとそれに。

対するＭＬ体、または受容体を応用して測定されている
。抗原抗体反応の結果、それらの結合瞼が不壊性になつ
九シ、多数の抗原・抗体分子からなる大きな集合体が形
成されることを利用する方法は既に古典的な方法として
知られている。これらは試験管内に沈降する量を直接測
定する方法や、ゲル内で沈降させる免疫拡散法、あるい
は抗原抗体結合物に結合する補体を用いる方法によシ測
定されている。ま九、種々のハプテン、抗原や抗体を何
らかの方法で標識しておき、七の標識を測定することに
よる方法もよく知られている。これらの内でも高感度測
定法として広く用いられている方法にラジオイムノアッ
セイ（ＲＩＡ）があるが、ＢＩＡは放射性同位元素を利
用するもので、よシ安全な測定法として放射性同位元素
標識の代シに酵素で標識したものを用いる測定法即ち酵
素免疫測定法（ＥＩＡ）が近年広く利用されている。

ＥＩＡは薬物や抗原（種々のハプテンを含む二以下単に
抗原と記する）ｔたは抗体に酵素を結合させておき、そ
の酵素活性を標識として抗原抗体反応の程度を測定し、
その結果よシ抗原または抗体の量を測定しようとするも
のである。

このような測定法としては、測定しようとするものが抗
原である場合と抗体である場合、酵素標識抗原または抗
体と標識しない（非標識）抗原まえは抗体を競争的に反
応させる場合と競争させない場合、更に競争反応のとき
に抗原会抗体結合物と非結合物とを分離して測定する場
合と分離しないで測定する場合、などが挙けられ、さら
にサンドイツチ法４挙られる。

本発明の一定法杜、これらの方法の内で競争反応法やサ
ンドイツチ法に用いられる測定法でｓｂ、その内でも４
１に好ましくは不溶性担体である測定用エレメントと固
定化（不溶性）抗体や抗原を用い友方法である。

不溶性担体を用いた従来の免疫測定法においては、抗体
固定化担体としてポリスチレンやガラス製の球状担体や
ペーパーディスク状担体勢を用い九ものであったシ、ま
たは反応管壁面を担体として利用していたため、免疫反
応のための媒体を多く必要とし、その免疫反応速度の低
下とか、反応濃度が一様でなかったりなどの欠点があっ
た。これらの欠点を補うためには、反応液の攪拌または
反応管の振とう操作が必須条件となシ、したがって、も
っばら比較的高含量の物質の測定のみにしか用いられて
いなかったのが実情である。

本発明は上記のような種々の欠点を改善するために研究
開発されたものであって、その目的とするところ°は、
不溶性担体である測定用エレメントを特殊な構造に形成
し、該測定用エレメントによって反応管内で接触面積を
増大させ、さらに測定用エレメントに対する反応液の接
触面を均一な層とすることにより、攪拌、振とうなどの
煤雑な操作を必須とせず、また著しく少ない免疫反応媒
体の使用にて、その免疫反応を迅速かつ均一な条件下で
行えるようにした測定用エレメントおよびそれを用いた
測定法を提供するにある。

本発明は、ＥＩＡ＋ＲＩＡにも応用できる。

更に本発明方法は、固相法などＫよる競争反応法やサン
ドイツチ法による測定法に応用できる。

本発明で使用される不溶性担体としては、一般のＢＩＡ
４−ＲＩＡに用いられる不溶性担体が使用される。４１
に抗体を不溶化するに当っては、一般的に云って不溶性
担体に結合させる対象が抗体蛋白質であるから、酵素蛋
白質を固定化する固定化酵素の製造の場合に用いられる
担体の様なものが使用される。この不溶性担体としては
、例えばグルタルアルデヒドなどＫで処理してなるアル
ブミンやセラチンなどの不溶性蛋白質担体、アガロース
、セルロースヤデキストリンなどのエピクロルヒドリン
処ｍｔたは臭化シアン処理、さらにそれらのアミノ化試
薬処理してなる不溶性半合成高分子担体（多糖類）、ア
クリロニトリル、アクリル酸、アクリル酸エステル、メ
タアクリル酸、メチルメタアクリル酸、ビニルアルコー
ル、酢酸ビニル、スチレン、アミノスチレン、ジビニル
ベンゼン、アクリルアミド、エチレン、無水マレイン酸
、クロトン酸などのポリマーまたはコポリマー、さらＫ
それらの７ミノ化試薬処理してなる不溶性合成高分子担
体（高分子樹脂）、その他アミン化試薬処理してなるシ
ラン化合物などの不溶性無機担体などの官能基に基いて
結合せしめて使用してもよい。またこの不溶性担体にア
ミン基などを導入する手段としては公知の種々の手段を
用れｄよく、例えばニトリル基の還元によるアミン化、
水酸基のｒ−アミノプロピルトリエトキシシランの反応
によるアミノアルキル基の導入、またはヒドロキシメチ
ル基の過ヨウ素酸酸化によるアルデヒド基への変換、さ
らにそのアルデヒド基にジアミンを反応せしめてなるア
ミノ基の導入、多糖類水酸基の臭化シアン反応によるイ
建ドヵルボナート基への変換、アミド基のハロゲン化リ
ン化合物によるイミノハロゲニド基への変換、さらにこ
の官能基を官能基導入試薬にて処理して新たに官能基を
適宜導入してしてもよい。これらの不溶性担体において
、ナイロン、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、塩化
ビニル等の高分子樹脂、セルロース、デキストランなど
の不溶化多糖体、ガラス等の無機材質等が加工するに好
適なものとして例示される。このような不溶性４担体と
しての測定用エレメントは、そのｔまの状態で本発明の
様に弾丸状あるいは槍形状その他これに類する形状のも
のでもよいが、他の固体成型物例えば金属、プラスチッ
クの表面に本発明の測定用エレメントの形状が保持され
るように付着形成させたものでもよい。

次に本発明の測定用エレメントの実施例について図面を
参照しながら説明する。

第１図は測定用エレメントが符号１として総括的に示し
である。測定用ニレメン）１は、例えばナイロン６６の
高分子樹脂材料から成シ、エレメント本体２と該本体２
の上面部２ａの中央部に突出して設けられた取付脚８と
から構成されている。

取付脚８には、他の操作棒（図示せず）が取付けられる
が、取付脚８自体を操作棒として使用するために延長さ
せた形状であってもよい。エレメント本体２は弾丸状に
成型されていて、その外径は反応管４の内径と僅かな隙
間を保つ様な径に形成しである。エレメント本体２の子
局間の頂部にはクサビ状の突起６が設けてあって、該突
起６によシ、エレメント本体２の弧状外周面２ｂと反応
管４との弧状内周面４ｍとの間に一定の間隙部６が保持
されるようＫなっている。また、このクサビ状の突起５
の代わシに凸状の突起をなしてもよい。

