JPS58113192A - Antibiotic substance safracin a and/or b - Google Patents

Abstract

NEW MATERIAL:The compound of formula (R is H or OH) having the following physical and chemical properties. Hydrochloride of safracin A: appearance, light yellow powder; melting point, begins to carbonize at 230 deg.C, and liquefies at >=300 deg.C; elemental analysis, C 54.83%, H 6.54%, N 9.01%, Cl<-> 11.99%; molecular formula C28H36N4O6.2HCl; solubility, soluble in water and methanol; specific rotation,[alpha]<21>D-144 deg. (c=0.5, methanol); etc. Hydrochloride of safracin B: melting point, begins to carbonize at 215 deg.C and starts to melt at 260 deg.C; elementary analysis, C 55.10%, H 6.61%, N 8.88%, Cl<-> 11.40%; specific rotation,[alpha]<21>D- 106 deg.; etc. USE:Antibacterial agent against Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, and various bacteria, and carcinostatic agent. PROCESS:A bacterial strain such as Pseudomonas fluorescens A2-2 strain (FERM BP-14) is cultured at 20-27 deg.C for 2-4 days preferably under nearly neutral condition.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗生物質サフラシンＡおよび／またはＢ１ま
たはその酸付加塩に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to the antibiotic safracin A and/or B1 or an acid addition salt thereof.

本発明者らは、シュードモナス属に属する特定菌株の培
養物中に、グラム陽性、グラム陰性細菌に強力な発育阻
止作用を示し、抗触瘍活性を示す物質が存在することを
見出し、培養物中から有効成分を採収したところ、２成
分の混合物であることが判った。The present inventors discovered that a culture of a specific bacterial strain belonging to the genus Pseudomonas contains a substance that exhibits a strong growth-inhibitory effect on Gram-positive and Gram-negative bacteria and exhibits anti-ulcer activity. When the active ingredient was collected, it was found to be a mixture of two components.

この混合物の有効成分をサフラシン（８ａｆｒａｃｉｎ
　）と命名し、後述する精製法で分離し、それぞれの有
効成分をサフラシンＡおよびサフラシンＢと命名し、本
発明を完成した。The active ingredient of this mixture is safracin (8afracin).
) and were separated by the purification method described below, and the respective active ingredients were named Safracin A and Safracin B, and the present invention was completed.

本発明の抗生物質サフラシンＡ物質の塩酸塩での理化学
的性質は次の通りである。The physicochemical properties of the antibiotic safracin A substance of the present invention as a hydrochloride are as follows.

（１）外観：淡黄色粉末 （２）融点＝２３０℃から炭化しはじめ、液化温度は３
００℃以上 （３）元素分析値：Ｃ５４，８３％、Ｈ６，５４％、Ｈ
９，０１％、。ＩＰｌｌ、９９％ （４）分子式：Ｃ２８Ｈ３６Ｎ４ｏ６・２Ｈｃ１・Ｂ２
゜（５）溶解性：水、メタノールに溶け、酢酸エチル、
クロロホルム、エーテル、ベンゼンＫ［−んど溶けない
。(1) Appearance: Pale yellow powder (2) Melting point: Starts to carbonize at 230℃, liquefaction temperature is 3
00℃ or higher (3) Elemental analysis values: C54, 83%, H6, 54%, H
9,01%. IPll, 99% (4) Molecular formula: C28H36N4o6・2Hc1・B2
゜(5) Solubility: Soluble in water, methanol, ethyl acetate,
Chloroform, ether, benzene K [- almost insoluble.

（６）比＆　光度：　Ｃα〕２１−１４４°（Ｃ＝０．
５、メタメール） （７）紫外部吸収スペクトル：第１図に示す通りである
。(6) Ratio & luminosity: Cα]21-144° (C=0.
5. Metamail) (7) Ultraviolet absorption spectrum: As shown in FIG.

λＭ００Ｈ＝２７１ｎｍ　（Ｅ　”＝　１６２　）ｍ　
ａ　ｘ　　　　　　　　′１ＬＩｎ（８）赤外部吸収ス
ペクトル：第２図に示す通りである。λM00H=271nm (E”=162)m
a x ′1LIn(8) Infrared absorption spectrum: As shown in FIG.

（９）薄層クロマトクリフィー（シリカゲル）：Ｒｆ＝
　０．５　（１−／Ｌ’エン：クロロホルム：メタノー
ル＝ｌ：３：２） Ｒｆ＝０．４（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４＝ｌ：１
） （ト）呈色反応：ニンヒドリン、ドラーゲンドルフ、ま
た、抗生物質サフラシンＢの塩酸塩での理化学的性質は
、次の通シである。(9) Thin layer chromatography (silica gel): Rf=
0.5 (1-/L'ene:chloroform:methanol=l:3:2) Rf=0.4(n-butanol:acetic acid:water=4=l:1
(G) Color reaction: The physicochemical properties of ninhydrin, Dragendorff, and the antibiotic safracin B in hydrochloride are as follows.

（１）外＋１＃、：淡黄色粉末 （２）融点：２１５℃から炭化しはじめ、２６０　℃で
欧化がはじまる。(1) External + 1#: Pale yellow powder (2) Melting point: Carbonization begins at 215°C and Europeanization begins at 260°C.

