JPS5841850A - Peptide for measuring human chorionic gonadotropic hormone - Google Patents

Abstract

NEW MATERIAL:A peptide shown by the formulaI(X is single bond or -Asp- Pro-Arg-Phe-) or its salt. EXAMPLE:A compound shown by the formulaI. USE:A peptide for measuring human chorionic gonadotropic hormone (hCG). Enabling early detection and diagonosis of pregnancy, heterotopic pregnancy, choriocarcinoma, etc. PROCESS:The individual amino acids or lower peptides are condensed in the order of the amino acids of the compound shown by the formulaI, and the removal of protecting group is repeated. At the final step of the condensation reaction, the protecting group of the functional group of a side chain is eliminated, to give the compound shown by the formulaI. Various kinds of protecting groups easily removable by hydrolysis, acidolysis, reduction, aminolysis, etc. are used. Azide process, active ester process, and carbodiimide process are preferable as the condensation.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒトじゆう電性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）
活性の測定用ペプチドに関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to the use of human gonadotropin (hCG).
This invention relates to peptides for measuring activity.

さらに詳しくは、本発明は、式 ％式％ ［１］ （式中、Ｘは単結合または−Ａｓｐ　−Ｐｒｏ　−Ａｒ
ｇ　−■５ Ｐｈｅ−基を示す）で表わされるペプチドまたはその塩
である。More specifically, the present invention provides the formula % formula % [1] (wherein, X is a single bond or -Asp -Pro -Ar
g -■5 Phe- group) or a salt thereof.

ｈＯＧは糖蛋白であり、妊娠と共に胎盤より分泌され、
妊娠の維持に重要な役割を果している性ホルモンである
。このｈＯＧを定性または定量することにより妊娠の有
無、異所性妊娠、じゆう毛性性癌などの早期発見並びに
診断が可能となる。hOG is a glycoprotein that is secreted from the placenta during pregnancy.
It is a sex hormone that plays an important role in maintaining pregnancy. By qualitatively or quantitatively measuring hOG, it becomes possible to detect and diagnose the presence or absence of pregnancy, ectopic pregnancy, hair cancer, etc. at an early stage.

しかしながら、性腺刺激ホルモンには黄体形成ホルモン
（Ｌ　Ｈ）　、ｌｌｌ刺激ホルモン（ＦＳＨ）及びＣＧ
があり、その分子構造は類似しており、糖蛋白である。However, gonadotropins include luteinizing hormone (LH), ll-stimulating hormone (FSH), and CG.
have a similar molecular structure and are glycoproteins.

しかもα鎖、揚鍋の２種のサブユニ１ツトからなり、特
にα鎖は交換しても活性に変化がない程分子構造的に類
似している。３鎖は各々の性腺刺激ホルモンにより特異
的であるが、ＬＨのβ鎖とＣＧのβ鎖とは類似している
。たソし、ＣＧβ鎖のＣ末端近辺のアミノ酸組成がＬＨ
のβ鎖とは大きく異なっており、禅ってＣＧβ鎖のＣ末
端近辺を認識する測定系が出現１れば、他の性腺刺激ホ
ルモ□ン、特にＬＨと全く交叉しない信頼性の高いＣＧ
測定系が可能となる。Moreover, it consists of two subunits, the α chain and the frying pan, and the α chain in particular is so similar in molecular structure that there is no change in activity even if it is exchanged. Although the three chains are more specific for each gonadotropin, the β-chains of LH and CG are similar. However, the amino acid composition near the C-terminus of the CGβ chain is LH.
If a measurement system that recognizes the C-terminus of the CG β chain emerges, it will be possible to detect highly reliable CG that does not cross at all with other gonadotropin hormones, especially LH.
measurement system becomes possible.

本発明は、上記に着目して完成されたものであり、式〔
Ｉ〕で表わされる本ペプチドはｈｃＧの測定系のための
ラジオ゛イムノアッセイ用の標識試薬として有用である
。The present invention was completed by paying attention to the above, and is based on the formula [
The present peptide represented by I] is useful as a labeling reagent for radioimmunoassay for hcG measurement system.

本発明のペプチド［１）は、式〔１〕で示されるアミノ
酸順序に個々のアミノ酸または低級ペプチドを縮合して
構成せしめ、縮合反応の最終段階で側鎖の官能基の保護
基を脱離することにより得られる。縮合反応自体はペプ
チド合成のための常法手段に従って、保護基の着脱、縮
合反応を繰り返すことにより行なわれる。即ち、本目的
化合物の原料ならびにすべその中間体の製造において使
用される各種保護基はペプチド合成で既知なもの、従っ
て加水分解、酸分解、還元、アミツリシスまたはヒドラ
ジツリシスのような既知手段によって容易に脱離するこ
とのできる保護基が用いられる。The peptide [1) of the present invention is constructed by condensing individual amino acids or lower peptides in the amino acid order represented by formula [1], and removing the protective group of the functional group of the side chain in the final step of the condensation reaction. It can be obtained by The condensation reaction itself is carried out by repeating the attachment and detachment of a protecting group and the condensation reaction in accordance with conventional methods for peptide synthesis. That is, the various protecting groups used in the production of the raw materials for the target compound and all its intermediates are those known in peptide synthesis, and therefore can be easily removed by known means such as hydrolysis, acidolysis, reduction, amitolysis, or hydrazitolysis. A protecting group that can be removed is used.

例えば、アミノ基に使用する保護基としては、ホルミル
基、トリフルオロアセチル基、フタロイル基、ベンゼン
スルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基、ｏ−ニトロ
フェニルスルフェニル基、２．４−ジニトロフェニルス
ルフェニル基、２．４−ジニトロフェニルスルフェニル
基などのアシル基、ベンジル基、ジフェニルメチル基、
トリフェニルメチル基（こたらの基は場合によっては０
−メトキシ基、ｐ−メトキシ基などの低級アルコキシ基
によって置換されている）などのアラルキル基、ベンジ
ルオキシカルボニル基、ｏ−７′ロモベンジルオキシカ
ルポニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、
ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−クロロベ
ンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシ
カルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル
基、ｐ−フェニルアゾ−ベンジルオキシカルボニル基、
ｐ’−（ｐｌ−メトキシフェニルアゾ）−ベンジルオキ
シカルボニル基ナトのベンジルオキシカルボニル基、シ
クロペンチルオキシカルボニル基、トリクロロエチルオ
キシカルボニル基、を−一アミルオキシカルボニル基、
ｔ−ブトキシカルボニル基、ジインプロピルメトキシカ
ルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２−フェ
ニル−インプロポキンカルボニル基、２−トリル−イソ
プロポキシカルボニル基、２−ｐ−ジフェニルーイソプ
ロポキシカルポニル基などのアラルキルオキ−ジカルボ
ニル基などがある。またこれらアミノ基をベンゾイルア
セトン、アセチルアセトン、ジメドンなどの１゜３−ジ
ケトンと反応させることによって得られるエナミンの形
成により保護することができる。For example, protective groups used for amino groups include formyl group, trifluoroacetyl group, phthaloyl group, benzenesulfonyl group, p-toluenesulfonyl group, o-nitrophenylsulfenyl group, and 2,4-dinitrophenylsulfenyl group. , acyl groups such as 2.4-dinitrophenylsulfenyl groups, benzyl groups, diphenylmethyl groups,
Triphenylmethyl group (Kodara group is 0 in some cases)
- aralkyl groups such as (substituted by lower alkoxy groups such as methoxy group, p-methoxy group), benzyloxycarbonyl group, o-7' lomobenzyloxycarbonyl group, p-bromobenzyloxycarbonyl group,
o-chlorobenzyloxycarbonyl group, p-chlorobenzyloxycarbonyl group, p-nitrobenzyloxycarbonyl group, p-methoxybenzyloxycarbonyl group, p-phenylazo-benzyloxycarbonyl group,
p'-(pl-methoxyphenylazo)-benzyloxycarbonyl group, cyclopentyloxycarbonyl group, trichloroethyloxycarbonyl group, -monoamyloxycarbonyl group,
Aliphatic oxycarbonyl groups such as t-butoxycarbonyl group and diimpropylmethoxycarbonyl group, aralkyl groups such as 2-phenyl-impropoquine carbonyl group, 2-tolyl-isopropoxycarbonyl group, and 2-p-diphenyl-isopropoxycarbonyl group Examples include oxy-dicarbonyl groups. These amino groups can also be protected by the formation of enamines obtained by reaction with 1°3-diketones such as benzoylacetone, acetylacetone, dimedone and the like.

カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形成または
エステル化によって保護される。すなわちアミド基は３
．４−ジメトキシベンジル基、ビス−（ｐ−メトキシフ
ェニル）メチル基などによって置換される。ヒドラチド
基はベンジルオキシカルボニル基、トリクロロエチルオ
キシカルボニル基、トリフルオロアセチル基、ｔ−ブト
キシカルボニル基、トリチル基、２−ｐ−ジフェニル−
インプロポキシカルボニル基などによって置換される。Carboxyl groups are protected by amide formation, hydratide formation or esterification. That is, the amide group is 3
．． Substituted with 4-dimethoxybenzyl group, bis-(p-methoxyphenyl)methyl group, etc. Hydratide group is benzyloxycarbonyl group, trichloroethyloxycarbonyl group, trifluoroacetyl group, t-butoxycarbonyl group, trityl group, 2-p-diphenyl-
Substituted with impropoxycarbonyl group, etc.

エステル基はメタノール、エタノール、１−ブタノール
、シアンメチルアルコールなどのアルカノール、ベンジ
ルアルコール、ｐ−ブロモベンジルアルコール、ｐ−ク
ロロベンジルアルコール、２．６−シクロロベンジルア
ルコール、ｐ−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニト
ロベンジルアルコール、２，４１６−ドリメチルベ／ジ
ルアルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベンゾイル
メチルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイルメチルアルコ
ール、ｐ−クロロベンゾイルメチルアルコールなどのア
ルカノール、２，４．６−トリクロロフェノール、２，
４．５−トリクロロフェノール、ペンタクロロフェノー
ル、ｐ−ニトロフェノール、２．４−ジニトロフェノー
ル、ｐ−シアンフェノール、ｐ−メタンスルホニルフェ
ノールなどのフェノ、−ル、チオフェノール、チオクレ
ゾール、ｐ−ニトロチオフェノールなどのチオフェノー
ルなどによって置換される。Ester groups include alkanols such as methanol, ethanol, 1-butanol, cyan methyl alcohol, benzyl alcohol, p-bromobenzyl alcohol, p-chlorobenzyl alcohol, 2,6-cyclobenzyl alcohol, p-methoxybenzyl alcohol, p- Alkanols such as nitrobenzyl alcohol, 2,416-drimethylbenzyl alcohol, benzhydryl alcohol, benzoylmethyl alcohol, p-bromobenzoylmethyl alcohol, p-chlorobenzoylmethyl alcohol, 2,4.6-trichlorophenol, 2,
Phenols such as 4.5-trichlorophenol, pentachlorophenol, p-nitrophenol, 2.4-dinitrophenol, p-cyanophenol, p-methanesulfonylphenol, thiophenol, thiocresol, p-nitrothio Substituted by thiophenols such as phenol.

前記チロシン、セリンおよびスレオニンの水酸基は、例
えばエステル化またはエーテル化によって保護すること
ができる。このエステル化に適する基としては例え−ば
アセチル基などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基な
どのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エチル
オキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基である
。またエーテル化に適する基としては、例えばベンジル
基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである
。これら水酸基の保護には２．２．２−）リフルオロ−
１−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル基、２．
２．２−トリフルオロ−１−ベンジルオキシカルボニル
アミノエチル基も適する。The hydroxyl groups of the tyrosine, serine and threonine can be protected, for example, by esterification or etherification. Groups suitable for this esterification include, for example, lower alkanoyl groups such as acetyl groups, aroyl groups such as benzoyl groups, and groups derived from carbonic acid such as benzyloxycarbonyl groups and ethyloxycarbonyl groups. Examples of groups suitable for etherification include benzyl group, tetrahydropyranyl group, and t-butyl group. 2.2.2-) Refluoro-
1-t-butyloxycarbonylaminoethyl group, 2.
Also suitable is the 2.2-trifluoro-1-benzyloxycarbonylaminoethyl group.

しかしながら、これら水酸基を、必ずしも保護する必要
はない。However, these hydroxyl groups do not necessarily need to be protected.

前記アルギニンのグアニジノ基中のアミノ基を保護する
のに使用する基と４しては、例えばニトロ基、トシル基
、ベンジルオキシカルボニル基などであるが、このグア
ニジノ基を必ずしも保護する必要はない。Examples of the group 4 used to protect the amino group in the guanidino group of arginine include a nitro group, a tosyl group, and a benzyloxycarbonyl group, but it is not necessary to protect this guanidino group.

本目的化合物〔ＩＪの合成においては、個々のアミノ酸
もしくは低級ペプチドの縮合は、例えば、保護されたα
−アミン基および活性化末端カルボキシル基をもつアミ
ノ酸またはペプチドと遊離α−アミン基および保護され
た末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプチドと
を反応させるか、あるいは活性化α−アミン基および保
護された末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプ
チドと遊離の末端カルボキシル基および保護さｈたα−
アミノ基をもつアミノ酸またはペプチドを反応させるこ
とにより実施することができる。In the synthesis of the target compound [IJ, the condensation of individual amino acids or lower peptides, for example,
- reacting an amino acid or peptide with an amine group and an activated terminal carboxyl group with an amino acid or peptide having a free α-amine group and a protected terminal carboxyl group, or an activated α-amine group and a protected terminal carboxyl group; An amino acid or peptide with a carboxyl group and a free terminal carboxyl group and a protected α-
This can be carried out by reacting amino acids or peptides having an amino group.

この場合のカルボキシル基は、ヒドラジドまたはＮ′−
保護ヒドラシト、例えばｔ−ブチルオキシカルボニルヒ
ドラジド、ベンジルオキシカルボニルヒドラジドなどか
ら亜硝酸で誘導したアジド、酸無水物、酸イミダゾリド
または活性エステル、例エバシアノメチルエステル、ｐ
−ニトロチオフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエ
ステル、２　＋　４−ジニトロフェニルエステル、２，
４．５−　）リクロロフェニルエステル、２．４．６−
　）　ＩＪ　クロロフェニルエステル、ペンタクロロフ
ェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシコノ・り酸イミドエス
テルなどに変換することによって、あるいはＮ、Ｎ’−
ジシクロへキシル−カルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ′
−３−ジメチルアミノプロピル−カルボジイミドなどの
カルボジイミド、Ｎ、Ｎ’−カルボニル−ジイミダゾー
ルまたはウッドワード反応剤などのイソオキサゾリウム
塩、ジフェニルホスホラジデートなどを使用して反応さ
せることによって活性化することができる。In this case, the carboxyl group is hydrazide or N'-
Azides, acid anhydrides, acid imidazolides or active esters derived from protected hydracites, such as t-butyloxycarbonyl hydrazide, benzyloxycarbonyl hydrazide, etc. with nitrous acid, such as evacyanomethyl ester, p
-nitrothiophenyl ester, p-nitrophenyl ester, 2 + 4-dinitrophenyl ester, 2,
4.5-) Lichlorophenyl ester, 2.4.6-
) IJ By converting into chlorophenyl ester, pentachlorophenyl ester, N-hydroxyconophosphate imide ester, or N,N'-
Dicyclohexyl-carbodiimide, N-ethyl-N'
- activated by reaction using a carbodiimide such as 3-dimethylaminopropyl-carbodiimide, an isoxazolium salt such as N,N'-carbonyl-diimidazole or a Woodward reagent, diphenylphosphorazidate, etc. be able to.

本発明において好ましい縮合方法は、アジド法、活性エ
ステル法およびカルボジイミド法である。Preferred condensation methods in the present invention are the azide method, active ester method and carbodiimide method.

縮合の各段階ではラセミ化が起らない方法またをまラセ
ミ化が最少になる方法を用いるのが望ましく、好ましく
は、アジド法、活性エステル法、ラセミ化防止試薬を添
加するカルボジイミド法、例えばＤＣＣ−ＨＯ８ｕを用
いるＷｕｎｓｃｈ法［Ｚ、Ｎａｔｕｒ−ｆｏｒｅｃｈ、
、　２１　ｂ　、　４２６　（１９６６）　］、ＤＣＣ
−ＨＱＢｔを用いるＧｅ　ｉ　ｇｅ　ｒ法ＣＣｈｅｍ、
Ｂｅｒ、＋　１０３　＋７８８　（１９７０）　〕、Ｗ
　Ｓ　ＣＩ　−ＨＯＳ　ｕを用いる東屋法［Ａｒｃｈ　
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、、　１４土、　
２３７　（１９７１）〕、ＷＳＣＩ−ＨＯＢｔを用いる
方法などと用いるのが適する。In each step of the condensation, it is desirable to use a method that does not cause racemization or a method that minimizes racemization, preferably an azide method, an active ester method, a carbodiimide method with the addition of a racemization preventing reagent, such as DCC. -Wunsch method using HO8u [Z, Natur-forech,
, 21b, 426 (1966)], DCC
- Ge i ger method CChem using HQBt,
Ber, +103 +788 (1970)], W
Arbor method using SCI-HOS u [Arch
Biochem, Biophys, 14th Sat.
237 (1971)] and a method using WSCI-HOBt.

縮合順序は式〔ＩＪで示されるアミノ酸順序であれば、
如何なる順序からも合成し得るが、Ｃ−末端側から順次
アミノ酸またはペプチドを連結させるのが好ましい。If the condensation order is the amino acid order represented by the formula [IJ,
Although it can be synthesized in any order, it is preferable to connect amino acids or peptides sequentially from the C-terminal side.

