JPS58222022A - Synthetic pulmonary surface active substance and remedy for respiratory distress syndrome (rds) containing the same as active constituent - Google Patents

Abstract

PURPOSE:A synthetic pulmonary surface active substance, containing a phospholipid phosphatidylcholine and cardiolipin, and easily available compounds as constituents, and having a specific surface activity without containing foreign proteins. CONSTITUTION:A synthetic pulmonary surface active substance containing 55- 80wt% phospholipid phosphatidylcholine of formula I (R1 and R2 are fatty acid group), preferably a compound in which 80wt% or more thereof is a compound of formula I (R1 and R2 are 14-20C straight chain saturated fatty acid residue), e.g. diplamitoyl phosphatidylcholine, and 20-45wt% cardiolipin of formula II(R1'-R4' are fatty acid group), preferably most of R1'-R4' are 14-20C straight chain fatty acid residuess, and 30wt% or more thereof are unsaturated fatty acid residues as main constituents. In the practical administration as a pharmaceutical, 1pt.wt. substance is used with 2-50pts.wt. pharmacologically acceptable water-soluble powdery substance, e.g. an amino acid or a saccharide, as an excipient, and the resultant pharmaceutical is preferably administered as the powdery synthetic pulmonary surface active substance.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、天然の肺表面活性物質と類似した表面活性を
有する合成肺表面活性物質及びそれを有効成分とする呼
吸窮迫症候群治療剤に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a synthetic pulmonary surfactant having surface activity similar to that of a natural pulmonary surfactant, and a therapeutic agent for respiratory distress syndrome containing the same as an active ingredient.

動物の肺胞には、肺表面活性物質と称するリン脂質を主
成分とする生理活性物質が存在する。In the alveoli of animals, physiologically active substances mainly composed of phospholipids, called pulmonary surfactants, are present.

これは肺胞の内壁を覆い、肺胞上皮保護作用を有すると
共に、動物が呼吸機能を維持する上に重要な生理的機能
を有している。即ち、肺表面活性物質は、呼気時、吸気
時における肺胞内面の表面張力を変化させると云った特
異な表面活性を有しており、肺胞相互間の安定性に寄与
して、抗無気肺作用を示すと云われている。Ｐｉｂ　ｓ
面活性物質については、従来櫨々の動物について多くの
研究がなされ、その全貌が明らかにされつつある。即ち
、この活性物質は、その成分としてリン脂質、中性脂質
、蛋白質等を含み、主成分はリン脂質の一つであるジパ
ルミトイルレシチンであることが知られている。It covers the inner wall of the alveoli and has a protective effect on the alveolar epithelium, as well as an important physiological function in maintaining the respiratory function of animals. In other words, lung surfactants have a unique surface activity that changes the surface tension on the inner surface of the alveoli during exhalation and inspiration, contributing to the stability between alveoli and causing anti-inflammatory properties. It is said to have a pneumolung effect. Pibs
As for surface-active substances, much research has been done on wild animals, and the full picture is beginning to be clarified. That is, it is known that this active substance contains phospholipids, neutral lipids, proteins, etc. as its components, and its main component is dipalmitoyl lecithin, which is one of the phospholipids.

最近、藤原らは生柿より抽出した活性物質にジパルミト
イルレシチン等を添カロして、人工的により活性の高い
肺表面活性物質を得、これを用いて新生児呼吸窮迫症候
群（ＩＲＤＳ　）に経気道的に補充療法を行って良好な
結果を得たことを報告している（小児科臨床、第３２巻
、第７号、第１３４３頁）。Recently, Fujiwara et al. added dipalmitoyl lecithin etc. to the active substance extracted from raw persimmons to artificially obtain a more active pulmonary surfactant, and used this to treat neonatal respiratory distress syndrome (IRDS) through the airway. reported that good results were obtained by supplementation therapy (Pediatrics Clinic, Vol. 32, No. 7, p. 1343).

また、小林らは豚の肺洗浄液より活性物質を分離、更に
活性を高める為にＯａ”＋を共存させた肺表面活性物質
を！ｉｌｌ製し、ＩＲＤＳの補充療法を行い成功してい
る（日本界面医学会雑誌、第２巻第１号（１９８１））
。In addition, Kobayashi et al. separated the active substance from pig lung lavage fluid, produced a lung surfactant substance with Oa''+ coexisting in order to further increase the activity, and successfully performed IRDS replacement therapy (Japanese). Journal of the Society of Interface Medicine, Volume 2, No. 1 (1981))
.

