JPS5832596B2 - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 - Google Patents
発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法Info
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- JPS5832596B2 JPS5832596B2 JP54102448A JP10244879A JPS5832596B2 JP S5832596 B2 JPS5832596 B2 JP S5832596B2 JP 54102448 A JP54102448 A JP 54102448A JP 10244879 A JP10244879 A JP 10244879A JP S5832596 B2 JPS5832596 B2 JP S5832596B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造方法に関
する。
する。
本発明者等は発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法を
改良すべく鋭意研究した結果、ブレビバクテリウム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）属またはコリネバクテ
リウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ）属のＬ−
グルタミン酸生産菌より誘導した上記の呼吸阻害剤また
はＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性を有す異株の中から、Ｌ
−グルタミン酸の生産能が優れた菌株を分離育成するこ
とに成功し、本発明を完成するにいたった。
改良すべく鋭意研究した結果、ブレビバクテリウム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）属またはコリネバクテ
リウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ）属のＬ−
グルタミン酸生産菌より誘導した上記の呼吸阻害剤また
はＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性を有す異株の中から、Ｌ
−グルタミン酸の生産能が優れた菌株を分離育成するこ
とに成功し、本発明を完成するにいたった。
すなわち、本発明の要旨はブレビバクテリウム属または
コリネバクテリウム属に属し、呼吸阻害剤またはＡＤＰ
りん酸化阻害剤に耐性を有し、かつＬ−グルタミン酸生
成能を有する変異株を培養して、培養液中にＬ−グルタ
ミン酸を生成蓄積させて、これを採取することを特徴と
する発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造方法である。
コリネバクテリウム属に属し、呼吸阻害剤またはＡＤＰ
りん酸化阻害剤に耐性を有し、かつＬ−グルタミン酸生
成能を有する変異株を培養して、培養液中にＬ−グルタ
ミン酸を生成蓄積させて、これを採取することを特徴と
する発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造方法である。
以下本発明をさらに詳細に説明する。
本発明に使用する呼吸阻害剤に耐性を有する菌とはマロ
ン酸に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトファー
メンタム（ＡＪ １１４２６ＦＥＲＭ−Ｐ５１２３）
及びブレビバクテリウム・フラバム（ＡＪ １１４２
７ ＦＥＲＭ−Ｐ５１２４）、コリネバクテリウム・
グルタミクム（ＡＪ １１４４１ ＦＥＲＭ−Ｐ５
１３８）アジ化ソーダ（ＮａＮ５ ）に耐性を有するブ
レビバクテリウム・ラクトファーメンタム（ＡＪ １
１４２８ＦＥＲＭ−Ｐ ５１２５）、シアン化カリ（
ＫＣＮ）に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトフ
ァーメンタム（ＡＪ １１４２９ ＦＥＲＭ−Ｐ５
１２６）、ブレビバクテリウム・フラバム（ＡＪ １
１４３０ ＦＥＲＭ−Ｐ ５１２７）及びコリネバ
クテリウム・グルタミクム（ＡＪ１１４３１ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ ５１２８）並びに亜ひ酸ソーダ（Ｎａ３Ａｓ
０３）に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトファ
ーメンタム（ＡＪ１１４３２、ＦＥＲＭ−Ｐ ５１２
９）等の変異株を挙げることができる。
