JPS5841898A - Production of s-adenosyl-l-homocysteine - Google Patents

Abstract

PURPOSE:Readily available S-adenosyl-L-methionine is used as a raw material and subjected to demethylation with thiosulfate, sulfite, hyposulfite or pyrosulfite to give the titled compound having analgesic and antispasmedic activity in high yield. CONSTITUTION:A water-soluble salt of S-adenosyl-L-methionine (abbreviated to SAM) is subjected to demethylation in a aqueous solution with a thiosulfate, sulfite, bisulfite or pyrosulfite salt to give s-adenosyl-L-homocysteine(SAH). For example, SAM sulfate is dissolved in water and sodium thiosulfate is added in an amount of less than 10, preferably 2-5 times the equivalent amount of the SAM salt and the reaction is effected at a pH of 3-6 and a temperature of 30-50 deg.C.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（以下ＳＡＭ
と略称する。）の化学的な脱メチル化によるＳ−アデノ
シル−Ｌ−ホモシスティン（以下ＳＡＨと略称する。）
の製造法に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to S-adenosyl-L-methionine (hereinafter SAM
It is abbreviated as. ) by chemical demethylation of S-adenosyl-L-homocysteine (hereinafter abbreviated as SAH).
Concerning the manufacturing method.

ＳＡＨは、生体内で普遍的なＳＡＭを基質とするトラン
スメチル化反応で生成する重要な生物学的中間物質であ
り、Ｓ　Ａ、ＭのトランスメチＪし化反応の生成物阻害
物質として知られている。近年、ＳＡＨそれ自体の薬理
活性が注目され、中枢神経系統の鎮静作用および睡眠誘
発作用、ならびに抗痙彎作用等が報告されている（特開
昭５４−１４５２２２号公報参照）。SAH is an important biological intermediate produced in the transmethylation reaction using SAM as a substrate, which is common in living organisms, and is known as a product inhibitor of the transmethylation reaction of SA and M. There is. In recent years, the pharmacological activity of SAH itself has attracted attention, and its sedative and sleep-inducing effects on the central nervous system, as well as its anti-spasmodic effects, etc. have been reported (see JP-A-54-145222).

ジ ＳＡＨの製造法としては、ｔｌｌｓ−ベンゼルーＬ−ホ
モシスティンとトシルイソプロピナデンアデノシンを原
料とする化学合成法（Ｂｉｏｃｈｅｍ。As a method for producing di-SAH, a chemical synthesis method (Biochem) using tlls-benzel-L-homocystine and tosylisopropinadenadenosine as raw materials is used.

Ｐｒｅｌ）ａｒａｔｉｏｎｓ、　ＶＯｌ、　８　、１）
ｐ、　８−１１　（１９６１）参照）、（２）酵母菌体
から過塩素酸によってＳＡＭとともに抽出し、ＳＡＨを
分離する方法（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、。Prel)arations, VOl, 8, 1)
p. 8-11 (1961)), (2) A method of extracting SAH from yeast cells with perchloric acid together with SAM (Anal, Biochem, 2003).

Ｖｏｌ、　１５　、　Ｉ）Ｉ）、　８２８−８８８　（
１９６６１参照）　、＋８１アデノシンとホモシスティ
ンを原料として、ラット等の肝臓から抽出した酵素によ
って酵素合成する方法（Ｊ、Ｂｉｏｌ、（ｈｅｍ、、Ｖ
ｏｌ、　２８４　、１）ｌ）、　６０　Ｂ−６０，８（
１９５９）参照）　、　（４１酵母菌体から抽出、精製
したメチルトランスフェラーゼを用い、ホモシスティン
とＳＡＭを基質として反応させ、メチオニンとともにＳ
ＡＨを生成させる方法（Ｊ。Vol, 15, I)I), 828-888 (
19661), a method of enzymatic synthesis using enzymes extracted from the liver of rats etc. using +81 adenosine and homocysteine as raw materials (J, Biol, (hem, , V
ol, 284, 1)l), 60 B-60,8(
(1959)), (41) Using methyltransferase extracted and purified from yeast cells, homocysteine and SAM were reacted as substrates, and methionine and S
Method for producing AH (J.

