JPS58141792A - Preparation of polysaccharide and novel bacterial strain - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To prepare a polysaccharide gelable under acidic conditions or in contact with a heavy metal salt, by culturing a novel bacterial strain belonging to Alcaligenes genus. CONSTITUTION:A novel bacterial strain belonging to Alcaligenes genus, i.e. Alcaligenes sp. DK-605 (FERM-P No.6342), is inoculated in a nutrient medium and cultured at 20-40 deg.C, preferably 25-35 deg.C, and 5-8 pH, preferably 6-7 pH, under aerobic conditions for 2-5 days, and the objective polysaccharide is separated from the cultured liquid.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、多糖類の製造方法に関し、更に詳しくはアル
カリ土類金属する新規菌種を用いた多糖類の製造方法お
よび新規菌種に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a method for producing a polysaccharide, and more particularly to a method for producing a polysaccharide using a new bacterial species containing alkaline earth metals, and a new bacterial species.

多糖類を生産する微生物として、これまでリゾビウム属
、キサントモナス属、アースロバフタ−属またはバチル
ス属に属する細菌、ハンゼヌラ属などの酵母類などが知
られて諮り、また近年、シュードモナス属に属する多糖
類生産性の新菌種も見い出されている（特開昭５６−６
１９９６号公報および特開昭５６−１４０８９６号公報
参照）２、本発明者らは、特に酸性領域において、また
は重金属塩と接触することによりゲル化しうる多糖類を
得るべく研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った
。As polysaccharide-producing microorganisms, bacteria belonging to the genera Rhizobium, Xanthomonas, Arthrobacterium, or Bacillus, and yeasts such as Hansenula have been known and investigated in recent years. New bacterial species have also been discovered (Japanese Unexamined Patent Publication No. 1986-6)
1996 and JP-A-56-140896) 2. As a result of repeated research to obtain a polysaccharide that can gel, especially in an acidic region or when contacted with heavy metal salts, the present inventors have developed the present invention. The invention was completed.

すなわち、本発明の要旨は、アルカリ土類金属に属する
アルカリゲネスｙ、ＤＫ　−６０５を培養し、この培養
液より多糖類を採取することを特徴とする多糖類の製造
方法および新規菌種アルカリゲネスｓｐ、ＤＫ　−６０
５に存する。That is, the gist of the present invention is to provide a method for producing a polysaccharide, which is characterized by culturing Alcaligenes y, DK-605, which belongs to an alkaline earth metal, and collecting polysaccharides from this culture solution, and a new bacterial species Alcaligenes sp. DK-60
5.

本発明のアルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　）
ｓｐ、　Ｄ　Ｋ−６０５は、土壌菌の中から多糖類生産
性菌を検索した績果得られた新規菌株であり、受託番号
微工研菌寄第６３４２号として工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されている。Alcaligenes of the present invention
sp, D K-605 is a new strain obtained as a result of a search for polysaccharide-producing bacteria among soil bacteria, and was submitted to the National Institute of Microbial Technology, Agency of Industrial Science and Technology as accession number 6342. It has been deposited in

このアルカリゲネスｓｐ、ＤＫ−６０５（以下、ＤＫ−
６０５という）２の菌学的性質は次の通りである： ■、形態学的性質 肉汁培地中３０℃で１〜２日間静置培養したものにつき
観察を行った。This Alcaligenes sp, DK-605 (hereinafter referred to as DK-
The mycological properties of 2 (referred to as 605) are as follows: (1) Morphological properties Observations were made after statically culturing at 30° C. for 1 to 2 days in a broth medium.

（１）細胞の大きさ、形 ０．９〜１．２　μＸ　１．２〜２．３　ｔｔ（Ｄ球状
桿菌（Ｃｏｃ−ｃｏｂａｃｉｌｌｉ）ないし短桿菌 （２）集団 単独またはしばしば２連 （３）運動性 なし く４）胞子の有無 なし く５）　　ダラム染色性 陰性 ■、各培地における生育状態 各培地での培養は３０℃で３日間行った。(1) Cell size and shape: 0.9-1.2 μX 1.2-2.3 tt (D Coc-cobacilli or short rods (2) population alone or often in pairs (3) movement 4) No spores, 5) Negative Durham staining ■, Growth status in each medium Cultivation in each medium was carried out at 30°C for 3 days.

