JPS5828286A - Novel antibiotic substance, sf-2139, and its preparation - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To prepare a novel antibiotic substance, SF-2139, having antibacterial activity against Gram-negative bacteria and Gram-positive bacteria, by culturing a microorganism belonging to Dactylosporangium genus. CONSTITUTION:Microorganism belonging to Dactylosporangium genus and capable of producing the antibiotic substance, SF-2139, e.g. Dactylosporangium sp. SF-2139 (FERM-P No.6040), is inoculated in a nutrient medium, and cultured aerobically at 20-35 deg.C, preferably 26-30 deg.C. The objective antibiotic substance SF-2139 can be separated mainly from the filtrate of the cultivation product.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質及びその製造法に関する本のであ
シ、さらに詳しくは抗生物質ＳＦ　−２１３９物質及び
ダクチロスポランギウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎ
　−ｇｉｕｍ）属に属するａＦ　−２１３９物質生産菌
を培地に培養し、得られた培養物から抗生物質ＳＦ　−
２１３９物質を採取することを特徴とする新規抗生物質
ＳＦ　−２１３９物質の製造法に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a novel antibiotic and a method for producing the same, and more particularly to the antibiotic SF-2139 substance and Dactylosporangium.
The aF-2139 substance-producing bacterium belonging to the genus -gium) was cultured in a medium, and the antibiotic SF-
The present invention relates to a method for producing a novel antibiotic SF-2139 substance, which is characterized by collecting the 2139 substance.

本発明者らは、ある種の菌株の培養物中にグラム陰性薗
及び陽性−に対して抗厘作用を示す物質が生産されてい
ることを見出し、その有効物質を培養物から純粋に単離
し、その性状を調べた結果、既知の物質とは異なる新規
抗生物質であることを確かめ、この有効物質をＳＦ　−
２１３９柳質と命名した。The present inventors have discovered that a substance exhibiting anti-gram-negative and gram-negative bacteria is produced in the culture of certain bacterial strains, and the active substance was isolated purely from the culture. As a result of investigating its properties, it was confirmed that it is a new antibiotic that is different from known substances, and this active substance was identified as SF-
It was named 2139 Yanagi quality.

ｆｆｒ規抗生物質ＳＦ　−２１３９愉質生慮菌としては
、その培養物中に、採取するに充分な量のＳＦ　−２１
３９物質を生産する能力を有するものであれば、いかな
るものであってもよいが、このような菌株の一例として
は本発明者らにより兵庫県氷上郡山重訂の土壌よシ新た
に分離されたＳＦ　−２１３９株がある。該菌株の菌学
的性状は下記の通シでおる。FFR antibiotic SF-2139 As a fungus, the culture contains a sufficient amount of SF-21 to be collected.
Any strain may be used as long as it has the ability to produce 39 substances, but an example of such a strain is the strain newly isolated by the present inventors from soil in Hikami-Koriyama, Hyogo Prefecture. There is strain SF-2139. The mycological properties of this strain are summarized below.

なお、観察は主にＳＩ：ＬＩＲＬＩＮＧ、　Ｅ、　Ｂ、
とＧＯＴＴＬＩＩＱＢ、　Ｄ。Note that observations are mainly made of SI: LIRRING, E, B,
and GOTTLIIQB, D.

により　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　ＳｙａｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ、　１６．３１３〜３４０　（１９６６）　　に記載
されている方法に従って行った。by International Journal
of Syatematic Bacteriology
y, 16.313-340 (1966).

■形態 基生繭糸はよく分枝して波状に伸長し、その直径は約０
．５〜０．７ミクａンである。寒天培地及び液体培地の
いずれにおいても基生鉋糸の分断は通常観察されない。■Morphological cocoon threads are well branched and elongate in a wavy manner, with a diameter of approximately 0.
．． It is 5 to 0.7 microns. In both agar and liquid media, fragmentation of the basal threads is usually not observed.