Ｂｉｏｌ、（：ｈｅｍ、、Ｖｏｌ、２８９．ｐＩ）、　
１５５１−１５５６　（１９６４）参照）、（５１ｓＡ
Ｍのギ酸塩、酢酸塩、過塩素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸
塩、沃化水素酸剤 塩などの使用有機溶損に溶解する特定の塩を、特定の一
性有機溶剤またはその混合溶剤に溶解し、脱水した後、
沃化バリウム、沃化ナトリウムなどのアルカリ金属もし
くはアルカリ土類金属のハロゲン化物またはブソイドハ
ロゲニドと反応させ、ＳＡＭを脱メチル化してＳＡＨを
製造する方法（５ 特公昭４Ｆ＝＊　−８７５８６号公報参照）などが知ら
れている。Biol, (:hem,, Vol, 289.pI),
1551-1556 (1964)), (51sA
Formate, acetate, perchlorate, hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide salt, etc. of M After dissolving in mixed solvent and dehydrating,
A method for producing SAH by demethylating SAM by reacting it with an alkali metal or alkaline earth metal halide such as barium iodide or sodium iodide or a butoid halide (5 Japanese Patent Publication No. 4F=*-87586) ) are known.

しかしながら、（１）の方法は、液体アンモニアを使用
するため、反応系を高圧、低温に保たなければならず、
また、乾燥窒素ガス中で反応するなど特殊な設備および
条件を必要とする。さらに、原料化合物の保護および生
成物の脱保護などの工程が必要であり、工業的生産には
適さない方法である。（２）の方法は、酵母菌体中のＳ
ＡＨが微量て、効率が悪く、また、抽出液からのＳＡＨ
の分離が困難である。］３）の方法は、動物の肝臓から
抽出した酵素を使用するため、工業的生産には採用てき
ない。（４）の方法は、酵母菌体から酵素を抽出する８
工程が煩雑であり、収率も悪い。（５）の方法は、上記
の方法に比べると現実的な方法であるが、反応を゛無水
の極性有機溶媒中で行う必要があり、本来。However, since method (1) uses liquid ammonia, the reaction system must be kept at high pressure and low temperature.
In addition, special equipment and conditions are required, such as reaction in dry nitrogen gas. Furthermore, steps such as protection of the raw material compound and deprotection of the product are required, making the method unsuitable for industrial production. Method (2) is based on S in yeast cells.
There is a small amount of AH, the efficiency is poor, and SAH from the extract
is difficult to separate. The method 3) cannot be used for industrial production because it uses enzymes extracted from animal livers. Method (4) involves extracting enzymes from yeast cells.
The process is complicated and the yield is poor. Method (5) is a more realistic method than the above method, but the reaction must be carried out in an anhydrous polar organic solvent.

水との親和性が強いＳＡＭの溶液を脱水するための複雑
な工程が必要となる。また、このため原料となるＳＡＭ
の塩の形態も限られる。A complicated process is required to dehydrate a solution of SAM, which has a strong affinity for water. In addition, for this reason, the raw material SAM
The form of the salt is also limited.

本発明者らは、これら従来技術の欠点を克服し、容易に
入手できるＳＡＭを原料とし、取扱いの容易な反応試薬
を使用し、水溶液中で簡単な設備および比較的温和な条
件で反応することにより、従段 未決に比べ、格榊の収率てＳＡＨを製造することに成功
し、本発明を完成した。The present inventors have overcome the drawbacks of these conventional techniques, used easily available SAM as a raw material, used easy-to-handle reaction reagents, and carried out the reaction in an aqueous solution with simple equipment and relatively mild conditions. As a result, we succeeded in producing SAH with a higher yield than the previous method, and completed the present invention.

