JPH11295311A - Antibody measurement method - Google Patents
Antibody measurement methodInfo
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- JPH11295311A JPH11295311A JP10309598A JP10309598A JPH11295311A JP H11295311 A JPH11295311 A JP H11295311A JP 10309598 A JP10309598 A JP 10309598A JP 10309598 A JP10309598 A JP 10309598A JP H11295311 A JPH11295311 A JP H11295311A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、体液中に存在する
抗体を検出乃至測定する方法、殊に、臨床検体としての
尿中に存在する感染源に向けられた抗体を精度よく、ま
た簡便かつ特異的に、検出乃至測定する方法に関する。The present invention relates to a method for detecting or measuring an antibody present in a body fluid, and more particularly, to a method for detecting an antibody directed to an infectious source present in urine as a clinical specimen with high accuracy and convenience. Specifically, it relates to a method of detecting or measuring.
【０００２】[0002]
【従来の技術】体液中に存在する感染源に向けられた特
異抗体の検出は、感染症の間接的な診断に有用である。
殊に血清等の血液を検体とする抗体測定方法は、その感
度及び特異性が臨床検査法としての有用性を支持するに
十分な程度に改良されており、広く診断分野において採
用されている。BACKGROUND OF THE INVENTION Detection of specific antibodies directed to the source of infection present in body fluids is useful for indirect diagnosis of infection.
Particularly, an antibody measurement method using blood such as serum as a specimen has been improved in sensitivity and specificity to a degree sufficient to support its usefulness as a clinical test method, and is widely used in the diagnostic field.
【０００３】一方、生体試料としての尿は、血液と比較
して、その調製が非侵襲的であり簡便かつ安全なことか
ら、臨床検査において殊に望ましい検体と考えられるも
のの、尿を検体とする抗体測定系は未だ精度上の課題を
残しているのが現状である。[0003] On the other hand, urine as a biological sample is considered to be a particularly desirable specimen in clinical tests because its preparation is non-invasive, simple and safe compared to blood, but urine is used as a specimen. At present, the antibody measurement system still has a problem in accuracy.
【０００４】即ち、尿を検体とする場合には、その中に
存在する抗体量（尿中抗体）が血清中に含まれる抗体量
に較べて低濃度であるがゆえに、より高感度な（偽陰性
が減少される）測定系が必要とされ、更に、検体に由来
すると考えられる非特異反応が高いため、同時に特異性
をも向上させた（偽陽性が減少される）測定系が必要と
される。[0004] That is, when urine is used as a specimen, the amount of antibody present therein (urine antibody) is lower than the amount of antibody contained in serum, so that a higher sensitivity (pseudo-antibody) is obtained. A measurement system that reduces the number of negatives) is required, and a measurement system that also improves specificity (reduces false positives) at the same time is required because of high nonspecific reactions that may be derived from the sample. You.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、かかる事情
に鑑みて開発されたものであり、体液中に存在する抗体
を、高感度かつ高い特異性をもって検出する測定技術を
提供することを目的とするものである。しかして、本発
明は、尿を検体とする場合にも十分な精度を与える、従
来の課題を解決した優れた抗体測定技術を提供すること
を目的とするものである。SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been developed in view of such circumstances, and has as its object to provide a measurement technique for detecting an antibody present in a body fluid with high sensitivity and high specificity. It is assumed that. Thus, an object of the present invention is to provide an excellent antibody measurement technique that provides sufficient accuracy even when urine is used as a sample and solves the conventional problems.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】既存の血清抗体の測定系
をそのまま尿中抗体の測定に準用した測定法は、非特異
反応が生じることにより偽陽性の結果を与え、検出特異
性・検出精度が劣るという問題点を有する。[Means for Solving the Problems] A measurement method in which an existing serum antibody measurement system is applied mutatis mutandis to the measurement of urinary antibodies gives false-positive results due to the occurrence of non-specific reactions, and provides detection specificity and detection accuracy. Is inferior.
【０００７】本発明者等は、かかる問題点を解決して尿
を検体とする尿中抗体の高精度測定系を開発すべく、こ
の非特異反応を与える成分につき研究を進めていたとこ
ろ、この成分は、測定系の抗原に非特異的に結合する抗
体成分であることを見出した。更に、この抗体成分は、
ＩｇＧの軽鎖（Ｌ鎖）或いは同Ｆ（ａｂ）領域の抗原性
を保持したＩｇＧ断片化物及び／又は同変性物であり、
通常の血清抗体測定系において採用されている抗体検出
試薬と交叉反応し偽陽性の結果を与えていることを確認
した。The present inventors have been studying a component that gives this non-specific reaction in order to solve such a problem and to develop a high-precision urine antibody measurement system using urine as a sample. The component was found to be an antibody component that nonspecifically binds to the antigen of the measurement system. In addition, this antibody component
An IgG fragment and / or denatured IgG that retains the antigenicity of an IgG light chain (L chain) or F (ab) region,
It was confirmed that the antibody cross-reacted with the antibody detection reagent used in the usual serum antibody measurement system and gave a false positive result.
【０００８】本発明は、かかる知見に基づき完成された
ものであり、下記（１）〜（５）に記載する、体液中に
存在する抗体の測定方法である。The present invention has been completed based on such findings, and is a method for measuring an antibody present in a body fluid as described in the following (1) to (5).
【０００９】（１）サンドイッチ法に従う免疫測定法で
あって、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性を
有する抗体検出試薬を用いることを特徴とする抗体測定
方法。(1) An immunoassay according to a sandwich method, wherein an antibody detection reagent having binding specificity to an Fc region of an IgG to be measured is used.
【００１０】（２） 体液中に存在する測定対象の抗体
と当該抗体に対する抗原を固定化してなる固相化抗原と
の免疫反応工程、及び当該固相化抗原に捕捉された測定
対象抗体と前記抗体検出試薬との反応工程を含む上記
（１）記載の抗体測定方法。(2) An immunoreaction step between an antibody to be measured present in a body fluid and an immobilized antigen obtained by immobilizing an antigen against the antibody, and an antibody to be measured captured by the immobilized antigen and The method for measuring an antibody according to the above (1), comprising a step of reacting with an antibody detection reagent.
【００１１】（３）上記抗体検出試薬がＦｃ特異的抗Ｉ
ｇＧ抗体である上記（１）又は（２）記載の抗体測定方
法。(3) The antibody detection reagent is an Fc-specific anti-I
The antibody measuring method according to the above (1) or (2), which is a gG antibody.
【００１２】（４）体液が尿である上記（１）乃至
（３）のいずれかに記載の抗体測定方法。(4) The antibody measuring method according to any one of the above (1) to (3), wherein the body fluid is urine.
