JPH11276170A - アスペルギルス属由来の新規なプロモーター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】本発明は、アスペルギルス（Aspergillus）属
糸状菌の新規プロモーターを提供する。 【構成】アスペルギルス・オリゼのアルコール・デヒド
ロゲナーゼI（alcoholdehydrogenase I）遺伝子、コプ
ロポルヒィリノーゲンIIIオキシダーゼ（coproporphyri
nogen III oxidase）遺伝子、ヘキソース・トランスポ
ーター（hexosetransporter）遺伝子、ヒストンH4.1（h
iston H4.1）遺伝子、40Sリボゾーム蛋白質S17（40S ri
bosomal protein S17)遺伝子又は40Sリボゾーム蛋白質S
28（40Sribosomal protein S28）遺伝子のプロモータ
ー。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術】本発明は、アスペルギルス（Aspe
rgillus）属糸状菌の新規プロモーターに関する。更に
詳細には、本発明はアスペルギルス・オリゼ由来の新規
プロモーター配列をクローニングし、アスペルギルス属
糸状菌を宿主として有用蛋白質およびペプチドを発現さ
せるために必要なＤＮＡ断片を有するプラスミドと、そ
れを用いた有用蛋白質およびペプチドの製造法に関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】糸状菌は、デンプン、蛋白質、脂質、セ
ルロース等を加水分解する各種加水分解酵素をはじめ多
くの有用酵素を菌体外に多量に分泌するため、古くより
これら有用酵素の給源として利用されてきた。従って、
糸状菌に関する培養法、生成物蛋白質の分離精製法など
の発酵技術の古い歴史と研究成果の裏付けがあり、多く
の菌株の安全性が広く認知されている。また、真核生物
であるが故に哺乳動物などの高等生物と同様に蛋白質の
糖鎖付加機構を有している。

【０００３】これらの理由により、糸状菌を異種蛋白質
の高生産用宿主として利用することが期待されていた。
遺伝子工学技術においては、目的とする蛋白質の生産量
は、プロモーター、ターミネーターなどの転写に関わる
因子、アミノ酸コドンの種類など翻訳に関わる因子、蛋
白質への糖鎖付加、発現した蛋白質の細胞内での存在様
式（分泌過程における移動も含む）などの翻訳後に関わ
る因子、遺伝子のコピー数の因子、宿主由来のプロテア
ーゼなど発現蛋白質の安定性に関わる因子など多くの因
子により影響を受ける。これらのうちもっとも重要であ
り制御しやすい因子は、プロモーターの選択である。

【０００４】この見地から、糸状菌における強力なプロ
モーターを利用した例は、たとえばアスペルギルス・ニ
ガー由来のグルコアミラーゼ遺伝子のプロモーター［Bi
otechnology, 5, 368（1987）］、トリコデルマ・リー
セイ由来のセロビオハイドロラーゼＩ遺伝子のプロモー
ター［Biotechnology, 7, 596（1989）］、アスペルギ
ルス・オリゼ由来のα-アミラーゼ遺伝子のプロモータ
ー［Biotechnology, 6,1419（1988）］（特開昭62-2729
88）、アスペルギルス・ニドランス由来のアルコールデ
ヒドロゲナーゼＩ遺伝子のプロモーター［Biotechnolog
y, 5, 713（1987）］、アスペルギルス・オリゼ、アス
ペルギルス・ニガーのグリセルアルデヒド−３−ホスフ
ェイト デヒドロゲナーゼ（GAP-DH）のプロモーターを
利用して異種蛋白質の製造（特開平3-187392）の場合な
どがある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明はアスペルギル
ス・オリゼ由来の新規なプロモーターを得、この発現系
を使用して異種蛋白質を製造する方法を提供することに
ある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者等は上記目的を
達成するために鋭意研究し、アスペルギルス・オリゼか
ら新規なプロモーター配列をクローニングすることに成
功し、本発明を完成した。即ち、本発明によりアスペル
ギルス・オリゼ由来の新規なプロモーターが提供され、
それを使用する点で新規なものである。

【０００７】本発明においては、以下のようにして上記
の目的を達することが出来た。例えば、グルコース存在
下で強く発現する遺伝子の同定と単離は、以下のように
してできる。

【０００８】糸状菌をグルコースを唯一の炭素源とした
培地で培養し、得られた菌体からポリＡ付加ＲＮＡを取
得する。このポリＡ付加ＲＮＡを用いてｃＤＮＡを合成
し、適当なベクターを用いてｃＤＮＡライブラリーを構
築する。

【０００９】このライブラリーの中から独立したクロー
ンを無作為に多数、例えば500個選別（約8,000遺伝子で
構成されている麹菌であれば約500個で推定できると考
えられる。）し、プラスミドＤＮＡを抽出して約800bp
の塩基配列を解析する。

【００１０】こうして得られた塩基配列は、各ｃＤＮＡ
のコード領域を５’末端領域の塩基配列を含み、ＤＮＡ
塩基配列データベースに対して相同性解析を行うことに
より、含まれる遺伝子を推定する。さらに、全ての塩基
配列間で総当たりで相同性検索を行うことにより、それ
ぞれのｃＤＮＡの頻度解析を行い、培地中のグルコース
存在下で強く発現している遺伝子を同定することができ
る。

【００１１】次に、この様にして同定したグルコース存
在下で強く発現している遺伝子のプロモーターの単離
は、通常よく用いられる方法、即ち上記で得られた各ｃ
ＤＮＡをプローブにして遺伝子ライブラリーからスクリ
ーニングすること等により成し遂げられるし、或いはＰ
ＣＲ（Polymerase chain reaction）を用いる方法によ
っても成し遂げられる。

【００１２】ＰＣＲを用いる方法の一例として、以下の
方法を用いることが出来る。糸状菌からゲノムＤＮＡを
抽出してＥｃｏＲＶ、ＳｃａＩ、ＤｒａＩ、ＰｖｕＩＩ
あるいはＳｓｐＩ等の６ｂｐを認識して平滑末端に切断
するそれぞれの制限酵素で完全消化し、そのゲノムＤＮ
Ａ断片の両端に適当なアダプターを連結する。

【００１３】この両端にアダプターが連結されたゲノム
ＤＮＡ断片を鋳型として、ｃＤＮＡの塩基配列から合成
したプライマーおよびアダプターの一本鎖部分の配列を
有するプライマーを用いてＰＣＲを行う。増幅産物を電
気泳動で確認して１〜２ｋｂｐ程度の長さを有するＤＮ
Ａ断片を電気泳動によって単離・精製し、適当なクロー
ニングベクターに連結して大腸菌にクローニングする。