本発明は、ＳＡＭの脱メチル化によってＳＡＷを製造す
るに際し、ＳＡＭの水溶性塩を゛水溶液中でチオ硫酸塩
、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩またはピロ亜硫酸塩と反応さ
せて脱メチル化することを特徴とするＳＡＨの製造法を
提供するものである、本発明において原料として使用さ
れるＳＡＭは水溶性の塩であればよく、特定の塩に限定
されない。たとえば、塩酸塩、硫酸塩、沃化水素酸塩、
臭化水素酸塩、りん酸塩、過塩素酸塩などの無機酸塩、
またはギ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、≠７酒石酸塩、リ
ンゴ酸塩、コハク酸塩、有機スルホン酸塩（たとえば、
トルエンスルホン酸塩など）、ヌクレオシド硫酸エステ
ル塩、糖硫酸エステル塩などの有機酸塩などいずれも使
用できる。またＳＡＭの塩は粗精製のものであってもよ
く、たとえば酵母抽出液からの部分精製物であってもよ
い。In producing SAW by demethylation of SAM, the present invention involves demethylating a water-soluble salt of SAM with thiosulfate, sulfite, bisulfite or pyrosulfite in an aqueous solution. SAM used as a raw material in the present invention, which provides a characteristic method for producing SAH, may be any water-soluble salt and is not limited to a specific salt. For example, hydrochloride, sulfate, hydroiodide,
inorganic acid salts such as hydrobromide, phosphate, perchlorate;
or formates, acetates, citrates, ≠7tartrates, malates, succinates, organic sulfonates (e.g.
Toluene sulfonate, etc.), organic acid salts such as nucleoside sulfate ester salts, sugar sulfate ester salts, etc. can be used. Further, the SAM salt may be crudely purified, for example, a partially purified product from yeast extract.

脱メチル化反応の反応試薬としてはチオ硫酸ナトリウム
、チオ硫酸アンモニウム、チオ硫酸カリウム、チオ硫酸
カルシウム、チオ硫酸マグネシウムなどのチオ硫酸塩、
亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸リチウム、
亜硫酸アンモニウムなどの亜硫酸塩、亜硫酸水素ナトリ
ウム、亜硫酸水素カリウムなどの亜硫酸水素塩、または
ピロ亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウムなどのピロ
亜硫酸塩が挙げられる。As reaction reagents for the demethylation reaction, thiosulfates such as sodium thiosulfate, ammonium thiosulfate, potassium thiosulfate, calcium thiosulfate, and magnesium thiosulfate;
Sodium sulfite, potassium sulfite, lithium sulfite,
Examples include sulfites such as ammonium sulfite, hydrogen sulfites such as sodium hydrogen sulfite and potassium hydrogen sulfite, and pyrosulfites such as sodium pyrosulfite and potassium pyrosulfite.

本発明の反応は水溶液中で行なわれる。反応を水溶液中
で行うことにより、従来技術Ｊζ比へて原料選択の範囲
が広がり、反応操作および精製操作が簡単となるなど種
々の利点が生じた。反応条件は特＋（限定されないが、
実用的条件はｐＨ１，０〜７．ｏ。The reaction of the present invention is carried out in an aqueous solution. By carrying out the reaction in an aqueous solution, various advantages such as a wider range of raw material selection than the Jζ ratio of the prior art and simplification of reaction and purification operations were produced. The reaction conditions are specified (but not limited to)
Practical conditions are pH 1.0-7. o.

温度は室温〜６０℃である。すなわち、ｐＨが低すぎる
場合または温度が低すぎる場合には反応は好適に進行せ
ず、ｐＨが高すぎる場合または温度が高すぎる場合には
ＳＡＭの分解、物であるメチルチオアデノシンおよびア
デニンが増加し、ＳＡＨの収率が低下する。好適な反応
条件はｐＨ８〜６、温度３０〜５０℃である。反応試薬
の量も特に限定されないがＳＡＭの塩に対して１０倍当
量以下、好ましくは２〜５倍当量を使用すれば経済的で
ある。The temperature is room temperature to 60°C. That is, if the pH is too low or the temperature is too low, the reaction will not proceed properly, and if the pH is too high or the temperature is too high, SAM will decompose and the products methylthioadenosine and adenine will increase. , the yield of SAH decreases. Suitable reaction conditions are pH 8-6 and temperature 30-50°C. The amount of the reaction reagent is also not particularly limited, but it is economical to use an amount of 10 times the equivalent or less, preferably 2 to 5 times the equivalent of the SAM salt.

