JPH11506418A - 免疫反応を刺激する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質を投与することを含む、免疫反応を刺激する方法が開示されている。その方法は病原性のあるいは日和見感染性の微生物に感染した患者および細胞性免疫反応が低下した患者を治療するときに有効である。ＣＤ４０結合タンパク質にはＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合するモノクローナル抗体、そしてそれらの組合せが含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫反応を刺激する方法 発明の属する技術分野 本発明は、有効な量のＣＤ４０リガンドのオリゴマー、そしてその代わりに有 用な合成物を投与することを含む、個体において免疫反応を刺激する方法に関す る。 発明の背景 病原体に対する免疫反応は、広くは、細胞依存性（細胞性免疫）あるいは抗体 依存性（液性免疫）のどちらかに分類されうる。細胞性免疫においては、活性化 されたマクロファージと細胞傷害性リンパ球が病原体の除去を行う。これに対し て液性免疫は基本的には抗体産生を通じて機能する。現在のところ考えられてい るのは、免疫反応のこれら２種類の様式は、特定の一連のサイトカインを分泌す るヘルパーＴ細胞（Ｔ_H）の特徴的なサブセットにより調節されている。（Ｉｍ ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ誌，１２３，１９９１にレビューされ ている。） １型Ｔ_H細胞（Ｔ_H１細胞）は遅延型過敏症（ＤＴＨ）を媒介し、そしてインタ ーフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）とインターロイキン−２（ＩＬ−２）を分泌する 。一方２型ＴＨ細胞（Ｔ_H２細胞）は基本的にはインターロイキン−４、５そし て１０（それぞれＩＬ−４、ＩＬ−５そしてＩＬ−１０）を分泌し、そしてＢ細 胞の補助の役割を果たす。Ｔ_H１あるいはＴ_H２経路を介した免疫反応の誘導は、 感染初期にしばしば顕著であり、そして感染を引き起こす微生物のタイプにより （Ｓｃｏｔｔ ａｎｄ Ｋａｕｆｍａｎｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １ ２：３４６，１９９１）、また感染宿主の遺伝的性質により支配されているよう に見える。免疫反応が不適切に進行したときには、結果として疾病の解決ができ ず、あるいは免疫病理学が発達することになりうる。Ｔ_H１、つまり細胞依存性 反応、あるいはＴ_H２、つまり抗体依存性反応、のどちらかのために免疫反応を 巧みに 扱うことが可能になることにより、感染症においてのみならず炎症やアレルギー 疾患においても有効な手段を提供できるだろう（例えば、Ｐｏｗｒｉｅ ａｎｄ Ｃｏｆｆｍａｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １４：２７０，１９９３を参 照）。 発明の概要 本発明は、微生物に対する防御的Ｔ_H１免疫反応を刺激するのに効果的な量の ＣＤ４０結合タンパク質を投与することを含む、病原性あるいは日和見感染性微 生物に感染した哺乳動物の治療方法に関する。ＣＤ４０結合タンパク質は、ＣＤ ４０に結合ができそして生物学的シグナルを引き起こすことができる薬剤組成物 である。病原性あるいは日和見感染性微生物としては、例えば、リーシュマニア 、リステリア、ミコバクテリア、サルモネラ、トリパノソーマ、ニューモシステ ィスそしてトキソプラズマが単独に又は複合したものとして含まれる。ＣＤ４０ 結合タンパク質はＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０に特異的に結合するモノクローナ ル抗体、そしてこれらの複合物からなる群により選択された。 インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は、マクロファージ／単球により産生 され、防御的ＴＨ１反応の誘導に作用するときに重要な、鍵となるサイトカイン である。ＩＬ−１２はＣＤ４０結合タンパク質により刺激されて産生される。Ｃ Ｄ４０結合タンパク質は、Ｔ_H１反応が起こることが望ましい病気の治療をする ときに、適切なＴ_H１反応を誘導することを通じて病気を予防するときに、そし て細胞依存性免疫が低下してしまった患者において病気の治療をするときに有効 なものとなり得る。 図面の簡単な説明 図１は、抗ＣＤ３抗体で活性化されたＣＤ４０Ｌ欠損マウス由来の脾細胞では 、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γあるいはＩＬ−１０の産生能力は低下しないものの、Ｉ Ｌ−１２の産生能力が低下していることを示している。脾細胞は実施例３で記載 されるように処置され、そして培養上清をＩＬ−１２あるいはＩＬ−２の存在を 調べる際にはバイオアッセイ（bioassay）で（図１Ａ及び１Ｂ）、ＩＦＮ−γあ る いはＩＬ−１０の場合には酵素免疫測定法を用いて試験した（図１Ｃ及び１Ｄ） 。 図２は、抗ＩＬ−１０によりＴ細胞依存性ＩＬ−１２産生が高められているこ とを示している。検定は、実施例４で記載されるように行われた。抗ＩＬ−１０ 存在下において抗ＣＤ３で刺激した対照脾細胞の培養上清には、抗ＩＬ−１０非 存在下において生成されたものの、およそ４倍の濃度のＩＬ−１２が含まれてい た。さらに抗ＣＤ３及び抗ＩＬ−１０存在下において培養されたＣＤ４０Ｌ Ｋ Ｏマウス（ＣＤ４０Ｌ欠損マウス）由来脾細胞の培養上清中に、低濃度のＩＬ− １２が検出された。 図３は、ＣＤ４０Ｌが抗原に対する細胞免疫反応の誘導に不可欠であることを 確認する結果を示している。実験は実施例６に記載されるように行われた。検定 されたＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスの個体間ではＤＴＨ反応に差異があるものの（図 ３Ａ）、群としては、ＣＤ４０Ｌ欠損マウスにおいては抗原に対するＤＴＨ反応 を開始する能力が重度に低下していた（図３Ｂ）。 図４は、ＣＤ４０Ｌ欠損マウスが由来する親のマウス系統とは対称的に、Ｌ． ｍａｊｏｒ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍａｊｏｒ）の感染に引き続いて起こる足 の肉趾（ｆｏｏｔｐａｄ）の進行性の腫脹が、ＣＤ４０Ｌ欠損マウスにおいて観 察されることを示している。マウスには実施例７で記載されるように感染させ、 疾患の進行は足の肉趾の厚さを測定することにより検定した。 図５は、ＣＤ４０ＬＴ（組換えＣＤ４０Ｌの三量体）の投与により、感受性マ ウスでの感染の重篤性が低下されることを示す結果を示している。感染マウスは 実施例８で記載されるように処置され、そして処置の効果は足の肉趾の厚さを測 定することにより検定した。 図６は、感受性であるＣＤ４０リガンド欠損マウスにおいて、ニューモシステ ィス感染が、ＣＤ４０ＬＴにより調節あるいは改善されていることを示している 。マウスは実施例９で記載されるように処置され、死因を確定するために剖検さ れた。 発明の詳細な説明 本発明は、病原体に対する免疫反応を刺激するのに効果的な量のＣＤ４０結合 タンパク質を投与することを含む、病原性あるいは日和見感染性の（ｏｐｐｏｒ ｔｕｎｉｓｔｉｃ）微生物に感染した哺乳動物の治療方法に関する。病原体リー シュマニアに感染したマウスを、ＣＤ４０結合タンパク質で処置し、ＣＤ４０結 合タンパク質は病原体に対する効果的な免疫反応を刺激した。使用したマウスの モデルは、当業者により、ヒトを含む種々の哺乳動物の種において得られた結果 と関連しうる、そしてその他の感染性の微生物とも関連する結果を提供すると考 えられている。 このように、本明細書中に記載した予言的な動物モデルにおける知見により、 病原性あるいは日和見感染性の微生物に感染した哺乳動物を、ＣＤ４０結合タン パク質活性をもつ物質を含む薬剤組成物により治療するという、発明の方法を十 分に可能にするデータが提供される。病原性あるいは日和見感染性の微生物 病原性微生物は、健康な個体に病気を引き起こすことができる微生物をいい、 一方日和見感染性微生物は、通常は健康な個体には病気を引き起こさないが免疫 力の低下した宿主において病気の状態に帰着しうるものをいう。どちらのタイプ の微生物にも、ウィルス、細菌、酵母、真菌、そして原生動物が含まれる。さら にいくつかの徴候では、複数の微生物が存在し、また徴候の原因となる役割を果 たす可能性がある。 典型的な病原原生動物はリーシュマニア（Ｌｅｉｃｈｍａｎｉａ）であり、こ れは内蔵、皮膚あるいは粘膜の傷害により特徴づけられる様々な疾患を引き起こ す、マクロファージの細胞内でのみ生息できる寄生虫である。リーシュマニアの 異なる種そして単離した種で、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）及び試験管内（ｉｎ ｖ ｉｔｒｏ）のどちらにおいてもマクロファージ内での感染及び複製の能力が変化 する。臨床的には、Ｌ．ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓによる感染では一つあるいは 複数の皮膚の傷害を呈し、低い割合ではあるがより重篤な粘膜の疾患に進行する 。皮膚の傷害は自然に治癒しあるいは化学療法によく反応する可能性がある一方 で、粘膜の傷害はしばしばひどく破壊的で比較的治療に対して無反応性である。 たとえ粘膜の傷害が治癒してもしばしば、恐らく数年後に、自然に再発する。原 生生 物およびマクロファージ病原性のリーシュマニアによる感染の経過は、これら微 生物にとっては排他的な作用をもつ宿主の細胞であるマクロファージの細胞内に おける初期複製により、部分的ではあるが確定されている。リーシュマニアの抑 制あるいは増殖に寄与する因子はよくは知られていないが、ある種のサイトカイ ンは感染の過程に影響を与えうる。例えばＩＬ−１２により感受性であるＢＡＬ Ｂ／ｃマウスにおいてリーシュマニア症が治癒する（Ｈｅｉｎｚｅｌ ｅｔ ａ ｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７：１５０５，１９９３）。 病原性の住血鞭毛虫類（ｈｅｍｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ）に属する原生動物で あるＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ（Ｔ．ｃｒｕｚｉ）は、ラテンアメリ カの多くの国々で公衆衛生上の主要な問題であるシャガス病を引き起こす。この 寄生虫による感染は、急性あるいは慢性となりうるもので、そしてしばしば心臓 、食道及び結腸の組織において進行性の病状を発生させる場合を含む。寄生虫は 、マクロファージを含む様々な有核細胞に感染する。ヒト及び実験動物のどちら においても、Ｔ．ｃｒｕｚｉ感染はＴ細胞とマクロファージにより媒介される非 特異的な免疫抑制をともなう。急性及び慢性の状態の間の寄生虫の複製を調節す る機構、そして慢性の状態にある間、数は少ないが持続的な数の寄生虫を血液中 に維持する機構は、よくは解明されていない。 病原体のさらなる例には、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏ ｓｉｓやＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ並びに原虫であるＴｏｘｏ ｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉが含まれる。真菌であるＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａｃ ａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａｐａ ｒａｐｓｉｌｏｓｉｓそしてＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ もまた日和見感染性あるいは病原性微生物と考えられ得る。ある種のリケッチア 、例えばＲ．ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｒ．ｃｏｒｏｎｉｉそしてＲ．ｔｓｕｔｓ ｕｇａｍｕｓｈｉもまた、２種類あるいはそれ以上の微生物の組合せとして含ま れる。 ヒトの感染に加えて、これらの微生物の多くはその他の哺乳動物に感染し、そ してそれらの動物はヒトにとっては感染の保有宿主（レゼルボア）として働きう る。例えば飼いイヌはリーシュマニアの主要な保有宿主として働いていると考え られており、一方でネコはトキソプラズマを保有していることが知られている。 これら微生物に対する哺乳動物の免疫反応および／または炎症反応を増大させる 方法は、従ってヒト以外の種々の哺乳動物において有効であるようである。ＣＤ４０ ヒトＣＤ４０抗原（ＣＤ４０）は分子量３０,６００の２７７アミノ酸からな るペプチドである（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．８ ：１４０３，１９８９）。ヒトＣＤ４０をコードするｃＤＮＡは、バーキット（ Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫細胞株のＲａｊｉから調製されたｃＤＮＡライブラリ ーから単離された。ＣＤ４０のｃＤＮＡによりコードされる推定のタンパク質は 、推定リーダー配列、膜貫通ドメインそして膜結合型受容体タンパク質に共通の その他の特徴を多く含んでいる。ＣＤ４０はＢリンパ球、上皮細胞そしていくつ かのガン細胞株で発現されていることが知られている。 ＣＤ４０は、細胞外領域にシステインを多く含む（システインリッチの）モチ ーフが存在することで定義づけられる、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）／神経成長因子 （ＮＧＦ）受容体ファミリーの一つである（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ ｅｎｃｅ ２４８：１０１９，１９９０；Ｍａｌｌｅｔｔ ａｎｄ Ｂａｒｃｌ ａｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ １２：２２０，１９９１）。このフ ァミリーには、リンパ球抗原のＣＤ２７、ＣＤ３０（ホジキン病のリンパ腫及び リード・スターンバーグ細胞にみられる抗原）、ＴＮＦに対する２種類の受容体 、４−１ＢＢと呼ばれているマウスタンパク質、ラットＯＸ４０抗原、ＮＧＦ受 容体そしてＦａｓ抗原が含まれる。 ＣＤ４０は、当該技術分野で知られているいくつかの方法のうちのどの一つに よっても細胞の表面で検出される。例えば、ＣＤ４０に特異的な抗体は、細胞が ＣＤ４０を発現しているかどうかを測定するために、蛍光標識細胞選別技術（Ｆ ＡＣＳ）の手法において使用されうる。細胞表面の分子を検出するその他の方法 もまた、ＣＤ４０を測定する際に有効である。ＣＤ４０モノクローナル抗体 ＣＤ４０表面抗原に対して指向するモノクローナル抗体（ＣＤ４０ ｍＡｂ） は、ヒトＢ細胞で様々な生物活性を媒介することが示されてきた。例えば、ＣＤ ４０ ｍＡｂは同型接着や異型接着を引き起こし（Ｂａｒｒｅｔｔ ｅｔ ａｌ ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１７２２，１９９１；Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０；１４２５，１９８８）、そして細胞の大 きさを拡大させる（Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０ ：１４２５，１９８８；Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ ｌ．１９：１４６３，１９８９）。ＣＤ４０ ｍＡｂはまた、抗ＩｇＭ、ＣＤ２ ０ ｍＡｂあるいはフォルボールエステルを単独で（Ｃｌａｒｋ ａｎｄ Ｌｅ ｄｂｅｔｔｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：４４ ９４，１９８６；Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉ ｎｇ ＩＩＩ（白血球分類ＩＩＩ）；Ａ．Ｊ．ＭｃＭｉｃｈａｅｌ ｅｄ．Ｏｘ ｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ．Ｏｘｆｏｒｄ，ｐ．４２６；Ｐ ａｕｌｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５９０，１９８９） 、あるいはＩＬ−４と協力して（Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍ ｍｕｎｏｌ．１９：１４６３，１９８９；Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１５３５，１９８７）、活性化させたＢ細胞の増 殖を引き起こし、そしてＩＬ−４で刺激したＴ細胞を取り除いた培養からは、Ｉ ｇＥ（Ｊａｂａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１８６１， １９９０；Ｇａｓｃａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８，１ ９９１）、ＩｇＧ及びＩｇＭ（Ｇａｓｃａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ ｌ．１４７：８，１９９１）が産生される。 加えて、ＣＤ４０ ｍＡｂが、Ｂ細胞からのＩＬ−４媒介性の可溶化ＣＤ２３ ／ＦｃεＲＩＩの放出を高めること（Ｇｏｒｄｏｎ ａｎｄ Ｇｕｙ，Ｉｍｍｕ ｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ８：３３９，１９８７；Ｃａｉｒｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅ ｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：３４９，１９８８）、そしてＢ細胞でのＩＬ −６の産生を増加させること（Ｃｌａｒｋ ａｎｄ Ｓｈｕ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ ｌ．