気菌糸はほとんど見られず、事実上形成されないと思わ
れる。ＳＦ　−２１３９株は寒天培地の表面に胞子のう
を１個あるい社タフト状に形成する。胞子のうはグルコ
ース・アスバ２ギ／寒天、グリセロール・アスバンギン
寒天、スターチ寒天、イーストψ！ルト寒天、カルシ寒
天−マレート寒天勢の培地で多数認められる。胞子のり
は指状で６大きさはおよそ０．８−”　１．２　Ｘ　２
．５〜４．５ミクロンである。各胞子のり社中に一列に
３〜４個の胞子台金む。胞子は卵型ないし円筒型で、表
面はなめらか、大色さは０．６〜１．ＯＸ　Ｏ，８〜１
．８ミクロンである。胞子のうを含む寒天培地表頂をか
きとって滅１水に懸濁し約３０分間放置し六後、検鏡す
ると活発な運動性を持った胞子が暮察された。Aerial hyphae are rarely seen and appear to be virtually never formed. The SF-2139 strain forms a single sporangium or a tuft-like sporangium on the surface of the agar medium. Sporangium is glucose/asbangine/agar, glycerol/asbangine agar, starch agar, yeast ψ! It is found in large numbers in Ruto agar, calci agar-malate agar media. The spores are finger-shaped and measure approximately 0.8-” 1.2 x 2.
．． It is 5 to 4.5 microns. Place 3 to 4 spores in a row in each spore paste. The spores are oval or cylindrical, with a smooth surface and a color size of 0.6 to 1. OX O, 8~1
．． It is 8 microns. The surface of the agar medium containing the sporangia was scraped off, suspended in diluted water, and allowed to stand for about 30 minutes.After 6 hours, a microscope revealed actively motile spores.

■各種培地上の生育状悪 ＳＦ　−２１３９株の各種培地上の生育状態は次夛に示
す通シである。色の記載について〔〕内轄示’ｔｌｌ＋
準ハ、コンテナー・コーポレーシロン・オフ０アメリカ
（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｌｏｎ　ｏｆ
Ａｎ＋ｅｒｉｃｍ）社製の「力２−Ｉ＋ハーモニー・ｉ
；為アル（Ｃｏ１ｏｒ　）Ｉａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａ
ｌ　）　Ｊに記−の鴫に行った。■ Poor growth condition on various media The growth conditions of the SF-2139 strain on various media are shown below. Regarding the description of colors [] Internal jurisdiction 'tll+
Container Corporation of America
"Power 2-I + Harmony i" manufactured by An+ericm)
; Co1or Iarmony Manua
l) I went to the restaurant mentioned in J.

［− 閾 １１″ パ リ ｉバ レー・ ′ｌき ′ヒ［ °１１− し ■生理的性質 （１）　　生育温度範囲：スターチ寒天において、１５
〜４０℃の温度範囲で生育し、２５℃〜３７℃において
喪好に生育する。[-Threshold 11'' Paris i Valley 'lki'hi[ °11- Physiological properties (1) Growth temperature range: In starch agar, 15
It grows in the temperature range of ~40°C and grows well at 25°C to 37°C.

（２）　　ゼラチンの液化：陰性 （３）　　スターチの加水分解：陽性 （４）　　硝酸塩の還元：陽性 （５）脱脂乳の凝固：陽性 脱脂乳のペグトン化：陽性 （６）　　メラニン様色素の生成：陰性す （７）　　耐塩性：　４．ｏ％で僅かに生厚するが、５
．ｏチ以上では生育しない。(2) Liquefaction of gelatin: Negative (3) Hydrolysis of starch: Positive (4) Reduction of nitrate: Positive (5) Coagulation of skim milk: Positive Pegtonization of skim milk: Positive (6) Production of melanin-like pigments: Negative (7) Salt tolerance: 4. It is slightly thicker at o%, but 5
．． It will not grow above ochi.

■炭素源の利用性 Ｄ−グルコース　　　　　　千十＋ Ｄ−キシロース　　　　　　＋＋＋ Ｄ−７＋＋　ドース　　　　　　　＋十十り−マンニト
ール　　　　＋＋＋ 炭＃Ｃ源　　　　　　生　育 Ｌ−アラビノース　　　　＋＋＋ Ｌ−ラムノース　　　　　＋＋＋ ｌ−イノシトール　　　　＋＋ シュクロース　　　　　　＋＋＋ ラフィノース　　　　　　＋＋ 無　　添　　加　　　　　　　　　　　十＋十＋：良好
に生育（利用性：あり） 十十：やや弱い生育（利用性：疑わしい）＋：弱い生育
（利用性：なし） 用いた基本培地： ■細胞壁組成 全１体加水分解物中のジアミノピメリン酸は主にヒドロ
キシ製であった。■Usability of carbon sources D-glucose 100+ D-xylose +++ D-7++ Dose +10+ mannitol +++ Charcoal #C source Growth L-arabinose +++ L-rhamnose +++ l-inositol ++ Sucrose +++ Raffinose ++ No addition 10 + 10 +: Good growth (usability: yes) 10: Slightly weak growth (usability: questionable) +: Weak growth (usability: none) Basic medium used: ■Cell wall composition: All 1 body Diaminopimelic acid in the hydrolyzate was mainly of hydroxy origin.