保護された［Ｔｙｒ　　］−ｈＯＧ［１１５−１４５］
は、］Ｃ−末端フラグメント１１６−１４５とチロシン
フラグメント１１５をアジド法により縮合するのが好ま
しい。Ｃ−末端フラグメント１１６−１４５は、Ｃ−末
端フラグメント１３０−１４５に順次フラグメント１２
７−１２９、フラグメント１２３−１２６、フラグメン
ト１２０−１２２およびフラグメント１１６−１１９を
アジド法により縮合するのが好ましい。Ｃ末端１３０−
１４５は、Ｃ−末端フラグメント１４ｏ−１４５に順次
１３９番目のアミノ酸、１３８番目のアミノ酸、フラグ
メント１３６−１３７　、フラグメント１３３−１３５
およびフラグメント１３０−１３２をアジド法により縮
合するのが好ましい。Protected [Tyr]-hOG[115-145]
] C-terminal fragment 116-145 and tyrosine fragment 115 are preferably condensed by the azide method. C-terminal fragments 116-145 sequentially add fragments 12 to C-terminal fragments 130-145.
7-129, fragment 123-126, fragment 120-122 and fragment 116-119 are preferably condensed by the azide method. C-terminal 130-
145 is the C-terminal fragment 14o-145, sequentially the 139th amino acid, the 138th amino acid, fragment 136-137, fragment 133-135
and fragments 130-132 are preferably condensed by the azide method.

保護された［Ｔｙｒ　　］　−ｈＣＧ　［１１１１４５
：］は、Ｃ−末端フラグメント１１２−１４５とチロシ
ンフラグメント１１１をアジド法により縮合させるのが
好ましい。Ｃ−末端フラグメント１１２−１４５は、前
記Ｃ−末端フラグイン）　１１６−１４５に順次フラグ
メント１１４−１１５およびフラグメント１１２−１１
３をアジド法により縮合するのが好ましい。Protected [Tyr]-hCG [111145
: ] is preferably obtained by condensing the C-terminal fragment 112-145 and the tyrosine fragment 111 by the azide method. C-terminal fragments 112-145 are the C-terminal fragments 116-145, sequentially fragments 114-115 and 112-11.
Preferably, 3 is condensed by the azide method.

上記のペプチドの合成に際して、その末端カルボキシル
基は、これを必らずしも保護しなければならないわけで
はない。例えば、アジド法、活性エステル法によって縮
合させる場合には、保護しなくてもよい。During the synthesis of the above peptides, the terminal carboxyl group does not necessarily have to be protected. For example, when condensation is carried out by an azide method or an active ester method, protection is not required.

しかしながら、これらの基を前記で述べた゛ようなエス
テル化によって、例えばメチルエステル、エチルエステ
ル、ｔ−ブチルエステル、ベンジルエステルなどで保護
することもできる。また、これらのエステル基は、例え
ばメチルエステル基はこれを希薄な水酸化ナトリウム水
溶液で***し、。However, these groups can also be protected by esterification as described above, for example with methyl esters, ethyl esters, t-butyl esters, benzyl esters and the like. In addition, these ester groups, for example, methyl ester groups, are split with a dilute aqueous sodium hydroxide solution.

あるいはヒドラチドまたはＮ′−保護ヒドラチドに変え
、ｔ−ブチルエステル基はこれをトリフルオロ酢酸で分
裂し、またベンジルエステルは無水弗化水素または水素
添加分解によって***することができる。Alternatively, the t-butyl ester group can be converted to a hydratide or N'-protected hydratide by cleavage with trifluoroacetic acid, and the benzyl ester can be cleaved by anhydrous hydrogen fluoride or hydrogenolysis.

これらペプチドのα−アミ７基は、ベンジルオキシカル
ボニル基で保護するのが適する。これらは水素添加分解
によって脱離される。The α-ami7 group of these peptides is suitably protected with a benzyloxycarbonyl group. These are eliminated by hydrogenolysis.

チロシン、セリンおよびスレオニンの水酸基は、必らず
しも保護するわけではないが、保護する場合には、ｔ−
ブチル基またはベンジル蒸で保護するのが適する。アス
パラギン酸の側鎖カルボキシル基は、必らずしも保護す
るわけではないが、保護する場合にはベンジルエステル
基で保護するのが適する。リジンのｅ−アミン基はｔ−
ブチルオキシカルボニル基で、アルギニンのグアニジノ
基中のアミノ基はニトロ基で保護するのが適する。The hydroxyl groups of tyrosine, serine, and threonine do not necessarily have to be protected, but if they are protected, t-
Protection with butyl or benzyl groups is suitable. The side chain carboxyl group of aspartic acid does not necessarily need to be protected, but if it is protected, it is suitable to protect it with a benzyl ester group. The e-amine group of lysine is t-
It is suitable to protect the amino group in the guanidino group of arginine with a butyloxycarbonyl group and a nitro group.

前記Ｃ−末端フラグメン）　１１６−１４５　、即ち保
護されたｈ（３Ｇ（１１６−１４５）およびＣ−末端フ
ラグメント１３０−１４５　、即ち保護されたｈｃａ（
１３０−１４５）’並びにそれらの中間フラグメントに
ついては、Ｃｈｅｍ、＋　Ｐｈａｒｍ、　Ｂｕｌｌ、＋
　２８　（９Ｌ　２７０７〜２７１３　（１９８０）　
、同２８　（９）、　２７１４〜２７１９　（１９８０
）に記載されている。said C-terminal fragment) 116-145, i.e. protected h(3G(116-145)) and C-terminal fragment 130-145, i.e. protected hca(
130-145)' and intermediate fragments thereof, Chem, + Pharm, Bull, +
28 (9L 2707-2713 (1980)
, 28 (9), 2714-2719 (1980
)It is described in.

こうして保護された［　Ｔｙ、ｒ　　］　−ｈ　ＣＧ　
（，１１５１１ −１４５：）または保護された［：　Ｔｙｒ　　］　−
ｈ　ＣＧ［１１１−１４５）が得られるが、これらの保
護基は、好ましくは酸分解、例えばトリフルオロ酢酸、
無水弗化水素などで一段階で脱離され、式ｍのペプチド
、即ちＣＴｙｒ　　］−ｈｃＧ［１１５−１４５）また
は［Ｔｙｒ　　１’−ｈ　ＯＧ　［１１１１４５）が得
られる。Thus protected [Ty,r]-hCG
(,11511 -145:) or protected [:Tyr] -
hCG[111-145) are obtained, these protecting groups are preferably removed by acid decomposition, e.g. trifluoroacetic acid,
Elimination in one step, such as with anhydrous hydrogen fluoride, yields a peptide of formula m, ie CTyr ]-hcG[115-145) or [Tyr 1'-h OG [111145).

上記のペプチドは、公知のペプチドを精製する手段によ
り分離、精製することができる。例えばセファデックス
Ｇ　−２５、セファデックスＧ−５０、ダウエックスｘ
１、セファデックスＬ　Ｈ−２０、カルボキシメチルセ
ルロースなどの担体を用いるカラムクロマトグラフィー
により行うことができる。The above-mentioned peptides can be separated and purified by known peptide purification methods. For example, Sephadex G-25, Sephadex G-50, Dowex x
1. It can be carried out by column chromatography using a carrier such as Sephadex L H-20 or carboxymethyl cellulose.

本目的化合物［１）は、竿の方法の条件により遊離塩基
または塩の形で得られる。通恰は塩酸の如き無機酸との
塩、酢酸の如き有機酸との塩の形で保存され得る。The objective compound [1) can be obtained in the form of a free base or a salt according to the conditions of Rod's method. The compound can be preserved in the form of a salt with an inorganic acid such as hydrochloric acid or a salt with an organic acid such as acetic acid.

尚、本明細書中に記載の略記号は次の意味を有する。In addition, the abbreviations described in this specification have the following meanings.