１４５：１４００，１９９０）が報告されている。最近、ＣＤｗ３２＋接着 細胞の存在下で、ＩＬ−４とＣＤ４０ ｍＡｂにより処置された初代培養Ｂ細胞 集団から、ヒトＢ細胞株が確立された（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：７０，１９９１）。さらに、胚中心の中心細胞は、Ｃ Ｄ４０および／または抗原に対する受容体を介して活性化した場合には、アポト ーシスが起こらないようにすることができる（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕ ｒｅ ３４２：９２９，１９８９）。上記の刊行物のそれぞれは、Ｂ細胞の生物 活性を刺激するＣＤ４０ ｍＡｂについて記載している。 １９９３年１０月１日に出願された米国特許出願第０８／１３０,５４１号は 、参考文献として援用される関連する開示であるが、ｈＣＤ４０ｍ２とｈＣＤ４ ０ｍ３と呼ばれている、ＣＤ４０に特異的に結合する２種類のモノクローナル抗 体を開示する。他のＣＤ４０ ｍＡｂと異なり、ｈＣＤ４０ｍ２（ＡＴＣＣ Ｈ Ｂ１１４５９）とｈＣＤ４０ｍ３はＣＤ４０に結合し、ＣＤ４０Ｌを構成要素と して発現する細胞に対するＣＤ４０の結合を阻害する。無関係なＩｇＧまたは対 照のＣＤ４０ ｍＡｂであるＧ２８．５と比較して、ｈＣＤ４０ｍ２あるいはＣ Ｄ４０ ｍＡｂであるＭ３を用いると、１２．５μｇ／ｍｌの低濃度で、９５％ 以上の結合阻害が観察された。ｈＣＤ４０ｍ２はまた、ＣＤ４０Ｌに誘導される ＴＮＦ−α産生を阻害することができた。 その他のＣＤ４０モノクローナル抗体は、通常の技術を用いて生成されうる（ 本明細書中で参考文献として援用される、米国特許第ＲＥ３２,０１１号、第４, ９０２,６１４号、第４,５４３,４３９号そして第４,４１１,９９３号を参照； 同様に本明細書中で参考文献として援用されている、”モノクローナル抗体、ハ イブリドーマ：生物解析の新次元”，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｋｅｎｎｅｔ ｔ，ＭｃＫｅａｒｎ，ａｎｄ Ｂｅｃｈｔｏｌ（ｅｄｓ．），１９８０，そして 、”抗体：研究室マニュアル”，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．） ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ ，１９８８も参照）。 簡単に説明すると、ＣＤ４０に対する免疫反応を引き起こすのに適している形 状のＣＤ４０を動物に注射する。動物は必要に応じて、ＣＤ４０に対する血清中 の抗体濃度がプラトーに達するまで、再免疫されうるものであり、その後可溶化 ＣＤ４０の最終免疫をされ、３ないし４日後に犠牲にされる。脾臓やリンパ節の ように多数のＢ細胞を含む臓器が回収され、メッシュの網に臓器を通すことによ り、あるいは細胞を包む脾臓あるいはリンパ節の膜を破断することにより、細胞 同士をバラバラに分離した細胞の懸濁液にまで分離する。 もう一つの方法は、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）免疫法を利用することによ り、モノクローナル抗体を作成するのに適した細胞を得る。簡単にいうと、動物 を犠牲にし、脾臓あるいはリンパ節の細胞を分離する。細胞同士をバラバラに分 離した細胞の懸濁液を作成し、上記のような免疫反応を引き起こすのに適した形 態のＣＤ４０を含む培養中に細胞を静置する。続いて、リンパ球を回収し以下に 記載するように融合する。 試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）免疫法を利用することにより、あるいは上記の ように免疫をした動物から得られた細胞は、ウィルスの感染（トランスフェクシ ョン）により不死化されうる。例えば、エプスタイン・バーウィルス（ＥＢＶ； Ｇｌａｓｋｙ ａｎｄ Ｒｅａｄｉｎｇ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ８（４）：３７ ７−３８９，１９８９参照）により、ヒトＢ細胞を形質転換できる。あるいは、 回収された脾臓および／またはリンパ節細胞の懸濁液は、モノクローナル抗体を 分泌する”ハイブリドーマ”を作成するために、適当なミエローマ細胞と融合さ れる。条件のあったミエローマ細胞は、抗体の構成あるいは発現が不完全である ことが好ましく、そして加えて免疫をした動物から得られた細胞と遺伝的に共通 な細胞であることが好ましい。多くのこのようなミエローマ細胞株が当該技術分 野ではよく知られており、これらはメリーランド州ロックヴィルにあるＡｍｅｒ ｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）のよ うな供給者から入手しうる（細胞株およびハイブリドーマカタログ，第６版，Ａ ＴＣＣ，１９８８参照）。ＣＤ４０リガンド 活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、高濃度のＣＤ４０に対するリガンド（ＣＤ４ ０Ｌ）を発現している。ヒトＣＤ４０Ｌは、膜結合型糖タンパク質であるが、最 近Ｓｐｒｉｇｇｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１５４３（１９９２）およ び本明細書中でも参考文献として援用される開示であるところの１９９２年１０ 月２３日に出願された米国特許出願第０７／９６９,７０３号において記載され ているように、末梢血Ｔ細胞からクローニングされた。マウスＣＤ４０Ｌのクロ ーニングは、Ａｒｍｉｔａｇｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３５７：８０，１９９２にお いて記載されている。ＣＤ４０Ｌは、その他のいかなる共刺激の非存在下でＢ細 胞の増殖を誘導し、そして種々のサイトカインの存在下では免疫グロブリンの産 生も誘導しうる。加えて、ＣＤ４０リガンドをトランスフェクトされた細胞は、 単球を抗腫瘍細胞となるように刺激しうる（Ａｌｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：６６９，１９９３）。 ＣＤ４０Ｌは、Ｃ末端側に細胞外領域をもち、膜貫通領域をもちそしてＮ末端 側に細胞内領域をもつ、ＩＩ型膜ポリペプチドである。可溶型ＣＤ４０Ｌは、Ｃ Ｄ４０Ｌの細胞外領域（配列番号１である、４７番アミノ酸から２６１番アミノ 酸）を含むか、あるいはそれの断片を含む。ＣＤ４０Ｌの生物活性は、ＣＤ４０ Ｌの細胞外領域がＣＤ４０に結合することにより媒介され、そしてＢ細胞の増殖 と抗体分泌（ＩｇＥの分泌を含む）の誘導が含まれる。 米国特許出願第０７／９６９，７０３号において、ＣＤ４０Ｌ／ＦＣ２と呼ば れる、可溶型のＣＤ４０Ｌ／Ｆｃ融合タンパク質の調製が記載されている。ＣＤ ４０Ｌ／ＦＣ２は、Ｈｏｐｐら（Ｈｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎ ｏｌｏｇｙ ６：１２０４，１９８８；Ｆｌａｇ（Ｒ）と呼ばれている）により 記載された８アミノ酸からなる親水性配列、ＩｇＧ₁ Ｆｃドメイン、連結配列 （米国特許第５,０７３,６２７号に記載）、並びにヒトＣＤ４０Ｌの細胞外領域 を含む。同様に米国特許出願第０７／９６９,７０３号において、三量体ＣＤ４ ０Ｌと呼ばれている可溶型ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質についても記載されており 、この三量体ＣＤ４０Ｌには、”ロイシンジッパー”と呼ばれている３３アミノ 酸の配列、Ｈｏｐｐら（前記）により記載された８アミノ酸からなる親水性配列 が含まれており、ヒトＣＤ４０Ｌの細胞外領域がその後につながっている。オリ ゴマー型のＣＤ４０Ｌは両方とも、その他のいかなる共刺激の非存在下でヒトＢ 細胞の増殖を誘導し、そして（適切なサイトカインと組み合わせることで）結果 としてＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡそしてＩｇＭを産生させる。 米国特許出願第０７／９６９,７０３号において記載されたＣＤ４０Ｌ／ＦＣ ２および三量体ＣＤ４０Ｌは、本発明の方法において有効であり得るし、また組 換えタンパク質を作成する既知の方法を利用して調製されうる他の形態のＣＤ４ ０Ｌでも有効であり得る。他のＣＤ４０結合タンパク質 結合タンパク質はまた、ＣＤ４０に対する抗体をコードする遺伝子の可変領域 を組み込むための組換えＤＮＡ技術を利用して、構築されうる（以下を参照。Ｊ ａｍｅｓ Ｗ．Ｌａｒｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，”混合プライマーを利用したポ リメラーゼチェーンリアクション：単一のハイブリドーマ細胞からのヒトモノク ローナル抗体可変領域遺伝子のクローニング”Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７ ：９３４−９３８，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ １９８９；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，”治療のためのヒト抗体の再構築”Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３− ３２７，１９８８；Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，”タンパク質工学による、 その抗原に対して充進された親和性および特異性をもつ抗体の生成”Ｎａｔｕｒ ｅ ３２８：７３１−７３４，１９８７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， ”ヒト抗体の再構築：抗リソザイム活性の移植”Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５ ３４−１５３６，１９８８；Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ｅｔ ａｌ．，”シュードモ ナスの外毒素と融合した２種類の抗体可変領域を含む組換え免疫毒”Ｎａｔｕｒ ｅ ３３９：３９４−３９７，１９８９）。 簡単にいうと、ＣＤ４０ ｍＡｂの抗原結合部位（あるいはＣＤ４０結合ドメ イン；可変領域）をコードするＤＮＡが単離され、増幅され、そして別のタンパ ク質、例えばヒトＩｇＧ（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，上記：Ｒｅｉｃ ｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，上記を参照）をコードするＤＮＡに連結される。あ るいは、抗原結合部位（可変領域）が、別の完全に異なるタンパク質と連結され るかあるいはその中に挿入されうる（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ｅｔ ａｌ．，上記 を参照）もので、結果として抗体の抗原結合部位と同時に全く異なるタンパク質 の機能的活性をもつ新しいタンパク質ができる。 さらに、哺乳動物のＣＤ４０と特異的に結合する、抗体のもっと小さな部分あ るいは可変領域もまた、本発明の状況において利用しうる。同様に、ＣＤ４０リ ガンドのＣＤ４０結合領域（細胞外ドメイン）は、他のＣＤ４０結合タンパク質 を調製するために利用しうる。オリゴマーを形成するタンパク質あるいはペプチ ドをコードするＤＮＡ配列は、ＣＤ４０抗体の抗原結合ドメインあるいはＣＤ４ ０リガンドの細胞外ドメインを含むＣＤ４０結合タンパク質を調製する際に、特 に有用になりうるだろう。このようなオリゴマーを形成するタンパク質のうちの あるものは、米国特許出願第０７／９６９７０３号において開示されている；別 のものとして、有用なオリゴマーを形成するタンパク質が１９９３年８月１３日 に出願された米国特許出願第０８／１０７３５３号、および１９９３年９月２９ 日に出願された米国特許出願第０８／１４５８３０号において開示されている。 一旦好ましい抗体あるいは結合タンパク質が得られれば、当業者にはよく知ら れている多くの方法によりそれらを分離あるいは精製しうる（”抗体：研究室マ ニュアル”，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８８を参照） 。望ましい技術として、ペプチドあるいはタンパク質アフィニティー（親和性） カラム、ＨＰＬＣあるいはＲＰ−ＨＰＬＣ、プロテインＡあるいはプロテインＧ カラムでの精製、あるいはこれらの技術のあらゆる組合せが含まれる。組換えＣ Ｄ４０結合タンパク質は、標準の方法に従って調製することができ、そして、例 えばＥＬＩＳＡ、ＡＢＣあるいはドットブロットアッセイを含む、当該技術分野 で既知の検定により、並びにＣＤ４０ ｍＡｂのために記載されたような生物活 性分析によって、ＣＤ４０に対する結合の特異性を検定することができる試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及び生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）モデル 本明細書中で記載されたリーシュマニア症のマウスモデルは、Ｔ_H１反応を必 要とする感染性疾患の動物モデルとして相応しいものとして認識されている。そ の他のヒトの感染性疾患の多くについてのマウスモデルが、当該技術分野では知 られている。例えば、Ｓｈｅｒ（Ｉｍｍ．Ｒｅｖ．１２７：１８３−２０４，１ ９９２）は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、トキソプラズマ症、リーシュ マニア症、トリパノソーマ症、そしてシストソーマ症を含むいくつかの別々のヒ トの疾患のマウスモデルについて検討している。Ｎａｔｈａｎ（”感染微生物、 腫瘍そして同種移植片に対する宿主の抵抗性のメカニズム”、Ｒ．Ｍ．Ｓｔｅｉ ｎｍａｎ ａｎｄ Ｒ．Ｊ．Ｎｏｒｔｈ，ｅｄｓ．，Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１６５−１８４ ，１９８６）もまた、様々なヒトの疾患の研究におけるマウスの利用についてレ ビューしており、そしてさらには、マウスモデルにおいて当初観察された結果を 確証 する、ヒトで行われた研究の結果を示している。ラットおよび／またはマウスは また、クリプトスポリジウム症（Ｍｅｕｌｂｒｏｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｗｏｒｋ ｓｈｏｐ ｏｎ Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ，Ｃｒｙｐｔｏｓｐｒｉｄｉｕｍ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ １１３Ｓ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔ ｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ感染症（Ｈｏｕｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＡＰＭＩＳ ９８ ：３０，１９９０）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ感染症（Ｆｕｒ ｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ３４：１６２９，１９９０）そしてＰｎｅｕｍｏｃ ｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎（Ｂｏｙｌａｎ ａｎｄ Ｃｕｒｒｅｎｔ，Ｊ ．Ｐｒｏｔｏｚｏｏｌ．３８：１３８Ｓ，１９９１；Ｓｏｕｌｅｚ ｅｔ ａｌ ．，Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ｏｎ Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ，Ｃｒｙｐｔｏｓｐｒ ｉｄｉｕｍ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ １２３Ｓ）の動物モデル としても利用されている。 他の種もまた、有用な動物モデルを提供する。例えば、Ｗｙａｎｄ（ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ８：３４９，１９ ９２）は、ＳＩＶに感染したアカゲザルをＡＩＤＳ治療薬やワクチンの前臨床的 評価のために利用することを検討している。サルおよびネコのモデル（Ｇａｒｄ ｎｅｒ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．１５：２６７，１９９１；Ｓｔａｈｌ− Ｈｅｎｎｉｇ ｅｔ ａｌ．，ＡＩＤＳ ４：６１１，１９９０）そしてマウス のモデル（Ｒｕｐｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：５ ６１８Ｓ，１９９０）が、抗レトロウィルス治療の評価のために提案されている 。アカゲザルはまた、シャガス病のモデルとしても利用されている（Ｂｏｎｅｃ ｉｎｉ−Ａｌｍｅｉｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｍ．Ｉｎｓｔ．Ｏｓａｌｄｏ Ｃ ｒｕｚ ８５：１６３，１９９０；Ｒｉｏ ｄｅ Ｊａｎｅｉｒｏ）。様々なヒ ト以外の霊長類が自然的にあるいは実験的に後天性のらい病に罹ることが観察さ れてきた（Ｍｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．ａｎｄ Ｈｙｇ．４４：２４，１９９１）。当業者はマクロファージ病原体により引き 起こされる疾患の、これらのそして他の多くの可能性がある動物モデルを認識し ている。