JPH11509830A

JPH11509830A - 再狭窄を処置する薬剤を製造するためのレチノイドの使用

Info

Publication number: JPH11509830A
Application number: JP8528571A
Authority: JP
Inventors: デイビーズ，ピーター・エイ・ジェイ; チャンドララトナ，ロシャンタ・エイ; ベネディクト，クロード・アール
Original assignee: Allergan Inc; University of Texas System
Current assignee: Allergan Inc; University of Texas System
Priority date: 1995-03-20
Filing date: 1996-03-19
Publication date: 1999-08-31
Also published as: AU5256596A; AU712029B2; US5798372A; EP0814799A1; CA2215731A1; WO1996029069A1

Abstract

(57)【要約】レチノイド、例えば式：

Description

【発明の詳細な説明】再狭窄を処置する薬剤を製造するためのレチノイドの使用発明の分野本発明は、レチノイド、好ましくはＲＡＲ受容体に選択的な作動剤（すなわちＲＸＲ受容体よりもＲＡＲ受容体への選択性が高いレチノイド）、または汎作動剤(pan agonist)（すなわちＲＡＲもしくはＲＸＲ受容体のいずれかを活性化し得るレチノイド）を投与することによって、血管形成後の再狭窄を防止する方法に関する。発明の背景経皮的経管的血管形成(ＰＴＡ)は、粥腫症斑、血栓、塞栓および／または無機沈着物のいずれの存在によって起こるものであれ、血管の狭窄を、バルーン拡張、熱的剥離、レーザー・アテレクトミー（atherectomy）、機械的シェービング、摘出または超音波粉砕のような多くの方法のいずれかによって軽減するための経皮的経管的方法であると定義され、以下、血管形成と称するが、これは閉塞性血管疾患の処置において広く行われている。しかし、しばしば再狭窄が起こり、冠動脈形成の場合には処置後６箇月以内に患者の約３分の１に再狭窄が起こるということがわかっている。哺乳動物のアテローム性動脈硬化症、血栓症および／または末梢血管疾患の処置において、アンギオテンシン変換酵素(ＡＣＥ)阻害剤または生理学的に許容し得るその塩が用いられている。ＡＣＥは内皮細胞の管腔形質膜に主に局在するので、ＡＣＥ阻害剤は血小板−内皮相互作用を妨害し得ると言われている。更に、ＡＣＥ阻害剤はブラジキニン(内皮細胞からのプロスタサイクリン遊離の強力な刺激剤)の作用を、その分解の抑制によって促進し、その結果、血小板凝集抑制作用を示す(米国特許第５１４００１２号および第５１６６１４３号参照)。大規模な臨床試験において、ＡＣＥ阻害剤は、血管形成後の再狭窄防止の有益な効果を示していない。血管形成後の再狭窄を防止する他の方法には、光活性化し得るソラレンと紫外線照射との組み合わせ(米国特許第５１１６８６４号に記載)、および放射線源からの照射(米国特許第５２１３５６１号に記載)が含まれる。イタリア国Ｌimone在住のある家族が有する最近発見された遺伝子がコードするタンパク質は、動脈を閉塞する脂肪沈着物の形成を防止する機能を有し得、また、閉塞血管のバルーン血管形成術処置後に起こる動脈再閉塞を防止するのに特に有効であり得る。しかし、どの点でも適当な再狭窄防止方法は現在存在しない。従って、血管形成後の再狭窄を防止する方法が、依然求められている。発明の説明本発明は、血管形成後の再狭窄を防止またはその危険性を低下する方法であって、処置有効量のレチノイドを全身的に(例えば経口または非経口的に)投与することを含んで成る方法を提供する。レチノイド投与は、血管形成処置前、処置中および／または処置後に行い得る。レチノイドは細胞増殖を抑制することによって、再狭窄の発症を抑制すると考えられる。本発明において使用する用語「再狭窄」とは、Serruys，P．W．