要は突起６によシ、エレメント本体２が反応管４の弧状
内局面４ａと密着状態となることを防止し得る形状であ
ればよい。この突起部の高さとしては、エレメント本体
２と反応管４の管内壁面との幅とが同一となればよい。

エレメント本体２の上面部２ａＫは、第２図に示すよう
に、取付脚８を中心にして四角形状に切夛込み溝８が付
設しである。切シ込み溝８の終端はエレメント本体２の
周縁部に開口させてあって、上面部２ａの延長線上での
反応液の表面張力を弱めるように考慮しである。またこ
の切り込み溝８の溝形状としては、断面形状が半円状、
楕円状、台形状、三角形状、四角形状などのいずれの形
状であってもよい。

本発明の測定用エレメントは、上記の様な構造であるた
め、反応管に入れた反応液中にエレメント本体を浸漬さ
せれば、エレメント本体の突起が反応管の内底面に接触
してエレメント本体の外周筒とそれに対応する反応管の
内周面との間に僅かな隙間が形成される。（第１図参照
）。したがって、反応液量が少量であってもエレメント
本体の浸漬によって、その液が隙間部に案内されるとと
もにエレメント本体の上面部にまで上昇された反応液は
切シ込み溝内を流れてそれ自体の表面張力作用を失う。

それ故、反応液はエレメント本体の外周面に均一な条件
（一定厚の層の形ＩＩ）で接触することになる。

上記の様な切シ込み溝８の変形例としては、第８図（イ
）Ｋ示すように、エレメント本体２の上面部２ａの半径
方向に放射状に配設してもよい。

また、他の変形例としては、第８図（ロ）に示すように
、エレメント本体２の上面部２ａの直径方向に直線状に
配設してもよい。更に他の変形例としては、第８図（）
・）に示すように、エレメント本体２の上面部２ａの円
周方向に左右対称の形に配設してもよい。このように、
切シ込み溝８は、その終端が上面部２ａの周縁部に開口
されている形状であればよく、また如何なる形状に付設
することもできる。

第４図は測定用エレメント１の他の変形例を示したもの
である。この実施例におけるエレメント本体２は槍形状
に成形して参る。したがって、反応管４もエレメント本
体２に沿うテーパー形状のものが使用されるもので、種
々市販の反応管の早秋に従って、その測定用エレメント
を変形、加工すればよい。なお、エレメント本体２のそ
の他の構造については、前記第１図で示した実施例のも
のと同じであるため、それと構造を同じくする部分には
同じ番号を付し、説明社省略する。

この様な測定用エレメントに通常公知の手段を適用して
化学的ｔたは物理的に抗体もしくは抗原、その他の薬物
の受容体を結合して不溶性抗体等（抗原、受容体）とな
し、固相を調製する。

同相の調製法としては、前記不溶性担体にあらかじめ抗
体等を結合せしめるための官能基を導入して特定の形状
に加工してもよく、また社加工した後に官能基を導入し
てもよいもので、例えば測定用エレメントがナイロン６
６の場合は、あらかじめ前述の形状に加工し、次いでジ
メチル硫酸あるいはイミクロ法による活性化をお仁ない
、ヘキサメチレンジアミン処理、グルタルアルデヒド処
理をおこなって、抗体等例えば第２抗体を結合させ、更
に第１抗体を免疫反応により固定化すればよい。また、
測定用エレメントがデキストランゲル、例えばセファデ
ックスの場合も、あらかじめ前述の形状に加工し、次い
でブロムシアン（Ｂ　ｒＣＮ　）による活性化をおこな
い、これに抗体を結合させて固定化する。更にまた、ポ
リスチレン勢の場合加工後、硫酸で化学的処理した後固
定化するか、または物理的吸着による固定化をおこなえ
ばよい。

またガラス等の場合はｒ−アミノアルキル）　ＩＪエト
キシシラン化合物などの有機アミノ基導入７ラン試薬に
よりアミノアルキルシリリ化せしめ、このアミノ基に基
いて公知の固定化手段により固定化せしめればよい。さ
らに一般に化学的に固定化するに当っては、不溶性担体
の分子内の官能基または導入された官能基と、抗体等の
分子内に有する官能基、例えばアミノ基、水酸基、カル
ボキシル基、チオール基、アルデヒド基勢の官能基に基
いて両者を結合し得る多官能性化合物が用いられる。こ
の公知の種々の多官能性化合物として社、例えばヘキサ
メチレンジインシアナー）、２．４−トルエンジイソシ
アナートなどのジイソシアナート化合物、ヘキサメチレ
ンジイソチオシアナートなどのジイソチオシアナート、
スクシンアルデヒド、グルタルアルデヒド、アジボアル
デヒト°などのジアルデヒド、Ｎ、Ｎ’−エチレンビス
マレイミド、Ｎ、Ｎ′−〇−フエニレ／シマレイミド°
、ヒビスジアゾベンジジン、Ｎ、Ｎ’−ポリメチン／ビ
スヨードアセトアミド、ジエチルマロンイミデート、ジ
メチルアジピンイミデー）、８−（２’−ぺｙジチアゾ
リル−ジチオ）−プロピオン酸、８−（２′−ビリジル
ーＮ−オキサイド−ジチオ）プロピオン酸、６−Ｎ（８
−（τ−ベンゾチアゾリルージチオ）プ四ピオニル〕カ
プロ／酸表どのスルフィドカルボン酸類またはそのスク
シンイミドエステル、ｐ−ニド四フェニルエステル、酸
クロライド、イミデートなどの反応性誘導体（４！願昭
６８−８６９００号参照）、マレイミド安息香酸、マレ
イミドフェニル酢酸、マレイミドフェニルプロピオン酸
などのマレイミドカルボン酸類またはその反応性誘導体
などが挙られる。

を九この多官能性化合物は、不溶性担体に官能基を導入
する丸めの官能基導入試薬としても使用できるものであ
る。

さらにまた、一般的に同相を得るに当っては、例えばｐ
Ｈ６〜８の緩衝液やアセトン、メタノール、エタノール
、ジオキサン、ジメチルスルホキサイド、ジメチルアセ
トアミド、テトラヒドロフランまたはそれらの混合媒体
などの不活性媒体中にて、冷却または室温にて、不溶性
担体と多官能性化合物を反応せしめる。その後必要に応
じて洗浄し、さらに同様の不活性媒体中にこれを加え、
さらに抗体等を加え反応せしめて不溶性担体と抗体等を
反応せしめる。