ン酸に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトファー
メンタム（ＡＪ １１４２６ＦＥＲＭ−Ｐ５１２３）
及びブレビバクテリウム・フラバム（ＡＪ １１４２
７ ＦＥＲＭ−Ｐ５１２４）、コリネバクテリウム・
グルタミクム（ＡＪ １１４４１ ＦＥＲＭ−Ｐ５
１３８）アジ化ソーダ（ＮａＮ５ ）に耐性を有するブ
レビバクテリウム・ラクトファーメンタム（ＡＪ １
１４２８ＦＥＲＭ−Ｐ ５１２５）、シアン化カリ（
ＫＣＮ）に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトフ
ァーメンタム（ＡＪ １１４２９ ＦＥＲＭ−Ｐ５
１２６）、ブレビバクテリウム・フラバム（ＡＪ １
１４３０ ＦＥＲＭ−Ｐ ５１２７）及びコリネバ
クテリウム・グルタミクム（ＡＪ１１４３１ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ ５１２８）並びに亜ひ酸ソーダ（Ｎａ３Ａｓ
０３）に耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトファ
ーメンタム（ＡＪ１１４３２、ＦＥＲＭ−Ｐ ５１２
９）等の変異株を挙げることができる。
またＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性を有する菌株としては
脱共役化剤２，４−ジニトロフェノールに耐性を有する
ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（ＡＪ
１１４３３ ＦＥＲＭ−Ｐ５１３０）及びブレビバク
テリウム・フラバム（ＡＪ １１４３４ ＦＥＲＭ
−Ｐ ５１３１）、ヒドロキシアミン塩酸塩に耐性を
有するブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（Ａ
Ｊ１１４３５ ＦＥＲＭ−Ｐ ５１３２）及びコリ
ネバクテリウム・グルタミクム（ＡＪ １１４３６Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ ５１３３）及びひ素に耐性を有するブレ
ビバクテリウム・ラクトファーメンタム（ＡＪ １１
４３７ ＦＥＲＭ−Ｐ ５１３４）、グアニジンに
耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトファーメンタ
ム（ＡＪ １１４３８ＦＥＲＭ−Ｐ ５１３５）、
ブレビバクテリウム・フラバム（ＡＪ １１４３９
ＦＥＲＭ−Ｐ５１３６）、コリネバクテリウム・グル
タミクム（ＡＪ １１４４０ ＦＥＲＭ−Ｐ ５
１３７）等がある。
脱共役化剤２，４−ジニトロフェノールに耐性を有する
ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（ＡＪ
１１４３３ ＦＥＲＭ−Ｐ５１３０）及びブレビバク
テリウム・フラバム（ＡＪ １１４３４ ＦＥＲＭ
−Ｐ ５１３１）、ヒドロキシアミン塩酸塩に耐性を
有するブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（Ａ
Ｊ１１４３５ ＦＥＲＭ−Ｐ ５１３２）及びコリ
ネバクテリウム・グルタミクム（ＡＪ １１４３６Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ ５１３３）及びひ素に耐性を有するブレ
ビバクテリウム・ラクトファーメンタム（ＡＪ １１
４３７ ＦＥＲＭ−Ｐ ５１３４）、グアニジンに
耐性を有するブレビバクテリウム・ラクトファーメンタ
ム（ＡＪ １１４３８ＦＥＲＭ−Ｐ ５１３５）、
ブレビバクテリウム・フラバム（ＡＪ １１４３９
ＦＥＲＭ−Ｐ５１３６）、コリネバクテリウム・グル
タミクム（ＡＪ １１４４０ ＦＥＲＭ−Ｐ ５
１３７）等がある。
その他例えばブレビバクテリウム・デイバリカタム（Ｂ
ｒｅｖｉ ｂａｃ ｔｅ ｒ ｉｕｍｄｉｖａｒｉｃａ
ｔｕｍ）ＡＴＣＣ１４０２０、ブレビバクテリウム・サ
ラカロリティカム （Ｂｒｅｖｉｂａｃ ｔｅｒ ｉｕｍ ０ｓａｃｃｈａ
ｒｏ ｌ ｉ ｔ ｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ１４０６６、及
びコリネバクテリウム・アセトアシドフイラム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ・ａｃｅ ｔｏａｃｉ ｄｏ
ｐｈｉ ｌｕｍ）ＡＴ ＣＣ１３８７０等を親株として
用いても同様に変異株をつくることができる。
ｒｅｖｉ ｂａｃ ｔｅ ｒ ｉｕｍｄｉｖａｒｉｃａ
ｔｕｍ）ＡＴＣＣ１４０２０、ブレビバクテリウム・サ
ラカロリティカム （Ｂｒｅｖｉｂａｃ ｔｅｒ ｉｕｍ ０ｓａｃｃｈａ