反応液からのＳＡＨの分離精製は常法により好適に行な
われる。すなわち、活性炭吸着法、弱酸性陽イオン交換
樹脂、強酸性陽イオン交換樹脂などによるイオン交換ク
ロマトグラフ法、有機溶媒、温度差などを利用した結晶
化法など、その他ＳＡＨの精製に通常利用される方法は
いずれも本発明における反応液からのＳＡＨの分離精製
に適宜採用される。Separation and purification of SAH from the reaction solution is suitably carried out by conventional methods. That is, activated carbon adsorption method, ion exchange chromatography method using weakly acidic cation exchange resin, strong acid cation exchange resin, etc., crystallization method using organic solvent, temperature difference, etc., and other methods commonly used to purify SAH. Any of these methods can be appropriately employed for separating and purifying SAH from the reaction solution in the present invention.

以下、本発明を実施例によって具体的に説明するが、本
発明はこれに限定されるものではない。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be specifically explained with reference to Examples, but the present invention is not limited thereto.

実施例１ 粗精製されたＳＡＭ硫酸塩５０　ｇ（ＳＡＭ純度５８．
４％）を水４００　ｍｌに溶解し、チオ硫酸ナトリウム
５８９を添加した後、水酸化ナトリウムで１）Ｈを４．
５に調整した。この水溶液を５０°Ｃで撹拌しながら７
時間反応を行った。Example 1 50 g of crudely purified SAM sulfate (SAM purity 58.
4%) in 400 ml of water, and after adding 589 ml of sodium thiosulfate, 1)H was dissolved in 4% with sodium hydroxide.
Adjusted to 5. While stirring this aqueous solution at 50°C,
A time reaction was performed.

反応液を濾過後、１０００　ｍｌに希釈してダイヤイオ
ンＷＫ−２０（商品名、三菱化成工業■製）Ｈ型５００
　ｍｌに１０００ｇ／／時間で吸着した。水洗後、００
１Ｎ塩酸で溶出し、ＩＮ水酸化ナトリウムで中和後、減
圧下で１５０　ｍｌに濃縮し、エタノール１０１００Ｏ
を加えて一夜冷却放置し、ＳＡＨの結晶を得た。この結
晶を少量の氷水で洗浄後、熱水より再結晶させ、ＳＡＨ
・２　Ｈ２Ｏの結晶を２４．９ｇ得た（ＳＡＭよりの理
論モル収率８１．１９６）。After filtering the reaction solution, it was diluted to 1000 ml and diluted with Diaion WK-20 (trade name, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) H type 500.
ml at a rate of 1000 g/hour. After washing with water, 00
Elute with 1N hydrochloric acid, neutralize with IN sodium hydroxide, concentrate to 150 ml under reduced pressure, and add ethanol 10100O
was added and left to cool overnight to obtain crystals of SAH. After washing the crystals with a small amount of ice water, they were recrystallized from hot water and SAH
24.9 g of 2 H2O crystals were obtained (theoretical molar yield from SAM: 81.196).

実施例２ ジュレンクツ培地（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　（ｈｅｍ、　、
　Ｖｏｌ、　２２９　。Example 2 Jurenkz medium (J, Biol, (hem, ,
Vol, 229.

ｐ、　１０８７　（１９５７）参照）で３０°Ｃｌ２Ｏ
時間培養した市販パン酵母（オリエンタル酵母工業（抹
製）１．０＃よりＩＮ塩酸で抽出して中和後、Ｈ型に調
整したダイヤイオンＷＫ−，１０（商品名。p, 1087 (1957)) at 30°Cl2O
Diaion WK-, 10 (trade name) was extracted from commercially available baker's yeast (Oriental Yeast Kogyo Co., Ltd. (Maga) 1.0#) cultured for a period of time with IN hydrochloric acid, neutralized, and adjusted to H type.