さらに第２抗体を用いて第１抗体を結合せしめてなる玉
しメント表面−第２抗体−第１抗体結合物を得るに当っ
ては、例えば目的の形状に加工した測定用エレメントを
用いて、上述の如くの同相を得る手段に基いて、まず第
２抗体を結合せしめる。次いでこれに、第１抗体を加え
て免疫反応に基いて結合せしめればよく、このようにし
て得られた第１抗体の免疫活性はほとんど劣化されない
ために４１に好ましい固相である。

さらに測定に当って用いられる酵素を結合させた成分、
例えば抗体、抗原、ハプテンなどや放射性同位元素を結
合させた成分は、公知のＥＩＡやＲＩＡに用いられる標
識のための手段が利用される。また標識物質としての酵
素としては、公知の種々の酵素、例えば酸化還元酵素、
加水分解酵素、転位酵素、リアーゼ、イソメラーゼ、−
リガーゼに属する酵素が利用できる。

この様にして測定用エレメントに固定化した不溶化抗体
等を用いて、この抗体等に対して特異的結合性を有する
測定すべき成分、例えば抗原、抗体を測定するためＫは
、公知のＥＩＡま九はＲＩＡによる測定法が適用される
。

例えば使用される小試験管が１５　ｘ　１０５　ｗｓ　
（内ｌ１１２゜８■±０．１．）の場合、測定用エレメ
ントは第５図に符号人ないしＩで示す各部寸法のものが
使用される。すなわち、Ａ：半径６１１１の半球部、Ｂ
：円柱部の高さｌＯ■、Ｃ：円錐状突起部の高さ０．４
ｗｘＸＤ　：円錐状突起部の円錐の半径０．５瓢、Ｅ：
半ｖｋＯ，７５ｔｍの半円状溝、Ｆ：対向する溝間の中
心部距離？、５ｓａ＊、Ｇ：操作棒を挿着するための凸
部の直径４■、Ｈ：操作棒挿着孔の直径２■、Ｉ：操作
棒挿着のための凸部の高さ８■の寸法にて示される円柱
部、（高さ１０ｍ、直径１２ｍ）と半径６簡の半球部か
ら成るエレメント本体で、免疫反応緩衝液の量はＺｏｏ
　ｐｉ程度、標識物質を結合させた成分を含有する液は
１００　ｌｉｔ程度および被検液（血清、尿等）は１０
０μ！程度を用いればよい。また、この際反応液の液層
の幅（厚み）は０．４．と均一に形成される本のである
。反応温度時間は対象物によって変るが、例えばインク
、ニリンの場合は８７℃、１−５時間、グルカゴンの場
合は６℃、８−４８時間である。要するに測定すべき成
分に応じて適轟に時間、温度を選択すればよい。さらに
、使用される小試験管およびそれに用いる測定用エレメ
ントの大きさに基いて、使用する各液量を調整すればよ
い。

血清中のインシュリン含量測定法を例に挙ると以下のご
とくである。

緩衝液１００μ１１酵素標識インシユリン液ＩＱ９μノ
および一定濃度のインシュリンを含む小試験管（１５Ｘ
１Ｇ５ｓａｍ、内径ＩＬ８．±Ｏ，１，）Ｋ前記の大き
さ、形状の測定用エレメントを加え、８７℃で８〜４時
間インキュベーションをおこなう。反応終了後蒸留水ま
たは生理食塩水５１１１を加え、測定用エレメントを洗
滌した後、あらかじめ酵素基質液４０Ｇ　−５００μｌ
を分注しである別の小試験管に測定用エレメントを移し
換え、８７℃でｌθ〜６０分間酵素反応をおこなう。反
応停止液２．１〜２．ＯｗＬｌを加え、反応を停止させ
て、測定用エレメントを除き、次いで酵素反応に基いて
消費される成分や生成される成分を測定するもので゛、
例えばその液の吸光度を測定するっ既知濃度の標準液の
吸光度１シ求めた標準曲線よシ被検体試料のインシュリ
ン量を求める。

以上のようにして測定されるのであるが、更に詳しく説
明を加える。

６．６−ナイロンを本発明の測定用エレメントの形状（
第５図参照）のもの（以下６．６ナイロンー測定用エレ
メントという）を５塩化リンを用いるイミクロ法により
活性化し、ヘキサメチレンジアミン、グルタルアルデヒ
ド処理してスペーサー導入６．６ｔイロン−測定用エレ
メントを得る。

とのものにウサギ抗モルモツ）ＩｇＧ血清のＩｇＧ画分
を反応させＩｇＧｔ固定化する。次いで、これにモルモ
ットインシュリン抗体血清を反応させて、６．６ナイロ
ン製測定用エレメント−抗モルモットＩｇＧ−インシュ
リン抗体を（以下固定化抗体という）調製する。この固
定化抗体をβ−ガラクトシダーゼ−インシュリン結合物
および種々の濃度の標準インシュリンと反応させ、洗滌
後固定化抗体のβ−ガラクトシダーゼ活性を測定して標
準曲線を作成する。別に固定化抗体に標準インシュリン
の代りに一定量の血清試料を加えて反応させ、上記標準
曲線よシ試料中のインシュリン含量を測定する。

このように本発明の測定用エレメントを使用することに
よシ、攪拌、振とうを要することなく極めて少量の試料
反応液量で免液反応を短時間で行うことができる結果、
微量の成分を少量の試料量で正確に測定することができ
る。