これらの方法においては天然の肺表面活性物質からＦｏ
ｌｃｈ　ｌｋ　、即ち、クロロホルム−メタノール混合
浴剤等で有機溶剤可溶部を抽出する方法により脂質部を
抽出して、牛や豚に由来する異種蛋白質を除去している
ものの、その除去は完全ではなく、１〜３９６前後の異
種蛋白の混入が認められている。また、天然よし得られ
た肺表面活性物質の中には通常の血清蛋白とは異る肺固
有の蛋白の存在がＫｉ　ｎｇらによっても認められてい
る（　Ｋｉｎｇ　８．Ａ＋ｎ、　Ｊ、Ｐｈｙｏｉｏｌ、
　２２±７８８〜？９５．１９７３．　Ｆｅｄ、Ｐｒｏ
ｃ、　３３２２３８〜２２４１．１９７４）。In these methods, Fo
Although foreign proteins derived from cows and pigs are removed by extracting the lipid part using a method of extracting the organic solvent-soluble part using a chloroform-methanol mixed bath agent, etc., the removal is not complete. However, contamination with foreign proteins around 1 to 396 has been observed. In addition, King et al. also recognized the presence of lung-specific proteins, which are different from normal serum proteins, among naturally obtained pulmonary surfactant substances (King 8. A+n, J, Phyoiol.
22±788~? 95.1973. Fed, Pro.
c, 332238-2241.1974).

これは分子量が３４．　Ｑ　ＯＯＯものが主成分で疎水
性のアミノ酸を多電に含む脂溶性蛋白であることが知ら
れている。このような事実からして上記の如く、天然の
肺表面活性物質からＦｏｌｃｈの方法により有機＃糺刃
溶部を抽出することにより肺表面活性物質を調製するこ
とは必要なリン脂質、中性脂質等のみならず肺固有の蛋
白も抽出され、その混入は免れないと考えられる。そし
て動物由来の蛋白の混入は抗原性を発現し、アナフィラ
キシ−等の副作用が惹起される可能性があり、肺表面活
性物質の医薬品化を考えた　　　）。This has a molecular weight of 34. Q OOO is known to be a fat-soluble protein containing hydrophobic amino acids as its main component. Based on these facts, as mentioned above, it is necessary to prepare a lung surfactant by extracting the organic #adhesive solution from a natural lung surfactant by Folch's method. Not only lung-specific proteins but also lung-specific proteins were extracted, and their contamination is considered inevitable. In addition, contamination with animal-derived proteins may develop antigenicity and cause side effects such as anaphylaxis, so we considered commercializing lung surfactant substances.

場合、これらは好ましくない。If so, these are not preferred.

以上の如き欠点を改良するために、０．Ｊ。In order to improve the above drawbacks, 0. J.

Ｍｏｒｌｅｙらは異種蛋白を含まない合成肺表面活性物
質の調製を試み、未熟児呼吸窮迫症候群に適用し、臨床
的に成功している（　Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ　。Morley et al. attempted to prepare a synthetic pulmonary surfactant free of foreign proteins and applied it to respiratory distress syndrome of prematurity with clinical success (The Lancet).

Ｊａｎｕａｒｙ　１０　、１　’１８１　）。　この合
成肺表面活性物質は、ノパルミトイルホス７アチジルコ
リンとホスファチジルグリセロールを重量比７対３の割
合で含有する粉末状のものである。この製剤に使用され
るジパルミトイルホ責ファチジルコリンは合成品でもよ
いが、ホスファチジルグリセロールハ、卵黄からホスフ
ァチジルコリンを分離し、それを更に酵素ホスフォリパ
ーゼＤによりグリセロール体に変換、精製したものであ
り、その脂肪酸残基は非常に°複雑な組成で一定なもの
は得がたく、再現性に乏しいと云う欠点がある。また、
その合成も繁雑で工業的規模での供給は極めて難しい。January 10, 1 '181). This synthetic pulmonary surfactant is a powder containing nopalmitoylphos-7-acylcholine and phosphatidylglycerol in a weight ratio of 7:3. The dipalmitoylphotidylcholine used in this preparation may be a synthetic product, but phosphatidylglycerol is obtained by separating phosphatidylcholine from egg yolk and then converting it into a glycerol form using the enzyme phospholipase D and purifying it. The disadvantage is that the fatty acid residues have a very complex composition, making it difficult to obtain a constant composition, and that reproducibility is poor. Also,
Its synthesis is complicated and it is extremely difficult to supply it on an industrial scale.

本発明者らは、異種蛋白を含まず、入手容易な化合物を
成分とし、そして肺表面活性物質特有の特異的な表面活
性を有する合成肺表面活性物質を開発すべく鋭意検討の
結果、ホスファチジルコリンと動、植物の組織中に広く
分布するカルシオリビンを基本組成とすることにより高
い表面活性が得られることを見い出し、本発明に到達し
た。The present inventors have conducted intensive studies to develop a synthetic pulmonary surfactant that does not contain foreign proteins, is composed of readily available compounds, and has a specific surface activity unique to pulmonary surfactants. We have discovered that high surface activity can be obtained by using calciolibin, which is widely distributed in animal and plant tissues, as the basic composition, and have arrived at the present invention.