Ｔｙｒ　；　Ｌ−チロシン Ａｓｐ　；　Ｌ−アスパラギン酸 ｐｒｏ　；　Ｌ−プロリン Ａｒｇ　；　Ｌ−アルギニン ｐｈｅ　；　Ｌ−フェニルアラニン Ｇｌｎ　；　Ｌ−グルタミン ８ｅｒ　、　Ｌ−セリン Ｌｙｓ　；　Ｌ−リジン Ａｌａ　；　Ｌ−アラニン Ｌ’ｅｕ　；　Ｌ−ロイシン Ｇｌｙ　；グリシン Ｔｈｒ　；　Ｌ−スレオニン ＩＩｓ　；　Ｌ−インロイシン Ｂｏｃ；　ｔ−ブチルオキシカルボニルｚ；ベンジルオ
キシカルボニル ０Ｂｕｔ；　ｔ−ブチルエステル ０Ｂｚｌ　；ベンジルエステル ＯＮＰ　；　ｐ−二トロフェニルエステルＢｕｓｔ−プ
チル ＭｅＯＩｌ　、メタノール ＤＭＦ　；ジメチルホルムアミド ＣＩＨＣＡ３　；クロロホルム エーテル：ジエチルエーテル ＴＦＡ　；　）リフルオロ酢酸 Ｅｔ３Ｎ　；　）リエチルアミン ＤＣＣ、Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシル−カルボジイミド
ＨＯＢｔ　；　１−ヒドロキシペラジトリアゾール次に
実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に説明する。尚
、実施例中で使用した薄層クロマトグラフィー（ＴＬＯ
）の担体および展開溶媒は、特記しない限り次の通りで
ある。Tyr; L-tyrosine Asp; L-aspartic acid pro; L-proline Arg; L-arginine phe; L-phenylalanine Gln; L-glutamine 8er, L-serine Lys; L-lysine Ala; L-alanine L'eu; L-leucine Gly; glycine Thr; L-threonine IIs; L-inleucine Boc; t-butyloxycarbonylz; benzyloxycarbonyl 0But; t-butyl ester 0Bzl; benzyl ester ONP; p-nitrophenyl ester Bust-butyl MeOIl, methanol DMF; Dimethylformamide CIHCA3; Chloroform ether: Diethyl ether TFA;) Lifluoroacetic acid Et3N;) Liethylamine DCC, N,N'-dicyclohexyl-carbodiimide HOBt; 1-hydroxyperazitriazole Examples are given below. Now, production examples of the present invention will be specifically explained. In addition, thin layer chromatography (TLO) used in the examples
) The carrier and developing solvent are as follows unless otherwise specified.

担体；メルク社製シリカゲル６０ＧＡｒｔ７７３１展開
溶媒； Ａ　；　ＣＭＣＪ３−　ＭｅＯＨ−酢酸（９０，８：２
　）Ｂ　、　ＯＨＣノ３−　ＭｅＯＨ−水（８：３：１
　）の下層Ｃ：ブタノール−ピリジン−酢酸−水（４，
１’ｌ：２　）Ｄ：ブタノール−ピリジン−酢酸−水（
３０，２０＋６：２４　）Ｅ；ブタノール−酢酸−水（
４：１５）の上層Ｆ；ブタノールー酢酸エチルー酢酸−
水（１：１．１：１　）実施例　１ ［Ｔｙｒ　　］　−ｈｃＧ［１１５−１４５］　；Ｈ−
Ｔｙｒ　−Ｇｌｎ　−Ａｓｐ　−Ｓｅｒ　−Ｓｏｒ　−
Ｓｅｒ　−８ｅｒ　　−Ｌｙｓ　　−Ａｌａ　　−Ｐｒ
ｏ　　−Ｐｒｏ　　−Ｐｒｏ　　−５ｅｒ−Ｌｅｕ　−
Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ−Ｌ
ｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｙ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ａ
ｓｐ　−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ　−１１ｅ　−Ｌｅｕ、−Ｐｒ
ｏ　−Ｇｌｎ　−０Ｈ（１）フラグメント１１５−１４
５　；　Ｚ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｎ−Ａｓｐ　（０ＢＺＩ
　）−８ｅｒ−８ｅｒ−８ｅｒ−８ｅｒ−Ｌｙｓ　（Ｂ
ｏｃ　）’−Ａｌａ　−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　−
８ｅｒ　＝　Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　
−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−０１７−’
　Ｐ、ｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ａｓｐ　−Ｔｈｒ　（Ｂｕ　
　）−Ｐｒｏ　−ｌ１ｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ　−Ｑｌｎ−
ＯＢｕ　　［１〕 Ｚ　−Ｇｌｎ　−Ａｓｐ　（０Ｂｚｌ　）　−Ｓｅｒ　
−Ｓｅｒ　−５ｅｒ−８ｅｒ　−Ｌｙｓ　（Ｂｏｃ　）
　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　−Ｐｒ。Support: Silica gel 60GAt7731 manufactured by Merck & Co., Ltd. Developing solvent: A: CMCJ3-MeOH-acetic acid (90,8:2
) B, OHC-3-MeOH-water (8:3:1
) lower layer C: butanol-pyridine-acetic acid-water (4,
1'l:2) D: Butanol-pyridine-acetic acid-water (
30,20+6:24) E; Butanol-acetic acid-water (
4:15) Upper layer F: Butanol-ethyl acetate-acetic acid-
Water (1:1.1:1) Example 1 [Tyr] -hcG[115-145];H-
Tyr −Gln −Asp −Ser −Sor −
Ser -8er -Lys -Ala -Pr
o -Pro -Pro -5er-Leu -
Pro-Ser-Pro-Ser-Arg-L
eu -Pro -Gly -Pro -Ser -A
sp -Thr-Pro -11e -Leu, -Pr
o -Gln -0H (1) fragment 115-14
5; Z-Tyr-Gln-Asp (0BZI
)-8er-8er-8er-8er-Lys (B
oc)'-Ala-Pro-Pro-Pro-
8er = Leu -Pro -Ser -Pro
-Ser -Arg-Leu -Pro -017-'
P, ro -Ser -Asp -Thr (Bu
)-Pro -l1e-Leu-Pro -Qln-
OBu [1] Z -Gln -Asp (0Bzl) -Ser
-Ser -5er-8er -Lys (Boc)
-Ala-Pro-Pro-Pr.

−Ｓｅｒ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　
−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−０１７−
Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ａｓｐ　−Ｔｈｒ’　（Ｂｕｔ）
　−Ｐｒｏ　−ＩＩｓ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ
　−ＯＢｕ″〔２〕５０ｔｎ９を酢酸０．１ゴを含む４
０％含水エタノール５Ｔｎ１．に溶かし、パラジウム触
媒の存在下水素添加する。触媒をｐ去し、母液を減圧濃
縮する。残渣をＩＮ塩酸０．０３　ｆｆ１７！を含む水
に溶かし、凍結乾燥する。-Ser -Leu -Pro -Ser -Pro
-Ser -Arg -Leu -Pro -017-
Pro-Ser-Asp-Thr' (But)
-Pro -IIs -Leu -Pro -Gln
-OBu″ [2] 4 containing 50tn9 and 0.1g of acetic acid
0% aqueous ethanol 5Tn1. and hydrogenated in the presence of a palladium catalyst. The catalyst is removed and the mother liquor is concentrated under reduced pressure. The residue is IN hydrochloric acid 0.03 ff17! Dissolve in water containing water and lyophilize.

一方、Ｚ　−Ｔｙｒ　−ＮＨＮＨ２２３”１９をＩＮ塩
化水素／ジオキサン溶液０．１４　ＩＩ！７！を含むＤ
ＭＦＩ−に溶かし、これに−３０℃に冷却下亜硝酸イン
アミル０．０１−を加え、５分間攪拌した後、Ｅｔ３Ｎ
０．０２−を加え；アジド溶液を得る。On the other hand, Z -Tyr -NHNH223''19 was added to the D
0.01- of inamyl nitrite was added to this while cooling at -30°C, and after stirring for 5 minutes, Et3N was dissolved in MFI-.
Add 0.02- to obtain an azide solution.

上記の凍結乾燥品をＥｔ３　Ｎ　Ｏ，００６−を含むＤ
ＭＦｌ−に溶かし、これに水冷上上記で得たアジド溶液
を加え、２日間攪拌する。反応液をＤＭＦでセファデッ
クスＬ　Ｈ−２０を充填したカラム（１，２Ｘ１８０　
ｃｍ　）に通し、ＤＭＦで溶出する。溶出液は３ｔづつ
分画し；ＴＬＣにより追跡して４３〜４９番目のフラク
ションを集めて減圧濃縮する。残渣にエーテルを加え、
生じた白色粉末を遠心分離により集め、エーテルで洗浄
して［１１２８１１１９（収率５４，４％）を得る。D containing the above lyophilized product Et3N O,006-
The azide solution obtained above was added to the solution while cooling with water, and the mixture was stirred for 2 days. The reaction solution was mixed with DMF into a column packed with Sephadex L H-20 (1.2 x 180
cm) and elute with DMF. The eluate is fractionated into 3t portions; the 43rd to 49th fractions are collected and concentrated under reduced pressure by tracking by TLC. Add ether to the residue,
The resulting white powder is collected by centrifugation and washed with ether to obtain [11281119 (yield 54.4%).

