JPS5850213B2 - カルチトニンの定量法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はカルチトニンのラジオイムノアッセイに関する
ものである。

カルチトニンは、甲状腺に存在しカルシウムの代謝に関
与するペプチドホルモンであり、その生物学的測定法と
しては幼若ラットを使用し、静注後のカルシウムレベル
低下程度をみることによる方法がある。

しかしながらこの方法では感度が悪く、血清をそのまま
用いて測定することが困難であった。

１９６８年に甲状腺髄様癌患者の腫瘍組織より人カルチ
トニンが抽出され、そのアミノ酸組成は１９６８年に決
定され、次いで合成されるに至った。

Ｃ１ａｒｋらは１９６９年（Ｌａｎｃｅｔ ７４ （１
，９６９））甲状腺髄様ガンの抽出物より得た人カルチ
トニンを使用し、そしてＦ ｒｏｌ ｉ ｃｈらは（Ｈ
ｏｒｍｌｍｅｔａｂ。

Ｒｅｓ、３．２９７（１９７１））合成人カルチトニン
を使用して抗体を得、従来の生物学的測定法とくらべて
著しく感度の高いラジオイムノアッセイ法を開発した。

しかしながら、これらのラジオイムノアッセイにはいく
つかの重要な問題が認められる。

第一に甲状腺髄様ガン抽出物を使用する場合、抽出され
た人カルチトニンには重合体の混在が認められ１ＪＪｅ
ｈｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ 、２２０．９８４（１９６８
））そのラジオイムノアッセイでは得られた血清値は必
ずしも妥当なものではない。

一方合成力ルチトニンあるいは天然のカルチトニンの場
合、そのアミノ酸組成上、容易に化学的変化★を受ける
ジスルフィド結合があり、そしてこの結合が破壊される
と生物学的活性がほとんど消失してしまうことが確めら
れた。

一方、これら抽出又は合成により得られた人力ルチトニ
ンを１２５■ で標識する際、その反応生成物には重
合体が認められ、１２５■ 標識カルチトニンは若干複
雑な精製方法により得られている。

そしてこの１２５Ｉ標識カルチトニンは保存中失活しや
すく、経時的に不安定であることが報告されている（
Ｈ，Ｔａ５ｈｊｉａｎら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ 、
８４．１４０（１９６９））。

以上の様な重大な問題があり、カルチトニンの安定なラ
ジオイムノアッセイは確立されたと未だ言えない状況で
ある。

そこで本発明者はカルチトニンの優れたラジオイムノア
ッセイ法を確立すべく研究を重ね、カルチトニンの一部
を変えた式（Ｉ）のヘントリアコンタペプチドを製し、
このものを放射性ヨウ素で標識してトレーサーとして用
いてもカルチトニンの測定には支障がなく、かつ経時的
にも安定であることを見出し本発明を完成した。

式中のアミノ酸残基の表示は一般に用いられている略号
によったものであり、グリシン以外は全てＬ−型である
。

以下特別に示す以外は本明細書中ではこの式（Ｉ）のペ
プチドをヘントリアコンタペプチドと称す。

このペプチドは参考例の如き方法で製造されるが、ジス
ルフィド結合がないため安定であり、かつ、抗原抗体反
応についてはヒト力ルチトニンと殆んど同等に反応する
ので、カルチトニンをラジオイムノアッセイで測定する
ために有用である。

すなわち、ヘントリアコンタペプチドをそのチロシン部
分に放射性ヨウ素で標識してトレーサーとすればこのも
のは標準物質または血清中のヒトカルチトニンと等しく
カルチトニン抗体と反応する。

カルチトニン抗体はカルチトニンで動物を免疫して作製
できるが、台底されたヘントリアコンタペプチドを用い
てもよく、安定性の点ではこのものを用いるのが有利で
ある。

抗体を製するには、例えば、次の方法がある。

ヘントリアコンタペプチドの５０μＶかも１０００μＰ
を０．５ ｒｎｌから１ｍｌの生理食塩水又は鉱酸ない
しは有機酸を含む酸性溶液に溶解し、これに等容量ない
しは過剰容量のアジュバントを混ぜる。

これを乳化した後、ウサギ、ヤギ、羊、モルモット等に
投与する。

投与方法としては皮肉注射、皮下注射、筋肉注射ならび
に復腔内注射があり、これらの方法により約５０μｌず
つ多数ケ所へ投与する。

以後２週間から２ケ月間隔にて追加免疫を行い、追加免
疫後７日〜１４日に採血することにより抗血清を得るこ
とができる。

また、ヘントリアコンタペプチドをヨード標識するには
、一般的なりロラミンＴ法を用いるのが便利であり、次
の如く行うことができる。

２〜５μグのヘントリアコンタペプチドに１０〜３０μ
ｌの０．４Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０〜７．５）を加
える。

次いで放射性ヨウ化ナトリウム、例えばＮａ１２Ｊを０
．５ｍＣｉ−２ｍＣｉ 加える。

これに２〜２０μグのクロラミンＴを含む溶液を１０μ
ｌ加え反応せしめる。

反応時間は液性にもよるが、５秒〜３０秒間で良い。

次いで５〜５０μグのメタ重亜硫酸ナトリウムを含む溶
液を２０μ？加え反応を終結せしめる。

以上の方法により１００μＣｉ／μグより５００μＣｉ
／μｉの比放射能を有する１２５Ｉ 標識ヘントリアコ
ンタペプチドが得られる。

このものは牛血清テルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩
衝剤に加え、凍結乾燥して保存することができるが、そ
の経時安定性を次のようにして検討した。

即ち、バイアル当り約２μＣｉの１２５■ 標識ヘント
リアコンタペプチドを含む１ ｍｌのリン酸緩衝剤を凍
結乾燥し、チッソ封印したものを試料とし、このものに
２ｒＩＬｌの蒸留水を加えて製した溶液の２００μｌを
セファデックスＧ５０を詰めたカラム（１×４０ｃｒｎ
）に加え、０．５％のＢＳＡを含むｐＨ７，５の０．０
５Ｍリン酸緩衝液で溶出し、２０〜３５ｍ１に溶出する
フラクションを１２５■ 標識ヘントリアコンタペプチ
ド、３５〜５０ｒｆＬｌに溶出するフラクションを遊離
ヨードとして、両者の割合を計算した。

その結果は第１図に示す通りであり、このトレーサーの
安定性のよいことが認められる。

ラジオイムノアッセイの操作は通常の方法で行うことが
でき、たとえば、標準物質または検体に放射性ヨウ素標
識ヘントリアコンタペプチド（トレーサー）及び抗血清
を加えてインキュベートしてトレーサーと抗血清の結合
物を未結合のトレーサーと分離しくＢＦ分離）、結合物
または未結合物の放射能量を測る。

このＢＦ分離には種々の方法が可能であり、主なものと
しては二抗体法、固相法などがあり、本発明についての
これらの方法の態様を示せば次の如くである。

（１）二抗体法 キャリヤー蛋白として正常家兎血清を０．３〜１．０％
含む反応混合物に兎ガンマグロブリンを感作して得たヤ
ギの抗血清を加え室温で数時間ないしは２〜８℃の冷蔵
庫中で一晩放置せしめた後、室温ないしは低温で遠心分
離を行い、生じた不溶性物質を沈澱させる。

上清を除去した後、沈澱の放射能量を測定する。

（ｉ［）固相法 抗血清を適当なマトリックスへ結合せしめたものに検体
又は標準物質溶液、更にトレーサーを加え反応せしめる
。

ここでマトリックスとしては、（ａ）ポリエチレン、ポ
リスチレン、ポリプロピレン等のプラスチック加工試験
管、（ｂ）ガラス試験管、ガラス玉、（Ｃ）ポリエチレ
ン、ポリスチレン、ポリプロピレン等のプラスチックで
成型された盤状物又はカップ等が主なものとしてあげら
れる。

反応終了後反応液を除去し、次いでこれらマトリックス
表面の抗体と結合しているトレーサーの放射能量を測定
する。

標準物質としてはヒトカルチトニンを用いることもでき
るが、安定性の点ではヘントリアコンタペプチドを用い
るのが有利である。

次にヘントリアコンタペプチドの製法を参考例として示
し、本発明の標識体の製法及びラジオイムノアッセイ法
を例により説明する。

なお、本明細書中に記載の記号は次の意味を有する。

ＢＯＣ：ｔ−ブトキシカルボニル ＡＯＣ：ｔ−アミルオキシカルボニル Ｂｚｌ ：ベンジル ＢＺＩ（Ｃ１２）ニジクロロベンジル Ｃｂｚ：ベンジルオキシ力ルボニル Ｃｂｚ（ｏ−ＣＩ）： ｏ−クロロベンジルオキシカル
ボニル ＯＢｕ：ｔ−ブチルエステル ＯＥｔ ：エチルエステル ０Ｂｚｌ：ベンジルエステル ＯＮＰ：ｐ−ニトロフェニルエステル Ｏ８Ｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルＴＦＡ
： トリフルオロ酢酸 Ａｃ０Ｅｔ ：酢酸エチル ＴｏｓＯＨ： ｐ−）ルエンスルホン酸 ＣＨＡ ニジクロヘキシルアミ／ ＴＨＦ ：テトラヒドロフラン ＤＭＦ ニジメチルホルムアミド ＤＣＣニジシクロへキシル力ルポジイミドＷＳＣ ＨＯ８Ｕ ＯＢＴ ｕＯＨ ＭＰＡ ｅＯＨ ｔＯＨ ｃＯＨ ｅｒ ｓｎ ｅｕ Ｔｈｒ Ｖａｌ ｅｔ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｙ ｙｓ Ｇｉｎ １ｅ Ａｌａ Ｈｌｓ Ｔｙｒ ｐｒ。

