JPS5813862B2 - セイタイシリヨウチユウ ノ ユウリシボウサン ノ テイリヨウヨウソセイブツ - Google Patents
セイタイシリヨウチユウ ノ ユウリシボウサン ノ テイリヨウヨウソセイブツInfo
- Publication number
- JPS5813862B2 JPS5813862B2 JP1601474A JP1601474A JPS5813862B2 JP S5813862 B2 JPS5813862 B2 JP S5813862B2 JP 1601474 A JP1601474 A JP 1601474A JP 1601474 A JP1601474 A JP 1601474A JP S5813862 B2 JPS5813862 B2 JP S5813862B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- derivative
- fatty acids
- carbazide
- chloroform
- nefa
- Prior art date
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- Expired
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は生体試料中に含まれる遊離脂肪酸の定量用組成
物に関する。
物に関する。
血液中に存在する遊離脂肪酸（以下ＮＥＦＡと略記する
）は糖と脂肪の代謝の媒体として働き、脂質代謝あるい
は糖代謝に密接な関連性を持つものであることが明らか
にされ、臨床的には特に重症肝障害、甲状腺機能不全あ
るいは糖代謝に異常をきたす疾患の診断並びに治療経過
の観察には血液中のＮＥＦＡの挙動を知ることが必須の
事となっている。
）は糖と脂肪の代謝の媒体として働き、脂質代謝あるい
は糖代謝に密接な関連性を持つものであることが明らか
にされ、臨床的には特に重症肝障害、甲状腺機能不全あ
るいは糖代謝に異常をきたす疾患の診断並びに治療経過
の観察には血液中のＮＥＦＡの挙動を知ることが必須の
事となっている。
生体試料中のＮＥＦＡの測定法としては滴定法と比色法
とがあるが、比色法は滴定法に比し操作が簡易であり、
必要とする試料も少量ですむので、臨床検査では主に比
色法が採用されている。
とがあるが、比色法は滴定法に比し操作が簡易であり、
必要とする試料も少量ですむので、臨床検査では主に比
色法が採用されている。
比色法の原理は脂肪酸の銅、コバルト、ニッケルなどの
金属塩が有機溶媒に溶解するが、脂肪酸と結合しない銅
、コバルト、ニッケルなど金属イオンは有機溶媒に溶解
しない性質を利用し、生体試料に前記金属塩類を加え脂
肪酸の前記金属塩のみを有機溶媒層に移行させ、抽出さ
れた金属量を呈色試薬を使用して比色定量し、同時に随
伴したＮＥＦＡ量を知ることに基く。
金属塩が有機溶媒に溶解するが、脂肪酸と結合しない銅
、コバルト、ニッケルなど金属イオンは有機溶媒に溶解
しない性質を利用し、生体試料に前記金属塩類を加え脂
肪酸の前記金属塩のみを有機溶媒層に移行させ、抽出さ
れた金属量を呈色試薬を使用して比色定量し、同時に随
伴したＮＥＦＡ量を知ることに基く。
この際抽出溶媒としては通常クロロホルムが単独あるい
は他の溶媒たとえばヘプタンなどと合目的的に混合して
用いられる。
は他の溶媒たとえばヘプタンなどと合目的的に混合して
用いられる。
銅塩として遊離脂肪酸を有機溶媒に抽出して行う定量法
において呈色試薬としてはジエチルジチオカルバミン酸
、バソクプロインのほか公知文献（１）〔クリニカ、ヒ
ミカ、アクタ（ Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍ一ｉｃａ
Ａｃｔａ）、第４５巻５５〜５９頁（ １ ９ ７ ３
））、また公知文献（２）〔クリニカ、ヒミカ、アクク
（ Ｃｌ ｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ）
、第２６巻１２７〜１３０頁（１９６９））の記載にあ
る如くジフエニルカルバジドが用いられるが、表１の如
くカルバジド誘導体（以下、ジフエニル力ルバジド誘導
体をいう。
において呈色試薬としてはジエチルジチオカルバミン酸
、バソクプロインのほか公知文献（１）〔クリニカ、ヒ
ミカ、アクタ（ Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍ一ｉｃａ
Ａｃｔａ）、第４５巻５５〜５９頁（ １ ９ ７ ３
））、また公知文献（２）〔クリニカ、ヒミカ、アクク
（ Ｃｌ ｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ）
、第２６巻１２７〜１３０頁（１９６９））の記載にあ
る如くジフエニルカルバジドが用いられるが、表１の如
くカルバジド誘導体（以下、ジフエニル力ルバジド誘導
体をいう。
）が感度が最も高い長所がある。本発明者らは実際に公
知文献（１）に従い追試したところカルバジド誘導体は
他の呈色試薬に比し数倍の分子吸光係数を示したが、呈
色感度が高いという利点とは逆に、呈色の安定性が極め
て悪いという欠点を有することを発見した。