（１）　　肉汁液体培養 生育：中程度　　１ 、′１１ 皮膜：リングを形成 沈渣：あり 混濁：あり （２）肉汁寒天平板培養 形状：正円 周縁二金縁 表面***の形：レンズ状 表面：平滑で光沢あり 色調：乳白色 （３）肉汁寒天斜面培養 形状：糸状 表面：平滑で光沢あり 辺縁：金縁 色調：乳白色 透明性：不透明 （４）肉汁寒天穿刺培養 表面および上部穿刺にそって生育 ■、生理学的性質 ＋ｌ）　　硝酸塩の還元性ニー （２）脱窒反瑯　　　： （３１ＭＲテスト　　ニー （４１ＶＰテスト　　ニー （５）インドール生成ニー （６）硫化水素生成　ニー （７）デンプンの加水分解ニー （８）無機窒素源の利用：アンモニウム塩、硝酸塩のみ
を窒素源として 利用 （９）色素の形成：たとえばＮＨ４ＣＩ　　０．１　％
、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０３％、Ｎａ２ＳＯ４０，
０５％、ＫＨ２ＰＯ４０，２１％、Ｎａ２ＨＰＯ４・１
２Ｈ２０１，２％、酵母エキス０．１％、グルコース２ ％および蒸留水（残部）培地 では赤褐色の色素を生産する ことがある。(1) Meat juice liquid culture Growth: Moderate 1,'11 Film: Forms a ring Sediment: Yes Turbidity: Yes (2) Meat juice agar plate culture Shape: Perfect circular edge Two metal edges Surface ridge shape: Lens-shaped surface: Smooth Glossy Color tone: Milky white (3) Meat juice agar slant culture Shape: filamentous Surface: Smooth and glossy Edge: gold edge Color tone: Milky white Transparency: Opaque (4) Meat juice agar puncture culture Growth along the surface and upper puncture■, Physiology (31MR test knee (41VP test knee (5) indole formation knee (6) hydrogen sulfide formation knee (7) starch hydrolysis knee (8) inorganic Use of nitrogen source: Use only ammonium salts and nitrates as nitrogen sources (9) Formation of pigments: For example, NH4CI 0.1%
, MgSO4・7H200,03%, Na2SO40,
05%, KH2PO40, 21%, Na2HPO4・1
2H20 1.2%, yeast extract 0.1%, glucose 2% and distilled water (balance) medium may produce a reddish-brown pigment.