ＣＨＡ 参考例 ：Ｎ−エチルーＮ′−ジメチルアミノプロピル−カルポ
ジイミド Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド ■−ヒドロキシベンゾトリアゾール ブタノール ヘキサメチルホスホリックトリアミド メタノール エタノール 酢酸 Ｌ−セリン Ｌ−アスパラギン Ｌ−ロイシン Ｌ−スレオニン Ｌ−バリン Ｌ−メチオニン Ｌ−アスパラギン酸 Ｌ−フェニルアラニン グリシン Ｌ−リジン Ｌ−グルタミン Ｌ−イソロイシン Ｌ−アラニン Ｌ−ヒスチジン Ｌ−チロシン Ｌ−プロリン ジシクロヘキシルアミン ＢＯＣ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ ）−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ （ＣＩ
２） ）Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ）−Ｇｉｎ−Ａｓｐ （Ｏ
Ｂｚｌ ）−Ｐｈｅ−ＡｓｎＬｙｓ ＣＣｂｚ （ｏ
−）ＣＩ ） ） −Ｐｈｅ −Ｈｌｓ −Ｔｈｒ （
Ｂｚｌ ） −Ｐｈｅ −Ｐｒｏ −Ｇｉｎ −Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ ） −Ａｌａ −１１ｅ −Ｇｌｙ −Ｖ
ａｌ −ＧｌｙＡｌａ −Ｐｒｏ−ＮＨ２２，０？ （
０，６祖モル）を−５℃に冷却下、ＴＦＡ１０ｍ／を加
え、室温で３０分攪拌する。

反応後減圧濃縮してＴＦＡを留去し、残渣にジエチルエ
ーテルを加え、生成する沈澱をデカンテーションにより
採取した後、これを苛性ソーダ上デシケータ−中で乾燥
する。

これをＤＭＦｌｏｌｒＬｌにとかし、冷却下トリエチル
アミンでｐＨ約９に調整した後、水を加えて生ずる沈澱
を濾取し水洗後頁酸化燐上デシケーター中で乾燥して脱
ＢＯＣ化物の遊離塩基を得る。

Ｇｌｙ −ＯＨＯ，８？ （０，７１ｍモル）ＤＭＦ
： Ｎメチルピロリドン（＝１：１）５ｗＬｌにとか
し、ＨＯ８Ｕ１２２■を加え、さらに冷却下ＤＣＣ１４
６ｍ９を溶かしたＤＭＦ ３１ｒＬｌを加えて一夜反
応させる。

反応終了後析出せる沈澱を濾別した溶液に、先に得た脱
ＢＯＣ化物の遊離塩基とＨＯＢＴ１００１ｎ９を加え、
３０°Ｃで５日間攪拌する。

反応終了後水を加え、生ずる沈澱を濾取し、水洗後乾こ
の粗粉末１． ｏ ｙ、メチオニン０，１１、アニソー
ル２ｒｒｔｌをフッ化水素反応管に入れ、減圧下にジメ
チルチオエーテルを加え、ドライアイス−メタノールで
冷却下フッ化水素２５ｍ１を加え一５℃で６０分間反応
させる。

反応終了後、フッ化水素を留去せしめ、その残渣にジエ
チルエーテルを加え、沈澱をデカンテーションにより採
取する。

このデカンテーションによる洗浄を３回繰り返えした後
、酢酸３０ｒＩＬｌ−水１０ｒＩＬｌの混液に溶かし、
ダウエックス１×２（酢酸型）を充填したカラム（２，
５Ｘ８ ｃｒｎ ）に通し、更に水２００Ｗｌｌで洗浄
し、得られる流出液をＨＰ−２０（ダイヤイオン−ＨＰ
２Ｏレジン；三菱化＃ｊ、）を充填したカラム（２，５
×７ＣｒｒＬ）に注入する。

含水エタノール（８０％）で溶出し、得られる溶出液か
らエタノールを留去した後これを凍結乾燥して粉末４４
０■を得る。

この粉末４４０Ｔｎ９を０．ＯＩＭ酢酸アンモニウム水
溶液に溶解し、ＣＭ−セルロースを充填したカラム（２
，２Ｘ ２５ＣＩｒＬ）上に注入し、０．０１Ｍ酢酸ア
ンモニウム水溶液（ｐＨ４，５） ７５０ｒｕｌ〜０．
２Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ４，５）７ｓｏｍｌ
の直線型濃度勾配溶出を行い、溶出液を１０１づつ分画
採取し、活性画分（６７〜７０本目）を集めて凍結乾燥
する。

この粉末を１Ｍ酢酸に溶かし、セファデックスＬＨ−２
０を充填したカラム（２，２Ｘ １３７ｃＩＩＬ）に注
入し、１Ｍ酢酸で溶出し、溶出液を６Ｓ’づつ分画採取
し、活性画分（２８〜３７本目）を集めて凍結乾燥する
。

この粉末を、ブタノール：酢酸：水（＝４：１：５）か
らなる混合溶媒の上層に溶解し、同溶媒の下層でセファ
デックスＧ−２５を充填しカラム内を同溶媒の上層で置
換したカラム（２，７Ｘ ５２ｃＩｒＬ）に注入し、次
いで同溶媒の上層で溶出する。

溶出液を６ｆＩづつ分画採取し、活性画分（５〜１４本
目）を集め、凍結乾燥する。

この粉末について上記と同一条件によりセファデックス
Ｇ−２５による再クロマトグラフィーを行い、溶出液の
活性画分を集め凍結乾燥する。

この粉末を１Ｍ酢酸に溶かし、セファデックスＬＨ−２
０を充填したカラム（２，２Ｘ １３７ｃｍ）に注入し
、１Ｍ酢酸で溶出し、溶出液を５１づつ分画採取、活性
画分を集め、凍結乾燥して上記目的物質２９．７ｍｐ（
１０００ＭＲＣｕ／ＩＶ）を得る。

Ｒｆ ＝０．８２ （担体：メルク社製セルロース、展
開溶媒：ｎ−ブタノール：酢酸：水：ピリジン＝１５：
３：１２：１０）、Ｒｆ ＝０．４３ （担体：メルク
社製セルロース、展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水
＝４：１：５（上層）〕、＠ｌ♀６９．６°（Ｃ＝０．
７２、ＩＭ−酢酸）アミノ酸分析： Ｌｙｓ ： １．
１５（１）、Ｈｉｓ １．０１ （１）、Ａｓｐ２．９
４（３）、Ｔｈｒ４．８０（５）、Ｓｅｒ １．０６
（１）、Ｇｌｕ ２．１４ （２）、Ｐｒｏ １．９６
（２）、ｃｔｙ ４．００ （４）、Ａｌａ ２．
ＯＯ（２）、Ｖａｌ Ｏ，９５（１）、Ｍｅｔ ０．８
７ （１）、１１ｅ ０．９６ （１）、Ｌｅｕ １．
８４ （２）、Ｔｙｒ ０．９６ （１）、Ｐｈｅ ３
．１８ （３）、α−アミノスペリン酸１．０２（１）
。

上記の原料は次のようにして製造される。

部分順序１−９； （１） ０Ｃ Ｌｅｕ −Ｇｌｙ Ｂ ｚｌ の製造 ＢＯＣ−Ｌｅｕ −ＯＨ４６，２ｆｔ、ＨＯＢＴＩＳ’
およびＨ−Ｇｌｙ −０Ｂｚｌ −Ｔｏｓ −ＯＨ７４
？をＤＭＦ １００ｍｌとジクロロメタン２００ｒｒ
Ｌｌノ混液に懸濁し、−５℃に冷却攪拌下ジクロロメタ
ン５０ｒｒＬｌに溶解したＷＳＣ３４＠の溶液を滴下し
、１時間後室温に戻し一夜攪拌する。

反応液を減圧濃縮してジクロロメタンを留去し、ＤＭＦ
溶液に水を加えて酢酸エチル１１で１回、５００ｒｒＬ
ｌで１回抽出する。

酢酸エチル層を１Ｎ塩酸、水、５％重曹水、水の順で洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮して油状
のＢＯＣ−Ｌｅｕ −Ｇｌｙ −０Ｂｚｌ ８２ ？を
得る。

２） ＢＯＣ−Ｍｅｔ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ−ＯＢｚ
ｌの製造ＢＯＣ−Ｍｅｔ−ＯＨ−ＤＣＨＡ １５０？
に酢酸エチル１ ｌを加え、ＩＮ硫酸６００ｒｒＬｌで
２回、水５００ｒＩＬｌの順で洗浄し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、減圧濃縮する。

残渣をジクロロメタン１００ｒＩＬｌとＴＨＦ １０
０ｍｌに溶解し、ＨＯＢＴ４１１を加えて一５℃に冷却
、更にＤＣＣ６２グ／ジクロロメタン１００ｒｆＬｌを
徐々に滴下する。