融点、２７０℃（分解）、２１０℃で半融Ｔ　　Ｌ　Ｃ
；　　Ｒｆｇ　＝　０．７５元素分析ＣＣｌ６９　Ｈ２
５９Ｎ３７０５２　　ＨＣＪＪ　　１５Ｈ２０として３
０％　　　８％　　　Ｎ％ 計算値　　　５１．４　　７．４０　　１３．１測定値
　　　５１３　　７．０６　　１３．２アミノ酸分析〔
酸加水分解］　；　’Ａｓｐ　２．１１（２）、Ｔｈｒ
　０．９７（１）、Ｓｅｔ　７．３０（８）、Ｇｌｕ　
２．２８（２）、Ｐｒｏ　８．７０（９）、０１７１０
０（１）、Ａｌａ　１０６（１−）、１１１３１．０３
（１）、Ｌｅｕ　２．７６（３）、Ｔｙｒ　０．８０（
１）、Ｌｙｓ　１．０８（１）、Ａｒｇ　Ｏ，９７（１
）前記のペプチドフラグメント〔２〕の物性および製造
法はＣｈ６ｍ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｂｕｌｌ、、　−２８
（９）、２７１４〜２７１９　（１９８０）に記載され
ている。Melting point, 270℃ (decomposition), semi-molten at 210℃ TLC
; Rfg = 0.75 elemental analysis CCl69 H2
59N37052 HCJJ 15H20 as 3
0% 8% N% Calculated value 51.4 7.40 13.1 Measured value 513 7.06 13.2 Amino acid analysis [
Acid hydrolysis] ; 'Asp 2.11(2), Thr
0.97(1), Set 7.30(8), Glu
2.28(2), Pro 8.70(9), 01710
0(1), Ala 106(1-), 11131.03
(1), Leu 2.76 (3), Tyr 0.80 (
1), Lys 1.08(1), Arg O,97(1
) The physical properties and production method of the peptide fragment [2] are described in Ch6m, Pharm, Bull, -28
(9), 2714-2719 (1980).

（２）　［Ｔｙｒ　　）　−ｈｃＧ　［１１５−１４５
：）［２］　２０■に’ｆ’　Ｆ　Ａ　Ｏ，６ｍ、アニ
ソール０．１−を加え、室温で３時間放置する。反応液
にエーテルを加え、析出した沈澱物を遠心分離により集
める。(2) [Tyr)-hcG [115-145
:) [2] Add 'f' FA O, 6m and 0.1- of anisole to 20■ and leave it at room temperature for 3 hours. Ether is added to the reaction solution, and the precipitate is collected by centrifugation.

これをエーテルで洗浄し、ＫＯＨ上で減圧乾燥した後、
エタノール４−および５％酢酸４Ｉ１１７！を加え、パ
ラジウム触媒の存在下水素添加する。触媒を瀘去し、母
液を減圧濃縮する。残渣を水に溶かし、凍結乾燥してふ
わふわした粉末を得る。After washing this with ether and drying under reduced pressure over KOH,
Ethanol 4- and 5% acetic acid 4I117! is added and hydrogenated in the presence of a palladium catalyst. The catalyst is filtered off and the mother liquor is concentrated under reduced pressure. The residue is dissolved in water and lyophilized to obtain a fluffy powder.

この粉末を５％酢酸に溶かし、これを５％酢酸でセファ
デックスＧ−２５を充填したカラム（２，２Ｘ　１３０
　ｃｍ　）に通し、５％酢酸で溶出する。溶出液は４ｆ
づつ分画し、２７５　ｎｍの吸光度の測定により追跡し
て５８〜７０番目のフックシ菅ンを集め、減圧下で溶媒
を留去する。残渣を水に溶かし凍結乾燥して［Ｔｙｒ　
　１−（１１５−１４５］１７１１１９（収率８５．２
％）を得る。This powder was dissolved in 5% acetic acid and added to a column packed with Sephadex G-25 (2.2X 130
cm) and elute with 5% acetic acid. Eluate is 4f
The 58th to 70th hooks were collected by fractionation and tracking by measuring absorbance at 275 nm, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was dissolved in water and lyophilized [Tyr
1-(115-145]171119 (yield 85.2
%).

〔α）Ｄ−１６４，７°（０−０，２，水）Ｔ　ＬＣ；
　Ｒｒ　　−０，１３、Ｒｆ、　−０，１０アミノ酸分
析〔酸加水分解）　；　Ａｓｐ　１０１（２）、Ｔｈｒ
　０．９９（１）、８ｅｒ　７．００（８）、Ｇｌｕ　
ｊｌｌｌ（２）、Ｐｒｏ　、９．８２　（９）、Ｇ１７
１１）０（１）、Ａｌａ　１４）５（１）、１１ｅ　Ｏ
，９９（１）、１１ｅ　Ｏ，９９（１）、Ｌｅｕ　８．
１０（３）、Ｔｙｒ　Ｏ，８０（１）、Ｌｙｓ　１．０
２（１）、Ａｒｇ　１．００（１）　”実施例　２ ［Ｔｙｒ　　］−ｈＯＧ［１１１−１４５］；Ｈ−、Ｔ
ｙｒ　＝　Ａｓｐ　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ　−Ｐｈｅ　−
Ｇｌｎ　−Ａｓｐ　−８ｏｒ　−Ｓｅｒ　−８ｅｒ　−
Ｓｅｒ　−Ｌｙｓ−１Ａｌａ　７Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　−
Ｐｒｏ　−８ｅｒ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−８ｅｒ　−
Ｐｒｏ　−８ｅｒ　−Ａｒｇ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−
Ｇｌｙ　−Ｐｒｏ　−８ｅｒ　−−Ａｓｐ　−Ｔｈｒ　
−Ｐｒｏ　−ＩＩｓ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　
−０Ｈ （１）フラグメント１１４−１１５　；　Ｚ　−Ａｒｇ
、　（ＮＯ２）−Ｐｈｅ−ＮＨＮＨＢｏｃ　　［３） Ｚ　−Ｐｈｅ　−ＮＨＮＨＢｏｃ［Ｅ　Ｗｕｎｓｃｈ　
ａｎｄＧ、Ｗｅｎｄｌｂｅｒｇｅｒ。[α) D-164,7° (0-0,2, water) T LC;
Rr -0,13, Rf, -0,10 amino acid analysis [acid hydrolysis]; Asp 101(2), Thr
0.99(1), 8er 7.00(8), Glu
jllll (2), Pro, 9.82 (9), G17
11)0(1),Ala 14)5(1),11e O
, 99(1), 11e O, 99(1), Leu 8.
10(3), Tyr O, 80(1), Lys 1.0
2(1), Arg 1.00(1) "Example 2 [Tyr]-hOG[111-145]; H-, T
yr=Asp-Pro-Arg-Phe-
Gln -Asp -8or -Ser -8er -
Ser-Lys-1Ala 7Pro-Pro-
Pro -8er -Leu -Pro -8er -
Pro -8er -Arg -Leu -Pro -
Gly-Pro-8er--Asp-Thr
-Pro -IIs -Leu -Pro -Gln
-0H (1) Fragment 114-115; Z -Arg
, (NO2)-Phe-NHNHBoc[3) Z-Phe-NHNHBoc[E Wunsch
andG, Wendlberger.

Ｃｈｅｍ、　Ｂｅｒ、、　９７．２５０４　（１９６４
））　２．ＯｆからＰｄ触媒存在下で水素添加分解によ
り得られるＨ−Ｐｈｅ−ＮＨＮＨＢｏｃとＺ　−Ａｒｇ
（ＮＯ２）　　ＯＨ１，７ｆをＤＭＦ　２０−に溶かし
、これに水冷下ＤＣＣ！１．２ｆおよびＨＯＢｔＯ，９
ｆを加え、−夜攪拌す′る。反応後、析出した尿素誘導
体をｐ去し、Ｆ液を減圧濃縮する。残渣を酢酸エチール
で抽出′し、５％重曹水、１０％クエン酸水、水の順に
洗浄する。無水芒硝で°乾燥後、減圧濃縮する。残渣に
エーテルを迦゛え、生じた沈澱物をｐ取する。これを少
量のクロロホルムに溶かし、シリカゲルのカラムにチ゛
ヤージして３％メタノール含有クロロホルムによりクロ
マトグラフィーを行う。ＴＬＣでＩｔｆＡ＝０．４１付
近のフラクションを集めて減圧乾固して（３）　１．６
　ｔ　（収率４．４５％）を得る。Chem, Ber, 97.2504 (1964
)) 2. H-Phe-NHNHBoc and Z-Arg obtained from Of by hydrogenolysis in the presence of Pd catalyst
(NO2) Dissolve OH1.7f in DMF 20- and apply DCC under water cooling! 1.2f and HOBtO,9
Add f and stir overnight. After the reaction, the precipitated urea derivative is removed and the F solution is concentrated under reduced pressure. The residue was extracted with ethyl acetate and washed successively with 5% sodium bicarbonate solution, 10% citric acid solution, and water. After drying with anhydrous sodium sulfate, concentrate under reduced pressure. Add ether to the residue and collect the resulting precipitate. This was dissolved in a small amount of chloroform, charged to a silica gel column, and chromatographed using chloroform containing 3% methanol. Fractions around ItfA = 0.41 were collected by TLC and dried under reduced pressure (3) 1.6
t (yield 4.45%).