【００１３】（５）測定対象の抗体が感染源に向けられ
た抗体である上記（１）乃至（４）のいずれかに記載の
抗体測定方法。(5) The antibody measuring method according to any one of (1) to (4) above, wherein the antibody to be measured is an antibody directed to an infection source.
【００１４】[0014]
【発明の実施の形態】本発明の抗体測定方法は、サンド
イッチ法に従う抗体免疫測定法の改良方法であり、体液
に由来する非特異反応を減少させ、その結果偽陽性を減
少させたことに最大の特徴を有する。このような特徴を
有する本発明の抗体測定方法は、測定対象抗体ＩｇＧの
Ｆｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬を用いるこ
とにより達成される。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The antibody measurement method of the present invention is an improved method of the antibody immunoassay according to the sandwich method, which reduces non-specific reactions derived from body fluids and, as a result, reduces false positives. It has the characteristics of The antibody measuring method of the present invention having such characteristics is achieved by using an antibody detection reagent having binding specificity to the Fc region of the antibody IgG to be measured.
【００１５】本発明において「体液」とは、抗体の存在
が認められる生体（ヒト、その他の動物を含む）の体液
であれば特に限定はないが、一般の臨床検査において検
体とされる、例えば血液、尿、唾液等の体液を好ましく
例示することができる。特に、本発明は、従来から抗体
検出への利用が望まれていた尿検体における検出精度の
問題を解決するものであり、本発明の効果を鑑みれば、
体液として尿を特に好ましく例示することができる。In the present invention, the “body fluid” is not particularly limited as long as it is a body fluid of a living body (including humans and other animals) in which the presence of an antibody is recognized. Preferred examples include body fluids such as blood, urine, and saliva. In particular, the present invention is to solve the problem of detection accuracy in urine specimens that have been conventionally desired to be used for antibody detection, and in view of the effects of the present invention,
Urine can be particularly preferably exemplified as a bodily fluid.
【００１６】また、体液中に存在する測定対象の「抗
体」は、その測定乃至検出が望まれる抗体（ＩｇＧ）で
あれば特に限定はなく、例えば生体にとって異物である
各種の抗原に向けられた抗体であることができる。特に
本発明における当該抗体は、各種感染源に向けられた抗
体であることが好ましい。The "antibody" to be measured present in the body fluid is not particularly limited as long as it is an antibody (IgG) whose measurement or detection is desired. For example, it is directed to various antigens which are foreign substances to a living body. It can be an antibody. Particularly, the antibody in the present invention is preferably an antibody directed to various infection sources.
【００１７】かかる感染源としては、特に限定はなく、
ヒト、その他の動物へ感染しその結果としての抗体産生
が認められる各種の感染源を挙げることができる。具体
的には、例えば、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ａ
型，Ｂ型及びＣ型等の各種肝炎ウイルス、風疹ウイル
ス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、サイトメ
ガロウイルス等のウイルス類；ヘリコバクターピロリ菌
（H. pylori）や梅毒菌等の細菌類；及びツツガムシ等
の原虫類等を挙げることができる。The source of the infection is not particularly limited.
Examples include various infection sources that infect humans and other animals and consequently produce antibody. Specifically, for example, HIV (human immunodeficiency virus), A
Viruses such as hepatitis virus, rubella virus, influenza virus, measles virus, cytomegalovirus, etc .; types B, C, etc .; bacteria such as Helicobacter pylori (H. pylori) and syphilis; Protozoa and the like can be mentioned.
【００１８】本発明における必須の構成としての抗体検
出試薬は、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性
を有する抗体検出試薬として特定される。かかる抗体検
出試薬は、測定対象である抗体（ＩｇＧ）と反応性を有
することによりその検出に使用でき、また、測定対象抗
体ＩｇＧの軽鎖或いはＩｇＧのＦ（ａｂ）領域とは反応
性を示さないことによって特徴付けられる。The antibody detection reagent as an essential component of the present invention is specified as an antibody detection reagent having binding specificity to the Fc region of the antibody IgG to be measured. Such an antibody detection reagent can be used for its detection by having reactivity with the antibody (IgG) to be measured, and shows reactivity with the light chain of the antibody to be measured IgG or the F (ab) region of IgG. Not characterized by no.
【００１９】当該抗体検出試薬としては、より具体的に
は、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域を免疫源として調製
したＦｃ特異的抗ＩｇＧ抗体を例示することができ、こ
れは、該免疫源で免疫された任意の被免疫動物から得ら
れる抗血清又はその精製物（ポリクローナル抗体）或は
モノクローナル抗体を包含するものである。また、当該
試薬は、これらの抗体からなる試薬に限定されることな
く、例えば、該ＩｇＧのＦｃ領域に対して特異的に反応
性を有するプロテインＡやプロテインＧ等であってもよ
い。More specifically, examples of the antibody detection reagent include an Fc-specific anti-IgG antibody prepared using the Fc region of the IgG to be measured as an immunogen. Antiserum obtained from any given immunized animal or a purified product thereof (polyclonal antibody) or a monoclonal antibody. In addition, the reagent is not limited to a reagent composed of these antibodies, and may be, for example, protein A or protein G specifically reactive with the IgG Fc region.
【００２０】尚、これらの抗体検出試薬は、常法に従い
調製することができ、また市販品としても入手すること
ができる。[0020] These antibody detection reagents can be prepared according to a conventional method, and can also be obtained as commercial products.
【００２１】上記抗体検出試薬は、その検出の為に、通
常の標識剤によって、直接的に修飾されていてもよい
し、また付加的な検出手段により間接的に修飾すること
もできる。The antibody detection reagent may be directly modified for detection by a usual labeling agent, or may be indirectly modified by additional detection means.
【００２２】この標識剤としては、特に制限はされず、
従来公知のもの又は将来使用され得るいずれのものをも
用いることができるが、具体的には125Ｉ、3Ｈ、14Ｃ等
の放射性同位元素類；アルカリホスファターゼ（ＡＬ
Ｐ）、ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）等の酵素類、フルオ
レセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テトラメチ
ルローダミンイソチオシアネート（ＲＩＴＣ）等の蛍光
物質類；及び１Ｎ−（２，２，６，６−テトラメチル−
１−オキシル−４−ピペリジル）−５Ｎ−（アスパルテ
ート）−２，４−ジニトロベンゼン（ＴＯＰＡ）等が例
示され、これらを標識剤として使用する免疫測定法は、
それぞれラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッ
セイ、フルオロイムノアッセイ及びスピンイムノアッセ
イと称されている。The labeling agent is not particularly limited.