別にＢＯＣ−Ｌｅｕ −Ｇｌｙ −０Ｂｚｌ １３７
Ｓ’に５℃に冷却下ＴＦＡ３００ｍｌを加え３０分間反
応させる。

ＴＦＡを減圧留去した後、残渣をＴＨＦ ７５ｒＩＬｌ
に溶かし、冷却下トリエチルアミ７１５５ｒｎｌでｐＨ
約６．７〜７に調整し、これを上記ＢＯｃ−Ｍｅｔ−Ｏ
Ｈのジクロロメタン溶液に一５℃以下に冷却下部下し、
−５℃で１時間室温で一夜攪拌する。

次いでトリエチルアミン約５０ｒｒＬｌでｐＨ約６に調
整し、６時間後ＤＣＣ６１をジクロロメタン１０ＴｒＬ
ｌに溶かした溶液を加え、一夜攪拌する。

これに氷酢酸１０ｒｒｔｌを加え、不溶物を濾去した濾
液を減圧濃縮し、その残渣に酢酸エチル１１を加え、こ
れを１Ｎ塩酸、５％重曹水で洗浄後、無水硫酸ナトリウ
ムをしいた濾紙上で乾燥せしめる。

酢酸エチルより２回、Ｍｅ・ｏＨ−ジエチルエーテルよ
り２回再結晶化して上記目的物９５′？を得る。

融点１１１．５〜１１３．５℃。

３） ＢＯＣ−Ｍｅｔ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ −ＯＨ
の製造ＢＯＣ−Ｍｅｔ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ −０Ｂｚ
ｌ １０．２ Ｓｉ’をＭｅ ｏＨ８９ｍｌに溶かし、
冷却下２ＮＮａｏＨ１２ｍ１を加え室温で２０分間攪拌
する。

次いでＩＮ塩酸でｐＨ約６に調整し、ＭｅｏＨを留去す
る。

残渣を酢酸エチル２００ｍ１で抽出し、ＩＮ塩酸、水で
洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し酢酸エチルを留去し
て後ｎ−ヘキサンで結晶化し、更に酢酸エチル−ジエチ
ルエーテルより再結晶して上記目的物７．８Ｐ（収率９
３．０％）を得る。

融点１３９〜１４０℃、（ｃｔ）宕−４９，６°（Ｃ＝
２．２、ＥｔｏＨ）元素分析（Ｃｌ８Ｈ３３Ｎ３０６
ｓｌ として〕測定値 Ｃ５１，４７、Ｈ８，］、３
、 Ｎ１０．１４ 計算値 Ｃ５１，５２、Ｈ７，９４、 Ｎ１０．０２ Ｃｂｚ−ＨＮ−ＣＨ−ＣＯＯＨ５０グ（０，１５モル）
、ハラホルムアルデヒド６．９ｆ、Ｐ−１ルエンスルホ
ン酸１．５Ｓ’、ベンゼン６５０１ｒＬｌを１１容ナス
型フラスコ中で３時間加熱還流する。

反応終了後、室温まで冷却し、このベンゼン溶液を３回
水洗し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ベンゼンを減
圧留去して油状残渣５８グを得る。

この油状物をメタノール３００ｍ１に溶解し冷却しなが
ら金属ナトリウム３．５ｔｉ？をメタノール３００１ｎ
ｌに溶解して生成するナトリウムメチレートを加え、室
温にて放置する。

塩酸にてｐＨ５とした後、メタノールを減圧留去して得
られる油状残渣を酢酸エチルに溶かす。

これをＩＮ−塩酸で洗浄し、次いで４回水洗し、無水硫
酸ナトリウムにて乾燥後酢酸エチルを減圧留去して上記
目的物より成る油状物５６１を得る。

Ｃｂｚ−ＨＮＣＨＣＯＯＣＨ３よりなる油状物５６グを
メタノール３００ｒＩＬｌ、水１５０１７１１に溶解し
、活性炭を入れ、１時間攪拌後パラジウムー炭素を加え
、１０時間水素添加を行う。

触媒濾別後、１００ｒＩＬｌ迄減圧濃縮する。

これにジオキサン２００１７１１を加え、冷却下トリエ
チルアミン２１ｒｕｌを加え、ＢＯＣ−Ｔｈｒ （Ｂｚ
ｌ ）−０ＳＵ ８０ ？を加え、室温にて３日間攪
拌する。

反応終了後、Ｎ−Ｎ−ジメチルアミノート３−プロパン
ジアミンを加え、３時間攪拌後、１００ｒＩＬｌ迄減圧
濃縮する。

これを酢酸エチルで抽出し、ＩＮ塩酸洗浄する。

さらに水洗後、酢酸エチルを減圧留去し、得られる油状
物をエーテルに溶かし、５％重曹水に転溶する。

水層をエーテルでよく洗った後、酢酸エチルで逆抽出し
、水洗、ＩＮ塩酸洗、水洗を繰り返した後、無水硫酸ナ
トリウムにて乾燥後、酢酸エチルを減圧留去して目的物
より成る油状物５７グを得る。

ＢＯＣ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＨＮＣＨＣＯＯＣＨ３５０
？に冷却下、ＴＦＡ １５０ｒＩＬｌを加え、振りまぜ
て溶解し、そのまま室温で３０分処理した後、ＴＦＡを
減圧留去し、残渣をＮ ａ ＯＨ上デシケーター中で一
夜乾燥させる。

この油状物をＤ■’１００ｗＬｌに溶解し、冷却下トリ
エチルアミン４０ｒＩｌｌを加え、ｐＨ約６とし、ＨＯ
ＢＴ５Ｐ、ＢＯＣ−８ｅｒ （Ｂ ｚｌ ） −（）Ｓ
Ｕ５０グを加え、再びＮ−メチルモルホリンでｐＨ約６
として室温で３日間攪拌する。

次いで、Ｎ−Ｎ−ジメチルアミノート３−プロパンジア
ミンを加え、１時間攪拌後、水を加え、酢酸エチルで抽
出する。

この酢酸エチル層をＩＮ塩酸、水、５％重曹水、水の順
で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。

次いで酢酸エチルを減圧留去し、残渣をジエチルエーテ
ル３００ｒｒＬｌに溶かし、５％重曹水に転溶する。

これを塩酸々性とし酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層
を５％重曹水及び水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥する。

酢酸エチル溶液に冷却下、等量のシクロヘキシルアミン
を加えた後、減圧留去し、得られる油状物をエーテル−
ｎ−ヘキサンにより固化させ、融点７０〜７３℃の目的
物４１１を得る。

（ロ）賃十４９°（Ｃ＝２．７、ＤＭＦ）。

（７） ＢＯＣ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−（）Ｂｚｌ の
製造ＢＯＣ−Ａｓｎ−ＯＨ２６，６９とＨ−ＬｅｕＯＢ
ｚｌ −ＴｏｓＯＨ４３，３ｆｔをＤＭＦ １５０
ｍｌに溶解しこれにＨＯＢＴ ２？を加えた後、−１
０℃に冷却下ＷＳＣ１６，３Ｐを約３０分間かげて滴下
し、室温で一夜攪拌する。

反応液に水を加え、生成物を沈澱させ、酢酸エチルで抽
出する。

抽出液をＩＮ塩酸、水、５％炭酸ソーダ水、水の順で洗
浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮する。

残渣を酢酸エチル−ｎ−へキサンより再結晶化して上記
目的物４４．３ｆを得る。

融点１４６〜１４７℃、（ロ）貨−２６，５°（Ｃ−２
、ＤＭＦ）。

（８） ＢＯＣ−Ｇｌｙ −Ａｓｎ−Ｌｅｕ −０Ｂ
ｚｌの製造ＢＯＣ−Ａｓｎ −Ｌｅｕ −０Ｂｚｌ
１５９に冷却下ＴＦＡ ３０ｒＩＬｌを加え、室温にて
１時間反応せしめた後、ＴＦＡを減圧留去し、油状残渣
を苛性ソーダ上デシケータ中で乾燥せしめる。

これをＤＭＦ ５０ｒＩＬｌに溶解し、冷却下トリエチ
ルアミンでｐＨ約６．５とした後、ＢＯＣ−Ｇｔｙ→５
Ｕ１１．３ｆおよびＨＯＢＴｘＰを加え、室温で一夜攪
拌する。

反応後、Ｎ−Ｎ−ジメチルアミノート３ プロパンジアミン２ｍｌを加え、３０分攪拌後抜水加え
、次いでクロロホルムで抽出を２回行なう。

クロロホルム層をＩＮ塩酸、水で良く洗浄した後無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、クロロホルムを留去した油状
残渣を酢酸エチル−ｎヘキサンより結晶化して上記目的
物１３．Ｏｆ（収率７６．５Ｓ’）を得る。

融点８６〜８８℃。（９） ＢＯＣ−Ｇｌｙ −Ａｓ
ｎ −Ｌｅｕ−ＮＨＮＨ２の製造ＢＯＣ−Ｇｌｙ −Ａ
ｓｎ −Ｌｅｕ −０Ｂｚｌ ５．０ ′？をメタノー
ル２０ｒＩＬｌにとかし、８０％ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ
２０ｒｆＬｌを加え、室温で一夜放置する。

次いでジエチルエーテルを加えて沈澱を完全に析出させ
た後、これを濾取し、ジエチルエーテルで良く洗浄し、
メタノール−ジエチルエーテルから再沈澱せしめて上記
目的物３９グ（収率９３，７％）を得る。