（３）元素分析値：Ｃ５５，１０％、Ｈ６，６１％、Ｈ
８，８８％、ｃＰ　１１．４０％ （４）溶解性：水、メタノールに溶け、酢酸エチル、ク
ロロホルム、エーテル、ベンゼンにはトント溶けない。(3) Elemental analysis values: C55, 10%, H6, 61%, H
8.88%, cP 11.40% (4) Solubility: Soluble in water and methanol, not at all soluble in ethyl acetate, chloroform, ether, and benzene.

（５）比旋光度：〔α］””−１０６°（Ｃ＝０．５、
メタノール） （６）紫外部吸収スペクトル：＠３図に示す通りである
。(5) Specific rotation: [α]””-106° (C=0.5,
methanol) (6) Ultraviolet absorption spectrum: As shown in Figure @3.

（７）赤外部吸収スペクトル：第４図に示す通りである
０ （８）４Ｍクロマトグラフィー（シリカゲル）：Ｒｆ＝
０．６（）ルエン：クロロホルム：メタノール−１：３
：２） Ｒｆ＝０．４５（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：
１） （９）呈色反応：ニンヒドリン、ドラーゲンドルフ、塩
化第２鉄反応に陽性を示す。(7) Infrared absorption spectrum: 0 as shown in Figure 4. (8) 4M chromatography (silica gel): Rf=
0.6 () toluene:chloroform:methanol-1:3
:2) Rf=0.45 (n-butanol:acetic acid:water=4:1:
1) (9) Color reaction: Shows positivity for ninhydrin, Dragendorff, and ferric chloride reactions.

哨塩基性・酸性・中性の区別二両性化合物これらの理化
学的性質および杉伺気共１（υスペタトノへＸ線ｊヅを
析などに基づいて、零発明者らは、と、さらに、サフラ
シンＢの１４寥造式をと決定した。Based on the physicochemical properties of biampholytic compounds, the distinction between basic, acidic, and neutral, and the analysis of X-rays to We decided on the 14-piece construction style of B.

これら本兄用の抗生物質サフラシンＡおよびす７ラシン
Ｂは、次に示す逼り、ダラム陽性園、ダラム陰性口を問
わず、Ａ４１菌類に対して抗菌力を有している。１だ、
抗肺錫活性も何するため、抗菌剤、但１ガンＡＩとして
用いられる。These main antibiotics, Safracin A and Su7racin B, have antibacterial activity against A41 fungi regardless of the following conditions: positive for Durham, and negative for Durham. It's 1.
Because of its anti-pulmonary activity, it is also used as an antibacterial agent, but also as a cancer AI.

（１１抗菌力については、たとえばＵ＊化学僚法学会標
早法に坐じて測定した最小発育阻止濃度を第１表に示す
。(11) Regarding antibacterial activity, for example, the minimum inhibitory concentration measured using the U*Chemical Law Society standard method is shown in Table 1.

一以下余白一 報 第　　　１　　　表 （培地は、トリプトソイ寒天を用い×をト」シたものは
、１０％血液添加トリプトソイ；家人を用いた。）（２
）抗腫陪活住 試験例１ １群５匹の雌性ＣＴ）Ｆよ系マウス（６〜７週食）に１
０６細胞１０．２ｒｎｌ／ＷクスにＬ−１２１０白血病
細胞を腹腔内移植し、２４時間後に生理食塩水に溶かし
た抗生物質サフラシンＡを１日１回４日間連続で腹腔的
投与して平均生存日数および延命率を求めた。その結果
を第２表に示す。Table 1 (Trypto soy agar was used as the culture medium; Trypto soy supplemented with 10% blood was used as the culture medium; a family member was used.) (2
) Antitumor living test example 1 1 group of 5 female CT) F-type mice (6-7 week diet)
L-1210 leukemia cells were intraperitoneally transplanted into 06 cells 10.2rnl/W, and 24 hours later, the antibiotic safracin A dissolved in physiological saline was intraperitoneally administered once a day for 4 consecutive days to determine the average survival time. and the life extension rate. The results are shown in Table 2.

第　　　２　　　表 ここで、平均生存日数は、Ｔ／Ｃ（’Ｉ’は、薬剤処理
マクスの平均生存日数を、Ｃは未処理マウスの平均生存
日数を示す。）で示し、延命率は、次式により求めた（
以下の試験例においても同様でＣ 延命率（％）＝−Ｘ１００ 試験例２ １′ｎ５匹ノ雌性ｃｎｒ１ｉ−ｖクス（６〜７Ｍ＋）Ｋ
１０６細胞７０．２ｍｌ／マクスの工ＭＣ乳癌細胞を腹
腔内移植し、２・４時間後に生理食塩水に溶かした抗生
物質サフラシンＡを１日１回４日間連続で腹腔的投与し
て平均生存日数および延命率を求めた。その結果を第３
表に示す。Table 2 Here, the average survival days are shown as T/C ('I' indicates the average survival days of drug-treated mice, and C indicates the average survival days of untreated mice), and the survival rate is as follows: It was calculated using the formula (
The same applies to the following test examples C Life extension rate (%) = -X100 Test example 2 1'n5 female cnr1i-vx (6-7M+) K
106 cells/70.2 ml/max of engineering MC breast cancer cells were transplanted intraperitoneally, and 2.4 hours later, the antibiotic safracin A dissolved in physiological saline was intraperitoneally administered once a day for 4 consecutive days to determine the average survival days. and the life extension rate. The result is the third
Shown in the table.