【００１４】数個の独立したクローンからプラスミドを
調製してクローニングしたＤＮＡ断片の両末端の塩基配
列を解析し、ｃＤＮＡと相同な塩基配列を有しｃＤＮＡ
の上流に位置するＤＮＡ断片をこのｃＤＮＡ由来の遺伝
子のプロモーターと判断する。

【００１５】プロモーター領域を有するＤＮＡ断片のう
ち、翻訳開始コドンより上流１ｋｂｐ程度以上を有する
ＤＮＡ断片を選別し、全塩基配列を決定し、グルコース
存在下で強く発現している遺伝子のプロモーターの単離
を行うことが出来る。上述した工程を図１に示す。

【００１６】本発明のプロモーターは上述のようにして
決定された塩基配列に対してストリンジェントな条件、
例えば、0.1％ SDS（60℃、0.3mol NaCl、0.03Ｍ クエ
ン酸ソーダ）でハイブリダイズする塩基配列をも包含す
る。

【００１７】本発明のプロモーターは、その下流に、所
望の有用タンパク質遺伝子を連結してベクターを構築
し、該ベクターで宿主を形質転換し、それを培養するこ
とにより、有用タンパク質を著量生産させることができ
る。

【００１８】宿主としては、アスペルギルス・オリゼを
はじめ、その他のアスペルギルス属、ノイロスポラ属、
ペニシリウム属、トリコデルマ属などの微生物が使用で
きる。特に、発現効率の点から、宿主として、アスペル
ギルス・オリゼを用いることが好ましい。

【００１９】得られたプロモーターへの有用タンパク質
遺伝子の連結、ベクターへの挿入は、それ自体公知の方
法で行うことができる。有用タンパク質遺伝子として
は、特に限定するものではない。また、ベクターとして
は、アルギニン要求性などの栄養要求性相補遺伝子、ア
セトアミド資化などの炭素、窒素源資化遺伝子、オリゴ
マイシン耐性などの薬剤耐性遺伝子などが挙げられる。

【００２０】宿主の形質転換も自体公知の方法で行うこ
とができる。また、該形質転換体の培養も常法に従っ
て、所望のタンパク質に適した培地、培養条件を適宜選
択することにより行うことができ、得られたタンパク質
の採取、精製も公知の方法で行うことができる。

【００２１】以下、実施例を参照しながら本発明を詳細
に説明するが、実施例に使用したプラスミドなどは一例
として挙げたものであり、本発明に使用できるものであ
ればこれらに限定されるものではない。

【００２２】

【実施例】実施例１ グルコース存在下で高発現する遺
伝子の同定 (1) 菌体の取得 アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）ATCC 4
2149を以下の培養条件で培養した。ＹＰＤ培地（酵母エ
キス１％、ポリペプトン２％及びグルコース２％よりな
る培地（pH6.0）に本菌株を接種し、30℃において22時
間通気攪拌培養し、菌体をろ過して得た。得られた湿菌
体４ｇを液体窒素中で凍結し、そのまま、液体窒素及び
海砂を入れた乳鉢に移し、乳棒で微細な粉末とした。

【００２３】(2) ｃＤＮＡライブラリーの作製 シグイン（Chigwin）等の方法〔バイオケミストリー（B
iochemistry）、18巻、5294頁（1979）〕に従って4.6mg
の全ＲＮＡを得た。その後、オリゴ（dT）セルロース・
カラム（ファルマシア社）に供し、1.4mgの全ＲＮＡか
ら30μgのポリＡ付加ＲＮＡ画分を得た。

【００２４】このポリＡ付加ＲＮＡを用いて、ＮｏｔＩ
制限酵素切断部位を含むプライマー（5'-TTCTAGAATTCAG
CGGCCGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTVN-3'：ここで
VはA,C,Gの混合、NはA,C,G,Tの混合を表す）及びMMLVリ
バーストランスクリプターゼ（RNaseH^-）（クロンテッ
ク）[逆転写酵素]を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成し、さ
らにE.coli DNA polymerase I（クロンテック）、E.col
i DNA ligase（クロンテック）およびE.coli RNase H
（クロンテック）により、両端が平滑化された二本鎖の
ｃＤＮＡとした。

【００２５】ｃＤＮＡ分離用カラム（クロンテック）を
用いたゲル濾過により短鎖ｃＤＮＡを除去した後、Ｅｃ
ｏＲＩ制限酵素切断部位を含むアダプター（5'-AATTCGG
CACGAGG-3'及び5'-CCTCGTGCCG-3'）を連結した。

【００２６】こうして得られたｃＤＮＡ断片は、Ｎｏｔ
Ｉ制限酵素で完全消化した後、ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔ
Ｉ制限酵素で消化したプラスミドベクターｐＵＣ１９に
連結した。このプラスミドを大腸菌に形質転換すること
により、ほぼ完全長のｃＤＮＡを含む大腸菌ｃＤＮＡラ
イブラリーを構築した。

【００２７】(3) 高発現する遺伝子の探索 このライブラリーの中から独立したクローンを無作為に
５００個選別し、プラスミドＤＮＡを抽出して、Ｍ１３
ユニバーサルプライマー（5'-CACGACGTTGTAAAACGAC-
3'）、Taq ＤＮＡポリメラーゼ（パーキン・エルマー
社）、ＤＮＡサーマル・サイクラー（パーキン・エルマ
ー社）及びＤＮＡシークエンサー（ＬＩ−ＣＯＲ社、モ
デル4000L）を用いたサイクル・シークエンス法により
約800bpの塩基配列を解析した。

【００２８】こうして得られた塩基配列は、各ｃＤＮＡ
の５’末端領域の塩基配列を含んでいる。GenBank Ｄ
ＮＡ塩基配列データベースに対して、BLASTXを用いて相
同性解析を行うことにより、含まれる遺伝子を推定し
た。

【００２９】さらに、Sequencher（GeneCodes社）を用
いて全ての塩基配列間で総当たりで相同性検索を行うこ
とにより、それぞれのｃＤＮＡの頻度解析を行い、培地
中のグルコース存在下で強く発現している遺伝子のリス
トを作製した。

【００３０】

【表１】

【００３１】表中においては、以下のように示す。 Score :ランダムに選んだ600のcDNA配列解析での出現
頻度 Source :GenBankデータベースに対するホモロジーサー
チでヒットしたもの Sc=Saccharomyces cerevisiae Af=Aspergillus flavus An=Aspergillus nidulans