即ち、本発明は、リン脂候ホスファチジルコリンとカル
シオリビンを主成分とし、咳ホスファチジルコリンが全
体の５５〜８０重ｔ＊を占めることを特徴とする合成肺
表面活性物質である。That is, the present invention is a synthetic pulmonary surfactant characterized in that the main components are phospholipid phosphatidylcholine and calciolibin, and cough phosphatidylcholine accounts for 55 to 80 weight tons* of the total.

本発明にお叶るリン脂質ホスファチジルコリンとは、下
記一般式Ｅｌ）で表わされる化合物でおる。The phospholipid phosphatidylcholine that can be used in the present invention is a compound represented by the following general formula El).

υ （Ｒ＋とＲ２は脂肪酸基を表わす。） リン脂質ホスファチジルコリンは、天然よ抄得られたＬ
一体或いは合成法で得られたｌ７Ｌ一体等いずれであっ
てもよい。ホスファチジルコリンの８０重量％以上は、
炭素数１４〜２０個の直鎖の飽和脂肪酸残基を２個（式
（１）のＲ，とＲ２）有するものであるのが好ましい。υ (R+ and R2 represent fatty acid groups.) Phospholipid phosphatidylcholine is extracted from natural L.
It may be either a single piece or a single piece of l7L obtained by a synthetic method. More than 80% by weight of phosphatidylcholine is
It is preferable to have two linear saturated fatty acid residues having 14 to 20 carbon atoms (R and R2 in formula (1)).

これらの例としては、シミリストイルホスファチジルコ
リン。Examples of these are simyristoylphosphatidylcholine.

ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアリルホ
ス７アチジルコリン等があり、特にジパルミトイルホス
７アテジルコリンが好ましい。Examples include dipalmitoylphosphatidylcholine and distearylphos-7-acylcholine, with dipalmitoylphos-7-acylcholine being particularly preferred.

本発明におけるカルシオリピンとは、下記一般式［［１
）で表わされる化合物である。Calciolipin in the present invention refers to the following general formula [[1
) is a compound represented by

（ｉｔ’、、　Ｒ’ｌ　、　Ｒ’、　、　Ｒ’、は脂肪
酸基を表わす。）カルシオリピンは天然或いは合成いず
れに由来するものでもよく、天然のものは、牛、馬、豚
等の動物の心筋、肺、腎等の臓器より抽出される。会成
品は、例えばＶａｎ　Ｄｅｅｎｅｎらの法（Ａｄｖａｎ
ｃｅｓ　ｉｎ　ｌ１ｉｐｉｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　Ｐ
１６７、　ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ（１９６４））
により合成される。いずれの場合に於ても不飽和脂肪酸
（残）基を含むものである。即ち、式（ｎ）に於けるＲ
Ｓ　Ｉ　Ｒ’２　、　Ｒ／ｌ、　ｎｉ、はほとんどが炭
素数１４〜２０からなる直鎖の脂肪酸基であり、そのう
ち３０重量％以上が不飽和脂肪酸基であるのが好ましい
。不飽和脂肪酸としては、ミリストオレイン酸、パルミ
トオレイン酸、オレイン酸、エライジン酸等のモノエン
体、或いはリノール酸、リルン酸、エレオステアリン酸
、アラキドン酸等のポリエン体がある。(It', , R'l, R', , R' represent fatty acid groups.) Calciolipin may be derived from either natural or synthetic sources, and natural ones include those derived from animals such as cows, horses, and pigs. Extracted from organs such as myocardium, lungs, and kidneys. For example, the method of Van Deenen et al.
ces in l1ipid Re5earch, P
167, Academic Press (1964))
is synthesized by In either case, it contains an unsaturated fatty acid (residue) group. That is, R in formula (n)
S I R'2, R/l, ni are mostly linear fatty acid groups having 14 to 20 carbon atoms, and preferably 30% by weight or more of them are unsaturated fatty acid groups. Examples of unsaturated fatty acids include monoenes such as myristoleic acid, palmitoleic acid, oleic acid, and elaidic acid, and polyenes such as linoleic acid, linuric acid, eleostearic acid, and arachidonic acid.

本発明の合成肺表面活性物質の主成分は、前記リン脂質
ホスファチジルコリンとカルシオリピンであるが、その
量比は前者が５５〜８０重量％で後者が２０〜４５重量
％である。その他に、表面活性を低下させない範囲で若
干のリン脂質、中性脂質、コレステロール、炭水化物等
を含有していてもよい。The main components of the synthetic pulmonary surfactant of the present invention are the phospholipid phosphatidylcholine and calciolipin, with the ratio of the former being 55 to 80% by weight and the latter being 20 to 45% by weight. In addition, some phospholipids, neutral lipids, cholesterol, carbohydrates, etc. may be contained within a range that does not reduce surface activity.