融点２０４〜２０７℃（分解）。

（１０） ＢＯＣ−Ｇｌｙ −Ａｓｎ −Ｌｅｕ−８
ｅｒ（Ｂｚｌ） −Ｔｈｒ（Ｂｚｌ） ＨＮＣＨＣＯＯＣＨ３−ＣＨＡ ８１−酢酸エチル中１
Ｎ塩酸で処理し遊離酸とし、無水硫酸ナトリウムで乾燥
後、減圧濃縮する。

油状残渣に冷却下ＴＦＡ３０ｍｌを加え、室温にて３０
分攪拌後、ＴＦＡを減圧留去した残渣を苛性ソーダ上デ
シケータ−中で乾燥せしめる。

これをＤＭＦＩＯｒＩｌｌにとかし、トリエチルアミン
で中和する。

一方、ＢＯＣ−Ｇｌｙ −Ａｓｎ −Ｌｅｕ −ＮＨＮ
Ｈ２４，２１をＤＭＦ １５ｒｆＬｌにとかし、−１０
℃に冷却しながら６Ｎ塩酸／ジオキサ７３．５ｍｌを加
え、更に同温度に保ちながらイソアミルニドリット２、
０ ｍｌを加え、同温度で１０分間反応せしめてアジド
化する。

このアジド化物を含む溶液を一５０℃に冷却し、これに
先に得たＤ■゛溶液を徐々に加える。

添加後、トリエチルアミンでｐＨ約７．０に調製し、−
５〜−１０℃で１時間攪拌抜水浴中で一夜攪拌を続ける
。

Ｎ−メチルモルホリンでｐＨを約７．０に調整し、攪拌
を３日間続ける。

次いでこの反応液を一５℃に冷却した０、 ５ Ｎ塩酸
３００ｒｒＬｌ中に一５°Ｃ以下に保ちつつ徐々に添加
し、生ずる沈澱を濾取し、水洗後メタノール１００ｒＩ
Ｌｌ−水２００ｍ１にて１０分間加熱還流し、放冷後沈
澱を濾取する。

更にクロロホルム２．００ ｒｒＬｌ−酢酸エチル１０
０ｒｆＬｌにて加熱還流し、放冷後沈澱を濾取する。

この沈澱をメタノールジエチルエーテルより再沈澱して
上記目的物６１ｖ（収率６３．８％）を得る。

融点１９２〜１９４℃（分解）、（ロ）賃−６，３３°
（Ｃ＝１．５、ＤＭＦ）。

Ｔｈｒ（Ｂｚｌ） ＨＮＣＨＣＯＯＣＨ３２，８グを乾燥ピ リジン３０扉ｌに溶解し、ＴＦＡ−ＯＮＰ５Ｐを加え、
４５℃で３時間攪拌する。

反応後、減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテルを加え、
生ずる沈澱を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄後乾燥せ
しめて黄褐色の粉末２．８１を得る。

この粉末に冷却下、ＴＦＡ １５ＴＩＬｌを加え、室温
にて３０分間攪拌後、ＴＦＡを減圧留去した残渣をＤＭ
Ｆ ２０ ｒｕｌに溶解する。

これを４５℃の乾燥ピリジン３．０Ｊに攪拌下１時間か
げて滴下する。

滴下終了後、液温な５０℃にして攪拌を８時間続け、さ
らに４０℃で一夜攪拌を続ける。

反応終了後、２００ｒＩＬｌまで減圧濃縮し、４０℃で
３時間攪拌後再び約５０ｒｒＬｌ迄減圧濃縮し、これを
クロロホルム６００ｗＬｌに溶解後、飽和食塩水、１Ｎ
−塩酸（２回）、食塩水の順に洗浄後、クロロホルム層
を約１０ｍ１迄減圧濃縮する。

これにジエチルエーテルを加え、生ずる沈澱を濾取し、
ジエチルエーテルで洗浄後乾燥して前記目的物１．５Ｐ
（収率６０％）を得る。

Ｔｈｒ（Ｂｚｌ） −ＨＮＣＨＣＯＯＣＨ３１，４？を
ＤＭＦ″５ｒｒｌ１１メタノ−／Ｌ／ ３０ ｍｌに溶
解し、８０％ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２０２０ｗＬｌを加え、
室温チー夜攪拌スル。

反応終了後、水を加え、生ずる沈澱を濾取水洗後、メタ
ノール５０ｍ１−酢酸エチル５０ＷＬｌを加えて加熱還
流する。

次いで室温迄放冷後、沈澱を濾取し、乾燥して上記目的
物１．１ｓ’（収率７８．６％）を得る。

融点２１２（軟化）〜２３６〜２５０℃（分解）、（ロ
）許−１５，５゜（Ｃ＝ ０．２、ＤＭＦ）。

Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −ＨＮＣＨＣＯ−Ｍｅｔ −Ｌ
ｅｕ −ＯＨの製造 （３）で得たＢＯＣ−Ｍｅｔ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ −
ＯＨ２ｉに冷却下ジメチルチオエーテル０．５ ｒＩＬ
ｌおよびＴＦＡｌｏＷＬｌを加え、室温で２０分間攪拌
後、ＴＦＡを減圧留去する。

この残渣にジエチルエーテルを加え、沈澱をデカンテー
ションにより採取し、苛性ソーダ上デシケータ−中で乾
燥後ＤＭＦ ２ｍｌにとかす。

−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＨＮＣＨＣＯＮＨＮＨ２８４０ｍ
９をＤＭＦ５ｗＬｌに懸濁し、−５℃に冷却下６Ｎ塩酸
を含むジオキサン１ｗＬｌを加え、１０℃迄温度を上げ
て完全に溶解せしめる。

次いでこれを一５℃以下に冷却してイソアミルニドリッ
ト０．２ ｒｎｌを徐々に加え、同温度で１０分間反応
を行いアジド化する。

このアジド化反応終了後、−５０℃迄冷却し、これに前
記ＤＭＦ溶液を徐々に加える。

添加後トリエチルアミンで中和し、そのまま−５℃で１
時間攪拌後、氷室にて３日間反応を行う。

この反応液を冷却下０．５ Ｎ−塩酸２００ｒＩＬｌ中
に徐々に加え、生ずる沈澱を濾取し、水洗後メタノール
２００ｒＩＬｌを加え沸騰させた後放冷して沈澱を濾取
し、上記目的物１．１１を得る。

融点２４３〜２４７℃（分解）、＠１℃−ＩＯ１７゜（
Ｃ＝０．３１、ＤＭＦ）。

アミノ酸分析： ＡｓｐＯ，９６（１）、Ｔｈｒ ０．
９４ （１）、Ｓｅｒ ０．８８ （１）、ｃｔｙ ２
． ＯＯ（２）、Ｍｅｔ ０．９９ （１）、Ｌｅｕ
１．８８ ＜２）、α−アミノスペリン酸１．０２（１
）、ＮＨ３１，０８゜ ドコサペプチドフラグメント（部分順序１０３１）の製
造 （１） Ｃｂｚ −Ａｌａ −Ｐｒｏ −ＮＨ２の製
造Ｃｂｚ −Ａｌａ−ＯＨ７４，１？、 Ｈ−Ｐｒ。

ＮＨ２−ＨＣＩ ５０ Ｓ’、 ＨＯＢＴ ５０．
５ ＰヲＤＭＦ ３００ ｒｎｌに溶かし、Ｏ〜−３
℃に冷却してＷＳＣ６１１ｒＬｌを加える。

同温度で約１時間、室温で一夜攪拌した後、溶媒を減圧
留去し、残渣をクロロホルムに溶かし、１Ｎ塩酸、水、
５％重曹水、水で洗浄後硫酸マグネシウムで乾燥する。

次いで減圧濃縮し、残渣をジエチルエーテルで処理し、
不溶物を濾取し、エタノールより２回再結晶化して上記
目的物７１′？（収率６７．６％）を得る。

融点１７１．３〜１７１．８℃、（ロ）１も−９４，２
°（Ｃ−２、メタノール）。

（２） ＢＯＣ−Ｖａｌ −Ｇｌｙ −０Ｅｔ の
製造ＢＯＣ−Ｖａｌ −ＤＣＨＡ ８０ ？を酢酸エチ
ル中ＩＮ硫酸で処理して油状の遊離酸を得る。

これとＨ−ｃｌｙ−ＯＥｔ−ＨＣＩ ２８ｆｔとをク
ロロホルム１５０ｒｒＬＩＳＴＨＦ １５０ｍｌの混
液に溶かし、冷却してトリエチルアミン２８ｒｎｌとＤ
ＣＣ４１，２ｆＩを加え、Ｏ〜−２℃に冷却下に１時間
、室温で一夜攪拌する。

不溶物を濾去した濾液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル
に溶かし、これを１Ｎ塩酸、水、５％重曹水、水で洗い
、硫酸マグネシウムで乾燥する。

次いで減圧濃縮し、残渣にｎ−ヘキサンを加えて固化さ
せ、酢酸エチル−ジエチルエーテル−ｎ−へキサンカラ
再結晶化して上記目的物５４グ（収率８９．２％）を得
る。

融点９４〜９６℃。（３） ＢＯＣ−Ｖａｌ −Ｇｌ
ｙ −ＯＨの製造（２）の生成物の１Ｏｆをメタノール
２０ｒＩＬｌにとかし、冷却しながら１Ｍ苛性ソーダ４
０ｒｒＬｌを加え、冷却下１５分、室温で４５分間攪拌
する。

