JPH1151938A - Immunological latex nephelometry quantifying reagent - Google Patents
Immunological latex nephelometry quantifying reagentInfo
- Publication number
- JPH1151938A JPH1151938A JP20568597A JP20568597A JPH1151938A JP H1151938 A JPH1151938 A JP H1151938A JP 20568597 A JP20568597 A JP 20568597A JP 20568597 A JP20568597 A JP 20568597A JP H1151938 A JPH1151938 A JP H1151938A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- latex
- antibody
- immunological
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、抗原抗体反応を利
用する免疫学的ラテックス比濁定量用試薬に関する。さ
らに詳しくは、長期間放置後も粒子の分散性に優れた、
自動分析装置を用いた測定に好適に使用できる免疫学的
ラテックス比濁定量用試薬に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an immunological latex turbidimetric reagent utilizing an antigen-antibody reaction. More specifically, excellent dispersibility of particles even after standing for a long time,
The present invention relates to an immunological latex turbidimetric reagent which can be suitably used for measurement using an automatic analyzer.
【０００２】[0002]
【従来の技術】被検液中の特定成分を定量的に測定する
試薬として、抗原抗体反応を利用した免疫学的測定試薬
があり、中でも抗原又は抗体を担持したラテックス粒子
と被検液中の抗体又は抗原の抗原抗体反応に起因するラ
テックス粒子の凝集を吸光度や濁度の変化で測定する免
疫学的ラテックス比濁定量用試薬は、自動分析装置を用
いて簡単な操作で定量できることから広く用いられてい
る。2. Description of the Related Art As a reagent for quantitatively measuring a specific component in a test solution, there is an immunological measurement reagent utilizing an antigen-antibody reaction. Among them, latex particles carrying an antigen or an antibody and a reagent in the test solution are used. The reagent for immunological latex turbidimetric determination, which measures the aggregation of latex particles due to the antibody-antigen antigen-antibody reaction by the change in absorbance or turbidity, is widely used because it can be quantified by a simple operation using an automatic analyzer. Have been.
【０００３】近年、上記のような自動分析装置を用いた
測定に於いては、簡便且つ迅速に高感度の測定を行うこ
とが望まれており、免疫学的ラテックス比濁定量用試薬
においてもこの様な要望に応える試薬が求められてい
る。[0003] In recent years, in the measurement using the above-mentioned automatic analyzer, it has been desired to carry out a simple and quick measurement with high sensitivity. There is a demand for a reagent that meets such demands.
【０００４】しかしながら、免疫学的ラテックス比濁定
量用試薬においては、感度を上げるために担体として使
用するラテックス粒子の粒子径を大きくした場合、試薬
を長時間放置しておくとラテックス粒子が沈降してしま
うという問題が起こる。従って、感度の高い免疫学的ラ
テックス比濁定量用試薬を用いて正確な測定を行うため
には、測定直前に試薬を転倒混和する等の再懸濁操作を
し、ラテックス粒子の再懸濁を確認する必要があり、そ
の操作は煩雑であるばかりでなく、再懸濁操作後から測
定するまでの時間も制約されている。[0004] However, in the immunological latex turbidimetric reagent, when the particle diameter of latex particles used as a carrier is increased to increase sensitivity, the latex particles settle if the reagent is left for a long time. The problem arises. Therefore, in order to perform accurate measurement using a highly sensitive immunological latex turbidimetric reagent, the resuspension operation such as inverting and mixing the reagent immediately before the measurement should be used to resuspend the latex particles. It is necessary to confirm, and the operation is not only complicated, but also the time from the resuspension operation to the measurement is restricted.
【０００５】例えば、トレポネーマ・パリダム菌体由来
成分の抗原を担持したトレポネーマ・パリダム抗体検出
用免疫学的ラテックス比濁定量用試薬においては、高感
度で大きな吸光度や濁度の変化が要求されるため、一般
に平均粒子径が約０．３μｍ以上と比較的に大きな粒子
径を有するラテックス粒子が使用されているが、該試薬
においては、毎日、自動分析機で測定する前に再懸濁操
作を行っているのが現状である。For example, an immunological latex turbidimetric reagent for detecting a Treponema pallidum antibody carrying an antigen derived from Treponema pallidum cells requires high sensitivity and a large change in absorbance and turbidity. In general, latex particles having a relatively large average particle size of about 0.3 μm or more are used. In the case of the reagent, a resuspension operation is performed every day before measurement by an automatic analyzer. That is the current situation.
【０００６】一般に懸濁粒子の沈降性は分散媒の比重に
影響を受け、分散媒の比重を大きくすれば粒子は沈降し
にくくなるため、分散媒に比重調整剤を添加して分散媒
の比重を高くすれば、懸濁粒子自体の沈降は防止するこ
とができると考えられる。そして、この様な考えに基づ
いて、特開昭５６−１６８４５号公報には、抗原又は抗
体の担持されていない粒子、すなわち抗原抗体反応を起
こさない粒子の懸濁液である比濁定量用濁度標準液に比
重調整剤としてエチレングリコールを添加し、懸濁粒子
の沈降を防止する方法が開示されている。In general, the sedimentation of suspended particles is affected by the specific gravity of the dispersion medium, and if the specific gravity of the dispersion medium is increased, the particles are unlikely to settle. It is considered that the sedimentation of the suspended particles themselves can be prevented by increasing the value. Based on this idea, Japanese Unexamined Patent Publication No. 56-16845 discloses a method for determining turbidity, which is a suspension of particles that do not carry an antigen or antibody, that is, particles that do not cause an antigen-antibody reaction. A method is disclosed in which ethylene glycol is added as a specific gravity adjusting agent to a standard solution to prevent sedimentation of suspended particles.