マクロファージ／単球 活性化されたマクロファージは、微生物を摂取（食菌）し、反応性の高い細胞 内酸素種を生成して放出し、そして一種類あるいは複数の微生物に対する哺乳動 物の免疫反応および炎症反応を上昇させる様々なサイトカインを分泌する。マク ロファージの活性化は、これらの活性の一つあるいは複数を測定することを含む 様々な方法により、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においても確証されている。 末梢血中の単球の基本的な機能の一つは、酵素、血漿タンパク質そしてサイト カインを含む一連の生物学的な活性分子を合成そして分泌することにより、免疫 反応あるいは炎症反応を調節することである。単球由来のサイトカインには、Ｉ Ｌ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２そしてＴＮＦ−αが含 まれる。単球により生成されるこれらのサイトカインのすべては、感染に対する 宿主の反応にとって中心となる、広範囲な免疫調節の特徴を有している。 ＬＰＳやペプチドグリカンといった微生物の産物は、単球によるサイトカイン の分泌の効果的な誘導物質である。単球により合成されたサイトカインはまた、 自己調節的に単球のサイトカイン合成を調節していることが証明されている。特 に、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−Ｃ ＳＦそしてＩＬ−３はすべて、単独で働いても他の刺激物質と組み合わせて働い ても、単球のサイトカイン分泌のいくつかの状況を刺激することが示されている 。逆にＩＬ−４は、サイトカイン分泌と呼吸破裂活性を両方とも含む単球の活性 化の誘導には、効果的な拮抗薬としての効果を有する。 活性化されたマクロファージは、以下に示す様々なサイトカイン、つまりイン ターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１αおよびβ（ＩＬ−１α 、ＩＬ−１β）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−８（ＩＬ −８）、マクロファージ抑制ペプチド−１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ 抑制ペプチド−１β（ＭＩＰ−１β）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２） そして成長調節タンパク質（ＧＲＯ）、を産生しそして分泌する。このように、 これらのサイトカインの一種類あるいは複数の分泌を測定することにより、ある いはこれらのサイトカインの一種類あるいは複数のｍＲＮＡの転写濃度を解析す ることにより活性化は測定しうる。さらに、マクロファージは、（試験管内（ｉ ｎ ｖｉｔｒｏ）あるいは生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）のどちらかにおいて活性化し た後）試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）でも得られそして培養することができ、ま た、微生物の食菌効果および／あるいは様々なサイトカインの産生を調べること により、活性化を測定しうる。反応性酸素種の産生および放出を測定する方法は 、当該技術分野ではよく知られている。 ある種の刺激に反応してマクロファージにより合成されるＩＬ−１２は、細胞 性免疫に対する初期サイトカインであると考えられている（Ｓｃｏｔｔ，Ｐ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：４９６，１９９３；Ｒｏｍａｇｎｉｎｉ，Ｓ．，Ｉｍ ｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １３：３７９，１９９２；Ｌｏｃｋｓｌｅｙ，Ｒ．Ｍ ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５９７０，１９９ ３）。単球／マクロファージは、様々な病原体に反応してＩＬ−１２を放出し、 それによりナチュラルキラー細胞（ＮＫ）や特定の分化をしていないＴ細胞を刺 激してＩＦＮ−γを分泌させる（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｅｉ，Ｇ．，Ｉｍｍｕｎｏ ｌ．Ｔｏｄａｙ １４：３３５，１９９３）。ＩＬ−１２はまた、Ｔ細胞やＮＫ 細胞の細胞融解活性を高め（Ｇａｔｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ ｏｌ．６：５７，１９９４）、また多くの感染性疾患において重要な働きをして いることが示されている（Ｇａｚｚｉｎｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎ ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６１１５，１９９３；Ｈｅｉｎｚｅ ｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７：１５０５，１９９３；Ｈｓｉ ｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：５４７，１９９３；Ｔｒｉｐｐ ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：３７２ ５，１９９３；Ｓｙｐｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７：１７ ９７，１９９３）。 他の研究では、ＩＬ−１２は抗腫瘍あるいは抗転移活性を示した（Ｂｒｕｎｄ ａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：１２２３，１９９３）。さら に、ＩＬ−１２産生が、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の感染者においては減 少していることが見いだされている；すなわち、ＩＬ−１２の産生能力の減少は 、ＨＩＶ関連疾患の顕著な特徴である免疫不全において重要な役割を果たしてい ると考えられている（Ｃｈｅｈｉｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１ ７ ９：１３６１，１９９４）。ＩＬ−１２の濃度は、例えばＺｈａｎｇら（Ｊ．Ｃ ｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：１７３３，１９９４）により記載されるように、 あるいは本明細書に記載されているような酵素免疫測定法や生物学的定量により 測定できる。ＣＤ４０結合タンパク質の投与 本発明において、効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質と好ましい希釈液そし て担体を含む医薬組成物を用いる方法、および免疫反応あるいは炎症反応を調節 する方法が提供される。可溶型のサイトカイン受容体あるいはサイトカインと組 み合わせて、またはその他の免疫調節分子と組み合わせてＣＤ４０結合タンパク 質を使用することもまた企図されている。例えば、ＣＤ４０結合タンパク質は、 単球／マクロファージを活性化させることが知られている因子、例えば顆粒球− マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ），インターフェロン−γ（Ｉ ＦＮ−γ）そして米国特許第５,０７３,６２７号に記載されているようなＧＭ− ＣＳＦを含む融合タンパク質と組み合わせて使用することができる。ＣＤ４０結 合タンパク質とその他の因子は、好ましい溶液と組合せうるし、あるいはそれら を同時に、連続してあるいは別々に投与することができる。 療法的な利用としては、精製されたＣＤ４０結合タンパク質が患者に、好まし くはヒトに、指示に沿った適切な方法で治療の目的で投与される。このように、 免疫反応および炎症反応を増大させるために投与されるＣＤ４０結合タンパク質 組成物は、例えば、巨丸剤の注入、持続点滴、インプラントからの持続的な放出 あるいはその他の好ましい技術により投与されうる。一般的には、治療薬は生理 学的に許容される担体、補形薬あるいは希釈液と組み合わせた、精製されたＣＤ ４０結合タンパク質を含む、組成物の形で投与されうる。このような担体は、用 いられる投薬量および濃度において受容者に非毒性なものであるだろう。 通常は、このようなＣＤ４０結合タンパク質の組成物の調製には、ＣＤ４０結 合タンパク質と緩衝液、アスコルビン酸のような抗酸化物質、低分子量（だいた い１０残基以下）のポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、ブドウ糖やショ糖や デキストリンを含む炭水化物、ＥＤＴＡのようなキレート剤、グルタチオンやそ の他の安定化剤および補形薬とを組み合わせることを必要とする。中性の緩衝塩 類溶液あるいは同種の血清アルブミンを混合した塩類溶液が、好ましい希釈液と しては典型的である。好ましくは、生成物は、希釈液として好ましい補形薬溶液 （例えばショ糖）を用いて凍結乾燥されたものとして処方される。 