【００３２】その結果、グルコース存在下で強く発現し
ている遺伝子としてアルコール・デヒドロゲナーゼI（a
lcohol dehydrogenase I）遺伝子、コプロポルヒィリノ
ーゲンIIIオキシダーゼ （coproporphyrinogen III oxi
dase）遺伝子、ヘキソース・トランスポーター（hexose
transporter）遺伝子、ヒストンH4.1（histon H4.1）
遺伝子、40Sリボゾーム蛋白質S17（40S ribosomal prot
ein S17）遺伝子、40Sリボゾーム蛋白質S28（40S ribos
omal protein S28）遺伝子を新たに発見した。

【００３３】実施例２ アルコール・デヒドロゲナーゼ
IのｃＤＮＡに対応するのプロモーター領域の取得 Aspergillus oryzae RIB-40株（ATCC 42149）からティ
ンバレークとバーナード（Timberlake and Bernard）の
方法に従って得たゲノムＤＮＡを、６ｂｐを認識して平
滑末端に切断するEcoRVで完全消化し、(P)5'-ACCTGCCC-
3'(NH2)および5'-CTAATACGACTCACTATAGGGCTCGAGCGGCCGC
CCGGGCAGGT-3'からなるアダプターを連結した。

【００３４】このゲノムＤＮＡ断片を鋳型とし、センス
プラーマーとしてアダプターの一本鎖部分の配列を有す
るプライマーＡＤ（5'-CTAATACGACTCACTATAGGGC-3'）
を、アンチセンスプライマーとしてアルコール・デヒド
ロゲナーゼＩ ｃＤＮＡの塩基配列から合成したプライ
マー＃１（5'-ACGAGGGGCATCTTCACTGGGAGG-3'）を用いて
ＰＣＲを行った。ＰＣＲ反応は、Expand HF（ベーリン
ガー・マンハイム社）を用い、ＤＮＡサーマル・サイク
ラー（パーキン・エルマー社）により行った。反応溶液
の組成は以下の通りである。

【００３５】 （終濃度） H₂O 20.25 μｌ [10×]Reaction buffer 2.5 μｌ ［１×］ dNTPs, Mix 10 mM 0.5 μｌ 200 μＭ センスプライマー(フ゜ライマーAD) 0.25 μｌ 5 μＭ アンチセンスプライマー(フ゜ライマー#1) 0.25 μｌ 5 μＭ ＊template(DNA 0.2μg) 1 μｌ Expand HF DNAポリメラーゼミックス 0.25 μｌ 1.25ｕ／TEST 25 μｌ ＊EcoRV分解したＤＮＡを0.2μg／10μｌになるようにＴＥでとかしたもの

【００３６】上記の反応液25μｌを0.2ｍｌ反応チュー
ブ中で混合してＤＮＡ Thermal Cyclerにセットし、以
下のような温度設定によりステップダウンＰＣＲを行っ
た。

【００３７】 95℃、1分 1サイクル 95℃、30秒 74℃、15秒 70℃、3分 3サイクル 95℃、30秒 70℃、15秒 70℃、3分 3サイクル 95℃、30秒 66℃、15秒 70℃、3分 3サイクル 95℃、30秒 62℃、15秒 70℃、3分 3サイクル 95℃、30秒 58℃、15秒 70℃、3分 3サイクル 95℃、30秒 54℃、15秒 70℃、3分 20サイクル

【００３８】増幅産物を1.5％アガロース・ゲル電気泳
動で確認して2.0ｋｂのＤＮＡ断片を得た。このＤＮＡ
断片をアガロース・ゲル中より単離・精製し、ＴＡクロ
ーニングベクターｐＣＲＩＩ（インビトロジェン社）に
連結して大腸菌にクローニングした。

【００３９】そのクローンからプラスミドを調製してク
ローニングしたＤＮＡ断片の両末端の塩基配列を解析
し、本ＤＮＡ断片がアルコール・デヒドロゲナーゼＩと
相同な塩基配列及びその上流に翻訳開始コドンより上流
1829bpのＤＮＡ領域を含むことを確認した。

【００４０】この様にして、1829bpのアルコール・デヒ
ドロゲナーゼＩ遺伝子のプロモーターを取得した。その
全塩基配列を決定し、配列番号：１に示す。

【００４１】実施例３ コプロポルヒィリノーゲンIII
オキシダーゼのｃＤＮＡに対応するのプロモーター領域
の取得 実施例２と同様にして、コプロポルヒィリノーゲンIII
オキシダーゼ遺伝子のプロモーターを取得した。この場
合、アスペルギルスオリゼのゲノムＤＮＡを完全消化す
る際に、６ｂｐを認識して平滑末端に切断する制限酵素
としてＤｒａＩを用いた。

【００４２】また、アンチセンスプライマーとして、コ
プロポルヒィリノーゲンIIIオキシダーゼｃＤＮＡの塩
基配列から合成したプライマー＃２（5'-GATCGCTTTTCCG
CTGAGTATCTG-3'）を用いた。こうして得られた1887bpの
コプロポルヒィリノーゲンIIIオキシダーゼ遺伝子のプ
ロモーターの全塩基配列を配列番号：２に示す。

【００４３】実施例４ ヘキソース・トランスポーター
のｃＤＮＡに対応するのプロモーター領域の取得 実施例２と同様にして、ヘキソース・トランスポーター
遺伝子のプロモーターを取得した。この場合、アスペル
ギルスオリゼのゲノムＤＮＡを完全消化する際に、６ｂ
ｐを認識して平滑末端に切断する制限酵素としてＥｃｏ
ＲＶを用いた。

【００４４】また、アンチセンスプライマーとして、ヘ
キソース・トランスポーターｃＤＮＡの塩基配列から合
成したプライマー＃３（5'-CTGGGGTAGGAGTATCGGAGTGCT-
3'）を用いた。こうして得られた2091bpのヘキソース・
トランスポーター遺伝子のプロモーターの全塩基配列を
配列番号：３に示す。

【００４５】実施例５ ヒストンH4.1のcDNAに対するプ
ロモーター領域の取得 実施例２と同様にして、ヒストンH4.1遺伝子のプロモー
ターを取得した。この場合、アスペルギルスオリゼのゲ
ノムＤＮＡを完全消化する際に、６ｂｐを認識して平滑
末端に切断する制限酵素としてＳｓｐＩを用いた。