ら、“Incidence of restenosis after successful coronary angioplasty; a time related phe nomenon．A quantitative angiographic study in 342-consecutive patients a t 1，2，3 and 4 months”、Circulation、１９８８;７:３６１−７１に定義された通りである。本発明に従って処置する患者が正常血圧である場合の好ましい態様においては、レチノイドを、副作用を生じるよりも低い量で好ましく投与し得る。本発明の方法において有用な選択的ＲＡＲ作動剤は、下記式で示される化合物を包含する：ＡＧＮ１００３３５（ＡＴＲＡ）：（Ｅ）−３,７−ジメチル−９−(２,６,６ −トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル)−２,４,６,８−ノナテトラエン酸ＡＧＮ１９００１３（１３−シス−ＲＡ）：(２Ｚ,４Ｅ,６Ｅ,８Ｅ)−３,７− ジメチル−９−(２,６,６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル)−２, ４,６,８−ノナテトラエン酸ＡＧＮ１９０１２１：(Ｅ)−４−[４−(２,６,６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル)ブタ−２−エン−１−イニル]安息香酸ＡＧＮ１９０２０５：４−[２−(５,６,７,８−テトラヒドロ−５,５,８,８− テトラメチル−２−ナフタレニル)エチニル]安息香酸ＡＧＮ１９１１８３：(Ｅ)−４−[２−(５,６,７,８−テトラヒドロ−５,５, ８,８−テトラメチル−２−ナフタレニル)−１−プロペン−１−イル]安息香酸ＡＧＮ１９２３２６：４−[２−(３−(２−テトラヒドロピラニル)オキシ)−( ４−(１,１−ジメチルエチル)フェニル)エチニル]安息香酸ＡＧＮ１９２３２７：６−[２−(３−(２−テトラヒドロピラニル)オキシ)−( ４−(１,１−ジメチルエチル)フェニル)エチニル]−３−ニコチン酸本発明の方法において有用な汎作動剤は、下記式で示される化合物を包含する：ＡＧＮ１９２０１３（９−シスＲＡ）：(２Ｅ,４Ｅ,６Ｚ,８Ｅ)−３,７−ジメチル−９−(２,６,６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル)−２,４, ６,８−ノナテトラエン酸ＡＧＮ１９１６５９：(Ｅ)−５−[２−(５,６,７,８−テトラヒドロ−３,５, ５,８,８−ペンタメチル−２−ナフタレニル)−１−プロペン−１−イル]チオフェン−２−カルボン酸本発明の方法において使用し得るこのようなレチノイドの例は、米国特許第４７３９０９８号および第４３２６０５５号；欧州特許出願第１７６０３４Ａ号（１９８６年４月２日公開）、並びにＰＣＴ特許出願ＷＯ９３／２５５３０およびＷＯ９４／１７７９６に記載されている。前記以外のレチノイドは、次のような反応によって合成し得る：エチル４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４ −フェニル]エチン−１−イル]ベンゾエート（化合物１）１００ｍｌ三つ口丸底フラスコ（ガラス栓、還流冷却器およびゴム隔壁を取り付けたもの）に、ジエチルアミン（固体ＫＯＨ上で蒸留したもの）２５ｍｌを入れた。この溶媒を、激しいアルゴン気流で数分間脱気した。この溶液に、ジエチルアミン１０ｍｌに溶解した２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]アセチレン（化合物Ｎ）２.６７ｇ（１０.３ミリモル）、ヨウ化第一銅（粉砕して粉末としたもの）０.３９ｇ（２.１ミリモル）、およびジエチルアミン５ｍｌに溶解したエチル４−ヨードベンゾエート（化合物Ａ）２.７２ｇ（９.８ミリモル）を加えた。得られた黄色溶液を１０分間脱気した後、ビス(トリフェニル)ホスフィンパラジウム(II)クロリド１.６７ｇ（２.４ミリモル）を加えた。溶液を０℃に冷却し、０℃で３０分間撹拌した（最初の５分間の撹拌は、アルゴンパージ下に行った）。反応混合物を室温に昇温させ、一晩撹拌した。フラスコ壁に塩が生成した。