次に測定法の実施例を挙げて説明するが本発明はこれに
限定されるものでないことはいうまでもない。

実施例１ インシュリンの測定法 〔固定化抗体の調整法）−Ｉ 第６図に示される大きさおよび形状の６．６ナイロン製
測定用工レメント５０個を６塩化リン４Ｉとピリジン４
ｇを含むベンゼン６０−中で２日間攪拌した後、４回ぺ
／ゼンにて洗滌し、イミクａライド化し九６，６ナイロ
ン製測定用エレメントを得、これに１００ｍＭのへキサ
メチレンジアミンを含有する水溶液（ｐＨ１１，５）５
Ｇ−を加えて室温下、１時間反応せしめ、０，１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ８，０）で充分洗滌し、さらＫこれに４
％グルタルアルデヒド含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ
８，０＞５０ｉｕを加え、室温下で１時間反応せしめ、
＆、　Ｉ　Ｍ　ＩＪ　ン酸緩衝液（ｐＨ８，０）　テ洗
滌し、スペーサーを６，６ナイロン製測定用エレメント
（５０個）を抗モルモッ）ＩｇＧ血清（ウサギ）のＩｇ
Ｇ画分５Ｎｇを含有する０、　１　Ｍ　リン酸緩衝液（
ｐＨ８，０）５０ｍ中に加えて、５℃１夜反応せしめて
１個当シＩｇ０５０μ９を固定せしめたナイロン製測定
用エレメントを得た。（なお、抗モルモットＩｇＧ活性
としては測定用エレメント１個尚り６００〜Ｔｏｏ　ｎ
ｉの抗体活性を有していた。）次いで、この測定用エレ
メントにモルモットのインシュリンの抗体を含有する血
清の２８２００倍希釈液（０，２５％Ｂ８Ａ、５ｍＭＥ
ＤＴＡ、８ｍＭｗｇｃｌＨ：、０．１５ＭＮａｃｊ、０
．１％Ｎ　ａ　Ｎ　Ｂ含有０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，４）よシなる希釈液）　５０ｄ　（２５０ｎｉの
インシュリン抗体を含む）を加えて、６℃で一夜反応し
て〔ナイロン製測定用エレメント−抗モルモットＩｇＧ
−インシュリン抗体〕結合物を得た。この測定用エレメ
ントはインシュリン−βガラクトシダーゼ結合物を使用
して、そのインシュリン抗体活性を測定したところ、測
定用エレメント１個Ｍ！Ｉシ４，５±０．２ｎｌｌのイ
ンシュリン抗体活性を有していた。

〔固定化抗体の調製法）−１ ６，６ナイロン製測定用ニレメン）５０個を８０％（Ｖ
　／　Ｖ　）ジメチル硫酸含有メタノール溶液５０ｍに
加え、８７℃で５０分間反応し、メタノールで充分洗滌
後、これに１００ｍＨへキサメチレンジアミン含有水溶
液（ｐＨ１１，５）Ｓｏｄを加え、室温下１時間反応せ
しめ、Ｏ，ＩＭＩＪン酸緩衝液（ＰＨ８，０）で充分洗
滌し、さらにこれに４％（Ｖ／Ｖ）グルタルアルデヒド
含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）５０ｓｌを加
え、室温下で１時間反応せしめ０．１Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ８，０）で洗滌し、スペーサーを６．６ナイロン製
測定用エレメントＫ、導入せしめた。以下調製法−■と
同様に処理して〔ナイロン製測定用エレメント−抗モル
モットＩｇＧ−インシュリン抗体〕結合物を得た。

〔固定化抗体の調製法）−ＤＩ ポリスチレン製測定用エレメント５０個を抗インシュリ
ンモルモット血清のＩｇＧ画分５０ｂｐ９を含有する０
、　１　Ｍ　リン酸緩衝液（ＰＨ８，０）に加え、５’
ｅｌ夜反応せしめて、〔ボリスチレ／製測定用エレメン
ト−インシュリン抗体〕結合物を得九、この測定用エレ
メントはインシュリン−βガラクトシダーゼ結合物を使
用して、そのインシュリン抗体活性をｉｌｌ定したとこ
ろ１測定用エレメント当シ、４０　ｔｈｏ、　８８ｎ９
のインシュリン抗体活性を有していえ。

〔β−ガラクトシダーゼ−インシュリンの調製法〕イン
シュリン６０■を０．１　Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ８，０
）１７ｄに溶解し、８−（ベンゾチアゾール−！−イル
ジチオ）ピロピオン酸・スクシンイミドエステル６．５
１９含有ジメデルホルムアミド１．７−を加えて、冷却
下１時間反応せしめ、反応後ｐＨ５，０となして沈澱物
を回収し、この沈澱物を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
，０）　４０・−に溶解しくインシュリンとして８．９
■／ｄ）、このうち１Ｏ００μ！を分取し、これにβ−
ガラクトシダーゼ６１１ｖを加えて１時間反応せしめ、
その後この反応液をセファデックスａ−ｉｏｏを充填し
たカラム（１，５Ｘ１２ＧＣ１１）にて０．１５ＭＮａ
ｃＪ含有０．０１Ｍ　リン酸緩衝液（ｐＨ７，４）で溶
出せしめ、その６５〜７８１の画分を集めて（（インシ
ュリン）−Ｃｏ　−（ＣＨ，）、−８−（β−ガラクト
シダーゼ）〕で略示されるインシュリンのアミン基とβ
−ガラクトシダーゼのチオール基とＫよるインシュリン
−β−ガラクトシダーゼ結倉物を含有する溶出区分（イ
ンシュリン２．４μｇ／Ｗ１１ｓかつβ−ガラクトシダ
ーゼ１分子当り１分子のインシュリンの結合物であり、
かつインシュリン抗体に対し、インシュリン結合物の９
６％の活性を有しているもの）を得た。

〔Ｉ　−インシュリンの調製法〕

■　−インシュリンの調製は、Ｗ、　Ｍ、　Ｈｕｎｔｅ
らＦ、　Ｃ，Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄらの方法（Ｎａｔｕｒ
ｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）　）１９４、４９５　（１９６２
）に順じておこない、ＢＰの分離は８ｅｐｈａｄｅｘＧ
　−２５のカラＡ　（０，９Ｘ　２０Ｃ１ｌ）を用いて
おこなった。

［インシュリンの測定］−ＥＩＡ 小試験管（１５Ｘ　１００ｍ、内径１２．８±０．１ｍ
）に免疫反応用緩衝液（０，２６％Ｂ８Ａ、６ｍＭＥＤ
　Ｔ　Ａ、　　８　ｍ　Ｍ　Ｈｇｃｌ＞　０．１５ＭＮ
ａｃｌ、　０．１％ＮａＮ　Ｓ含有０．０１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，４）１００μノ、β−ガラクトシダーゼ
−インシュリン結合物（インシュリンとして２００ｐｇ
）Ｚｏｏμ！、および標準インシュリン溶液（６〜１２
８０ＩＩＵ／ｍ）　１００μｌを加え、これに前記（Ｉ
Ｉ）で調製した抗インシュリン固定化測定用エレメント
１個を加え、８７℃で８〜４時間反応を行なつ九。終了
後、蒸留水または生理食塩水５１を加え測定用エレメン
トを洗滌しながら引き抜き、あらかじめβ−ガラクトシ
ｒ−ゼｉ性ｍｊｌ［ＣＯ−ニトロフェニール−β−Ｄ−
ガラクトピラノシドＢｑ／−を有する０、１％Ｂ　８　
Ａ、　　０．１５ＭＮａｃ／　、　　１　＠ＭＭｇｃ７
１　％Ｇ、　１％ＮａＮ１含有１０ｍＭリン酸緩衝液（
ｐＨ６，７）　８６部および２００ｍＭメルカプトエタ
ノール含有メタノール溶液１６部よりなる溶液〕６００
μｌを加えである小試験管に測定用エレメントを加え、
８７℃で１時間反応させた。反応停止液（１００ｓｔＭ
グリシ７−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１１，５）　）　２−
を加え反応を停止させ、測定用エレメントを除いた後そ
の液の４２０ｎｍＯ＠、光度を測定した。