（１■　ウレアーゼ　ニー （１１）オキシダーゼ：＋ （１２１カタラーゼ　：＋ （１３１酸素に対する態度：好気性 −ゼラチンの液化ニー ０９　　リドマスミルク：変化なし ０６）生育温度　　　：２５〜３５℃ 最適生育温度　：３０’Ｃ αη　生育ｐＨ：５．０〜７．３ 最適生育ＰＨ：６．０〜７．０ ０Ｓ　　糖類からの酸およびガスの生成ニゲルコース、
ガラクトース、マルトース、スクロース、ラクトース、
ラフィノース、グリセロールからの酸およびガスの生成
は認められない α０　炭素源の資化性 グルコース　＋、マンニット　　　　　　＋、ガラクト
ース＋、ソルビット　　　　　　＋、マンノース　＋、
イノジット　　　　　　＋、フルコース　士、ｍｅｓｏ
−エリトリット　　−、ソルボース　士、グリコノーδ
−ラクトン＋、アラビノース＋、２−ケト−ローグルコ
ネート　−、キシロース　士、５−ケト−ローグルコネ
ート−、リボース　　士、クエン酸ナトリウム　　−、
マルトース　−、コハク酸ナトリウム　　＋、ラクトー
ス　＋、アスパラギン酸　　　　＋、スクロース　＋、
アスパラギン　　　　　＋、トレハロース＋、ヒスチジ
ン　　　　　　＋、メリ、ビオース　＋、プロピオン酸
−、メレジトース　−、酪酸　　　　　　　−、ラフィ
ノース　＋、酢酸ナトリウム　　＋、イヌリン　　　−
、フェノール　　　　−、可溶性デンプン−、エタノー
ル　　　　＋、グリセリン　　＋、メタノール　　　　
＋、（支））　ビタミン要求性：なし １２１１　　ＧＣコンテント：６５．８モル％以上の菌
学的諸性質に従い、本発明の菌株（ＤＫ−６０５）の分
類学的地位をバージ−著「マニュアル・オブ・デターミ
ナティブ・バクテリオロジーＪ　（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　
Ｆ４ｎｕａｌ！ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂ
ａｃｔｅｒｉ−ｏｌｏｇｙ　）第８版により求めようと
したが、いずれの属にも属さないという結果になったの
で、同第７版により求めた。ＤＫ　−６０５は、ダラム
陰性の球状桿菌ないし短桿菌で運動性はなく、好気性で
、カタラーゼ陽性、オキシダーゼ陽性であることからア
ルカリ土類金属に属する。（なお、第８版では運動性の
ないものはアルカリ土類金属に属さないとしている。）
次に、この属の種の分類と対比すると、ゼラチンを液化
しないことと運動性がないことから、アルカリゲネス・
ビスコラクチイス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　Ｖｉｓｃ
ｏｌａｃｔｉｓ　）またはアルカリゲネス・メタルカリ
ゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｍｅｔａｌ−ｃａｌ
　ｉｇｅｎｅｓ　）に近い。しかし、その特徴を厳密に
比較すると、前１者とはリドマスミルクでの生育状況や
生育温度が異なり、また後者とは生育温度や酸素に対す
る挙動が異なる。従って、本菌株ＤＫ−６０５はアルカ
リ土類金属に属する新菌種とするのが妥当であると判断
し、アルカリゲネス（Ａｌｃａ　−１ｉｇｅｎｅｓ）ｓ
ｐ、ＤＫ　−６０５と命名した。(1 ■ Urease Knee (11) Oxidase: + (121 Catalase: + (131 Attitude towards oxygen: Aerobic - Liquefaction of gelatin Knee 09 Lidomus milk: No change 06) Growth temperature: 25-35℃ Optimum growth temperature: 30'C αη Growth pH: 5.0-7.3 Optimum growth pH: 6.0-7.0 0S Production of acid and gas from sugars nigercose,
galactose, maltose, sucrose, lactose,
No acid or gas production from raffinose or glycerol is observed α0 Carbon source assimilation glucose +, mannit +, galactose +, sorbit +, mannose +,
Innojit +, full course teacher, meso
-Erythrite-, Sorbosshi, Gliconau δ
-lactone +, arabinose +, 2-keto-logluconate -, xylose, 5-keto-logluconate, ribose, sodium citrate -,
Maltose -, sodium succinate +, lactose +, aspartic acid +, sucrose +,
Asparagine +, trehalose +, histidine +, meli, biose +, propionic acid -, melezitose -, butyric acid -, raffinose +, sodium acetate +, inulin -
, phenol -, soluble starch -, ethanol +, glycerin +, methanol
+, (support)) Vitamin requirement: None 1211 GC content: 65.8 mol% or more According to the various mycological properties, the taxonomic status of the strain of the present invention (DK-605) was determined according to the manual by Burge. Of Determinative Bacteriology J (Bergey's
F4nual! of Determinative B
Acteri-ology) 8th edition, but the result was that it does not belong to any genus, so I tried to find it using the 7th edition. DK-605 is a Durham-negative coccobacillus or short bacillus, non-motile, aerobic, and catalase-positive and oxidase-positive, so it belongs to alkaline earth metals. (The 8th edition states that non-motile metals do not belong to alkaline earth metals.)
Next, in contrast to the classification of species in this genus, Alcaligenes
Alcaligenes Visc
olactis) or Alcaligenes metal-cal
igenes). However, if their characteristics are strictly compared, they differ from the former in terms of growth conditions in lidmus milk and growth temperature, and also differ from the latter in growth temperature and behavior towards oxygen. Therefore, we judged that it is appropriate to consider this strain DK-605 as a new bacterial species belonging to alkaline earth metals, and
p, and was named DK-605.

本発明の新菌種ＤＫ−６０５は、土壌菌中より次のスク
リーニング方法により得ることができる：土壌を滅菌し
た生理食塩水に混合し、上澄部分から１白金耳を下記ス
クリーニング用培地に移し、３０℃で３日間振とう培養
する。The new bacterial strain DK-605 of the present invention can be obtained from soil bacteria by the following screening method: Mix the soil with sterilized physiological saline, and transfer one platinum loopful from the supernatant to the following screening medium. , and culture with shaking at 30°C for 3 days.

