JPS58225029A - う蝕簡易判別用具 - Google Patents

う蝕簡易判別用具

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JPS58225029A
JPS58225029A JP57106389A JP10638982A JPS58225029A JP S58225029 A JPS58225029 A JP S58225029A JP 57106389 A JP57106389 A JP 57106389A JP 10638982 A JP10638982 A JP 10638982A JP S58225029 A JPS58225029 A JP S58225029A
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澁谷　睦
Kiyoyuki Matsumoto
松本　清幸
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Showa Yakuhin Kako Co Ltd
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/521—Single-layer analytical elements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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    • C12Q2304/20—Redox indicators
    • C12Q2304/22—Resazurin; Resorufin
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
本発明はう蝕予防またけう蝕治療に際し当人父は患者の
り独活動性を簡易に判別（２うる方法及び用具に関する
。 従来から歯科の臨床または口腔衛生の立場からう蝕の罹
恵性または進行状態を判別する手段として口腔内の唾液
または歯垢中の微生物特に細菌例えばヌトレプトコツカ
スミュタンス（以下Ｓ、ｒｎｕｔａｎｓと略記する）や
ラクトバチルス（乳酸Ｗ４）’Ｉどの菌数や活動性を検
査する方法が種々報告されている。出願人は一般細菌を
対象として取得した特許第５３９（１１１号（％公昭４
５−１９８１７号公報）において細菌が特定の薬剤を禁
色させることを利用した迅速判別法を開示［またが該特
許発明を要約すれば薬剤として（イ）レサズリン、（ロ
）ネオテトラゾリウム塩化物又は（ハ）トリフェニルテ
トラゾリウム塩化物の一定量を培養液（微生物増殖の学
舎Ｓ）に添加し、骸液に試験紙を浸し、乾燥したも　　
　、・者のを試験用小紙片とし、これに供試用細菌浮遊
液の一定容量１に核試験片に滴下した後に３７℃で一定
時間培養
【２肢試験片の色調変化により該細菌浮遊液中
の細菌の活動性を判別する方法を特徴としたものである
。 一方う独活動性の判別法について種々報告されている近
時の祖父江鎮雄他〔小児歯科学雑誌、１８　（３）　６
０６〜６１１．１９８０）の報告を要約すれば次の通り
である。即ち口腔内より採取した歯垢を生理食塩水に懸
濁したものの一定容量（Ｏ，１Ｖ）を検体とする。別に
調製したショ抛１０係ブロムチモールブルー（ｓ、ｖ、
ｓ　）　０．００６係、窒化三ナトリウム（Ｎａ５Ｎ　
）　　０　、０５％、ｐＨ７，２とした液を製し、これ
に先の検体を接種してこれを３７℃に３０分間放着する
。該液の色調は黄緑色、淡鹸緑色、黄色に変化するので
これを陰性、疑陽性、陽性と読みかえる。並行的に行っ
た従来の培養による試駆の変化と比較した場合に小児う
蝕罹恵状勅と高度な正の相関性が統められたとしている
。更に下野勉他〔口腔衛生学会雑誌、３０　（４）昭和
５５年１２月〕は幼稚園児を対象として口腔内診査を行
った際の判別法およびその結果を次の曲り述べている。 　ｆｊ＋］ち呈色指示薬はレサズリン、メチルレッド、
アリザリンレッド、ラクモルト、ブロムクレゾールグリ
ーン、ブロムフェノールブルー等であってこれらを含む