第３表 試験例３ １群５匹の雌性ＣＤＦ工系マクス（６〜７週食）に１０
６細胞／　０．２　ｍｅ／マクスのＰ−３８８白血病細
胞を腹腔内移植し、２４時間後に生理食塩水に溶かした
抗生物質サクラシンＢを１日１回５日間連続で腹腔的投
与して平均生存日数および延命率を求めた。その結果を
第４表に示す。Table 3 Test Example 3 1 group of 5 female CDF engineering makus (6-7 week diet)
6 cells/0.2 me/max of P-388 leukemia cells were transplanted intraperitoneally, and 24 hours later, the antibiotic Sucrasin B dissolved in physiological saline was intraperitoneally administered once a day for 5 consecutive days to determine the average survival. The number of days and survival rate were determined. The results are shown in Table 4.

第　　４　　表 試験例４ １群５匹の雌性ＣＤＦ工系マウス（６〜７週４Ｆ）に１
０６細胞／　０．２　ｍｅ／マクスの工ＭＣ乳癌細胞を
１２− 腹腔内移植し、２４時間後に生理食塩水に溶かした抗生
物質す７ラシンＢを１日１回４日間連続で腹腔的投与し
て平均生存日数および延命率を求めた。Table 4 Test Example 4 1 group of 5 female CDF engineered mice (6-7 weeks 4F)
06 cells/0.2 me/max were transplanted intraperitoneally, and 24 hours later, the antibiotic Su7racin B dissolved in physiological saline was intraperitoneally administered once a day for 4 consecutive days. The average survival days and survival rate were determined.

第５表 試験例５ Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、　Ｒｅｐ−、３、
（１９７２）に記載の方法に準じて黒色膿細胞を１群５
匹の雌性ＣＤＦｌ系マクス（６〜７週食）に腹腔内移植
し、２４時間後に生理食塩水に溶かしたす７ラシンＢを
１日１回４日間連続で腹腔的投与して平均生存日数およ
び延命率を求めた。その結果を第６表に示す。Table 5 Test Example 5 Cancer Chemother, Rep-, 3,
(1972), one group of 5 melanobinous cells was collected.
The mean survival days and The life extension rate was calculated. The results are shown in Table 6.

第６表 （３）急性毒性値 １輌＋１０匹の雌性ＪＣＬ：工ＣＲ系マウス（４週令、
体重２０〜２２ｇ）にサフラシンＡまたはサフラシンＢ
を腹腔内または経口投与し、７日後の生存率からプロビ
ット法により”Ｄ５０値を求めた。その結果を第７表に
示す。Table 6 (3) Acute toxicity value of 1 car + 10 female JCL: Engineering CR mouse (4 weeks old,
safracin A or safracin B (body weight 20-22 g)
was administered intraperitoneally or orally, and the "D50 value" was determined from the survival rate after 7 days by the probit method. The results are shown in Table 7.

一以下余白一 本発明の抗生物質を医薬として用いる場合には薬理上許
容されうる担体、賦形剤、希釈剤などと混合し、錠剤、
散剤、カプセル剤、注射剤などの形で投与されうる。投
与量は、症状、投与法などにより異なるが、通常成人１
日あたり経口投与で５〜１１００ｒｎ／Ｋｇ休菫が適当
である。When the antibiotic of the present invention is used as a medicine, it is mixed with pharmacologically acceptable carriers, excipients, diluents, etc.
It can be administered in the form of powder, capsule, injection, etc. The dosage varies depending on the symptoms, administration method, etc., but is usually 1.
Oral administration of 5 to 1100 rn/Kg per day is appropriate.

本＠明の抗生物質す７ラシンは、シュードモナス属に属
し、抗生物質サフラシンＡまたはサクラシンＢを生産す
る能力を有するものを培養するこ　　　　　　ｊとによ
り生産される。その生ｒｆ：菌として、たとえば、本発
明者らが福岡県田川郡添田町にある英彦山山麓から分離
したシュードモナス・スルオレスセンスＡ２−２株（以
後Ａ２−２株と略称することもある。）があげられる。The antibiotic 7 Racine belongs to the genus Pseudomonas and is produced by culturing sacracin which has the ability to produce the antibiotic sacracin A or sacracin B. For example, as the bacteria, Pseudomonas sluorescens A2-2 strain (hereinafter sometimes abbreviated as A2-2 strain) was isolated from the foot of Mt. Hiko in Soeda-cho, Tagawa-gun, Fukuoka Prefecture by the present inventors. can be given.

この人２−２株の細菌学的性質は、次の通りである。The bacteriological properties of this human 2-2 strain are as follows.

（１）形態 肉汁および肉汁寒天培地に生育した細胞は以下の形態を
示す。(1) Morphology Cells grown in broth and broth agar medium exhibit the following morphology.

■両＠鈍円な桿菌で、菌体は特に湾曲していない。■Both @ obtuse rod, the bacterial body is not particularly curved.

大きさは０．８　Ｘ　２〜３／’Ｉであり、配列は不規
則で連鎖を作らない。多くの細胞は孤在するが２個連接
しているものもある。The size is 0.8 x 2-3/'I, and the arrangement is irregular and does not form a chain. Many cells are solitary, but some are two connected cells.

■多形成なし。■No polyplasia.

■運−Ｊ性あり。ライフシン鞭毛染色法により極多毛性
鞭毛を認める。■ Luck - J-like. Extremely multicellular flagella are observed using the Lifesin flagellar staining method.

１６− ■胞子形成なし。16- ■No spore formation.

０３０℃、２４時間培養菌のダラム染色保木では、ダラ
ム陰性桿菌のみが認められる。In Durham staining and preservation of bacteria cultured at 030°C for 24 hours, only Durham-negative bacilli were observed.