本発明の合成肺表面活性物質は、前記のリン脂質ホスフ
ァチジルコリンとカルシオリピンを。−Ｋａ［１−ｔ４
ｊよよよっ７４．わ、。あ。。　　　“方法、手段は何
ら限定されないが、例えば、両者をクロロホルム等の共
通溶媒に溶解し、その後溶媒を除去するといった方法で
容易に均一な混合物を′ｆＡ製することかで趣る。かく
して得られた合成肺表面活性物質は通常ワックス状であ
り、そのまま後述のウイルヘルミーノ（ランスによって
表面活性を測定すると、最小表面張力は１０　ｄｙｎｅ
／ｃｍ以下で、最大光面張力は３６−５５ｄｙｎｅ１０
ｎで、またスタビリテイ・インデックスは１．２以上で
あり、これらは天然の肺表面活性物質と同様な第１図に
示した如き特異的なヒステリシスループを描き、高い表
面活性を有している。The synthetic pulmonary surfactant of the present invention contains the phospholipids phosphatidylcholine and calciolipin. -Ka[1-t4
j Yoyoyo74. circle,. a. . “The method and means are not limited in any way, but for example, it is possible to easily prepare a homogeneous mixture by dissolving both in a common solvent such as chloroform and then removing the solvent. Synthetic pulmonary surfactants are usually waxy, and when the surface activity is measured using the Wilhelmino (Lance) described below, the minimum surface tension is 10 dyne.
/cm or less, the maximum optical surface tension is 36-55 dyne10
n, and the stability index is 1.2 or more, and they exhibit a specific hysteresis loop as shown in FIG. 1, similar to that of natural lung surfactants, and have high surface activity.

本発明の合成肺表面活性物質は通常ワックス状であるの
で、製剤として実際の投与に際しては、他の医学的に杵
容される粉末状物質を賦形剤として使用し、粉末化合肺
表面活性物質とし−（投与するのが好ましい。Since the synthetic pulmonary surfactant of the present invention is usually waxy, when actually administered as a formulation, other medically punchable powdered substances are used as excipients to form the powdered compound pulmonary surfactant. (preferably administered).

粉末状物質としては、水浴性でかつ毒性のない粉末状物
質が好ましく、その割合は合成肺表面活性物質１型電部
に対し２〜５０重量部、なかんずく５〜２０重１部が適
当である。好ましい粉末状物質としては、表面活性を低
下させないもので、アミノ酸、糖等があり、アミノ酸と
しては必須アミノ酸のグリシン、アラニン、トリプトフ
ァン、シスチン等であり、糖としてはグルコース、マン
ニトール、ソルビトール等力ある。The powdery substance is preferably a powdery substance that is water-bathable and non-toxic, and the proportion thereof is preferably 2 to 50 parts by weight, especially 5 to 20 parts by weight, per part of the synthetic pulmonary surfactant type 1. . Preferred powdery substances that do not reduce surface activity include amino acids, sugars, etc. Amino acids include essential amino acids such as glycine, alanine, tryptophan, cystine, etc. Sugars include glucose, mannitol, sorbitol, etc. .

粉末化の方法としては、合成肺表面活性物質と粉末状物
質をよく混ぜてもよいが、好ましくは活性物質を有＠鹸
媒に溶解し、該浴液に微粉化したアミノ酸等の粉末を適
量加え、均一に分散させる。そして、次にロータリーエ
ノ（ボレーター等で減圧下で回転攪拌しながら蒸発乾固
し、得られた粉末を更に均一な微粉末とすることにより
製剤化される。また別の粉末化法としては、活性物質を
水または食塩等の塩溶液に均一に分散させ、該分散液に
上記の糖またはアミノ酸を所定量溶解し、均一な分散溶
液をｙ４製する。次に凍結乾燥を行い、得られた粉末を
更に均一な微粉末とすることにより製剤化される。合成
肺表面活性物質はこれら粉末状物質の弐面に均一に付着
せしめられており、粉末の影線をとる製剤として使用さ
れる。この様に製剤として粉末化してもその表面活性は
変らず、前述の如く天然の肺表面活性物質と同等の表面
活性を有していることより、本発明で得られた粉末化合
成肺表面活性物置は、吸入や噴霧等の方法によりＩ　Ｉ
ｔ　ｌ）　Ｓ等の呼吸窮迫症鋏群治療薬としてその薬効
を充分発現することが期待出来るものである。As for the powdering method, the synthetic pulmonary surfactant and the powdered substance may be thoroughly mixed, but preferably the active substance is dissolved in a saponified medium, and an appropriate amount of finely divided powder of amino acids, etc. is added to the bath liquid. Add and disperse evenly. Then, the powder is evaporated to dryness while being rotated and stirred under reduced pressure using a rotary eno (volator), etc., and the resulting powder is further made into a uniform fine powder to form a formulation.Another powdering method is The active substance is uniformly dispersed in water or a salt solution such as common salt, and a predetermined amount of the above-mentioned sugar or amino acid is dissolved in the dispersion to prepare a uniform dispersion solution.Next, freeze-drying is performed to obtain the obtained The powder is made into a more uniform fine powder to form a formulation.Synthetic pulmonary surfactant is uniformly adhered to the upper side of these powdered substances and is used as a formulation to remove shadows from the powder. Even if it is powdered as a preparation, its surface activity does not change, and as mentioned above, it has a surface activity equivalent to that of a natural lung surfactant. Therefore, the powdered synthetic lung surfactant obtained by the present invention can be administered by methods such as inhalation or spraying.
tl) It is expected that it will fully exhibit its medicinal efficacy as a therapeutic agent for respiratory distress syndromes such as S.