ｒｏ ｌ ｉ ｔ ｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ１４０６６、及
びコリネバクテリウム・アセトアシドフイラム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ・ａｃｅ ｔｏａｃｉ ｄｏ
ｐｈｉ ｌｕｍ）ＡＴ ＣＣ１３８７０等を親株として
用いても同様に変異株をつくることができる。
上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照射、Ｘ線
照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法が用
いられ、例えば２５０μｇ／ｒｒＬｌのＮ−ニトロ−Ｎ
／−メチル−Ｎ−ニトロソクアニジンにより３０℃で２
０分間処理する方法等がある。
照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法が用
いられ、例えば２５０μｇ／ｒｒＬｌのＮ−ニトロ−Ｎ
／−メチル−Ｎ−ニトロソクアニジンにより３０℃で２
０分間処理する方法等がある。
ここに呼吸阻害剤とは微生物の呼吸を阻害し、従って微
生物の生育がそれによって阻害される薬剤を云い、例え
ばマロン酸、シアン化カリ、アジ化ソーダ、または亜ひ
酸ソーダ等がこれに属し、ＡＤＰ（アデノシン・ジホス
フェート以下ＡＤＰと略す）りん酸化阻害剤とはＡＤＰ
をりん酸化してＡＴＰ（アデノシン・トリホスフェート
以下ＡＴＰと略す）にする反応を阻害し、結果として微
生物の生育を抑制する薬剤を云い、例えば２゜４−ジニ
トロフェノール、ヒドロキシアミン塩酸塩、ひ素、グア
ニジン等がこれに属する。
生物の生育がそれによって阻害される薬剤を云い、例え
ばマロン酸、シアン化カリ、アジ化ソーダ、または亜ひ
酸ソーダ等がこれに属し、ＡＤＰ（アデノシン・ジホス
フェート以下ＡＤＰと略す）りん酸化阻害剤とはＡＤＰ
をりん酸化してＡＴＰ（アデノシン・トリホスフェート
以下ＡＴＰと略す）にする反応を阻害し、結果として微
生物の生育を抑制する薬剤を云い、例えば２゜４−ジニ
トロフェノール、ヒドロキシアミン塩酸塩、ひ素、グア
ニジン等がこれに属する。
次に先ず呼吸阻害剤に耐性を有する菌株の阻害剤存在下
の生育度を第１表に、ＡＤＰりん酸化阻害剤のうちの脱
共役化剤に耐性を有する菌株の阻害剤存在下の生育度を
第２表に、同じ＜ＡＤＰりん酸化阻害剤のうちのエネル
ギー転移阻害剤に耐性を有する菌株の阻害剤存在下の生
育度を第３表にそれぞれ示す。
の生育度を第１表に、ＡＤＰりん酸化阻害剤のうちの脱
共役化剤に耐性を有する菌株の阻害剤存在下の生育度を
第２表に、同じ＜ＡＤＰりん酸化阻害剤のうちのエネル
ギー転移阻害剤に耐性を有する菌株の阻害剤存在下の生
育度を第３表にそれぞれ示す。
この場合生育度の測定は次のようにして行なった。
イースト・エキ２ニ
食塩０． ５ ９ ７ｄ１１寒天２ｇ／ｄｌ（ｐＨ７．
０ ）を含有する培地を１２０℃で１５分間殺菌し、
寒天プレートを調製した。
０ ）を含有する培地を１２０℃で１５分間殺菌し、
寒天プレートを調製した。
このプレートに、ブイヨンスラントで２４時間培養した
菌株を無菌水で懸濁してプレート当り１０５〜１０６の
菌数を散布接種し、その上に一定濃度、容量の薬剤を含
むペーパーディスクをおき、１６〜４８時間培養した。
菌株を無菌水で懸濁してプレート当り１０５〜１０６の
菌数を散布接種し、その上に一定濃度、容量の薬剤を含
むペーパーディスクをおき、１６〜４８時間培養した。
形成される生育阻止円の存在の有無により生育度をみた
。
。
上記の表中小，＋は菌の生育が観察されたもの、−は生
育が観察されなかったものを示す。
育が観察されなかったものを示す。
次に呼吸阻害剤に耐性を有する菌株の呼吸阻害剤存在下
におけるＮＡＤＨ酸化能の影響を測定した結果を第４表
に示す。
におけるＮＡＤＨ酸化能の影響を測定した結果を第４表
に示す。
ＮＡＤＨ酸化能は次の方法によって測定した。
あらかじめ３２℃に保持されたリン酸緩衝液（ｐＨ７，
５） ５００ μｍｏｌｅｓ、ＮＡＤＨ６１Ｅｎｏｌｅ
ｓ。
５） ５００ μｍｏｌｅｓ、ＮＡＤＨ６１Ｅｎｏｌｅ
ｓ。
一定量の無細胞抽出液、所定量の呼吸系阻害剤からなる
反応液１０１ｒＬｌをＢｅｃｋｍａｎ ｍｏｄｅｌ ７
７７酸素分析計センサーを組み込んだ容器に入れ空間＊
＊が生じないように密閉したのち、マグネチツクスター
ラーで攪拌しながら３２℃に保持し酸素分圧の減少を記
録する。
反応液１０１ｒＬｌをＢｅｃｋｍａｎ ｍｏｄｅｌ ７
７７酸素分析計センサーを組み込んだ容器に入れ空間＊
＊が生じないように密閉したのち、マグネチツクスター
ラーで攪拌しながら３２℃に保持し酸素分圧の減少を記
録する。