Any of those conventionally known or those which can be used in the future can be used. Specifically, radioisotopes such as 125 I, 3 H, and 14 C; alkaline phosphatase (AL
P), enzymes such as peroxidase (HRP), fluorescent substances such as fluorescein isothiocyanate (FITC), tetramethylrhodamine isothiocyanate (RITC); and 1N- (2,2,6,6-tetramethyl-
Examples thereof include 1-oxyl-4-piperidyl) -5N- (aspartate) -2,4-dinitrobenzene (TOPA) and the like.
These are called radioimmunoassay, enzyme immunoassay, fluoroimmunoassay and spin immunoassay, respectively.
【００２３】尚、これらの標識剤による標識方法や間接
的な標識化による修飾方法、並びにそれらの検出方法等
は、自体公知の方法に従って行うことができる（「単ク
ローン抗体」岩崎辰夫 他著、講談社サイエンティフィ
ク、1984；「酵素免疫測定法」第２版、石川栄治 他
著、医学書院、1982等）。The labeling method using these labeling agents, the modification method by indirect labeling, and the detection method thereof can be performed according to a method known per se ("Monoclonal Antibody", Tatsuo Iwasaki et al., Kodansha Scientific, 1984; Enzyme Immunoassay, 2nd Edition, Eiji Ishikawa et al., Medical Shoin, 1982, etc.).
【００２４】本発明の測定方法は、上記特定の抗体検出
試薬の使用を必須とし、その限りにおいて、他の基本的
操作等は特に制限されることなく、通常のサンドイッチ
法に従う免疫測定法における方法及び慣用の方法等を広
く採用することができる。The measurement method of the present invention requires the use of the above-mentioned specific antibody detection reagent, and other basic operations are not particularly limited, and the method in an immunoassay method according to a usual sandwich method is not limited. And commonly used methods can be widely adopted.
【００２５】基本的には、検出を所望する測定対象抗体
と免疫反応（抗原抗体反応）し得る抗原を用いて、該抗
原を体液中に存在する測定対象抗体と免疫反応させ、そ
の結果、当該抗原に結合した測定対象抗体（抗原抗体結
合物）を上記抗体検出試薬にて検出することにより実施
される。Basically, using an antigen capable of immunoreaction (antigen-antibody reaction) with an antibody to be measured which is desired to be detected, the antigen is immunoreacted with an antibody to be measured present in a body fluid, and as a result, The detection is performed by detecting the antibody to be measured (antigen-antibody conjugate) bound to the antigen with the above antibody detection reagent.
【００２６】ここで用いられる抗原としては、検出すべ
き測定対象抗体と免疫反応（抗原抗体反応）する抗原で
あれば特に制限はなく、例えば既存の血清抗体測定系に
おいて採用されている抗原等をいずれも良好に採用する
ことができる。これらは、ウイルス等の感染源（乃至異
物）そのものであってもよいが、少なくとも当該感染源
に固有の抗原決定基を有するものであればよい。例え
ば、感染源を加温処理や放射線照射等により不活性化し
たもの、感染源を界面活性剤等で抽出処理して得られる
抗原、また、化学合成や遺伝子工学的手法により人工的
に調製した抗原等を例示することができる。The antigen used here is not particularly limited as long as it is an antigen that reacts immunologically (antigen-antibody reaction) with the antibody to be detected, and examples thereof include antigens used in existing serum antibody measurement systems. Either can be favorably adopted. These may be the source of infection (or foreign substance) such as a virus, but may be at least those having an antigenic determinant unique to the source of infection. For example, the infectious source was inactivated by heating or irradiation, the antigen obtained by extracting the infectious source with a surfactant, etc., or artificially prepared by chemical synthesis or genetic engineering techniques. Examples include antigens and the like.
【００２７】尚、採用しようとする抗原が本発明の測定
法において良好に使用し得るかは、例えば、測定対象抗
体との反応性を常法に従って試験することにより容易に
確認することができる。Whether or not the antigen to be employed can be favorably used in the assay of the present invention can be easily confirmed, for example, by testing the reactivity with the antibody to be assayed according to a conventional method.
【００２８】本発明において当該抗原又は抗体検出試薬
は、所望により、常法に従って各種の任意の固相に固定
化して用いることができる。当該固相としては、この技
術分野において慣用の各種の固相が利用でき、例えばガ
ラス、セルロース粉末、セファデックス、セファロー
ス、ポリスチレン、濾紙、カルボキシメチルセルロー
ス、イオン交換樹脂、デキストラン、プラスチックフィ
ルム、プラスチックチューブ、ナイロン、ガラスビー
ズ、絹、ポリアミン−メチルビニルエーテル−マレイン
酸共重合体、アミノ酸共重合体、エチレン−マレイン酸
共重合体等の種々の素材からなるスティック、ビーズ、
プレート（マイクロプレートを含む）、試験管等を広く
例示できる。In the present invention, the antigen or antibody detection reagent can be used by immobilizing it on various solid phases according to a conventional method, if desired. As the solid phase, various solid phases commonly used in this technical field can be used, for example, glass, cellulose powder, Sephadex, Sepharose, polystyrene, filter paper, carboxymethyl cellulose, ion exchange resin, dextran, plastic film, plastic tube, Nylon, glass beads, silk, sticks, beads made of various materials such as polyamine-methyl vinyl ether-maleic acid copolymer, amino acid copolymer, ethylene-maleic acid copolymer,
Plates (including microplates), test tubes, and the like can be widely exemplified.
【００２９】固定化方法についても特に制限はなく、物
理的結合及び化学的結合のいずれをも使用できる。例え
ば、共有結合法としてジアゾ法、ペプチド法（酸アミド
誘導体法、カルボキシルクロライド樹脂法、カルボジイ
ミド樹脂法、無水マレイン酸誘導体法、イソシアナート
誘導体法、臭化シアン活性化多糖体法、セルロースカル
ボナート誘導体法、縮合試薬を使用する方法等）、アル
キル化法、架橋試薬による担体結合法（例えば架橋試薬
としてグルタールアルデヒド、ヘキサメチレンイソシア
ナート等を用いるもの）、Ｕｇｉ反応による担体結合法
等の化学的反応：或いはイオン交換樹脂のような担体を
用いるイオン結合法：ガラスビーズ等の多孔性ガラスを
担体として用いる物理的吸着法等が例示できる。The method of immobilization is not particularly limited, and any of a physical bond and a chemical bond can be used. For example, diazo method, peptide method (acid amide derivative method, carboxyl chloride resin method, carbodiimide resin method, maleic anhydride derivative method, isocyanate derivative method, cyanogen bromide activated polysaccharide method, cellulose carbonate derivative as a covalent bond method , A method using a condensing reagent), an alkylation method, a carrier binding method using a cross-linking reagent (for example, using glutaraldehyde, hexamethylene isocyanate, etc. as a cross-linking reagent), and a carrier binding method using a Ugi reaction. Reaction: or an ion binding method using a carrier such as an ion exchange resin: a physical adsorption method using a porous glass such as glass beads as a carrier can be exemplified.