以下実施例により本発明を詳述する。ｌなお、肺表面活
性物質の表面油性は以下の如き方法で測定した。The present invention will be explained in detail with reference to Examples below. Note that the surface oiliness of the pulmonary surfactant was measured by the following method.

〔合成肺表面活性動員の表面張力の測定とスタビリテイ・インデックスの算出〕[Measurement of surface tension of synthetic lung surface active mobilization and calculation of stability index]

測定ＶＣｉＬアコマ社製のウイルヘルミーバランスを使
用し、このテフロン水槽に生理食塩水を５０−入れ、そ
の上に被検試料の微量乾燥物を峠かにのせた。セして、
０．３−ｊ／−イクル／分の速度で液体の表ＩｌＩ］積
を４０−から１３ｒｄの間で連続的にブイクリングさせ
、Ｘ−Ｙし・コーダーで第１図に示した如き弐面槓−表
面張カダイアグラムを記碌した。サイクリフグ開始後５
〜６回目で一定に収束したヒステリシスルーズから最小
表面張力（ｒ−）の値と最大表面張力（ｒｍａｘ　）の
値及びヒステリ７スルーズで囲まれた面積を求めた。安
定性の指標であるスタビリテイ・インデックス（Ｓ、Ｌ
）を下記式から求めた。Measurement Using Wilhelmy balance manufactured by VCiL Acoma, 50% of physiological saline was placed in the Teflon water tank, and a small amount of the dried substance of the test sample was placed on top of it. Set,
At a rate of 0.3j/-cycles/min, the liquid surface IlI] product was continuously buoyed between 40- and 13rd, and an I completed the surface tension diagram. 5 after starting Cyclifug
The values of the minimum surface tension (r-), the maximum surface tension (rmax), and the area surrounded by the hysteresis 7 sloes were determined from the hysteresis slugs that converged at the 6th to 6th sloes. Stability index (S, L) is an indicator of stability.
) was calculated from the following formula.

実施例Ｉ Ｌ−α〜ジパルミトイルホスファチジルコリン６５Ｑｔ
ｈ２をクロロホルム３０６ｇＫ溶解し、これに牛の心臓
から抽出されたカルシオリピンのナトリウム塩を３５０
岬添加溶解し、均一な溶液とした。次に該溶液を室温減
圧下口−タリーエバポレーターで蒸発乾固し、更に高真
空下に乾燥し、白色のろう状の固形物を得た。このも　
　　。Example I L-α~dipalmitoylphosphatidylcholine 65Qt
H2 was dissolved in 306gK of chloroform, and 350g of sodium salt of calciolipin extracted from cow heart was added to the solution.
The cape was added and dissolved to form a homogeneous solution. The solution was then evaporated to dryness at room temperature in a vacuum-tally evaporator and further dried under high vacuum to obtain a white waxy solid. This too
.

のを微量とり、ウィルヘルミーバランスで表面活性を測
定した。サンプルを界面にのせると瞬時に表向張力は低
下し、界面における良好な分散性を示すと共に大きなヒ
ステリ／スループを描いた。結果は第１表に示した通り
であし、天然の肺表面活性物質に類似した物性を示した
。A small amount of the sample was taken and the surface activity was measured using a Wilhelmy balance. When the sample was placed on the interface, the surface tension instantly decreased, indicating good dispersibility at the interface and large hysteresis/sloop. The results are shown in Table 1, and showed physical properties similar to natural lung surfactant.