反応混合物をセライトで濾過し、エチルエーテル５００ｍｌで洗い、セライトプラグを廃棄した。濾液を水（４×２００ｍｌ）およびブライン１５０ｍｌで洗い、Ｋ₂ＣＯ₃で乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、黄色泡状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、５％酢酸エチル／ヘキサン）、および次いで再結晶（メタノール）により精製して、標記化合物をベージュ色針状物として得た。４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]エチン−１−イル]安息香酸（化合物２）テトラヒドロフラン８０ｍｌ中のエチル４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２ −テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]エチン−１−イル]ベンゾエート（化合物１）２.００ｇ（４.９ミリモル）の溶液に、ＬｉＯＨ（０.５Ｍ水溶液）１９.７ｍｌ（９.８ミリモル）を加えた。均質な黄色溶液を室温で１９時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、水１００ｍｌおよびヘキサン６０ｍｌに分配し、相を分離した。水相をエチルエーテル２００ｍｌで希釈し、０℃に冷却し、１Ｎ硫酸でｐＨ約４〜５に酸性化した。相を分離し、水相を廃棄した。有機相をブラインで１回洗い、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、白色固体を得た。この固体を再結晶（アセトニトリル）して、標記化合物を細かい白色針状物として得た。エチル６−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４ −フェニル]エチン−１−イル]ニコチネート（化合物３）エチル４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４ −フェニル]エチン−１−イル]ベンゾエート（化合物１）の合成と同様の手順によって、２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]アセチレン（化合物Ｎ）２.８４ｇ（１１.０ミリモル）、ヨウ化第一銅（粉砕して粉末としたもの）０.３８ｇ（２.０ミリモル）、エチル６−ヨードニコチネート（化合物Ｃ）２.７６ｇ（１０.０ミリモル）、ビス(トリフェニル)ホスフィンパラジウム(II)クロリド１.６１ｇ（２.３ミリモル）、およびジエチルアミン５０ｍｌを用いて、黄色がかった赤色の泡状固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、５％酢酸エチル／ヘキサン）、および次いで再結晶（メタノール）により精製して、標記化合物を黄色結晶として得た。６−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]エチン−１−イル]ニコチン酸（化合物４）４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]エチン−１−イル]安息香酸（化合物２）の合成と同様の手順によって、エチル６−２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]エチン−１−イル]ニコチネート（化合物３）１.９０ｇ（４.７ミリモル）、ＬｉＯＨ（０.５Ｍ水溶液）１８.７ｍｌ（９.３ミリモル）、およびテトラヒドロフラン８０ｍｌを用いて、黄−白色固体を得た。この固体を再結晶（アセトニトリル）して、標記化合物を細かい黄色針状結晶として得た。エチル６−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５ −フェニル]エチン−１−イル]ニコチネート（化合物５）エチル４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４ −フェニル]エチン−１−イル]ベンゾエート（化合物１）の合成と同様の手順によって、２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５−フェニル]アセチレン（化合物Ｏ）２.