JPS5848155B2 - Sweets manufacturing method - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、甘味物の製造に際し、トリテルペンアルコー
ルβ−グリコシドとα−グリコシル糖化合物とを含有す
る水溶液に、α−グリコシル糖転移酵素を作用させて、
α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドを生成含有せしめることを特徴とした甘味物の製
造方法に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION In the production of sweets, the present invention allows α-glycosyl glycosyltransferase to act on an aqueous solution containing a triterpene alcohol β-glycoside and an α-glycosyl sugar compound.
The present invention relates to a method for producing a sweet product characterized by producing and containing α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside.

また、本発明は、モモルデイカ・クロスベノリ・スウイ
ングル（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉ
Ｓｗｉｎｇｌｅ）から甘味物を製造するに際し、該
植物の果実または葉をα−グリコシル糖化合物を含有す
る水溶液で抽出し、この抽出液にα−グリコシル糖転移
酵素を作用させて、α−グリコシル化したトリテルペン
アルコールβ−グリコシドを生成含有せしめることを特
徴とした甘味物の製造方法に関するものである。The present invention also provides a method for cultivating Momordica grosvenori swingle (Momordica grosvenori swingle).
Swingle), the fruits or leaves of the plant are extracted with an aqueous solution containing α-glycosyl sugar compounds, and this extract is subjected to α-glycosylation by acting with α-glycosyl glycosyltransferase. The present invention relates to a method for producing a sweet product characterized by producing and containing triterpene alcohol β-glycoside.

近年、ウリ科の多年生草本であるモモルデイかグロスベ
ノリ・スウイングルの果実または葉は、新しい甘味源と
して注目されている。In recent years, the fruits or leaves of Momordei or Grosvenori swingle, a perennial herb of the Cucurbitaceae family, have attracted attention as a new source of sweetness.

通常、この果実を加熱加工して得られる生薬羅漢果（Ｆ
ｒｕｃｔｕｓ Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ）を抽出し、濃
縮して黒褐色のエキス甘味料が製造されている。The herbal medicine Luo Hanguo (F) is usually obtained by heat processing this fruit.
ructus momordicae) is extracted and concentrated to produce a dark brown extract sweetener.

このエキスには、特開昭５２−８３９８６号公報および
特開昭５３−３４９６６号公報などに開示されているよ
うに、甘味グリコシドとして、トリテルペンアルコール
β−テトラグルコシド（分子式 Ｃ，４Ｈ，２０２４・
２Ｈ２０、通称Ｓ−４糖体）、トリテルペンアルコール
β−ペンタグルコシド（分子式 Ｃ６ｏＨ１ｏ２０２９
・２Ｈ２０１通称Ｓ−５配糖体）、トリテルペンアルコ
ールβ−へキサグルコシド（分子式 ｃｅａ Ｈ１１２
０３４、通称Ｓ−６配糖体）などのトリテルペンアル
コールβ−グリコシドが含まれていることが知られてい
る。As disclosed in JP-A-52-83986 and JP-A-53-34966, this extract contains triterpene alcohol β-tetraglucoside (molecular formula C, 4H, 2024,
2H20, commonly known as S-4 glycoside), triterpene alcohol β-pentaglucoside (molecular formula C6oH1o2029
・2H201 commonly known as S-5 glycoside), triterpene alcohol β-hexaglucoside (molecular formula cea H112
It is known that triterpene alcohol β-glycosides such as 034 (commonly known as S-6 glycoside) are contained.

本発明者は、トリテルペンアルコールβ−クリコシドの
味質について検討したところ、 （１）甘味以外に、刺すような刺激性の味と、薬品臭を
呈すること。The present inventor investigated the taste quality of triterpene alcohol β-cricoside and found that (1) In addition to sweetness, it exhibits a stinging and irritating taste and a chemical odor.

（２）甘味が砂糖よりも遅れて現われ、甘味以外に苦味
、渋味が残り味として長く尾を引き、不快感を与えるこ
と。(2) Sweetness appears later than sugar, and in addition to sweetness, bitterness and astringency linger as a lingering taste, causing discomfort.

などの欠点を有していることを見いだした。It was found that it has the following drawbacks.

そこで、トリテルペンアルコールβ−グリコシドにおけ
るこれらの欠点を、生化学的手段で解消することを目的
に研究を続けた結果、トリテルペンアルコールβ−グリ
コシドと、例えばマルトース、マルトトリオース、マル
トテトラオースなどのマルトオリゴ糖、シクロデキスト
リン、Ｄ．Ｅ．１〜７０の澱粉部分分解物、澱粉、更に
は砂糖などのα−グリコシル基を有する糖化合物、即ち
α一グルコシル糖化合物とを含有する水溶液に、これら
α−グルコシル糖化合物からα−グルコシル基をトリテ
ルペンアルコールβ−グリコシドに転移しうるα−グル
コシル糖転移酵素、例えばα一グルコシダーゼ（ＥＣ
３．２．１．２０）、α−アミラーゼ（ＥＣ ３
．２．１．１）、シクロデキストリングルカノトランス
フエラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）、デキストラ
ンシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．５）などを作用さ
せて生成するα−グリコシル化したトリテルペンアルコ
ールβ−グリコシドを含有せしめて得た甘味物は、従来
のトリテルペンアルコールβ−グリコシド製品とは全く
違って、（１）まろやかな甘味を呈し、刺激性の味、薬
品臭を呈しないこと。Therefore, as a result of continuing research with the aim of resolving these drawbacks of triterpene alcohol β-glycosides by biochemical means, we found that triterpene alcohol β-glycosides and malto-oligomers such as maltose, maltotriose, and maltotetraose, etc. sugar, cyclodextrin, D. E. The α-glucosyl group from these α-glucosyl sugar compounds is added to an aqueous solution containing starch partial decomposition products of 1 to 70, starch, and sugar compounds having an α-glycosyl group such as sugar, that is, α-glucosyl sugar compounds. α-glucosyl glycosyltransferases capable of transferring triterpene alcohol β-glycosides, such as α-glucosidase (EC
3.2.1.20), α-amylase (EC 3
．． 2.1.1), cyclodextrin glucanotransferase (EC 2.4.1.19), dextran sucrase (EC 2.4.1.5), etc. Sweet products containing triterpene alcohol β-glycoside are completely different from conventional triterpene alcohol β-glycoside products in that (1) they have a mellow sweet taste and do not exhibit any pungent taste or chemical odor.

（２）甘味が尾を引かず、苦味、渋味が後に残らないこ
と。(2) The sweetness should not linger, nor should bitterness or astringency be left behind.

などの甘味物として極めて優れた性質を有していること
を見いだし、本発明を完成した。They discovered that it has extremely excellent properties as a sweet food, and completed the present invention.

本発明で使用するトリテルペンアルコールβ−グリコシ
ドは、 で示されるトリテルペンアルコールにおいて、Ｒ１およ
びＲ２は、一方が水素を意味し、他方が１以上のβ一Ｄ
−グルコース残基を意味するか、または両方とも１以上
のβ−Ｄ−グルコース残基を意味する化合物である。The triterpene alcohol β-glycoside used in the present invention is a triterpene alcohol represented by
- refers to a glucose residue, or both refers to one or more β-D-glucose residues.