培地組成：メタノーノヒ、２−１ＮＨ４ＣＩ　０．２　
’ｉ　。Medium composition: Methanonohi, 2-1NH4CI 0.2
'i.

ＫＨ２ＰＯ４０，２１ｆ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２０
１，２Ｓ’、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０３Ｓ’、Ｎａ
２ＳＯ４０，０５ｆ！、　水１０〇−ｐＨ７，０゜ この培養液の１白金耳を、上記と同様のスクリーニング
用培地に２Ｆ／１００ｍ１の寒天の入った平板培地にス
トリークして３０℃で３日間静置培灸する。出現するコ
ロニーのうち１、前記菌学的性質の旧２）肉汁寒天平板
培養における生育状態を満足し、かつ粘稠性で大形（直
径約５　ａｎ　）のコロニーを白金耳でつり、同様の培
地で２回純化を行う。KH2PO40, 21f, Na2HPO4・12H20
1,2S', MgSO4・7H200,03S', Na
2SO40,05f! , Water 100° - pH 7.0° Streak one platinum loopful of this culture onto a plate medium containing 2 F/100 ml of agar in the same screening medium as above and let it stand at 30°C for 3 days. . Among the colonies that appear, 1, a viscous and large colony (approximately 5 an2 in diameter) that satisfies the growth condition of the above-mentioned mycological properties in broth agar plate culture, is picked up using a platinum loop, and a similar Purification is performed twice in the medium.

次に、本発明の菌株ＤＫ−６０５を用いた多糖類の製造
方法を詳述する。Next, a method for producing polysaccharides using the strain DK-605 of the present invention will be described in detail.

培地には、使用する微生物が資化しうる炭素源（たとえ
ば、グルコース、糖蜜、コハク酸、酢酸、エタノール、
メタノールなど）、同化しうる窒素源（たとえば、酵母
エキス、ペプトン、コーンスチープリカー、アン汚ニア
、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなど）および生
育に必要な各種無機塩などを包含させる。The medium contains carbon sources that can be assimilated by the microorganisms used (e.g., glucose, molasses, succinic acid, acetic acid, ethanol,
methanol, etc.), assimilable nitrogen sources (e.g., yeast extract, peptone, corn steep liquor, ammonium, ammonium sulfate, ammonium nitrate, etc.), and various inorganic salts necessary for growth.

培養は、通常好気的な条件下、たとえば振とう培養法ま
たは通気攪拌培養法により、２０〜４０℃、好ましくは
２５〜３５℃、特に約３０℃の培養温度で実施するのが
好ましい。この場合、培地のｐＨは５〜８、好ましくは
′６〜７、特に約６．５に調整し、培養時間は、少な（
とも２４時間であり、振とう培養の場合は好ましくは３
〜５日間、ジャーファーメンタ−などを使用する通気攪
拌培養の場合は好ましくは２〜４日間である。この様な
条件下の培養により好収量で多糖類が得られる。Cultivation is usually carried out under aerobic conditions, for example by shaking culture method or aerated agitation culture method, at a culture temperature of 20 to 40°C, preferably 25 to 35°C, particularly about 30°C. In this case, the pH of the medium is adjusted to 5-8, preferably '6-7, particularly about 6.5, and the culture time is adjusted to
Both times are 24 hours, and in the case of shaking culture, preferably 3 hours.
-5 days, preferably 2-4 days in the case of aerated agitation culture using a jar fermenter or the like. Cultivation under such conditions allows polysaccharides to be obtained in good yields.

醗酵終了後、遠心分離などの手段により除菌した後、ア
セトン、エタノールなどの有機溶媒を添加して白色繊維
状の粗多糖類を得る。また、醗酵終了後の培養液を塩酸
、硫酸、酢酸などの酸で酸性（ｐＨ約２〜３）にし、次
いで遠心分離して上澄液を除き、沈殿物にアルカリ液を
加えて遠心除菌した後、再び酸性（ｐＨ約１〜３）にし
て白色繊維状の粗多糖を得ることができる。After the fermentation is completed, bacteria are removed by means such as centrifugation, and an organic solvent such as acetone or ethanol is added to obtain a white fibrous crude polysaccharide. In addition, the culture solution after fermentation is made acidic (pH approximately 2 to 3) with an acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, or acetic acid, then centrifuged to remove the supernatant, and an alkaline solution is added to the precipitate for centrifugal sterilization. After that, it is acidified again (pH about 1 to 3) to obtain a white fibrous crude polysaccharide.