２１ｇ（８.６ミリモル）、ヨウ化第一銅（粉砕して粉末としたもの）０.４５ｇ（２.４ミリモル）、エチル６−ヨードニコチネート（化合物Ｃ）２.１５ｇ（７.８ミリモル）、ビス(トリフェニル)ホスフィンパラジウム(II)クロリド１.８９ｇ（２.７ミリモル）、およびジエチルアミン４５ｍｌを用いて、橙色泡状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルムを用いてシリカに前吸着し、１０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出）、および次いで再結晶（メタノール）により精製して、標記化合物を明黄色針状物として得た。エチル４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５ −フェニル]エチン−１−イル]ベンゾエート（化合物６）エチル４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４ −フェニル]エチン−１−イル]ベンゾエート（化合物１）の合成と同様の手順によって、２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５−フェニル]アセチレン（化合物Ｏ）３.３０ｇ（１２.８ミリモル）、ヨウ化第一銅（粉砕して粉末としたもの）０.４４ｇ（２.３ミリモル）、エチル４−ヨードベンゾエート（化合物Ａ）３.２０ｇ（１１.６ミリモル）、ビス(トリフェニル)ホスフィンパラジウム(II)クロリド１.８７ｇ（２.７ミリモル）、およびジエチルアミン５０ｍｌを用いて、橙色泡状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルムを用いてシリカに前吸着し、５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出）、および次いで再結晶（メタノール）により精製して、標記化合物を明褐色クラスターとして得た。４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５−フェニル]エチン−１−イル]安息香酸（化合物７）４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]エチン−１−イル]安息香酸（化合物２）の合成と同様の手順によって、エチル４−２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５−フェニル]エチン−１−イル]ニコチネート（化合物６）２.０１ｇ（５.１ミリモル）、ＬｉＯＨ（１Ｍ水溶液）１０.５ｍｌ（１０.５ミリモル）、およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）４４ｍｌを用いて、室温で４８時間撹拌後、一晩還流して、白色固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、１０％酢酸エチル／ヘキサン、次いで１５％メタノール／ジクロロメタン）により精製して、標記化合物を灰白色固体として得た。６−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５−フェニル]エチン−１−イル]ニコチン酸（化合物８）４−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−４−フェニル]エチン−１−イル]安息香酸（化合物２）の合成と同様の手順によって、エチル６−[２−[[２−ｔ−ブチル−１−(２−テトラヒドロピラノキシ)]−５−フェニル]エチン−１−イル]ニコチネート（化合物５）１.５０ｇ（３.８ミリモル）、ＬｉＯＨ（１Ｍ水溶液）８.０ｍｌ（８.０ミリモル）、およびテトラヒドロフラン３２ｍｌを用いて、黄色固体を得た。