換言すれば、トリテルペンアルコールにβ一Ｄーグルコ
ースが等モル以上グルコシドに結合しておればよく、一
般にはモモルデイカ・グロスベノリ・スウイングルの果
実または葉から抽出されるトリテルペンアルコールβ−
テトラグルコシド、トリテルペンアルコールβ−ペンタ
グルコシド、トリテルペンアルコールβ−ヘキサグルコ
シドなどのトリテルペンアルコールβ−グリコシド混合
物が用いられる。In other words, it is sufficient that the triterpene alcohol has at least an equimolar amount of β-D-glucose bonded to the glucoside.
Triterpene alcohol β-glycoside mixtures such as tetraglucoside, triterpene alcohol β-pentaglucoside, triterpene alcohol β-hexaglucoside are used.

また、場合によっては、例えばシリカゲル力ラムクロマ
トグラフイーにて個々のグリコシドを単離して使用する
こともできるし、これらグリコシドの部分分解物である
トリテルペンアルコールβーモノグルコシド、トリテル
ペンアルコールβ一シクルコシド、トリテルペンアルコ
ールβ一トリグルコシドなどを用いることもできる。In some cases, individual glycosides can be isolated and used, for example, by silica gel column chromatography, and partial decomposition products of these glycosides, such as triterpene alcohol β-monoglucoside, triterpene alcohol β-monocyclecoside, and triterpene alcohol β-triglucoside and the like can also be used.

本発明に用いるα−グルコシル糖化合物は、同時に用い
るα−グルコシル糖転移酵素によって、トリテルペンア
ルコールβ−グリコシドからα−グリコシル化したトリ
テルペンアルコールβ−グリコシドを生成するものであ
ればよい。The α-glucosyl sugar compound used in the present invention may be one that produces α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside from triterpene alcohol β-glycoside using α-glucosyl glycosyltransferase used at the same time.

従って、α−クリコシル化したトリテルペンアルコール
βグリコシドの生成を容易にするためには、α一グルコ
シル糖転移酵素に好適な基質、即ち澱粉部分分解物や、
砂糖などのα−グルコシル糖化合物が選ばれる。Therefore, in order to facilitate the production of α-cricosylated triterpene alcohol β-glycoside, suitable substrates for α-glucosyl glycosyltransferase, namely starch partial decomposition products,
An α-glucosyl sugar compound such as sugar is chosen.

本発明に用いるα−グルコシル糖転移酵素は、その酵素
に好適な基質α−グルコシル糖化合物とトリテルペンア
ルコールβ−グリコシドとを含有する水溶液に作用させ
るとき、トリテルペンアルコールβ−グリコシドを分解
せずにα−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドを生成するものであれば、自由に用いるこ
とができる。When the α-glucosyl glycosyltransferase used in the present invention is allowed to act on an aqueous solution containing a suitable substrate α-glucosyl sugar compound and triterpene alcohol β-glycoside, α -Glycosylated triterpene alcohol β
- Anything that produces glycosides can be used freely.

一般には、動物、植物、微生物由来のα−グルコシダー
ゼ（ＥＣ ３．２．１． ２０）、α−アミラーゼ（Ｅ
Ｃ ３．２．１．１）、シクロデサストリングルカノ
トランスフエラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）、デ
キストランシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．５）、
デキストリンデキストラナーゼ（ＥＣ ２．４．１．
２）、アミロシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．４）な
どがα一グルコシル糖転移酵素として有利に用いること
ができる。In general, α-glucosidase (EC 3.2.1.20) and α-amylase (E
C 3.2.1.1), cyclodesastring lucanotransferase (EC 2.4.1.19), dextran sucrase (EC 2.4.1.5),
Dextrin dextranase (EC 2.4.1.
2), amylosucrase (EC 2.4.1.4), etc. can be advantageously used as the α-1 glucosyl glycosyltransferase.

これらのα−グルコシル糖転移酵素は、前記の条件を満
足しさえすれば、必ずしも精製して使用する必要はなく
、通常は粗製品で本発明の目的を達成することができる
。These α-glucosyl glycosyltransferases do not necessarily need to be purified before use, as long as they satisfy the above conditions, and the purpose of the present invention can usually be achieved with a crude product.

また、固定化されたα−グルコシル糖転移酵素をバッチ
式で反応に繰返し利用することも、連続式で反応に利用
することも自由にできる。Furthermore, the immobilized α-glucosyl glycosyltransferase can be used repeatedly in reactions in a batchwise manner, or can be freely used in reactions in a continuous manner.

本発明の反応条件は、トリテルペンアルコールβ−グリ
コシドとα−グルコシル糖化合物とを含有する水溶液に
α−グルコシル糖転移酵素を反応させることができれば
よい。The reaction conditions of the present invention may be as long as they can react an a-glucosyl glycosyltransferase with an aqueous solution containing a triterpene alcohol β-glycoside and an α-glucosyl sugar compound.

通常、トリテルペンアルコールβ−グリコシドは、水に
蓄解して反応液中の濃度を約０．１〜２０ｗ／ｗ％とし
、α−グルコシル糖化合物の濃度を約１〜５０ｗ／ｗ％
とすればよく、トリテルペンアルコールβ−グリコシド
に対するα−グルコシル糖化合物の比率は、固形物当り
約０．５〜５００倍の範囲が好ましい。Usually, the triterpene alcohol β-glycoside is stored in water so that the concentration in the reaction solution is about 0.1 to 20 w/w%, and the concentration of the α-glucosyl sugar compound is about 1 to 50 w/w%.
The ratio of α-glucosyl sugar compound to triterpene alcohol β-glycoside is preferably about 0.5 to 500 times the solid content.

反応液のｐＨと温度は、α−グルコシル糖転移酵素が反
応してα−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドを生成できればよく、通常ｐＨ ３〜ｌＯ
、温度２０〜８０℃の範囲から選ばれる。The pH and temperature of the reaction solution are such that the α-glucosyl glycosyltransferase reacts with α-glycosylated triterpene alcohol β.
- It is sufficient to generate glycosides, usually pH 3-10
, a temperature range of 20 to 80°C.

また、本発明者は、羅漢果からグリコシドを抽出する際
にα−グルコシル糖化合物を含有する水溶液で抽出すれ
ば、爽雑物の混入が比較的少ない状態で目的とするグリ
コシドが高収率で抽出でき、次いで、この抽出液に直接
、または濃縮した後にα−グルコシル糖転移酵素を作用
させれば容易にα−グリコシル化したトリテルペンアル
コールβ一グリコシドを生成することを見いだした。In addition, the present inventor has discovered that when extracting glycosides from Luo Han Guo, if the extraction is performed with an aqueous solution containing α-glucosyl sugar compounds, the desired glycosides can be extracted in high yield with relatively little contamination by impurities. It has been found that α-glycosylated triterpene alcohol β-monoglycoside can be easily produced by treating this extract with α-glucosyl glycosyltransferase either directly or after concentration.

この際、抽出時にα−グルコシド糖転移酵素を共存させ
、抽出と酵素反応とを平行して行ない抽出の促進と、抽
出、反応に要する時間の短縮を計ることもできる。At this time, α-glucoside glycosyltransferase may be present at the time of extraction, and extraction and enzymatic reaction may be performed in parallel to promote extraction and shorten the time required for extraction and reaction.