知文献（１）に従い追試したところカルバジド誘導体は
他の呈色試薬に比し数倍の分子吸光係数を示したが、呈
色感度が高いという利点とは逆に、呈色の安定性が極め
て悪いという欠点を有することを発見した。
即ち呈色後の退色が極めて早く、数分以内に退色し、完
全に消失する。
全に消失する。
かように呈色が不安定であるということは日常の臨床検
査として採用し難い重大な欠点である。
査として採用し難い重大な欠点である。
本発明者らはかかる欠点を有するカルバジド誘導体を呈
色剤として用いるＮＥＦＡ測定方法について種々検討を
重ねた結果、カルバジド誘導体に対応するカルバゾン誘
導体（以下、ジフエニル力ルバゾン誘導体をいう。
色剤として用いるＮＥＦＡ測定方法について種々検討を
重ねた結果、カルバジド誘導体に対応するカルバゾン誘
導体（以下、ジフエニル力ルバゾン誘導体をいう。
）を添加すれば、呈色が極めて安定化することを発見し
、従来の測定方法より優れたＮＥＦＡ測定方法を組立て
ることに成功し、本発明を完成させた。
、従来の測定方法より優れたＮＥＦＡ測定方法を組立て
ることに成功し、本発明を完成させた。
本発明は発色剤にカルバジド誘導体と対応するカルバヅ
ン誘導体の混合物を使用するが、使用にあたってはたと
えはメタノール、エタノール、アセトン等、本剤を溶か
しうる溶媒に溶かし溶液として使用するか、あるいは粉
末、錠剤等の型で使用することも可能である。
ン誘導体の混合物を使用するが、使用にあたってはたと
えはメタノール、エタノール、アセトン等、本剤を溶か
しうる溶媒に溶かし溶液として使用するか、あるいは粉
末、錠剤等の型で使用することも可能である。
溶液として用いる場合発色剤の濃度は通常１〜１０％と
する力胡宿こ限定はしない。
する力胡宿こ限定はしない。
カルバジド誘導体に対応するカルバゾンを種々の割合で
混合した場合の呈色の時間的な変化を表２に示す。
混合した場合の呈色の時間的な変化を表２に示す。
表２の如くカルバジド誘導体に混合するカルバゾン誘導
体の割合が０．１％でも呈色の感度、呈色の安定性の向
上に極めて有効であるが、カルバゾン誘導体自身５３０
〜５６０ｎｍ付近に最大吸収波長を持つ為、多量に用い
ることは試薬盲検を高めるのでカルバジド誘導体に対す
るカルバゾン誘導体の割合は１０％以下が好ましいが、
特に限定するものではない。
体の割合が０．１％でも呈色の感度、呈色の安定性の向
上に極めて有効であるが、カルバゾン誘導体自身５３０
〜５６０ｎｍ付近に最大吸収波長を持つ為、多量に用い
ることは試薬盲検を高めるのでカルバジド誘導体に対す
るカルバゾン誘導体の割合は１０％以下が好ましいが、
特に限定するものではない。
カルバジド誘導体としては、例えばジフエニル力ルバジ
ドのベンゼン核にアルキル基、又はハロゲン原子等が置
換したもの、又はジフエニルチオ力ルバジド、ジフエニ
ルチオ力ルバジドのベンゼン核にアルキル基、又はハロ
ゲン原子等が置換したもの等が挙げられる。
ドのベンゼン核にアルキル基、又はハロゲン原子等が置
換したもの、又はジフエニルチオ力ルバジド、ジフエニ
ルチオ力ルバジドのベンゼン核にアルキル基、又はハロ
ゲン原子等が置換したもの等が挙げられる。
さらに好都合なことにはカルバゾン誘導体を共存させる
ことにより、カルバジド誘導体単独の場合に比べ約２０
％呈色の感度が高くなることもわかった。
ことにより、カルバジド誘導体単独の場合に比べ約２０
％呈色の感度が高くなることもわかった。
カルバゾン誘導体を含有したカルバジド誘導体を呈色剤
に使用した場合、従来のジエチルジチオカルバミン酸の
数倍の分子吸光係数を持つから、試料の使用量を数分の
一にすることができ、微量の試料しか使用できない臨床
検査には極めて有利であり、さらに血清成分の影響が少
なくなるため、正確な結果が得られる。
に使用した場合、従来のジエチルジチオカルバミン酸の
数倍の分子吸光係数を持つから、試料の使用量を数分の
一にすることができ、微量の試料しか使用できない臨床
検査には極めて有利であり、さらに血清成分の影響が少
なくなるため、正確な結果が得られる。
さらには本発明の方法によれば呈色が極めて安定である
ため従来法に比べ表３の如く、バラツキの少ない測定値
が得られる。
ため従来法に比べ表３の如く、バラツキの少ない測定値
が得られる。
本発明は臨床医学上極めて有用な結果を与え、診断、治
療医学に貢献するところ大なるものがある。
療医学に貢献するところ大なるものがある。
以下に本発明の実施例を示す。実施例 １
試薬
本発明組成物・・・・・・ジーｐ−メチルフエニルカル
ハソン１０ｍｇとジーｐ−メチルフエニルカルバジド４
９０ｍｇをメチルアルコールに溶解し全量を１００ｍｌ
とする。
ハソン１０ｍｇとジーｐ−メチルフエニルカルバジド４
９０ｍｇをメチルアルコールに溶解し全量を１００ｍｌ
とする。
緩衝液・・・・・・リン酸−カリウム５ ４． ５ Ｐ
１ リン酸ニカリウム（１２水塩）１７．４Ｐに水を
加え正確に１ｔとする。
１ リン酸ニカリウム（１２水塩）１７．４Ｐに水を
加え正確に１ｔとする。
銅試薬・・・・・・１Ｍトリエタノールアミン水溶液、
ＩＮ酢酸、６４５％Ｃｕ（Ｎ０３）２・３Ｈ２０水溶液
を容量で９：１：１０の割合で混合する。
