JPS58140634A - 簡易二次元電気泳動法 - Google Patents
簡易二次元電気泳動法Info
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- JPS58140634A JPS58140634A JP57022746A JP2274682A JPS58140634A JP S58140634 A JPS58140634 A JP S58140634A JP 57022746 A JP57022746 A JP 57022746A JP 2274682 A JP2274682 A JP 2274682A JP S58140634 A JPS58140634 A JP S58140634A
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- JP
- Japan
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- gel
- concentration
- substrate
- dimensional
- separation
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
- G01N27/44773—Multi-stage electrophoresis, e.g. two-dimensional electrophoresis
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は臨床検査を目的とした血液などの体液の分析法
に係り、特に、体液中に含まれる諸種蛋白質の多成分同
時分析に好適な二次元電気泳動分析法に関するものであ
る。
に係り、特に、体液中に含まれる諸種蛋白質の多成分同
時分析に好適な二次元電気泳動分析法に関するものであ
る。
従来、血液蛋白質の多成分同時分析法として用いられて
いるポリアクリルアミドゲルを支持体とする二次元電気
泳動分析法（詳細は例えば「蛋白質・核酸−酵素」、共
立出版、１９７８年９月号２１１頁参照）においては、
まず、両性電解質を含む細長い円筒状のゲルをガラス管
内に作成し、ゲル管を垂直に立て、ゲルの両端に電圧を
かけ、ゲルの一端に添加した血液試料中の成分蛋白質を
その等電点の差により分離する（一次元目の分離）。
いるポリアクリルアミドゲルを支持体とする二次元電気
泳動分析法（詳細は例えば「蛋白質・核酸−酵素」、共
立出版、１９７８年９月号２１１頁参照）においては、
まず、両性電解質を含む細長い円筒状のゲルをガラス管
内に作成し、ゲル管を垂直に立て、ゲルの両端に電圧を
かけ、ゲルの一端に添加した血液試料中の成分蛋白質を
その等電点の差により分離する（一次元目の分離）。
次に、別に、２枚のガラス板の間（ゲル保持用枠内）に
作成しておいたアクリルアミドの濃度勾配を有する平板
状のゲルの低濃度端に、一次元目の分離を終了した同筒
状のゲルをガラス管から押し出して乗せ、ゲル板を垂直
に立て、改めて平板ゲルの濃度勾配方向に通電して二次
元口の分子量差による分離を行なう。次に、各分離蛋白
質を定量するために、平板ゲルをはさんでいるガラス板
２枚をはずし、例えば、コーマツシーブルーなどの染料
溶液にゲルを浸し蛋白質を染色しさらにバックグランド
・の脱染色をし、残存している染色蛋白質スポットの吸
光度を測定する。
作成しておいたアクリルアミドの濃度勾配を有する平板
状のゲルの低濃度端に、一次元目の分離を終了した同筒
状のゲルをガラス管から押し出して乗せ、ゲル板を垂直
に立て、改めて平板ゲルの濃度勾配方向に通電して二次
元口の分子量差による分離を行なう。次に、各分離蛋白
質を定量するために、平板ゲルをはさんでいるガラス板
２枚をはずし、例えば、コーマツシーブルーなどの染料
溶液にゲルを浸し蛋白質を染色しさらにバックグランド
・の脱染色をし、残存している染色蛋白質スポットの吸
光度を測定する。
しかしながら、一次元目に用いる細長いゲルは柔らかく
、ガラス管から押し出し、平板ゲルの一端にすきまなく