【０００７】しかしながら、上記のトレポネーマ・パリ
ダム抗体検出用免疫学的ラテックス比濁定量用試薬に比
重調整剤としてエチレングリコールを添加した場合に
は、十分な粒子の沈降防止効果が得られる条件では試薬
感度が低下することが判明した。[0007] However, when ethylene glycol is added as a specific gravity adjuster to the above-mentioned immunological latex turbidimetric reagent for detecting T. pallidum antibody, the sensitivity of the reagent cannot be obtained under the condition that a sufficient effect of preventing sedimentation of particles can be obtained. Was found to decrease.
【０００８】このように、免疫学的ラテックス比濁定量
用試薬における粒子の沈降を防止する有効な方法はこれ
まで知られておらず、また、単に比重調整剤を懸濁液に
添加して粒子の沈降を防止すると言う方法には、試薬感
度の点で問題があることが明らかとなった。[0008] As described above, an effective method for preventing sedimentation of particles in an immunological latex turbidimetric reagent has not been known so far, and the method of simply adding a specific gravity adjusting agent to a suspension is not known. It has been clarified that the method of preventing sedimentation has a problem in terms of reagent sensitivity.
【０００９】[0009]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、免疫学的ラ
テックス比濁定量用試薬において、高い試薬の感度を保
持したまま粒子沈降性を改善することを技術課題とし、
自動分析装置を用いた測定に適用した場合に、簡便且つ
迅速に高感度の測定が可能な免疫学的ラテックス比濁定
量用試薬を提供することを目的とする。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to improve the sedimentability of particles in an immunological latex turbidimetric reagent while maintaining high sensitivity of the reagent.
An object of the present invention is to provide an immunological latex nephelometric quantification reagent that can easily and quickly perform high-sensitivity measurement when applied to measurement using an automatic analyzer.
【００１０】[0010]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために、免疫学的ラテックス比濁定量用試
薬に種々の比重調整剤を添加し、試薬感度及びラテック
ス粒子の沈降性について種々検討を行った結果、特定の
比重調整剤を特定量添加することにより上記課題が解決
できるという知見を得て、本発明を完成するに到った。Means for Solving the Problems In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors added various specific gravity adjusting agents to a reagent for turbidimetric determination of immunological latex, and examined the sensitivity of the reagent and the sedimentation of latex particles. As a result of various studies on the properties, the present inventors have found that the above-mentioned problems can be solved by adding a specific specific gravity adjusting agent in a specific amount, and have completed the present invention.
【００１１】即ち本発明は、抗原又は抗体を担持したラ
テックス粒子の懸濁液からなる免疫学的ラテックス比濁
定量用試薬において、該試薬中に７．５〜１５重量／体
積％（以下、単に「％」で表す。）の糖類を含むことを
特徴とする免疫学的ラテックス比濁定量用試薬である。That is, the present invention relates to an immunological latex turbidimetric reagent comprising a suspension of latex particles carrying an antigen or an antibody, wherein the reagent contains 7.5 to 15% by weight / volume (hereinafter simply referred to as "the weight / volume"). (Expressed in “%”)).
【００１２】また、他の本発明は、トレポネーマ・パリ
ダム菌体成分由来の抗原を担持したラテックス粒子の懸
濁液からなるトレポネーマ・パリダム抗体検出用免疫学
的ラテックス比濁定量用試薬において、該試薬中に７．
５〜１５％の糖類を含むことを特徴とするトレポネーマ
・パリダム抗体検出用免疫学的ラテックス比濁定量用試
薬である。Another aspect of the present invention is an immunological latex turbidimetric quantification reagent for detecting a Treponema pallidum antibody, comprising a suspension of latex particles carrying an antigen derived from Treponema pallidum cell components. 7 inside.
An immunological latex turbidimetric reagent for detecting a Treponema pallidum antibody, which comprises 5 to 15% of a saccharide.
【００１３】本発明では、比重調整剤として糖類を使用
することにより、試薬感度を低下させることなくラテッ
クス粒子の沈降が防止される。このような優れた効果
は、糖類を７．５〜１５％添加したときにのみ特異的に
得られるものであり、他の比重調整剤を添加した場合や
糖類を添加した場合であってもその添加量が上記範囲外
であるときにはこの様な効果は得られない。In the present invention, the use of a saccharide as a specific gravity adjuster prevents the sedimentation of latex particles without lowering the sensitivity of the reagent. Such an excellent effect is specifically obtained only when 7.5 to 15% of a saccharide is added, and even when another specific gravity adjusting agent is added or when a saccharide is added. When the amount is outside the above range, such effects cannot be obtained.
【００１４】[0014]
【発明の実施の形態】本発明の免疫学的ラテックス比濁
定量用試薬は、抗原又は抗体を担持したラテックス粒子
の懸濁液からなる免疫学的ラテックス比濁定量用試薬に
おいて、該試薬中に７．５〜１５％の糖類を含むことを
特徴とする。ここで、免疫学的ラテックス比濁定量用試
薬とは、抗原（又は抗体）を担持したラテックス担体
が、検体中の抗体（又は抗原）と接触した時に起こる免
疫反応に伴い凝集する現象を光学的に、例えば吸光度や
濁度の変化を利用して定量的に測定することを目的とす
る試薬を意味する。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is an immunological latex turbidimetric reagent comprising a suspension of latex particles carrying an antigen or an antibody. It contains 7.5 to 15% of saccharides. Here, the immunological latex turbidimetric reagent refers to a phenomenon in which a latex carrier carrying an antigen (or an antibody) aggregates with an immune reaction that occurs when the latex carrier contacts an antibody (or an antigen) in a sample. For example, a reagent intended to be quantitatively measured using a change in absorbance or turbidity.