■抗酸性なし。■No acid resistance.

（２）各種培地における生育状惑 ■肉汁寒天培地 ３０℃、２４時間培養の集落は微小で、４８時間培養の
集落は直径１〜１．５　ｍｍ　ｆＩＪ形で、辺縁正、表
面滑かで淡黄色半透明で、湿潤し、少し光沢あり。水溶
性色素なし。(2) Growth status in various media ■ Broth agar medium Cultured at 30°C for 24 hours, the colonies were tiny, and those cultured for 48 hours were 1-1.5 mm in diameter, fIJ-shaped, with positive edges and smooth surface. Pale yellow, translucent, moist and slightly glossy. No water-soluble dyes.

■肉汁寒天斜面 ３０℃、２４時間培養の菌苔は、糸状に生育し、淡黄色
、半透明、湿潤し、鈍い光沢あり。■ Fungal moss grown on a gravy agar slope at 30°C for 24 hours grows in the form of threads, is pale yellow, translucent, moist, and has a dull luster.

■肉汁液体培養 ３０℃、２４時間培養では、液は均等に混１節している
。日数の経過とともに試験省・底に沈殿を生するが、菌
ｊ匠は形成されない。■ Meat juice liquid culture When cultured at 30°C for 24 hours, the liquid is evenly mixed. As the days pass, a precipitate forms on the bottom of the test, but no bacteria are formed.

■肉汁ゼラチン ２０〜２１’Ｃで培貢すると培地大局および芽刺線上部
で増殖し、培賛３日目壕ではロート状の油化が生じ、そ
れ以後、ｊ示々に１１！２伏に増強する。■ When cultured with meat juice gelatin at 20-21'C, it proliferated in the general area of the medium and above the shoot line, and on the third day of culture, a funnel-shaped oil formation occurred in the trench, and after that, it suddenly decreased to 11!2. Strengthen.

■リドマスミルク ペプトン化が起り、弱酸性になる。■Lidomas Milk Peptonization occurs, making it slightly acidic.

（３）生（ｌｌ学的性質 一一−↓＋’ｊ　Ｌ　Ｕｈ、−＼−）１１７．０Ｆ培朋
での粘からの酸産生 −以下余白一 （４）その他の性状 以上の場貫町児に基つい１、バーシイース・マニュアル
・オプ・デイターミネイティブ・バクテリオロジイー（
Ｂａｒｇｅｙｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉ
　−ｎａｔｉｖａ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第８
版（１９７４年発行）を参考にして、Ａ２−２株の近縁
菌種を検討すると、シュードモナス・フルオレスセンス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　
）があげられる０しかし々から、前記した培養所見を比
較すると、■麦芽糖、ショ糖、ラムノースからの酸産生
で、′Ａ２−２株は公知のシュードモナス・フルオレス
センスと異なること、■公知のシュードモナス・フルオ
レスセンスはホスファターゼ活性を有しないが、Ａ２−
２株は有すること、および■Ａ２−２株は抗生物質サフ
ラシンを生産することなどの点で相遣している。　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１以上のことから
、Ａ２−２株は、相違点はあるものの基本的には、シュ
ードモナス・フルオレスセンス（Ｐｓｅｕｃｌｏｍｏｎ
ａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　）と一致するので、シ
ュードモナス・フルオレスセンスＡ２−２株（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　Ａ２　２株
）と命名した。(3) Acid production from viscosity in raw (ll Scientific properties 11-↓+'j L Uh, -\-) 117.0F culture - blank space below (4) Other properties or higher 1, VersiEs Manual Op Determinative Bacteriology (
Bargeys Manual of Determi
-nativa Bacteriology) No. 8
(published in 1974) and examined the related bacterial species of strain A2-2, it was found that Pseudomonas fluorescens
), but when comparing the culture findings described above, it can be seen that: 1) the 'A2-2 strain differs from the known Pseudomonas fluorescens in terms of acid production from maltose, sucrose, and rhamnose; Pseudomonas fluorescens does not have phosphatase activity, but A2-
The two strains are compatible, and the A2-2 strain produces the antibiotic safracin.
Based on the above, the A2-2 strain is basically Pseudomonas fluorescens, although there are differences.
Pseudomonas fluorescens strain A2-2 (Pseudomonas fluorescens).
domonas fluorescens A2 2 strains).

この菌は、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条
寄第１４す（ｒＥＩ？Ｍ　ＢＰ−１４）として受託され
ている。This bacterium has been entrusted to the Institute of Microbial Technology, Agency of Industrial Science and Technology as the Microbiological Research Institute No. 14 (rEI?M BP-14).

来園においては、サフラシンＡまたはサフラシンＢを生
産する性質を失わない限り、他の生理学的生化学的性状
が変異しても本発明に使用することができる。もちろん
、それらの変異株が自然の原因に由来するものであって
も、人工的に行われるものであってもさしつかえない。Even if other physiological and biochemical properties change during the visit, the plant can be used in the present invention as long as the ability to produce safracin A or safracin B is not lost. Of course, it does not matter whether the mutant strains are derived from natural causes or are produced artificially.

本発明の方法においては、上記のようなＡ２−２株が培
養される。Ａ２−２株は、適当な培養条件下で発育させ
ると、抗生物質サフラシンＡとサフラシンＢを生産する
。In the method of the present invention, the A2-2 strain as described above is cultured. Strain A2-2 produces the antibiotics safracin A and safracin B when grown under appropriate culture conditions.