【００３０】上記抗原と測定対象抗体との免疫反応（抗
原抗体反応）は、特に制限されず、通常の免疫反応にお
ける条件が採用される。一般には４５℃以下、好ましく
は約４〜４０℃、より好ましくは２５〜４０℃程度の温
度条件下で、抗原と測定対象抗体とを共存させ、約０．
５〜４０時間、好ましくは１〜２０時間程度、放置もし
くはインキュベーションする方法を挙げることができ
る。The immune reaction (antigen-antibody reaction) between the above-mentioned antigen and the antibody to be measured is not particularly limited, and conditions in a normal immune reaction are employed. In general, the antigen and the antibody to be measured coexist under a temperature condition of 45 ° C. or lower, preferably about 4 to 40 ° C., and more preferably about 25 to 40 ° C.
A method of leaving or incubating for 5 to 40 hours, preferably about 1 to 20 hours can be mentioned.
【００３１】なお、かかる抗原抗体反応において、大腸
菌に由来する成分を共存させておいてもよい。かかる大
腸菌由来成分は、大腸菌に由来するものであれば特に制
限されず、例えば大腸菌抽出蛋白やリポポリサッカライ
ド等であってもよい。In the antigen-antibody reaction, a component derived from Escherichia coli may be allowed to coexist. Such a component derived from Escherichia coli is not particularly limited as long as it is derived from Escherichia coli, and may be, for example, an Escherichia coli extracted protein or lipopolysaccharide.
【００３２】次いで、得られる抗原抗体結合物を洗浄し
て、該抗原抗体結合物（測定対象抗体）を抗体検出試薬
と反応させる工程に供せられるが、該反応も上記免疫反
応（抗原抗体反応）条件に準じて実施することができ
る。Next, the obtained antigen-antibody conjugate is washed and subjected to a step of reacting the antigen-antibody conjugate (antibody to be measured) with an antibody detection reagent. ) It can be carried out according to the conditions.
【００３３】これらの反応の条件等（溶媒、ｐＨ、洗浄
条件等）は、通常の免疫測定法（サンドイッチ法）で用
いられるものと同じか若しくはそれに準じた条件等を採
用して行うことができる。例えば、溶媒は、当該反応に
悪影響を与えないものであれば特に制限はなく、具体的
にはクエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス塩緩衝液、
酢酸緩衝液等のｐＨが約５〜９程度の緩衝液を例示する
ことができる。The conditions (solvent, pH, washing conditions, etc.) of these reactions can be the same as those used in ordinary immunoassays (sandwich method), or conditions similar thereto can be adopted. . For example, the solvent is not particularly limited as long as it does not adversely affect the reaction, specifically, citrate buffer, phosphate buffer, Tris salt buffer,
A buffer having a pH of about 5 to 9 such as an acetate buffer can be exemplified.
【００３４】このように、体液検体中に存在する検出を
所望する測定対象抗体と測定系の抗原との免疫複合体
（抗原抗体結合物）を生成させ、当該免疫複合体として
の測定対象抗体を該抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性
を有する本発明にかかる抗体検出試薬を用いて検出する
ことにより本発明を実施することができる。As described above, an immunoconjugate (antigen-antibody conjugate) of the antibody to be detected present in the body fluid sample and the antigen of the measurement system is generated, and the antibody to be measured as the immune complex is produced. The present invention can be carried out by performing detection using the antibody detection reagent according to the present invention having binding specificity to the Fc region of the antibody IgG.
【００３５】尚、体液中における測定対象抗体の存在有
無、或いはその含有量は、常法に従って、抗体検出試薬
の標識に用いた標識剤（或はその間接的な標識）の種類
に応じた標識活性の測定により、或いはその測定値より
換算した抗体力価として評価される。The presence or absence or the content of the antibody to be measured in the body fluid is determined according to the type of the labeling agent (or its indirect label) used for labeling the antibody detection reagent according to a conventional method. It is evaluated by measuring the activity or as an antibody titer converted from the measured value.
【００３６】上記本発明の測定方法を実施するに際して
は、この測定の為の試薬キットを利用することによっ
て、簡便に実施することができる。When the above-described measurement method of the present invention is carried out, it can be easily carried out by utilizing a reagent kit for this measurement.
【００３７】本発明は、前記する抗体測定方法を実施す
る為の試薬キットをも提供するものである。The present invention also provides a reagent kit for performing the above-described antibody measurement method.
【００３８】該試薬キットは、前記の測定対象抗体Ｉｇ
ＧのＦｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬、好ま
しくはＦｃ特異的抗ＩｇＧ抗体を有効成分として含有す
ることを特徴とする。当該キットには、更に測定対象抗
体に応じた各種の抗原試薬を含有することができ、ま
た、これら含有試薬は、測定系に応じて任意に固相化さ
れていても、また標識化されていてもよい。The reagent kit contains the antibody Ig to be measured.
An antibody detection reagent having binding specificity to the Fc region of G, preferably an Fc-specific anti-IgG antibody is contained as an active ingredient. The kit may further contain various antigen reagents corresponding to the antibody to be measured, and these reagents may be arbitrarily immobilized or labeled according to the measurement system. You may.
【００３９】また、当該試薬キットには、測定の実施の
便益のために、更に適当な反応液、希釈液、洗浄液、標
識活性測定試薬等が含まれていてもよい。The reagent kit may further contain an appropriate reaction solution, diluting solution, washing solution, reagent for measuring the labeling activity, etc. for the convenience of performing the measurement.
【００４０】[0040]
【実施例】以下、本発明の内容を以下の実施例を用いて
具体的に説明する。ただし、本発明はこれらに何ら限定
されるものではない。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention will be specifically described below with reference to the following embodiments. However, the present invention is not limited to these.
【００４１】実施例１ 公知測定法［CalypteTM HIV-1 Urine EIA：Arch. Patho
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995)； Clinical lnfec
tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)］による尿中Ｈ
ＩＶ抗体の測定において偽陽性の結果を与えた尿検体を
用いて、該測定系で非特異反応を与える成分が何である
かを突きとめるべく検討を行った。Example 1 Known method [Calypte ™ HIV-1 Urine EIA: Arch. Patho
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995); Clinical lnfec.
Tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)]
Using a urine sample that gave a false positive result in the measurement of the IV antibody, a study was conducted to determine what components gave a nonspecific reaction in the measurement system.