【００４６】また、アンチセンスプライマーとして、ヒ
ストンH4.1ｃＤＮＡの塩基配列から合成したプライマー
＃４（5'-AGGTTGAGTGGGAAAATGTGGAGA-3'）を用いた。こ
うして得られた1915bpのヒストンH4.1遺伝子のプロモー
ターの全塩基配列を配列番号：４に示す。

【００４７】実施例６ 40Sリボゾーム蛋白質S17のcDNA
に対するプロモーター領域の取得 実施例２と同様にして、40Sリボゾーム蛋白質S17遺伝子
のプロモーターを取得した。この場合、アスペルギルス
オリゼのゲノムＤＮＡを完全消化する際に、６ｂｐを認
識して平滑末端に切断する制限酵素としてＥｃｏＲＶを
用いた。

【００４８】また、アンチセンスプライマーとして、40
Sリボゾーム蛋白質S17 ｃＤＮＡの塩基配列から合成し
たプライマー＃５（5'-GCTTGGGGTAGTAACGCTCAATGA-3'）
を用いた。こうして得られた1569bpの40Sリボゾーム蛋
白質S17遺伝子のプロモーターの全塩基配列を配列番
号：５に示す。

【００４９】実施例７ 40Sリボゾーム蛋白質S28のcDNA
に対するプロモーター領域の取得 実施例２と同様にして、40Sリボゾーム蛋白質S28遺伝子
のプロモーターを取得した。この場合、アスペルギルス
オリゼのゲノムＤＮＡを完全消化する際に、６ｂｐを認
識して平滑末端に切断する制限酵素としてＳｓｐＩを用
いた。

【００５０】また、アンチセンスプライマーとして、40
Sリボゾーム蛋白質S28 ｃＤＮＡの塩基配列から合成し
たプライマー＃６（5'-AAGCACCACCGAAGGGAGAGGACT-3'）
を用いた。こうして得られた1631bpの40Sリボゾーム蛋
白質S28遺伝子のプロモーターの全塩基配列を配列番
号：６に示す。

【００５１】実施例８ アルコール・デヒドロゲナーゼ
I遺伝子プロモーターによる大腸菌由来β-グルクロニダ
ーゼのアスペルギルス・オリゼでの発現 (1) 大腸菌由来β-グルクロニダーゼ遺伝子発現カセッ
トの構築 実施例２で取得した約2.0 kbのDNA断片を鋳型にして、P
CRによりアルコール・デヒドロゲナーゼI遺伝子プロモ
ーターを含む1.0 kbのDNA断片を得た。PCR反応に用いた
プライマーは、 センスプライマー：5'-GTCGACGAACTATTACGGAGTACATAGC-
3' アンチセンスプライーマー：5'-GTCGACTTTGACTTTGGGATC
TTGTGTT-3' であった。

【００５２】この断片を制限酵素SalＩ消化後、大腸菌
由来β-グルクロニダーゼ遺伝子を有するプラスミドpBR
J275（4.5 kb、クロンテック社）のSalI部位に挿入し、
転写方向が順方向に挿入されたプラスミドpBRJAP（5.5
kb）を得た。

【００５３】次に、アスペルギルス・オリゼのエノラー
ゼ遺伝子を含む2.9-kb BglII断片（Biosci. Biotech. B
iochem., 60巻161-163頁,1996）からエノラーゼ遺伝子
のターミネーター領域0.6-kb EcoRV-HindIII断片をpBlu
escript（ストラタジーン社）のEcoRV-HindIII部位にサ
ブクローニングし、プラスミドpBET（3.6 kb）を得た。

【００５４】プラスミドpBRJAPからアルコール・デヒド
ロゲナーゼI遺伝子プロモーターとそれに続く大腸菌由
来β-グルクロニダーゼ遺伝子を含む2.8-kb PstI-EcoRI
断片を取得し、これをプラスミドpBETのPstI-EcoRI部位
に挿入して、大腸菌由来β-グルクロニダーゼ遺伝子発
現カセットを含むプラスミドpBAPETG（6.4 kb）を得
た。

【００５５】(2) 大腸菌由来β-グルクロニダーゼ遺伝
子発現カセットをアスペルギルス・オリゼへ導入するた
めのプラスミドの構築 プラスミドpBAPETGから制限酵素PstI及びHindIII消化に
より、3.4-kbの大腸菌由来β-グルクロニダーゼ遺伝子
発現カセットを取得して、アスペルギルス・オリゼの形
質転換マーカーとしてniaD遺伝子を有するプラスミドpN
3（特開平6-245777）のPstI-HindIII部位に挿入し、本
発現カセットをアスペルギルス・オリゼへ導入するため
のプラスミドpNAPETG（11.6 kb）を構築した。

【００５６】(3) 大腸菌由来β-グルクロニダーゼ遺伝
子のアスペルギルス・オリゼでの発現 プラスミドpNAPETGをUnkels らの方法（Mol. Gen. Gene
t., 218巻 99-104頁,1989）に従ってアスペルギルス・
オリゼniaD欠損株AO1.1に導入した。得られた形質転換
体を3%グルコース及び50 μg/ml 5-ブロモ-4-クロロ-3-
インドール-β-D-グルクロニドを含むCzapek-Doxプレー
ト上で30Cで10日間培養したところ、コロニーが青色を
呈した。対照として得た形質転換マーカーのみを有する
プラスミドpN3由来の形質転換体は青色を呈しなかっ
た。このことは大腸菌由来β-グルクロニダーゼ遺伝子
がアスペルギルス・オリゼで発現し、発現したβ-グル
クロニダーゼ酵素が基質5-ブロモ-4-クロロ-3-インドー
ル-β-D-グルクロニドに作用したことを示す。

【００５７】青色を示した形質転換体の１つを栄養培地
で生育させ集めた菌体を洗浄後、3%グルコースを含むCz
apek-Dox培地で8時間培養し、得られた菌体の無細胞抽
出液中のβ-グルクロニダーゼ活性をJeffersonらの方法
（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 83巻、8447-8451,
1986年）で測定したところ、比活性は78 nmol p-ニトロ
フェノール/min/mg-蛋白質であった。これに対し、pN3
由来形質転換体は、＜1nmol p-ニトロフェノール/min/m
g-蛋白質であった。

【００５８】

【発明の効果】本発明により、アスペルギルス・オリゼ
由来の新規なプロモーターが提供され、当該プロモータ
ー配列を含むベクターにより形質転換されたアスペルギ
ルス属糸状菌における外来蛋白質の生産が可能である。