【００１５】一般に、従来公知の免疫学的ラテックス比
濁定量用試薬は、抗原又は抗体を担持したラテックス粒
子の懸濁液からなるが、本発明の免疫学的ラテックス比
濁定量用試薬は該試薬中に特定量の糖類を含有せしめた
ものである。従って、試薬に特定量の糖類を含有するこ
とを除けば、本発明の免疫学的ラテックス比濁定量用試
薬は、一般的に使用されている公知の免疫学的ラテック
ス比濁定量用試薬と基本的に同じものであり、本発明の
免疫学的ラテックス比濁定量用試薬における基本組成と
しての“抗原又は抗体を担持したラテックス粒子”及び
該粒子を懸濁させる“分散媒”としては、公知の免疫学
的ラテックス比濁定量用試薬に使用されるものがそれぞ
れそのまま適用できる。In general, a conventionally known immunological latex turbidimetric reagent consists of a suspension of latex particles carrying an antigen or an antibody. It contains a specific amount of saccharide. Accordingly, except that the reagent contains a specific amount of saccharide, the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is basically the same as a commonly used known immunological latex turbidimetric reagent. As the basic composition of the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention, “latex particles carrying an antigen or an antibody” and “dispersion medium” for suspending the particles are known in the art. Those used for the immunological latex turbidimetric reagent can be applied as they are.
【００１６】即ち、本発明で使用する抗原又は抗体を担
持したラテックス粒子は、公知の免疫学的ラテックス比
濁定量用試薬に使用されているものが何等制限無く使用
することができ、例えば、ポリスチレン、スチレン−メ
タクリル酸共重合体、スチレン−グリシジル（メタ）ア
クリレート共重合体、スチレン−スチレンスルホン酸塩
共重合体などのラテックス等の有機高分子物質の微粒子
であるラテックス粒子を担体とし、該担体に抗β2-マイ
クログロブリン（β2-ｍ）抗体、抗線維素分解産物Ｄ分
画（ＦＤＰ−Ｄ）抗体、抗線維素分解産物Ｅ分画（ＦＤ
Ｐ−Ｅ）抗体、抗線維素分解産物ＤＤ分画（ＦＤＰ−Ｄ
Ｄ）抗体、抗アルブミン抗体、抗フェリチン抗体、抗α
−フェトプロテイン（ＡＦＰ）抗体、インシュリン、抗
インシュリン抗体、並びにトレポネーマ・パリダム（Ｔ
Ｐ）、ストレプトリジンＯ（ＳＬＯ）及びＢ型肝炎ウィ
ルス（ＨＢＶ）の抗原又は抗体等を物理的吸着法等によ
り０．００１〜１重量％程度担持させたものが好適に使
用できる。That is, as the latex particles supporting the antigen or antibody used in the present invention, those used in known immunological latex turbidimetric reagents can be used without any limitation. Latex particles, which are fine particles of an organic polymer substance such as latex such as styrene-methacrylic acid copolymer, styrene-glycidyl (meth) acrylate copolymer, and styrene-styrene sulfonate copolymer, Anti-β2-microglobulin (β2-m) antibody, anti-fibrin degradation product D fraction (FDP-D) antibody, anti-fibrin degradation product E fraction (FD
PE) antibody, anti-fibrin degradation product DD fraction (FDP-D
D) Antibody, anti-albumin antibody, anti-ferritin antibody, anti-α
-Fetoprotein (AFP) antibodies, insulin, anti-insulin antibodies, and Treponema pallidum (T
P), streptolysin O (SLO), hepatitis B virus (HBV) antigen or antibody, etc., which carry about 0.001 to 1% by weight by a physical adsorption method or the like can be suitably used.
【００１７】なお、上記担体（すなわちラテックス粒
子）の平均粒子径も特に限定されないが、一般に平均粒
子径が約０．３μｍ以上の平均粒子径を有するラテック
ス粒子を担体として使用した場合には、得られる試薬の
感度が高く本発明の効果も顕著である。また、吸光度や
濁度の変化を測定する際の装置上の感度の点からする
と、上記ラテックス粒子の平均粒子径は約０．３μｍ〜
１．０μｍ、更に約０．３μｍ〜０．５μｍであるのが
好適である。The average particle size of the above-mentioned carrier (ie, latex particles) is not particularly limited. However, when latex particles having an average particle size of about 0.3 μm or more are generally used as the carrier, the average The sensitivity of the reagent to be used is high, and the effect of the present invention is remarkable. Further, from the viewpoint of the sensitivity of the apparatus when measuring the change in absorbance or turbidity, the average particle diameter of the latex particles is about 0.3 μm to
Preferably it is 1.0 μm, more preferably about 0.3 μm to 0.5 μm.