実施例２ ■よ一α−ジパルミトイルホスファチジルコリン１４０
０１１９とカルシオリピンナトリウム塩６００〜をクロ
ロホルムに俗解し、実施例１と同様に蒸発乾固し、白色
のろう状の固形物を得た。実施例１と同様に表面活性を
測定し、結果を第１表に示した。史Ｐにのものの５００
ｗ１をクロロホルム５０−に俗解し、予め微粉末化した
マンニトール５．０ｖを該溶液に均一に分散させた。Example 2 ■ Yoichi α-dipalmitoylphosphatidylcholine 140
0119 and calciolipin sodium salt 600 ~ were dissolved in chloroform and evaporated to dryness in the same manner as in Example 1 to obtain a white waxy solid. Surface activity was measured in the same manner as in Example 1, and the results are shown in Table 1. 500 things in history P
W1 was commonly interpreted as 50-chloroform, and 5.0v of mannitol, which had been pulverized in advance, was uniformly dispersed in the solution.

次ニロータリーエバボレーターで減圧下、室温で回転蒸
発乾燥させ、更に高真空下で乾燥した。It was then rotary evaporated to dryness under reduced pressure in a rotary evaporator at room temperature and further dried under high vacuum.

得られた粉末体を更に微粉化し、均一な白色のさらさら
した微粉末を得た。このものの表面的性を測定し、その
結果を第１表に示した。このものの氷表面に於ける分散
性は非常に良好であり、大きなヒステリシスループを抽
き、マンニトールによる粉末化によって活性の低下は認
められなかった。The obtained powder was further pulverized to obtain a uniform white free-flowing fine powder. The surface properties of this product were measured and the results are shown in Table 1. This product had very good dispersibility on the ice surface, exhibited a large hysteresis loop, and no decrease in activity was observed due to powdering with mannitol.

実施例３ 実施例２で得たＬ−α−ジパルミトイルホスファチジル
コリンとカルシオリビンの重量比７対３の固形物１．Ｏ
ｒを１０（１ｗＬｔの水に均一に分散させ、これに２Ｏ
ｆのマンニトールを俗解して、均一な分散溶液をｐ４製
した。次に該分散液を凍結乾燥し、白色の凍乾物を得た
。このものを小型ボールミルで３０時間粉砕して、白色
の均一な微粉体を得た。このものの表面活性は第、１表
に示した通りであり、を次、分散性も非常に良好であっ
た。Example 3 Solid material obtained in Example 2 containing L-α-dipalmitoyl phosphatidylcholine and calciolibin in a weight ratio of 7:3. O
r uniformly dispersed in 10 (1 wLt) water, and 2O
A homogeneous dispersion solution was prepared using the mannitol in f. Next, the dispersion was freeze-dried to obtain a white freeze-dried product. This material was ground in a small ball mill for 30 hours to obtain a white, uniform fine powder. The surface activity of this product was as shown in Table 1, and the dispersibility was also very good.

実施例４ 実施例２で得たＬ−α−ジパルミトイルホスファチジル
コリンとカルシオリビンの重量比７対３の固形物３ＱＱ
Ｗｖをクロロホルムに俗解し、マンニトールの代りにト
リプトファン３２を使用して実施例２と同様な方法で微
粉末化した。Example 4 Solid 3QQ obtained in Example 2 with a weight ratio of L-α-dipalmitoylphosphatidylcholine and calciolibin of 7:3
It was pulverized in the same manner as in Example 2 except that Wv was replaced by chloroform and tryptophan 32 was used instead of mannitol.

このものの表面活性は第１表に示した通りであり、トリ
プトファンによる粉末化によって、活性の低下は認めら
れなかった。The surface activity of this product was as shown in Table 1, and no decrease in activity was observed after powdering with tryptophan.

実施例５ １、−α−シハルミトイルホス７′アテジルコリン６５
０Ｉｌｖとカルシオリピンナトリウム塩３３０〜．シリ
ルイン２０ｍ？をクロロホルムにｍ解し、実施例１と同
様に蒸発乾固し、白色ろう状の固形物を得た。このもの
の表面活性を測定し、結果を第１表に示した。更にこの
ものを約２０事ＪｌｌＩφｍ度のマンニトール水浴液５
０−に均一に分散１−で、凍結乾燥を行った。得られた
白色の速乾物を低温室にて小型ボールミルで３０時間粉
末化し、白色の均一な微粉体を得た。このものの表面活
性を測定し、結果を第１表に示した。このものの氷表面
に於ける分散性は非常に良好でおった。Example 5 1, -α-cyhalumitoylphos 7′ atedylcholine 65
0Ilv and calciolipin sodium salt 330~. Shiriruin 20m? was dissolved in chloroform and evaporated to dryness in the same manner as in Example 1 to obtain a white waxy solid. The surface activity of this product was measured and the results are shown in Table 1. Furthermore, add about 20 times of this material to JllIφm degree of mannitol water bath solution 5
Freeze-drying was carried out by uniformly dispersing 0- and 1-. The obtained white quick-dried product was powdered in a small ball mill in a cold room for 30 hours to obtain a white uniform fine powder. The surface activity of this product was measured and the results are shown in Table 1. The dispersibility of this product on the ice surface was very good.