これらの方法によれば、比較的爽雑物の混入の少ない状
態でα−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−
グリコシドを含有する甘味物が生薬羅漢果から直接製造
することができるので極めて有効である。According to these methods, α-glycosylated triterpene alcohol β-
Sweeteners containing glycosides can be produced directly from the herbal medicine Luo Hanguo, which is extremely effective.

本発明では、目的によっては反応液をそのままでも甘味
物として使用できるが、必要に応じて、反応後に酵素を
加熱失活させ、例えば本発明者らが先きに出願した特願
昭５５−１９７４１号の明細書に示したケイ酸アルミン
酸マグネシウム、また特願昭５５−６０５０２号の明細
書に示したマグネシア系吸着剤で有色夾雑物を吸着除去
し、その非吸着部分を採取して甘味物とするか、更には
イオン交換樹脂（例えば、Ｈ型強酸性イオン交換樹脂、
ＯＨ型弱塩基性イオン交換樹脂）を用いて脱塩し、これ
を濃縮してシラツプ状の甘味物とするか、更には乾燥粉
末化して粉末状の甘味物とすることもできる。In the present invention, depending on the purpose, the reaction solution can be used as a sweetener as it is, but if necessary, the enzyme may be deactivated by heating after the reaction. Colored impurities are adsorbed and removed using magnesium aluminate silicate as shown in the specification of the No. 1999 patent, and the magnesia-based adsorbent as shown in the specification of Japanese Patent Application No. 55-60502, and the non-adsorbed portion is collected to produce sweets. or even ion exchange resins (for example, H-type strongly acidic ion exchange resins,
It can be desalted using an OH-type weakly basic ion exchange resin) and concentrated to produce a syrupy sweet, or further dried and powdered to produce a powdery sweet.

また、この甘味物から糖類とグリコシドとを分離する必
要がある場合には、合成吸着剤、例えばＨＰ−１０（三
菱化成工業株式会社製）、アンバーライトＸＡＩ）−２
（ローム＆ハース社製）などを充填したカラムに通液す
れば、α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドは吸着され、糖類は吸着されずに流出する
。In addition, if it is necessary to separate sugars and glycosides from this sweet product, synthetic adsorbents such as HP-10 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation, Amberlite XAI)-2
(manufactured by Rohm & Haas), etc., the solution is passed through a column filled with α-glycosylated triterpene alcohol β.
- Glycosides are adsorbed, sugars are not adsorbed and flow out.

吸着されたグリコシドは、該カラムに低級アルコール水
溶液、例えば５ ０ ｖ ／ ｖ％メタノール水溶液を
通液することによって容易に溶出され、この溶出液を濃
縮してシラツプ状甘味物とするか、更に乾燥、粉末化し
て粉末状の甘味物とすることができる。The adsorbed glycosides can be easily eluted by passing a lower alcohol aqueous solution, such as a 50 v/v% methanol aqueous solution, through the column, and this eluate can be concentrated into a syrup-like sweetener or further dried. It can be powdered into a powdered sweetener.

このようにして得られる本発明の甘味物における甘味度
は、一般には、反応に用いたトリテルペンアルコールβ
−グリコシドの固形物重量に見合う甘味度とほぼ同程度
か、やや低い程度である。The sweetness of the sweetener of the present invention thus obtained is generally determined by the triterpene alcohol β used in the reaction.
- The degree of sweetness is approximately the same as or slightly lower than the sweetness level commensurate with the solid weight of the glycoside.

また、その甘味の質は、粉末状のものをそのまま口に含
んでも薬品臭、刺激味、苦味、渋味などの嫌味を呈する
ことなく、まろやかな甘味を呈し、残り味の切れもよい
。In addition, the quality of the sweetness is such that even when the powdered product is put in the mouth as it is, it does not exhibit unpleasant tastes such as chemical odor, pungent taste, bitterness, or astringency, and it exhibits a mellow sweetness and has a good lingering taste.

また、本発明のα−グリコシル化したトリテルペンアル
コールβ−グリコシドを含有するシラツプ状甘味物は、
低温下で長期保存してもα−グリコシル化シタトリテル
ペンアルコールβ−クリコシド、および未反応のトリテ
ルペンアルコールβグリコシドの析出が見られなかった
。In addition, the syrup-like sweetener containing the α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside of the present invention is
Even after long-term storage at low temperatures, no precipitation of α-glycosylated sitatriterpene alcohol β-glycoside and unreacted triterpene alcohol β-glycoside was observed.

また、本発明のα−グリコシル化したトリテルペンアル
コールβ−グリコシドを含有する粉末状甘味物は、それ
に含まれる各グリコシド化合物が互いに溶け合ったいわ
ゆる固溶体の粉末である。Further, the powdered sweetener containing the α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside of the present invention is a so-called solid solution powder in which the various glycoside compounds contained therein are dissolved in each other.

従って、この粉末の水に対する溶解速度は、瞬時に溶解
できる程犬き＜、シかもその溶解度には際限がないので
シラツプ状からペースト状になる程の高濃度にも自由に
溶解することができる。Therefore, the dissolution rate of this powder in water is so low that it can be dissolved instantaneously, and there is no limit to its solubility, so it can be freely dissolved at high concentrations from syrupy to paste-like. .

本発明の甘味物は、そのまま甘味付のための調味料とし
て使用することは勿論、必要に応じて他の甘味物、例え
ば水飴、ブドウ糖、麦芽糖、カップリングシュガー（登
録商標、林原株式会社）、乳糖、異性化糖、砂糖、ソル
ビトール、マルチトール、ステビオシド、ジヒドロカル
コン、グリチルリチン、Ｌ−アスパラチルフエニルアラ
ニンメチルエステル、グリシン、アラニンなどと混合し
て使用することもできる。The sweetener of the present invention can of course be used as it is as a seasoning for sweetening, and if necessary, other sweeteners such as starch syrup, glucose, maltose, coupling sugar (registered trademark, Hayashibara Co., Ltd.), It can also be used in combination with lactose, high fructose sugar, sugar, sorbitol, maltitol, stevioside, dihydrochalcone, glycyrrhizin, L-asparatylphenylalanine methyl ester, glycine, alanine, etc.

また、本発明の甘味物は、虫歯原因菌などによって醗酵
されにくいことから虫歯を起しにくい甘味剤として、さ
らには代謝されにくいことから低カロリー甘味剤として
も利用できる。Furthermore, since the sweetener of the present invention is not easily fermented by caries-causing bacteria, it can be used as a sweetener that does not easily cause tooth decay, and furthermore, since it is not easily metabolized, it can be used as a low-calorie sweetener.

また、本発明の甘味物は、塩から味、渋味、旨味、苦味
などの他の呈味を有する各種の物質とよく調和し、耐酸
性、耐熱性も大きいので飲食物、嗜好物、菓子類などへ
の甘味付に、また呈味の改良に利用することもできる。In addition, the sweetener of the present invention harmonizes well with various substances having other tastes such as salt, astringency, umami, and bitterness, and has high acid resistance and heat resistance, so it can be used in foods and drinks, luxury foods, and confectionery. It can also be used to sweeten food and improve the taste.

また、家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のため
に、餌料、飼料の嗜好性を向上させる目的で使用するこ
ともできる。It can also be used for the purpose of improving the palatability of feed and feed for domesticated animals such as livestock, poultry, bees, silkworms, and fish.