酸素濃度が直線的に減少する曲線部分から酵素活性を算
出した。
出した。
その結果、ＡＪ １１４２９．ＡＪ １１４３０゜
ＡＪ １１４３１はマロン酸、 Ｋ ＣＮ ２ Ｎ
ａ Ｎ３２亜ヒ酸をそれぞれ添加してもＮＡＤＨ酸化能
の低下は親株はど著しくないことがわかった。
ＡＪ １１４３１はマロン酸、 Ｋ ＣＮ ２ Ｎ
ａ Ｎ３２亜ヒ酸をそれぞれ添加してもＮＡＤＨ酸化能
の低下は親株はど著しくないことがわかった。
次にＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性を有する菌株のうちの
脱共役化剤に耐性を有する菌株の阻害剤の存在下におけ
る呼吸活性及びＡＤＰりん酸化能の影響を第５表に、同
じ＜ＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性を有する菌株のうちの
エネルギー転移阻害剤に耐性を有する菌株の阻害剤の存
在下における呼吸活性及びＡＤＰりん酸化能の影響を第
６表にそれぞれ示す。
脱共役化剤に耐性を有する菌株の阻害剤の存在下におけ
る呼吸活性及びＡＤＰりん酸化能の影響を第５表に、同
じ＜ＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性を有する菌株のうちの
エネルギー転移阻害剤に耐性を有する菌株の阻害剤の存
在下における呼吸活性及びＡＤＰりん酸化能の影響を第
６表にそれぞれ示す。
この場合呼吸活性、ＡＤＰりん酸化能の測定は次の方法
によって行なった。
によって行なった。
呼吸活性ニ
ゲルコース３６７７２ｐ／ｍｌ、尿素２ ｍ９７ｍ１
。
。
ＫＨ２ＰＯ４１ｍ９ ／ｍｌ、 Ｍｇ５Ｏ，・７ ａｑ
０．４ｍ９／ｍｌ！。
０．４ｍ９／ｍｌ！。
ＦｅＳＯ４・７ａｑ１０μｇ７ａ２ＭｎＳＯ４・４ａｑ
８μ９７ｆｎｌ 、大豆蛋白酸加水分解物５μｌ／ｍｌ
、サイアミン塩酸塩１００μｇ／ｌ 、ビオチン２．５
μｇ／１３を含有する培地で２０時間培養した培養液か
ら集菌し、０．５％食塩水で２回洗浄した菌体を１／１
５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，５）に懸濁し、２８℃
で３時間、ロータリーシェーカーで飢餓培養した休止細
胞懸濁液０．５ ｍｌを、リン酸緩衝液（ｐＨ７，５’
。
８μ９７ｆｎｌ 、大豆蛋白酸加水分解物５μｌ／ｍｌ
、サイアミン塩酸塩１００μｇ／ｌ 、ビオチン２．５
μｇ／１３を含有する培地で２０時間培養した培養液か
ら集菌し、０．５％食塩水で２回洗浄した菌体を１／１
５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，５）に懸濁し、２８℃
で３時間、ロータリーシェーカーで飢餓培養した休止細
胞懸濁液０．５ ｍｌを、リン酸緩衝液（ｐＨ７，５’
。
１００ μｍｏｌｅｓ、ｍｏｌｅｓ、 ００ μｍｏｌ
ｅｓ、全液量２．０全液量２厄０ 後のワールブルグ検圧計の読みから呼吸活性を測定した
。
ｅｓ、全液量２．０全液量２厄０ 後のワールブルグ検圧計の読みから呼吸活性を測定した
。
ＡＤＰリン酸化能：
上記休止細胞を遠心分離により集菌し、室温ですみやか
に風乾し、さらに五酸化リンデシケータ−内で一液減圧
風乾した。
に風乾し、さらに五酸化リンデシケータ−内で一液減圧
風乾した。
この菌体をＡＤＰＩＯμｍｏｌｅｓ，グルコース２ ０
０ μｍｏｌｅｓ， リン酸緩衝液２ ５ ０ μ
ｍｏｌｅｓ，ＭｇＣＪ？２°６ａｇ５μｍ０１ｅＳを含
む反応液２ｍｌに５０■懸濁し、３０℃で、３時間反応
させ、反応後反応液を沸騰湯浴中に３分間浸して反応を
停止し、水冷後菌体を遠心分離により除去し、得られた
上清液を分析に供した。
０ μｍｏｌｅｓ， リン酸緩衝液２ ５ ０ μ
ｍｏｌｅｓ，ＭｇＣＪ？２°６ａｇ５μｍ０１ｅＳを含
む反応液２ｍｌに５０■懸濁し、３０℃で、３時間反応
させ、反応後反応液を沸騰湯浴中に３分間浸して反応を
停止し、水冷後菌体を遠心分離により除去し、得られた
上清液を分析に供した。
ＡＴＰの分析はＡＴＰ ｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒｍｏｄ
ｅ１２ ０ ０ ０ （ Ｓ Ａ Ｉ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ Ｃｏ− 、製）によった。
ｅ１２ ０ ０ ０ （ Ｓ Ａ Ｉ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ Ｃｏ− 、製）によった。
この試験の結果ＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性を有する菌
株ＡＪ １１４３３．ＡＪ １１４３４゜ＡＪ
１１４３６（第５表）も、エネルギー転移阻害剤に耐性