好ましい投薬量は、最初は好ましい動物モデルにおける、続いて治療が行われ る種における試行により決定されうる。投与の量および頻度は、もちろん、治療 される症候の性質および重症度、期待される反応、治療される患者の体調などの 因子に左右されるだろう。好ましい投薬量は、単独であるいは他の免疫反応調節 物質と組み合わせて、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約１００μｇ／ｋｇ／日の範囲 内である。好ましくは、１００ｎｇ／ｋｇ／日から約１０００ｎｇ／ｋｇ／日の 量をおよそ１〜２０日間投与することにより、適切な生物学的効果が誘導される ことが期待されうる。もう一つの方法としては、約１μｇ／ｋｇ／日から約１０ ０μｇ／ｋｇ／日の巨丸剤の注入であれば、免疫反応および／または炎症反応を 介した効果を持続するために、およそ４日間隔で投与されうる。 本明細書中で引用したすべての参考文献についての関連した開示は、具体的に 参考文献として援用する。以下の実施例は、発明の特定の態様を説明することを 目的としており、発明の請求の範囲を限定するものではない。 実施例１ 本実施例は、ＣＤ４０リガンドが脾臓抗原提示細胞（ＡＰＣ）からのＩＬ−１ ２の産生のＴ細胞依存的な調節に関与しているということを示す。この機構にお いては、抗ＣＤ３が脾臓Ｔ細胞を活性化し、そしてそれらの細胞に脾臓ＡＰＣか らのＩＬ−１２の産生を調節させると推測された。 非分画の、放射線標識していない、特定の実験を受けたことがない（ｎａｉｖ ｅ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスから得た脾細胞を、ＣＤ３に対する抗体（３３３ｎｇ ／穴）でコートした９６穴培養皿において、１０μｇ／穴の抗ＣＤ４０Ｌ（ＭＲ １；ファーミンジェン、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから入手）の存在下あるいは 非存在下の条件で、４×１０5細胞／穴の濃度で培養した。培養上清は、２０時 間後に取り除き、そして様々なサイトカインの存在を測定した。ＩＦＮ−γ濃度 は、商業的に入手できるモノクローナル抗体の組合せ（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、 ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を利用して、ｔｗｏ ｓｉｔｅ ＥＬＩＳＡを用いて 測定し、ファーミンジェンから供給されたプロトコルに従い行われた。ＩＦＮ− γに対するＥＬＩＳＡは、ジェンザイム（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）から入手 したマウスＩＦＮ−γをスタンダードとして利用して、ＩＦＮ−γにして１００ ｐｇ／ｍｌの感度で測定した。ＩＬ−１２の検定は、Ｋｅｎｎｅｄｙら、Ｅｕｒ ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２２７１（１９９４）に記載されているように行 われた。下の表１に示したように、ＩＬ−１２がこれらの培養において産生され 、そして抗ＣＤ４０Ｌが含まれることにより、ＩＬ−１２の産生が９０％以上抑 制された。 抗ＣＤ４０Ｌはまた、ＩＦＮ−γの産生は部分的に抑制するが、しかしＩＬ− ２の産生は抑制しない。さらに抗ＣＤ４０Ｌは、刺激された脾細胞からのＩＬ− １０の産生を充進しない。このことから、抗ＣＤ４０Ｌは、ＩＬ−１０を誘導す ることによりＩＬ−１２産生を抑制したのではなかった。 実施例２ 本実施例は、抗原依存性機構におけるＩＬ−１２の産生はＣＤ４０Ｌに依存し ているということを示す。様々な数のＣＤ６として呼ばれているＴ_H１クローン 化細胞（スカシガイヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃ ｙ ａｎｉｎ；ＫＬＨ）に特異的）を、４×１０⁵個の放射線標識した遺伝子の共通 した脾細胞と、抗原（５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ）とともに、抗ＣＤ４０Ｌの存在 下あるいは非存在下で、９６穴培養皿において刺激した。培養上清は２０時間の 時点で回収され、ＩＬ−１２あるいはＩＦＮ−γについて上に記載したように測 定した。結果は以下の表２に示されている。 抗ＣＤ４０Ｌが含まれることにより、この抗原依存性機構におけるＩＬ−１２ の産生は９０％以上も抑制された。これと対称的に、ＩＦＮ−γに対する中和抗 体が含まれることにより、ＩＬ−１２の産生には抑制効果はなかった。ＩＬ−１ ２産生に対するその強力な抑制効果にも関わらず、抗ＣＤ４０Ｌはこれらと同様 な培養においてもＩＦＮ−γの産生はほんの部分的にしか抑制しなかった。ＩＬ −２はどの培養上清からも検出されなかった。 Ｃ３Ｇ９と呼ばれるＨ−２^d特異的同種反応性Ｔ_H１クローン化細胞を、放射線 標識したＣ．Ｂ１７ ＳＣＩＤの脾細胞、あるいは接着性ＢＡＬＢ／ｃの腹膜滲 出細胞（ＰＥＣ）とともに刺激したときにも、同様な結果が観察された。どちら の場合にも、抗ＣＤ４０Ｌがこれらの培養中に含まれることによりＩＬ−１２産 生は９０％以上抑制されるが、これに対して、抗ＩＦＮ−γが含まれていても抑 制効果はなかった。 実施例３ 本実施例は、機能的なＣＤ４０Ｌを欠損したマウス由来の脾細胞では、Ｔ細胞 依存性ＩＬ−１２産生が欠損しているようであるということを示す。脾細胞は実 質的に上記の実施例１において記載したように刺激された。非分画の、放射線標 識していない、特定の実験を受けたことがないＣ５７ＢＬ／６Ｘ１２９／Ｊマウ スでＣＤ４０リガンド遺伝子を欠損する同型接合型のマウス（１９９４年１月２ ０日に出願され、現在係属中である米国特許出願第０８／１８４,４２２号に記 載された、ＣＤ４０リガンドノックアウトあるいはＣＤ４０Ｌ ＫＯマウス）か ら得た脾細胞、あるいは対照のＢ６（Ｃ５７ＢＬ／６）あるいはＦ１（Ｂ６×１ ２９）から得た脾細胞を、ＣＤ３に対する抗体（３３３ｎｇ／穴）でコートした ９６穴培養皿において、４×１０⁵細胞／穴の濃度で培養した。培養上清は２０ 時間後に取り除き、そして様々なサイトカインの存在を、生物学的定量（ＩＬ− １２およびＩＬ−２、図１Ａおよび１Ｂ）あるいはＥＬＩＳＡ（ＩＦＮ−γおよ びＩＬ−１０、図１Ｃおよび１Ｄ）のどちらかで測定した。ＩＬ−２の生物学的 定量（ｂｉｏａｓｓａｙ）は、上記のＫｅｎｎｅｄｙらによって記載されたよう に、ＣＴＬＬ−２細胞を利用した。ＩＬ−１０のＥＬＩＳＡは、ＰｈａｒＭｉｎ ｇｅｎから入手したモノクローナル抗体とプロトコルを利用している、以前に記 載されているＩＦＮ−γのＥＬＩＳＡと同様である。スタンダードとして使用す る精製されたＩＬ−１０は、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ （Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）あるいはＧｅｎｚｙｍｅ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ）から入手できる。結果は図１に示し、そして結果は３つの実験の平均値で ある。 ＩＬ−１２は、抗ＣＤ３で刺激されたＢ６とＦ１のマウス由来の脾細胞からは 産生されたが、しかし抗ＣＤ３で刺激されたＣＤ４０Ｌ ＫＯの脾細胞から得ら れた培養上清中には検出できなかった（２ｐｇ／ｍｌ以下）。これと対称的に、 ＣＤ４０Ｌ ＫＯの脾細胞から産生されたＩＦＮ−γの濃度（ｎｇ／ｍｌ）は対 照群のそれより低いものの、ＣＤ４０Ｌ脾細胞は、ＩＬ−２、ＩＬ−１０あるい はＩＦＮ−γの産生能力の点からみると明らかな欠陥は存在しない（図１Ｃ）。 ＣＤ４０Ｌ ＫＯおよびＢ６対照のマウスの両方により産生されたＩＬ−１０の 量は、Ｆ１の対照マウスにより産生された量よりも明らかに低量であった（図１ Ｄ）。抗ＣＤ３が存在しない培養中では、どんなサイトカインも検出されなかっ た。 実施例４ 本実施例は、抗ＩＬ−１０および可溶性の三量体ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０ＬＴ） が、ＣＤ４０Ｌ ＫＯ由来の脾細胞からのＴ細胞依存性ＩＬ−１２産生を促進す るということを示す。ＩＬ−１２産生を抑制するＩＬ−１０もまた、上に記載し た培養中に存在しているため、二重の培養を上に記載したように調製し、抗ＣＤ ３単独の存在下あるいは抗ＣＤ３と抗ＩＬ−１０（２μｇ／ｍｌ）を同時に含む 条件下で培養した。抗ＩＬ−１０の存在下で抗ＣＤ３で刺激した対照の脾細胞か ら得た培養上清には、抗ＩＬ−１０の非存在下において生成されたものと比べて 、ＩＬ−１２の濃度がおよそ４倍含まれていた（図２）。さらに、抗ＣＤ３およ び抗ＩＬ−１０の両方とともに培養したＣＤ４０Ｌ ＫＯ由来の脾細胞から得た 培養上清中には低濃度のＩＬ−１２が検出された（図２）。 ＣＤ４０ＬＴの存在下、あるいは非存在下というこれらの条件下での、ＣＤ４ ０Ｌ ＫＯ由来の脾細胞のＩＬ−１２産生能は、以下の表３に示されている。 抗ＣＤ３、抗ＩＬ−１０およびＣＤ４０Ｌ三量体（２５μｇ／ｍｌ）により刺 激したＣＤ４０Ｌ ＫＯ由来脾細胞は、抗ＣＤ３と抗ＩＬ−１０のみにより刺激 したＣＤ４０Ｌ ＫＯ由来脾細胞と比べて、およそ５倍の濃度のＩＬ−１２を産 生した。ＣＤ４０ＬＴはまた、抗ＣＤ３は含まれるが抗ＩＬ−１０が含まれない 培養中で、低濃度のＩＬ−１２を誘導した。抗ＣＤ３により活性化されたＣＤ４ ０Ｌ ＫＯ由来の脾細胞からのＩＬ−１２産生に関するその効果とは対称的に、 ＣＤ４０ＬＴは、これらの培養条件においては一貫してＩＬ−２およびＩＦＮ− γの産生を促進しなかった。抗ＣＤ３の存在しない培養中ではサイトカインは何 も検出されなかった。 実施例５ 本実施例は、可溶型の三量体ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０ＬＴ）によりヒト単球から のＩＬ−１２産生が促進されるということを示す。二人の異なる提供者から全血 を採取し、そしてＡｌｄｅｒｓｏｎらＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：６６９（１ ９９３）において記載されているようにカウンターカレントエルトリエーション 法（向流洗浄）により単球を分離した。単球は、培養液のみあるいはＣＤ４０Ｌ Ｔ（１μｇ／ｍｌ）、ＩＦＮ−γ（１０ｎｇ／ｍｌ）あるいはＧＭ−ＣＳＦ（１ ０ｎｇ／ｍｌ）それぞれ単独あるいは組合せ（ＣＤ４０ＬＴ＋ＩＦＮ−γあるい はＣＤ４０ＬＴ＋ＧＭ−ＣＳＦ）の存在下のどちらかで、２４穴培養皿（Ｃｏｓ ｔａｒ Ｃｏｒｐ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を用いて、５×１０⁵細胞／ 穴の濃度で培養した。共刺激の効果が特異的なものか調べるため、ＣＤ４０Ｌの 中和モノクローナル抗体（１０μｇ／ｍｌ）が加えられた。２４時間の培養の後 培養上清を回収し、そしてヘテロ二量体ＩＬ−１２を検出する商業的に入手でき るＥＩＡを用いて（Ｒ＆Ｄシステムズ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、ＩＬ −１２の存在を測定した。結果は以下の表４に示されている。 ＣＤ４０ＬＴとＩＦＮ−γとを培養液中に添加することで、ＩＦＮ−γだけを 添加したときと比べて、結果としてＩＬ−１２産生が促進（４ないし５倍）され た。ＣＤ４０Ｌに特異的に結合し、かつその受容体であるＣＤ４０へのＣＤ４０ の結合を阻害するモノクローナル抗体により、その（ＣＤ４０ＬＴの）効果を抑 制することができることからも示されるように、この促進はＣＤ４０ＬＴに特異 的によるものであった。ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０ＬＴは、これらの実験にお いて、単独でもあるいは組み合わせでもＩＬ−１２の分泌を刺激せず、これは膜 結合型のＣＤ４０Ｌで刺激された単球によるその他のサイトカインの産生を共刺 激するというＧＭ−ＣＳＦあるいはＩＦＮ−γの活性とは顕著に異なるものであ った（Ａｌｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，上記）。これらの結果は、可溶型ＣＤ ４０Ｌはヒト単球によるＩＬ−１２の分泌に対して潜在的な共刺激物質であると いうことである。 実施例６ この実施例は、ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスが激しいＴ細胞アネルギー（ａｎｅｒ ｇｙ）を示すということである。本質的にＧｒａｙとＪｅｎｎｉｎｇｓ（Ａｎｎ ．Ｒｅｖ．Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ７２：１７１，１９５５）の方法に従い 、Ｖａｎ Ｂｕｒｅｎら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４０：６９４（１ ９８５）に記載されたように、ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスと対照のＣ５７ＢＬ／６ Ｘ１２９／ＪのＦ１雑種（Ｆ１）とで、精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）に対す る、遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応の試験が行われた。 マウス（ＣＤ４０Ｌ ＫＯあるいは対照）には、２００μｌのフロイントの完 全アジュバント（ＣＦＡ；Ｈ３７Ｒａ）を皮下に免疫した。三週間後、免疫した マウスおよび非免疫の対照群は、５０μｌの容量中の２μｇのＰＰＤを後跂の肉 趾（ｒｅａｒ ｆｏｏｔｐａｄ）に皮内注射を施された。同時に、等量の通常の 塩類溶液を反対側の肉趾に注射した。 ４８時間後に、肉趾の厚さがミクロメータを用いて測定された；結果は、ＰＰ Ｄを投与された肉趾と塩類溶液を投与された肉趾との間で腫脹の程度の差として 記述され、そして免疫していない動物にＰＰＤを投与して得られた腫脹の程度と 比較された。結果は図３に示されている。 結果から示されることは、試験したＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスの個体間には反応 にいくらかのばらつきがあるものの（図３Ａ）、群としてはＣＤ４０Ｌ欠損マウ スは抗原に対してＤＴＨ反応を開始する能力が極端に失われているということで ある（図３Ｂ）。これらの結果から、ＣＤ４０Ｌは抗原に対する細胞性免疫の発 生に対して決定的なものであることが確認された。 実施例７ 本実施例は、ＣＤ４０リガンドがリーシュマニアに対する細胞性免疫反応の発 生において重要であるということを示す。異なる近交系マウスにおけるＬ．ｍａ ｊｏｒの感染経過は、Ｔ_H１あるいはＴ_H２ ＣＤ４＋Ｔリンパ球の分化発生によ り決定されている。ＩＬ−４を分泌するＴ_H２細胞が増加することにより、ＢＡ ＬＢ／ｃマウスが疾患や寄生虫の播種に感受性になる。これに対してＩＦＮ−γ を産生するＴ_H１細胞が増加することにより、Ｃ５７ＢＬ／６および１２９／Ｊ を含む抵抗性のマウス系統が防御的免疫を確立することができる。 ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスあるいは対照マウス（１２９／Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６） には、後跂の肉趾に、２×１０⁵のＬ．ｍａｊｏｒを注射により感染させた。疾 患の進行は生理学的症状を観察することにより、また非感染の反対側の足と比較 しながら感染させた肉趾の厚さを測定することにより、測定された。ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスでは、プロマスティゴート（ｐｒｏｍａｓｔｉｇｏｔｅ）の接種後 ４〜６週間の間に感染を受けた後跂で大きな外傷が形成された。これに対して、 対照のマウスはＬ．ｍａｊｏｒ感染の進行に抵抗した。肉趾の大きさの平均の変 化は図４に示されている。 感染を受けた動物の脾臓由来およびリンパ節（ＬＮＣ）から取り出されたリン パ球は、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で、固定化された抗ＣＤ３あるいは可溶 型のリーシュマニア抗原により刺激され、そしてサイトカイン分泌が測定された 。ＩＦＮ−γ濃度は、前記のようにｔｗｏ ｓｉｔｅ ＥＬＩＳＡにより測定さ れた。ＩＬ−４濃度は、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎから入手した抗体とプロトコルを 用い、Ｉｍｍｕｎｅｘ（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）で作成された組換えマウスＩＬ −４をスタンダードとして用いることで、同様な方法により測定した。結果は表 ５ に示されている。 ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウス由来の細胞が、対照のマウス由来の細胞と比較して、 有意に少ないＩＦＮ−γを、また有意に多くのＩＬ−４を産生していることから 、ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスはリーシュマニアに対するＴ_H１反応を開始する能力 に欠けていることが示されることが示唆される。これらの結果から、ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスは抵抗性の背景をもつにも関わらず、Ｌ．ｍａｊｏｒに対して感受性 であるということが示される。 実施例８ 本実施例は、可溶型の三量体ＣＤ４０リガンドにより感受性マウスにおけるリ ーシュマニア症の経過が改善されるということを示すである。ＣＤ４０Ｌ ＫＯ マウス、感受性ＢＡＬＢ／ｃマウスおよび対照のＣ５７ＢＬ／６Ｘ１２９／Ｊの Ｆ１雑種（Ｆ１）に、上記のようにＬ．ｍａｊｏｒを感染させた。可溶型の三量 体組換えＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０ＬＴ）が、二週間にわたって毎日マウスに 投与され（５０μｇ／日）、感染の日を第０日とした。疾患の進行は、前記のよ うに肉趾の厚さを測定することにより、また疾患の症状を観察することによりモ ニターした。