以上の性状より、ＳＦ　−２１３９株は放線菌の中でダ
クチロスポランギウム（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇ
ｉｕｍ　）真に属する菌株である。従って、本発明者等
はＳＦ　−２１３９株をダクチロスポランギウム・エス
ピー　ａＳＦ　−２１３９（Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａ
ｎｇｉｕｍ　ｓｐ、　ＳＦ　−２１３９）と命名した。Based on the above properties, strain SF-2139 is a member of Dactylosporangium among actinomycetes.
ium) is a true bacterial strain. Therefore, the present inventors used the SF-2139 strain as Dactylosporangium sp. aSF-2139 (Dactylospora sp.
ngium sp, SF-2139).

ＳＦ　−２１３９株は、微生物工業技術研究所に第６０
４０号として受託されている。SF-2139 strain is the 60th strain of Microbial Technology Research Institute.
It has been commissioned as No. 40.

本発明は、上記の知見に基いて完成されたもので、ダク
チロスポランギウム属に属する抗生物質ＳＦ　−２１３
９物質生産菌を培養し、その培養物より抗生物質ＳＦ　
−２１３９物質を採取することを特徴とする製造法にあ
る。The present invention was completed based on the above-mentioned findings, and is based on the antibiotic SF-213 belonging to the genus Dactyrosporangium.
9 substance-producing bacteria were cultured, and the antibiotic SF was extracted from the culture.
-2139 substance is collected.

ダクチロスボランギクムーエスピー・ＳＦ　−２１３９
株は、　傭の放線菌の場合にみられるように、その性状
が変化しやすく、例えば紫外線、エックス線、放射線、
薬品等を用いる人工的変異手段で変異しうるものであり
、このような変異株でおっても抗生物質ＳＦ　−２１３
９物質の生産能を有するダクチロスポランギウム属の厘
はすべて本発明の方法に使用することができる。Dactylosborangicummusp SF-2139
Strains are susceptible to changes in their properties, such as exposure to ultraviolet light, X-rays, radiation,
It can be mutated by artificial mutation methods using drugs, etc., and even such mutant strains cannot be used as antibiotics SF-213.
All members of the genus Dactylosporangium capable of producing nine substances can be used in the method of the present invention.

本発明の方法では、ＳＦ　−２１３９株を通常微生物が
利用しうる栄養愉を含有する培地で培養する。In the method of the present invention, strain SF-2139 is cultured in a medium containing nutrients that can be used by microorganisms.

例えば、炭素源としてグルコース、シェクロース、デキ
ストリ／、澱粉、水あめ、糖みつ、大豆油吟を使用しう
る。For example, glucose, shekrose, dextrin, starch, starch syrup, molasses, and soybean oil may be used as carbon sources.

又、窒素源として大豆粉、小麦胚芽、ペプトン、肉エキ
ス、＃母エキス、：７−ンスティープリカー、硝酸ソー
ダ、硫酸アンモニウム等を使用しうる。その他、必要に
応じて炭酸カルシウム、塩化カリウム、燐酸塩等の無機
塩類を添加するほか菌の発育を助け、ＳＦ　−２１３９
物質の主意を促進するごとき有機愉及び無機物を適当に
添加することができる。Further, as a nitrogen source, soybean flour, wheat germ, peptone, meat extract, #mother extract, 7-steep liquor, sodium nitrate, ammonium sulfate, etc. can be used. In addition, inorganic salts such as calcium carbonate, potassium chloride, and phosphates may be added as necessary to aid the growth of bacteria.
Organic and inorganic substances may be added as appropriate to promote the purpose of the substance.

培養法としては一般抗生智質生産の方法と同じく、好気
的条件下での培養法であれば、いかなる方法を適用して
もよいが、特に深部培養法が最も適している。培養に適
当な温度社２０〜３５℃でおるが、多くの場合２６〜３
０℃付近で培養を行うのが好ましい。ＳＦ　−２１３９
物質の生産は振盪培養法、タンク培養法共に２〜１０日
で蓄積が最高に達する。As for the culture method, any method can be applied as long as it is a culture method under aerobic conditions, as is the case with the general method for producing antibiotic sap, but the deep culture method is particularly suitable. The appropriate temperature for culturing is 20-35°C, but in most cases it is 26-35°C.
It is preferable to culture at around 0°C. SF-2139
Production of the substance reaches maximum accumulation in 2 to 10 days for both the shaking culture method and the tank culture method.