その他、本発明の甘味物は、タバコ、練歯みがき、口紅
、リップクリーム、内服薬、トローチ、肝油ドロップ、
口中清涼剤、口中香錠、うがい薬などの各種固形状、ペ
ースト状、液状嗜好物、化粧品、医薬品などへの甘味剤
、呈味改良剤、矯味剤としても利用できる。In addition, the sweeteners of the present invention include cigarettes, toothpaste, lipstick, lip balm, oral medicines, troches, cod liver oil drops,
It can also be used as a sweetener, taste improver, and flavoring agent for various solid, pasty, and liquid favorites such as mouth fresheners, pastilles, and gargles, cosmetics, and pharmaceuticals.

さらに、本発明の甘味物を生薬羅漢果と同じ薬効用途、
すなわち情熱、潤肺、怯痰、咳止めなどの用途にも使用
することができ、例えば咳止めシロップ、ぜんそくの発
作をおさえる錠剤などとして使用できる。Furthermore, the sweetener of the present invention can be used for the same medicinal purposes as the herbal medicine Luo Han Guo.
That is, it can be used for purposes such as passion, moisturizing, phlegm, and cough suppressant, and can be used, for example, as cough syrup and tablets for suppressing asthma attacks.

次に、本発明の甘味物を実験に基づいて説明する。Next, the sweetener of the present invention will be explained based on experiments.

実験 １ 甘味物の調製 １−１ グルコシル転移酵素の調製 バチルス ステアロサーモフイラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＦＥＲＭ Ｐ
／１６２ ２ ２ ２をソリュブルスターチ２ｗ／
ｖ％、硝酸アンモニウムＩｗ／ｖ％、リン酸２カリウム
０．１ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム・７水塩０．０５ｗ
／ｖ％、コーンステイープリカー０．５ｗ／ｖ％、炭酸
カルシウム１ ｗ ／ ｖ％からなる殺菌した液体培地
１０ｌに植菌し、５００Ｃで３日間通気撹拌培養した。Experiment 1 Preparation of sweets 1-1 Preparation of glucosyltransferase Bacillus stearothermophilus
stearothermophilus) FERM P
/162 2 2 2 soluble starch 2w/
v%, ammonium nitrate Iw/v%, dipotassium phosphate 0.1w/v%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05w
/v%, corn staple liquor 0.5 w/v%, and calcium carbonate 1 w/v%.

得られた培養液を遠心分離して、その上清を硫安０．７
飽和で塩析し、シクロデキストリングルカノトランスフ
エラーゼ（Ｅｃ ２．４．１．１９）の活性約８ ０
，０ ０ ０単位を有する粗酵素標品を得た。The obtained culture solution was centrifuged, and the supernatant was diluted with ammonium sulfate 0.7
Salting out at saturation, the activity of cyclodextrin glucanotransferase (Ec 2.4.1.19) is approximately 80
A crude enzyme preparation having ,000 units was obtained.

ここでいう活性１単位とＣマ、ｐＨ５．５ ， ０．０
２Ｍの酢酸緩衝液及び２Ｘ１０ −３Ｍの塩化カルシ
ウムを含む０．３ｗ／ｗ，％のソリュブルスターチ溶液
５Ｍに、適当に希釈した酵素液０．２ｒＩＬｌを加え４
０℃で１０分間反応させた後、その反応液０．５ｒｆＬ
ｌをとり、０．０２Ｎ−硫酸水溶液１５ｍｌに混合して
反応を停止させ、さらにこの反応停止液に０．ＩＮヨウ
素ヨウ化カリウム溶液０．２ｒｒＬｌを加えて発色させ
、ついで６６０ｎｍにおける吸光度を測定して、４０℃
で１０分間反応させることによりソリュブルスターチ１
５■のヨウ素の呈色を完全に消失させる酵素量をいう。Here, 1 unit of activity and Cma, pH 5.5, 0.0
Add 0.2 rILl of the appropriately diluted enzyme solution to 5 M of 0.3 w/w, % soluble starch solution containing 2 M acetate buffer and 2 x 10 -3 M calcium chloride.
After reacting at 0°C for 10 minutes, 0.5rfL of the reaction solution
1 was taken and mixed with 15 ml of a 0.02N aqueous sulfuric acid solution to stop the reaction. Add 0.2rrLl of IN iodine potassium iodide solution to develop color, then measure absorbance at 660 nm, and heat at 40°C.
Soluble starch 1 by reacting for 10 minutes with
This refers to the amount of enzyme that completely eliminates the coloration of iodine in 5.

１−２ 酵素反応 シリカゲルカラムクロマトグラフイーにて単離したトリ
テルペンアルコールβ−ペンタグルコシド（Ｓ−５配糖
体）３１とマルトデキストリン（Ｄ．Ｅ． １ ８ ）
９ １とを水１００Ｍに加熱溶解した後、６０℃に冷
却し、ついで前述の粗シクロデキストリングルカノトラ
ンスフエラーゼ標品の６００単位を加え、ｐＨ６．０と
し、６０℃で４時間反応させた。1-2 Triterpene alcohol β-pentaglucoside (S-5 glycoside) 31 and maltodextrin (D.E. 18) isolated by enzymatic reaction silica gel column chromatography
9 1 was heated and dissolved in 100M water, cooled to 60°C, and then 600 units of the crude cyclodextrin glucanotransferase preparation mentioned above was added to adjust the pH to 6.0, and the mixture was reacted at 60°C for 4 hours. .

この反応液を９５℃に１０分間保って酵素を加熱失活さ
せた（この標品は、第１表の試料涜３に相当する。This reaction solution was kept at 95° C. for 10 minutes to inactivate the enzyme by heating (this sample corresponds to Sample 3 in Table 1).

）後、済過して得たＰ液をマグネシア系吸着剤で脱色し
、ついでイオン交換樹脂、アンバーライトＩＲ−２００
Ｃ（Ｈ型）およひアンバーライト ＩＲＡ−９３（ＯＨ
型）を通して脱塩した。), the resulting P solution was decolorized with a magnesia-based adsorbent, and then treated with an ion exchange resin, Amberlite IR-200.
C (H type) and Amberlight IRA-93 (OH
It was desalted through a mold).

ついで、これを７０℃以下で減圧濃縮し、乾燥粉末化し
て粉末甘味物（この標品は、第１表の試料Ａ６４に相当
する。Then, this was concentrated under reduced pressure at 70° C. or below and dried into powder to obtain a powdered sweetener (this sample corresponds to sample A64 in Table 1).

）を得た。) was obtained.

対照品は、同様に加熱、溶解した後、反応工程、加熱失
活工程までを経たもので、その配合組成は第１表に示す
。The control product was similarly heated and dissolved, followed by a reaction step and a heat deactivation step, and its composition is shown in Table 1.

実験 ２ 甘味の質の比較テスト 予備テストで求めた甘味度から算出して、各試料を１５
％の砂糖水溶液に相当する甘味度の水溶ネ傘液を調製し
た。Experiment 2 Comparison test of sweet taste quality Calculated from the sweetness level determined in the preliminary test, each sample was
% of aqueous sugar solution was prepared.

そして最も劣っているものと、最も優れているものを各
１つずつ選出させ、かつ味質について意見を求めた。They were then asked to select one item as the worst and one as the best, and asked for their opinions on the flavor quality.