その結果は第６図に示す通シ、本発明のインシュリン測
定系は、きわめて曳好な定量曲線を示すものであった。

なお、被検試料（血清、血乗等゛）中のインシュリンを
測定する場合は、標準インシュリン溶液１００μノの代
わシに試料ｌＯＯμ！を加え、前記と同様の操作をおこ
ない、定量曲線と対照することにより、試料中のインシ
ュリン量を求めた。インシュリン４０μＵ／ｊにおいて
、上記抗インシュリン固定化測定用エレメント（Ｉｆ）
と公知の固定化ビーズ（８粒；６，６−ナイロン製の直
径４．５Ｗのピースを前記の抗インシュリン固定化測定
用ニレメン）（Ｉｆ）を得る方法に従い処理して得られ
た抗インシュリン固定化ビーズである。また抗インシュ
リン固定化測定用エレメント（１）の表面積と同−表面
積量を用いるために８粒を必要とした）を用いて、上記
測定手段に準じて反応時間とその結合率を求めた。その
結果第７図に示す通シであった。（図中、０−０は本発
明の測定用エレメントを用いた測定値を示し、・−−ｍ
−・は公知の固定化ビーズを用いた測定値を示す。） 〔インシュリンの測定）　−ＲＩ　Ａ 小試験管（１５Ｘ　１０５ｍ、内径１２．８±０．１．
）に免疫反応用緩衝液（０，２５％Ｂ８Ａ、５＊ＭＥＤ
　Ｔ　Ａ　、　８　＠　ＭＭｇｃ４２．０．１５　ＭＮ
ａｃ／、ｏ、　ｉ％ＮａＮ　Ｈ含有０．０１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，４）　１００μ！、■　−インシュリン
（インシュリンとして１００９ｇ）１００μ！、および
標準インシュリン溶液（２，５−６４０μＵ／１ｕ）１
００μノを加え、これに抗インシュリン測定用エレメン
ト１個を加え、８７℃で８〜４時間反応をおこなった。

終了後、蒸留水または生理食塩水６ｄを加え、測定用エ
レメントを洗滌しながら引き抜き、新しい試験管に移し
、測定用エレメントの放射能を測定した。その結果は第
８図に示す通り、本発明のインシュリン測定系紘、きわ
めて良好な定量曲線を示すものゼロサンプルのカウント 実施例２ グルカゴンの測定法 〔固定化抗体の調製法〕 ｒ−アミノプロピルトリエトキシシラン処理したガラス
製測定用ニレメン）５０個に２％グルタルアルデヒド含
有０．１　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，０）５０Ｗ１
１を加え、室温下１時間反応せしめ、次いで０、１　Ｍ
　ＩＪン酸緩衝液（ＰＨ８，０）で充分に洗滌し、これ
に抗つサギＩｇＧ血清（ヤギ）のＩｇＧ画分６■を含有
する０、１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ８，０）５０−を加え
て５℃で１夜反応せしめて、１個当りＩｇＧ８０／ＪＪ
を固定せしめた測定用エレメントを得た。（なお、抗つ
サギＩｇＧ活性としては測定用エレメント１個当り９０
０〜１０００ｎＪｉ＋の抗体活性を有していた。） 次いで、この測定用エレメントに抗Ｉｌｌ　　！Ｉグル
カゴンフラグメント血清（ウサギ）の１５０００倍希釈
液（前記の免疫反応緩衝液）５０ｗＪ（６８ｒ＋Ｊの１
８　　ＩＩ　　グルカゴンフラグメント抗体を含む）を
加えて、５℃で１夜反応して〔測定用エレメ／１＠　　
　　ＩＩ トー抗ウサギＩｇＧ−グルカゴンフラグメント抗体〕結
合物を得た。この測定用エレメントは　１１　１・グル
カゴンフラグメント−β−ガラクトシダーゼ結合物を使
用してその抗体活性を測定したところ、１．１±０．０
６ｎｐの　１−”グルカゴンフラグメント抗体活性を有
していた。

（１６１９グルカゴンフラグメント−β−ガラクトシダ
ーゼの調製法〕 グヤヵゴ、フラグメン）（ｌ嘗−ｇ＠）０．４ｗｇを５
０、Ｍリン酸緩衝液（１）Ｈ８，Ｏ）０゜４−に溶解し
、これにｌｏＯｍＭＥＤＴＡ水溶液１０ｔｔｌ＞よび０
．１％８−（τ−ベンゾチアゾリルージチオ）プロピオ
ン酸スクシンイミドエステル含有ジメチルホルムアミド
溶液６２５ａＡ！を加えて６℃１時間反応せしめた。反
応後これをセファデックスＧ−１６（ｌ。５　Ｘ　４０
　ｅ＋ａ　）のカラムでゲル口過して、その素通シ区分
を得た〔グルカゴンフラグメント（１・−！９）のＮ末
端に８−（２’−ベンゾチアゾリル−ジチオ）プロピオ
ニル基を導入し九誘導体を含む〕。次いで、この８−（
τ−ベンゾチアゾリルージチオ）プロピオニル基を導入
し九誘導体２０μｌｌを含有する、５０ｍＭす／酸緩衝
液（ｐＨ７，０）２Ｎｌに、β−ガラクトシダーゼ６．
１９ダ含有６０、　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７，０）
を加え、室温で１時間反応し九。反応液をセファデック
スＧ−１５０（１，５Ｘ９Ｇｃｍ）のカラムでゲル口過
してその素通り区分を回収してグルカゴンフラグメント
（１１−Ｎ　）のＮ末端とβ−ガラクトシダーゼのチオ
ール基とをもって結合せしめたβ−ガラクトシダーゼ−
グルカゴン７ラグメント（１・−雪Ｉ）結合体（純度９
６％）を得九。