第　　１　　表Table 1

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図は、合成肺表面活性物質の表面積−表面張力ダイ
アグラムを示す。 手続補正書 昭和５７年　９月コニ日　　、 特許庁長官殿 １、事件の表示 特願昭　５７　−　１０５４８９　　号２、発明の名称 合成肺表面活性物質及びそれな有効成分とする呼吸窮迫
症候群治療剤 ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 大阪市東区南本町１丁目１１番地 （３００）帝人株式会社 代表者　徳　末　知　夫 （１１明細書の「特許請求の範囲」を別紙の通り訂正す
る。 （２）　　同第９頁の第１４行目に「は、他の」とある
な、「は、水或いは生理食塩水等の電解質溶液に分散し
て使用するか、又は」と訂正する。 （３）　　同第１１負の第１７行目に「靜かにのせた。 」とあるな、［静かにのせ測定した。また、測定試料が
分散液の場合は、分散液５０−をテフーン水＋ｍｔ’＝
とり測定した。］と訂正する。 （４）　　同第１５頁の実施例５の矢に、下記の実施例
６．７及び８を追加する。 「 実施例６ ｂ−ｏ（−ジパルミトイルホスファチジルコリン６２０
１ｖをクロロホルム３０ｒＲｔに溶解し、これに牛の心
臓より抽出されたカルシオリピンのナトリウム塩を３８
０〜添加溶解し、均一な溶液とした。次に該溶液を実施
例１と同様な方法で乾燥し、白色ろう状固形物を得た。 このものの表面活性は第１表に示した通りであった、次
にこのもの１００■をと９５０−の生理食塩水に分散さ
せて、白濁分散液を調製した。この分散液余液によるウ
イルヘルミーバランス表面活性は、第１表に示した通り
であった。 実施例７ Ｉ、−メークパルミトイルホスファチジルコリン３００
ηとカルシオリピンのナトリウム塩１９０■及びパルミ
チン酸１′０〜をりｐロホルウ５０−に溶解し、実施例
１と同様に蒸発乾固し、白色ろう状固形物を得た。次に
このもの１００■をとり５０ｍの生理食塩水に分散させ
て、実施例６と同様に表面活性を測定した。このもの〜
表面活性は第１表に示した通りであった。 実施例８７１ ＤＬ−ジパルミトイルホスファチジルコリン３２５ｑと
カルシオリピンのナトリウム塩１７５〜をりｐｐホルム
３０−に溶解し、実施ｆｉｌ　１と同様に蒸発乾固して
白色ろう状物質を得た。次にこのもの１ｏｏｑをとり、
０．０２％塩化カルシウムを含む０．９％の塩化ナトリ
ウム水溶液５〇−に分散させて、実施例６と同様に表面
活性を測定した。このもの〜表面活性（ま第１６表に示
した通りであった。　　　　　　　　　　　　　　」（
５）　　同第１６頁の第１表の下端に、下Ｗｅ事項を追
加する。 以　　上 別紙 特許請求の範囲 １　リン１旨質ホスファチジルコリンとカルシオリピン
を主成分とし、該ホスファチジルコリンが全体の５５〜
８０重量％を占めることを特徴とする合成肺表面活性物
質。 ２、　ホスファチジルコリンの８０重＊％以とが、炭素
数１４−２０個の直鎖の飽和脂肪酸残基を２個有するホ
スファチジルコリンである、特許請求の範囲第１項記載
の合成肺表面活性物質。 ３　直鎖の飽和脂肪酸がパルミチン酸である、特許請求
の範囲第２項記載の合成肺表面活性物質。 ４　合成肺表面活栓物′ｆ１香歇部に対し、医学的に、
許容される水溶性の粉末状物ｐｓ２〜５〇−重量部より
なる呼吸窮迫症候群治療剤。 ５　水ｍ性の粉末状物質がアミノ酸、糖またはそれらの
混合物である、特許請求の範囲第４項記載の１呼吸窮ｊ
自症候群治＃削。FIG. 1 shows a surface area-surface tension diagram of a synthetic pulmonary surfactant. Procedural Amendment dated September 1980, Director General of the Patent Office1, Indication of Case Patent Application No. 1983-1054892, Title of Invention: Synthetic Pulmonary Surfactant and Respiratory Distress Syndrome Treatment Using the Same as an Active Ingredient3 Relationship with the case of the person making the amendment Patent Applicant Tomoo Tokusue, Representative of Teijin Limited, 1-11 Minamihonmachi, Higashi-ku, Osaka (300) (amends the "Scope of Claims" in Specification 11 as shown in the attached sheet). (2) In the 14th line of page 9, the phrase "is other" should be corrected to "is used after being dispersed in an electrolyte solution such as water or physiological saline." ( 3) In the 17th line of the 11th negative line, it says "It was placed quietly." [It was measured by placing it quietly. Also, if the measurement sample is a dispersion liquid, add the dispersion liquid 50- to Tefun water + mt. '＝
I took measurements. ] Correct. (4) Add the following Examples 6, 7 and 8 to the arrow of Example 5 on page 15. "Example 6 bo(-dipalmitoylphosphatidylcholine 620
1v was dissolved in 30rRt of chloroform, and 38% of sodium salt of calciolipin extracted from bovine heart was added to the solution.
Add and dissolve from 0 to make a homogeneous solution. The solution was then dried in the same manner as in Example 1 to obtain a white waxy solid. The surface activity of this product was as shown in Table 1. Next, 100 μm of this product was dispersed in 950 μm of physiological saline to prepare a cloudy white dispersion. The Wilhelmy balance surface activity of the residual liquid of this dispersion was as shown in Table 1. Example 7 I,-make palmitoyl phosphatidylcholine 300