この固体を再結晶（アセトニトリル）して、標記化合物を明黄色結晶として得た。レチノイドは、選択的ＲＡＲ受容体作動剤または汎作動剤が好ましい。最も好ましいのは、ＲＡＲ受容体作動剤であるレチノイドである。前記特許および特許出願を、引用により本発明の一部とする。本発明の方法の実施において、レチノイドを、血管形成処置前、処置中および／または処置後に、哺乳動物種（例えばイヌ、ネコ、ヒトなど）に投与し、レチノイドは従来の全身的投与形態（例えば錠剤、カプセル剤、エリクシル剤または注射剤）中に組み合わせ得る。このような投与形態において、レチノイドを薬学的に許容し得る担体［必要な担体材料、賦形剤、滑沢剤、緩衝剤、抗菌剤、増量剤（例えばマンニトール）、抗酸化剤（アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）などを包含する］と組み合わせ得る。経口投与形態が好ましいが、非経口投与形態も充分好ましい。経口投与のためには、約０.０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０.１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲の量でレチノイドを使用することによって、充分な結果を得ることができる。好ましい経口投与形態、例えば錠剤またはカプセル剤は、レチノイドを約０. １〜５００ｍｇ、好ましくは約２〜５０ｍｇ、より好ましくは約５〜２５ｍｇの量で含有し得る。非経口投与のためには、レチノイドを約０.００５〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０.００５〜１.５ｍｇ／ｋｇの範囲の量でレチノイドを使用し得る。前記組成物は、前記投与形態で、１回または分割して（１日１〜４回）投与し得る。低用量から始めて、徐々に用量を増すことが有利であり得る。例えば、総重量約２〜２０００ｍｇの、種々のサイズの錠剤を調製し得る。錠剤は１種または複数種の活性物質を前記量で含有し、残部は、許容される薬学的手法に従って、他の材料から成る薬学的に許容し得る担体である。そのような錠剤は当然、用量を分割できるように刻み目を有し得る。ゼラチンカプセル剤も同様に調製し得る。活性物質の１種またはその組み合わせを、ティースプーン１〜４杯で所望の用量を提供できるように、薬剤投与に許容し得る従来の液体賦形剤に溶解または懸濁することによって、液体製剤を調製することもできる。そのような投与形態では、１日１〜４回患者に投与し得る。組成物の調製において、前記量の活性物質を、許容される薬学的手法に従って、生理学的に許容し得る賦形剤、担体、佐剤、結合剤、保存剤、安定剤、香料などと組み合わせて、特定の単位用量形態とする。錠剤中に組み合わせ得る佐剤の例は、次の通りである：結合剤、例えばトラガカントガム、アラビアガム、トウモロコシデンプンまたはゼラチン；賦形剤、例えばリン酸二カルシウムまたはセルロース；崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸など；滑沢剤、例えばステアリン酸またはステアリン酸マグネシウム；甘味料、例えばスクロース、アスパルテーム、ラクトースまたはサッカリン；香料、例えばオレンジ、ペパーミント、冬緑油またはチェリー。単位用量形態がカプセルである場合は、上記種類の材料に加えて、液体担体、例えば脂肪油をも含有し得る。コーティングとして、または用量単位の物理形態を更に改良するために、種々の他の材料が存在し得る。例えば、錠剤またはカプセル剤を、シェラック、糖またはその両方でコーティングし得る。エリクシル剤シロップは、活性化合物、水、アルコールなど（担体として）、グリセロール（可溶化剤として）、スクロース（甘味料として）、メチルおよびプロピルパラベン（保存剤として）、色素並びに香料（例えばチェリーまたはオレンジ）を含有し得る。前記活性物質のいくつかは、通常知られた薬学的に許容し得る塩、例えばアルカリ金属塩および他の通例塩基性の塩または酸付加塩などを形成する。従って、基礎物質の説明は、その親化合物と実質的に等価であることが知られている通常の塩についての説明をも包含することを意図する。