〔グルカゴンの測定法）−ＥＩＡ 小試験管（１５ｘ１０５ｍ、内径１２．８±０．１．）
Ｋ免疫及応用ＩＮＥＲ（０，２５％ＢＳＡ、５ｍＭＢＤ
ＴＡ。

８篤ＭＭｇｃ／１．　０．１５ＭＮａｃ／、０．１％Ｎ
ａＮ　Ｈ含有ｆｌ　ｇ　ｇ　Ｍ　ヘｏ　ｆ−ル緩衝液（
ｐＨ７，４）１００μ／。

β−ガラクトシダーゼ−ＩＩ　　！Ｉグルカゴンフラグ
メント（グルカゴンフラグメントとして４５　ｐｇ）１
００μ！、および標準グルカゴン溶液（２５〜８２００
ｐＨ／ｉｌ　）　１００μノを加え、これに抗１−−３
９グルカゴンフラグメント測定用エレメント１個を加え
、６℃でｌ〜２夜反応をおこなった。終了後、蒸留水ま
たは生理食塩水５１を加え、測定用エレメントを洗滌し
ながら引き抜き、あらかじめβ−ガラクトシダーゼ活性
測定液（前記）　５００／ｊＪを加えである小試験管に
測定用エレメントを加え、８７℃で２．６時間反応させ
た。反応停止液（前記）２１を加え、反応を停止させ、
上液の４２０ｎｍの吸光度を測定した。