融点；　１２０−１２５℃ 〔α］Ｄ−２８，９２（ｃ　＝　１４）、、ＭｅＯＨ）
Ｔ　Ｌ　Ｃ；　ＲｒＡ＝　０．４１．　ＲｆＢ＝　０．
７９元素分析［Ｏｊｉ！８　Ｈ３８Ｎ８　ｏ８として〕
０％　　８％　　Ｎ％ 計算値　　　５４．７　　．６．２３　　１８．８測定
値　　　５４．５　　　＆２３　　１８．５（２）フラ
グメント１１４−１４５　；　Ｚ　−Ａｒｇ（ＮＯ２）
　−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ　−Ａｓｐ　−Ｓｏｒ　−Ｓｏｒ　
−Ｓｅｔ　−Ｓｏｒ　−Ｌｙｅ（Ｂｏｃ）　−Ａｌａ　
−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ｌｅｕ−
Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ　−
Ｌｅｕ　−Ｐｒ。Melting point; 120-125°C [α]D-28,92 (c = 14), MeOH)
TLC; RrA=0.41. RfB=0.
79 elemental analysis [Oji! 8 H38N8 o8]
0% 8% N% Calculated value 54.7. 6.23 18.8 Measured value 54.5 &23 18.5(2) Fragment 114-145; Z-Arg(NO2)
-Phe-Gln -Asp -Sor -Sor
-Set -Sor -Lye(Boc) -Ala
-Pro -Pro -Pro -Ser -Leu-
Pro-Ser-Pro-Ser-Arg-
Leu-Pr.

−Ｇｌｙ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ａｓｐ　−Ｔｈｒ（
Ｂｕ　）　−Ｐｒｏ　−Ｉｘｅ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　
−０１ｎ　−ＯＢｕ　　［４］Ｚ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（Ｏ
Ｂｚｌ）　−８ｅｒ　−Ｓｏｒ　−Ｓｅｒ　−８ｅｒ−
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ　−Ｓｏｒ　−Ｌｅｕ−Ｐｉｅ　−５ｅｒ−Ｐｒｏ
　−５ｏｒ７Ａ、ｒｇ−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｙ　
−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ａａｐ　−Ｔｈｒ（Ｂｕ　）　
−Ｐｌ；ｏ　−１１ｅ−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　
−ＯＢｕ　　［５：ｌにエタノール１〇−および５％酢
酸１０−を加えて溶解し、Ｐｄ触媒の存在下で水素添加
分解を行う。触媒を戸去し、ｐ液を減圧濃縮する。残渣
をＤＭＦ５−に溶がし、Ｅｔ３ＮでｐＨすに調節する。-Gly -Pro -Ser -Asp -Thr(
Bu) -Pro -Ixe -Leu -Pro
-01n -OBu [4]Z-Gln-Asp(O
Bzl) -8er -Sor -Ser -8er-
Lys(Boc) -Ala -Pro -Pro-P
ro -Sor -Leu-Pie -5er-Pro
-5or7A, rg-Leu -Pro -Gly
-Pro -Ser -Aap -Thr(Bu)
-Pl;o -11e-Leu -Pro -Gln
-OBu [5:l] is dissolved by adding 10-ethanol and 5% 10-acetic acid, and hydrogenolysis is performed in the presence of a Pd catalyst. The catalyst is removed and the p liquid is concentrated under reduced pressure. The residue is dissolved in DMF5- and the pH is adjusted with Et3N.

一方、［３］　３１６■にアニソール０．０５−および
ＴＦＡＩ−を加え、室温で４０分間放置した後、エーテ
ルを加えφ。生じた白色沈澱物を遠心分離により集め、
エーテルで洗浄した後、ＫＯＨ上で減圧乾燥す、る。こ
のヒドラジドをＤＭＦ４−に溶が゛し、これに−２０℃
に冷却下６．４Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液０．１６　
ｍｇを加えた後、次いで亜硝酸イソペンチル０．０７２
ｄを加える。５分後、反応液のｐＨをＥｔ３ＮＯ，１５
ｄでｐＨ：８に調節する。このアジド溶液を前記のｐＨ
調節したＤＭＦ溶液に加え、４℃で４８時間攪拌する。On the other hand, [3] Anisole 0.05- and TFAI- were added to 316■, left at room temperature for 40 minutes, and then ether was added to give φ. The resulting white precipitate was collected by centrifugation,
After washing with ether, dry under vacuum over KOH. Dissolve this hydrazide in DMF4- and add it to -20°C.
6.4N hydrogen chloride/dioxane solution under cooling to 0.16
After adding mg, then isopentyl nitrite 0.072
Add d. After 5 minutes, the pH of the reaction solution was adjusted to Et3NO, 15
Adjust the pH to 8 with d. This azide solution was adjusted to the above pH.
Add to the adjusted DMF solution and stir at 4°C for 48 hours.

反応混合物をＤＭＦで充填したセファデックスＬ　Ｈ−
２０のカラム（１，５Ｘ　１８０　ｃｍ　）に通し、Ｄ
ＭＦで流出液は３ｆづつ分画し、ＴＬＯで追跡して２５
−３０番目のフラクションを集めて減圧濃縮する。残渣
にエーテルを加え、生じた白色沈澱物を集める。との沈
澱物を前記と同じ方法でゲルｐ過して白色固形物３１０
　ｌ１１９（収率９４．７％）を得る。The reaction mixture was packed with DMF in Sephadex L H-
D
The effluent was fractionated into 3f fractions using MF and tracked using TLO.
-Collect the 30th fraction and concentrate under reduced pressure. Add ether to the residue and collect the resulting white precipitate. The precipitate was filtered through gel filtration in the same manner as above to obtain a white solid 310
1119 (yield 94.7%) is obtained.

これをできるだけ少量のブタノール−酢酸−水（４：１
：５）の上層液に溶かし、上記と同一溶媒で充填したシ
リカゲル（１３×３５　ｃｍ　）のカラムに通し、上記
と同一溶媒で溶出する。溶出液は３ｇづつ分画し、ＴＬ
Ｃにより追跡して１４−３３番目のフラクションを集め
て減圧濃縮する。残渣にエーテルを加え、生じた白色沈
澱物を遠心分離により集めて〔４〕２８７Ｉ１１９（収
率８７７％）を得る。Mix this with as little amount of butanol-acetic acid-water (4:1) as possible.
:5) Dissolve in the upper layer solution, pass through a column of silica gel (13 x 35 cm) packed with the same solvent as above, and elute with the same solvent as above. The eluate was fractionated into 3g portions and TL
The 14th to 33rd fractions are collected and concentrated under reduced pressure. Ether is added to the residue, and the resulting white precipitate is collected by centrifugation to obtain [4]287I119 (877% yield).

融点、１６０℃で湿潤、１８７℃で分解［α〕Ｄ　　６
３．０　（ｃ　＝、　０．２．ＤＭＦ　）ＴＬＣ；　Ｒ
ｆＡ＝０．２０ 元素分析ＣＣｖｒ５Ｈ２７ｏＮ４ｚ０５＋ＨＣＺ　　２
Ｈ２０として〕 ０％　１％　Ｎ％ 計算値　　　５８．４　　７．１５　　１５．０測定値
　　　５３．５２　　７．７２　　１５．３６アミノ酸
分析；　Ａｓｐ　ｊｔ０３（２）、　Ｔｈｒ　０．９５
（１）、５ｅｔ７．７７（８）、Ｇｌｕ　２．１７（２
）、Ｐｒｏ　８．９６（９）、Ｇｌｙ　１ｉＪＯ（Ｌ）
、Ａｌａ　１．０１’（１）、Ｉｌｅ　Ｏ，９３（１）
、Ｌｅｕ　２．９６（３）、Ｐｈｅ　１．３０（１）、
Ｌｙｅ　１．０５（１）、Ａｒｇ　ＩＪ３４（２）前記
のペプチドフラグメント〔５〕の物性は、Ｃｈａｍ、、
Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ　　、　２８（９）、　２７１４
〜２７１９（１９８０）に記載され、そのフラグメント
自体およびその中間フラグメントの製造法は同文献およ
び同誌、２８（９）　、　２７０７〜２７１３（１９８
０）に記載されている。Melting point, wet at 160°C, decomposed at 187°C [α]D 6
3.0 (c=, 0.2.DMF) TLC; R
fA=0.20 Elemental analysis CCvr5H27oN4z05+HCZ 2
As H20] 0% 1% N% Calculated value 58.4 7.15 15.0 Measured value 53.52 7.72 15.36 Amino acid analysis; Asp jt03 (2), Thr 0.95
(1), 5et7.77(8), Glu2.17(2
), Pro 8.96 (9), Gly 1iJO (L)
,Ala 1.01'(1),Ile O,93(1)
, Leu 2.96 (3), Phe 1.30 (1),
Lye 1.05 (1), Arg IJ34 (2) The physical properties of the above peptide fragment [5] are as follows: Cham.
Pharm, Bull, 28(9), 2714
-2719 (1980), and the method for producing the fragment itself and its intermediate fragments is described in the same document and the same journal, 28(9), 2707-2713 (1980).
0).