その結果は、第２表に示す通りであった。The results were as shown in Table 2.

第２表の結果から、試料，％１．４２の対照品は、甘味
の質が劣っており、これに対し試料Ａ３，Ａ４の本発明
品は、甘味の質が優れている。From the results in Table 2, the sample and the control product with a percentage of 1.42 are inferior in the quality of sweetness, whereas the products of the present invention, samples A3 and A4, are excellent in the quality of sweetness.

従って、本発明のα−グリコシル化したトリテルペンア
ルコールβ−グリコシドは、従来のトリテルペンアルコ
ールβ−グリコシド、またはトリテルペンアルコールβ
−グリコシドと他の甘味物との単なる混合物などとは違
って、嫌味がなく、まろやかで砂糖に近い甘味を有して
おり、しかも残り味の切れもよいことから、そのまま口
にふくんで甘味を味わうことのできる極めて優れた甘味
物である。Therefore, the α-glycosylated triterpene alcohol β-glycosides of the present invention can be prepared from conventional triterpene alcohol β-glycosides or triterpene alcohol β-glycosides.
- Unlike simple mixtures of glycosides and other sweeteners, it has no unpleasant taste, has a mellow sweetness similar to sugar, and has a good lingering taste, so you can enjoy the sweetness by simply putting it in your mouth. It is an extremely delicious sweet.

実験 ３ α−クリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドの確認 実験１−２で調製した試料Ａ６．４の１０ｇを水１００
ｒＩｌｌに溶解して得られる溶液を合成吸着剤（三菱化
成株式会社製の商品名ＨＰ−２０）１００ｍｌのカラム
に通液した後、充分水洗して糖類を除去した。Experiment 3 Confirmation of α-cricosylated triterpene alcohol β-glycoside 10 g of sample A6.4 prepared in Experiment 1-2 was added to 100 g of water.
The solution obtained by dissolving in rIll was passed through a 100 ml column of synthetic adsorbent (trade name: HP-20, manufactured by Mitsubishi Kasei Corporation), and then thoroughly washed with water to remove sugars.

次いで、このカラムに５０ｖ／ｖ％エタノール３００ｍ
ｌを通過してグリコシドを溶出し、濃縮、乾燥して約２
．６ｇの粉末（試料４５）を得た。Next, add 300 m of 50 v/v% ethanol to this column.
The glycosides are eluted by passing through a
．． 6 g of powder (sample 45) was obtained.

この試料Ａ６．５は、水に極めてよく溶け、まろやかな
甘味を有する無臭、無色中性の物質である。This sample A6.5 is an odorless, colorless and neutral substance that is extremely soluble in water and has a mild sweet taste.

また、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールなどの
低級アルコールには一部溶け、クロロホルムやエチルエ
ーテルには難溶性の物質である。Furthermore, it is a substance that partially dissolves in lower alcohols such as methanol, ethanol, and n-butanol, and is sparingly soluble in chloroform and ethyl ether.

試料，４６５のＢＫｒ錠剤法による赤外線吸収スペクト
ルを図に示した。The infrared absorption spectrum of sample 465 obtained by the BKr tablet method is shown in the figure.

試料／１６５の一部を少量の水に溶解した溶液に市販の
結晶グルコアミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．３）を０
．１Ｍ酢酸緩衝溶液（ ｐＨ ４．８ ）に溶解した溶
液を加え、５０℃で作用させて経時的にサンプリングし
、シリカゲル６０薄層（メルク社製）にスポットし、展
開溶媒、酢酸エチル：メタノール：水一５：３：１の混
合溶媒で上昇法で展開した。Commercially available crystalline glucoamylase (EC 3.2.1.3) was added to a solution in which a portion of sample/165 was dissolved in a small amount of water.
．． A solution dissolved in 1M acetate buffer solution (pH 4.8) was added, allowed to react at 50°C, sampled over time, spotted on a thin layer of silica gel 60 (manufactured by Merck & Co.), and mixed with a developing solvent, ethyl acetate:methanol: It was developed using a mixed solvent of water and water in a ratio of 5:3:1 using an ascending method.

これを乾燥した後、４０ｗ／ｖ％ケイタングステン酸エ
タノールを噴霧して加熱し発色させた。After drying this, 40 w/v% silicotungstic acid ethanol was sprayed and heated to develop color.

また、試料４１，４５およびＤ−グルコースとをスポッ
トして比較して見た。In addition, samples 41, 45 and D-glucose were spotted and compared.

その結果、試料５には、試料／ｌ６１のトリテルペンア
ルコールβ−ペンタグリコシドに相当するＲｆＯ．６５
のかすかなスポット以外にＲｆ０．４７，Ｒｆ Ｏ．３
３ ， Ｒｆ Ｏ．１ ５および原点近くに新しいス
ポットが確認できた。As a result, sample 5 contained RfO. corresponding to triterpene alcohol β-pentaglycoside of sample/l61. 65
In addition to a faint spot, Rf0.47, Rf O. 3
3, RfO. A new spot was confirmed near 1 5 and the origin.

これらの新しいスポットは、トリテルペンアルコールβ
−ペンタグルコシドと同様に紫紅色であった。These new spots are triterpene alcohol β
- It was purple-red in color, similar to pentaglucoside.

また、試料Ａ５にグルコアミラーゼを作用させ、経時的
にサンプリングしたものは、反応時間とともに新しいス
ポットが徐々に分解を受けて最終的には紫江色を呈する
トリテルペンアルコールβペンタグルコシド（Ｒｆ０．
６５）と褐色を呈するＤ−グルコース（ＲｆＯ．６０）
とに分解されることが判明した。In addition, when sample A5 was treated with glucoamylase and sampled over time, new spots were gradually decomposed with the reaction time, and finally the triterpene alcohol β-pentaglucoside (Rf0.
65) and brown-colored D-glucose (RfO.60)
It was found that it was decomposed into

以上の事実から、Ｒｆ Ｏ．４７ ， Ｒｆ Ｏ．３３
，ＲｆＯ．１５などを示す新しい物質はトリテルペン
アルコールβ−ペンタグルコシドにＤ−グルコースが等
モル以上α−グルコシド結合しているものと判断される
。From the above facts, Rf O. 47, Rf O. 33
, RfO. The new substances showing compounds such as 15 are considered to be those in which D-glucose is bonded to triterpene alcohol β-pentaglucoside in an amount equal to or more than the same mole as α-glucoside.

従って、試料／ｌ６５は、α−グルコシル糖転移酵素に
よって新らたに生じたＲｆＯ．４７，Ｒｆ Ｏ．３ ３
， Ｒｆ Ｏ．１ ５および原点近くのスポツトを示
す物質と少量の未反応のトリテルペンアルコールβ−ペ
ンタグルコシドとの混合物である。Therefore, sample/l65 contains the newly generated RfO. 47, Rf O. 3 3
, Rf O. 15 and a substance showing spots near the origin and a small amount of unreacted triterpene alcohol β-pentaglucoside.

また、Ｒｆ Ｏ．４７，Ｒｆ Ｏ．３３ ，Ｒｆ Ｏ．
１５などを示す新物質は、豚の肝蔵を抽出し、部分精製
されたα−グルコシダーゼの作用によっても同様ＩｔＣ
｝ ＩＪ−ｒルペンアルコールβ−ペンタグルコシド
とＤ−グルコースとに分解されることが判明した。Also, RfO. 47, Rf O. 33, Rf O.
New substances such as 15 were also produced by extracting pig liver and using partially purified α-glucosidase.
} IJ-r was found to be decomposed into lupen alcohol β-pentaglucoside and D-glucose.