ＳＦ　−２１３９物質の検定に当っては、ンクｐコツカ
ス・ルテウス（Ｍｉｅｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ
　）を被検菌とする生物検定法を用いる。この検定法で
Ｂ　、Ｓ　Ｆ−２１３９物質が２００ｍｃｇ／ｄ　〜３
２００ｒｎａｇ／ｍｌ　の織度範囲ではその対数と阻止
円径との間は直線関係を示し、それぞれ１３ｍ〜２３謹
の阻止円を与える。For the assay of SF-2139 substance, Mierococcus luteus (Mierococcus luteus)
) is used as the test bacterium. With this assay method, B, SF-2139 substance was detected at 200 mcg/d to 3
In the weave range of 200 rnag/ml, the logarithm and the inhibition circle diameter show a linear relationship, giving inhibition circles of 13 m to 23 m, respectively.

８Ｆ　−２１３９物質は、後記する理化学的性状を有す
るので、その性状に従って抽出、精製することが可能で
おるが、以下の方法によシ効率的に抽出、精製できる。Since the 8F-2139 substance has the physical and chemical properties described below, it can be extracted and purified according to its properties, and can be efficiently extracted and purified by the following method.

すなわち、有効成分は主として培養ｐ液に含まれておシ
、これをダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成）等の多孔
性吸着樹脂に吸着させ、アセトン、メタノール婢の水に
可溶性である溶剤と水との混合溶剤で有効成分を溶出す
る。さらに有機溶剤を留去したのち、ブタノール、酢酸
エチル勢の溶剤に抽出、乾固したのち、シリカゲル、ア
ルｉ＋、−ｋｙアデックスＬＨ−２０（７ｙルマシア）
等のカラムり四マドグツフィーを適宜組合せ使用し、メ
タノールで結晶化させ、８Ｆ　−２１３９物質の黄色結
晶を純粋状に得ることができる。かくして得られたＳＦ
　−２１３９物質は、各種の溶剤系での薄層クロマトグ
ラフィーでいずれも単一のスポットを与えることから純
品であると判断される。In other words, the active ingredient is mainly contained in the culture p solution, which is adsorbed onto a porous adsorption resin such as Diaion HP-20 (Mitsubishi Kasei), and then mixed with acetone, methanol, a solvent that is soluble in water, and water. The active ingredient is eluted with a mixed solvent. After further distilling off the organic solvent, extraction was carried out with a solvent of butanol and ethyl acetate, and after drying, silica gel, Al i+, -ky Adex LH-20 (7y Lumacia)
A pure yellow crystal of 8F-2139 substance can be obtained by crystallizing it with methanol using an appropriate combination of columnar columns such as 8F-2139. The SF thus obtained
Substance -2139 is judged to be a pure product as it gives a single spot in thin layer chromatography using various solvent systems.

前記の方法で得られたＳＦ　−２１３９物質の理化学性
状は以下のとおりである。The physical and chemical properties of the SF-2139 substance obtained by the above method are as follows.

元素分析：炭素５５．９７重量−１水素１Ｌ９５重量−
（窒素、ハロゲン、硫黄、リン を含有しない。） 融　　点：２２０〜２３０℃　（徐々に分解）比旋光度
：　（ｃｔ　）：’　＝−１３５°（Ｃ０，５、ピリジ
ン） 紫外線吸収スペクトル：第１図に示す（メタノール中）
０ 赤外線吸収スペクトルニ第２図に示す（臭化カリウム錠
剤法）０ 呈色反応：Ｍ−ド反応、Ｖンユー反応、塩化第２鉄反応
　陰性 ニンヒドリン反応　陰性 外　　観：黄色結晶 中性、酸性、塩基性の区別：溶解性、元素分析値から酸
性物質と考えられる０ シリカゲル薄層クロマトグラフィー： Ｒｆ　＝　０．４０　（クロルホルム：メタノール＝５
　：　１） ＝　０．８５　（ｎ−ブタノール：メタノール：水＝２
：１： ｌ） 溶解性＝アルカリ性水、ピリジン、ジメチルスルホキサ
イドにＴｏｆ６゜メタノー ルに可潜。クロＵホルム、ベンゼ ン、酸性水に離溶。Elemental analysis: Carbon 55.97 weight - 1 hydrogen 1 L 95 weight -
(Contains no nitrogen, halogen, sulfur, or phosphorus.) Melting point: 220-230°C (gradually decomposes) Specific rotation: (ct):' = -135° (C0,5, pyridine) Ultraviolet absorption spectrum: Shown in Figure 1 (in methanol)
0 Infrared absorption spectrum shown in Figure 2 (potassium bromide tablet method) 0 Color reactions: M-de reaction, V-N-U reaction, ferric chloride reaction Negative ninhydrin reaction Negative appearance: Yellow crystal neutral, acidic, Basicity classification: 0 considered to be an acidic substance based on solubility and elemental analysis values Silica gel thin layer chromatography: Rf = 0.40 (chloroform:methanol = 5
: 1) = 0.85 (n-butanol: methanol: water = 2
:1: l) Solubility = Soluble in alkaline water, pyridine, dimethyl sulfoxide, Tof6°, methanol. Dissolves in chloroform, benzene, and acidic water.