【００５９】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１８２９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：アスペルギルス・オリゼ 配列の特徴 特徴を示す記号：promoter 配列 ATCAATTTAA AGGCTATAGA TGGCTAAGAC TTTGGGGGCG ATACAGATCG GAGTGTTGGA 60 AAGGGGCTTG CTTTCGTTTG ACAGCATAAG CTATCGTGGT GTTACAGCGG TAGCAAACAC 120 GTGGAACAGG AATCCTTATA TTGTCTAGAT CATAGACATG TCAAACATTT CAGACAATCC 180 CCTTCACTAG CAGACTACAC ACCCAAATGC TATCAATGAA GAAACGGACA GAATTATATG 240 TACTTCTACA GAGGGTGGAG GTCAGGTGGC TTCCGAAAGG TCCTTCGCCC GTAAGGTACT 300 CCTGCTAGGC TTTGAAAGTT TTAAAAACCC CGCTATCTGC CCTCAAAAAC TCTTTTGTCT 360 TTCTCAATTG ACAGGAGGGT CTGCGCGGAG GATGTTATTG TCTCCGTATC CATGAGTGCG 420 ATGAGAGAAG ACAGTAATGA TGACGACGAG AACAGAATCA CAAACAAGGT GATCCTACAG 480 ATGTTACTGA AGACACCATC TGCTCTGGGT CGTAAAATTG TCGCTGACTT TCAGGGAGAA 540 GTTCAAGTCT TTCTTTTATA GCAGGAACTG AACCGAATCA CCGACCTCAT GTTCCATACG 600 GCTCGCTGGT TAGTCGTCCG GATATGGGGA AGCTGCCGCT GTTAGGTATC AGGATTATAC 660 ATTAATTTGC GGTGCCTTCC ATATGTTGAG CTCCGTACGT CCGGGGTCAG CATGGGAAGA 720 ATTAGATGAA AGCGCAGCCA TCCCGCATCT CAGCAAATCC CGAGAAAAAG CAAGCAAGAA 780 GGAAGGGAGG GGGTTTAACG GAGTAGATGG GGCGAAGTGG CTGCCATGCT GAACTATTAC 840 GGAGTACATA GCGAGAAGTA CGAACATCCA CCAACACAGA AACGGAACTA GCGGCTCACA 900 ATTCCGCCTG AGGCATCCAT GCCATCCTTA AAACTGACTA GGGTTGCCAC TTCCATTGGC 960 CATCAGTCGA TCGAAATCAT CTGATTTGAA GGGTCTCGGT TGAAACGACA CTACAGTATC 1020 GAACGGGATT TGCTTCTGGA GTCTCCCAGC TTGAGGTCGA GTCTATCTTA TTCGGTGGTC 1080 TATCCCGAAA TTAAAAGCTT GACGTTTGAC AGGGAACCTT TAAAAAAAAA GAAAAGAAGA 1140 TCCTTTCTTC TTTCCCCGCA TGAGATACGG CCAATTTTGC TATATTTGGA AAGGCTTGGC 1200 CCAGGATCTG GACTCACTTG ACAGGGAAGC CTTTTCGGGG GAAGGGAAAG TCTGTGACTC 1260 TGTACGGGAG TACTACTTCG TACTTACCAC TTACTACTTA CTACTGACTT GTTAGTTTAA 1320 AATCGAAGGA AGTGCTTATG CGCCATCGTA CCGATCGGGC AATGAGCCTA ACCCCGATGA 1380 CGTCGGCCCA TGGATCTCCT GTTGTTGCCG TTCATTCGGT GGGCTGATAA TCTTCCAATG 1440 ATCCAAAAAT CGTTTGATCG TCTTGGAATA GCTTCGGTGT GTCTCACAGA TTCTCTTTCA 1500 TGGTTTTTTG ACCTTTCCTT TCCCTCTCTC CGGTGACTCG TTTTCCATAT GTCCGTCTAG 1560 ATGTGCGTGT GTATCACTAC AACACCATTC ACCTTCATTC ACCACTATTA TTCCCACCCT 1620 ATAATACGAC GTCATGCCTA TGAGATTCCC GGGTTGGATG ACCGTCACCC CACCCATTGC 1680 TTGGATTCTA GACTTCTATA AGAACTGTCC AGCGTCTCAC CATCAGCTTA CTTCACTTTC 1740 TCATCACTTC TCTCATCGTG TAAATCAACC CTAACTCCAC CGCAACCTCC TTTCTTCCCT 1800 TTCTTTCAAC ACAAGATCCC AAAGTCAAA 1829