【００４２】（１）上記該当する尿検体を１Ｍリン酸緩
衝液（pH 7.7）にてｐＨ７．４に調整後、５．０、０．
８及び０．２μｍのカットフィルターで順次濾過し、そ
の２０ｍｌを限外濾過（10 kdカットのメンブラン）に
て２ｍｌにまで濃縮した。濃縮した尿検体をゲル濾過
（Sephacryl S-300, Pharmacia）に付し、得られた各分
画について、ＨＩＶ抗原への反応性を試験した。(1) The above urine sample was adjusted to pH 7.4 with 1M phosphate buffer (pH 7.7), and then adjusted to 5.0, 0.
Filtration was carried out sequentially with an 8 and 0.2 μm cut filter, and 20 ml of the filtrate was concentrated to 2 ml by ultrafiltration (10 kd cut membrane). The concentrated urine sample was subjected to gel filtration (Sephacryl S-300, Pharmacia), and each of the obtained fractions was tested for reactivity with HIV antigen.
【００４３】尚、ＨＩＶ抗原への反応性は、各分画をＨ
ＩＶ抗原を固定化したＨＩＶ抗原固相化プレートと反応
させた後、結合成分（抗原抗体結合物）をＡＬＰ標識ヤ
ギ抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体（Jackson ImmunoRese
arch Labs.社製）にて検出することにより確認した。The reactivity with the HIV antigen was determined by dividing each fraction into H
After reacting with the HIV antigen-immobilized plate on which the IV antigen was immobilized, the binding component (antigen-antibody conjugate) was converted to an ALP-labeled goat anti-human (IgG + IgM) antibody (Jackson ImmunoRese).
arch Labs.).
【００４４】この試験の結果、フラクション４６〜４８
をピークとする非特異反応成分の存在が確認された。As a result of this test, fractions 46 to 48
The presence of a non-specific reaction component having a peak of was confirmed.
【００４５】同様に、この抗原固相化プレートに結合し
た成分を、ＡＬＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）
抗体又はＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）
抗体（いずれもJackson ImmunoResearch Labs.社製）を
用いて、検出した。Similarly, the component bound to the antigen-immobilized plate is converted to an ALP-labeled goat anti-human IgG (Fc-specific).
Antibody or HRP-labeled goat anti-human IgG (Fab specific)
Detection was performed using an antibody (both manufactured by Jackson ImmunoResearch Labs.).
【００４６】結果を図１に示す。FIG. 1 shows the results.
【００４７】図１において、縦軸は吸光度（O.D.）を、
横軸はゲル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実
線は２８０ｎｍにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上
記抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体による検出結果を、白
三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体による検
出結果を、黒三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異
的）抗体による検出結果をそれぞれ示す。In FIG. 1, the vertical axis represents absorbance (OD),
The horizontal axis indicates the fraction (fraction number) of gel filtration. The solid line is the absorbance of the protein at 280 nm, the black circle is the result of detection with the anti-human (IgG + IgM) antibody, the white triangle is the result of detection with the anti-human IgG (Fc-specific) antibody, and the black triangle is the anti-human The results of detection using an IgG (Fab-specific) antibody are shown.
【００４８】図１より、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）
抗体での検出においては、抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗
体における場合と同様の反応様式（非特異反応成分との
反応性）を示し、一方、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗
体を用いた場合には反応性を示さないことが明らかとな
った。このことより、非特異反応を与える成分は、抗ヒ
トＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体との反応性を保持したヒ
トＩｇＧの断片化物又は同変性物であると考えられた。As shown in FIG. 1, anti-human IgG (Fab specific)
In the detection with the antibody, the same reaction mode (reactivity with the non-specific reaction component) as in the case of the anti-human (IgG + IgM) antibody is shown. On the other hand, when the anti-human IgG (Fc-specific) antibody is used, It turned out that it did not show reactivity. From this, it was considered that the component giving the non-specific reaction was a fragmented or denatured human IgG retaining the reactivity with an anti-human IgG (Fab-specific) antibody.
【００４９】（２）上記の各分画をヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｈ＋Ｌ）抗体（Jackson ImmunoResearch Labs.社製）
と反応させ、結合成分をＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）抗体、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ａｂ特異的）抗体又はＨＲＰ標識ラット抗ヒトＩｇＭ抗
体（いずれもJackson ImmunoResearch Labs.社製）と反
応させることにより、各グロブリン量を測定した。(2) Goat anti-human IgG
(H + L) antibody (Jackson ImmunoResearch Labs.)
With HRP-labeled goat anti-human IgG
(Fc-specific) antibody, HRP-labeled goat anti-human IgG (F
The amount of each globulin was measured by reacting with an ab-specific) antibody or an HRP-labeled rat anti-human IgM antibody (both manufactured by Jackson ImmunoResearch Labs.).
【００５０】その結果、ＩｇＧ（Ｆｃ）濃度は、フラク
ション３８をピークとしてフラクション５０付近で検出
感度以下となったのに対し、ＩｇＧ（Ｆａｂ）濃度で
は、フラクション４６まではＩｇＧ（Ｆｃ）と同等の濃
度を示し、その以降は穏やかな減少傾向を示すに留まっ
た。特にフラクション４７以降はその差が顕著であっ
た。 このことは、フラクション４６までは、両者の測
定値は完全な形のＩｇＧに対する濃度を反映しているの
に対して、フラクション４７以降のＩｇＧ（Ｆａｂ）濃
度は、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体との反応性を
保持したＩｇＧ断片化物若しくは同変性物の濃度を反映
しているものと考えられる。As a result, the IgG (Fc) concentration became lower than the detection sensitivity near the fraction 50 with the peak of the fraction 38, whereas the IgG (Fab) concentration was the same as that of the IgG (Fc) up to the fraction 46. Concentration, and thereafter showed only a mild decreasing trend. In particular, the difference was remarkable after fraction 47. This implies that up to fraction 46, both measurements reflect the concentration for intact IgG, whereas the IgG (Fab) concentration for fraction 47 and onward shows that anti-human IgG (Fab specific) This is considered to reflect the concentration of the fragmented IgG or the denatured IgG retaining the reactivity with the antibody.
【００５１】なお、ＩｇＭは、測定を行ったいずれの分
画においても検出されなかった。[0051] IgM was not detected in any of the fractions measured.