密着させる操作も機械的方法により行なうことは困難で
ある。父、二次元泳動後の柔かい平板ゲルをガラス板の
間から取り出し、染色、脱染色、吸光度測定など一連の
操作中取扱うのも、ゲルの破損などの問題があり困難で
おる。
、ガラス管から押し出し、平板ゲルの一端にすきまなく
密着させる操作も機械的方法により行なうことは困難で
ある。父、二次元泳動後の柔かい平板ゲルをガラス板の
間から取り出し、染色、脱染色、吸光度測定など一連の
操作中取扱うのも、ゲルの破損などの問題があり困難で
おる。
本発明の目的は、上記従来法の欠点を改良した操作性の
良い簡易な二次元電気泳動法を提供することにある。
良い簡易な二次元電気泳動法を提供することにある。
本発明は、一次元目と二次元口の泳動分離に用いる支持
体を機械的強度の高い基板の上に隣接して付着せしめ、
この基板一枚で二次元泳動分離を行なうものである。
体を機械的強度の高い基板の上に隣接して付着せしめ、
この基板一枚で二次元泳動分離を行なうものである。
すなわち、ガラス、又は、ポリエステルのような基板を
シランカップリング剤（Ｒ８ｉＸｓ 、ｎｒ！例えばビ
ニル基、Ｘは例えばエトキシ基で代表される有機残基よ
りなる化合物）で処理し、この基板上に、アクリルアミ
ドの濃酸勾配を有するポリマーゲルを結合、固定させて
作成する。次に、この濃度勾配ゲルの低濃度端に、一定
の間隔を置いて、アクリルアミドの濃度一定で、がっ、
低濃度のゲルを同じく結合、同定させる。本発明は、こ
のようにして得られたゲルの内、ゲル濃度一定のゲルを
支持体として一次元目の電気泳動分離を行ない、このゲ
ル内に分離された被分析成分を、あらかじめ電解質を含
ませておいた二つのゲルの間の隙間を経由して、濃度勾
配ゲル甲に電気体動せしめ分離するものである。
シランカップリング剤（Ｒ８ｉＸｓ 、ｎｒ！例えばビ
ニル基、Ｘは例えばエトキシ基で代表される有機残基よ
りなる化合物）で処理し、この基板上に、アクリルアミ
ドの濃酸勾配を有するポリマーゲルを結合、固定させて
作成する。次に、この濃度勾配ゲルの低濃度端に、一定
の間隔を置いて、アクリルアミドの濃度一定で、がっ、
低濃度のゲルを同じく結合、同定させる。本発明は、こ
のようにして得られたゲルの内、ゲル濃度一定のゲルを
支持体として一次元目の電気泳動分離を行ない、このゲ
ル内に分離された被分析成分を、あらかじめ電解質を含
ませておいた二つのゲルの間の隙間を経由して、濃度勾
配ゲル甲に電気体動せしめ分離するものである。
以下、本発明の一実施例を第１図により説明する。
カラス板１０片面をメタアクリルオキシプロピルトリメ
トキシシランで処理し、ガラス板上１０副四方にアクリ
ルアミドの濃度勾配４〜２０％を有し、かつ、０．０５
Ｍのトリスヒドロキシメチルアミノメタンおよび”０．
３８ Ｍのグリシン水溶液（以下Ａ液と言う）を含むポ
リアクリルアミトゲ／’ （ＪＩす２ｓａ＋ ） ３を
作成する。次に、このガラス板上に、さらに、ポリアク
リルアミド濃度４チを含みかつ２優の両性電解質、アン
フオライン（スウェーデン、ＬＫＢ社製、ｐＨ４ｇ３．
５〜１０ ）を含むゲル（長さ１０ｃｍＸ幅１ｃｒｎ１
厚さ２■）２を１■の隙間４を隔でて濃に勾配ゲルの低
濃度（４囁）端に作成する（以上、第１図（ａ））。次
に、ゲル２の中央部にスリット５を切り、２％のアンフ
オラインを含むヒト血清１０μＬを加わえ、０．０４Ｍ
のＮａＯＨ水溶液を含浸させ−ｔ”ｃ’ｇ絡用Ｆ紙６を
置き、０．０４ＭのＮａＯＨを含む負電極槽７に接続す
る。同一に、０．０１Ｍのリン酸を含浸させ九液絡用濾
紙８を０．０１ Ｍのリン酸を含む正電極槽９に接続し
、両電極間に通電し、血清蛋白質をその等電点差により
分離する（以上、第１図（ｂ））。次に、この液絡を取
シ去シ、隙間４にＡ液を毛細管現象により保持せしめ、
Ａ液を含浸させた液絡用ヂ紙１０をゲルｌに置き、これ
を負電極槽１１に接続する。同様に、Ａ液を含浸させた
液絡用戸紙１２を製置勾配ゲル３の高濃度端に置き、こ
れを正電極槽１３に接続し、両電極間に通電し、成分蛋