結果は図５に示されている。ＣＤ４０リガンドにより、ＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスおよび感受性ＢＡＬＢ／ｃマウスの双方においてリーシュマニア症 の生理学的重症度を減少させた。 実施例９ 本実施例は、可溶型の三量体ＣＤ４０リガンドにより、ニューモシスティスに よる感受性マウスの感染が、調節あるいは改善されているということを示す。Ｃ Ｄ４０Ｌ ＫＯマウスは、特定病原体のいない（ＳＰＦ）環境で維持された。１ つめのグループ（ｎ＝１２）には、生後２日目から、１週間に３回、１２週間に わたって、ＣＤ４０ＬＴ（５０μｇ／日）が投与された。２つめのグループ（ｎ ＝１２）には、生後１６週目から、１週間に３回、５週間にわたって、ＣＤ４０ ＬＴ（５０μｇ／日）が投与された。対照群のマウス（ｎ＝３４）には、ＣＤ４ ０ＬＴを投与しなかった。結果は図６に示されている。 対照群のマウスは、およそ５カ月齢から死亡しはじめた；さらに、それらのす べてが約１１カ月齢までに死亡した。死亡した動物については剖検し、そして死 亡原因を特定するため組織学的調査が行われた。特定された唯一の病原性／日和 見病原性微生物は、ニューモシスティスであった；すなわち、死亡したマウスの 肺は、銀染色によりニューモシスティス感染の特徴的な病変を示していた。これ と対称的に、生後直後から１２週間にわたってあるいは１６週齢から５週間にわ たってＣＤ４０ＬＴを投与されたマウスは、かなり長く生存した；すなわち、最 も早い死亡例は約１０カ月齢のときであり、マウスの大多数は生存し、また１歳 を超えても一見すると健康である。このようにＣＤ４０Ｌ ＫＯマウスはニュー モシスティス感染の動物モデルとして有用である；すなわち、この日和見感染性 病原体は「通常の」細菌叢としてマウス体内に存在しているようだが、しかし疾 患は通常の細胞媒介性の免疫システムにより抑制されている。ＣＤ４０リガンド は、感受性の個体においてニューモシスティス感染を調節するのに有用であるだ ろうし、また同様に、細胞性免疫反応が低下した患者においてその他の疾患を調 節する際に有用であるだろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ケネディー，メアリー・ケー アメリカ合衆国ワシントン州98117，シア トル，トゥエンティーサード・アベニュ ー・ノース・ウエスト 7307 (72)発明者 マリスゼウスキ，チャールズ・アール アメリカ合衆国ワシントン州98177，シア トル，ノースウエスト・ワンハンドレッド アンドトゥエンティース 1014

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．病原性あるいは日和見感染性微生物が感染した哺乳動物を治療する方法で あって、前記微生物に対して防御的なＴ_H１免疫反応を刺激するために効果的な 量のＣＤ４０結合タンパク質を、医薬的に許容される担体をもって投与すること を含む、前記方法。 ２．ＣＤ４０結合タンパク質が、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合 するモノクローナル抗体、そしてこれらの組合せからなる群から選択される、請 求項１の方法。 ３．病原性あるいは日和見感染性微生物が、トリパノソーマ、サルモネラ、ニ ューモシスティス、トキソプラズマ、リステリア、ミコバクテリアそしてリーシ ュマニアからなる群から選択される、請求項１の方法。 ４．投与されるＣＤ４０結合タンパク質の量が、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約 １００μｇ／ｋｇ／日の間である、請求項１の方法。 ５．マクロファージを活性化するのに効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質を 、医薬的に許容される担体をもって投与することを含む、マクロファージを活性 化する方法。 ６．ＣＤ４０結合タンパク質が、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合 するモノクローナル抗体、そしてこれらの組合せからなる群から選択される、請 求項５の方法。 ７．投与されるＣＤ４０結合タンパク質の量が、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約 １００μｇ／ｋｇ／日の間である、請求項６の方法。 ８．細胞性免疫反応を刺激するのに効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質を、 医薬的に許容される担体をもって投与することを含む、細胞性免疫反応の低下に 苦しめられている哺乳動物の治療方法。 ９．効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質を、医薬的に許容される担体をもっ て投与することを含む、哺乳動物において抗腫瘍反応を刺激する方法。 １０．効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質を、医薬的に許容される担体をもっ て投与することを含む、哺乳動物において防御的Ｔ_H１免疫反応を誘導する方法 。 １１．病原性あるいは日和見感染性微生物に感染した哺乳動物の治療に用いる組 成物であって、前記微生物に対する防御的Ｔ_H１免疫反応を刺激するのに効果的 な量のＣＤ４０結合タンパク質、および医薬的に許容される担体を含む、前記組 成物。 １２．ＣＤ４０結合タンパク質が、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合 するモノクローナル抗体、そしてこれらの組合せからなる群から選択される、請 求項１１の組成物。 １３．病原性あるいは日和見感染性微生物が、トリパノソーマ、サルモネラ、ニ ューモシスティス、トキソプラズマ、リステリア、ミコバクテリアそしてリーシ ュマニアからなる群から選択される、請求項１１の組成物。 １４．投与されるＣＤ４０結合タンパク質の量が、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約 １００μｇ／ｋｇ／日の間である、請求項１１の組成物。 １５．マクロファージを活性化するのに効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質、 および医薬的に許容される担体を含む、マクロファージを活性化するための組成 物。 １６．ＣＤ４０結合タンパク質が、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合 するモノクローナル抗体、そしてこれらの組合せからなる群から選択される、請 求項１５の組成物。 １７．投与されるＣＤ４０結合タンパク質の量が、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約 １００μｇ／ｋｇ／日の間である、請求項１６の組成物。 １８．細胞性免疫反応を刺激するのに効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質、お よび医薬的に許容される担体を含む、細胞性免疫反応の低下に苦しめられている 哺乳動物の治療のための組成物。 １９．ＣＤ４０結合タンパク質が、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合 するモノクローナル抗体、そしてこれらの組合せからなる群から選択される、請 求項１８の組成物。 ２０．投与されるＣＤ４０結合タンパク質の量が、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約 １００μｇ／ｋｇ／日の間である、請求項１９の組成物。 ２１．効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質、および医薬的に許容される担体を 含む、哺乳動物において抗腫瘍反応を刺激するための組成物。 ２２．ＣＤ４０結合タンパク質が、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合 するモノクローナル抗体、そしてこれらの組合せからなる群から選択される、請 求項２１の組成物。 ２３．投与されるＣＤ４０結合タンパク質の量が、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約 １００μｇ／ｋｇ／日の間である、請求項２２の組成物。 ２４．効果的な量のＣＤ４０結合タンパク質を、医薬的に許容される担体をもっ て投与する方法を含む、哺乳動物において防御的Ｔ_H１免疫反応を誘導する方法 。 ２５．ＣＤ４０結合タンパク質が、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０と特異的に結合 するモノクローナル抗体、そしてこれらの組合せからなる群から選択される、請 求項２４の組成物。 ２６．投与されるＣＤ４０結合タンパク質の量が、約１０ｎｇ／ｋｇ／日から約 １００μｇ／ｋｇ／日の間である、請求項２５の組成物。