反応液を１Ｎ塩酸でｐＨ約７に調整した後減圧濃縮し、
残渣に水を加えてジエチルエーテルで洗浄する。

水層のｐＨをＩＮ塩酸で約２として酢酸エチルで抽出す
る。

酢酸エチル層をよく水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥後
、減圧濃縮し、残渣の油状物にｎ−ヘキサンを加えて固
化させる。

これを酢酸エチル−ｎ−ヘキサンより再結晶化して上記
目的物ｓ、ｏｙ（収率８９％）を得る。

融点１０１〜１０４℃。（４） ＢＯＣ−Ｖａｌ
−Ｇｌｙ −Ａｌａ −Ｐｒｏ −ＮＨ２の製造 （１）の生成物の３Ｏｒを２５％ＨＢｒ／酢酸２００ｍ
１に溶かし、室温で３０分攪拌する。

反応後ジエチルエーテルを加え沈澱を濾取しこれをジエ
チルエーテルで良く洗った後苛性ソーダ上デシケータ−
中で乾燥する。

これをＤＭＦ２００ｒＩｌｌに溶かし、これに（３）の
生成物の２６２、ＨＯＢＴ １２．８ｆを加え、冷却
下ＫＷＳＣ１７，４ｍｌを加えて同温度で約１時間攪拌
する。

反応液にＮ−メチルモルホリンを約５ｍｌ加えてｐＨ約
４に調整する。

更に室温で一夜攪拌する。Ｄ■゛を減圧留去し、残渣に
水を加え、食塩を飽和させた後クロロホルムで抽出を行
う。

クロロホルム層は食塩を飽和させた１Ｎ−塩酸、水、５
％重曹水で洗い硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮する
。

残渣をエタノールより再結晶化して上記目的物３６グ（
収率８５．９％）を得る。

融点２０１〜２０２℃、＠背−７９．９°（Ｃ−１，０
、酢酸） （５） ＢＯＣ−１１ｅ −Ｇｌｙ−ＯＥｔの製造Ｂ
ＯＣ−１１ｅ−ＯＨ−−Ｈ２Ｏ１２０？にクロ０ホルム
２００１ｒＬ１１トルエン２００ｒｆＬｌを加え、減圧
濃縮する。

油状残渣をジクロロメタン３００ｒｒＬｌに溶解し、Ｈ
−ｃｔｙ −０Ｅｔ −ｆ（Ｃ１７７ｆを加え冷却下攪
拌し、トリエチルアミンで中和する。

反応物にクロロホルム２００ｒｒＬｌを加え、冷却下Ｄ
ＣＣ１１４Ｐ／クロロホルム溶液１００ｍＡ’を１時間
で滴下し、以後室温にて１８時間攪拌する。

酢酸４ｒｒＬｌを加え更に２時間攪拌した後、不溶物を
濾去し、クロロホルムで洗浄後、減圧濃縮し、残渣にク
ロロホルムを加えた後、水、ＩＮ塩酸、水、５％重曹水
、水の順に洗浄後硫酸マグネシウムで乾燥する。

次いで減圧濃縮し、ジエチルエーテル−ｎ−ヘキサンよ
り結晶化し、更に熱酢酸エチル−ジエチルエーテル−ｎ
−ヘキサンより再結晶化して上記目的物１２６．１１を
得る。

融点１０７〜１０８℃、＠１１も−１２，６°（Ｃ＝１
、ＤＭＦ ）。

（６） ＢＯＣ−Ａｌａ −１１ｅ −Ｇｌｙ−ＯＥ
ｔの製造（５）の生成物の８．ＯＩ？に一５℃に冷却下
、ＴＦＡ ２０ｍ１を加え、４０分間反応させる。

ＴＦＡを減圧留去した後残渣にジエチルエーテルを加え
、沈澱をデカンテーションにより採取し、苛性ソーダ上
デシケータ−中で乾燥する。

これをＤＭＦ ４０ｒｒＬｌにとかし、トリエチルアミ
ンで中和後、ＢＯＣ−Ａｌａ −０ＮＳＵ ８．７ｔを
加え２日間反応を行なう。

次いでこれにＮ−Ｎ’ジメチルアミノプロピルアミン２
ｒｕｌを加え１時間反応せしめた後、ＤＭＦを減圧留去
し、残渣にクロロホルムを加え、水、ＩＮ塩酸、水、５
％炭酸ソーダ水、水の順で洗浄し、次いで硫酸マグネシ
ウムで乾燥後酢酸エチルより再結晶化して上記目的物８
．８′？（収率８４．９％）を得た。

融点１９０〜１９０．５℃、（ロ）冒−２６，７°（Ｃ
＝１、ＤＭＦ）。

（７） ＢＯＣ−Ａｌａ −１１ｅ −Ｇｌｙ −Ｏ
Ｈの製造（６）ノ生成ｖｌ）８．５１１ｔｉｒ：） 夕
／−ルア ０ｒｕｌニトカし、これに−５℃に冷却下、
１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液２５ｒＩＬｌを滴下し、５
時間攪拌した後、１Ｎ塩酸でｐＨ約４〜５に調整する。

反応液を減圧濃縮してメタノールを留去し、残渣に水を
加えた後ＩＮ塩酸でｐＨ約２まで下げ、次いで酢酸エチ
ルで抽出を２回行なう。

酢酸エチル層を硫酸マグネシウムで脱水後濃縮し、酢酸
エチルより３回再結晶化を繰り返えし、上記目的物６．
８グ（収率８４．８％）を得る。

融点２０５．６〜２０７．５°Ｃ１（ロ）’、；−３４
．７°（Ｃ＝０．７、ＤＭＦ）。

（８） ＢＯＣ−Ｇｌｎ −Ｔｈｒ（Ｂｚｌ ）−（
）Ｂｚｌの製造Ｈ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−０８ｚｌ（ＣＯ
ＯＨ） ２２１．４１を酢酸エチル３００ｒｒＬｌに懸
濁し、１Ｍ炭酸ソーダ水１００ｒｒＬｌを加えて良く振
り、不溶物を濾去してから分液し、酢酸エチル層を水お
よび飽和食塩水で洗浄後硫酸マグネシウムで乾燥し減圧
濃縮する。

油状残渣をＴＨＦ ４０ｒｎｌに溶解し、ＢＯＣ−Ｇ
ｉｎ −ＯＨ１２，３？、ＨＯＢＴ ６．８′ｉｆを
加えてとかし、冷却攪拌下ＤＣＣ１０，３ｆＩ／ＴＨＦ
ＩＯＦＩＬｌ溶液を５分間で滴下し、同温度で２時間攪
拌後、室温で２１時間攪拌する。

不溶物を濾去し、ＴＨＦにて洗浄後、濾洗液を減圧乾固
し、残油状物を酢酸エチルにとかして冷所に１時間放置
する。

析出する不溶物を濾去した後酢酸エチル層を水、ＩＮ塩
酸、水、５％重曹水（３回）、水の順に洗浄し、更に１
Ｎ塩酸（３回）、食塩水（３回）にて洗浄後、硫酸マグ
ネシウムで乾燥する。

次いで減圧濃縮し、残渣に少量のｎ−ヘキサンと多量の
ジエチルエーテルを加えて結晶化させこれを濾取し、酢
酸エチル−ジエチルエーテルより再結晶化して上記目的
物２２．３Ｓ’（収率８４．５％）を得る。

融点８８〜８９．５℃、（ロ）雲−２５，１°（Ｃ＝１
．１、メタノール）。

（９） ＢＯＣ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ） −ＮＨ
ＮＨ２の製造（８）の生成物の１６．４？をメタノ−／
Ｌ／ ２ Ｑ ｒｒＬｌに溶解し、８０％抱水ヒドラジ
ン２０グを加えて４４時間攪拌する。

反応抜水を加えて結晶を砕き、濾取、水洗後ジエチルエ
ーテルで洗浄し、熱メタノール−ジエチルエーテルより
再結晶化して上記目的物８．２ｆ（収率５８．５％）を
得る。

（ロ）零−９，９°（Ｃ＝１．０．メタノール）。

元素分析（Ｃ２１Ｎ３３０ａ Ｎ５として〕測定値 Ｃ
５５，８６、Ｈ７，３７、 Ｎ１５．５１ 計算値 Ｃ５５，８９、Ｈ７，５２、 Ｎ１５．１７ （１０） ＢＯＣ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ） −Ａ
ｌａ−１１ｅｃｔｙ −０）Ｉの製造 （７）の生成物の３．６１に一５℃に冷却下、ＴＦＡ
１５ｒｒＬｌを加え、室温で４０分間反応させる。

ＴＦＡを減圧留去した後、残渣にジエチルエーテルを加
え、沈澱をデカンテーションにより採取し、苛性ソーダ
上デシケータ−中で乾燥する。

これを３０ｍ１の水にとかし、１Ｍ重曹水にて中和し、
減圧濃縮後再び１０ｒｒＬｌの水にとかし、トリエチル
アミン１．４ｒｒＬｌを加え、冷却下にＤＭＦ １０ｒ
ＩＬｌを加え、更に一１５℃まで冷却する。

一方、ＢＯＣ−Ｇｉｎ −Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −Ｎ
ＨＮＨ２５，８７ｆをＤＭＦ ４０ｒｆＬｌにとかし、
−２０℃まで冷却、６Ｎ−塩酸／ジオキサン９ＴｒＬｌ
を滴下し、１５℃にてイソアミルニドリット２．２８
ｒｒｉｌをゆっくり加え、−１０℃にて５０分間攪拌す
る。