培地には来園が同化しつる炭素源、消化しうる窒素源お
よび無機塩など含有させることができる。The culture medium can contain carbon sources that can be assimilated by visitors, nitrogen sources that can be digested, and inorganic salts.

また、必要に応じて微量栄養素促進物質、ＡＮ駆物質な
どのＶ、量有効物質を培地に添加してもよい。Further, if necessary, V, amount-effective substances such as micronutrient-promoting substances and AN-stimulating substances may be added to the medium.

Ａ２−２株が、同化しうる炭素源としては、グルコース
、マンニトール、クリセロール、フルクトースなどがあ
り、消化しうる窒素源としては、肉エキス、ペプトン、
カゼイン、コーンスチープリカー、大豆粉、乾燥酵母な
どの有磯窒累化合物や硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウ
ムなどの無機窒素化合物があり、それらはいずれも有効
に利用される。Carbon sources that can be assimilated by the A2-2 strain include glucose, mannitol, chrycerol, and fructose, and nitrogen sources that can be digested by the A2-2 strain include meat extract, peptone,
There are organic nitrogen compounds such as casein, corn steep liquor, soybean flour, and dried yeast, and inorganic nitrogen compounds such as sodium nitrate and ammonium sulfate, all of which can be used effectively.

培養を行う場合、Ａ２−２株を適切な培地に接種し、好
気的条件下で培養する。培地は中性付近が良く、培養時
の温度は、４〜３５°Ｃで生′＃可能であるが、２０〜
２７℃に保つのがよい。培養は２日ないし４日で終了す
る。When culturing, strain A2-2 is inoculated into a suitable medium and cultured under aerobic conditions. The medium should be around neutrality, and the culture temperature can be kept at 4-35°C;
It is best to keep it at 27°C. Cultivation is completed in 2 to 4 days.

培養物から抗生物質サフラシンＡ１ザ７ラシンＢを採取
する方法としては、微生物の生産する代謝産物を採収す
るのに通常用いられる手段を適宜に利用すればよい。す
なわち、濾過、？ＩＱＭ、イオン交換体による交換クロ
マトグラフィー、活性炭、シリカゲル、アルミナおよび
合成吸着剤（アンバーライトＸＡＤ−２、ダイヤイオン
ＩＪＰ−２０など）などによる吸着クロマトグラフィー
、各種溶剤による転溶、沈殿、不純物の除去、あるいけ
透析、乾燥、再結晶などの手段が単独または、組合わせ
て利用される。As a method for collecting the antibiotic safracin A1 and 7 racin B from the culture, any means commonly used for collecting metabolites produced by microorganisms may be used as appropriate. i.e. filtration,? IQM, exchange chromatography using ion exchangers, adsorption chromatography using activated carbon, silica gel, alumina, synthetic adsorbents (Amberlite XAD-2, Diaion IJP-20, etc.), dissolution using various solvents, precipitation, and removal of impurities. , dialysis, drying, recrystallization, etc. may be used alone or in combination.

なお、本物質は両性化合物であり、また弱アルカリ性側
で酢酸エチルなどの有機溶剤に転溶するため、積装に際
してはそれらの理化学的性質が利用される。Furthermore, this substance is an amphoteric compound, and since it is dissolved in weakly alkaline organic solvents such as ethyl acetate, its physical and chemical properties are utilized during loading.

さら釦、強アルカリ性側で不安定であるため、処理中の
溶液は弱アルカリ性ないしは酸性に保つのが有利である
。Since it is unstable in strong alkalinity, it is advantageous to keep the solution during treatment weakly alkaline or acidic.

培養液の処理法の一例を示すと、培養液の上澄液を中性
（ｐＨ＝７）、または弱酸性（ｐＨ＝５）とし、合成吸
着剤（アンバーライトＸＡＤ−２、ダイヤイオンＨＰ−
２０など）に吸着させることにより、培養液から濃縮す
ることができる。この吸着物を水および含水溶剤（メタ
ノール、アセトンなど）で洗えばさらに不純物を除去す
ることができる。活性成分は溶出剤として、有機溶剤（
メタノール、アセトンなど）と水とをその混合比を変え
つつ用するか、またはｐＨを７〜Ｉ（塩酸水など）まで
変えつつ水を用いることにより、より純度よく分ｌ１１
１ＩＩ〆出することができる。An example of a culture solution treatment method is to make the culture solution supernatant neutral (pH = 7) or weakly acidic (pH = 5), and use synthetic adsorbents (Amberlite XAD-2, Diaion HP-2).
20, etc.), it can be concentrated from the culture solution. Impurities can be further removed by washing this adsorbed material with water and a water-containing solvent (methanol, acetone, etc.). The active ingredient is extracted with an organic solvent (
By using water while changing the mixing ratio (methanol, acetone, etc.), or by using water while changing the pH from 7 to I (hydrochloric acid, etc.), it is possible to obtain a more purified fraction.
1II〆can be issued.

ヂ旌例１ ｐＨ７，０に一埜したグルコース２％、マンニトール４
％、’４％　０４６’母２％、荀；ｉ酸アンモニクム１
．０％、リン酸二カリクム０．０２％、塩化カリタム０
．４％および炭酸カルシウム（沈降性）０．８％からな
るｔ＝ｔａの４　Ｑ　Ｑ　ｍｅを、２１！容の坂ロフラ
スコに分注し、１２１℃、２０分間、高圧蒸気滅菌、放
冷俵、Ａ２−２株（微工研条寄第１４号・）を−白金耳
摺−し、２４〜２６℃で毎分１８０往イヅ、７日振幅で
振轍培賛する。Example 1: 2% glucose and 4% mannitol at pH 7.0
%, '4% 046' mother 2%, Xu; ammonicum i acid 1
．． 0%, dipotassium phosphate 0.02%, potassium chloride 0
．． 4% and calcium carbonate (sedimentable) 0.8% with t=ta, 21! Dispense the A2-2 strain (Meikoken Joyori No. 14) into a volumetric flask, autoclave it at 121°C for 20 minutes, and cool it in a bale. 180 beats per minute, 7 days of amplitude.