指示薬０　、００３％、ショ糖１０係、Ｎａ５Ｎ　　Ｏ
、０５１からなる培養液に歯垢の生理食塩水浮遊液の一
定容量を接種した本のを３７℃で３０分間培養してその
培養液の色調変化によりう独活動性の判別を行った結果
、幼稚園児のり蝕罹患歯率と高い正の相関関係が認めら
れたとしている。なお上記薬液に用いられているこれら
指示薬のうちでレサズリンの色調変化が最も鮮明である
ことが記載さり、でいる。上記のようにう独活動性の判
別法として用いるレサズリンが有効な指示薬であること
は種々の報告において認められている。これらはいずれ
も簡易法とされる方法であるけれども湿式法であってレ
サズリン父はｐＨ指示薬を含む少邑の発色液に唾液又は
歯垢を加えろ７でに加温して３０分後の変色を検するも
のである。実際臨床には普及していない。従って最も一
般的な従来技術のり蝕活動試験の方法は唾液０．１〜０
．２ｄ又は、歯垢を採取しこれを３−位の培地に混和し
％３７’６のふ卵器中で２４〜７２時間培養することか
らなる湿式法である。この方法は全国的に普及している
。 本発明者叫はレサズリンを用いたう独活動性の＃！（ｉ
別法を更に簡易化し、しかも短時間に判別可能な方法に
ついて検討した結果湿式法によらない乾式法としての本
発明に到達した。すなわち本発明は唾液または歯垢中の
り蝕に関与する菌のり独活動性を呈色試薬組成物含有の
乾燥状の試験片例えば試験紙により簡単に短時間に湿式
法によることなく判別する方法及び用具の提供が目的で
ある。 本発明の用具の一具体例においてはショ糖とレサズリン
とを含んだ薬液を製し、これに浸し乾燥した円形または
方形の小紙片を台紙上に配置【７、該小紙片をサンドイ
ッチ状に挾む形で別に粘着剤を内側に塗布した円形又は
方形の液種用フィルムで重畳し、或は小紙片を粘着剤と
接触させないようにする場合には粘着剤を内（０１１周
辺部のみに塗布した円形名は方形の被覆用フィルムで重
畳し、史にこれらとは別に支持用フィルム（小紙片と被
覆用フィルムとを試験時に支持するフィルム）を同じ台
紙上に並べて配置１〜、支持用フィルムも液種用フィル
ムも剥離可能に台紙に粘着し貼り付いて形成されたこと
を特徴とする。 本発明の判別用具の一具体例を示す図面の譲１図におい
て記号１は薬液を浸み込捷せ乾燥【また径５〜ＩＱｌｌ
１１の円形父はｍｍ４Ｕ以上の方形の小紙片であり、杉
小紙片の材質は一般に使用するｐ紙好ましくは厚味的０
−８′ｍｊａＪｙ下のＰ紙である、これを周辺部内側２
Ａに粘着剤を有する被榎用フィルム２で覆い、これらと
並べて支持用フィルム３を台紙４上に剥離可能に粘着さ
せて配置する。但し被覆用フィルムの内側全面に粘着剤
を施しておけは小紙片の片側は常に被援用フィルムの内
側に固定されたままと、なるので試験時に取扱上便利で
１ あることが多い。このように形成すると使用前の小紙片
】は完全に外気と遮断され空気もηＣ通せず、その上無
菌的に保持されるのである。支持用フィルム３はサイズ
と［、て径５〜１ｏｃｒｎの円形又はこの稈塵の面積の
刃形成は矩形でありフィルム２は、径３〜５　Ｃ７ｎの
円ｔＳ又はその稈度の面積の方形が考えられる。台紙の
太さはフィルム２とフィルム３とが並置され得るに十分
な太さである。なお、こ力らフィルムは透明有機樹脂又
は透明プラスチック製である。 噺　　　　次に小紙片１に使用する薬液はショ糖１ｏ重
量係及びレサズリン、トリフェニルテトラゾリウム父は
メチルオレンジ或はこれらの塩類の０．０１〜０．００
５重量係、好適にはレサズリン０．００３重ｆチを有す
る試薬組成物水溶液からなっている。 この場合のレサズリンは呈色指示薬であり、前記の浦り
例えばＳ、ｒｍＪｔａｎ５のり独活動性は本指示薬の色
調変化により間接的であるが容易に判別できる。これを
詳しく説明すれば、唾液父は歯垢の中にけう蝕の主因を
なすといわれるＳ、ｍｕｔａｎＳ及び乳ｒｇ、菌尋が多
く、特にＳ、ｍｕｔａｎｓの酵素は培養薮中ニおいてシ
ョａ！ｌを縮合させてグルカン（デキストラン）を作る
。糖は又酵素的に乳糖に迄分解される。この活発な酵素
反応、酸化還元電位の変化。 液性の低下尋に基いてレサズリンｄ色調が変化するもの