【００１８】また、上記ラテックス粒子に担持される抗
原又は抗体とは、それぞれ検査したい抗体又は抗原と抗
原抗体反応を起こすものであれば特に限定されず、先に
例示した抗原又は抗体が適宜使用できる。上記抗原又は
抗体の中でも、トレポネーマ・パリダム（ＴＰ）菌体成
分由来の抗原を担持したラテックス粒子の懸濁液からな
る従来のトレポネーマ・パリダム抗体検出用免疫学的ラ
テックス比濁定量用試薬においては、感度の点から平均
粒子径の比較的大きな（平均粒子径約０．３μｍ以上
の）ラテックス粒子を使用せざるを得なかったため、特
に前記粒子沈降の問題が顕在化していた。従って、担体
に担持させる抗原又は抗体としてトレポネーマ・パリダ
ム（ＴＰ）菌体成分由来の抗原を採用する場合には、本
発明の免疫学的ラテックス比濁定量用試薬を使用するこ
との意義は特に大きい。The antigen or antibody carried on the latex particles is not particularly limited as long as it causes an antigen-antibody reaction with the antibody or antigen to be tested, and the antigens or antibodies exemplified above can be used as appropriate. . Among the above antigens or antibodies, a conventional immunological latex turbidimetric reagent for detection of a Treponema pallidum antibody comprising a suspension of latex particles carrying an antigen derived from the Treponema pallidum (TP) cell component includes: From the viewpoint of sensitivity, latex particles having a relatively large average particle diameter (having an average particle diameter of about 0.3 μm or more) had to be used, so that the above-mentioned problem of particle sedimentation became apparent. Therefore, when an antigen derived from the cell component of Treponema pallidum (TP) is used as an antigen or an antibody to be carried on a carrier, the use of the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is particularly significant. .
【００１９】また、上記の“抗原又は抗体を担持したラ
テックス粒子”を懸濁させる分散媒はとくに限定され
ず、公知の免疫学的ラテックス比濁定量用試薬に使用さ
れているものが制限なく使用できる。そのような分散媒
を例示すれば、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、グリシン
緩衝液、ホウ酸緩衝液又はグッド緩衝液等の緩衝液等が
挙げられる。これら分散媒中の前記“抗原又は抗体を担
持したラテックス粒子”の含有量は特に限定されない
が、一般的には０．０１〜０．５％程度である。The dispersion medium for suspending the "latex particles carrying the antigen or antibody" is not particularly limited, and those used in known immunological latex turbidimetric reagents can be used without limitation. it can. Examples of such a dispersion medium include buffers such as Tris buffer, phosphate buffer, glycine buffer, borate buffer and Good buffer. The content of the “latex particles carrying the antigen or antibody” in these dispersion media is not particularly limited, but is generally about 0.01 to 0.5%.
【００２０】さらに、本発明の免疫学的ラッテクス比濁
定量用試薬には、本発明の効果を阻害しない範囲で、塩
化ナトリウム、アジ化ナトリウム等の無機塩、ウシ血清
アルブミン等の蛋白及び塩化コリン等の安定化剤などの
添加剤が添加されていても良い。これら成分の添加量は
特に限定されないが、添加する際には、塩化ナトリウム
であれば５０〜３００ｍＭ、アジ化ナトリウムであれば
０．０１〜１％、ウシ血清アルブミンであれば０．１〜
１０％、塩化コリンであれば０．１〜３０％が好適に用
いられる。Further, the reagent for immunological latex turbidimetric determination of the present invention includes inorganic salts such as sodium chloride and sodium azide, proteins such as bovine serum albumin, and choline chloride as long as the effects of the present invention are not impaired. Additives such as stabilizers may be added. The addition amount of these components is not particularly limited, but when added, 50 to 300 mM for sodium chloride, 0.01 to 1% for sodium azide, and 0.1 to 0.1 for bovine serum albumin.
10%, and if it is choline chloride, 0.1 to 30% is suitably used.
【００２１】本発明の免疫学的ラテックス比濁定量用試
薬は、試薬中に糖類を７．５〜１５％含有することを最
大の特徴とする。The immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is most characterized in that the reagent contains 7.5 to 15% of saccharides.
【００２２】本発明で使用する糖類は、試薬の感度を低
下させずに上記分散媒の比重を上昇させることができる
ものであれば特に限定されず、この様な糖類としては、
グルコース、フルクトース等の単糖類、スクロース、ラ
クトース、マルトース、セロビオース、トレハロース等
の二糖類、またはマルトトリオース等のオリゴ糖等が挙
げられる。これら糖類の中でもコストや安定性の面から
スクロースやトレハロースを使用するのが好適である。The saccharide used in the present invention is not particularly limited as long as the specific gravity of the dispersion medium can be increased without lowering the sensitivity of the reagent.
Monosaccharides such as glucose and fructose; disaccharides such as sucrose, lactose, maltose, cellobiose, and trehalose; and oligosaccharides such as maltotriose. Among these saccharides, it is preferable to use sucrose and trehalose from the viewpoint of cost and stability.
【００２３】また、本発明の免疫学的ラテックス比濁定
量用試薬中における上記糖類の含有量は７．５〜１５
％、好適には７．５〜１０％である。糖類の含有量が
７．５％未満の場合には十分な粒子沈降防止効果が得ら
れず、また、含有量が１５％を越える場合にはかえって
粒子が浮遊してしまうばかりでなく高感度を維持するこ
ともできない。The content of the above saccharide in the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is 7.5 to 15%.
%, Preferably 7.5 to 10%. If the saccharide content is less than 7.5%, a sufficient effect of preventing sedimentation of the particles cannot be obtained, and if the saccharide content exceeds 15%, not only the particles are suspended but also high sensitivity is obtained. It cannot be maintained.