このことから、これら新物質は、人や動物が摂取すると
き、体内でトリテルペンアルコールβ−ペンタグルコシ
ドとＤ−グルコースとに容易に分解されることを示唆し
ている。This suggests that when these new substances are ingested by humans or animals, they are easily decomposed into triterpene alcohol β-pentaglucoside and D-glucose in the body.

また、試料／Ｉ６５は、実験２で使用した試料涜３およ
び試料Ａ６．４と同様に優れた甘味を有していること、
残り味の切れのよいことから、本発明のαークリコシル
化したトリテルペンアルコールβ一グリコシド甘味物と
して好適である。In addition, Sample/I65 has excellent sweetness similar to Sample No. 3 and Sample A6.4 used in Experiment 2;
Since it has a sharp aftertaste, it is suitable as the α-glycosylated triterpene alcohol β-monoglycoside sweetener of the present invention.

従って、本発明のトリテルペンアルコールβグリコシド
の欠点を解消するという目的は、トリテルペンアルコー
ルβ−クリコシドとα−グルコシル糖化合物とを含有す
る水溶液にα−グルコシル糖転移酵素を反応させてα−
グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−ペンタク
リコシドを生成せしめることによって達成されるものと
判断される。Therefore, the purpose of the present invention to eliminate the drawbacks of triterpene alcohol β-glycoside is to react α-glucosyl glycosyltransferase with an aqueous solution containing triterpene alcohol β-glycoside and α-glucosyl sugar compound.
It is considered that this is achieved by producing a glycosylated triterpene alcohol β-pentacricoside.

次に、２〜３の実施例について述べる。Next, a few examples will be described.

実施例 １ バチルス・メガテリウムＦＥＲＭ−ＰＡ９３５を実験１
−１の培地５ｌｌに植菌し、２８℃で３日間通気攪拌培
養した。Example 1 Experiment 1 using Bacillus megaterium FERM-PA935
The cells were inoculated into 5 liters of medium No.-1 and cultured with aeration at 28° C. for 3 days.

培養終了後、遠心分離して得た上清に硫安を０．７飽和
にし、更に遠心分離して沈澱を採取した。After completion of the culture, the supernatant obtained by centrifugation was made 0.7 saturated with ammonium sulfate, and further centrifuged to collect the precipitate.

この沈澱は、実験１−１に記載する活性測定方法でシク
ロデキストリングルカノトランスフエラーゼ（ＥＣ ２
．４．１．１９）を３０万単位含んでいた。This precipitate was analyzed for cyclodextrin glucanotransferase (EC2) using the activity measurement method described in Experiment 1-1.
．． 4.1.19) contained 300,000 units.

羅漢果の破砕物５００ｇをデキストリン（Ｄ．Ｅ．２０
）の５ｗ／ｗ％温水溶液１．５ｌで１時間抽出した。Add 500g of crushed Luohanguo to dextrin (D.E. 20
) for 1 hour.

抽出液を分離し、その残査をさらに同溶液で抽出した後
、最後に温水で洗浄抽出し、全抽出液を合せて済過した
後、固形物濃度約３０％まで濃縮し、この濃縮液に前記
シクロデキストリングルカノトランスフエラーゼ３，０
０ ０単位を加え、ｐＨ５．５、温度５０℃で１６時
間作用させた。The extract is separated, the residue is further extracted with the same solution, and finally washed and extracted with warm water. After combining all the extracts, it is concentrated to a solid concentration of about 30%, and this concentrated solution is The cyclodextrin glucanotransferase 3,0
00 units were added and allowed to react at pH 5.5 and temperature 50° C. for 16 hours.

反応終了後、酵素を加熱失活させて戸過し、次いでケイ
酸アルミン酸マグネシウム（富士化学工業株式会社製、
商品名 ノイシリン）を充填したカラムを通液して有色
爽雑物を吸着除去し、その非吸着部分を濃縮してα−グ
リコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリコシド
を含有するシラツプ状甘味物約２７０ｇを得た。After the reaction is complete, the enzyme is inactivated by heating and filtered, and then magnesium aluminate silicate (manufactured by Fuji Chemical Industry Co., Ltd.,
Colored impurities are adsorbed and removed by passing the liquid through a column packed with (trade name: Neusilin), and the non-adsorbed portion is concentrated to produce approximately 270 g of a syrup-like sweetener containing α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside. Obtained.

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２倍であっ
て、甘味の質もまろやかであり、残り味の切れもよい。The sweetness of this sweet product per solid substance is about twice that of sugar, and the quality of the sweetness is mellow and the residual taste is easy to cut through.

従って、本甘味物は、各種飲食物、嗜好物など多方面へ
の甘味付けに利用することができる。Therefore, the present sweetener can be used to sweeten various foods, drinks, and luxury foods.

特に、虫歯原因菌によって水不溶性のグルカンが生産さ
れないことにより、虫歯を予防する甘味物として効果的
に利用できる。In particular, since water-insoluble glucan is not produced by caries-causing bacteria, it can be effectively used as a sweetener to prevent dental caries.

また、このシロップ状甘味物は、そのままで情熱、潤肺
、怯痰、咳止め用に好適である。In addition, this syrup-like sweet product is suitable as it is for treating passion, moisturizing the lungs, coughing up sputum, and suppressing coughs.

実施例 ２ 羅漢果の破砕物５００ｇにβ−シクロデキストリン２．
５ ｗ ／ ｗ％および実験１−１で得たシクロデキ
ストリングルカノトランスフエラーゼ５，０ ０ ０単
位を加えた水溶液２ｌをｐＨ５．５、温度６０℃に５時
間保って抽出と酵素反応とを行った。Example 2 β-cyclodextrin was added to 500 g of crushed Luo Han fruit.
5 w/w% and 5,000 units of cyclodextrin glucanotransferase obtained in Experiment 1-1 were added to 2 liters of an aqueous solution at pH 5.5 and temperature of 60°C for 5 hours to allow extraction and enzymatic reaction. went.

反応終了後、済過して得られるｐ液にマグネシア系吸着
剤（北海道曹達株式会社製、商品名 Ｍ−５１１）３０
ｇを加え、徐々に攪拌しつつ３０分間保った後済過し、
得られるＦ液をイオン交換樹脂アンバーライトＩＲ−１
２０Ｂ（Ｈ型）およひアンバライトＩＲＡ−９４（ＯＨ
型）のカラムに通液して脱塩し、更に濃縮してα−グリ
コシル化したトリテルペンアルコールβ−グリコシドを
含有スるシラツプ状甘味物約２００１を得た。After completion of the reaction, 30% of magnesia-based adsorbent (manufactured by Hokkaido Soda Co., Ltd., trade name M-511) is added to the p-liquid obtained after completion of the reaction.
g was added and kept for 30 minutes while stirring gradually, and then filtered.
The obtained F solution was mixed with ion exchange resin Amberlite IR-1.
20B (H type) and Amberlite IRA-94 (OH
The mixture was desalted by passing through a column of type 1), and further concentrated to obtain approximately 2001 syrup-like sweets containing α-glycosylated triterpene alcohol β-glycosides.