【００６０】配列番号：2 配列の長さ：１８８７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：アスペルギルス・オリゼ 配列の特徴 特徴を示す記号：promoter 配列 TAAAGGGAAT ACGGAAAACC TGATATAAAC GCCTGCACAC ATGAAGAATC GCCGCAAGTC 60 TAACCAGCTC ATTCGCCTCA TACCGGAGTG GCTGGTCACA CACCCGGCCC TAAAACAAAA 120 CACATACTGA CGGCGAMGAG TTACATATCT TGGGAGAACT GCTTATCAGA GCTTAAAGAT 180 CGCCGAAGTG TTTTCCCCGG AATACCTAGA GACTATGTCA ATATGTGCCG AAAACCGCCT 240 TTGAAGAATA AAGCATACGT GATATAAAGA AAGCCATCTT CATCCTTGTG TTCTTCGTAG 300 ATGCTGCTCA TAAGTGCAGC TGTTGGTGGT AGCACCTCGT CGACGAAGAT GAAGATAGCC 360 TTCTCGGGAG ACAGTTTGAT GCGCTTGCGG ATAACATAGA CGAACTGCCC GACGGTAAGG 420 TCTGCAGGAA CAAGATACTT CTTCTTATCA ATAGTGGCGA TGTCCGACTT CTCGACTTTC 480 TCACAGATTA CCTACAAGTG AAACTCGAGT TAGCATTCTA AACAAGCGGT GAGTAGACAT 540 CTTGCTTCCC TGAGGAAGAA CAGCTCAAGG GCAAGAATCA TCTACCAAAG TACGGATCAG 600 ATAGAGTTGT GCGTACTGGA ATGCGATCAG CGTATTTCTG ACGGATACGC TCGGCTTCTG 660 CCTTGCGCTT CTCAAAGGGG TGCTCGTCCT TGAACTTGGA GCGCATATTG ATGGATCGAA 720 TCAGTTAATG GATACAACTA GGTCGGTTTA CTATGAGTAC TAGGTACATC AACGAGATAG 780 ACGTAGATGG TGTGAGGTGC AGAGTGATGT AAATGAGATG GTTGGTGTAA TAGGTGAACA 840 GTAGGAAGAA GGTGGATGAT GACAAAAGGG AGAGCAAAGC CCCGCGTCAT GGGTAGTACC 900 ACGGCTGATA AGGTCGTCAG GCAAGAGCGG ATCACGGGGT GGAGGCGGTG AGCAGCCCCA 960 CACGTGAGTC ACGATCAGCC TTGAGCCTTC AGGTGCCCCA AGTCATCCAT TTAATTTGAT 1020 TTGATTTATG TCATCTTCAT TAAACAGATA GCTCATGGAC ACACGTCATA TTCTCACGTG 1080 GGGAGCCTGG GTGATGTCCC GGTGATATCG GGTCTATAGT GCCCTACAAA GATGTACTAC 1140 TGAACTGAGT AGCTGTGGGT AGATGCGGTG TCCGCCTCCA CCTGATCAGC GGCTAGACTA 1200 CTGGTGCGCG CTGTCTCCAT AGAGGGCTCT TGATAGGCTC TGTTCCTGGA ACTTGTAGTC 1260 GGTATTACAA TCATAGTCAA GTTCCAAGAG TATATATAAT CCCAATTCTG TGATGACTCT 1320 CACTCAACTT AATCTCATTA CAAGCTGCAT TATGACAAGC CAACAACTTT ACATGCATGA 1380 TCAACTCGAT GGCCAATCCT CAACGCAATG CAAACCAGGC AAACTACTTA TCACAGCGTC 1440 ATCTGACTAA GCAGGAACTG GGACATGTGC CAAACAATGC AAACAGCGTA TATCCCGGAT 1500 ATTCTGACGA CGAGTGGTCC CATACAGTTC CAGTCCAGAG AAGGTAACCT CACGATTAGG 1560 CTACCTCTAT TTCTTGAGAT AGGTGGAGCC GTTTGAGAGA GCGTGCACCC ACTCATATCG 1620 TTCCGGTACC ACCTGATCAT TCCATCTATC AGCCAATTTT CAATTCCATC TTATAAAACT 1680 ATGACCTTGT CCCGGCAATA TATGCCTCTT CGGAGGTCAC TCTGCCACTT CTCAGCGCAG 1740 ACCAGACGCG CACCTTGCAA CTTTCAGAAT ACATTTCGCA GATACTCAGC GGAAAAGCGA 1800 TCCAGCGAAC CGAAATCTTT TGTCGTGTGG AGGCCATACC TCCGGCTGGC CATTGGTGTC 1860 CCATTCATCG GAGCTCTGAT ATATTCC 1887

【００６１】配列番号：3 配列の長さ：2091 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：アスペルギルス・オリゼ 配列の特徴 特徴を示す記号：promoter 配列 GCARGTAGAH TAGAACACAT TTGCCATCCC GTAGAACCGC CAATAGTAAA AWTTGCGGTG 60 CCATAAGGTC GTCGAGGAAC GTCGGTTGGT TTCCATGAGA TTGCCGCCGA GCAACAATGC 120 ACGACCCGGA TTTTGATTTA CTGATTATAG GATCGTTATT ATAGACAGGG AAGGAAAAAG 180 AAGCAAAAGA CAAGCAAAGA CTATCAAGAG ACATGAAGGC AAAAAAGCTA TACAAACACA 240 TGATTTAGGT TGCATGATGA CTTCCGTGAC TGTCATACCA CCGTGCAGTG GACCACGAAG 300 AGAGTCGCCT AGATGCTCGA CTTACTARAC GGGTTAACCG CTTCTGTTGA TCTGCATGCA 360 GACTTTTCCC GACTAGACTC AATCCAATAA GGCCGGCGTC CGTACGGCAT GCCGAKATAT 420 CCCGTGTAGG GTAACGCCGT GGTTGTCACC GGRGGCSGAA ATGGTCGAGT CTGAGAGATT 480 TTGCGTCGGC AAGTCTGCCG AGTGGGACCA CGGCCAACGC AGGAGAATAG GAAATCTCAG 540 CCGTTGTTTG TTGAGACTAA AGTTGCACCA KTCAACATCG GCTCTGCTGA AGTCTGCACC 600 TCTCAACAGT GGTTGGATGA AAATCCGACA GTGGGTCGGA CGCCAAGTGC CTTGATGCGA 660 CGATCCACCA GTCGAACGCA CCAGCAGAAA TTTTTCTCCT AAGTTAGGGC GAASTATTKC 720 GTATGTGACG TCGAGTTGAC CGAATCGGCA CACCGAGTCA CAAACGGATC ACGNTGCCGA 780 CTTCTCGGAC GGCCGATAGC TTCGGAACGN TTCCAATGAC ATACATACAC AGCAGAAGAC 840 ATGCATGGGA CATTCTTGTA GGTATTGTAG TCAGATGATG TTACCTTCCA CCCAATATTG 900 ATTTGTAACC TTCGTATCCA TATTATTTTT TGAACCAAGA CTACAGGGTA TTGGCACAGA 960 GTTCGGATGC TGCATGAGTT GACTTTATCG GCATCATTAT TACCTTTCAC TACCCGACTC 1020 GGGATCGCCC AGAAATTTTT TTTCTTAGGG TGGATCCATT TAGATCTGCC ATGACTCTTG 1080 GTACCAGCTC GGAACCAGAA AACTTTACTG TGTGTCTTCA GGGGAGCTAT AATTAAATTT 1140 AGGGCAAGGG GGAAAAAAAA TGAGTGAGGC AGATTTGAAT GGGCCTCGTT AACATCGTTA 1200 AAACAACTCT GTTGAGAAAG GAGTCAAGGG ATGTAGTGGA TCGTCAAATG TAAACAATTG 1260 TCCGTAAATA CCCCCGTACA CACACCAACA GAGTAATTGT GCGTGTGAAT CCTGAGAAGT 1320 ATGTGGCAAA GGAATTAAGC GTGTAAACAG AGTCAGTGAA CTAACTATTA CTACCACCGT 1380 GAGACAACAC GGGAAAACAA ACTACGTAGT ATCTACAGTG TGGAATGGAA TAATCGAGAT 1440 ACTACCATAG GTACTACAAA CTTGAATTTA GAGGATTGGG TAATAAAAAA TAAAATAAAT 1500 AAAAATAAAA AATAAAAACC AAACCAGACC ATCATGAGAC GCACATGACG TCCCCGTGAC 1560 TACTTTGGTA GAATTCCAGA CTCTCTCAAG TTCGCTTTTC ACGATAGCAA GACGGCGAGC 1620 CCGGCAACGA ACCTCAACCC ATCCATGCCA ACGATAACTT TACTCTTTTG GTCGTCTCCA 1680 GGCACATCCC CACTGTCTCC CCACTCCAAG AGACTCTGTC GAAGCATCCA AGAACACACT 1740 CCGCCCCCCT AGCATGCGAC TATCCTTCCT GGTTCGGCCC TTGAGATCTG GGCCCCCGTT 1800 TTTCTTGCCA TGGTCCCTAC CCCGAGAATG GGGTGTCCTC CAATCCCTGG GATGGAGGCG 1860 ACGTTTTGTC TTGCCGACGT ATGGACCGTT CATGTAAAAC CTTTCATTTA ATTTTCAATT 1920 AAGCGCACTA AATAATTCCA CGATGCGGTT ATTAAGTTCC GACTCTGGGT TATATATCTC 1980 CGCGCTTCCC ACGTTGCCTC CCCGGTTTCC TTCTCTTTCT CATCCCATCT TTCATCCCTT 2040 CACCAATCTG TCTAAGGATT CGTTCGACCA TTGAGGAATC CATCCATCAT T 2091

【００６２】配列番号：4 配列の長さ：1915 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：アスペルギルス・オリゼ 配列の特徴 特徴を示す記号：promoter 配列 ATTCTATAGA CTTGGTAGAA GTAGAACCTT CCCTGGTCGT ATATGGAGTA CCGAACGCGG 60 TGGGCAGTAC ACCAGCAACA CCACCAGCGT ACACACGCTC AACAGTTCGC GTCGCTAAAG 120 GCGCGCGACC GCGATAGTGG CATACTTCTT ACAAGAGAAA ACAGCGCGAG ATTAAGTCAC 180 GACAGTAATG AATTGGATTA TTCGTCATAG AATCTGCATT TCGAATCTAT GCCATCCGGT 240 GGCAATTCAT AGAGAATACC ACTTGGTCAA GTAAAATTTC TTAATGTACA TGCTCGGATG 300 CATCCCATGA GATCCAATCC ACTCAGCCGC GTCGTCGGCA GCCTACTATT TATTGCGCAG 360 CAAAACGAAA ACTAATCCCA GTGCCGAAAC CCATTGATAT TCGCAAATGA AAAAAAAGAA 420 CCCATCATGT ATCGCCAGTC GTGAAAAAGA AATAAAACCC CTAATCGCCT ACCCAGAGAC 480 AACCAGAAAA ACCGGACTCA TTAGAGAATA ATCTAAGAGC GCTCACCACG GAGACGGCGG 540 GCGAGCTGGA TGTCCTTGGA CTGGATGGTA ACACGCTTGG CGTGGATGGC GCAGAGGTTG 600 GTGTCCTCGA AAAGAGAGAC GAGGTAGGCC TCAACGGACT CCTGGAGAGC ACCGATGGCG 660 GAGGACTGGA AACGGAGGTC GGACTTGAAA TCCTGGGCGA TTTCACGGAC CAGACGCTGG 720 AAGGGGAGCT TGCGGATCAG AAGCTCGGTG GACTTCTGGT AGCGACGGAT CTCACGGAGA 780 GCGACGGTAC CTTTTCATGA CTGTTAGTGA TGACGCGATG ATGGTTTGCC ACATCATAAG 840 ATAACTTACC AGGCTTGTAA CGGTGAGGCT TCTTGACACC TCCGGTAGAG GGAGCAGCCT 900 TACGGGCGGC CTTGGAGGCG AGCTGCTTAC GAGGGGCCTT GCCACCAGTG GACTTACCTG 960 GATGGATGTT AGTGATGATG ATTCAAGACG CGATGTATCA CTCATGGGGA CGCGACCCTG 1020 ACGCGGGGCG ACGACACCAC AAGAGAAAGG ATAGTAAGGT TAAGACTTAC GGGCAGTCTG 1080 CTTAGTTCTG GCCATCTTTA GAGATAAGGT TTGATGGATT TAGTCGACTT TGAGATGAAA 1140 ATAGATAAAA GTCGATGGTT GTCGATGATA ATGTGTTGGC GGATGAGGAG ATGAAAGAAG 1200 GATGGAGGAG GCGGGTGGGG GAAGGTATTT GTAGTAAGCG AAGGGTGGGT GGTGATCTGA 1260 TGGCGTTGCC AGCAATTTGG GTGGCCTTAG CGTCGTTTCC CTTTGATCAA AAAAGCGCTC 1320 GGAAAGCAGC ACACCATAAG CCGTGATTTC GGGGGTCACT TTTGGCTGCA GAATCAAAGG 1380 GTTACCTTGC GGGCGGTCAA GGAATCCGCG CCCAAGGCAG GAATGAAGTG TGGTCTGTGC 1440 GTTAAGCGAG TGACGGACCA ATAGAATCGT AGGATCACTG ATCTAGCCTG TCTCCCTACC 1500 ACGTCTTGAT CCCAACCACC GGTAAGGTAT GTGAAGTAAT TCAGTAGATC AAAATGAAAG 1560 TTGGTATGCT CAGGAATATC TCTGGTCAAT TTTGATCCCT GATCTCGGTG GTTCAGAGGC 1620 ATTCCGTGAG GATCAAAGTT GATCGTAGCG GAATCATCAC TTCTCGGTCA CGTTGCCGAC 1680 AGATCAAACC CGCCGGGAGG ATCCTCGTCT CTCATTGGTC GATCCTCTTG TAGCGCGTGA 1740 TTCCAACGCC CTCCCCGCGC TCTTCCTTTT CCTATACAAA TATCACCCGT CCCATGGCAG 1800 CTGTCCCAAT CTTTCCCTTC CCATCTCTCT CACATCTGTC ATCCAATTAA CCACCTATCT 1860 CTCCACATTT TCCCACTCAA CCTTAAACAA GTTAACTCTT TAATCAACCA TCAAT 1915