ＳＦ　−２１３９物質の各種検定菌に対する阻止円社次
ＩＩ！に示すとおシで、グラム陽性薗、陰性劇に対して
有効である（ペーパーディスク法）。またｉウスを用い
た急性毒性試験の結果、１００１１１’〜腹腔内投与で
金側生存し九〇 前記したＳＦ−２１３９物質の理化学性状および生物学
的性状を既知物質のそれと比較したところ、近似物質と
してす２ンゴマイシン（Ｎａｒａｎｇｏｍｙｃｉω（米
国特許、　ＵＳ　３．１５５．５８３　）があるが、七
の標品と比較検討した結果、紫外部吸収抗菌スペクトル
、薄層クロマトグラフィーのＲｆ値などで　明瞭に異な
り、本ＳＦ　−２１３９物質は新規物質であると判定し
た。Inhibition of SF-2139 substance against various test bacteria Enshaji II! It is effective for Gram-positive and Gram-negative cases (paper disk method). In addition, as a result of an acute toxicity test using Ius, it was found that the physicochemical and biological properties of the SF-2139 substance survived after intraperitoneal administration of 100111' to those of known substances. There is Narangomycin (U.S. patent, US 3.155.583), but as a result of comparing it with the seven standard products, it was found that the ultraviolet absorption antibacterial spectrum, Rf value of thin layer chromatography, etc. were clearly different. This SF-2139 substance was determined to be a new substance.

表　ＳＦ　−２１３９物質の抗菌活性 以下にＳＦ　−２１３９智質の製造法の実施例を示すが
、ここに例示しなかった多くの変形、修飾手段を用い得
ること社もちろんである。Table: Antibacterial Activity of SF-2139 Substance Examples of the method for producing SF-2139 are shown below, but it is of course possible to use many modifications and modification methods not exemplified here.

実施例 ｓｌとしてダクチロスポランギウム・エスピー・ＳＦ　
−２１３９株（値工研受旺誉号第６０４Ｑ号）を用い、
櫨培地としてスターチ２．０チ、グルコース１７１％。Dactyrosporangium sp. SF as example sl
-2139 strain (Value Koken Jewohyo No. 604Q) was used,
2.0% starch and 171% glucose as Haji medium.

小麦胚芽０．６％　、ペプトンＯ，ＳＳ　、イーストエ
キス０．３％　、大豆粉０．２チ、炭酸カルシウム０．
１チを含む培地を用いた。また生産培地として、スター
チ１．５チ、水あめ１．０％　、大豆粉ｔＳ＊　、イー
ストエキス０．１優、リンｉＩｌ第２カリ０．１チ、硫
酸マグネシウム０．１％　。Wheat germ 0.6%, peptone O, SS, yeast extract 0.3%, soybean flour 0.2%, calcium carbonate 0.
A medium containing 1. In addition, the production medium contained 1.5% starch, 1.0% starch syrup, soybean flour tS*, 0.1% yeast extract, 0.1% phosphorous IIl, and 0.1% magnesium sulfate.

塩化コバル）　０．０００１％　、　　炭酸カルシウム
０．１−を含む培地を用いた。A medium containing 0.0001% of cobal chloride and 0.1% of calcium carbonate was used.