【００２４】糖類の添加方法は特に限定されないが、前
記の分散媒に所定量の糖類を溶解させた後、抗原（又は
抗体）を担持したラテックス粒子を該分散媒に懸濁させ
るのが一般的である。また、先に抗原（又は抗体）を担
持したラテックス粒子を分散媒に懸濁させた後に、所定
量の糖類を溶解させても良い。The method of adding the saccharide is not particularly limited, but it is common to dissolve a predetermined amount of the saccharide in the above-described dispersion medium, and then suspend the latex particles carrying the antigen (or antibody) in the dispersion medium. It is. Alternatively, a predetermined amount of saccharides may be dissolved after suspending latex particles carrying an antigen (or antibody) in a dispersion medium.
【００２５】本発明の免疫学的ラテックス比濁定量用試
薬の使用態様は特に限定されないが、本発明の免疫学的
ラテックス比濁定量用試薬は自動分析装置を用いた測定
に特に適しており、自動測定用免疫学的ラテックス比濁
定量用試薬として使用するのが好適である。The mode of use of the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is not particularly limited, but the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is particularly suitable for measurement using an automatic analyzer. It is suitable for use as an immunological latex turbidimetric reagent for automatic measurement.
【００２６】即ち、本発明の免疫学的ラテックス比濁定
量用試薬の好適な態様としては、（Ａ）抗原又は抗体を
担持したラテックス粒子の懸濁液からなる自動測定用免
疫学的ラテックス比濁定量用試薬において、該試薬中に
７．５〜１５重量／体積％の糖類を含むことを特徴とす
る自動測定用免疫学的ラテックス比濁定量用試薬、
（Ｂ）トレポネーマ・パリダム菌体成分由来の抗原を担
持したラテックス粒子の懸濁液からなるトレポネーマ・
パリダム抗体検出用自動測定用免疫学的ラテックス比濁
定量用試薬において、該試薬中に７．５〜１５重量／体
積％の糖類を含むことを特徴とするトレポネーマ・パリ
ダム抗体検出用自動測定用免疫学的ラテックス比濁定量
用試薬、及び（Ｃ）ラテックス粒子の平均粒子径が少な
くとも約０．３μｍ以上、好ましくは約０．３〜１．０
μｍであることを特徴とする上記（Ａ）又は（Ｂ）の自
動測定用免疫学的ラテックス比濁定量用試薬等が挙げら
れる。That is, a preferred embodiment of the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention is (A) an immunological latex turbidity for automatic measurement comprising a suspension of latex particles carrying an antigen or an antibody. An immunological latex turbidimetric reagent for automatic measurement, which comprises 7.5 to 15% by weight / volume of a saccharide in the reagent;
(B) Treponema pallidum comprising a suspension of latex particles carrying antigens derived from the cell body components of Treponema pallidum
An immunological latex turbidimetric reagent for automatic measurement for detection of a paridum antibody, wherein the reagent contains 7.5 to 15% by weight / volume of a saccharide in the reagent. Latex turbidimetric reagent, and (C) the latex particles have an average particle size of at least about 0.3 μm or more, preferably about 0.3 to 1.0.
The immunological latex turbidimetric reagent for automatic measurement according to the above (A) or (B), which is characterized by having a particle size of μm.
【００２７】また、一般に免疫学的ラテックス比濁定量
用試薬は、後述するように、抗原又は抗体を担持したラ
テックス粒子の懸濁液からなる甲液と、特定の緩衝液か
らなる乙液の二液からなる試薬形態をとることもある
が、この様な場合、本発明の免疫学的ラテックス比濁定
量用試薬とは甲液を指す。なお、下記の例示における各
物質の濃度は、試薬として好ましい範囲を例示するもの
であって、本発明を限定するものではない。As will be described later, an immunological latex turbidimetric reagent is generally composed of two solutions: an upper solution consisting of a suspension of latex particles carrying an antigen or an antibody, and a second solution consisting of a specific buffer. The reagent may be in the form of a liquid, but in such a case, the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention refers to instep fluid. The concentrations of the respective substances in the following examples exemplify preferred ranges as reagents, and do not limit the present invention.
【００２８】甲液：（１）、（２）、（３）及び（４）
を含有する懸濁液 （１）緩衝液 ２０〜１０００ｍＭ、ｐＨ４〜１２ （２）抗原又は抗体を担持したラテックス粒子 ０．０
１〜０．５％ （３）塩化ナトリウム ５０〜３００ｍＭ （４）糖類 ７．５〜１５％ 乙液：下記（５）及び（６）を含有する溶液 （５）緩衝液 ２０〜１０００ｍＭ、ｐＨ４〜１２ （６）塩化ナトリウム ５０〜３００ｍＭ ここで、緩衝液としては、トリス緩衝液、リン酸緩衝
液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液又はグッド緩衝液等
が使用できる。Instep fluid: (1), (2), (3) and (4)
(1) Buffer solution 20 to 1000 mM, pH 4 to 12 (2) Latex particles carrying antigen or antibody 0.0
1-0.5% (3) Sodium chloride 50-300 mM (4) Saccharides 7.5-15% B solution: A solution containing the following (5) and (6) (5) Buffer solution 20-1000 mM, pH 4- 12 (6) Sodium chloride 50 to 300 mM As the buffer, a Tris buffer, a phosphate buffer, a glycine buffer, a borate buffer, a good buffer, or the like can be used.