と考λられる。例えば色調が紫色、育紅色。 紅色と検液により変化する。後記の実施例に示されるよ
うにこの色調変化とり独活動性とは相関する。従ってこ
れによりう独活動性を判定できるのである。指示薬と１
．てトリフェニルデトラゾリウムの塩化物を使用し上記
同様に製しｆｃ、場合に色調は紅色より無色に変化する
。この色の変化はう独活動性の陰性から陽性への変化に
対応する。父指示集と１．てメチルオレンジを使用した
場合には色調は黄緑色から赤黄色に変化する。この場合
のう独活動性は陰性から陽性への変化に対応する。これ
らの指示薬の中ではレサズリンの色真ＩＭ変化が最も鮮
明であって段階的に変色し、肉眼的に判別し易いことか
ら指示薬としてレザズリンを主として使用することが望
ましい。 次にフィルム２に塗布される粘着剤は合成ゴム等を主体
としたものであるが支持用フィルム３や台紙４より常温
で容易に脱着でき、かつ舟び小紙片ととこれを加温器材
即ち例えば金楕、木材、プラスチック等の培養のための
加温器材に付着させ得るものであれば十分である。すな
わち唾液や歯垢を浸まぜた小紙片は空気補給を可及的に
遮断し唾液中の水分の蒸発を防止したまま１０〜１５分
間３７℃に培養しなければならず１本発明の用具は簡便
な小器具であるから加温器材の代用物としての人体皮膚
の表面にフィルムごと貼りつけて加温してもよい。従っ
てフィルムの接着剤としては人体の皮膚を害１−ないも
のを選択することが望ま【７い。なお支持用フィルム３
を加温器材又は人体皮膚面に貼りつけることをせず、加
温器内に収納するル、一様で使用する場合には支持用フ
ィルム３は接着剤を有せずともよい。 本発明の判別用具を使用するためには唾液をスポイトな
どで僅少量通常は一滴採取（−１別に用具の台紙からフ
ィルム２を半ば剥がしながら、中の小紙片１にスポイト
のＩ！！！液を落しこれが十分均一に浸み広がった後に
フィルム２で小紙片］を覆った捷１の状輸で支持用フィ
ルム３上に粘着貼布せしめる。フィルム２がその内面周
辺に粘着剤を有する場合を第２図に示す。小紙片ｌと液
種用フィルム２とを支持した′１１着の状態の該支持用
フィルム３ｔ一台紙４から剥がしこれを加温器表面又は
その代用物としての人体の適当な露出部に貼布１．て１
５分後に小紙片１の色、、＃！変化を観察する。この色
調変化即ち青色、紫紅色、紅色への変色に応じてう独活
動性は陰性、弱陽性、陽性と判別する。 ３７℃内外の培養温度の維持のため加温器代用としてヒ
トの体温を利用できることに本用具の使用特徴がある。 被覆用フィルム２の内面全部に粘着剤を有する場合には
これを半ば剥がｔまたときに中の小紙片１はそのｐ面が
フィルム２に接着されているのでその裏面全露出するこ
ととなり、従ってこの裏面に対して唾液を添加すること
となる。唾酵浸潤後にフィルム２と共に、：・・小紙片
１を台紙４から剥がし、これらを支持用フィルム３上に
接着させる。この　　　パ状態を第３図に示す。支持用
フィルム３と共に台紙４から剥がしてこれらを加温器表
面又はその代用物と］２ての人体露出部表面に貼り付け
る。貼り付けずに加温器内へ収納する場合には台紙４か
ら支持用フィルム３を剥がすことなく台紙４と共に加温
器内へ収納してもよい。 以上の事から本発明の判別用具はう蝕罹患者はもとより
、特に幼時のう蝕予防父は治療対策としてこれを用いう
独活動性を簡易にしか本短時間に判別でき、更に製造も
容易であるためコストも低く供給することができる。 次に実施例を示す。 実施例 レサズリン０．０２５重量係とショ糖１０Ｍ量係との水
溶液に肉径８ｕの戸紙片を浸漬し乾燥することにより判
別用の小紙片１（ディスク）を製造り、　ｆｒ、これを
内面全部に粘着剤を有する直径４副の透明プラスチック
被覆用フィルム２でＷｔｎ、４　、５ＱｎＸ　４　、５
ｃｍの方形透明プラスチック製支持用フィルム３（裏面
に粘着剤を有する）と並置して５ｃｍ×１０ｃｍの矩形
台紙４に貼り＋１け、これを透明プラスチック製の包装
用のサツシュ又ハ小型ポリ袋に入れてヒートシールした
ものを１個の一回使用分の製品とした。 試験例 唾液検体は被検各人のＩ！！！液をミニカップに採取り