イースト麦芽斜面寒天培地に２８℃で１４日間培養した
種１１６〜７白金耳ずつを、前記培地２ｏ−ずつを分注
した１０〇−容三角フラスコ３本に接種し、２８℃で５
日間培養し、＃ｇ１種培養液とした。ついで、種培地８
ｏ―ずつを分注した５００−容の三角７２スコ１０本に
、前記の第１ｆＩＩ培養液４−ずつを接種し、２８℃で
３日間振盪培養し、これを第２１ｍ培養液とした。つい
でこの第２種培養を、３５ｔの生産培地を含む５０を容
のジャー７アーメンターに接檎し２ｇ℃で５日間通気、
攪拌培養した（回転数２５Ｏｒｐｍ　＋通気量３５４／
ｍｉ　ｎ　）。116 to 7 loopfuls of seeds cultured on a yeast malt slant agar medium at 28°C for 14 days were inoculated into three 100-capacity Erlenmeyer flasks into which 20° of the above medium had been dispensed, and the seeds were incubated at 28°C for 55 days.
It was cultured for several days and used as a #g1 seed culture solution. Then, seed medium 8
The above-mentioned 1fII culture solution was inoculated into 10 500-volume triangular 72 tubes, which were each dispensed with 500-volume 72 tubes, and cultured with shaking at 28° C. for 3 days, which was used as the 21m culture solution. This second type culture was then inoculated into a 50 ml jar containing 35 t of production medium in a 7-armenter, and aerated at 2 g°C for 5 days.
Agitation culture was carried out (rotation speed 25 Orpm + aeration volume 354/
min ).