白質をその分子量差によシ、ゲル３の内部に分離する（
以上、第１図（Ｃ））。なお泳動分離の過程でガラス基
板１は水平位置に保持して置く。
トキシシランで処理し、ガラス板上１０副四方にアクリ
ルアミドの濃度勾配４〜２０％を有し、かつ、０．０５
Ｍのトリスヒドロキシメチルアミノメタンおよび”０．
３８ Ｍのグリシン水溶液（以下Ａ液と言う）を含むポ
リアクリルアミトゲ／’ （ＪＩす２ｓａ＋ ） ３を
作成する。次に、このガラス板上に、さらに、ポリアク
リルアミド濃度４チを含みかつ２優の両性電解質、アン
フオライン（スウェーデン、ＬＫＢ社製、ｐＨ４ｇ３．
５〜１０ ）を含むゲル（長さ１０ｃｍＸ幅１ｃｒｎ１
厚さ２■）２を１■の隙間４を隔でて濃に勾配ゲルの低
濃度（４囁）端に作成する（以上、第１図（ａ））。次
に、ゲル２の中央部にスリット５を切り、２％のアンフ
オラインを含むヒト血清１０μＬを加わえ、０．０４Ｍ
のＮａＯＨ水溶液を含浸させ−ｔ”ｃ’ｇ絡用Ｆ紙６を
置き、０．０４ＭのＮａＯＨを含む負電極槽７に接続す
る。同一に、０．０１Ｍのリン酸を含浸させ九液絡用濾
紙８を０．０１ Ｍのリン酸を含む正電極槽９に接続し
、両電極間に通電し、血清蛋白質をその等電点差により
分離する（以上、第１図（ｂ））。次に、この液絡を取
シ去シ、隙間４にＡ液を毛細管現象により保持せしめ、
Ａ液を含浸させた液絡用ヂ紙１０をゲルｌに置き、これ
を負電極槽１１に接続する。同様に、Ａ液を含浸させた
液絡用戸紙１２を製置勾配ゲル３の高濃度端に置き、こ
れを正電極槽１３に接続し、両電極間に通電し、成分蛋
白質をその分子量差によシ、ゲル３の内部に分離する（
以上、第１図（Ｃ））。なお泳動分離の過程でガラス基
板１は水平位置に保持して置く。
以上、一枚のガラス基板を用い、等電点分離、および、
分子量分離からなる二次元泳動分離を行なった。分離蛋
白質を含むゲル３を、ゲルを直接取扱うことなく、ガラ
ス基板１を取扱い、コーマツシープル−８２５０の酢酸
−メタノール混液に浸し、次に、このゲル（ガラス基板
）を酢酸水溶液に浸し、蛋白質を含まないゲルの部分に
存在する上記染料を除去したところ、約１００種の蛋白
質の分離スポットを検出し得た。
分子量分離からなる二次元泳動分離を行なった。分離蛋
白質を含むゲル３を、ゲルを直接取扱うことなく、ガラ
ス基板１を取扱い、コーマツシープル−８２５０の酢酸
−メタノール混液に浸し、次に、このゲル（ガラス基板
）を酢酸水溶液に浸し、蛋白質を含まないゲルの部分に
存在する上記染料を除去したところ、約１００種の蛋白
質の分離スポットを検出し得た。
本発明において、一次元目の泳動分離を行なうための支
持体はポリアクリルアミドゲルに限る必要はなく、他の
例えばアガロースゲルでも良い。
持体はポリアクリルアミドゲルに限る必要はなく、他の
例えばアガロースゲルでも良い。
すなわち、１チの濃度のアガロースゲルをガラス板上１
．第１図２の支持体として用いて、二次元泳動を行なっ
たとと一呂、ポリアクリルアミドゲルを支持体２として
用いた場合と同様の結果を得た。
．第１図２の支持体として用いて、二次元泳動を行なっ
たとと一呂、ポリアクリルアミドゲルを支持体２として
用いた場合と同様の結果を得た。
以上、本発明によれば、一次元目と二次元口の２つの機
械的強度の低いゲル状支持体を直接取扱う必要がなくな
シ、固い基板ごとゲルを取扱えばよいので泳動分離操作
は大巾に簡略化された。
械的強度の低いゲル状支持体を直接取扱う必要がなくな
シ、固い基板ごとゲルを取扱えばよいので泳動分離操作
は大巾に簡略化された。
本発明において、一次元目と二次丸目の泳動分離用支持
体の間に隙間を設けたことにより、一次元目の泳動時に
電気力線が一次元目の支持体中に局在し、この泳動の分
離能が上昇する効果もあった。
体の間に隙間を設けたことにより、一次元目の泳動時に
電気力線が一次元目の支持体中に局在し、この泳動の分
離能が上昇する効果もあった。
第１図（ａ）（ｂ）（Ｃ）は本発明の方法を実施するた
めの泳動装置の平面図である。
めの泳動装置の平面図である。
Claims (1)