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約４倍であっ
て、甘味の質もまろやかであり、残り味の切れもよい。The sweetness of this sweet product per solid substance is about four times that of sugar, and the quality of the sweetness is mellow and the residual taste is easy to cut through.

本甘味物は、各種の飲食物、嗜好物等への甘味源として
利用することができるが、中でも虫歯を予防する甘味料
、低カロリー甘味料として好適である。The present sweetener can be used as a sweetening source for various foods and drinks, luxury foods, etc., and is particularly suitable as a sweetener for preventing dental caries and a low-calorie sweetener.

実施例 ３ マルトース ４ｗ／ｖ％、燐酸１カリウム ０．１ｗ／
ｖ％、硝酸アンモニウム ０． １ ｗ ／ ｖ％、硝
酸ナトリウム ０． １ ｗ ／ ｖ％、硫酸マグネシ
ウム・７水塩 ０．０５ｗ／ｖ％、塩化カリウム ０．
０５ｗ／ｖ％、ポリペプトン ０． ２ ｗ ／ ｖ％
、炭酸カルシウムｌｗ／ｖ％（別に乾熱滅菌し、植菌時
に無菌的に添加した。Example 3 Maltose 4w/v%, monopotassium phosphate 0.1w/
v%, ammonium nitrate 0. 1 w/v%, sodium nitrate 0. 1 w/v%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05w/v%, potassium chloride 0.
05w/v%, polypeptone 0. 2 w/v%
, calcium carbonate lw/v% (separately sterilized by dry heat and added aseptically at the time of inoculation.

）からなる培地５ｌにムコール・ヤバニカス（Ｍｕｃｏ
ｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ）を植菌して１３０℃で４４時
間通気攪拌培養した。) was added to 5 liters of a medium consisting of Mucor yabanicus (Muco
r javanicus) and cultured with aeration at 130° C. for 44 hours.

この培養液から得られた湿菌体４８１ｇにＭ／２酢酸緩
衝液（ ｐＨ ５．３ ）に溶解した４Ｍ尿素液５ｌを
加え、３０℃で４０時間静置した。5 liters of 4M urea solution dissolved in M/2 acetate buffer (pH 5.3) was added to 481 g of wet bacterial cells obtained from this culture solution, and the mixture was allowed to stand at 30° C. for 40 hours.

この上清を流水中で一夜透析した後、硫安０．９飽和と
して４℃で一夜放置し、次いで遠心分離して沈澱を採取
した。This supernatant was dialyzed in running water overnight, then left at 4° C. overnight to saturation with ammonium sulfate of 0.9, and then centrifuged to collect the precipitate.

この沈澱を酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１００膨に懸濁し
た後、遠心分離し、上清をα−グルコシターゼ（ＥＣ
３．２．１．２０）液とした。This precipitate was suspended in 100 volumes of acetate buffer (pH 6.0), centrifuged, and the supernatant was collected using α-glucosidase (EC).
3.2.1.20) It was made into a liquid.

羅漢果軟エキス（日本商事株式会社製）１５０ｇとＤ．
Ｅ．４０のマルトデキストリン３００ｇとを水５００ｄ
に溶解し、前記のα−グルコシダーゼ液を加え、ｐＨ６
．０、温度５０℃で２４時間反応させた。150 g of Luohan Guo Soft Extract (manufactured by Nippon Shoji Co., Ltd.) and D.
E. 300g of maltodextrin and 500d of water
Add the above α-glucosidase solution and adjust the pH to 6.
．． 0. The reaction was carried out at a temperature of 50° C. for 24 hours.

反応終了後、酵素を加熱失活させ、次いで実施１と同様
に爽雑物を吸着除去し、済液を濃縮、乾燥、粉末化して
α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドを含有する粉末甘味物を固形物収率約９７％で得
た。After the reaction is completed, the enzyme is inactivated by heating, and then impurities are adsorbed and removed in the same manner as in Example 1, and the resulting liquid is concentrated, dried, and powdered to produce a powder sweetness containing α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside. The product was obtained in a solid yield of about 97%.

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２倍であっ
て、甘味の質もまろやかで残り味の切れもよく、実施例
１と同様に、飲食物、嗜好物だけでなく、薬効用途にも
有利に利用できる。The sweetness of this sweet product per solid substance is about twice that of sugar, and the quality of the sweetness is mellow and the residual taste is good.Similar to Example 1, it can be used not only as a food, drink, or a luxury food. It can also be advantageously used for medicinal purposes.

実施例 ４ 水１ｌにバレイショ澱粉３００ｇと羅漢果軟エキス３０
０９とを加え、これに細菌糖化型α−アミラーゼ（ＥＣ
３．２．１。Example 4 300g of potato starch and 30g of Lohan fruit extract in 1l of water
09 and bacterial saccharification α-amylase (EC
3.2.1.

１）（生化学工業株式会社製）を実験１−１の方法によ
る活性測定方法で澱粉ダラム当り１０単位加え、８０℃
になるまで攪拌しながら加熱し、澱粉の液化が終ったと
ころで６０℃に冷却し２日間反応を続けた。1) (manufactured by Seikagaku Kogyo Co., Ltd.) was added at 10 units per starch duram using the activity measurement method described in Experiment 1-1, and heated to 80°C.
The mixture was heated while being stirred until the starch liquefied, and when the liquefaction of the starch was completed, the mixture was cooled to 60° C. and the reaction was continued for 2 days.

この反応液を加熱してα−アミラーゼを失活させた後、
実施例３と同様に精製し、減圧濃縮した後、粉末化して
α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドを含有する粉末状甘味物を固形物収率９５％で得
た。After heating this reaction solution to inactivate α-amylase,
After purification and vacuum concentration in the same manner as in Example 3, a powdered sweet containing α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside was obtained with a solid yield of 95%.

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２倍であり
、甘味の質もまろやかで、残り味の切れもよく、実施例
ｌと同様に飲食物、嗜好物だけでなく、薬効用途へも有
利に利用できる。The sweetness level per solid substance is approximately twice that of sugar, and the quality of the sweetness is mellow and the residual taste is well cut.As with Example 1, this sweetener is useful not only for foods, drinks, and recreational foods, but also for its medicinal properties. It can also be used advantageously for various purposes.

実施例 ５ 羅漢果１ｋｇを破砕し、これに３ｌｌの熱水を加えて４
回抽出し、得られた抽出液を合わせて実施例２に準じて
マグネシア系吸着剤で爽雑物を吸着除去した後、非吸着
部を合成吸着剤（アンバーライトＸＡＤ−７ ） ４
０ ０ｒＩＬｌのカラムに通液し、溶液中に含まれるグ
リコシドを吸着させ、糖類溶液を流出させた。Example 5 1 kg of Luohan Guo was crushed and 3 liters of hot water was added to it.
After extracting twice and combining the obtained extracts and adsorbing and removing impurities with a magnesia-based adsorbent according to Example 2, the non-adsorbing part was treated with a synthetic adsorbent (Amberlite XAD-7) 4
The solution was passed through a column of 00rIL1 to adsorb the glycosides contained in the solution, and the saccharide solution was allowed to flow out.