【００２９】また、上記甲剤は、次のようにして調製す
ることができる。即ち、まず平均粒子径０．３μｍ〜
１．０μｍのラテックス粒子０．１〜１０％を懸濁した
緩衝液に、抗原又は抗体を０．００１〜１００ｍｇ／ｍ
ｌ含む緩衝液を混合した後、３０分〜４８時間、４〜６
０℃の条件で振とうする。次にウシ血清アルブミンやカ
ゼイン等のマスキング剤を０．０５〜２００ｍｇ／ｍｌ
添加して３０分〜４８時間、４〜６０℃の条件で振とう
した後に遠心分離等により担体と溶液を分離し未結合の
抗原又は抗体を除去する。最後に抗原又は抗体を担持し
たラテックス粒子を所定量の塩化ナトリウム及び糖類を
溶解した緩衝液に分散させて抗原又は抗体担持ラテック
ス懸濁液（甲剤）とする。The above-mentioned instep preparation can be prepared as follows. That is, first, the average particle diameter is 0.3 μm or more.
In a buffer in which 0.1 to 10% of 1.0 μm latex particles are suspended, an antigen or an antibody is 0.001 to 100 mg / m 2.
30 minutes to 48 hours after mixing the buffer solution containing
Shake at 0 ° C. Next, a masking agent such as bovine serum albumin or casein is added at 0.05 to 200 mg / ml.
After adding and shaking for 30 minutes to 48 hours at 4 to 60 ° C., the carrier and the solution are separated by centrifugation or the like to remove unbound antigen or antibody. Finally, the latex particles carrying the antigen or antibody are dispersed in a buffer solution in which a predetermined amount of sodium chloride and saccharide are dissolved to prepare a suspension of latex carrying the antigen or antibody (supplement).
【００３０】[0030]
【発明の効果】本発明の免疫学的ラテックス比濁定量用
試薬は、高い試薬感度を有しており、しかも長時間放置
しても粒子が沈降することがない。従って、本発明の免
疫学的ラテックス比濁定量用試薬は、使用前に再懸濁操
作を行う必要がなく、該試薬を用いることにより、自動
分析装置を用いた高感度な測定を簡便且つ迅速に行うこ
とが可能となる。As described above, the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention has a high reagent sensitivity and does not cause particles to settle even if left for a long time. Therefore, the immunological latex turbidimetric reagent of the present invention does not require a resuspension operation before use, and by using the reagent, highly sensitive measurement using an automatic analyzer can be performed simply and quickly. Can be performed.
【００３１】[0031]
【実施例】以下実施例を上げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。The present invention will be described in detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited to these examples.
【００３２】実施例１〜５ （１）甲剤（トレポネーマ・パリダム抗原担持ラテック
ス懸濁液）の調製 平均粒子径０．３５μｍ、ラテックス濃度５％のポリス
チレン粒子懸濁液０．１ｍｌをｐＨ８．６の２０ｍＭグ
リシン緩衝液で１０μｇ／ｍｌに希釈したトレポネーマ
・パリダム抗原液０．９ｍｌに加えて混合した。４℃で
４時間静置した後、ウシ血清アルブミンを含む水溶液２
ｍｌを添加し、さらに１．５時間静置した。次いで遠心
分離により得られた沈渣（トレポネーマ・パリダム抗原
担持ラテックス）に、２ｍｌの１００ｍＭ塩化ナトリウ
ム、０．１％アジ化ナトリウム、１％ウシ血清アルブミ
ン、並びに各種（スクロース、グルコース、トレハロー
ス）及び各濃度（７．５％、１０％、１５％）の糖類を
含むｐＨ８．０の０．１Ｍトリス緩衝液を加えて懸濁し
て甲剤を調製した。Examples 1 to 5 (1) Preparation of instep agent (Treponema / palidum antigen-loaded latex suspension) 0.1 ml of a polystyrene particle suspension having an average particle diameter of 0.35 μm and a latex concentration of 5% was prepared at pH 8.6. Was added to 0.9 ml of Treponema pallidum antigen solution diluted to 10 μg / ml with a 20 mM glycine buffer solution, and mixed. After standing at 4 ° C. for 4 hours, an aqueous solution 2 containing bovine serum albumin was added.
Then, the mixture was left still for 1.5 hours. Next, 2 ml of 100 mM sodium chloride, 0.1% sodium azide, 1% bovine serum albumin, and various (sucrose, glucose, trehalose) and various concentrations were added to the sediment obtained by centrifugation (Treponema pallidum antigen-loaded latex). A 0.1 M Tris buffer solution (pH 8.0) containing saccharides (7.5%, 10%, 15%) was added to suspend the suspension, thereby preparing an inoculant.
【００３３】（２）乙剤（緩衝液）の調製 ０．１Ｍ塩化ナトリウムと０．１％アジ化ナトリウムと
１％ウシ血清アルブミンと１．５％のポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）２００００を含むｐＨ８．０の０．１
Ｍトリス緩衝液を調製して乙剤とした。(2) Preparation of an agent (buffer) pH 8.0 containing 0.1 M sodium chloride, 0.1% sodium azide, 1% bovine serum albumin and 1.5% polyethylene glycol (PEG) 20,000 0.1
An M tris buffer was prepared to prepare a second preparation.
【００３４】（３）被検液の調製 ヒト正常血清で梅毒陽性コントロール血清（国際試薬）
を希釈して２００Ｕに調製し被検液とした。(3) Preparation of test liquid Normal human serum and syphilis positive control serum (International reagent)
Was diluted to 200 U and used as a test solution.