（３）フラグメント１１２−１１３　；　Ｚ　−Ａｓｐ
　（０Ｂｚｌ　）　−Ｐｒｏ　−ＮＨＮＨＢｏｃ　［６
） Ｚ　−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）　−０ＮＰ４ｆ３ｔとＨＰｒ
ｏ　−ＮＨＮＨＢｏｃ２．３ｆをＥｔ３Ｎ１．４−を含
むジオキサン２２ＩＩ＋７！に溶かし、室温で一夜攪拌
する。反応後、ジオキサンを減圧下留去し、残渣を酢酸
エチルに溶かした後、。１０％クエン酸水、５％重曹水
、水の順に洗浄する。(3) Fragment 112-113; Z-Asp
(0Bzl) -Pro -NHNHBoc [6
) Z -Asp(OBzl) -0NP4f3t and HPr
o -NHNHBoc2.3f to dioxane 22II+7 containing Et3N1.4-! and stir overnight at room temperature. After the reaction, dioxane was distilled off under reduced pressure, and the residue was dissolved in ethyl acetate. Wash with 10% citric acid solution, 5% sodium bicarbonate solution, and water in this order.

無水芒硝で乾燥後、減圧濃縮し、残渣に石油エーテルを
加える。生じた沈澱物を集め無定形粉末〔６〕４４５ｆ
（収率７８．２％）を得る。After drying with anhydrous sodium sulfate, it was concentrated under reduced pressure, and petroleum ether was added to the residue. Collect the resulting precipitate and amorphous powder [6] 445f
(yield 78.2%).

〔α］蟹−７８，９°（ｃ　＝　１．０．　ＭｅＯＨ）
ＴＬＣ；　Ｒｆ＝　０．４９、ＲｆＢ＝０．７９元素分
析［０２９Ｈ３６Ｎ４０Ｂとして〕０％　　１％　　Ｎ
％ 計算値　　　６１３　　６．３８　　９．９測定値　　
　６１２６．６０　　９．６（４）フラグメント１１２
−１４５　；　Ｚ　−Ａ８ｐ（ＯＢＺＩ）　−Ｐｒ。[α] Crab-78,9° (c = 1.0. MeOH)
TLC; Rf=0.49, RfB=0.79 Elemental analysis [as 029H36N40B] 0% 1% N
% Calculated value 613 6.38 9.9 Measured value
6126.60 9.6(4) Fragment 112
-145; Z-A8p(OBZI)-Pr.

−Ａｒｇ−Ｐｈｅ　−Ｇｉｎ　−Ａｓｐ　−８ｅｒ　−
Ｓｅｒ　−５ｅｒ−Ｓｅｒ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌ
ａ　−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　−８ｅｒ−Ｌｅｕ
　−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｐｒｏ　−８ｅｒ−Ａｒｇ　−Ｌ
ｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−８ｅｒ　−Ａｓｐ
−Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）−Ｐｒｏ　−１１ｅ　−Ｌｅ’ｕ　
−、Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　−ＯＢｕ　　［７］［４］　２
５０■にエタノール１０コおよび５％酢酸水１０ｍを加
えて溶解し、Ｐｄ触媒の存在下で水素添加分解を行う。-Arg-Phe -Gin -Asp -8er -
Ser-5er-Ser-Lys(Boc)-Al
a -Pro -Pro -Pro -8er-Leu
-Pro-8er-Pro -8er-Arg -L
eu -Pro -Gly-Pro-8er -Asp
-Thr(But)-Pro -11e -Le'u
-, Pro -Gln -OBu [7] [4] 2
10 parts of ethanol and 10 m of 5% acetic acid water were added to 50 ml of the solution to dissolve it, and hydrogenolysis was carried out in the presence of a Pd catalyst.

触媒を治去し、ｐ液を減圧濃縮する。The catalyst is removed and the p liquid is concentrated under reduced pressure.

残渣に０．１　Ｎ塩酸０．１９−を含む水を加え、凍結
乾燥する。得られたペプチドをＤＭＦ３ｍに溶がし、Ｅ
ｔ３ＮでＰＨ８に調節する。Water containing 0.19% of 0.1N hydrochloric acid is added to the residue and freeze-dried. The obtained peptide was dissolved in DMF3m and E
Adjust the pH to 8 with t3N.

一方、［６）　１８３■を６．４Ｎ塩化水素／ジオキサ
ン溶液０．２１−に溶かし、５分後、これにジオキサン
０．２−を加えた後、室温で３０分間放置する。次いで
ＤＭＦ５−を加え、−２０℃に冷却下亜硝酸インペンチ
ル０．０４５ｍを加える。５分後、Ｅｔ３Ｎで溶液のｐ
Ｈを８に調節した後、このアジド溶液を前記のｐＨ調節
したＤＭＦ溶液に加え、４℃で４８時間攪拌する。反応
混合物をＤＭＦで充填したセファデックスＧ−２５のカ
ラム（１，８Ｘ　１９（ｋｍ　）に通し、ＤＭＦで流出
する。流出液を３２づつ分画し、２３〜２９番目のフラ
クションを集めて減圧濃縮する。残渣にエーテルを加え
、生じた沈澱物を遠心分離により集めてＣ７’３２２６
■（収率８１．７％）を得る。On the other hand, [6] 183■ is dissolved in 6.4 N hydrogen chloride/dioxane solution (0.21 mm), and after 5 minutes, 0.2 mm of dioxane is added thereto, and the mixture is allowed to stand at room temperature for 30 minutes. Next, DMF5- is added, and 0.045 m of impentyl nitrite is added while cooling to -20°C. After 5 minutes, the p of the solution was reduced with Et3N.
After adjusting H to 8, this azide solution is added to the above pH-adjusted DMF solution and stirred at 4°C for 48 hours. The reaction mixture was passed through a Sephadex G-25 column (1,8 x 19 (km)) packed with DMF and eluted with DMF. The effluent was fractionated into 32 fractions, and the 23rd to 29th fractions were collected and concentrated under reduced pressure. Ether was added to the residue, and the resulting precipitate was collected by centrifugation.
(yield: 81.7%).

融点；　１９１　℃（分解）、１７８℃で半融を併なう
。Melting point: 191°C (decomposition), with half melting at 178°C.

［ａ：）Ｉ）−６９，５°（ｃ　＝　０．２．　ＤＭＦ
　）Ｔ　Ｌ　Ｃ；　　Ｒｆ　Ｂ＝　０．１９　、Ｒｆ　
ｃ　＝　０．５１元素分析ＣＣ！１９１　Ｈ２８９Ｎ４
３０５６２ＨＣＺ　１１Ｈ２０として〕　　　　／ ０％　　１％　　Ｎ％ 計算値　　　５２．７　　７．２５　　１＆８測定値　
　　５２．．４７．２０　　１３．８アミノ酸分析；　
Ａｓｐ　３２０（３）、’ｌ’ｈｒ　１．０２（１）、
５ｅｔ７．４１（８）、Ｇｌｕ　２．１２（２）、Ｐｒ
ｏ　１０．３８（１０）、Ｇ１７１．００　（１）、Ａ
ｌａ　１．０３（１）、Ｉ　ｒｅ　Ｏ，９３（１）、Ｌ
ｅｕ　２．８９（３）、Ｐｈｅ　１．１６（１）、Ｌｙ
ｓ　１．０８（１）、Ａｒｇ　１．９５（２）、ＮＨ３
２，９４（５）フラグメント（１１１１４５）　；　Ｚ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ（ＯＢＺＩ）　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ−
Ｐｈｅ　−Ｇｌｎ　’−Ａｓｐ　−５ｅｒ−Ｓｅｒ　−
８ｅｒ　−８ｅｒ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｐｒ
ｏ　−Ｐｒｏ　　−Ｐｒｏ　　−Ｓｅｔ　　−Ｌｅｕ　
−Ｐｒｏ　　−Ｓｅｔ　−Ｐｒｏ　−８ｅｒ　−Ａｒに
１−　Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−０１７−、Ｐｒｏ　−Ｓｅ
ｒ　−Ａｓｐ　−Ｔｈｒ（−Ｂｕ　）−Ｐｒｏ　−１１
ｅ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　−ＯＢｕ　　　［
８］ ［７］　５１’１９にエタノール２−および５％酢酸２
−を加えて溶解し、パラジウム触媒の存在下で水素添加
分解を１１時間行う。触媒をｐ去し、母液を減圧濃縮し
、残渣をＩＮ塩酸０．０１２−を含む水に溶かして凍結
乾燥してふわふわした粉末を得る。この粉末をＤＭｐｓ
’ｍに溶かし、Ｉｔ、　３　Ｎ　Ｏ，００３３−でｐＨ
８に調節す、る。[a:) I) -69,5° (c = 0.2.DMF
) T L C; Rf B= 0.19, Rf
c = 0.51 elemental analysis CC! 191 H289N4
As 30562HCZ 11H20] / 0% 1% N% Calculated value 52.7 7.25 1 & 8 measured value
52. ．． 47.20 13.8 Amino acid analysis;
Asp 320(3),'l'hr 1.02(1),
5et7.41(8), Glu 2.12(2), Pr
o 10.38 (10), G171.00 (1), A
la 1.03(1), I re O, 93(1), L
eu 2.89 (3), Phe 1.16 (1), Ly
s 1.08(1), Arg 1.95(2), NH3
2,94(5) fragment (111145); Z
-Tyr-Asp(OBZI) -Pro -Arg-
Phe-Gln'-Asp-5er-Ser-
8er-8er-Lys(Boc)-Ala-Pr
o -Pro -Pro -Set -Leu
-Pro -Set -Pro -8er -Ar to 1-Leu -Pro -017-, Pro -Se
r-Asp-Thr(-Bu)-Pro-11
e -Leu -Pro -Gln -OBu [
8] [7] Ethanol 2- and 5% acetic acid 2- at 51'19
- is added and dissolved, and hydrogenolysis is carried out for 11 hours in the presence of a palladium catalyst. The catalyst is removed, the mother liquor is concentrated under reduced pressure, and the residue is dissolved in water containing 0.012-IN hydrochloric acid and lyophilized to obtain a fluffy powder. DMps this powder
'm and pH it with It, 3N O,0033-
Adjust to 8.