【００５２】（３）上記により、完全型ＩｇＧが豊富で
あると思われるフラクション３８及び非特異反応成分が
豊富であると思われるフラクション４７について、ＨＲ
Ｐ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体又はＨＲＰ
標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体を用いたウ
エスタンブロット分析を行った。(3) As described above, the fraction 38 considered to be rich in complete IgG and the fraction 47 considered to be rich in nonspecific reaction components were subjected to HR
P-labeled goat anti-human IgG (Fc-specific) antibody or HRP
Western blot analysis using a labeled goat anti-human IgG (Fab specific) antibody was performed.
【００５３】その結果、フラクション３８においては、
両標識抗体による分析結果はともにヒトＩｇＧ（対照）
の場合と酷似の反応様式を示した。フラクション４７
は、ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体での分析では、ヒト
ＩｇＧのメインスポットと４３ＫＤにわずかに反応する
スポットが認められ、この４３ＫＤスポットはその分子
量より断片化された重鎖（Ｈ鎖）であると思われた。ま
た、フラクション４７のヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗
体での分析では、ヒトＩｇＧでは検出されないスポット
が２０及び４０ＫＤ付近に認められ、非特異反応を与え
る成分がこれらのスポットに該当すると考えられた。As a result, in fraction 38,
The results of analysis using both labeled antibodies were both human IgG (control).
The reaction pattern was very similar to that of the above. Fraction 47
In the analysis using a human IgG (Fc-specific) antibody, a main spot of human IgG and a spot slightly reacting with 43 KD were observed, and this 43 KD spot was a heavy chain (H chain) fragmented from its molecular weight. I thought there was. In the analysis of the fraction 47 with a human IgG (Fab-specific) antibody, spots that were not detected by human IgG were found at around 20 and 40 KD, and it was considered that components giving a non-specific reaction corresponded to these spots.
【００５４】以上より、尿中ＨＩＶ抗体の測定時に非特
異的反応を与える成分は、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異
的）抗体との反応性を保持したＩｇＧの断片化物若しく
は同変性物であると考えられ、また、その分子量から、
ＩｇＧ軽鎖（Ｌ鎖）及びその２量体などのＬ鎖に関与し
ている物質であると考えられた。From the above, it is considered that the component that gives a non-specific reaction when measuring urinary HIV antibodies is a fragmented or denatured IgG of IgG that retains reactivity with an anti-human IgG (Fab-specific) antibody. And from its molecular weight,
It was considered to be a substance involved in the L chain such as an IgG light chain (L chain) and a dimer thereof.
【００５５】従って、このような非特異反応を与える成
分との反応性を持たない、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）
抗体を抗体検出試薬として使用すれば、抗体検出におい
て非特異反応を防ぐことができ、しかして、偽陽性が減
少することにより特異性の高い高精度の抗体検出方法が
提供できることが明らかになった。Therefore, an anti-human IgG (Fc-specific) which has no reactivity with a component giving such a non-specific reaction
It was revealed that the use of an antibody as an antibody detection reagent can prevent non-specific reactions in antibody detection, and can provide a highly specific and highly accurate antibody detection method by reducing false positives. .
【００５６】実施例２ 尿中ＨＩＶ抗体の測定 ＨＩＶ抗原プレート（CalypteTM HIV-1 Urine EIA, Cal
ypte Biomedical Corp.）の各ウエルに、第１緩衝液（C
alypteTM HIV-1 Urine EIAのサンプル緩衝液）を２５μ
ｌ及び尿サンプルを２００μｌ加え、１０秒間撹拌後、
３７℃で１時間放置した。該プレートを６回洗浄後（洗
浄液：D-PBS, 0.05% Tween 20）、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒ
トｌｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体（Peroxidase-conjugated
Affini Pure Goat anti-Human lgG、 Fc Fragment Speci
fic, Jackson ImmunoResearch Labs.社製）を第２緩衝
液（50mM Tris, 0.14M NaCl, 0.5% BSA, 5% Goat Seru
m, 0.05% Tween 20, 0.1% XL-II (pH 7.3)）で１１,０
００倍希釈したものを１００μ１加え、同様に３７℃で
の１時間放置とプレート洗浄（６回）を行った。Example 2 Measurement of Urine HIV Antibody HIV Antigen Plate (Calypte ™ HIV-1 Urine EIA, Cal
ypte Biomedical Corp.) with the first buffer (C
alypte ™ HIV-1 Urine EIA sample buffer)
l and urine sample 200 μl, and after stirring for 10 seconds,
It was left at 37 ° C. for 1 hour. After washing the plate 6 times (washing solution: D-PBS, 0.05% Tween 20), HRP-labeled goat anti-human IgG (Fc-specific) antibody (Peroxidase-conjugated)
Affini Pure Goat anti-Human lgG, Fc Fragment Speci
fic, Jackson ImmunoResearch Labs.) in a second buffer (50 mM Tris, 0.14 M NaCl, 0.5% BSA, 5% Goat Seru).
m, 0.05% Tween 20, 0.1% XL-II (pH 7.3))
100 μl of the solution diluted 100-fold was added, and the plate was similarly left at 37 ° C. for 1 hour and washed (six times).
【００５７】次いで、発色液（50% TMB, 50mM Citrate-
Na2HPO4, 0.0075% H2O2）を１００μ１加え、室温で１
０分間反応後、反応停止液（50% TMB停止液, 50% 1N-H2
SO4）１００μｌを加えて吸光度（OD=450nm）を測定し
た。Next, a coloring solution (50% TMB, 50 mM Citrate-
100 μl of Na 2 HPO 4 , 0.0075% H 2 O 2 ).
After reacting for 0 minutes, stop reaction solution (50% TMB stop solution, 50% 1N-H 2
SO 4 ) was added and the absorbance (OD = 450 nm) was measured.
【００５８】尚、比較対照実験として、ＡＬＰ標識ヤギ
抗ヒトイムノグロブリン抗体を第２抗体として使用する
公知測定法［CalypteTM HIV-1 Urine EIA：Arch. Patho
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995)； Clinical lnfec
tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)］を用いて同一
の検体を測定した（対照方法）。また、該測定キットの
陰性コントロールと陽性コントロールを上記本発明の測
定方法に従い測定した結果、同キットにおける測定結果
と同等の吸光度が得られたことから、同キットのカット
オフ値の算出法に従い、本発明方法におけるカットオフ
値を、該陰性コントロールの平均吸光度に０．１８０を
加えた値とした。As a comparative control experiment, a known assay method using an ALP-labeled goat anti-human immunoglobulin antibody as the second antibody [Calypte ™ HIV-1 Urine EIA: Arch.
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995); Clinical lnfec.
tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)], and the same specimen was measured (control method). Further, as a result of measuring the negative control and the positive control of the measurement kit according to the measurement method of the present invention, an absorbance equivalent to the measurement result of the kit was obtained, according to the method for calculating the cutoff value of the kit, The cutoff value in the method of the present invention was a value obtained by adding 0.180 to the average absorbance of the negative control.