ＩＮ酢酸、６４５％Ｃｕ（Ｎ０３）２・３Ｈ２０水溶液
を容量で９：１：１０の割合で混合する。
抽出剤・・・・・・クロロホルム
測定方法
共栓試験管にクロロホルム４ｄと０． ５ Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ６．２）１ｍｌをとり血清０．０５ｍｌを加
える。
衝液（ｐＨ６．２）１ｍｌをとり血清０．０５ｍｌを加
える。
振とうし遊離脂肪酸をクロロホルム層に抽出する。
上層を取り除いたクロロホルム層に銅試液２ＴＬｌを添
加し振り混ぜる。
加し振り混ぜる。
微量の水層部分も混入しないよう注意して下層のクロロ
ホルム層を別の清浄な試験管に移す。
ホルム層を別の清浄な試験管に移す。
発色剤１．５１ｎｌを加え混和する。
５５０ｎｍ付近の吸光度を測定する。別に標準液を用い
て同様に操作して得られた検量線からＮＥＦＡの量を求
める。
て同様に操作して得られた検量線からＮＥＦＡの量を求
める。
実施例 ２
試薬
本発明絹成物・・・・・・ジーｐ−プロムフエニルカル
バゾン５０■とジーｐ−プロムフエニル力ルハシド４５
０〜をアセトンで溶解し全量を１００属とする。
バゾン５０■とジーｐ−プロムフエニル力ルハシド４５
０〜をアセトンで溶解し全量を１００属とする。
銅試液・・・・・・トリエタノールアミン６．７ｇに水
７０ｍｌを加え溶解する。
７０ｍｌを加え溶解する。
さらに硫酸銅３３６グ、氷酢酸０． ３ｍｌ塩化ナトリ
ウム２０１、水酸化ナトリウム０．４５ｇそれに水を加
え全容を１００１ｒＬｌとする。
ウム２０１、水酸化ナトリウム０．４５ｇそれに水を加
え全容を１００１ｒＬｌとする。
抽出剤・・・・・・クロロホルムとへブタンの１：１混
合液。
合液。
測定方法
共栓試験管に抽出剤３ＴＬｌと銅試液１１１ｌｌをとり
血清０．０５ｍｌを加える。
血清０．０５ｍｌを加える。
振とうし遊離脂肪酸の銅塩をクロロホルムーヘブタン層
に抽出する。
に抽出する。
二層を分離しクロロホルムーヘブタン層から２ｍを別の
清浄な試験管に移す。
清浄な試験管に移す。
発色剤ＩＴＬｌを加え混和する。５３０〜５ ６ ０
ｎｍ付近の吸光度を測定する。
ｎｍ付近の吸光度を測定する。
別に標準液を用いて同様に操作して得られた検量線から
ＮＥＦＡの量を求める。
ＮＥＦＡの量を求める。
Claims (1)
- １ ジフエニルカルバジド誘導体即チシフエニル力ルバ
ジドのベンゼン核にアルキル基、又はハロゲン原子が置
換したものと対応するジフエニル力ルバゾン誘導体の混
合物を用いることを特徴とする生体試料中の遊離脂肪酸
の定量用組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1601474A JPS5813862B2 (ja) | 1974-02-08 | 1974-02-08 | セイタイシリヨウチユウ ノ ユウリシボウサン ノ テイリヨウヨウソセイブツ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1601474A JPS5813862B2 (ja) | 1974-02-08 | 1974-02-08 | セイタイシリヨウチユウ ノ ユウリシボウサン ノ テイリヨウヨウソセイブツ |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16179682A Division JPS5892862A (ja) | 1982-09-17 | 1982-09-17 | 生体試料中の遊離脂肪酸の定量用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS50110698A JPS50110698A (ja) | 1975-08-30 |
| JPS5813862B2 true JPS5813862B2 (ja) | 1983-03-16 |
Family
ID=11904706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1601474A Expired JPS5813862B2 (ja) | 1974-02-08 | 1974-02-08 | セイタイシリヨウチユウ ノ ユウリシボウサン ノ テイリヨウヨウソセイブツ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5813862B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4777143A (en) * | 1986-12-12 | 1988-10-11 | Litmus Concepts Inc. | Method of detecting carboxylic acids in a specimen |
-
1974
- 1974-02-08 JP JP1601474A patent/JPS5813862B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS50110698A (ja) | 1975-08-30 |
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