三菱化成工業（株制）１０１１こ吸着、水洗後、０１Ｎ
塩酸で溶出し、９．４９のＳＡＭを塩酸塩として含んだ
溶液２０ｅを得た。この溶液をｐＨ５，０に調整し、チ
オ硫酸ナトリウム２００ｑ添加後、４００Ｃて１０時間
撹拌放置した。Mitsubishi Chemical Industries, Ltd. 1011 adsorption, after washing with water, 01N
Elution was carried out with hydrochloric acid to obtain a solution 20e containing 9.49 SAM as a hydrochloride. This solution was adjusted to pH 5.0, and after adding 200q of sodium thiosulfate, it was left stirring at 400C for 10 hours.

この溶液を８００　ｍｌの活性炭カラムに通し、蒸留水
で水洗後、エタノール−水−濃アンモニア（５０：５０
　：１）で、溶出し、２５７ｎｍの紫外線吸収画分８０
００　ｍｌを得た。この溶液を２０　ｍｌに濃縮後、中
和して一夜０８Ｃで放置してＳＡＨを析出させた。結晶
を濾過分離し、少量の氷水で洗浄後、熱水より再結晶さ
せてＳＡＨ・２　Ｈ２Ｏの結晶６．５９を得た（ＳＡＭ
よりの理論モル収率６７．３％）。This solution was passed through an 800 ml activated carbon column, washed with distilled water, and then mixed with ethanol-water-concentrated ammonia (50:50).
:1), eluted, 257 nm ultraviolet absorption fraction 80
00 ml was obtained. After concentrating this solution to 20 ml, it was neutralized and left overnight at 08C to precipitate SAH. The crystals were separated by filtration, washed with a small amount of ice water, and then recrystallized from hot water to obtain 6.59 crystals of SAH.2H2O (SAM
(theoretical molar yield of 67.3%).

実施例８ 粗精製されたＳＡＭ硫酸塩１０ｇ（ＳＡＭ純度５８６４
％）を１００　ｍｌの水に溶解後、チオ硫酸アンモニウ
ム１２２ｇを添加し、水酸化ナトリウムでｐＨを４５１
こ調整後、５０°Ｃで７時間撹拌反応させた後、実施例
１と同様番こ精製してＳＡＨ・２Ｈ２０の結晶４．８ｇ
を得た（ＳＡＭよりの理論収率７８％）。Example 8 10 g of crudely purified SAM sulfate (SAM purity 5864
%) in 100 ml of water, 122 g of ammonium thiosulfate was added, and the pH was adjusted to 451 with sodium hydroxide.
After this adjustment, the reaction was stirred at 50°C for 7 hours, and then purified in the same manner as in Example 1 to obtain 4.8 g of crystals of SAH・2H20.
(78% theoretical yield from SAM).

実施例４ 粗精製されたＳＡＭ硫酸塩１０ｇ（ＳＡＭ純度５８４％
）を１００　ｍｌの水に溶解した後、亜硫酸ナトリウム
５．５８ｇを添加し、水酸化ナトリウムでｐＨを５．０
に調整後、５０’Ｃて６時間撹拌した後、実施例１と同
様に精製してＳＡＨ・２Ｈ２０の結晶を２．１ｇ得た（
ＳＡＭよりの理論モル収率８４．０％）。Example 4 10 g of crudely purified SAM sulfate (SAM purity 584%)
) was dissolved in 100 ml of water, 5.58 g of sodium sulfite was added, and the pH was adjusted to 5.0 with sodium hydroxide.
After adjusting to
(Theoretical molar yield from SAM 84.0%).

特許出願人　（６７７）ヤマサ醤油株式会社１０１Patent applicant (677) Yamasa Soy Sauce Co., Ltd. 101

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] Ｓ−アデノシル−し−メチオニンの脱メチル化によって
Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシスティンを製造するに際し
、Ｓ−アデノシル−し−メチオニンの水溶性塩を水溶液
中でチオ硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩またはピロ亜
硫酸塩と反応させて脱メチル化することを特徴とするＳ
−アゾノンルーム−ホモシスティンの製造法。When producing S-adenosyl-L-homocysteine by demethylation of S-adenosyl-methionine, the water-soluble salt of S-adenosyl-methionine is converted into thiosulfate, sulfite, and bisulfite in an aqueous solution. or S characterized by demethylation by reaction with pyrosulfite
- Azononroom - Method for producing homocystine.