得られた粗多糖類は、いずれの場合にも、工−テノペエ
タノールなどで洗浄し、再び水に溶解し、熱処理、クロ
ロホルム−アミルアルコール混液処理または超遠心分離
などの操作の後、５℃で２〜７日間透析し、次いでエタ
ノールを理論して生じた白色繊維状多糖類を水溶液から
凍結乾燥して綿状の精製多糖類にする。In either case, the obtained crude polysaccharide is washed with ethanol, etc., dissolved in water again, and heated at 5°C after heat treatment, treatment with a chloroform-amyl alcohol mixture, or ultracentrifugation. The resulting white fibrous polysaccharide is then lyophilized from the aqueous solution into a cotton-like purified polysaccharide.

本発明で得られる新規多糖は次の諸性質を有する： （１）呈色反応 糖に特有のアンスロン反応、フェノール硫酸反応などの
呈色反応は陽性である。The novel polysaccharide obtained by the present invention has the following properties: (1) Color reactions specific to color reaction sugars, such as the Anthrone reaction and the phenol-sulfuric acid reaction, are positive.

（２）第四級アンモニウム塩に対する反応多糖類の水溶
液にセチルトリメチルアンモニウムクロライドを添加す
ると白色沈殿を生じる。(2) Reaction to quaternary ammonium salt When cetyltrimethylammonium chloride is added to an aqueous solution of a polysaccharide, a white precipitate is produced.

（３）溶剤に対する溶解度 水に可溶で、メタノール、エタノール、アセトン、ジメ
チルスルホキシドには不溶。(3) Solubility in solvents Soluble in water, insoluble in methanol, ethanol, acetone, and dimethyl sulfoxide.

（４）色調 乾燥状態では白色の綿状または繊維状であり、水溶液は
無色透明である。(4) Color: In the dry state, it is white and cotton-like or fibrous-like, and the aqueous solution is colorless and transparent.

（５）粘度 １重量／容量％水簿液の粘度を東京計器社製ＢＬ型粘度
計により２５℃、５Ｑｒｐｍで測定したところ１１０Ｃ
ｐであった。(5) Viscosity 1% by weight/volume The viscosity of the liquid was measured at 25°C and 5Qrpm using a BL type viscometer manufactured by Tokyo Keiki Co., Ltd., and it was 110C.
It was p.

（６）赤外吸収スペクトル 第１図に示す通りである。(6) Infrared absorption spectrum As shown in FIG.

本発明で得られる多糖は、従来の多種類の用途である食
品添加物、医薬品（たとえば抗腫瘍剤、抗潰瘍剤など）
および化粧品の担体、ドＩＪ　ＩＪング剤、鉛、銅など
の重金属のトラップ、酸のトラップ、酵素の不溶化担体
などに用いられる。さらに本発明で得られる多糖は酸性
でゲル化し、中性ないしアルカリ性で元に戻るという性
質を有する。The polysaccharide obtained by the present invention has a wide variety of conventional uses, such as food additives and pharmaceuticals (e.g., antitumor agents, antiulcer agents, etc.).
It is also used as a carrier for cosmetics, a chemical agent, a trap for heavy metals such as lead and copper, a trap for acids, an insolubilizing carrier for enzymes, etc. Furthermore, the polysaccharide obtained in the present invention has the property of gelling under acidic conditions and returning to its original state under neutral or alkaline conditions.

この酸性でゲル化する性質を利用して胃で作用させるべ
き液薬剤の基材に、またカプセル化した腸溶剤の基材に
用いられる。Taking advantage of its ability to gel under acidic conditions, it is used as a base material for liquid drugs to be administered in the stomach, and as a base material for encapsulated enteric agents.

次に実施例を示し本発明を具体的に説明する。Next, the present invention will be specifically explained with reference to Examples.