- １、二次元電気泳動分離法において、基板上に、ポリア
クリルアミド濃度勾配ゲル、および、この濃度勾配ゲル
の低濃度端に、一定の隙間をおいて、濃度一定の低濃度
のポリアクリルアミドゲル又はアガロースゲルを固定し
て配したものを泳動分離用支持体として用い、一次元目
の泳動分離を濃度一定のゲル内で行ない、濃度一定のゲ
ル内に分離された被分析成分を、次に、隙間を泳動せし
めて、濃度勾配ゲル内で泳動分離することを特徴とする
簡易二次元電気泳動法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57022746A JPS58140634A (ja) | 1982-02-17 | 1982-02-17 | 簡易二次元電気泳動法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57022746A JPS58140634A (ja) | 1982-02-17 | 1982-02-17 | 簡易二次元電気泳動法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58140634A true JPS58140634A (ja) | 1983-08-20 |
Family
ID=12091255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57022746A Pending JPS58140634A (ja) | 1982-02-17 | 1982-02-17 | 簡易二次元電気泳動法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58140634A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4874490A (en) * | 1988-11-04 | 1989-10-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Pre-cast gel systems for two-dimensional electrophoresis |
| JP2006242802A (ja) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 二次元電気泳動方法 |
| JP2007064848A (ja) * | 2005-08-31 | 2007-03-15 | Sharp Corp | 自動化２次元電気泳動装置および装置構成器具 |
| JP2014077811A (ja) * | 2014-02-06 | 2014-05-01 | Hoyu Co Ltd | ２次元電気泳動方法 |
-
1982
- 1982-02-17 JP JP57022746A patent/JPS58140634A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4874490A (en) * | 1988-11-04 | 1989-10-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Pre-cast gel systems for two-dimensional electrophoresis |
| JP2006242802A (ja) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 二次元電気泳動方法 |
| JP2007064848A (ja) * | 2005-08-31 | 2007-03-15 | Sharp Corp | 自動化２次元電気泳動装置および装置構成器具 |
| JP2014077811A (ja) * | 2014-02-06 | 2014-05-01 | Hoyu Co Ltd | ２次元電気泳動方法 |
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