２０℃まで冷却し、トリエチルアミン７．５６−をゆっ
くりと加えた後、前記の冷却したＤＭＦ溶液を加え、−
１０℃にて１時間３０分攪拌抜水浴中で６日間反応を続
ける。

次いで１％酢酸２００ｒｒＬｌを加え、沈澱物を濾取、
水洗後ジエチルエーテルで洗浄し、メタノール−ジエチ
ルエーテルから再沈澱して上記目的物３．３′？（収率
４８．７％）を得る。

融点２３０〜２３２℃（分解）、（ロ）■−３２，７゜
（Ｃ＝１．０、酢酸）。

（４）の生成物の２．６５Ｆに冷却下、ＴＦＡＩＯ献を
加え、５０分間反応させる。

ＴＦＡを減圧留去した後、残渣にジエチルエーテルを加
え、沈澱をデカンテーションにより採取し、苛性ソーダ
上デシケータ−中で乾燥する。

これをＤＭＦ ２０ｒＩＬｌ、 ＨＭＰＡ ２０ｒ
ａｌにとかし、これニ（１０）ノ生成物３．８７？とＨ
ＯＢＴ Ｏ，８２？を加え攪拌溶解し、００℃以下に
冷却し、ＷＳＣｌ、１ｒｎｌを加えて同温度にて攪拌反
応させる。

反応３日後、２％酢酸２００ｒＬｌを加え、生ずる沈澱
を濾取、水洗後ジエチルエーテルで洗浄する。

メタノールを加え、加熱還流後放冷沈澱化させ、更に酢
酸エチル５０ｒＩＬ１１ジエチルエーテル５０ｒｒＬｌ
を加え、放置冷却後沈澱を濾取、酢酸エチルで洗浄して
上記目的物４．１Ｓ’（収率７１．８％）を得る。

融点２５０〜２６０℃（分解） 、＠１２４−５７．０
°（Ｃ＝１．０、酢酸）。

（１２） Ｃｂｚ −Ｐｈｅ −Ｈｉｓ−ＯＭｅの製
造Ｈ−Ｈｉｓ−ＯＭｅ・２ＨＣ１１２６Ｐ及びＣｂｚＰ
ｈｅ −０８Ｕ ２１３ ’ｆ？をりｏｏホルム６００
７ｒＬｌに懸濁し、冷却下攪拌する。

トリエチルアミン１４５．６ｍＡを約４０分間で滴下、
以後室温にて攪拌、４日間反応させた。

クロロホルム１１を加え、５％炭酸ソーダ水にて２度洗
浄後、水洗（４回）、飽和食塩水洗浄（２回）を行ない
硫酸マグネシウムにて乾燥する。

次いで減圧濃縮し、残渣にジエチルエーテル：ｎ−ヘキ
サン（−１： ２）を加え、生ずる結晶を濾取し、ジエ
チルエーテル：ｎ−ヘキサン（＝１ ： ２）で洗浄し
、メタノール−酢酸エチルで再結晶化し、更にジエチル
エーテルを加えてから結晶を濾取、ジエチルエーテルで
洗浄して上記目的物２１６．５Ｖ（収率９２．５％）を
得る。

融点１３５〜１４０℃。

α３）ＢＯＣ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ（ｏ−ＣＩ））−Ｐｈｅ
−Ｈｉｓ（１２）の生成物の２７２に冷却下２６％ＨＢ
ｒ／酢酸１１０ｒＩＬｌを加え、攪拌５分後より室温に
て６０分間攪拌したのち乾燥ジエチルエーテルを加えて
沈澱化させ、デカンテーションにより３回洗浄を行ない
、粉末を濾取し、苛性ソーダ上デシケータ−中で乾燥す
る。

ＨＢｒ塩をＤＭＦ １００ ｒｒＬｌに溶解し、冷却
攪拌下トリエチルアミン１６．８ｒＩＬｌで中和し、続
いてＢＯＣ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ（ｏ−ＣＩ） ）−ＯＮＰ
３２．２１を加え、冷却下３０分、以後室温にて攪拌
反応させる。

７０時間後減圧濃縮乾固し、残渣に酢酸エチル３５０ｒ
Ｉｌｌ、水１５０ｒｆＬｌを加え、更に炭酸ナトリウム
水溶液を加えて水層のｐＨを８〜９とした後分液する。

酢酸エチル層を５％重曹水１５０ｍ１で５回洗い、飽和
食塩水１５０ｍ１で２回洗った後硫酸マグネシウムで乾
燥し、減圧濃縮する。

結晶残渣をジエチルエーテルにて濾取し、酢酸エチル７
００ｒｎｌ、メタノール５０縦より再結晶化、この結晶
を酢酸エチルで洗って上記目的物２７．５ｆ（収率６４
．２％）を得る。

融点１３４〜１３６°Ｃ１（ロ）茗−１９，８°（Ｃ−
１，０、ＤＭＦ）。

（１４） ＢＯＣ−Ａｓｎ−Ｌｙｇ［Ｃｂｚ（ｏ−Ｃ
Ｉ）） −Ｐｈｅ−Ｈ１ｓ −ＯＭｅ ・−Ｈ２Ｏの製
造 （１３）の生成物の２７．１ ？をＴＦＡ６０ｍｌにて
冷却下１０分間、室温６５分間処理し、減圧濃縮乾固し
、油状残渣にジエチルエーテルを加え、生ずる沈澱をデ
カンテーションにより採取し、苛性ソーダ上デシケータ
−中で乾燥する。

これをＤＭＦ ５０ｒｒＬｌにとかし、トリエチルアミ
ンで中和後ＢＯＣ−Ａｓｎ −０ＮＰ １６．１ ？を
加え、冷却下１時間、室温７２時間攪拌する。

反応後減圧濃縮し、残渣に水を加えた後飽和炭酸ソーダ
水を加えてｐＨ９とした後沈澱物を濾取、水洗後ジエチ
ルエーテルで洗浄乾燥し、次いでメタノール−酢酸エチ
ルおよびメタノール−ジエチルエーテルからそれぞれ再
沈澱して上記目的物１５．６Ｐ（収率４９％）。

融点１７５〜１７６℃、ω席−４４，２°（Ｃ＝ ｔ、
ｏｌＤＭＦ）。

（１５） ＢＯＣ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ（ｏ−Ｃ
Ｉ））］−Ｐｈｅ（１４）の生成物の８．３１をメタノ
ール２０ＴＬｌ、ＤＭＦ １０ｒｎｌに溶かし、８０％
抱水ヒドラジン６、３ ｍｌを加え攪拌する。

反応５日後水を加え、析出せる結晶を濾取水洗する。

これをメタノール１５０ｒＩｌｌ中で加熱還流、放冷後
ジエチルエーテル２００ｍ１を加えて放置し、沈澱を濾
取しジエチルエーテルで洗浄して上記目的物６．９ｆ（
収率８４．５％）を得る。

融点２００〜２０２℃（分解） 、（ａ：］％ ４３
−００（Ｃ＝１．１、ＤＭＦ）。

α６） ＢＯＣ−Ｐｈｅ −Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの製造
Ｈ−Ｐｒｏ −０Ｂｚｌ −ＨＣｌ １２１ ？にＴ
Ｈ干゛４００ｒＩＬｌを加え、冷却攪拌下トリエチルア
ミン７０ｒｒＬｌを滴下、更にＴＨＦ １００ｒａｌ
、クロロホルム５ｏｒＩＬｌを追加し、これにＢＯＣ−
ＰｈｅＯＨ１３２グを加え、冷却攪拌下ＤＣＣ１１３グ
／クロロホルム溶液１００ＴＩｌｌを１時間で滴下し、
１０℃以下で攪拌を続ける。

反応１６時間後、冷却下に酢酸５ｒｆＬｌを加え、更に
２時間攪拌した後不溶物を濾去し、濾液をＴＨＦで洗浄
後減圧濃縮する。

油状残渣を酢酸エチル１１に溶解し、不溶物を濾去した
濾液を水、１Ｎ塩酸、水、５％重曹水、水の順に洗浄し
、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮する。

油状残渣をジエチルエーテルに溶解し、ｎ−ヘキサンを
加えて結晶化し、更に酢酸エチル−ｎ−へキサンより再
結晶化して上記目的物１６９Ｓ’（収率７４．８％）を
得る。

融点１０４〜１０６℃。（１７） ＢＯＣ−Ｔｈｒ（
Ｂｚｌ） −Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの製造 （１６）の生成物の６７．９２に冷却下ＴＦＡ１５０献
を加え、４０分間攪拌したのち減圧濃縮する。

乾燥ジエチルエーテルを加え、再濃縮した油状物を苛性
ソーダ上デシケータ−中で乾燥する。

これをＤＭＦｌ ４０ｒｒｔｌにとかし、冷却下トリエ
チルアミンで中和した後、ＢＯＣ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）Ｏ
ＮＳＵ ６７．１１−加え、冷却下に１時間、続いて
室温で攪拌し、途中トリエチルアミンを加えてｐＨ約７
に調整する。

７２時間後Ｎ−メチルモルホリンを加え、２５℃に加温
して反応を続ける。

反応１１７時間後Ｎ−Ｎ−ジメチルアミノート３−プロ
パンジアミン２ｒＩＬｌを加え、２時間攪拌したのち減
圧濃縮しその残渣に水、クロロホルムを加え、クロロホ
ルム層を水、ＩＮ塩酸、水、１０％炭酸ソーダ水、水の
順に洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。