実施例１ 兵庫県三田亡（千刈貯水地、地下３　ａｎ　）から採取
した土壌、１ｇを滅菌した生理食塩水５−のはいった試
験管に加え、よく振とうした。１分間静置。Example 1 1 g of soil collected from Mitago, Hyogo Prefecture (Chikari Reservoir, 3 an.m. underground) was added to a test tube containing 5-mL of sterilized physiological saline and shaken well. Let stand for 1 minute.

後、上澄部分から１白金耳を前記スクリーニング用培地
５−を含む試験管に入れ、綿栓をして往復振とう培養機
により３０℃で３日間振とう培養した（振とう速度１０
０回／分）。この培養液の１白金耳を、同様のスクリー
ニング用培地に２ｙ／１００ｒｎｌの寒天の入った平板
培地にスｌ−ＩＪ−りして３０℃で３日間静置培養した
。・出現したコロニーのうち、前記菌学的性質の旧２）
肉汁寒天平板培養における生育状態を満足し、かつ粘稠
で大形（直径約５　ｗｎ　）のコロニーを白金耳でつり
、同様の培地で２回純化を行い、アルカリゲネスｓｐ、
ＤＫ−６０５を得た。After that, one platinum loopful of the supernatant was placed in a test tube containing the screening medium 5-, which was covered with a cotton plug and cultured with shaking at 30°C for 3 days using a reciprocating shaker (shaking speed 10).
0 times/min). One platinum loopful of this culture solution was plated onto a plate medium containing 2y/100rnl of agar in the same screening medium and cultured stationary at 30°C for 3 days.・Among the colonies that appeared, the former 2) with the above mycological properties
A large, viscous colony (approximately 5 wn in diameter) that satisfies the growth condition in broth agar plate culture was picked using a platinum loop, and purified twice in the same medium to obtain Alcaligenes sp.
DK-605 was obtained.

実施例２ グルコース２０２、ＫＨ２ＰＯ４２，Ｉ　Ｅｌ、Ｎａ２
ＨＰＯ４−１２）１２ｏ１２ｔｉ％Ｍｇ５ｏ４”７”２
００．３Ｓｉ、Ｎ　ａ　２　Ｓ　Ｏ４０，５７、ＮＨ４
Ｃｌ　ｌグおよび酵母エキス１１を水１１に溶解して培
地とした。この培地３Ｉ！を調製し、ｐＨを７．０に調
節した後、容量７１！のジャーファーメンタ−に注入し
、１２１℃で１５分間殺菌した。Example 2 Glucose 202, KH2PO42, I El, Na2
HPO4-12) 12o12ti%Mg5o4”7”2
00.3Si, Na2SO40,57, NH4
Cl and yeast extract 11 were dissolved in water 11 to prepare a medium. This medium 3I! After preparing and adjusting the pH to 7.0, the volume was 71! The mixture was poured into a jar fermenter and sterilized at 121°C for 15 minutes.

上記と同一組成の培地を用い、三角フラスコで前培養し
たアルカリゲネスｓｐ、Ｄ　Ｋ　−６０５を上記ジャー
ファーメンタ−に接種し、培養温度３０℃、通気量０，
５ＶＶＭで７２時間培養した。Using a medium with the same composition as above, Alcaligenes sp.
Cultured at 5VVM for 72 hours.

培養後、培養液を塩酸でｐＨ２，０にし、遠心分離（１
００００ｒＰ’ｎ、１５分間）した。沈殿物に０゜５Ｎ
水酸化すｌ−ＩＪウム液１１を加えて多糖類を溶解した
後、遠心除菌（１００００ｒｐｍ、１５分間−）した。After culturing, the culture solution was adjusted to pH 2.0 with hydrochloric acid and centrifuged (1
0000 rP'n for 15 minutes). 0゜5N to the precipitate
After adding sulfur hydroxide solution 11 to dissolve the polysaccharide, sterilization was performed by centrifugation (10,000 rpm, 15 minutes).

次いで、上澄液を塩酸でｐＨ２，０に調節した後、析出
した白色繊維状の粗多糖類を遠心分離により採集した。Next, the supernatant liquid was adjusted to pH 2.0 with hydrochloric acid, and the precipitated white fibrous crude polysaccharide was collected by centrifugation.