一方、Ｚ　−Ｔｙｒ　−ＮＨＮＨｉ７７、ｌ　”９をＩ
Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液０．Ｏ６，７−を含むＤＭ
Ｆ３ｍに溶かし、これに−３０℃に冷却下亜硝酸インア
ミル０刀３３ｄを加え、１０分間攪拌した後、Ｂ　ｔ　
ｓＮ　Ｏ，０６６ａｔでｐＨ８に調節した後、このアジ
ド溶液を前記のｐＨ調節したＤＭＦ溶液に加え、水冷下
で２日間攪拌する。On the other hand, Z −Tyr −NHNHi77, l ”9 is I
N hydrogen chloride/dioxane solution 0. DM containing O6,7-
Dissolved in F3m, added 33d of inamyl nitrite while cooling to -30°C, and stirred for 10 minutes.
After adjusting the pH to 8 with sN O,066at, this azide solution is added to the above pH-adjusted DMF solution and stirred for 2 days under water cooling.

反応混合物をＤＭＦで充填したセファデックスＬＨ−２
０のカラム（１，６Ｘ　１７０　ｃｍ　）に通し、ＤＭ
Ｆで溶出する。溶出液を３ｆづつ分画し、３２〜３５番
目のフラクションを集めて減圧濃縮する。残渣にエーテ
ルを加え、生じた白色沈澱物を遠心分離Ｃ：Ｊ、より集
めて［８］　３６■（収率６８％）を得る。Sephadex LH-2 filled reaction mixture with DMF
0 column (1,6X 170 cm) and DM
Elutes with F. The eluate is fractionated into 3f fractions, and the 32nd to 35th fractions are collected and concentrated under reduced pressure. Ether was added to the residue, and the resulting white precipitate was collected by centrifugation C:J to obtain [8] 36■ (68% yield).

融点；１９８〜２２０℃（分解） 〔α〕ゎ−７５，５°　（Ｃ畠０．２．　ＤＭＦ　）Ｔ
ＬＣ；ＲｆＤ社０．７６ アミノ酸分解〔酸加水分解）　；　Ａｓｐ　＆２５（３
）、’ｐｈｒ　Ｏ，９７（１）、Ｓｅｒ　６．７Ｒ８）
、Ｇｌｕ　２．３５（２）、Ｐｒｏ　９．７７（１０）
、０１Ｆ　０．９６（１）、Ａｌａ　ＬＱＯ（１）、Ｉ
ｌｅ　Ｏ，９８（１）、Ｌｅｕ　２．９３（３）、Ｔｙ
ｒｌ、０３（１）、Ｐｈｅ　Ｏ，９３（１）、Ｌｙｅ　
Ｏ，９１（１）、Ａｒｇ２．０６（２）（６）［４”ｙ
ｒ”’　）　−ｈａ　Ｇ〔１１１−１４５’）［８］　
２０１１９に’Ｉ’　Ｆ　Ａ　Ｏ，６ｍおよびアニソー
ル０．１−を加え、室温で３日間放置する。反応液にエ
ーテルを加え、析出した白色沈澱物を遠心分離により集
め、エーテルで洗浄した後、ＫＯ）ｌ上で減圧乾燥する
。この粉末にエタノール２ｍおよび５％酢酸２−を加え
て溶解し、パラジウム触媒の存在下で水素添加分解を６
時間行う。触媒を戸去し、母液を減圧濃縮し、残渣を水
に溶かして凍結乾燥する。得られた粉末を５％酢酸ｌｌ
１ｌＩ！に溶かし、これを５％酢酸で充填したセファデ
ックスＧ−２５のカラム（２，２Ｘ　１３５ｃｍ　）に
通し、５％酢酸で溶出する。Melting point: 198-220℃ (decomposition) [α] -75.5° (C Hatake 0.2.DMF)T
LC; RfD 0.76 Amino acid decomposition [acid hydrolysis]; Asp &25 (3
), 'phr O, 97(1), Ser 6.7R8)
, Glu 2.35 (2), Pro 9.77 (10)
, 01F 0.96 (1), Ala LQO (1), I
le O, 98(1), Leu 2.93(3), Ty
rl, 03(1), Phe O, 93(1), Lye
O,91(1),Arg2.06(2)(6)[4”y
r"') -ha G[111-145')[8]
Add 'I' F A O, 6m and 0.1- of anisole to 20119 and leave at room temperature for 3 days. Ether is added to the reaction solution, and the precipitated white precipitate is collected by centrifugation, washed with ether, and then dried under reduced pressure over KO1. This powder was dissolved in 2 m ethanol and 5% acetic acid, and hydrogenolysis was carried out for 6 ml in the presence of a palladium catalyst.
Do time. The catalyst was removed, the mother liquor was concentrated under reduced pressure, and the residue was dissolved in water and freeze-dried. The obtained powder was diluted with 5% acetic acid.
1lI! This is passed through a Sephadex G-25 column (2.2 x 135 cm) packed with 5% acetic acid and eluted with 5% acetic acid.

溶出液は６ｔづつ分画し、２７５ｎｍの吸光度の測定に
より追跡して３０〜３５番目のフラクションを集め、減
圧濃縮する。残渣を水に溶がし凍結乾燥してふわふわし
た粉末の［Ｔｙｒ　　］−ｈｃＧ（１１５−１４５）Ｉ
ＩＷ＆９（収率６２％）を得る。The eluate is fractionated into 6t portions, followed by absorbance measurement at 275 nm, and the 30th to 35th fractions are collected and concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in water and freeze-dried to obtain a fluffy powder of [Tyr]-hcG(115-145)I.
IW&9 (62% yield) is obtained.

〔αＩＤ　　１４４３°（ｃｍ０．２．水）ＴＬＯ；Ｒ
ｆＤ＝０．２５ アミノ酸分析〔漸加水分解］　；　Ａｓｐ　８３１（３
）、ＴｈｒＯ，９５（１）、８ｅｒ　７．２７（８）、
Ｇｌｕ　１３７（２）、Ｐｒｏ　１０．８６（１０）、
Ｇｌｙ　Ｏ，９８，（１）、Ａｌａ　１．００（１）、
Ｉｘｅ　１．０１（１）、Ｌｅｕ　＆０１（３）、Ｔｙ
ｒ　０．９８（１）、Ｐｈｅ　Ｏ，９５（１）、Ｌｙｅ
ｌ　１．０５（１）、Ａｒｇ　２．．２４（２）特許出
願人 東洋醸造株式会社 代表者伊東富士馬[αID 1443° (cm0.2.water) TLO;R
fD=0.25 Amino acid analysis [gradual hydrolysis]; Asp 831 (3
), ThrO, 95(1), 8er 7.27(8),
Glu 137 (2), Pro 10.86 (10),
Gly O, 98, (1), Ala 1.00 (1),
Ixe 1.01(1), Leu &01(3), Ty
r 0.98 (1), Phe O, 95 (1), Lye
l 1.05(1), Arg 2. ．． 24(2) Patent applicant Toyo Jozo Co., Ltd. Representative Ito Fujima

Claims (1)

【特許請求の範囲】 ■）、式 ％式％ ） （式中、Ｘは単結合または−Ａｓｐ　−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−基を示す）で表わされるペプチドまたはその
塩。[Claims] ■), formula % formula %) (wherein, X is a single bond or -Asp -Pro-Arg
-Phe- group) or a salt thereof.