を有する菌株ＡＪ １１４３８゜ＡＪ １１４３９
．ＡＪ １１４４０（第６表）もいずれも阻害剤であ
る脱共役化剤及びエネルギー転移阻害剤の存在下におい
てＡＤＰりん酸化能は親株に比べて低下の程度が少ない
ことが認められた。
株ＡＪ １１４３３．ＡＪ １１４３４゜ＡＪ
１１４３６（第５表）も、エネルギー転移阻害剤に耐性
を有する菌株ＡＪ １１４３８゜ＡＪ １１４３９
．ＡＪ １１４４０（第６表）もいずれも阻害剤であ
る脱共役化剤及びエネルギー転移阻害剤の存在下におい
てＡＤＰりん酸化能は親株に比べて低下の程度が少ない
ことが認められた。
しかし阻害剤の存在化における呼吸活性の方の動向は両
者で異なり、脱共役化剤に耐性を有する菌株（第５表）
は阻害剤存在下で親株も変異株も呼吸活性は増大を示し
たがエネルギー転移阻害剤に耐性を有する菌株（第６表
）は阻害剤の存在下で親株も変異株も呼吸活性は大差な
い。
者で異なり、脱共役化剤に耐性を有する菌株（第５表）
は阻害剤存在下で親株も変異株も呼吸活性は増大を示し
たがエネルギー転移阻害剤に耐性を有する菌株（第６表
）は阻害剤の存在下で親株も変異株も呼吸活性は大差な
い。
上記の本発明の呼吸阻害剤又はＡＤＰりん酸化阻害剤に
耐性を有する菌株を用いてＬ−グルタミン酸を生成蓄積
させるにはＬ−グルタミン酸発酵に用いられる常法を用
いて行なえばよい。
耐性を有する菌株を用いてＬ−グルタミン酸を生成蓄積
させるにはＬ−グルタミン酸発酵に用いられる常法を用
いて行なえばよい。
すなわち、使用する培地としては、通常の炭素源、窒素
源、無機イオンその他の栄養素の含有する通常の培地が
用いられる。
源、無機イオンその他の栄養素の含有する通常の培地が
用いられる。
炭素源としては例えばサトウキビ、甜菜からの糖汁ある
いは廃糖蜜、澱粉、加水分解物等の糖質原料等または酢
酸等の有機酸等を用いる。
いは廃糖蜜、澱粉、加水分解物等の糖質原料等または酢
酸等の有機酸等を用いる。
窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に用いられ
る例えばアンモニウム塩、アンモニア水、尿素等が用い
られ、その他リン酸イオン、マクネシウムイオン等の無
機イオンが必要に応じて適宜使用され、又ビオチンに関
してもビオチン又はビオチン活性物質が生育の適量以下
の制限条件下において行なわれ、廃糖蜜等のビオチン過
剰原料を炭素源として使用するときはペニシリンＧ、Ｆ
。
る例えばアンモニウム塩、アンモニア水、尿素等が用い
られ、その他リン酸イオン、マクネシウムイオン等の無
機イオンが必要に応じて適宜使用され、又ビオチンに関
してもビオチン又はビオチン活性物質が生育の適量以下
の制限条件下において行なわれ、廃糖蜜等のビオチン過
剰原料を炭素源として使用するときはペニシリンＧ、Ｆ
。
Ｋ、０．Ｖ、Ｘ等のペニシリン類あるいはシュークロー
スモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタン−
モノパルミテートパルミチン酸等の高級脂肪酸又はその
誘導体よりなる界面活性剤をビオチン抑制物質として添
加する等の常法で行なわれ、培養条件についても温度３
０〜４０℃、ｐＨ６〜８の範囲内で好気的条件で実施す
る等常法によって実施する。
スモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタン−
モノパルミテートパルミチン酸等の高級脂肪酸又はその
誘導体よりなる界面活性剤をビオチン抑制物質として添
加する等の常法で行なわれ、培養条件についても温度３
０〜４０℃、ｐＨ６〜８の範囲内で好気的条件で実施す
る等常法によって実施する。
以下本発明の呼吸阻害剤またはＡＤＰりん酸化阻害剤に
耐性を有する変異株を用いた実症例を次に示す。
耐性を有する変異株を用いた実症例を次に示す。
実施例 １
グルコース３６ｍ９／ｍｌ、尿素２７７１９，４’ 。
ＫＨ２ＰＯ４１ｍ９／ｒｒｔｌ 、 Ｍｇ５Ｏ，−７ａ
ｑ ０．４ ｍ９７ｍ１！。
ｑ ０．４ ｍ９７ｍ１！。
ＦｅＳＯ４・７ａｑ１０μｇ／ｍ１２ＭｎＳＯ４・４ａ
ｑ８μｇ／ｒｒＬｌ、大豆蛋白酸加水分解物（「味液」
）５μｌ／ｍｌ、サイアミン塩酸塩１００ｐ９／ｌ。
ｑ８μｇ／ｒｒＬｌ、大豆蛋白酸加水分解物（「味液」
）５μｌ／ｍｌ、サイアミン塩酸塩１００ｐ９／ｌ。
ビオチン２．５μｇ／ｌを含有する培地を調製しその２
０ｍ１づつを５００ｍ１容の振盪フラスコに入れ１１５
℃で１０分間加熱殺菌した。
０ｍ１づつを５００ｍ１容の振盪フラスコに入れ１１５
℃で１０分間加熱殺菌した。
この培地に次に示す菌株を振盪し往復振盪により３１．
５℃で培養を行った。
５℃で培養を行った。
培養中、培養液をｐＨ６，５ないし８．０に保つように
４５０■／ｒ／ｌｌの濃度の尿素溶成を少量づつ添加し
た。