その結果は、第９図に示す通シ、本発明のグルカゴン測
定系は、きわめて良好な定量曲線を示すものであった。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明の好適な数個の実施例を示したものであり
、第１図は第１実施例の測定用エレメントの拡大部分断
面図、ｆｓ２図はその平面図、第８図（イ）（ロ）（ハ
）はエレメント本体の上面部に形成する切込み溝のそれ
ぞれ異った実施例を示す平面図、第４図は第２実施例の
測定用エレメントの拡大断面図、第５図は測定用エレメ
ント製作のための１例の実測図、第６図はＥＩＩＣよる
インシュリン測定の定量曲線、第７図は本発明にょるＥ
ＩＡと公知固定化ビーズにょるＥＩＡによる反応性の比
較を示すもので、＊８ｖＡはＲＩＡによるインシュリン
測定の定量曲線、第９図ａＥＩＡによるグルカゴン測定
の定量曲線である。 符号の説明 ！は測定用エレメント、 ２はエレメント本体、 ４は反応管、　　　　　５は突起、 ６は隙間部、　　　　　８は切込み溝である。 （イ） （ロ） （八） 第５図 第６図 インシュリン　（１０７ｍ１） Ａ！／キュＮ−ジョン時間（ｆｔｌ−）第９図 ２５　　　　＋００　　４００　　１６００５０　　２
００　　８００　　３２００グツレノＪゴン　（Ｐｇ／
ｍｆ） 手続補正書 昭和５７年４月２６日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第　１０１３６５号 ２、発明の名称 事件との関係　特許出願人 住　所　静岡県田方郡大仁町三福６３２の１名称　東洋
醸造株式会社 ４、代理人 自発 ６、　補正により増加する発明の数 （１）明細書申請８ページ下から６行目「・・・実情で
ある。」の後に次文を挿入する。 「また、免疫反応後には、同相体から結合にあずからな
かった標識物（未反応の成分）を洗滌除去し、固相体に
結合したもののみで測定しなければ測定結果に誤差が生
じることになる。そのため、免疫反応後、何回かの洗滌
を行わなければならないが、従来公知のビーズ法では、
洗滌液量、回数に多くを必要とするという欠点があった
。Ｊ（２）明細書中筒９ページ上から５行目「行えるよ
うにし」とあるを「行えるようにし、また免疫反応後の
洗滌液量、回数が少くてすむようにし」と訂正する。 （３）明細書申請２９ページ下から５行目「・・−・す
。）」の後に改行して次文を挿入する。 「上記インシュリンのＥＩＡによる測定において、本発
明の測定用エレメントを用いた場合と、公知の固定化ビ
ーズを用いた場合における免疫反応後の洗滌の影響につ
いての実験結果を以下に示す。 〔方法〕 （１）本発明の測定用エレメントを用いた測定法免疫反
応用緩衝液１００μ！、β−ガラクトシダーゼ−インシ
ュリン結合物１００μ！、および標準イノシュリン溶液
（４０μＵ／ＩＩ／　）　１００μノを加えた反応用小
試験管（１５ｘ１０５ｍ、　　内径１１８±０．１　ｔ
ｌｌ　）に、抗インシュリン固定化測定用エレメント１
個を加え、５℃で４８時間反応を行なった。 （２）公知の固定化ビーズを用いた測定法免疫反応用緩
衝液６００μノ、β−ガラクトシダーゼ−インシュリン
結合物１００　ｐＪ、および標準インシュリン（４０μ
Ｕ／ｄ）１００μ！を加えた反応用小試験管（１５ｘ１
０５Ｍ１１．内径１区８士α１１１　）に公知の抗イン
シュリン固定化ビーズ（８粒：ａ６−ナイロン製の直径
４５ｍのビーズ）を加え、５℃で４８時間反応を行なっ
た。 〔洗滌の影響〕 〔！〕　洗滌液量の影響 反応を終了した■■の実験の各試験管に、蒸留水を２〜
１０ＩＩＩ／加え、エレメント及びビーズを洗滌した後
、各固相のβ−ガラクトシダーゼ活性を測定した。結果
は、図−１０に示す通りである。 （本発明のエレメントは、公知のものに比べて結合にあ
ずからなかった標識物の洗滌効果が着るしく良好である
。） （図中、０−０は本発明の測定用エレメントを用いた場
合を示し、・−・は公知の固定化ビーズを用いた場合を
示す。） （ＩＩ）　　洗滌回数の影響 反応を終了した■■の笑験の各試験管に蒸留水４−を加
え、１〜５回洗滌した後、各固相のβ−ガラクトシダー
ゼ活性を測定した０結果は図−１１に示す通りである。 （本発明のエレメントは、公知のものに比べて、その洗
滌効果は着るしく良好なものであった。 （図中の記号は上記に同じ◇）」 （４Ｊ明細書中第３５ページ上から１行目「定量曲線」
の後に［、第１０閣は本発明の測定用エレメントと従来
の固定化ビーズとの洗滌液量の関係を示し、第１１図は
本発明の測定用エレメントと従来の固定化ビーズとの洗
滌回数の関係を夫々示したちの」を挿入する〇 （５）本願添付の図面において、第１０図及び第１１図
を別紙の通り追加する。 以　　　上 第１０図 ９先鋒涜量　（ｍ／） ミを條１１牧 手続補正書 昭和５７年８月６日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５６　年特許願第１０１３６５　　号２、発明の名
称 事件との関係　　特許出願人 住　所　静岡県田方郡大仁町三福６３２の１名称　東洋
醸造株式会社 代表者伊東富士馬 ４゜代理人 自　　　発 ６、　補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 （１）特許請求の範囲の項 （２）発明の詳細な説明の項 （１１明細書申請１１ページ下から２行目「ナイロン６
６」とあるを「ナイロン６．６」に訂正する。 （２）明細書申請１５ページ上から９行目「ナイロン６
６」とあるを［ナイロｙ６，６Ｊに訂正する。 （３）　　明細書申請１６ページ上から４行目［アミノ
アルキルシリル１とあるを「アミノアルキルシリル」と
訂正する。 （４）　　明細書中葉２０ページ下ｉ゛ら５行目「イン
シュリンを含むＪとあるを「インシュリン液１００μｔ
を含む」と訂正する。 （５）明細書中篇２２ページ下から７行目「免液反応」
とあるを「免疫反応」と訂正する。 （６）明細書中篇２３ページ上から２行目「調整法」と
あるを「調製法」Ｋ訂正する。 （γ）　同ページ中下から６行目「スペーサーを６，６
（８）　　明細書申請２４ページ上から５行目及び６行
目ｒ　３　ｍＭ’１ｇ　ＯＬ２、」とあ′るをｒ３ｍＭ
Ｍｇ（１４、Ｊに訂正する。 （９）　　同ページ中下から１行目ｒ　１００　ｍＨＪ
とあるをｒ　１００　ｍＭ　Ｊに訂正する、 （７）明細書申請２５ページ下から１行目［４０±０．
３８ｎｇＪとあるを［４，０±０．３８ｎｇＪに訂正す
る。 αめ　明細書中筒２６ページ上から９行目ｒ　４０ｄＪ
とあるをｒ４．ｏｄＪに訂正する。 （ロ）　同ページ中下から７行目ｒＯ，１５ＭＮａ０ｔ
ＪとあるをｒＯ，ｌ５ＭＮ０１Ｊと訂正する。 （至）明細書９第２７ページ中上から１行目「２４μｓ
／ｄ、Ｊとあるを「４２μｇ／ｌｄ、」と訂正する。 α◆　同ページ中下から６行目ｒ　３ｍＭＨｇＣｊ１Ｂ
、」とあるをｒ　３ｍＭＭｇ０１ｔ、Ｊに訂正する。 （至）　同ページ中下から３行目ｒ　２００　ｐｇ　Ｊ
とあるを「２αＯｐｇＪに訂正するつ （至）　明細書申請２８ページ上から７行目ｒＯ，１５
ＭＮａ０ｔ、ＪとあるをｒＯ，１５ＭＮ０１．Ｊと訂正
する。 （Ｌ′１）　　明細書中筒３０ページ上から３行目ｒ　
１００　ｐｇＪとあるをｒ　１０．Ｏｐｇ　Ｊに訂正す
る。 （至）　同ページ中上から５行目「抗インシュリン測定
用エレメント」とあるを「抗インシュリン固定化測定用
エレメント」と訂正する。 α呻　同ページ中下から７行目 （２）　明細書中筒３３ページ下から８行目ｒ４５ｐｇ
Ｊとあるをｒ４５ｐｇＪと訂正する。 （２１）同ページ中下から５行目「グルカゴン７ツグメ
ント測定用エレメント」とあるを「グルカゴンフラグメ
ント固定化測定用エレメント」と訂正する。 （２２）　　明細書中篇３４ページ上から２行目「２５
時間反応させた」とあるを「２〜５時間反応させた」と
訂正する。 殻　本願の特許請求の範囲を別紙の通り訂正する。 補正後の特許請求の範囲 （１）　　反応管と一定の隙間部を保つ形状に成形され
しかも表面に測定すべき成分に対して特異的結合性を有
する成分を固定化した免疫測定用エレメント。 （２）測定すべき成分が抗体であり、固定化される成分
が抗原である特許請求の範囲第１項記載の免疫測定用エ
レメント◎ （３）測定すべき成分が抗原であり、固定化される成分
が抗体である特許請求の範囲第１項記載の免疫測定用エ
レメント〇 （４）測定すべき成分がホルモンまたは薬物ハブテンで
あり、固定化される成分がその受容体である特許請求の