得られた粗多糖類をエタノールで十分洗浄した後、純水
５００−に溶解し、８０℃で１５分間加熱した。次いで
、溶液のｐＨを０．５Ｎ水酸化ナトリウムにより７．０
とし、クロロホルム−アミルアルコール（容量比５：１
）液で除たん白を行った後、エタノール１１！を加える
と、多糖類は繊維状の塊となった。これを濾取してエタ
ノールで十分洗浄し、再び水に溶解して透析を２日間行
った後、再び２倍量のエターノールを加えて多糖類を析
出させた。析出物を純水１００−に溶解し、凍結乾燥し
て精製多糖類３．１９を得た。これは、前記の諸性質を
有していた。After thoroughly washing the obtained crude polysaccharide with ethanol, it was dissolved in 500 ml of pure water and heated at 80° C. for 15 minutes. The pH of the solution was then adjusted to 7.0 with 0.5N sodium hydroxide.
and chloroform-amyl alcohol (volume ratio 5:1)
) after removing protein with ethanol 11! When added, the polysaccharide became a fibrous mass. This was collected by filtration, thoroughly washed with ethanol, dissolved in water again and dialyzed for 2 days, and then twice the amount of ethanol was added again to precipitate the polysaccharide. The precipitate was dissolved in 100% pure water and lyophilized to obtain purified polysaccharide 3.19. It had the properties mentioned above.

実施例３ 培地としてグルコース２０９、ペプトン１０７、酵母エ
キス１０グを水１／に溶解した組成のものを用いる以外
は実施例２と同様の手順を繰り返して精製多糖類３．５
９を得た。Example 3 The same procedure as in Example 2 was repeated except that a medium with a composition of glucose 209, peptone 107, and yeast extract 10 g dissolved in 1/2 water was used to obtain 3.5 g of purified polysaccharide.
I got a 9.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第１図は、本発明で得られる新規多糖の赤外吸収スペク
トルである。 特許出願人　ダイキン工業株式会社 代　理　人　升埋士　青　山　葆（ほか２名）手　　続
　　補　　正　　ｇ（自発） １．事件の表示 昭和５７年特許願第２６５９０号 ン１発明の名称 多糖類の製造方法および新規菌種 ：（、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　−大阪府大阪市北区梅田１丁目１２番３９号新阪
急ビル 名称　（２８５）　　ダイキン工業株式会社代表者　山
　１）　稔 ｊ）、補正命令の日付：　（自　発） （、、補正の対象：　　　明細書の「発明の詳細な説明
」の欄１、補正の内容 明細書の発明の詳細な説明の欄中、次の個所を補正しま
す。 （１）３頁３行、「Ｃｏｅ−Ｊを「ｃｏｃ−」と訂正。 （２）６ｊ１１２行、「フルコース」を「フルクトース
」と訂正。FIG. 1 is an infrared absorption spectrum of the novel polysaccharide obtained by the present invention. Patent Applicant: Daikin Industries, Ltd. Agent: Aoyama Aoyama (and 2 others) Procedures Amendment g (Voluntary) 1. Display of the case 1982 Patent Application No. 26590 N1 Name of the invention Method for producing polysaccharides and new bacterial species: (Relationship to the case by the person making the amendment Patent applicant address - 1-chome Umeda, Kita-ku, Osaka-shi, Osaka Prefecture No. 12-39 New Hankyu Building Name (285) Daikin Industries, Ltd. Representative Yama 1) Minoru J), Date of amendment order: (voluntary) (,, Subject of amendment: "Detailed description of the invention" in the specification In Column 1, Contents of Amendment, in the Detailed Description of the Invention column of the Specification, the following parts are amended: (1) Page 3, line 3, "Correct Coe-J to "coc-". (2) In line 6j112, "full course" was corrected to "fructose".

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １、　アルカリ土類金属に属するアルカリゲネス５ＲＤ
Ｋ　−６０５を培養し、この培養液より多糖類を採取す
ることを特徴とする多糖類の製造方法。 ２、多糖類生産能を有し、アルカリゲネス属に属するア
ルカリゲネスｓｐ、ＤＫ　−６０５（微工研受託番号微
工研菌寄第６３４２号）。[Claims] 1. Alcaligenes 5RD belonging to alkaline earth metals
A method for producing a polysaccharide, which comprises culturing K-605 and collecting the polysaccharide from the culture solution. 2. Alcaligenes sp, DK-605, which has the ability to produce polysaccharides and belongs to the genus Alcaligenes (Feikoken accession number: Fiber Science and Technology Research Institute No. 6342).