４５０■／ｒ／ｌｌの濃度の尿素溶成を少量づつ添加し
た。
３０時間で発酵を終了し発酵液中に蓄積したＬ−グルタ
ミン酸の対糖収率を測定した。
ミン酸の対糖収率を測定した。
その結果、第７表に示すようにいづれの薬剤耐性株も良
好なＬ−グルタミン酸を蓄積した。
好なＬ−グルタミン酸を蓄積した。
実施例 ２
甘蔗糖蜜を、糖として１００ ｍ９／ｍｌ、 ＫＨ２Ｐ
Ｏ４１１ｎ９／ｍｌ！ 、 Ｍｇ５０．４ａｑ Ｉ Ｔ
ｎ９／ｒｒｔｌ 、サイアミン塩酸塩１００ ｐｇ／Ｉ
Ｊの組成を有する培地を調製しくｐＨ７，０）、その３
０ＷＬｌづつを５００ｍ１振盪フラスコに分在し、加熱
殺菌した。
Ｏ４１１ｎ９／ｍｌ！ 、 Ｍｇ５０．４ａｑ Ｉ Ｔ
ｎ９／ｒｒｔｌ 、サイアミン塩酸塩１００ ｐｇ／Ｉ
Ｊの組成を有する培地を調製しくｐＨ７，０）、その３
０ＷＬｌづつを５００ｍ１振盪フラスコに分在し、加熱
殺菌した。
この培地に下記の菌株を接種し、往復振盪機により３１
．５℃で培養を行った。
．５℃で培養を行った。
培養中、培養液をｐＨ６，５〜８．０に保つように４０
０■／ｍｌの濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。
０■／ｍｌの濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。
培地の２６倍希釈液の５６２ｍμの吸光度が０．３０に
到達した時にポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テート（ＰＥＳＰ）を添加した。
到達した時にポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テート（ＰＥＳＰ）を添加した。
３６時間で発酵を終了し、発酵液中に蓄積したＬグルタ
ミン酸の対糖収率を測定した。
ミン酸の対糖収率を測定した。
その結果、第８表に示すようにいずれの薬剤耐性株もＬ
−グルタミン酸を良好に蓄積した。
−グルタミン酸を良好に蓄積した。
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属
に属し、呼吸阻害剤またはＡＤＰりん酸化阻害剤に耐性
を有し、かつＬ−グルタミン酸生成能を有する変異株を
培養して、培養液中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積させ
て、これを採取することを特徴とする発酵法によるＬ−
グルタミン酸の製造方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54102448A JPS5832596B2 (ja) | 1979-08-10 | 1979-08-10 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
| US06/175,705 US4347317A (en) | 1979-08-10 | 1980-08-06 | Method for producing L-glutamic acid by fermentation |
| ES494106A ES8106759A1 (es) | 1979-08-10 | 1980-08-08 | Un metodo para producir acido l-glutamico por fermentacion |
| GB8025892A GB2056451B (en) | 1979-08-10 | 1980-08-08 | Producing l-glutamic acid by fermentation and novel mutants |
| PH24421A PH16120A (en) | 1979-08-10 | 1980-08-08 | Method for producing l-glutamic acid by fermentation |
| FR8017570A FR2463184A1 (fr) | 1979-08-10 | 1980-08-08 | Procede pour la production d'acide l-glutamique par fermentation |
| MX808967U MX6020E (es) | 1979-08-10 | 1980-08-11 | Procedimiento de fermentacion mejorado para la produccion de acido l-glutamico |