【００３５】（４）感度測定 乙剤２４０μｌに被検液１０μｌをガラスセル中で添加
攪拌した後、３７℃で約５分間静置した。次いで甲剤を
８０μｌ添加攪拌し、３０秒後から２００秒までの波長
７００ｎｍにおける光学密度変化量を測定した。以上の
操作には、自動分析装置ＴＢＡ−３０Ｒ形（東芝メディ
カル）を用いた。(4) Sensitivity measurement 10 μl of the test solution was added to 240 μl of the second agent in a glass cell and stirred, and then allowed to stand at 37 ° C. for about 5 minutes. Next, 80 μl of the former was added and stirred, and the change in optical density at a wavelength of 700 nm from 30 seconds to 200 seconds was measured. For the above operations, an automatic analyzer TBA-30R (Toshiba Medical) was used.
【００３６】（５）ラテックス粒子の沈降性の評価 試薬を静置し、転倒混和せずに１０℃での長期保存後
（３０日後及び１２０日後）の上部及び底部を目視によ
りラテックス粒子の沈降性を評価した。(5) Evaluation of Sedimentability of Latex Particles The reagent was allowed to stand, and the upper and lower parts after long-term storage at 10 ° C. (after 30 days and 120 days) without inversion mixing were visually checked for latex particles. Was evaluated.
【００３７】感度及びラテックス粒子の沈降性の評価結
果を表１に示した。The evaluation results of the sensitivity and the sedimentation of latex particles are shown in Table 1.
【００３８】[0038]
【表１】 [Table 1]
【００３９】実施例６ ラテックス粒子の粒子径に０．５０μｍを用いた以外
は、実施例２と同様な操作で行った。結果を表１に示し
た。Example 6 The same operation as in Example 2 was carried out except that the particle size of the latex particles was 0.50 μm. The results are shown in Table 1.
【００４０】比較例１〜３ 糖類にスクロースを用い、濃度を０％、５％、２０％と
した以外は、実施例１と同様な操作で行った。結果を表
１に示した。Comparative Examples 1 to 3 The same operation as in Example 1 was carried out except that sucrose was used as the saccharide and the concentrations were 0%, 5% and 20%. The results are shown in Table 1.
【００４１】比較例４〜５ 糖類の代わりにエチレングリコールを用い、濃度を１０
％、３５％とした以外は、実施例１と同様な操作で行っ
た。結果を表１に示した。Comparative Examples 4 and 5 Ethylene glycol was used in place of the saccharide and the concentration was 10
%, 35%, and the same operation as in Example 1. The results are shown in Table 1.
【００４２】実施例１〜６の条件においては、いずれも
０．１０以上の光学密度変化量（０．１４〜０．２０）
が得られ、充分な測定感度であった。また、静置後１２
０日後においても分散性が良く、転倒混和の必要はなか
った。Under the conditions of Examples 1 to 6, the optical density change amount of 0.10 or more (0.14 to 0.20)
Was obtained, and the measurement sensitivity was sufficient. In addition, 12
Even after 0 days, the dispersibility was good and there was no need to mix by inversion.
【００４３】スクロース濃度５％以下では、静置時間１
２０日後で上部は透明になり、底部には沈澱があったこ
とから、転倒混和等の再懸濁操作をしないと測定できな
い状態にあることが判った。また、スクロース濃度を２
０％とすると、静置時間１２０日後で上部にラテックス
が浮き上がり、再懸濁操作しないと測定できない状態に
あった。When the sucrose concentration is 5% or less, the standing time is 1
After 20 days, the upper part became transparent and the bottom part had a precipitate, indicating that the state could not be measured without a resuspension operation such as mixing by inversion. In addition, the sucrose concentration is 2
At 0%, the latex floated up at the top after 120 days of standing, and could not be measured without a resuspension operation.
【００４４】一方、エチレングリコールを用いた場合、
１０％の濃度（比較例４）では静置時間１２０日後で上
部が透明になり、底部に沈澱を生じた。また、十分な沈
降防止効果が得られるまでエチレングリコールの濃度を
上げた場合（３５％：比較例５）には、感度が０．０３
と著しく低くなり、測定できないことが判明した。On the other hand, when ethylene glycol is used,
At a concentration of 10% (Comparative Example 4), the top became transparent and the bottom formed a precipitate after 120 days of standing time. When the concentration of ethylene glycol was increased until a sufficient anti-settling effect was obtained (35%: Comparative Example 5), the sensitivity was 0.03.
It was found that the measurement was extremely low and measurement was impossible.
Claims (3)
の懸濁液からなる免疫学的ラテックス比濁定量用試薬に
おいて、該試薬中に７．５〜１５重量／体積％の糖類を
含むことを特徴とする免疫学的ラテックス比濁定量用試
薬。1. An immunological latex turbidimetric reagent comprising a suspension of latex particles carrying an antigen or an antibody, wherein the reagent contains 7.5 to 15% by weight / volume saccharide in the reagent. An immunological latex turbidimetric reagent.
抗原を担持したラテックス粒子の懸濁液からなるトレポ
ネーマ・パリダム抗体検出用免疫学的ラテックス比濁定
量用試薬において、該試薬中に７．５〜１５重量／体積
％の糖類を含むことを特徴とするトレポネーマ・パリダ
ム抗体検出用免疫学的ラテックス比濁定量用試薬。2. An immunological latex turbidimetric reagent for detecting a Treponema pallidum antibody, comprising a suspension of latex particles carrying an antigen derived from a Treponema pallidum cell component. An immunological latex turbidimetric reagent for detecting Treponema pallidum antibody, comprising 15% by weight / volume of a saccharide.