これを減圧濃縮し、その残渣をメタノール−ジエチルエ
ーテルから結晶化させ、濾取した後メタノールで洗浄し
、メタノールから再結晶化して上記目的物６４グ（収率
６６．３％）を得る。

融点１３２〜１３３℃、（ロ）零−２９，００（Ｃ＝１
．０、ＤＭＦ’）。

（ＩＩ ＢＯＣ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ ）−Ｐｈｅ−Ｐｒ
。

０Ｈ−ＣＨＡの製造 同の生成物の６４．４５’をＴＨＦ″ ２００ｒｒＬｌ
に溶かし、冷却攪拌下ＩＮ−苛性ソーダ１２０ｒｒＬｌ
を３０分間で滴下し、更にＴＨＦ５０ｒｒＬｌ、メタノ
ール５０ｒｒＬｌを追加し、室温にて３．５時間攪拌す
る。

反応後ＩＮ−塩酸２５ｒＩＬｌを加えてｐＨ７とし、減
圧濃縮する。

残渣に水を加え、冷却下クロロホルム８００ｍ１．ＩＮ
−塩酸１１０ｒｒＬｌを加えｐＨ２〜３に調整する。

クロロホルム層を２回水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥後
減圧濃縮乾固する。

油状物を酢酸エチルに溶解後、減圧濃縮しこれをジエチ
ルエーテルに置き換え、シクロヘキシルアミン１２ｒｆ
Ｌｌを加えて結晶化し、これを濾取し、ジエチルエーテ
ルで洗浄して上記目的物５８．９グ（収率９０．３％）
を得る。

融点９０〜１１５℃、（ロ）３０−２０．２°（Ｃ＝１
．０、ＤＭＦ）。

Ｑ！Ｊ ＢＯＣ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ （Ｃｂｚ （ｏ−
ＣＩ ） ）Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ）
−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ −ＯＨ・２Ｈ２０の製造 （１１の生成物の４６１をＩＮ−塩酸２００ ｒｒＬｌ
／酢酸エチル５００７７ＬＡ！で振り、水層を酢酸エチ
ル１５０ｍ１で再抽出し、これらの酢酸エチル層を０．
５Ｎ塩酸、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧
濃縮乾固する。

この油状残渣に冷却下ＴＦＡ１００ＴｒＬｌを加え、１
時間４０分攪拌反応させた後減圧濃縮乾固し、ジエチル
エーテルを加えて結晶化する。

これを濾取し、ジエチルエーテルで洗浄後、苛性ソーダ
上デシケータ−中で減圧乾燥し、ＤＭＦ １００ ｍ
ｌにとかして一２０℃に冷却する。

一方、ＢＯＣ−Ａｓｎ −Ｌｙｓ （Ｃｂｚ （ｏ −
ＣＩ） ）Ｐ ｈｅ −Ｈｉ ５−ＮＨＮＨ２５７ｆに
ＤＭＦ ２５０１ｒＬｌを加え一２０℃まで冷却してこ
れに６Ｎ−塩酸／ジオキサン４６ｒｒＬｌを滴下する。

次いで−１５〜−１０℃にてイソアミルニドリット１２
．０４ｍ１を滴下し、−１０℃にて４０分攪拌して後再
び２０℃に冷却する。

これに前記で得た冷ＤＭＦ溶液を加え、−２０〜−１５
℃でトリエチルアミン５８．２ｍｌを滴下して一５〜Ｏ
℃で４日間反応させた後減圧濃縮する。

残渣に酢酸エチル５００ｍ１を加え、生ずる沈澱を濾取
し、乾燥後水洗、ジエチルエーテル洗し、乾燥後酢酸エ
チル、ジエチルエーテルで洗浄する。

酢酸エチル中で加熱還流し、放冷後濾取し、メタノール
−ジエチルエーテルより再結晶化して上記目的物７８ｚ
（収率９０．７％）を得る。

融点１５０〜１５５℃（分解）、■ドー３２，１゜（Ｃ
＝１．０、ＤＭＦ）。

■ＢＯＣ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ（ｏ−ＣＩ）） −
ＰｈｅＨｉｓ −Ｔｈｒ （Ｂ ｚｌ ） −Ｐｈｅ
−Ｐ ｒｏ −Ｇ １ｎＴｈｒ （Ｂｚｌ ）−Ａｌａ
−Ｉ １ｅ−Ｇｌｙ −Ｖａｌ −Ｇｌｙ−〇生成物の
３．９２をＴＦＡ １０ｒ／Ｌｌにて処理、冷却下５分
、室温で４０分反応させた後減圧濃縮乾固し、６Ｎ塩酸
／ジオキサン０．６５ｍ１を加え、ジエチルエーテルを
加えて沈澱化し、デカントにて２回洗浄した後、苛性ソ
ーダ上デシケーク−中で減圧乾燥する。

これをＤＭＦ １０ｍｌ、ＨＭＰＡ１５ＴＬｌに溶か
し、ＨＯＢＴ５４５ ｒＩＩ９及びα９）の生成物５．
０Ｐを加えて溶かし、０℃以下に冷却攪拌し、ＷＳＣ０
，７５ｍｌを加え、２４時間反応させた後減圧濃縮する
。

残渣に酢酸エチル５００ｍ１を加え、生ずる沈澱を濾取
し、酢酸エチル、ジエチルエーテルで洗浄する。

濾取した結晶を水中ですりつぶし、これに炭酸ソーダ水
を加えてｐＨ９とし、濾取、水洗、ジエチルエーテル洗
浄を行った後、メタノール１００ｍ１中で加熱還流し、
放冷後ジエチルエーテルを加え、結晶な濾取、メタノー
ルで洗浄して上記目的物７．１Ｓ’（収率８５．３％）
を得る。

融点２２８〜２３１℃（分解）、（ロ）習−４３，２°
（Ｃ＝１．０、酢酸）。

アミノ酸分析； Ｌｙｓ ０．９０（１）、Ｈｉｓ ０
．９９ （１）、Ａｓｐ ０．９９ （１）、Ｔｈｒｌ
、７２（２）、Ｇｌｕｌ、 １１（１）、Ｐｒｏ２．１
８（２）、Ｇｌｙ２．Ｏ０（２）、Ａｌａ２．０４（２
）、Ｖａｌ １．０２（１）、ｌ１ｅｌ、１３（１）、
Ｐｈｅ ２．１２（２）。

（２１） ＢＯＣ−Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ） −Ｐｈ
ｅ−ＯＨの製造フェニルアラニン３．３１をＤＭＦ
１０ｍｌに懸濁させ、トリエチルアミン２．８ｍｌを加
えて攪拌、これに水４ｍｌを加え、ＢＯＣ−Ａ ｓｐ
（ＯＢ ｚｌ ）ＯＮＰ８．９ｆを加え攪拌する。

４４時間後ＢＯＣ−Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ） −０ＮＰ
４．４ ？を追加し、更に３日間反応を続げた後、減
圧濃縮し、水、ＩＮ塩酸を加えてｐＨ２とし酢酸エチル
で抽出する。

酢酸エチル層をＩＮ塩酸、水、食塩水にて洗浄し、硫酸
す） ＩＪウムで乾燥後減圧濃縮する。

油状残渣をジエチルエーテルに溶かし、これを濃縮後生
成する結晶を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄後、酢酸
エチル−ジエチルエーテル−ｎ−ヘキサンより再結晶化
して上記目的物３．７１を得る。

融点１４６〜１４７℃、（ロ）背十３．９° （ｃ＝ｉ
、ｏ、メタノール）。

（２２） ＢＯＣ−Ｇｉｎ Ａｓｐ（ＯＢｚｌ ）
−Ｐｈｅ −０Ｈ−Ｈ２Ｏの製造 （２１）の生成物の３．３１をＴＦＡ １０ｍｌにて冷
却下２０分、室温で４０分間反反応域圧濃縮乾固し、そ
の残渣にジエチルエーテルを加え結晶化する。

結晶を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄後、苛性ソーダ
上デシケータ−中で減圧乾燥する。

これをＤＭＦ １０ｗ１ｌにとかし冷却攪拌下、トリ
エチルアミン１．９６ｒＩｌｌを加えて中和し、ＢＯＣ
−Ｇｌｎ −０ＮＰ３．３４ ′？を加えて４２時間攪
拌する。

反応後減圧濃縮によりＤＭＦを留去し、酢酸エチル及び
ＩＮ塩酸を加える。

水層な酢酸エチルで再抽出し、これら酢酸エチル層をＩ
Ｎ塩酸、水で洗浄し、ジエチルエーテルを加えて析出す
る結晶を濾取する。

この結晶を０．５Ｎ塩酸ですりつぶし再び濾取した後メ
タノール−ジエチルエーテルより再結晶化して上記目的
物３．５？（収率８３．５％）を得る。

融点〜１６１〜１６３℃（分解） 、＠）％’−１７，
０゜（Ｃ＝１．Ｌ ＤＭＦ）。

（２３） ＢＯＣ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −Ｇｉｎ
−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ ）（２湯の生成物の４５ｙに冷
却下ＴＦＡ１００ｍｌを加え、５０分間攪拌したのち減
圧濃縮する。