| MY374/85A MY8500374A (en) | 1979-08-10 | 1985-12-30 | Process for producing l-glutamil acid byfermentation and novel mutants |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54102448A JPS5832596B2 (ja) | 1979-08-10 | 1979-08-10 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5648890A JPS5648890A (en) | 1981-05-02 |
| JPS5832596B2 true JPS5832596B2 (ja) | 1983-07-14 |
Family
ID=14327744
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP54102448A Expired JPS5832596B2 (ja) | 1979-08-10 | 1979-08-10 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4347317A (ja) |
| JP (1) | JPS5832596B2 (ja) |
| ES (1) | ES8106759A1 (ja) |
| FR (1) | FR2463184A1 (ja) |
| GB (1) | GB2056451B (ja) |
| MX (1) | MX6020E (ja) |
| MY (1) | MY8500374A (ja) |
| PH (1) | PH16120A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6248320A (ja) * | 1985-08-26 | 1987-03-03 | 高北農機株式会社 | 自走ロ−ルベ−ラ− |
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| JPS57115190A (en) * | 1980-12-29 | 1982-07-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-glutamic acid by fermentation |
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| WO2006070944A2 (en) | 2004-12-28 | 2006-07-06 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing l-glutamic acid |
| KR100791659B1 (ko) * | 2006-07-13 | 2008-01-03 | 씨제이 주식회사 | 알지닌을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 엘-알지닌의제조방법 |
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-
1979
- 1979-08-10 JP JP54102448A patent/JPS5832596B2/ja not_active Expired
-
1980
- 1980-08-06 US US06/175,705 patent/US4347317A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-08-08 GB GB8025892A patent/GB2056451B/en not_active Expired
- 1980-08-08 PH PH24421A patent/PH16120A/en unknown
- 1980-08-08 ES ES494106A patent/ES8106759A1/es not_active Expired
- 1980-08-08 FR FR8017570A patent/FR2463184A1/fr active Granted
- 1980-08-11 MX MX808967U patent/MX6020E/es unknown
-
1985
- 1985-12-30 MY MY374/85A patent/MY8500374A/xx unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6248320A (ja) * | 1985-08-26 | 1987-03-03 | 高北農機株式会社 | 自走ロ−ルベ−ラ− |
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| GB2056451B (en) | 1983-07-06 |
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