も約０．３μｍ以上であることを特徴とする請求項１又
は請求項２記載の免疫学的ラテックス比濁定量用試薬。3. The reagent according to claim 1, wherein the latex particles have an average particle size of at least about 0.3 μm or more.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20568597A JP3471198B2 (en) | 1997-07-31 | 1997-07-31 | Reagent for turbidimetric determination of immunological latex |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20568597A JP3471198B2 (en) | 1997-07-31 | 1997-07-31 | Reagent for turbidimetric determination of immunological latex |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1151938A true JPH1151938A (en) | 1999-02-26 |
| JP3471198B2 JP3471198B2 (en) | 2003-11-25 |
Family
ID=16511015
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20568597A Expired - Fee Related JP3471198B2 (en) | 1997-07-31 | 1997-07-31 | Reagent for turbidimetric determination of immunological latex |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3471198B2 (en) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000046828A (en) * | 1998-05-28 | 2000-02-18 | Sekisui Chem Co Ltd | Immunoassay reagent and production thereof |
| JP2006227027A (en) * | 2000-12-28 | 2006-08-31 | Shino Test Corp | Measuring reagent for measured material |
| JP2008304275A (en) * | 2007-06-06 | 2008-12-18 | Denka Seiken Co Ltd | Novel immunoagglutination measuring method |
| CN113030489A (en) * | 2021-04-01 | 2021-06-25 | 捷和泰（北京）生物科技有限公司 | Preparation method of cystatin C rabbit polyclonal antibody-latex particles |
| CN113985029A (en) * | 2021-10-25 | 2022-01-28 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | Composition suitable for improving stability of immunoturbidimetric reagent |
| CN114935655A (en) * | 2022-06-16 | 2022-08-23 | 安徽农业大学 | Pig IL-17 latex enhanced immunoturbidimetry detection kit and preparation and use methods thereof |
-
1997
- 1997-07-31 JP JP20568597A patent/JP3471198B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000046828A (en) * | 1998-05-28 | 2000-02-18 | Sekisui Chem Co Ltd | Immunoassay reagent and production thereof |
| JP2006227027A (en) * | 2000-12-28 | 2006-08-31 | Shino Test Corp | Measuring reagent for measured material |
| JP2008304275A (en) * | 2007-06-06 | 2008-12-18 | Denka Seiken Co Ltd | Novel immunoagglutination measuring method |
| CN113030489A (en) * | 2021-04-01 | 2021-06-25 | 捷和泰（北京）生物科技有限公司 | Preparation method of cystatin C rabbit polyclonal antibody-latex particles |
| CN113985029A (en) * | 2021-10-25 | 2022-01-28 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | Composition suitable for improving stability of immunoturbidimetric reagent |
| CN114935655A (en) * | 2022-06-16 | 2022-08-23 | 安徽农业大学 | Pig IL-17 latex enhanced immunoturbidimetry detection kit and preparation and use methods thereof |
| CN114935655B (en) * | 2022-06-16 | 2024-02-20 | 安徽农业大学 | Pig IL-17 latex enhanced immunoturbidimetry detection kit and preparation and use methods thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3471198B2 (en) | 2003-11-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4656143A (en) | Heterogeneous binding assay | |
| JP5442179B2 (en) | Method for suppressing sedimentation of fine particles bound with reactive substance and reagent containing the fine particles | |
| CN101310186B (en) | Method of assaying antigen and kit to be used therein | |
| JP4730304B2 (en) | Method for measuring hyaluronic acid using hyaluronic acid binding protein | |
| CA1146852A (en) | Reagent for latex agglutination | |
| JP5362797B2 (en) | Aggregation reaction stabilization method | |
| JPS6255103B2 (en) | ||
| US4552633A (en) | Fine particulate for use in clinical testing and a process for producing thereof | |
| JP3471198B2 (en) | Reagent for turbidimetric determination of immunological latex | |
| JPH0810224B2 (en) | A latex for immobilizing a physiologically active substance and a latex reagent using this latex | |
| JP2545707B2 (en) | Immunological diagnostic reagent | |
| JP2682697B2 (en) | Immunoassay reagents and immunoassays | |
| JP2545503B2 (en) | Immunological diagnostic reagent | |
| CN111239403B (en) | Beta 2 microglobulin latex enhanced immunoturbidimetry kit and application | |
| JPH1123573A (en) | Immunological measuring method | |
| JP2996690B2 (en) | Immunological agglutination reagent | |
| JP2003344410A (en) | Immuno-measurement reagent and immuno-measurement method | |
| JPH05281229A (en) | Method for measuring antigen or antibody under presence of immune complex | |
| CA2088471C (en) | Method for determining rheumatoid factors and agents for carrying out the method | |
| JP3644704B2 (en) | Immunoassay | |
| WO2024038863A1 (en) | Immunoassay method and reagent | |
| JPH04122858A (en) | Immunoassay | |
| JPH0650312B2 (en) | How to remove non-specific turbidity | |
| JP2895584B2 (en) | Latex agglutination test method and reagents used therefor | |
| JP3438962B2 (en) | Immunological agglutination reagent |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090912 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120912 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120912 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140912 Year of fee payment: 11 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |