JPH1129412A - Phytoalexin inducer - Google Patents
Phytoalexin inducerInfo
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- JPH1129412A JPH1129412A JP18374697A JP18374697A JPH1129412A JP H1129412 A JPH1129412 A JP H1129412A JP 18374697 A JP18374697 A JP 18374697A JP 18374697 A JP18374697 A JP 18374697A JP H1129412 A JPH1129412 A JP H1129412A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、アミノ酸結合型ジ
ャスモン酸を有効成分として含有するファイトアレキシ
ン誘導剤に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a phytoalexin inducer containing an amino acid-bound jasmonic acid as an active ingredient.
【０００２】[0002]
【従来の技術】植物はストレスや病害に対する自己防御
反応の一つとしてファイトアレキシンと呼ばれる抗菌性
物質を生産する。ファイトアレキシンは低分子量の二次
代謝産物であり、数多くの植物から様々な骨格を有する
ファイトアレキシンが単離・同定されている。例えば、
イネいもち病菌感染に対するファイトアレキシンとして
オリザレキシン類やサクラネチンが単離・同定されてい
る（Phytochemistry,31,3807-3809(1992); Tetrahedro
n,49, 2025-2032(1993)）。2. Description of the Related Art Plants produce an antibacterial substance called phytoalexin as one of self-defense reactions against stress and disease. Phytoalexins are secondary metabolites of low molecular weight. Phytoalexins having various skeletons have been isolated and identified from many plants. For example,
Oryzalexins and sakuranetin have been isolated and identified as phytoalexins against rice blast infection (Phytochemistry, 31, 3807-3809 (1992); Tetrahedro
n, 49, 2025-2032 (1993)).
【０００３】イネ葉での外的ストレスによるファイトア
レキシンの生産は、ジャスモン酸の生成を介して起こる
ことが知られている（Biosci.Biotech.Biochem.,60,104
6-1048(1996)）。すなわち、エリシタとして塩化銅を処
理したイネ葉では、内生ジャスモン酸が速やかに増加
し、又ジャスモン酸を外部から与えたイネ葉では、サク
ラネチンが大量に生成される（前出）。また、イネ葉に
おいて、サクラネチンはその前駆体であるナリンゲニン
（図２）のメチル化反応によって生合成され、このメチ
ル化反応をナリンゲニン-7-O- メチルトランスフェラー
ゼ( NOMT )が触媒していることが知られている（Bioche
m.Biophys.Res.Commun.,222, 732-735(1996)）。この酵
素は、塩化銅、紫外線照射等のストレスや、ジャスモン
酸によって誘導される。[0003] It is known that the production of phytoalexin in rice leaves by external stress occurs through the production of jasmonic acid (Biosci. Biotech. Biochem., 60, 104).
6-1048 (1996)). That is, endogenous jasmonic acid rapidly increases in rice leaves treated with copper chloride as an elicitor, and large amounts of sacrannetin are generated in rice leaves to which jasmonic acid is given from outside (see above). In rice leaves, sakuranetin is biosynthesized by the methylation reaction of its precursor naringenin (Fig. 2), and this methylation reaction is catalyzed by naringenin-7-O-methyltransferase (NOMT). Known (Bioche
m. Biophys. Res. Commun., 222, 732-735 (1996)). This enzyme is induced by stress such as copper chloride, ultraviolet irradiation, and jasmonic acid.
【０００４】このようにジャスモン酸は、ファイトアレ
キシンの生産において重要な役割を果たしている。ジャ
スモン酸は、リノレン酸カスケードにおいて生合成され
るので、そのカスケードにおける上流及び下流化合物も
ジャスモン酸と同様にファイトアレキシンの生産に関与
している可能性がある。しかし、そのようなジャスモン
酸関連化合物とファイトアレキシン生産との関係につい
て論じた報告は皆無である。[0004] Thus, jasmonic acid plays an important role in the production of phytoalexins. Since jasmonic acid is biosynthesized in the linolenic acid cascade, upstream and downstream compounds in that cascade may be involved in the production of phytoalexins, as well as jasmonic acid. However, there are no reports discussing the relationship between such jasmonic acid-related compounds and phytoalexin production.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記観点か
らジャスモン酸関連化合物とファイトアレキシン生産と
の関係を明らかにし、新規なファイトアレキシン誘導剤
を提供することを目的とする。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to clarify the relationship between jasmonic acid-related compounds and phytoalexin production from the above viewpoints, and to provide a novel phytoalexin inducer.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究した結果、アミノ酸結合型ジ
ャスモン酸がエリシタ活性を有し、ファイトアレキシン
誘導剤として極めて有用であることを見出し、本発明を
完成するに至った。すなわち、本発明は、アミノ酸結合
型ジャスモン酸を有効成分として含有するファイトアレ
キシン誘導剤である。Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, it has been found that amino acid-bound jasmonic acid has elicitor activity and is extremely useful as a phytoalexin inducer. And completed the present invention. That is, the present invention is a phytoalexin inducer containing an amino acid-bound jasmonic acid as an active ingredient.
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のファイトアレキシン誘導剤は、以下の一般式：DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention will be described below in detail.
The phytoalexin inducer of the present invention has the following general formula:
【０００８】[0008]
【化１】 Embedded image
【０００９】（式中、Ｒはアミノ酸残基である）で示さ
れるアミノ酸結合型ジャスモン酸を有効成分として含有
する。ここで、アミノ酸結合型ジャスモン酸とは、ジャ
スモン酸（図１）のカルボキシル基とアミノ酸のアミノ
基とがアミド結合した化合物を意味する。(Wherein R is an amino acid residue), which contains an amino acid-bound jasmonic acid as an active ingredient. Here, the amino acid-bonded jasmonic acid means a compound in which the carboxyl group of jasmonic acid (FIG. 1) and the amino group of the amino acid are amide-bonded.
【００１０】アミノ酸結合型ジャスモン酸において、ジ
ャスモン酸とアミド結合するアミノ酸は特に限定され
ず、いかなるアミノ酸でもよいが、植物に対する毒性が
低いという点から、フェニルアラニン、ロイシン又はイ
ソロイシンが好ましく、フェニルアラニンが最も好まし
い。In the amino acid-bonded jasmonic acid, the amino acid which is amide-bonded to jasmonic acid is not particularly limited, and any amino acid may be used, but phenylalanine, leucine or isoleucine is preferable, and phenylalanine is most preferable, since it has low toxicity to plants. .
【００１１】アミノ酸結合型ジャスモン酸の調製法とし
ては、公知の方法を用いることができ、いずれの方法で
調製したものをも本発明のファイトアレキシン誘導剤の
有効成分して用いることができる。例えば、ジャスモン
酸を酸無水物にし、該酸無水物とアミノ酸とを反応させ
ることによりアミノ酸結合型ジャスモン酸を得ることが
でき、該アミノ酸結合型ジャスモン酸を本発明のファイ
トアレキシン誘導剤の有効成分として用いることができ
る。As the method for preparing the amino acid-bound jasmonic acid, known methods can be used, and those prepared by any of the methods can be used as an active ingredient of the phytoalexin inducer of the present invention. For example, jasmonic acid can be converted to an acid anhydride, and an amino acid-bound jasmonic acid can be obtained by reacting the acid anhydride with an amino acid. It can be used as a component.
【００１２】本発明のファイトアレキシン誘導剤を用い
ることにより、ファイトアレキシンを誘導することがで
き、これによりファイトアレキシンの持つ抗菌活性を発
揮させることができる。この抗菌活性を利用して、本発
明のファイトアレキシン誘導剤を、例えば、作物に散布
して植物病害防除剤として使用したり、カット野菜等に
噴霧して植物鮮度保持剤等として使用することができ
る。By using the phytoalexin inducer of the present invention, phytoalexin can be induced, and thereby the antimicrobial activity possessed by phytoalexin can be exhibited. Utilizing this antibacterial activity, the phytoalexin inducer of the present invention can be used as a plant disease controlling agent by spraying on crops or used as a plant freshness preserving agent by spraying on cut vegetables and the like. Can be.
【００１３】[0013]
〔実施例１〕ジャスモン酸およびその誘導体の調製 ジャスモン酸（化合物１）を以下のようなジャスモン
酸メチルの脱エステル化により調製した。ジャスモン酸
メチル 1.0g と炭酸カリウム 0.71gとを70% メタノール
水 10mlに溶解し、7 時間煮沸した。反応混合物に希塩
酸水を加え、クロロホルムで抽出した。クロロホルム相
を無水硫酸ナトリウムで脱水後、ロータリーエバポレー
ターで濃縮し、ジャスモン酸 0.93gを得た。Example 1 Preparation of Jasmonic Acid and Its Derivative Jasmonic acid (Compound 1) was prepared by deesterification of methyl jasmonate as follows. 1.0 g of methyl jasmonate and 0.71 g of potassium carbonate were dissolved in 10 ml of 70% aqueous methanol and boiled for 7 hours. Dilute hydrochloric acid was added to the reaction mixture, and the mixture was extracted with chloroform. After the chloroform phase was dehydrated with anhydrous sodium sulfate, it was concentrated with a rotary evaporator to obtain 0.93 g of jasmonic acid.
【００１４】また、対掌体分割は、 Kamell,R., Schnei
der,G., Schmidt,J., Sembdner,G.及び Schreiber,Kら
の記載（Z.Naturforsch.B Chem.Sci.45,377-81(1990)）
に従って、以下のように行なった。The enantiomeric division is described by Kamell, R., Schnei
der, G., Schmidt, J., Sembdner, G. and Schreiber, K. et al. (Z. Naturforsch. B Chem. Sci. 45, 377-81 (1990))
Was performed as follows.
【００１５】ジャスモン酸 0.82g、トリエチルアミン
0.58ml 及びイソブチルクロロホルメート 0.55ml の TH
F溶液を 0℃で 1時間反応させた。反応後、 (＋) マン
デル酸0.46gを溶解した THF溶液に上澄を加え、 0℃で2
4時間反応させた。反応物に水を加え、クロロホルムで
抽出した。クロロホルム相を脱水し濃縮した後、得られ
たジアステレオマーをカラムクロマトグラフィーで分離
した。溶出には、クロロホルム：酢酸エチル：ヘキサ
ン：酢酸＝15 : 3 : 5 : 0.5の溶媒を用いた。ジアステ
レオマーを分離後、1N NaOH で加水分解し、目的の (-)
ジャスモン酸 100mgを得た。0.82 g of jasmonic acid, triethylamine
0.58 ml of TH and 0.55 ml of isobutyl chloroformate
The F solution was reacted at 0 ° C. for 1 hour. After the reaction, the supernatant was added to a THF solution in which 0.46 g of (+) mandelic acid was dissolved.
The reaction was performed for 4 hours. Water was added to the reaction product, and extracted with chloroform. After the chloroform phase was dehydrated and concentrated, the resulting diastereomers were separated by column chromatography. For elution, a solvent of chloroform: ethyl acetate: hexane: acetic acid = 15: 3: 5: 0.5 was used. After separating the diastereomers, they are hydrolyzed with 1N NaOH to give the desired (-)
100 mg of jasmonic acid was obtained.
【００１６】ジヒドロジャスモン酸（化合物２）を、
Buchi,G.及びEgger,B らの記載（J.Org.Chem.36,2021-2
023.(1971)）に従って、2-ペンチル-2- シクロペンタン
-1- オンから以下のように合成した。2-ペンチル-2- シ
クロペンタン-1- オン 10gをメタノールに溶解し、0.33
mmolのMeONa の存在下で、ジメチルマロン酸と 0℃で一
晩反応させた。反応物を抽出し、得られた抽出液を脱水
し濃縮した後、生成物をジメチルスルフォキシドに溶解
した。NaClの存在下で煮沸することにより脱炭酸し、目
的のジヒドロジャスモン酸メチルエステル 5g を得た。
このエステルを炭酸カリウムの存在下で加水分解し、ジ
ヒドロジャスモン酸 3.0g を得た。Dihydrojasmonic acid (compound 2) is
Buchi, G. and Egger, B et al. (J. Org. Chem. 36, 2021-2)
023. (1971)), according to 2-pentyl-2-cyclopentane
It was synthesized from -1-one as follows. Dissolve 10 g of 2-pentyl-2-cyclopentan-1-one in methanol and add 0.33
Reaction with dimethylmalonic acid at 0 ° C. overnight in the presence of mmol MeONa. The reaction product was extracted, and the obtained extract was dehydrated and concentrated, and then the product was dissolved in dimethyl sulfoxide. Decarbonation was carried out by boiling in the presence of NaCl to obtain 5 g of the target methyl dihydrojasmonate.
This ester was hydrolyzed in the presence of potassium carbonate to obtain 3.0 g of dihydrojasmonic acid.
【００１７】7-イソクルルビン酸（化合物３）を、Ya
mane,H., Sugawara,J., Suzuki,Y., Shimamura,E. 及び
Takahashi,N.らの記載（Agric.Biol.Chem.44, 2857-286
4.(1980)）に従って、ジャスモン酸から以下のように合
成した。ジャスモン酸 0.21gをメタノールに溶解し、 0
℃で水素化ホウ素ナトリウム 0.4g を加えた。反応後、
反応物を抽出し、得られた抽出液を濃縮し、メチルエス
テル 0.51gを得た。このエステルを炭酸カリウムの存在
下で加水分解し、7-イソクルルビン酸 0.3g を得た。7-Isocrurubic acid (compound 3) is converted to Ya
mane, H., Sugawara, J., Suzuki, Y., Shimamura, E. and
Takahashi, N. et al. (Agric. Biol. Chem. 44, 2857-286)
According to 4. (1980)), it was synthesized from jasmonic acid as follows. Dissolve 0.21 g of jasmonic acid in methanol and add 0
At 0 ° C., 0.4 g of sodium borohydride was added. After the reaction,
The reaction product was extracted, and the obtained extract was concentrated to obtain 0.51 g of methyl ester. This ester was hydrolyzed in the presence of potassium carbonate to obtain 0.3 g of 7-isocurruvic acid.
【００１８】ジャスモン酸のアルコール誘導体（化合
物４）を、メチルジャスモン酸から以下のように合成し
た。ジャスモン酸 1.0g をエチレングライコール 1.0g
とベンゼン中で水を除去しながら煮沸反応させた。反応
物を抽出し、得られた抽出液を濃縮して油状物を得た。
この生成物をリチウムアルミニウムハイドライドで還元
し、加水分解した後、目的のアルコール誘導体 0.5g を
得た。An alcohol derivative of jasmonic acid (compound 4) was synthesized from methyl jasmonic acid as follows. 1.0 g of jasmonic acid to 1.0 g of ethylene glycol
And boiling reaction while removing water in benzene. The reaction product was extracted, and the obtained extract was concentrated to obtain an oil.
The product was reduced with lithium aluminum hydride and hydrolyzed to obtain 0.5 g of the desired alcohol derivative.
【００１９】アミノ酸結合型ジャスモン酸として、 N
-[(-)-ジャスモノイル]-S-イソロイシン（化合物５：イ
ソロイシン結合型ジャスモン酸）、 N-[(-)-ジャスモノ
イル]-S-フェニルアラニン（化合物６：フェニルアラニ
ン結合型ジャスモン酸）、 N-[(-)-ジャスモノイル]-S-
ロイシン（化合物７：ロイシン結合型ジャスモン酸）、
及び N-[(-)-ジャスモノイル]-S-トリプトファン（化合
物８：トリプトファン結合型ジャスモン酸）、並びにそ
れらの (＋) 体を、 Kamell,R., Schmidt,G., Schneide
r., Sembdner,G. 及び Schreiber,Kらの記載（Tetrahed
ron 44,5791-5807. (1988)）に従って、以下のように合
成した。As the amino acid-bound jasmonic acid, N
-[(-)-Jasmonoyl] -S-isoleucine (compound 5: isoleucine-bound jasmonic acid), N-[(-)-jasmonoyl] -S-phenylalanine (compound 6: phenylalanine-bound jasmonic acid), N- [ (-)-Jasumonoiru] -S-
Leucine (compound 7: leucine-bound jasmonic acid),
And N-[(-)-jasmonoyl] -S-tryptophan (compound 8: tryptophan-bound jasmonic acid) and their (+)-forms were converted to Kamell, R., Schmidt, G., Schneide
r., Sembdner, G. and Schreiber, K et al. (Tetrahed
ron 44,5791-5807. (1988)).
【００２０】ジャスモン酸 210mgをテトラヒドロフラン
中で、トリエチルアミン 0.15ml の存在下でイソブチル
クロロフォルメート 0.14ml と反応させた。 0℃で 3時
間反応させた後、アミノ酸のリチウム塩を加えたテトラ
ヒドロフラン中に上澄を滴下した。 5時間反応させた
後、HCL でpHを3.0 に調整し、クロロホルムで目的物を
抽出し、得られた抽出液を濃縮し精製した後、目的のア
ミノ酸結合型化合物を得た。上記化合物１、２、３、
４、５、６、７及び８の構造式を図１に示す。210 mg of jasmonic acid were reacted with 0.14 ml of isobutyl chloroformate in tetrahydrofuran in the presence of 0.15 ml of triethylamine. After reacting at 0 ° C. for 3 hours, the supernatant was dropped into tetrahydrofuran to which lithium salt of amino acid was added. After reacting for 5 hours, the pH was adjusted to 3.0 with HCL, the desired product was extracted with chloroform, and the obtained extract was concentrated and purified to obtain the desired amino acid-bound compound. Compounds 1, 2, 3,
The structural formulas of 4, 5, 6, 7 and 8 are shown in FIG.
【００２１】〔実施例２〕ジャスモン酸とその誘導体と
のサクラネチンの誘導活性の比較 〔実施例１〕で調製した各化合物（化合物１、２、３、
４、５、６、７及び８）を 0.5 mM の濃度に調製し、各
々20μl ずつイネ葉付傷部に滴下した。26℃、高湿度下
で72時間インキュベートした後、付傷部を切り取り、滴
下液と共に70%メタノール中で 3分間煮沸した。遠心濃
縮によりメタノールを除去した水溶液を酢酸エチルで抽
出し、サクラネチン抽出液とした。なお、サクラネチン
の構造式を図２に示す。得られた抽出液をSep-Pak Kigh
t Slica カートリッジ( Waters製)で精製した後、ＨＰ
ＬＣ（カラム, LichroCART, RP-C18( Merck 製 )；溶
媒,メタノール：水= ６：４；検出，ＵＶ(285nm) ）で
サクラネチン産生量を定量した。サクラネチンの保持時
間は流量が1ml/分で約 8分であった。その結果、化合物
２〜４及び８は、ジャスモン酸（化合物１）よりも低い
サクラネチン誘導活性しか有さないことが示された（図
３Ａ及びＢ）。それとは対照的に、化合物５〜７は、ジ
ャスモン酸（化合物１）よりも高いサクラネチン誘導活
性を有することが示された（図３Ｂ）。特に、化合物６
及び７は顕著に高い活性（約35％増加）を有することが
示された（図３Ｂ）。Example 2 Comparison of Sakuranetin-Inducing Activity between Jasmonic Acid and Its Derivative Each compound prepared in Example 1 (compounds 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, and 8) were adjusted to a concentration of 0.5 mM, and 20 μl of each was dropped onto the wounded rice leaf. After incubation at 26 ° C. and high humidity for 72 hours, the wound was cut off and boiled in 70% methanol for 3 minutes together with the drop solution. The aqueous solution from which methanol was removed by centrifugal concentration was extracted with ethyl acetate to give a sacranetin extract. FIG. 2 shows the structural formula of Sakuranetin. The obtained extract is separated by Sep-Pak Kigh
t After purification with Slica cartridge (Waters), HP
Sakuranetin production was quantified by LC (column, LichroCART, RP-C18 (manufactured by Merck); solvent, methanol: water = 6: 4; detection, UV (285 nm)). Sakuranetin retention time was about 8 minutes at a flow rate of 1 ml / min. The results showed that Compounds 2 to 4 and 8 had lower Sakuranetin-inducing activity than Jasmonic Acid (Compound 1) (FIGS. 3A and B). In contrast, Compounds 5-7 were shown to have higher Sakuranetin-inducing activity than Jasmonic Acid (Compound 1) (Figure 3B). In particular, compound 6
And 7 were shown to have significantly higher activity (about 35% increase) (FIG. 3B).
【００２２】なお、アミノ酸結合型ジャスモン酸の
（＋）対掌体及び遊離のアミノ酸（フェニルアラニン、
イソロイシン、ロイシン及びトリプトファン）はサクラ
ネチン誘導活性を示さなかった（結果は示していな
い）。The (+) enantiomer of amino acid-bound jasmonic acid and free amino acids (phenylalanine,
Isoleucine, leucine and tryptophan) did not show sakuranetin-inducing activity (results not shown).
【００２３】〔実施例３〕ジャスモン酸（化合物１）と
フェニルアラニン結合型ジャスモン酸（化合物６）との
サクラネチン誘導活性の比較 化合物１及び６を 0.5 mM の濃度に調製し、各々20μ
l ずつイネ葉付傷部に滴下した。24、48、72及び96時間
インキュベートした後、実施例２と同様にしてサクラネ
チン産生量を定量した。その結果、サクラネチンの誘導
は各化合物の滴下24時間後に確認され、フェニルアラニ
ン結合型ジャスモン酸（化合物６）はジャスモン酸（化
合物１）よりも高いサクラネチン誘導活性を有すること
が示された（図４Ａ）。Example 3 Comparison of Sakuranetin-Inducing Activity between Jasmonic Acid (Compound 1) and Jasmonic Acid-Binding Jasmonic Acid (Compound 6) Compounds 1 and 6 were prepared at a concentration of 0.5 mM and each had a concentration of 20 μm.
l was dripped into the rice leaf wound. After incubation for 24, 48, 72 and 96 hours, the amount of sakuranetin production was quantified in the same manner as in Example 2. As a result, induction of sakuranetin was confirmed 24 hours after the instillation of each compound, and it was shown that phenylalanine-bound jasmonic acid (compound 6) had a higher sakuranetin-inducing activity than jasmonic acid (compound 1) (FIG. 4A). .
【００２４】化合物１及び６を20、100 、500 μM の
濃度に調製し、各々20μl ずつイネ葉付傷部に滴下し
た。72時間インキュベートした後、実施例２と同様にし
てサクラネチン産生量を定量した。その結果、サクラネ
チンの誘導の閾値は約20μM であることが確認され、フ
ェニルアラニン結合型ジャスモン酸（化合物６）はジャ
スモン酸（化合物１）よりも高いサクラネチン誘導活性
を有することが示された（図４Ｂ）。Compounds 1 and 6 were prepared at concentrations of 20, 100, and 500 μM, and 20 μl of each was dropped on the wounded rice leaf. After incubation for 72 hours, the amount of sakuranetin production was quantified in the same manner as in Example 2. As a result, it was confirmed that the threshold value of sakuranetin induction was about 20 μM, and it was shown that phenylalanine-bound jasmonic acid (compound 6) had a higher sakuranetin inducing activity than jasmonic acid (compound 1) (FIG. 4B). ).
【００２５】〔実施例４〕ジャスモン酸（化合物１）と
アミノ酸結合型ジャスモン酸（化合物５〜８）とのナリ
ンゲニン-7-O- メチルトランスフェラーゼ( NOMT )の誘
導活性の比較 実施例１で調製した各化合物（化合物５、６、７及び
８）を 0.5μM の濃度に調製し、各々20μL ずつイネ葉
付傷部に滴下した。なお、対照として蒸留水20μL のみ
をイネ葉付傷部に同様に滴下した。その後、上記実施例
２と同様にして抽出したサクラネチン抽出液 35 μl 、
375 μM ナリンゲニンを含む 0.1M グリシン-NaOH 緩衝
液( pH9.5 、5mM DTT 及び 1mM EDTA を含む) 100 μl
、92.5 Bq/μl に希釈した S-[14C]アデノシルメチオ
ニン 10 μl を、1.5ml 容量のねじ口付きポリプロピレ
ン製ミクロチューブに入れ、27℃で20分間反応させるこ
とにより、サクラネチンをラベル化した。 6N 塩酸 25
μl を反応液に加え、反応を停止させた後、トルエンシ
ンチレーター(4g の 2,5- ジフェニルオキサゾールを 1
lのトルエンに溶解) 1ml を加え、よく攪拌し、ミクロ
チューブを直接液体シンチレーションカウンター用バイ
アルに入れ、液体シンチレーションカウンターによりラ
ベル化したサクラネチンの放射活性を測定し、NOMT活性
を算出した。[Example 4] Comparison of inducing activity of jasmonic acid (compound 1) and amino acid-bound jasmonic acid (compounds 5 to 8) for naringenin-7-O-methyltransferase (NOMT) prepared in Example 1. Each compound (compounds 5, 6, 7, and 8) was prepared at a concentration of 0.5 μM, and 20 μL of each compound was dropped on the wounded rice leaf. In addition, as a control, only 20 μL of distilled water was similarly dropped on the wounded rice leaf. Thereafter, 35 μl of the Sakuranetin extract extracted in the same manner as in Example 2 above,
0.1 M glycine-NaOH buffer containing 375 μM naringenin (pH 9.5, containing 5 mM DTT and 1 mM EDTA) 100 μl
Sakuranetin was labeled by placing 10 μl of S- [ 14 C] adenosylmethionine diluted to 92.5 Bq / μl into a 1.5 ml polypropylene microtube with a screw cap and reacting at 27 ° C for 20 minutes. . 6N hydrochloric acid 25
After adding 1 μl to the reaction mixture to stop the reaction, toluene scintillator (4 g of 2,5-diphenyloxazole was added
1 ml of toluene) was added, and the mixture was stirred well. The microtube was directly placed in a vial for a liquid scintillation counter, and the radioactivity of labeled sakuranetin was measured by a liquid scintillation counter to calculate NOMT activity.
【００２６】その結果、化合物８はジャスモン酸（化合
物１）よりも低いNOMT誘導活性しか有さないことが示さ
れた。それとは対照的に、化合物５〜７はジャスモン酸
（化合物１）よりも高いNOMT誘導活性を有することが示
された（図５）。As a result, it was shown that Compound 8 had a lower NOMT-inducing activity than jasmonic acid (Compound 1). In contrast, Compounds 5-7 were shown to have higher NOMT-inducing activity than jasmonic acid (Compound 1) (Figure 5).
【００２７】〔実施例５〕ジャスモン酸（化合物１）と
アミノ酸結合型ジャスモン酸（化合物５〜７）とのイネ
幼苗の生育に対する阻害活性の比較 各々 18 〜 204μg の化合物５〜７をアセトン 3mlに溶
解した。各アセトン溶液及びアセトン（対照として用い
た）をペトリ皿に敷いた直径5.5cm の濾紙にしみ込ませ
た。アセトンが蒸発した後、３mlの蒸留水を加えた。そ
の濾紙の上に４粒の発芽したイネ（日本晴）の種子を置
き、蛍光灯下25℃で生育させた。７日後、その芽の伸長
を測定し、対照に対する阻害率を計算し、各化合物の植
物毒性を比較した。その結果、ロイシン結合型ジャスモ
ン酸（化合物７）はジャスモン酸（化合物１）と同様の
植物毒性を示したが、イソロイシン結合型ジャスモン酸
（化合物５）及びフェニルアラニン結合型ジャスモン酸
（化合物６）は、ジャスモン酸（化合物１）よりも植物
毒性が弱かった（図６）。Example 5 Comparison of the inhibitory activities of jasmonic acid (compound 1) and amino acid-bound jasmonic acid (compounds 5 to 7) on the growth of rice seedlings 18 to 204 μg of each of compounds 5 to 7 were added to 3 ml of acetone. Dissolved. Each acetone solution and acetone (used as a control) were infiltrated into a 5.5 cm diameter filter paper spread on a Petri dish. After the acetone had evaporated, 3 ml of distilled water were added. Four germinated rice (Nipponbare) seeds were placed on the filter paper and grown at 25 ° C. under fluorescent light. Seven days later, the bud elongation was measured, the percent inhibition relative to controls was calculated, and the phytotoxicity of each compound was compared. As a result, leucine-binding jasmonic acid (compound 7) showed the same phytotoxicity as jasmonic acid (compound 1), but isoleucine-binding jasmonic acid (compound 5) and phenylalanine-binding jasmonic acid (compound 6) It was less phytotoxic than jasmonic acid (compound 1) (FIG. 6).
【００２８】[0028]
【発明の効果】本発明は、植物病害防除剤、植物鮮度保
持剤等として利用できる新規なファイトアレキシン誘導
剤を提供する。According to the present invention, there is provided a novel phytoalexin inducer which can be used as a plant disease controlling agent, a plant freshness preserving agent, and the like.
【図１】ジャスモン酸及びその誘導体の構造式を示す図
である。FIG. 1 shows the structural formulas of jasmonic acid and its derivatives.
【図２】ナリンゲニン及びサクラネチンの構造式を示す
図である。FIG. 2 is a diagram showing the structural formulas of naringenin and sakuranetin.
【図３】図３ａ及び図３ｂは、ジャスモン酸とその誘導
体とのサクラネチン誘導活性を比較した図である。FIGS. 3a and 3b are diagrams comparing the sakuranetin-inducing activity of jasmonic acid and its derivatives.
【図４】図４ａは、ジャスモン酸及びフェニルアラニン
結合型の処理時間とサクラネチン誘導活性との関係を示
す図である。図４ｂは、ジャスモン酸及びフェニルアラ
ニン結合型の処理濃度とサクラネチン誘導活性との関係
を示す図である。FIG. 4a is a diagram showing the relationship between the treatment time of jasmonic acid and phenylalanine-binding type and the activity of inducing sakuranetin. FIG. 4b is a graph showing the relationship between the treatment concentration of jasmonic acid and phenylalanine binding type and the activity of inducing sakuranetin.
【図５】ジャスモン酸とアミノ酸結合型ジャスモン酸と
のナリンゲニン7-O-メチルトランスフェラーゼ誘導活性
を比較した図である。FIG. 5 is a graph comparing naringenin 7-O-methyltransferase inducing activity between jasmonic acid and amino acid-bound jasmonic acid.
【図６】ジャスモン酸とアミノ酸結合型ジャスモン酸と
のイネ幼苗の生育に対する阻害活性を比較した図であ
る。FIG. 6 is a graph comparing the inhibitory activities of jasmonic acid and amino acid-bound jasmonic acid on the growth of rice seedlings.
Claims (2)
として含有するファイトアレキシン誘導剤。1. A phytoalexin inducer containing an amino acid-bound jasmonic acid as an active ingredient.
ェニルアラニン結合型ジャスモン酸、ロイシン結合型ジ
ャスモン酸及びイソロイシン結合型ジャスモン酸からな
る群から選択される、請求項１記載のファイトアレキシ
ン誘導剤。2. The phytoalexin inducer according to claim 1, wherein the amino acid-binding jasmonic acid is selected from the group consisting of phenylalanine-binding jasmonic acid, leucine-binding jasmonic acid and isoleucine-binding jasmonic acid.
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| CN113105285A (en) * | 2021-03-26 | 2021-07-13 | 浙江大学 | Female parent flowering time regulator for japonica indica rice hybrid seed production and method for regulating flowering time |
| CN113105285B (en) * | 2021-03-26 | 2022-04-22 | 浙江大学 | Female parent flowering time regulator for japonica indica rice hybrid seed production and method for regulating flowering time |
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