前記製剤は、血管形成術の時点から始めて、長期間（すなわち４週ないし６箇月間またはそれ以上）にわたって投与し得る。そのような量を２週間、１週間、１箇月などの期間にわたって提供し得る徐放形態の製剤を使用してもよい。最少限の効果を達成するために、少なくとも１〜２週間投与する必要がある。以下の実施例は、本発明の好ましい態様を説明するものである。以下更に説明するように、本発明の方法を実施するために選択するレチノイドは、ＲＡＲ選択的作動剤または汎作動剤、より好ましくはＲＡＲ作動剤である。レチノイドがＲＡＲ作動剤、ＲＸＲ作動剤または汎作動剤のいずれであるかを調べる方法は、当分野でよく知られている。ＲＡＲおよびＲＸＲ作動剤活性を測定するアッセイの説明は、とりわけ、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９３／２５５３０(１９９３年１２月２３日公開)(引用により、本発明の一部とする)に記載されている。(言うまでもなく、汎作動剤は、ＲＡＲおよびＲＸＲ受容体の両方において作動剤活性を示す。) 発明の詳細な説明本発明の目的のために、ＲＡＲ選択的作動剤は好ましくは、ＲＡＲ対ＲＸＲ受容体活性比が少なくとも５(より好ましくは少なくとも約１０)であり得る。汎作動剤は、ＲＡＲおよびＲＸＲ受容体のいずれにおいても、例えば同程度の活性を示し得る。冠動脈傷害のインビボ覚醒イヌモデルにおいて、セロトニン(５ＨＴ)およびトロンボキサンＡ₂(ＴxＡ₂)が新動脈内膜増殖に寄与する重要な役割を有することが示された(“Frequency and severity of cyclic flow alternations and plat elet aggregation predict the severity of neointimal proliferation follow ing experimental coronary stenosis and endothelial injury”、Ｗillerson ＪＴら、Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci ＵＳＡ、８８：１０６２４−１０６２８、１９９１参照)。５ＨＴは、大動脈内皮および平滑筋細胞においてＤＮＡ合成(³ Ｈ−チミジン取り込み)を促進することによって有系***を誘発し得るということが証明された。また、酸性線維芽細胞増殖因子(β−ＦＧＦ)および血小板由来増殖因子(ＰＤＧＦ)も血管内皮および平滑筋細胞の強力なマイトジェンであり、それら細胞に対する５ＨＴの***促進作用と重要な相乗効果を示し得るということも示された。すなわち、後述の動脈内皮および平滑筋細胞培養系は、レチノイドが重要な抗増殖作用を有するか否かを短時間で調べるための理想的な系である。 ³Ｈ−チミジン取り込みを利用する内皮または平滑筋細胞によるＤＮＡ合成に対する、１％血清の作用を調べた。ある種のマイトジェン(すなわち、セロトニンまたはβ−ＦＧＦ)により誘導される内皮または平滑筋細胞増殖を抑制するレチノイドの作用を調べるためには、それらの所定濃度を１％血清の代わりに培地に加えた。イヌ大動脈から採った一次細胞をこの試験に使用した。そのような一次細胞を１回の試験を行うのに充分な数に増殖させるのに、通常のセルライン( 例えばＮＩＨ３Ｔ３細胞など)とは異なって、６〜７週間を要した。以下の試験のために、一次細胞(継代２〜４)を、１０％ウシ胎児血清(ＦＢＳ)中、３５×１０mm組織培養皿にプレーティングし、インキュベートした。７２時間増殖させた後、同調のために培地を０.１％ＦＢＳに替え、更に７２時間インキュベートした。次いで、１％血清を加え、２０時間インキュベートした後、³Ｈ−チミジン( １μＣi)を加えた。³Ｈ−チミジン添加の４時間後、ＤＮＡを沈澱させ、取り込まれた³Ｈ−チミジン量を測定した。この値を、血清またはセロトニンまたはβ −ＦＧＦの細胞増殖促進値として報告し、³Ｈ−チミジン取り込みのベースライン％として表す。レチノイドの抗増殖作用を調べるために、レチノイドを１００％エタノールに溶解し、所定の最終濃度となるように加えた。この化合物は、細胞を刺激する１％血清またはセロトニンまたはβ−ＦＧＦを加える時点で加えた。（培地中のエタノールの最高最終濃度は、内皮または平滑筋細胞に対し細胞毒性を示さない１％であった。）レチノイドおよび１％血清またはセロトニンまたはβ−ＦＧＦと共に２０時間インキュベート後、³Ｈ−チミジン取り込みを測定した。下記表２に示すように、平滑筋に対する作用の強さは、ＡＧＮ１９１６５９＝１９１１８３＞ＡＧＮ１９２３２７＞ＡＧＮ１９１９８５＞ＡＧＮ１９２３２６のような順である。内皮細胞に対する作用強度順は、ＡＧＮ１９２０１３＞ＡＧＮ１９０２０５＝ＡＧＮ１９１１８３である。平滑筋および内皮細胞増殖に対するＡＧＮ１９１１８３の作用の試験結果を、下記表１に示す。この試験においては、細胞増殖に対するＡＧＮ１９１１８３の作用を、０.０１〜１００μＭの用量範囲で評価した。細胞増殖率を用量に対してプロットすることによって、細胞増殖を５０％抑制する濃度(ＥＤ₅₀)が、平滑筋および内皮細胞に対してそれぞれ０.０３μＭおよび６.１５μＭであることがわかる。 * １００％＝２１０８±１６５cpm／１０⁶細胞 ** １００％＝１７３９±７１cpm／１０⁶細胞先に述べた他のレチノイドも、ＡＧＮ１９１１８３と同用量で、平滑筋および内皮細胞増殖に対する作用を試験した。表２に、各レチノイドのＥＤ₅₀を示す。この結果から明らかなように、概してＲＡＲ選択的レチノイドは汎作動剤よりも有効で、汎作動剤はＲＸＲ選択的レチノイドよりも有効である。とりわけ、ＡＧＮ１９１１８３が、平滑筋および内皮細胞のいずれの増殖をも抑制する最も有効なレチノイドである。次いで、いくつかのレチノイドを、マイトジェン誘発細胞増殖に対して試験した；マイトジェンとして、セロトニン(５ＨＴ)およびβ−ＦＧＦを使用した。この試験において(結果を下記表３に示す)、同じ用量で、マイトジェン誘発細胞増殖に対する作用を評価した(結果をＥＤ₅₀として示し、血清により誘発した平滑筋および内皮細胞増殖に対するＥＤ₅₀と比較する)。どちらの細胞種に対しても１％血清が最も強力なマイトジェンであり得、セロトニンまたはβ−ＦＧＦにより誘発される細胞増殖を抑制するのに要するレチノイドはより低濃度であり得ると言えるかもしれない。このことは、内皮細胞については部分的に事実であることがわかる。しかし、平滑筋細胞に対しては、試験したレチノイドはβ−ＦＧＦ誘発細胞増殖を抑制しない。血管形成の損傷を最少にすることによって再狭窄の発症を低減する試みが注目されている。レーザー血管形成の研究によると、熱的損傷の程度と、もたらされる新動脈内膜増殖の量との間には直接の関連性が見られる。しかし、従来のバルーン血管形成に関して、損傷の程度と再狭窄との間に同様の関連性があることは証明されていない。血管損傷後の細胞増殖の経過および程度をより特徴付けるために、ウサギの動脈損傷モデルにおける³Ｈ−チミジンのインビボ取り込みに対するレチノイドの作用を調べた。単なる内膜の内皮除去および血管の伸張損傷（従来の血管形成による）を包含する、種々の程度の損傷を形成した。バルーン血管形成により誘発される細胞増殖を抑制するＡＧＮ１００３３５(トランスレチノイン酸の作用を調べた。３.０〜３.５kgの雄のニュージーランド白ウサギの大腿動脈に、標準化した損傷を形成した。動脈アクセスは、右頸動脈(術後に結紮した)から得た。動脈アクセスが得られたら、ヘパリン(１００Ｕ／kg、ＩＶ)を投与した。下記方法によって損傷を形成した。１．２.５mm×２cmバルーンカテーテルを、８気圧(ＡＴＭ)に３０秒間、３回拡張した(n＝７１)。バルーンカテーテルの配置は、バルーンの中心点を、大腿上部と膝との間の４０％の距離の位置に配置する(透視診断法によって確認)ことによって標準化した。損傷から種々の時間後に(１、１.２５、１.５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、２０および２８日後)、０.２５μＣi／kgの³Ｈ−チミジンを内側の耳静脈から注入し、生理食塩水１０ccを流入した。³Ｈ−チミジン注入の１時間後に動物を殺した。動物を殺すのは、安楽死溶液２ccを心臓内注射することによって行った。鼠径靭帯から大腿動脈の遠位分岐までを切除することによって動脈片を採った。