【００５９】血清ＨＩＶ抗体陽性者（２例）及び同抗体
陰性者（９８例）から得られた１００検体（尿）につい
て測定した結果を表１に示す。Table 1 shows the results of measurements on 100 specimens (urine) obtained from a serum HIV antibody positive (2 cases) and a serum HIV negative (98 cases).
【００６０】[0060]
【表１】 [Table 1]
【００６１】表１より、本発明方法及び対照方法の感度
はともに１００％（２／２）であったが、特異性は対照
方法では７１．４％（７０／９８）であり、本発明方法
では９８％（９６／９８）であった。From Table 1, the sensitivity of the method of the present invention and the control method were both 100% (2/2), but the specificity was 71.4% (70/98) in the control method. Was 98% (96/98).
【００６２】このことから本発明方法による抗体測定方
法は、対照方法に比較して偽陽性が著しく減少し特異性
において極めて優れていることが判る。From this, it can be seen that the method for measuring antibodies according to the method of the present invention significantly reduces false positives and is extremely excellent in specificity as compared with the control method.
【００６３】実施例３ 尿中ピロリ（H.pylori）抗体の
測定 （１）抗原プレートの調製 常法［J. Clin. Microbiol., 29: 2587-2589 (1991)］
に従って調製したピロリ菌（臨床分離培養株）の１００
ｍｇ／ｍｌ冷ダルベッコ−ＰＢＳ溶液に、スターラーで
撹拌しながら更に冷０．２％トリトン−Ｘ溶液を等量加
え、５分間撹拌後遠心した（3,000 rpm, 20 min.）。上
澄みを新しいチューブに移して抽出液とした（1〜1.5mg
/ml protein）。Example 3 Measurement of H. pylori antibody in urine (1) Preparation of antigen plate Conventional method [J. Clin. Microbiol., 29: 2587-2589 (1991)]
Of H. pylori (clinical isolation culture) prepared according to
An equal volume of a cold 0.2% Triton-X solution was further added to the mg / ml cold Dulbecco-PBS solution while stirring with a stirrer, followed by centrifugation after stirring for 5 minutes (3,000 rpm, 20 min.). The supernatant was transferred to a new tube to obtain an extract (1 to 1.5 mg
/ ml protein).
【００６４】この抽出液を、Ｄ−ＰＢＳで希釈し（2.5
μg/ml）、９６ウエルプレートの各ウエルに１００μｌ
ずつ加え、２５℃で一夜インキュべートした。該ウエル
を洗浄後、ブロッキング液（D-PBS, 0.5% casein, 5% s
orbitol, 0.05% NaN3 (pH 7.4)）３００μｌを加え、２
５℃で一夜インキュベートした。次いでブロッキング液
を除去し、２５℃で一夜乾燥させ、これをアルミ袋に乾
燥剤とともに入れ密封して、使用時まで４℃で保存し
た。This extract was diluted with D-PBS (2.5
μg / ml), 100 μl per well of a 96-well plate
And incubated at 25 ° C. overnight. After washing the wells, a blocking solution (D-PBS, 0.5% casein, 5% s
orbitol, 0.05% NaN 3 (pH 7.4))
Incubate overnight at 5 ° C. Next, the blocking solution was removed, dried at 25 ° C. overnight, put in an aluminum bag together with a desiccant, sealed, and stored at 4 ° C. until use.
【００６５】（２）測定 上記で得られた固相化抗原（プレート）を用い、実施例
２と同様にして尿検体中のピロリ抗体を測定した。(2) Measurement Using the solid-phased antigen (plate) obtained above, the H. pylori antibody in the urine sample was measured in the same manner as in Example 2.
【００６６】即ち、各ウエルに、第１緩衝液（200mM Tr
is, 0.14M NaCl, 2% casein, 0.5%BSA, 0.05% Tween 2
0, 0.1% NaN3, 20μg/ml E. Coli抽出物 (pH 7.3)）２
５μｌ及び尿サンプル１００μｌ加え、１０秒間撹拌
後、３７℃で１時間放置した。該プレートを６回洗浄
後、実施例２と同様に、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）抗体の第２緩衝液溶液希釈物１００μｌ
を加えて３７℃で１時間放置することにより抗体を検出
した。That is, the first buffer (200 mM Tr) was added to each well.
is, 0.14M NaCl, 2% casein, 0.5% BSA, 0.05% Tween 2
0, 0.1% NaN 3 , 20 μg / ml E. Coli extract (pH 7.3) 2
5 μl and 100 μl of a urine sample were added, stirred for 10 seconds, and left at 37 ° C. for 1 hour. After the plate was washed six times, HRP-labeled goat anti-human IgG was treated in the same manner as in Example 2.
100 μl of second buffer solution dilution of (Fc-specific) antibody
Was added and left at 37 ° C. for 1 hour to detect the antibody.
【００６７】得られた結果を図２及び表２に示す。FIG. 2 and Table 2 show the obtained results.
【００６８】[0068]
【表２】 [Table 2]
【００６９】図２中、縦軸は吸光度（OD=450-650nm）
を、横軸は13Ｃ−ＵＢＴ試験［J.Gastroenterol.,33: 6
-13 (1998)］にて確認したピロリ感染陽性群（＋；n=5
6）及び同陰性群（−；n=44）を示す。In FIG. 2, the vertical axis represents absorbance (OD = 450-650 nm).
And the horizontal axis represents the 13 C-UBT test [J. Gastroenterol., 33: 6
-13 (1998)] positive group (+; n = 5)
6) and the same negative group (-; n = 44).
【００７０】表２において、感度は、13Ｃ−ＵＢＴ試験
における陽性者を陽性と検出した割合を、特異性は、13
Ｃ−ＵＢＴ試験における陰性者を陰性と検出した割合
を、正確性は、13Ｃ−ＵＢＴ試験における陽性者及び同
陰性者をそれぞれ陽性及び陰性と検出した割合をそれぞ
れ示し、カットオフ値として、平均（Ｍ）＋３ＳＤ又は
Ｍ＋５ＳＤを採用した場合について表した。また、対照
として、血清をサンプルとするピロリ抗体測定キット
［ＨＭ−ＣＡＰ：ＥＰｌ社／協和メデックス（株）］を
用いて同一検体を測定した結果を併記した（対照方
法）。[0070] In Table 2, the sensitivity is the ratio of the positive persons were detected as positive in 13 C-UBT test, the specificity, 13
The accuracy indicates the ratio of detecting a negative person in the C-UBT test as negative, and the accuracy indicates the ratio of detecting a positive person and the same negative person in the 13 C-UBT test as positive and negative, respectively. The case where (M) + 3SD or M + 5SD was adopted is shown. As a control, the result of measurement of the same specimen using a pylori antibody measurement kit using serum as a sample [HM-CAP: EPl / Kyowa Medex Co., Ltd.] is also shown (control method).