培久４日後、６木のフラスコ培套液を合せて、２１の培
養液を得る。After 4 days of cultivation, the flask culture solutions of 6 plants were combined to obtain 21 culture solutions.

最終培食液のｐＨは、７．５〜８．０でプドク球菌を検
定菌としてペーパーディスク法で、８〜１６：ｆｆＪ′
択単位／　ｎｒｌの活性を示した。The pH of the final culture solution was 7.5 to 8.0 using the paper disk method using Peptococcus as the assay bacteria, and the pH was 8 to 16: ffJ'.
The activity of selective unit/nrl was shown.

得られた培膏液２１′ｆ：遠心分離により区Ｉ体除去を
した後、水酸化ナトリクム溶液（５規定）でｐＨ９、０
Ｋθｊ、ｉｌ格し、等量の酢酸エチルにて３回抽出する
。この抽出液をｐＨ１の塩１唆水５００ｒｎｔで活性成
分を転溶させる。この抽出液を、さらに水酸化ナトリク
ム水溶液でｐＨ９に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽
出し、抽出液を合せ、２００ｍｅの蒸悄水で１同洸浄す
る。この酢酸・エチル液に無水硫酸ナトリウムを加え、
乾燥、／濾過し、減圧下に酢酸エチルを留去する（３０
℃以“ド）。得られた黄色粉末（Ｆ］２０ｒｎｇ）をト
ルエン、クロロホルムおよびメタノール（１：３：０．
４）のｌ昆合溶剤ににギかし、シリカゲルカラム（プレ
バックカラム・サイズＡ１メルク社）にて、前記と同じ
混合病剤を展開溶媒として単離精製を行う。活性フラク
ションを東め、減圧乾固すると、黄色粉末のサフラシン
Ａが塩基として約５　”ｆｊ　ｓ、および黄色粉末のザ
フラシンＢが石基として約４　ｗｒｙが得られる。Obtained culture medium 21'f: After removing the I form by centrifugation, the pH was adjusted to 9.0 with sodium hydroxide solution (5N).
Kθj, il and extracted three times with an equal volume of ethyl acetate. The active ingredients are dissolved in this extract with 500 rnt of water per liter of pH 1 salt. This extract was further adjusted to pH 9 with an aqueous sodium hydroxide solution, extracted three times with an equal amount of ethyl acetate, and the extracts were combined and washed once with 200 ml of distilled water. Add anhydrous sodium sulfate to this acetic acid/ethyl solution,
Dry/filter and remove ethyl acetate under reduced pressure (30
The obtained yellow powder (F) (20 rng) was mixed with toluene, chloroform and methanol (1:3:0.
4) Add to the mixed solvent and isolate and purify using a silica gel column (Prevac column, size A1, Merck & Co., Ltd.) using the same mixed disease agent as above as a developing solvent. The active fractions are combined and dried under reduced pressure to yield about 5" fj s of yellow powder Safracin A as a base and about 4 wry of yellow powder Zafracin B as a base.

これらの物質は常法により塩酸塩などの対応する酸付加
塩にすることができる。These substances can be converted into corresponding acid addition salts such as hydrochlorides by conventional methods.

実施例２ ｐＨ７，ＯＫ副調整だグルコース２％、マンニトール４
％、乾燥酵母２．０％、硫酸アンモニウム１．０％、リ
ン酸二カリウム０．０２％、塩化カリウム０．４％およ
び炭酸カルシウム（沈降性）０，８％からなる培地２０
１を容量３０Ｉ！のジャーファーメンタ−に入れ、Ｍ、
１後、Ａ２−２株（畝工研条寄第１４勺）の種培養液を
２％接接種、２４〜２６°Ｃにて、７２時間、通気撹拌
培養（通気量１５１７分、撹Ｊ４ｉ　３００回１版／分
）を行う。Example 2 pH 7, OK secondary adjustment, glucose 2%, mannitol 4
%, dry yeast 2.0%, ammonium sulfate 1.0%, dipotassium phosphate 0.02%, potassium chloride 0.4% and calcium carbonate (sedimentable) 0.8% medium 20
1 has a capacity of 30I! Put it in the jar fermenter, M.
After 1, inoculation with 2% seed culture of A2-2 strain (Unekoken Joyori No. 14) was carried out at 24-26°C for 72 hours with aeration and agitation (aeration rate 1517 minutes, agitation J4i 300). 1 edition/minute).

培套゛ｌイνの最終ｐＨけ、７．５〜７．７でブドク球
菌を倹定閉としたペーパーディスク法で８〜１６４得ら
れた培養液２０１を遠心分限によりｌ体除去をした後、
塩酸でｐＨ６とし、合成吸着Ａ１１（ダイヤイオンＩＰ
−２０）２ｒを充填した塔に通し活性）う７４分を１μ
ｓ肴させる。塔を６７？の水で洗った後、８０％メタノ
ール−ｐＨ２塩酸水溶液５１にて活性成分を賄出さぜる
。溶出液を塩酸にてｐＨ３，０にｄ　ｑ＝し、メタノー
ルを減圧４）ｑ去後、イリられた水〆（αｌ／を、等量
の酢酸エチルにて３回洗い、不純物を除去する。水層を
水酸化ナトリクム水耐液にてｐＨ９，ＱにｆＪＮ整し、
等量の酢酸エチルにて３回抽出分？Ｉｌｊを行う。この
酢酸エチル液をｐＨ１の塩ｔ＜Ｙ水＋ｒで転離させる。The final pH of the culture solution was 7.5 to 7.7, and the culture solution 201 obtained by the paper disc method was 8 to 164. ,
The pH was adjusted to 6 with hydrochloric acid, and synthetic adsorption A11 (Diaion IP
-20) Pass 74 minutes of active) through a column filled with 2r to 1μ
Serve it as a snack. 67 towers? After washing with water, the active ingredient is removed with 80% methanol-pH 2 aqueous hydrochloric acid solution 51. The eluate was adjusted to pH 3.0 with hydrochloric acid, and the methanol was removed under reduced pressure. The filtrated water (alpha) was washed three times with an equal amount of ethyl acetate to remove impurities. The aqueous layer was adjusted to pH 9, Q with sodium hydroxide water-resistant liquid,
Three extractions with equal volume of ethyl acetate? Do Ilj. This ethyl acetate solution is evaporated with a pH 1 salt t<Y water+r.

この抽出液を、さらに水酸化ナトリウム水が液でｐＨ９
，０に１１′１１整し、％皿（ の＋イ１＋酸エチルで３回抽出し、抽出液を６・せ、１
／の蒸留水で１回洸浄する。この酢酸エチル液に無水硫
酸す）　ＩＪクムを加え乾燥、Ｐ１ＪＩ！ｉシ、減圧下
に酢酸エチルを留去する（３０℃以下）。This extract was further added with sodium hydroxide solution to pH 9.
, Adjust to 11'11 to 0, extract 3 times with ethyl acetate (of
/ Clean once with distilled water. Add sulfuric anhydride to this ethyl acetate solution, add IJ cum and dry, P1JI! Then, ethyl acetate is distilled off under reduced pressure (below 30°C).

得られた黄色粉末的１８０■を、トルエン、クロロホル
ムおよびメタノール（１：３：０．４）の混合溶剤に溶
かし、シリカゲルカラム（プレバツクドカラム・サイズ
Ｂ１ノル２社）にて、前記同一混合溶剤の展開溶媒で単
離Ｍ製する。活性フラクションを集めて減圧乾固すると
、鹸色粉末のサフラシンＡが塩基として約５ｔｎ９、’
Ｎ色粉末のザフラシンＢが石基として約６９　ｍｙが得
られる。The obtained yellow powder 180cm was dissolved in a mixed solvent of toluene, chloroform and methanol (1:3:0.4), and the same mixture was added to a silica gel column (pre-packed column size B1 Nor 2). Isolate M is prepared using a developing solvent. When the active fractions were collected and dried under reduced pressure, about 5 tons of safracin A as a base was obtained.
Approximately 69 my of N-colored powder Zafracin B is obtained as a stone base.

実施例３ ｐＨ７，０に調格シたグルコース２％、マンニトール４
％、乾燥酵母２．０％、硫酸アンモニウム１．０％、リ
ン酸二カリウム０．０２％、塩化カリウム０．４％およ
び炭酸力ルシウム（沈降性）０．８％からなる培地、１
０００／を容量１７００／の発酵タンクに入れ、畝−後
、Ａ２−２株（眞工＋ｔｌｌ’呆倚第１４号）の種培、
＊液を２％接伸し、２４〜２６℃にて、７２時＋ａｌ、
１ｆｔｉ気撹拌ｊと１資（ｊ＋ｔ＋気ｂ３００１／分、
撹拌：２００回転／分）を行う。Example 3 Glucose 2%, mannitol 4% adjusted to pH 7.0
%, dry yeast 2.0%, ammonium sulfate 1.0%, dipotassium phosphate 0.02%, potassium chloride 0.4% and lucium carbonate (sedimentable) 0.8%, 1
000/ into a fermentation tank with a capacity of 1700/, and after fermentation, a seed culture of A2-2 strain (Shinko + tll' Baku No. 14),
*The solution was stretched by 2%, at 24-26°C, at 72 hours + al.
1fti air stirring j and 1 stock (j + t + air b 3001/min,
Stirring: 200 rpm).

培誉（ｆ衾のｈψ終ｐＨは、　７．５〜７．７でゾドク
球曲を検定菌としたペーパーディスクｔ１：で、８〜１
６希釈単位／　ｎｌｅの活性を示した。The final pH of the culture was 7.5 to 7.7, and the paper disk t1 using Zodoku Kyuukyu as the test bacteria was 8 to 1.
It showed an activity of 6 dilution units/nle.