次いで、このカラムを水洗した後、５ ０ ｖ ／ ｖ
％メタノール水溶液１ｌを通液してグリコシドを溶出し
、濃縮、乾燥してトリテルペンアルコールβ−グリコシ
ドの白色粉末約４．６ｇを得た。Then, after washing this column with water, 50 v/v
% methanol aqueous solution was passed therethrough to elute the glycoside, and the mixture was concentrated and dried to obtain about 4.6 g of white powder of triterpene alcohol β-glycoside.

砂糖 ５ｗ／ｖ％、酵母エキス ０． ５ ｗ ／ ｖ
％、リン酸１カリウム ０． ８ ｗ／ ｖ％、リン酸
２カリウム２．４ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム・７水塩
０．０ ２ｗ／ｖ％、硫酸マンガン ０．００２ｗ／ｖ
％、前記トリテルペンアルコールβ−グリコシド１ｗ／
ｖ％を含有する培地２００ｒｒＬｌにロイコノストック
・センテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎ
ｔｅｒｏｉｄｅｓ ） ＩＡＭ １ １ ５ １の種
培養液を植菌し、２５℃で２４時間培養した。Sugar 5w/v%, yeast extract 0. 5w/v
%, monopotassium phosphate 0. 8 w/v%, dipotassium phosphate 2.4w/v%, magnesium sulfate heptahydrate 0.02w/v%, manganese sulfate 0.002w/v
%, said triterpene alcohol β-glycoside 1w/
Leuconostocmesen (Leuconostocmesen) in 200rrLl of medium containing v%
A seed culture of IAM 1 1 5 1 was inoculated and cultured at 25° C. for 24 hours.

本培養液を遠心分離して得た上清を、実施例１の反応液
と同様に精製してα−グリコシル化したトリテルペンβ
−グリコシドを含有するシラツプ状甘味物約１５ｇを得
た。The supernatant obtained by centrifuging the main culture solution was purified in the same manner as the reaction solution of Example 1, and the α-glycosylated triterpene β
- Approximately 15 g of syrupy sweetness containing glycosides were obtained.

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２０倍であ
り、甘味の質もまろやかで、残り味の切れもよい。The sweetness of this sweet product per solid substance is about 20 times that of sugar, and the quality of the sweetness is mellow and the residual taste is good.

本甘味物は、嗜好物、嗜好物への甘味付けだけでなく、
低カロリー甘味物として、さらには他の甘味物、例えば
麦芽糖、マルチトール、カップリングシュガー（登録商
標 林原株式会社製）などの甘味度の強化に利用できる
。This sweetener is not only useful for sweetening luxury foods and favorite foods, but also for
It can be used as a low-calorie sweetener and to enhance the sweetness of other sweeteners, such as maltose, maltitol, coupling sugar (registered trademark, manufactured by Hayashibara Co., Ltd.), and the like.

また、情熱、潤肺、怯痰、咳止めなどの用途に、そのま
まで、または他の薬剤と併用して粉剤、顆粒剤、錠剤と
して利用できる。It can also be used as it is or in combination with other drugs in the form of powders, granules, and tablets for purposes such as passion, phlegm, and cough medicine.

なお、本実施例の前記培地からトリテルペンアルコール
β−グリコシドを除いた培地に、ロイコノストック・メ
センテロイテ゛ス ＩＡＭ１１５１を同様に培養して得
た培養液を遠心分離し、得られた上清にリン酸カルシウ
ムゲルを加えて透析し、次いで遠心分離してリン酸カル
シウムゲルを採取した。In addition, the culture solution obtained by culturing Leuconostoc mesenteroides IAM1151 in the same manner as in the above-mentioned medium of this example except for triterpene alcohol β-glycoside was centrifuged, and calcium phosphate gel was added to the obtained supernatant. The calcium phosphate gel was collected by addition, dialysis, and centrifugation.

このゲルを硫安０．３５飽和の０． ２ Ｍ ＩＪン酸
モノナトリウム溶液に懸濁して溶出し、濃縮して得たデ
キストランシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．５）溶
液１０ｒＩＬｌを、砂糖４ｗ／ｖ％と先きに調製したト
リテルペンアルコールβ−グリコシド １ ｗ ／ ｖ
％とを含有する溶液２００ＴＬｌに加えて、ｐＨ５．３
、温度３０℃で１０時間作用させた。This gel was 0.35 saturated with ammonium sulfate. 10 rIL of dextran sucrase (EC 2.4.1.5) solution obtained by suspending, eluting and concentrating 2 M IJ monosodium phosphate solution was mixed with 4 w/v % sugar and the triterpene alcohol prepared earlier. β-Glycoside 1 w/v
200 TL of a solution containing % and pH 5.3
, for 10 hours at a temperature of 30°C.

反応終了後、マグネシア系吸着剤で爽雑物を吸着除去し
、得られる非吸着部を実験１−３に準じて合成吸着剤（
アンバーライトＸＡＤ−７ ）のカラムに通液し、該カ
ラムを水洗し、次いで５０ｖ／ｖ％エタノール水溶液で
グリコシドを溶出回収し、これを濃縮、乾燥してα−グ
リコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリコシド
を含有する粉末状甘味物約２．５ｇを得た。After the reaction, impurities are adsorbed and removed using a magnesia-based adsorbent, and the resulting non-adsorbed area is treated with a synthetic adsorbent (
The solution was passed through a column of Amberlite Approximately 2.5 g of powdered sweetener containing .

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約８０倍であ
り、甘味の質もまろやかで、残り味の切れもよい。The sweetness of this sweet product per solid substance is about 80 times that of sugar, and the quality of sweetness is mellow and the lingering taste is easy to cut through.

本甘味物は前記と同様に各種の用途に利用できる。This sweet product can be used for various purposes as described above.

本甘味物に含有するα−グリコシル化したトリテルペン
アルコールβ−グリコシドハ、イソマルトデキストラー
ゼ（ＥＣ ３．２．１．９４）によって分解され、ト
リテルペンアルコールβ−グリコシド、α−グルコシル
化したトリテルペンアルコールβ一グリコシドなどとと
もにイソマルトースを生じたことから、トリテルペンア
ルコールβ−グリコシドにＤ−グルコースが等モル以上
α−グルコシド結合している混合物であると判断される
。The α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside contained in this sweet product is decomposed by isomaltodextrase (EC 3.2.1.94) to produce triterpene alcohol β-glycoside and α-glucosylated triterpene alcohol β-glycoside. Since isomaltose was produced together with glycoside, etc., it is judged that this is a mixture in which D-glucose is bonded to triterpene alcohol β-glycoside in an amount equal to or more than the α-glucoside.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

図は、α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドの赤外線吸収スペクトルである。The figure shows α-glycosylated triterpene alcohol β
- Infrared absorption spectrum of glycoside.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] １ トＩＪテルペンアルコールβ−グリコシドとα
グリコシル糖化合物とを含有する水溶液に、αグルコシ
ル糖転移酵素を作用させて、α−グリコシル化したトリ
テルペンアルコールβ−グリコシドを生成含有せしめる
ことを特徴とした甘味物の製造方法。1 ToIJ terpene alcohol β-glycoside and α
1. A method for producing a sweet product, which comprises causing an aqueous solution containing a glycosyl sugar compound to act with an α-glucosyl glycosyltransferase to produce and contain α-glycosylated triterpene alcohol β-glycoside.