動脈片をアッセイに付すまで−４０℃で保存した。次いで、動脈片を解凍し、外膜をすべて剥がした。組織を０.５Ｎ−ＮaＯＨ( ３ml)中、１００℃で１時間消化した。消化した片を氷浴内で冷却し、４０％トリクロロ酢酸(ＴＣＡ)(１cc)を加えることによって、核酸を沈澱させた。６３００gで１０分間遠心することによって、沈澱を集めた。上清をデカントし、管を逆さにして残りの上清を排出させた。沈澱を０.５Ｎ−ＮaＯＨ(２００μl)中で再消化し、ピペットでシンチレーションバイアルに入れた。サンプルを０.５Ｎ −ＨＣlで中和し、マルチゾル(multisol)シンチレーション液を用いてカウントした。血管形成誘発再狭窄の前記モデルを用いて、オール-トランスレチノイン酸による継続的処置により、血管損傷部位の細胞増殖が抑制されるか否かを調べた。この試験には、次のプロトコールを用いた。１日目: 血液１０ccを採り、血清をベースラインサンプルとして冷凍した。オールートランスレチノイン酸(１０mg／kg)をジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解し(１０mg/ml)、次いで大豆油で１:１に希釈したものを、腹腔内投与(ＩＰ)した。２〜６日目: 上記混合物を毎日注射した(損傷前に、６日間、前処理)。７日目: ウサギをバルーン血管形成術に付した。７〜９日目: ウサギにレチノイン酸のＩＰ注射を毎日続けて行った。１０日目: 血管損傷部位におけるＤＮＡ合成を評価するために、前記のように³Ｈ−チミジンをウサギに投与し、１時間後に殺した。このインビボ試験により、１０mg／kgの用量のレチノイン酸は、血管形成後の細胞増殖を抑制するらしいと結論した。しかし、分析に付すことのできた動物は、非常に少数であった。また、レチノイン酸を投与した４匹のうち２匹は、試験終了前に死亡した。これは、多量のレチノイン酸の毒性によるものであり得る。より低用量で、そのような作用を防ぐことができると考えられる。結果を図３５に示す。本発明の特定の態様を説明したが、当然、明らかに多くの変更を加えることができるので、本発明は前記態様に制限されることはなく、請求の範囲に含まれる変更は本発明に包含される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/44 Ａ６１Ｋ 31/44 (72)発明者チャンドララトナ，ロシャンタ・エイアメリカ合衆国92691カリフォルニア州ミッション・ビエホ、エンプレサ 25841 番 (72)発明者ベネディクト，クロード・アールアメリカ合衆国77031テキサス州ヒューストン、トゥイン・ヒルズ・ドライブ 9103番

Claims

【特許請求の範囲】１．血管形成後の再狭窄を防止またはその危険性を低減する方法であって、そのような処置を要する哺乳動物種に有効量のレチノイドを投与することを含んで成る方法。２．レチノイドが、選択的ＲＡＲ受容体作動剤または汎作動剤である請求項１記載の方法。３．レチノイドが、選択的ＲＡＲ受容体作動剤である請求項２記載の方法。４．レチノイドを血管形成前に投与する請求項１記載の方法。５．レチノイドを血管形成中に投与する請求項１記載の方法。６．レチノイドを血管形成後に投与する請求項１記載の方法。７．レチノイドを、１日１〜４回、約０.１〜５００ｍｇの単一または分割用量で投与する請求項１記載の方法。８．レチノイドは、下記式で示される化合物から成る群から選択する請求項２記載の方法：９．レチノイドがである請求項８記載の方法。１０．血管形成後の再狭窄を防止またはその危険性を低減するために使用するのに適当な投与形態の薬剤組成物であって、有効量のレチノイドおよび薬学的に許容し得る担体を含有する組成物。１１．投与形態が、錠剤、カプセル剤、エリクシル剤または注射剤である請求項１０記載の組成物。１２．投与形態が経口投与形態である請求項１０記載の組成物。１３．レチノイドが、選択的ＲＡＲ受容体作動剤または汎作動剤である請求項１０記載の組成物。１４．レチノイドが、選択的ＲＡＲ受容体作動剤である請求項１３記載の組成物。１５．レチノイドは、下記式で示される化合物から成る群から選択する請求項１３記載の組成物：１６．レチノイドがである請求項１５記載の組成物。