培養終了後、−過助剤を用いて濾過し、得られたＰ液２
５１をダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成）の２５０ｔ
Ｚ１１Ｄカラムに通し有効成分を吸着させた。この塔を
水８００ｗｔ、４０％メタノール水３００−で洗った後
、８０ｔｓメタノールおよび５０嗟アセトンで有効成分
を溶出した。活性区分を合併し、減圧下でメタノールお
よびアセト／を留去した水層（１５０ｍｇ、）Ｋｎ−ブ
タノール１５０−を加え振盪し有効成分を抽出した０ブ
タノ一ル層を減圧濃縮乾固し、褐色の粉末３４０１９を
得、メタノールに溶解し、アルミナ（クエルム）の１０
−の塔にかけメタノールで展開し活性区分を合併し減圧
下でａｍ、乾固し１２０岬の黄褐色粉末を得た。この粉
末を少量のメタノールＫ１１ｊｌ　ＬセファデックスＩ
、Ｈ−２０（ファルマシア）の５０−〇塔Ｋかけメタノ
ールで緻開し、活性区分を減圧下に濃縮するとＳＦ　−
２１３９物質の結晶が析出し、３４ＩＩＩＦをデ取した
。After the completion of the culture, the obtained P solution 2 was filtered using a filter aid.
51 to 250t of Diaion HP-20 (Mitsubishi Kasei)
The active ingredients were adsorbed through a Z11D column. After washing this column with 800 wt of water and 300 wt of 40% methanol water, the active ingredient was eluted with 80 ts methanol and 50 ts acetone. The active fractions were combined and methanol and acetate were distilled off under reduced pressure. Kn-butanol 150- was added and shaken to extract the active ingredients. The 0-butanol layer was concentrated to dryness under reduced pressure to give a brown color. A powder of 34019 was obtained, dissolved in methanol, and 10% of alumina (Quelm) was obtained.
The active fractions were combined and dried under reduced pressure to obtain a yellowish brown powder of 120 capes. Add this powder to a small amount of methanol K11jl L Sephadex I
, H-20 (Pharmacia) 50-0 column K was sparged with methanol, and the active fraction was concentrated under reduced pressure to obtain SF-
Crystals of substance 2139 were precipitated, and 34IIIF was collected.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第１図はＳＦ　−２１３９物質の紫外吸収スペクトルで
、（１）は中性メタノール中、（２）は酸性メタノール
中、（ａｎｔｉアルカリ性メタノール中で、埴ずれも１
０面ｇ鷹の濃度で測定したものである。 第２図はＳＦ　−２１３９物質の赤外部吸収スペクトル
で、臭化カリの錠剤上して測定したものである。 特許出願人　　　明治製菓株式会社 代　　理　　人　　　　　伊　　東　　　守　　忠（ほ
か１名） 手続補正書 特許庁長官　島　１）春　樹　殿 １、事件の表示 昭和　５６年　特許願　第　１２３１９２号３、補正を
する者 事件との関係　　　特許出願人 住所 ４、代理人 ！１１　　特許請求の範囲を下記の通り補正する。 「１．下記の物理化学的特性を有する５Ｆ−２１３９物
質 元素分析：炭素５５．９７重量％、水素５．９５重量％
（窒素、ハロゲン、硫黄、リンを含有 しない。） 融　　点：２２０〜２３０℃（徐々ニ分解）比旋光度：
　　（α）Ｈ”　　＝−１３５°　（ＣＯ，５，ヒｌＪ
ジン） 紫外線吸収スペクトル：第１図に示す（メタノール中）
。 赤外線吸収スペクトル：第２図に示す（臭化カリウム錠
剤法）。 呈色反応：ヨード反応、レミエー反応、塩化第２鉄反応
　　陽性 ニンヒドリン反応　　陰性 外　　観：黄色結晶 中性、酸性、塩基性の区別：溶解性１元素分析値から酸
性物質と考えられる。 シリカゲル薄層クロマトグラフィー：　Ｒｆ　＝０．４
０（クロロホルム：メタノール＝５７１）Ｒｆ　＝０．
８５　（ｎ−ブタノール：メタノール：水＝２　：　１
　：　１） 溶解性　：アルカリ性水、ビリジ仝−ジメチルスルホキ
サイドに５溶。メタノール に可溶。クロロホルム、ベンゼン。 １性水に離溶。 ２、　ダクチロスポランギウム（Ｄａｃｔｙｌｏ−ｓｐ
ｏｒａｎｇｉｕｍ）属に属する抗生物質ＳＦ−２１３９
物質生産菌を培養し、得られた培養物力Ａら抗生物質５
Ｆ−２１３９物質を採取することを特徴とする新規抗生
物質５Ｆ−２１３９物質の製造法。」（２）　　明帽Ｉ
頁１〜２行 「カルシウム・マレート」を「リンフ１酸カルシウム」
と訂正する。 （３）同６頁の表の１．７．１０欄の「少も１」を「少
ない」と訂正する。 （４）同１４頁１１行 「紫外部吸収抗菌スペクトル」を「紫外部、抗菌スペク
トル」と訂正する。 （５）同１６頁９行 「積地」を「培地」と訂正する。 （６）同１８頁２行 「紫外吸収］を「紫外部吸収」と訂正する。 （７）同１４頁３行 「次表」を「第１表」と訂正する。 （８）　　同１５頁１行 「表」を「第１表」と訂正する。 （９）　　同１４頁４行 「（ベーパディスク法）。」の次に下記の語句を挿入す
る。 「嫌気性菌に対するＭＩＣ（ＣＡＭ寒天培地を用いた寒
天希釈法により測定）は第２表に示したとおりであり、
５Ｆ−２１３９物質は有効である。」（１０）　　同１
５買の第１表の次に次表を挿入する。 第２表　嫌気性菌に対するＭＩＣFigure 1 shows the ultraviolet absorption spectrum of SF-2139 substance, (1) in neutral methanol, (2) in acidic methanol, and (anti-alkaline methanol).
It was measured at the concentration of 0-sided g-hawk. FIG. 2 shows an infrared absorption spectrum of SF-2139 substance, measured on a potassium bromide tablet. Patent applicant: Meiji Seika Co., Ltd. Agent: Mori Tadashi Ito (and one other person) Procedural amendments: Director of the Patent Office Shima 1) Haruki Tono1, Indication of the case 1982 Patent Application No. 1231923, Person making the amendment Relationship to the case Patent applicant address 4, agent! 11 The claims are amended as follows. 1. Elemental analysis of 5F-2139 material with the following physicochemical properties: carbon 55.97% by weight, hydrogen 5.95% by weight
(Contains no nitrogen, halogen, sulfur, or phosphorus.) Melting point: 220-230°C (gradual dilysis) Specific rotation:
(α)H” = −135° (CO, 5, Hill J
gin) Ultraviolet absorption spectrum: Shown in Figure 1 (in methanol)
. Infrared absorption spectrum: Shown in Figure 2 (potassium bromide tablet method). Color reaction: Iodine reaction, Remier reaction, ferric chloride reaction Positive ninhydrin reaction Negative Appearance: Yellow crystal Neutral, acidic, basic Distinction: Solubility One element analysis value suggests that it is an acidic substance. Silica gel thin layer chromatography: Rf =0.4
0 (chloroform: methanol = 571) Rf = 0.
85 (n-butanol:methanol:water=2:1
: 1) Solubility: Soluble in alkaline water and pyridine-dimethyl sulfoxide. Soluble in methanol. Chloroform, benzene. Dissolves in monovalent water. 2. Dactylo-sp
SF-2139, an antibiotic belonging to the genus Orangium
The substance-producing bacteria were cultured, and the obtained culture A et al. Antibiotic 5
A method for producing a novel antibiotic 5F-2139 substance, which comprises collecting F-2139 substance. ” (2) Akira I
Page 1-2 lines ``calcium malate'' is changed to ``calcium phosphomonate''
I am corrected. (3) In the table on page 6, in columns 1, 7, and 10, "at least 1" is corrected to "few." (4) On page 14, line 11, "ultraviolet absorption antibacterial spectrum" is corrected to "ultraviolet light, antibacterial spectrum." (5) On page 16, line 9, "loading port" is corrected to "culture medium." (6) On page 18, line 2, “ultraviolet absorption” is corrected to “ultraviolet absorption.” (7) On page 14, line 3, “Next table” is corrected to “Table 1.” (8) On page 15, line 1, “Table” is corrected to read “Table 1.” (9) Insert the following words and phrases next to "(Vapor disc method)." on page 14, line 4. "MIC against anaerobic bacteria (measured by agar dilution method using CAM agar medium) is as shown in Table 2,
5F-2139 substance is effective. ”(10) Same 1
Insert the following table after the first table of 5 buys. Table 2 MIC against anaerobic bacteria