、　コ；ｈ　７５．らプラスチックス７１？イトで一滴
（およそ０．０５ｍ１）’ｅ取り、本用具のフィルム２
をけいで露出させ父は取出【、た青色のディスク（小紙
片）１に十分浸透させてからこれらを支持用フィルム３
へ貼り付ける。これらを台紙４から剥がし、これを被検
者の腕部に貼付して１５分後にディスク１０色調変化を
検した。これを従前の検査法としてのＳＴメディア使用
の場合及びＭＳＢＢ使用の場合と比較した結果を第１表
に示す。 第１表 １　　　周　　３５　　　＋１−４−　　　　４＋　　
　　　−１−）＋２　　　男　　３４　　　４＋１−　
　　　　　十　　　　　月＋５　　女　　５２　　−１
−＋＋　　　　　−＋−４−＋＋＋６　　　　男　　　
２７　　　　−Ｈ＋　　　　　　　十−１−）−１−７
列　　２５　　　＋　　　　　十　　　　　丑８　　勇
　　２４　　　−１＋　　　　　　−→斗１１　　女　
　２３＋　　　　　　＋−１−＋＋１２　　９４　　２
８　　　−　　　　　−　　　　　升１６　　　　女　
　　２８　　　　　＋　　　　　　　　十　　　　　　
　−１＋１４　　女　　３１　　　−　　　　　−　　
　　　　＋１５　　女　　２４　　　−　　　　　−　
　　　　−１６　　女　　２３　　　−　　　　　−　
　　　　−１７　　　男　　４５　　　　−　　　　　
　−　　　　　　−１８　　　男　　２７　　　　　＋
　　　　　　　−−嘴 注１　歯科医師の診査によって個人のう蝕の状態をＡ：
悪い、Ｂ：普通、Ｃ：良いの３段階に判定した。 注２　本判別用具の変色の程度より次のようにう蝕を判
定した。白色〜紅色（−＋−）−＋−）　：強い、僅淡
紅色〜淡紅色〜紅色（＋父は−Ｈ−）：弱い、紫色〜青
色（−）：なし 注３　市販のり独活動性試験用セツ）ｒｓＴメディア■
」（昭和薬工）、これを用い唾液を検体として使い、唾
液中に含１れるう蝕関連菌：酸産生菌をｐＨの低下で検
する、注４　　ＭＳ８Ｂ（ミチスサリバリウスバシトラ
シン培地、商標名「ミューカウント１昭和薬工）。う蝕
の原因菌であるストレプトコッカスミュタンスの同定培
地。 本例の結果によれば成人のり蝕罹患率と本用具の色調変
化に基く判定とは正の相関性を明確に示　　　　゛して
いる。 このことから本用具はその使用が簡単でしかも短時間に
湿式法によらず乾式で、容易にう独活動性を判別するた
めに有効であることが分る。
【図面の簡単な説明】
第１図は発明の判別用具の平面図、第２及び３図は同用
具の使用時の側面図を示したものである。 記号１・・・本発明による試験用乾燥状小紙片、２・・
・被覆用フィルム、２Ａ・・・フィルム２の粘着剤を有
する内側周辺部、３・・・支持用フィルム、４・・・台
紙。 第１図 第２図 第３図 手　　続　　補　　正　　書 １．事件の表示　昭和５７年特許願第１ｏ６３どり号２
・　発明の名称　　　　う蝕簡易判別方法及び用具３　
補正をする者 事件との関係　　出願人 ４゜代理人 ５　補正命令の日イ、」　　　自　　発６・ ８、補正の内容 （１）特許請求の範囲を別紙の通りに補正する。 （２）明細Ｖ第り頁ど〜７０行の１次に・・・・・０．
０／“を次のように補正する。 「　次に小紙片１に使用する薬液はショ糖１０重葉％及
びレサズリン、トリフェニルテトラゾリウム、ネオテト
ラゾリウム、”２１６−ノクロルフエノールインドフエ
ノール又ハメチルオレンノ或はこれらの塩類のθ０ｊＪ
−１１ ％許請求の範囲 （１）唾液中のり触発化原因微生物の多少を判別するだ
めの試薬組成物を乾燥状態で保持する試験片に対し被検
唾液の一滴又は僅少量を浸潤させ、この浸潤物を空気補
給遮断下に唾液中水分の蒸発を防止した状態で定温付近
に短時間保持して唾液包廟試薬紹成物の色調変化を測定
することを特徴とする湿式によらないう蝕簡易判別方法
。 （２）　　試薬組成物がレサズリン、トリフェニルテト
ラゾリウム、ネオテトラゾリウム、２，６−シクロルフ
エノールインドフエノール又ハメチルオレンジ或はこれ
らの塩類とショ糖とよりなることを特徴とする％ＰＦｔ
−請求の範囲縞（１）項に記載の方法。 （３）　　試験片が小紙片であることを特徴とする特許