範囲第１項記載の測定用エレメント。 （５）　　当該測定用エレメントにおけるエレメント本
体の形状が、はぼ弾丸状に形成されて成る特許請求の範
囲第１項記載の免疫測定用エレメント。 （６）　　当該測定用エレメントにおけるエレメント本
体の形状が、はぼ槍形状に形成されて成る特許請求の範
囲第１項記載の免疫測定用エレメント。 （７）　　当該測定用エレメントにおけるエレメント本
体に対し、その周面部の頂部Ｋ１１間形成用の突起を設
けて成る特許請求の範囲第１項、第５項および第６項記
載の免疫測定用エレメント。 （８）当該測定用エレメントにおけるエレメント本体の
上面部に、切込み溝が設けられ、この切込み溝の終端は
上記の上面部の周端縁に開口されて成る特許請求の範囲
第１項、第５項および第６項記載の免疫測定用エレメン
ト。 （９）　　反応管と一定の隙間部を保つ形状に成形され
、しかも表面に測定すべき成分に対して特異的結合性を
有する成分を固定化した測定用エレメントと、標識物質
を結合させた成分、および測定すべき成分とを反応させ
ることを脣黴とする測定すべき成分の測定法。 曽　測定用ニレメン）Ｋ測定すべき成分に対して特異的
結合性を有する抗体を結合させた固相、標識物質を結合
させた成分が標識抗原であり、また測定すべき成分が抗
原を含む被検液であり、これらを反応せしめ、固相もし
くは液相の標識活性を測定することによる抗原の測定法
である特許請求の範囲第９項記載の測定法＠ （ロ）測定用エレメントに測定すべき成分に対して特異
的結合性を有する抗原を結合させた固相、標識物質を結
合させた成分が標識抗体であり１、また測定すべき成分
が抗体を含む被検液であり、これらを反応せしめ、固相
もしくは液相の標識活性を測定することによる抗体の測
定法である特許請求の範囲第９項記載の測定法。 （イ）測定用エレメントの表面に測定すべき成分に対し
て特異的結合性を有する抗原を結合させた固相、標識物
質を結合させた成分が標識抗原であり、測定すべき成分
が抗体を含む被検液であり、固相と被検液とを反応せし
め、次いで標識抗原を反応せしめ、その固相もしくは液
相の標識活性を測定することによる抗体の測定法である
特許請求の範囲第９項記載の測定法。 （２）測定用エレメントの表面に測定すべき成分に対し
て特異的結合性を有する抗体を結合させた固相、標識物
質を結合させた成分が標識抗体であり、測定すべき成分
が抗原を含む被検液であり、固相と被検液とを反応せし
め、次いで標識抗体を反応せしめ、その固相もしくは液
相の標識活性を測定することによる抗原の測定法である
特許請求の範囲第９項記載の測定法。 Ｑ４　　測定用エレメントの表面に結合した抗体が、該
エレメント表面−第２抗体−第１抗体結合物である特許
請求の範囲第１０項または第１３項一　記載の測定法。 （ト）測定用エレメントにおけるエレメント本体におけ
る形状が、はぼ弾丸状または槍形状に形成されて成る特
許請求の範囲第９項、第１０項、第１１項、筒１２項ま
たは第１３項記載の測定法。 （至）　エレメント本体が、その局面部の頂部に突起を
設けて成る特許請求の範囲第１５項記載の測定法。 （１１エレメント本体がその上面部に切り込み溝が設け
られ、この切り込み溝の終端は上記の上面部の周端縁に
開口されて成る特許請求の範囲第１５項記載の測定法。 （至）標識物質が酵素である特許請求の範囲第９項、第
１０項、第１１項、第１２項または第１３項記載の測定
法。 （至）標識物質が放射性同位元素である特許請求の範囲
第９項、第１０項、第１１項、第１２項またけ第１３項
記載の測定法。 曽　測定すべき成分が、インシュリン、グルカゴンであ
る特許請求の範囲第１項、第４項、第９項、第１０項、
第１３項に記載の測定法。 へ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　反応管と一定の隙間部を保つ形状に成形され
   しかも表面に測定すべき成分に対して特異的結合性を有
   する成分を固定化した免疫測定用エレメント。 （２）　　ＩＩ定すべき成分が抗体であシ、固定化され
   る成分が抗原である特許請求の範囲第１項記載の免疫一
   定用エレメント。 （３）　　Ｉｔ定すべき成分が抗原であシ、固定化され
   る成分が抗体である特許請求の範囲第１項記載の免疫測
   定用エレメント。 （４）一定すべき成分がホルモンまたは薬物ハプテンで
   あシ、固定化される成分がその受容体である特許請求の
   範囲第１項記載の測定用エレメント。 （５）　　当腋測定用エレメントにおけろエレメント本
   体の形状が、は、埋弾丸状（形成されて成る特許請求の
   範囲第１項記載の免疫測定用エレメント。 （６）　　当該測定用エレメントにおけるエレメント本
   体の形状が、はぼ槍形状に形成されて成る特許請求の範
   囲第１項記載の免疫測定用エレメント。 （７）　　当該測定用エレメントにおけるエレメント本
   体に対し、その局面部の頂部に隙間形成用の突起を設け
   て成る特許請求の範囲第１項、第６項および第６項記載
   の免疫測定用エレメント。 （８）　　当該測定用エレメントにおけるエレメント本
   体の上面部に、切込み溝が設けられ、この切込み溝の終
   端は上記の上面部の周端縁に開口されて成る特許請求の
   範囲第１項、第５項および第６項記載の免疫測定用エレ
   メント。 （９）反応管と一定の隙間部を保つ形状に成形され、し
   かも表面に測定すべき成分に対して特異的結合性を有す
   る成分を固定化した測定用エレメントと、標識物質を結
   合させた成分、および測定すべき成分とを反応させるこ
   とを特徴とする測定すべき成分の測定法。 （至）　測定用エレメントに測定すべき成分に対して特
   異的結合性を有する抗体を結合させ九固相、Ｉｌ識物質
   を結合させた成分が標識抗原であシ、また測定すべき成
   分が抗原を含む被検液であり、これらを反応せしめ、固
   相もしくは液相の標識活性を測定することによる抗原の
   測定法である特許請求の範囲第９項記載の測定法。 （１１）ＩＩＩ定用エレメントに測定すべき成分に対し
   て４１異的結合性を有する抗原を結合させ九面相、標識
   物質を結合させた成分が標識抗体であシ、を九測定すべ
   き成分が抗体を合金む被検液であり、これらを反応せし
   め、固相もしくは液相の標識活性を測定することによる
   抗体の測定法である特許請求の範囲第９項記載の測定法
   。 （１２）ＩＩＩ定用エレメントの表面に測定すべき成分
   に対して特異的結合性を有する抗原を結合させ九固相、
   標識物質を結合させた重分が標識抗原であ夛、測定すべ
   き成分が抗体を含む被検液であシ、固相と被検液とを反
   応せしめ、次いで標識抗原を反応せしめ、その固相もし
   くは液相の標識活性を測定することＫよる抗体の測定法
   である特許請求の範囲第９項記載の測定法。 （１８）測定用エレメントの表面Ｋｌｌ定すべき成分に
   対して特異的結合性を有する抗体を藷合させ九固相、標
   識物質を結合させた成分が標識抗体であ夛、測定すべき
   成分が抗原を含む被検液であり、固相と被検液とを反応
   せしめ、次いで標識抗体を反応せしめ、その固相もしく
   は液相の標識活性を測定することによる抗原の測定法で
   ある特許請求の範囲第９項記載の測定法。 （１４）測定用エレメントの表面に結合した抗体が、咳
   エレメント表面−第２抗体−第１抗体結合物である特許
   請求の範囲第１０項ま九は第１８項記載の測定法。 （１５）Ｉｌｌｌ周定レメントにおけるエレメント本体
   における形状が、は理外丸状または槍形状に形成されて
   成る特許請求の範囲第９項、第１０項、第１１項、第１
   ２項または第１８項記載の測定法。 （１６）エレメント本体が、その局面部の頂部に突起を
   設けて成る特許請求の範囲第１６項記載の測定法。 （１７）エレメント本体がその上面部に切シ込み溝が設
   けられ、この切シ込み溝の終端は上記の上面部の周端縁
   に開口されて成る特許請求の範囲第１５項記載の測定法
   。 （１８）標識物質が酵素である特許請求の範囲第９項、
   第１０項、嬉１１項、第１２項または第１８項記載の測
   定法。 （１９）標識物質が放射性同位元素である特許請求の範
   囲第９項、第１０項、第１１項、第１２）Ｊまたは第１
   ８項記載の測定法。 （２０）測定すべき成分が、インシュリン、グルカゴン
   である特許請求の範囲第１項、第４項、第９項、第１０
   項、第１８項に記載の測定法。