Claims (1)

【特許請求の範囲】 ｓ　　１．　　下記の倫理化学的特性を有する８Ｆ　−
２１３９物質 元素分析：炭素５５．９７重量−１水素５．９５重量％
（窒素、ハロゲン、硫黄、リンを含 有しない。） １０　　　融　　点：２２０〜２３０℃（徐々に分解）
比論光ｆ　：、Ｃａ　入＝　−１３５°　（ＣＯ，５、
ピリジン） 紫外線吸収スペクトル：第１図に示す（メタノール中）
。 １１　　　赤外線吸収スペクトル：第２図に示す（Ａ死
力５リウ五錠剤法）。 呈色反応：！ｉ−ドｆ：：応、レミュー反応、塩化第２
鉄反応　陽性 ニンヒドリン反応　陰性 外　　観：黄色結晶 中性、ｌ！性、塩基性の区別：溶解性１元素分析値から
酸性物質と考えられる。 シリカゲル薄′層り四マトグシフイー：　Ｒｆ　＝　０
．４０（クロロホルム：メタノール≠５： １）　　　Ｒｆ　＝ＯＪ５（ｎ−ブタノール：メタノー
ル：水ミ２：１：１） 湊解性：アルカリ性水、ピリジンジメチルスルホキサイ
ドに易溶。メタノールに 可溶。クロ筐ホルム、ベンゼン、酸 性水に離溶。 ２、　　／　？　ｆ　ＨＸ　ホ９７キ’；Ｉ　Ａ　（Ｄ
ａｅｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇｌｕｍ）属に属する抗生物
質ＳＦ　−２１３９物質生産薗を培養し、得られた培養
物から抗生物質ＳＦ　−２１３９物質を！Ｉｉ取するこ
とを特徴とする！＃凰抗生物質８Ｆ　−２１３９物質の
製造法。[Claims] s1. 8F- with the following ethical and chemical properties:
2139 material elemental analysis: carbon 55.97 weight - 1 hydrogen 5.95 weight %
(Contains no nitrogen, halogen, sulfur, or phosphorus.) 10 Melting point: 220-230°C (gradually decomposes)
Comparative light f:, Ca input = -135° (CO,5,
Pyridine) Ultraviolet absorption spectrum: Shown in Figure 1 (in methanol)
. 11 Infrared absorption spectrum: Shown in Figure 2 (A-5-tablet method). Color reaction:! i-do f::reaction, Lemieux reaction, second chloride
Iron reaction Positive ninhydrin reaction Negative Appearance: Yellow crystal neutral, l! Distinction between basicity and basicity: It is considered to be an acidic substance based on the solubility single element analysis value. Silica gel thin layer four-layer material: Rf = 0
．． 40 (Chloroform:methanol≠5:1) Rf = OJ5 (n-butanol:methanol:water 2:1:1) Solubility: Easily soluble in alkaline water and pyridine dimethyl sulfoxide. Soluble in methanol. Dissolves in chloroform, benzene, and acidic water. 2./? f HX Ho97 Ki'; I A (D
The antibiotic SF-2139 substance belonging to the genus Aetylosporanglum is cultured, and the antibiotic SF-2139 substance is produced from the obtained culture! It is characterized by taking Ii! #Production method of antibiotic 8F-2139 substance.