請求の範囲第（１）項に記載の方法。 （４）定温が３７℃付近で保持時間がｌｊ分間程度であ
ることを特徴とする特許請求の範咄第（１）項に記載の
方法。 （５）定温が室温（，２０℃付近）で保持時間が２０〜
３０分間程度であることを特徴とする特許請求の範囲第
（１）項に記載の方法。 （６）唾液中のり触発化原因微生物の多少を判別するた
めの試薬組成物を溶解した薬液に浸してから乾燥した適
宜の形状の小紙片；この小紙片を載せるための台紙；台
紙上の小紙片を僚い固定するだめの被覆用フィルムであ
ってその内側全体に粘着剤を塗布されるか又はこの小箱
“枠上に粘着剤が付着しないように内側周辺部のみに粘
着剤を窪布されていて台紙から剥離１ｌｌｉ］能に小紙
片に重畳された該被覆用フィルム；及び被覆用フィルム
で被覆された該小紙片と並べて同じ台紙に剥離可能に貼
り付けられた支持用フィルムから形成されたことを特徴
とするう触簡易判別用具。 （７）　　ｉ［がレサズリン、トリフェニルテトラゾリ
ウム、ネオテトラゾリウム、２１乙−ジクロルフェノー
ルインドフェノール又ハメチルオレンジ或はこれらの塩
類のθＯｊ〜０．００３重量％とショ糖１０重葉％とよ
りなることを特徴とする特許請求の範囲第（６）項に記
載の用具。 （８）　　フィルムが何れも透明の有機樹脂又は透明グ
ラスチック物質よりなることを特徴とする特許請求の範
囲第（６）項に記載の用具。 （９）　　適宜の形状が円形、方形又は矩形であること
を特徴とする請求 具。

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）唾液中のり蝕発生原因微生物の多少を判別するた
    めの試薬組成物を乾燥状態で保持する試験片に対し被検
    唾液の一滴又は僅少量を浸潤させ、この浸潤物を空気補
    給遮断下に唾液中水分の蒸発を防止した状態で定温付近
    に短時間保持して唾液含有試薬組成物の色調変化を測定
    することを特徴とする湿式によらないう蝕間易判別方法
    。
  2. （２）試薬組成物がレサズリン、トリフエ；ルテトシゾ
    リウム又はメチルオレンジ或はこれらの塩類とショ糖と
    よりなることを特徴とする特杵晴求の範囲第（０項に記
    載の方法。
  3. （３）試験片が小紙片であることを特徴とする特許請求
    の範囲第（１）央に記載の方法。
  4. （４）定温が５７Ｃ付近で保持時間が１５分間程度であ
    ることを特徴とする特許ｌｔ＃求の範囲第（］）項に記
    載の方法。 嘴
  5. （５）定温が室温（２０℃付近）で保持時間が２０〜３
    ０分間程度であることを特徴とする％＃’Ｆ＃１１求の
    範囲第（１）項に記載の方法。
  6. （６）唾液中のり触発生原因像生物の多少を判別するた
    めの試薬組成物を溶解した薬液に浸してから乾燥した適
    宜の形状の小紙片；この小紙片を載せるための台紙；台
    紙上の小紙片を覆い固定するための被覆用フィルムであ
    つ°Ｃその内側全体に粘着剤を塗布されるか又はこの小
    紙片上に粘着剤が付着しないように内側周辺部のみに粘
    着剤を塗布されＣいて台紙から剥Ｍ　＝ｒ能に小紙片に
    重畳された該被覆用フィルム：及び被覆用フィルムで被
    覆された該小紙片と並べて同じ台紙に剥離可能に貼り付
    けられた支持用フィルムから形成されたことを特徴とす
    るう蝕簡易判別用具。
  7. （７）　　薬液がレサズリン、トリノエニルナト＞ｌｖ
    ウム又はメチルオレンジ或はこれらの１ｊＩＬＭの０．
    ０１〜０．００５重ｉｔｓとショ糖１０１１ｉｉチとよ
    りなることを特徴とする特許−求の範囲第（６）項に記
    載の用具。
  8. （８）　　フィルムが何れも透明の有機樹脂又は透明プ
    ラスチック物質よりなることを特徴とする特詐紬求の範
    囲第（６）項に記載の用具。
  9. （９）　　適宜の形状が円形、方形又は矩形であること
    を特徴とする特許請求の範囲第（６）項に記載の用具。
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