帰られた培’、ｕｒ＝’欲１００１を）ｇ心分子により
菌１＋１余去した歳、濃塩酸でｐＨ６とし、合ＯＱ、１
及看剤（ダイヤイオン汀Ｐ−２０）１０１金充填した塔
に川１し、活性成分を吸着さぜる。１ｔ５を２０／の水
で、ノ１１つたイ；、８０％メタノール−ｐＨ２塩ｒし
水溶７夜３０１！にて粘性成分を溶出させる。′ｇ出濱
液を塩酸にてｐＬ１３．０に調整し、メタノールを減圧
留去後、得られた水溶液、５１を等量の酢酸エチルにて
３回洗い不純物を１余失する。ボーを水酸化ナトリウム
水瀘液にてｐＨ９，０に調整し、等量の酢酸エチルにて
３回抽出分部を行う。この酢噴エチル額をｐＨｌの塩酸
水３１で活性成分を枢溶させる。Returned culture', ur='greed 1001) After removing 1+1 bacteria with g heart molecule, adjust the pH to 6 with concentrated hydrochloric acid, and combine OQ, 1
Additive (Diaion P-20) is poured into a tower filled with 101 gold, and the active ingredients are adsorbed and stirred. 1t5 with 20% water, 80% methanol-pH2 salt and dissolved in water for 7 nights 301! The viscous components are eluted. The resulting solution was adjusted to pL 13.0 with hydrochloric acid, methanol was distilled off under reduced pressure, and the resulting aqueous solution 51 was washed three times with an equal amount of ethyl acetate to remove one more impurity. The pH of the bottle was adjusted to 9.0 using aqueous sodium hydroxide filtrate, and the mixture was extracted three times with an equal volume of ethyl acetate. The active ingredient is dissolved in this ethyl vinegar solution with hydrochloric acid water having a pH of 31%.

この抽出液をさらに水酸化ナトリクム水溶液でｐＨ９，
０に調整し、等量の酢酸エチルで３回抽出し、抽出液を
合わせ、５１の蒸留水で洗浄する。この酢拶エチル液に
無水硫酸ナトリウムを加え、乾燥、ｒＩコ過し、ρ圧下
に酢酸エチルを留去する（３０’Ｃ以下）。This extract was further added with an aqueous sodium hydroxide solution to pH 9.
0 and extracted three times with an equal volume of ethyl acetate, the extracts were combined and washed with distilled water from step 51. Anhydrous sodium sulfate is added to this ethyl acetate solution, dried, filtered with rI, and ethyl acetate is distilled off under ρ pressure (below 30'C).

得られた黄色粉末（約１ｇ）をトルエン、クロロホルム
およびメタノール（１：３：０．４）の混合溶Ａｌｌに
溶かし、シリカゲルカラム（プレパックカラム・サイズ
Ｃ１メルク社）にて前記と同じｔＪＮ合溶剤を展開溶媒
として、単離精製を行う。活性フラクションを巣め減圧
＋１１司すると、黄色粉末のサフラシンＡが塩基として
約４５０　ｔｔｂ４Ｘ黄色粉末のサフラシンＢが塩基と
して約４００　ｖｗが得られる。The obtained yellow powder (approximately 1 g) was dissolved in a mixed solution of toluene, chloroform, and methanol (1:3:0.4), and the same tJN mixture as above was added to the silica gel column (prepack column size C1 Merck). Isolation and purification is carried out using as a developing solvent. The active fractions are combined and subjected to vacuum +11 to give approximately 450 ttb4X of safracin A as a yellow powder as a base and approximately 400 vw as a base of safracin B as a yellow powder.

４、図面のｌｉｌ’ｌ　’−な説、ｌ料量１図は、抗生
物質サフラシンＡの塩酸塩のメタノール溶液（１ｇ４度
：　２０．６　ｍａｇ／ｍｅ　）中での紫外部吸収スペ
クトルを、第２図は、抗生物質す７ラシンＡのＩｋ酸塩
の臭化カリツム法での光外部吸収スペクトルを、第３図
は抗生物質ザ７ラシンＢの燻酩″塩のメタノール溶液（
濃度：　２５．４　ｗａｇ／ｒｎ／）中での紫外部１反
収スペクトルを、第４図は、抗生物ＪＣ［サフラシンＢ
の塩酸垣の具化カリタム法での赤外ｆｌｌｓ　＋９ｉ収
スペクトルを示す。4. The lil'l '- theory of the drawing, l material amount 1 The figure shows the ultraviolet absorption spectrum of the antibiotic safracin A hydrochloride in a methanol solution (1g 4 degrees: 20.6 mag/me). Figure 2 shows the optical external absorption spectrum of the Ik salt of the antibiotic Zaracin A using the potassium bromide method, and Figure 3 shows the methanol solution of the smoked salt of the antibiotic Zaracine B (
Figure 4 shows the ultraviolet absorption spectrum of the antibiotic JC [Safracin B
The infrared fulls +9i yield spectrum is shown in the embodiment of Kalitum method using a hydrochloric acid fence.

代理人　弁理士　尚′ｄ咳　　肋 瞥　ギ　超Agent Patent attorney Nao’d cough ribs Super glance

Claims (1)

【特許請求の範囲】 ！、一般式 （式中、Ｒは水素または水酸基を示す。）で表わされる
抗生物質サフラシンＡおよび／またはＢＸ″！１．たは
その酸付加塩。 ２、式 ％式％ で表わされる抗生物質サフラシンＡである特許請求の範
囲第１項記載の化合物。 ３、式 で表わされる抗生物質サフラシンＢである特ＦｆＦ　８
１求の範囲第１項記載の化合物。[Claims]! , the antibiotic safracin A and/or BX'' represented by the general formula (in the formula, R represents hydrogen or a hydroxyl group)! 1. or an acid addition salt thereof. 2. The antibiotic safracin represented by the formula % formula % The compound according to claim 1, which is A. 3. The compound FfF, which is the antibiotic safracin B represented by the formula 8
1. A compound according to item 1.