.eta., calciolipin sodium salt 190.degree. and palmitic acid 1'0.about.50.degree. Next, 100 μm of this material was dispersed in 50 m of physiological saline, and the surface activity was measured in the same manner as in Example 6. This thing~
The surface activity was as shown in Table 1. Example 871 DL-dipalmitoyl phosphatidylcholine 325q and sodium salt of calciolipin 175~ were dissolved in pp form 30~ and evaporated to dryness in the same manner as in Example fil 1 to obtain a white waxy substance. Next, take 1 ooq of this stuff,
It was dispersed in a 0.9% aqueous sodium chloride solution containing 0.02% calcium chloride, and the surface activity was measured in the same manner as in Example 6. This thing had surface activity (as shown in Table 16).
5) Add the following items to the bottom of Table 1 on page 16. Attached Claim 1 Phosphatidylcholine and calciolipin are the main components, and the phosphatidylcholine accounts for 55 to 55% of the total amount.
Synthetic lung surfactant characterized in that it accounts for 80% by weight. 2. The synthetic pulmonary surfactant according to claim 1, wherein 80% by weight or more of the phosphatidylcholine is phosphatidylcholine having two linear saturated fatty acid residues having 14 to 20 carbon atoms. 3. The synthetic pulmonary surfactant according to claim 2, wherein the straight chain saturated fatty acid is palmitic acid. 4 Medically, for synthetic lung surface stopcock 'f1 incense part,
A therapeutic agent for respiratory distress syndrome comprising 2 to 50 parts by weight of an acceptable water-soluble powder. 5. 1 Respiratory distress according to claim 4, wherein the aqueous powder substance is an amino acid, a sugar, or a mixture thereof.
Self-syndrome treatment #cut.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １　リ／脂賞ボスファチンルコリンとカルシオリピンを
主成分とし、該ホスファチジルコリンが全体の５５〜８
０皿ｉｔ饅を占めることを特徴とする合成肺表面活性物
質。 ２　ホスファチジルコリンの８０重Ｉｉ１％以上が、炭
素数１４〜２０個の自鎖の飽和脂肪酸残基を２個有する
ホスファチジルコリンである、特ｅｌｆ　ｈ＃求の範囲
第１項記載Ω合成肺表面活性物質。 ３　直−の飽和脂肪酸がパルミチン酸である、％＃’ｆ
　Ｍ＊求の範囲第２　ｘｒａ　Ｈｔ載の合成肺表面活性
物質。 ４　合成肺表面活性物質ｌｌＩ！１部に対し、医学的に
許容される水浴性の粉末状物質２〜５゜重量部よりなる
呼吸窮迫症候群治療剤。 ５、　水浴性の粉末状物質がアミノ酸、楯またはそれら
の混合物である、特許請求の範囲第４項記載の呼吸窮迫
症候群治療剤。[Claims] 1 The main components are phosphatin lucholine and calciolipin, and the phosphatidylcholine accounts for 55 to 8
A synthetic pulmonary surfactant characterized by occupying 0 plates. 2. The Ω synthetic pulmonary surfactant according to item 1, wherein 1% or more of 80 F Ii of the phosphatidylcholine is phosphatidylcholine having two self-chain saturated fatty acid residues having 14 to 20 carbon atoms. 3 Direct saturated fatty acid is palmitic acid, %#'f
Synthetic pulmonary surfactant listed in M*Required Range 2 xra Ht. 4 Synthetic pulmonary surfactant llI! A therapeutic agent for respiratory distress syndrome, comprising 2 to 5 parts by weight of a medically acceptable water-bathable powder substance per 1 part. 5. The therapeutic agent for respiratory distress syndrome according to claim 4, wherein the bathable powdery substance is an amino acid, a shield, or a mixture thereof.