【００７１】該結果より、本発明方法が、特に感度及び
正確性において、優れた結果を与えることが判明した。From the results, it was found that the method of the present invention gave excellent results, particularly in sensitivity and accuracy.
【００７２】実施例４ 尿中風疹ウイルス（ルベラ）抗
体の測定 （１）ルベラ抗原プレートの調製 抗原として市販のルベラ抗原［ＢＩＯ−ＤＥＳIＧＮ
社］を用い、抗原濃度を１μｇ／ｍｌ及びブロッキング
液を（D-PBS, 1% BSA, 5% sorbitol, 0.05% NaN3(pH 7.
4)）とした以外は前記実施例３（１）と同様にして、ル
ベラ抗原プレートを調製した。Example 4 Measurement of Urinary Rubella Virus (Rubella) Antibody (1) Preparation of Rubella Antigen Plate Commercially available rubella antigen [BIO-DESIGN] as an antigen
Using an antigen concentration of 1 μg / ml and blocking solution (D-PBS, 1% BSA, 5% sorbitol, 0.05% NaN 3 (pH 7.
A rubella antigen plate was prepared in the same manner as in Example 3 (1) except that 4)) was used.
【００７３】（２）測定 上記で得た抗原プレートを使用して、前記実施例３
（２）と同様にして尿サンプル中のルベラ抗体を測定し
た。(2) Measurement Using the antigen plate obtained above, Example 3
Rubella antibody in the urine sample was measured in the same manner as in (2).
【００７４】得られた結果を図３及び表３に示す。The results obtained are shown in FIG. 3 and Table 3.
【００７５】[0075]
【表３】 [Table 3]
【００７６】図３中、縦軸は、吸光度（OD=450-650nm）
を、横軸は、市販キット（風疹ＩｇＧ（II）−ＥｌＡ
「生研」、デンカ生研（株））によって測定された血清
ルベラ抗体陽性群（n=76）及び同陰性群（n=23）をそれ
ぞれ示す。表３は、本発明方法と対照法としての上記血
清ルベラ抗体測定結果との一致性を示すものである。In FIG. 3, the vertical axis represents the absorbance (OD = 450-650 nm).
, The horizontal axis is a commercially available kit (Rubella IgG (II) -ElA).
“Seiken”, Denka Seiken Co., Ltd.) shows a serum Rubella antibody positive group (n = 76) and a serum Rubella antibody positive group (n = 23), respectively. Table 3 shows the consistency between the method of the present invention and the above-mentioned serum Rubella antibody measurement results as a control method.
【００７７】該結果より、本発明方法と対照方法の一致
率は１００％（９９／９９）であり、本発明によれば、
検体として安全かつ簡便な尿を採用しても高感度かつ高
特異的な抗体検出が可能であり、臨床検査分野において
有用であることが判明した。From the results, the agreement between the method of the present invention and the control method was 100% (99/99).
Even when safe and simple urine is used as a sample, highly sensitive and highly specific antibody detection is possible, which proves to be useful in the field of clinical testing.
【図１】尿中ＨＩＶ抗体の測定において偽陽性の結果を
与える尿検体のゲル濾過と各分画の抗体反応性を示す図
である。なお図中縦軸は、吸光度（O.D.）を、横軸はゲ
ル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実線は２８
０ｎｍにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上記抗ヒト
（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体による検出結果を、白三角線は
上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体による検出結果
を、黒三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体
による検出結果をそれぞれ示す。FIG. 1 is a diagram showing gel filtration of a urine sample giving a false positive result in the measurement of urinary HIV antibody, and the antibody reactivity of each fraction. In the figure, the vertical axis indicates absorbance (OD), and the horizontal axis indicates gel filtration fractions (fraction numbers). Solid line is 28
The absorbance of the protein at 0 nm, the black circle is the result of detection with the anti-human (IgG + IgM) antibody, the white triangle is the result of detection with the anti-human IgG (Fc-specific) antibody, and the black triangle is the anti-human IgG ( (Fab specific) The detection result by an antibody is each shown.
【図２】本発明方法に従う尿中ピロリ抗体の測定結果
（実施例３）を示す図である。FIG. 2 shows the results of measurement of urinary H. pylori antibodies according to the method of the present invention (Example 3).
【図３】本発明方法に従う尿中ルベラ抗体の測定結果
（実施例４）を示す図である。FIG. 3 shows the results of measurement of rubella antibody in urine according to the method of the present invention (Example 4).
Claims (5)
従って検出測定する免疫測定法であって、該抗体ＩｇＧ
のＦｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬を用いる
ことを特徴とする抗体測定方法。1. An immunoassay for detecting and measuring an antibody present in a body fluid according to a sandwich method, wherein said antibody IgG
An antibody measuring method, characterized by using an antibody detection reagent having binding specificity to the Fc region of the above.
体に対する抗原を固定化してなる固相化抗原との免疫反
応工程、及び当該固相化抗原に捕捉された測定対象抗体
と前記抗体検出試薬との反応工程を含む請求項１記載の
抗体測定方法。2. An immunoreaction step between an antibody to be measured present in a body fluid and an immobilized antigen obtained by immobilizing an antigen against the antibody, and an antibody to be measured captured by the immobilized antigen and the antibody 2. The method for measuring an antibody according to claim 1, comprising a reaction step with a detection reagent.
ある請求項１又は２記載の抗体測定方法。3. The method according to claim 1, wherein the antibody detection reagent is an Fc-specific anti-IgG antibody.
に記載の抗体測定方法。4. The method according to claim 1, wherein the body fluid is urine.
である請求項１乃至４のいずれかに記載の測定方法。5. The method according to claim 1, wherein the antibody to be measured is an antibody directed to an infection source.
Priority Applications (17)
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|---|---|---|---|
| JP10309598A JPH11295311A (en) | 1998-04-14 | 1998-04-14 | Antibody measurement method |
| ES99913623T ES2306509T3 (en) | 1998-04-14 | 1999-04-09 | PROCEDURE FOR ANTIBODY ANALYSIS AND DEVICE FOR ANTIBODY ANALYSIS. |
| BR9906351-4A BR9906351A (en) | 1998-04-14 | 1999-04-09 | Antibody assay method and antibody assay device |
| PCT/JP1999/001921 WO1999053318A1 (en) | 1998-04-14 | 1999-04-09 | Methods for assaying antibody and device for assaying antibody |
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