乾燥ジエチルエーテルを加え、生ずる沈澱を濾取、ジエ
チルエーテルで洗浄後苛性ソーダ上デシケータ−中で減
圧乾燥する。

この粉末にＤＭＦ ２００ ｒｎｌを加え、攪拌冷却
下ＤＭＦ −水（＝１ ：１）２００扉ｌを加え、トリ
エチルアミン２１ｒｒＬｌを滴下する。

これにＢＯＣ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −０ＮＳＵ ３
３．７ ？を加え攪拌反応させる。

反応２０時間後Ｎ−メチルモルホリン５ＴＩＬｌを追加
し、更に２２時間反応させた後減圧濃縮する。

油状残渣にＩＮ−塩酸約１１を加えて結晶化し、乳鉢に
てすりつぶし、これを濾取した後水洗、ジエチルエーテ
ル洗浄し、メタノール−ジエチルエーテルより再結晶し
て上記目的物４６．５ｆを得る（収率７８．５５’）。

融点１７２〜１７３．５℃（分解）、＠も６−３．７゜
（ｃ＝ｉ、ｏ、ＤＭＦ）。

Ｃ２４） ＢＯＣ−Ｔｙｒ （ＢｚＬ （Ｃｌ２）
） −Ｔｈｒ（Ｂｚｌ ）−Ｇｉｎ −Ａｓｐ （０Ｂ
ｚｌ ） −Ｐｈｅ（２３）の生成物の４５２に冷却下
ＴＦＡ１００ｒｎｌを加え、冷却下１０分間、室温にて
６０分間攪拌したのち減圧濃縮乾固する。

残渣にジエチルエーテルを加えて結晶化し、これを濾取
、ジエチルエーテルにて洗浄後苛性ソーダ上デシケータ
−中で減圧乾燥する。

この粉末をＤＭＦ １００ ｒｕｌに溶かし、冷却攪
拌下トリエチルアミンで中和後、ＢＯＣ−Ｔｙｒ（Ｂｚ
ｌ（Ｃ１２）） ０８Ｕ３２．２Ｐを加え、冷却下に
１時間、室温にて４６時間攪拌後減圧濃縮する。

残渣に冷却下、冷０．５Ｎ−塩酸を加えて結晶化し、こ
れをすりつぶして濾取後水洗、ジエチルエーテル洗浄、
更に酢酸エチルで洗浄する。

次いでメタノール１５０ｒｒＬｌ、酢酸エチル１５０ｒ
ｆＬｌの混合溶媒中で加熱還流し、放冷後ジエチルエー
テルを加え、生ずる沈澱を濾取、ジエチルエーテルで洗
浄して上記目的物５４．５ｆを得る（収率８６．０％）
。

融点１９８〜１９９℃Ｃ２４）の生成物の５１Ｓ’に冷
却下ＴＦ’Ａ １３０ｒｒＬｌを加え、冷却下５分間
、室温にて５０分間攪拌したのち減圧濃縮乾固する。

残渣にジエチルエーテルを加え、沈澱を濾取、ジエチル
エーテルにて洗浄後苛性ソーダ上デシケータ−中で減圧
乾燥する。

この粉末をＤＭＦ １２０ｒａｌに溶解し、冷却攪拌
下トリエチルアミンで中和後ＢＯＣＴｈｒ （Ｂｚｌ
） −０ＮＳＵ １９．６ ｆｔを加え、以後室温にて
攪拌する。

２０時間後トリエチルアミンを加えてｐＨ７〜８に調整
し、更に２０時間反応後減圧濃縮する。

残渣に冷却下に冷０．５ Ｎ塩酸１１を加えて結晶化し
、これをすりつぶした後濾取し、水洗、次いでジエチル
エーテルで洗浄する。

これをメタノール２００ｒｒＬｌ中で２０分間加熱還流
後酢酸エチル１００ｗＬｌを加え、放冷し、更にジエチ
ルエーテル６００ｒｒＬｌを加えて冷蔵庫中に放置する
。

析出する結晶を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄して上
記目的物５３グを得る（収率８８．９％）。

融点１９６〜１９８℃（分解）、＠） ２８＋５．９°
（Ｃ＝１．０．ＤＭＦ″）。

アミノ酸分析： Ａｓｐ １．００． Ｔｈｒ １．６
８、Ｇｌｕｌ、０８、ＴｙｒＯ，９１、Ｐｈｅｏ、 ８
５ 。

（ ドコサペ プチドフラグメント（部分順序１０〜３１））の製造 （２０）の生成物の６．７０？に冷却下ＴＦＡ２ｏｒｒ
Ｌｌを加え、冷却下５分間、室温で５０分間攪拌した後
減圧濃縮し、途中で８Ｎ塩酸／ジオキサン０、５ ｒｎ
ｌを加え減圧濃縮乾固する。

残渣にジエチルエーテルを加え沈澱をデカンテーション
により採取する。

沈澱を乾燥し、粉末をＤＭＦ３０ｗＬｌに溶かし、これ
にＨＯＢＴ Ｏ，４６Ｐ及ヒ（２５）ノ生成物４．４
４？を加え、これをＮ−メチル−２ピロリドン２０ ｒ
ｎｌを加えてとかした後０℃以下に冷却、ＷＳＣＯ，６
２ｒｕｌを加え、同温度で攪拌、数時間後より室温で攪
拌する。

反応３目抜酢酸エチル４００ｒｒＬｌを加えて生ずる沈
澱を濾取、酢酸エチルで洗浄後、０．５Ｎ酢酸中乳鉢で
すりつぶし水洗後濾取する。

更に０．５ Ｍ酢酸、水で洗浄して後メタノール５０ｍ
１中で加熱還流、酢酸エチル、ジエチルエーテルを加え
て放置、冷却後濾取、酢酸エチルで洗浄して上記目的物
９．２１（収率８９．４％）を得る。

融点２２８〜２３４℃（分解）、（ロ）：’ −２７，
００（Ｃ＝ ０．５、酢酸）。

アミノ酸分析： Ａｓｐ １．９０（２）、Ｔｈｒ３．
４０（４）、Ｇｌｕ ２．１６（２）、Ｐｒｏ １．７
０ （２）、Ｇｌｙ ２．００（２）、Ａｌａ ２．１
２（２）、Ｖａｌ ０．９３ （１）、Ｉ ｌｅ １．
０３（１）、Ｔｙｒ １．１５（１）、Ｐｈｅ ３．０
６ （３）。

例１ ヘントリアコンタペプチド標識体の製法 ０．０１Ｍの酢酸溶液に溶解したヘントリアコンタペプ
チド５μｍ（１０μｌ）に０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）２０μｌ及び放射性ヨウ化ナトリウム（Ｎａ
”５Ｉ ）溶液を１ｍｃｉ加エル。

コレにクロラミンＴを２０７！ＡＰ（４０μＪの０．０
５Ｍ、ｐＨ７，５のリン酸緩衝液に溶解）加え、１０秒
間反応させる。

次いでメタ重亜硫酸ナトリウムを１００ｐｆｌ （４０
μＪ）Ｏ，０５Ｍ、 ｐＨ７，５ノリン酸緩衝液に溶解
）加えることにより反応を終結させ、これに５％のＢＳ
Ａを４ｏμｌ加える。

セファデックスＧ−１５を詰めたカラム（ＩＸ１５ＣＩ
ｒＬ）に上記反応液を加えた後、°ｏ、５％ＢＳＡを含
む０．０５Ｍのリン酸緩衝液で溶出する。

初めに溶出してくるフラクションを集め、これをセファ
テックスＧ−５０を詰めたカラム（ＩＸ４０ＣｒｒＬ）
に加え、再び０．５％ＢＳＡを含む０．０５Ｍのリン酸
緩衝液で溶出し、２０〜３０ｒｒＬｌの溶出液を集める
。

この溶出パターンを同様にして製したヒトカルチトニン
標識体を対照として示したのが第２図及び第３図である
。

例２ ラジオイムノアッセイ 被検血清（または標準物質溶液）１００μｌを試験管に
とり、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２，０，３％
ＢＳＡ を含む）０．５ｒｒＬｌ、ヘントリアコンタペ
プチドを家兎に感作させて得た抗血清（約２５００倍）
を０．１ ｍｌ加え、冷蔵庫中（２〜８℃）で一晩イン
キュベーションする。

次いで、ヘントリアコンタペプチドの１２５Ｉ 標識物
（約０．０２μＣ１）を０．１ ｒｕｌ加え、冷蔵庫中
（２〜８℃）で一晩インキュベートする。

次いで家兎γ−グロブリンを山羊に感作して得た抗血清
（第二抗体；約７倍希釈） ０．１ ｒｒｔｌを加え、
冷蔵庫中（２〜８℃）で一晩インキュベーションし、白
色沈澱物を得る。

２０００Ｐで１５分間遠心分離したのち、上清を除去し
、沈澱物の放射能量を計測する。

第４図はこのようにして得た標準曲線を、また第５図は
正常人及び髄様癌患者血清のカルチトニン測定値を示す
。

【図面の簡単な説明】

第１図はヘントリアコンタペプチド１２５■ 標識体の
経時安定性を図示したものであり、第２図及び第３図は
溶出パターン図であり、第４図はラジオイムノアッセイ
の標準曲線であり、第５図は正常人及び患者の血清を測
定した結果を図示したものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １式 で表わされるヘントリアコンタペプチドの放射性ヨウ素
   標識体。 ※※２ カルチトニ
   ンのラジオイムノアッセイにおいて式 で表わされるヘントリアコンタペプチドの放射性ヨウ素
   標識体をトレーサーとすることを特徴とする方法。