【００６３】配列番号：5 配列の長さ：1569 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：アスペルギルス・オリゼ 配列の特徴 特徴を示す記号：promoter 配列 ATCGGAGGTC TTGGGCTCAA TGAAGTGAAT ATATAGTGGA GGGCTCTCCG CACTACTTTG 60 TTGAAAGAYA ATCGATACTT GCTCGATTTA GTAGTCAAAG CGCCGAACTG AGCCTTTCCA 120 TGGCAATAGT CAAATGAAAT AACTACTGGA CTAGATCTCA TCATCAAACC ATTGTATGTT 180 TAGCTCACGG GGATGTTGTT CCTCGGTTAC TACCCGCTTT GTAGAGTCAT GGAGCAGAAT 240 TCCGAAATGA GTTATAGTGG GCAAAAAACA TTATTCTTAT GTTGCCAGAA AAAAATACTA 300 CGTTTTTCTC CTTCAACCAT TGTCTTGCGA GTCAACTAGC AGCATATCAG ACTGTGACAG 360 TAGTCCGTTG CCCTCACCGG CCTATCGGAC GAGGTGTTTT TGTGTTGCTA CCCTTCTGGG 420 TTTAGTGAGT TGGACCAGAT TTTGGTAAAT GTTGCACGTG ACTCGGGTCA CATGAGGAGC 480 TCTTCAAAGA GTGCGCTATT CCTGAACAGG TACTCTTGAC GCTAGGCAAT TTCAGGCACA 540 ACTCAAGGCG CCCGCAAGTG CCCGCTCAGT GGCCTACTCG AAAATACCAA CTCTTTGGGT 600 GTGGTTCGCT ATAAGGGCTT TCGCCTTTAC ATAGTGACAT GAATAACCAC GGAGTATATA 660 GGTCCTTGGC TAATCGTGCG AAATCCAAGT ATCGATTCAA CTGCATGATT GTGATAGCTT 720 GGTAGAGTAG CATAGCGGCA AGAGCAATCT CCGAGATGGC TAATATGAAG AATTTTACAA 780 GATACTCGGA CATAAGTCTG CAGAGGTGAC TTCTCAAAGT TCTTTCCTGG AGGCTGTTCA 840 ACGCGATGCC ATTCTCTTGA CCCCACATTG ATTGAATACG TCCCCCACAG CTTCACTGGA 900 ACATGTTGGC TTGTGCCAAG TGAGAGCAAT CGTACCTCAT CTCATCATAT ATGGATATAT 960 GTCGTATACC TGCTTCCGAA GGTTGAAAGT CAAGGATGGA AAAGAAAAAG GAGGAGAGTT 1020 CTAGATTCAT GCGGGGGAGT GGTTGTGGTG TTACTAACTT ACTCCGTACT GATCCTACGA 1080 CTGCCAGGTG ATATTGATAT GAATATCGAA TGATGATTGG GTGGATGGGG TTTGTTCCGA 1140 AAGAGGGTTA GTTCGTTGTG GAAGGGTAGA TTTTACGATT GGAAGATAAT GTGGGATAGG 1200 GCTAACGCGG CCTGCCTGAA CCCTCAGGCC GGAGCCGGGT GTTACATACT GACCGCCCAG 1260 CGGCTGAGTT AATGAGAACA TACACATGAT TCGAAGTTTC AGGTCGATGG TGGAGGGGAT 1320 ACATTCAAAA TTAGTACTTA AGAGAATTAA ATACGAGGCT AATGAGGTTA ACTGCTCTAC 1380 TTACCCCACG AGAGGAGGAA AAACTGCACC ATCATCGTTT GGTGGTGTTG GTCATGTGAT 1440 CTTCAATCAC CTGACTCTGA ACCCGTTAAG CGAGACTTGG CAGAAATCGG AATGCACACC 1500 AAAATTGCCC ATCCTCACAA CCACCCGAAC AACATCGCAG CTTTCGAGGT CGACAACTAA 1560 TACGCCAAA 1569

【００６４】配列番号：6 配列の長さ：1631 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：アスペルギルス・オリゼ 配列の特徴 特徴を示す記号：promoter 配列 CAGGTATTTC CTTTAGTCGG TCCAGCCTTA CCATTTCCCT GCATTGAATG ACAACACTGT 60 CGCATTTTTT ATACGCCAAT AATAGCCATG GCCATTCTCT CACAACATCA CAGGTCAAGC 120 AGACTGCAAG TGGTTTCTTG TGGTGGCTGT ACTATCAAAA CGATAGAATT CCCATTTGCT 180 TCGTTGGCGG TAGTAACCCC CACCAATGCT TTGTGGACTT GATGAAGTGT ACACGTCCAC 240 TGCCTGTCAA AATGGCACGT AATACATTCC AATCCACAGG CTAGAAGGCT TGTGCGGTGT 300 CCACAGACGA TCAATCCTCA TAGGTTTCTG ACAGTCTCAC CCAGTGTTAG CCGTCGATGC 360 GGTCTCCGTG GTTATGCTTT CATTATCACT CCATATGTCT CTGCTCTCCC TCTCCACTGC 420 GCGCATAGCT TGAGCAACCT CCTCAAGCTT AGCTACCACA TCCAATACGC CGTTGTTGAC 480 CCTATCGAAA TAGCGATCAT TCGCTTCACG CCTCTCGCGT GCCAGAAGAA TGTCCTTTTC 540 TGTTTCCTCA TCTAGATTCC TCTGGGAGGC ATCATCCGTT GCGGTTTGTT CTCCCGTGTG 600 ACTAGTGGCA GGAGAGGATG CTCTTGGTCT TGATTGACTC TTGGTAGCTG CATTCTTCGG 660 ATCAACTACC TCATCAGCTT CGCTTCGAGC CCAGGCCTGG GCAAGCCTCA GCTGCTTTGT 720 TCGCAGGTCT TCAAGGGCCT CAGAGTGCTT TTCGCCAAAG ACATGTTCAC TAGCTACCGC 780 ACTCAGCTCG ACCTCTGACA AGGCATTCTG CATTTCTTGC CAGATGGCGT CCGAGCGATC 840 AAGTTCGCCT TTTGATTGTG TACGAGATAG AAAGGGGGAG AGAGAGCCTG GGGTCTCAAG 900 GCCGCCTTGC TGGCGCGAGG AACGATTCCG CTGCAGCGCA GGACGCTGAA CCCCTCCACC 960 GGGAGAAACC GAGGGCACCG GAGGTGTGAG AGATATGTTA GATCCATTAT GGGAAGTGGG 1020 TGGACCTTGA AAAAGAACAG GGGGAGGGAG ACGCGCAGAG GGAATTTTCC TCAGATTCTC 1080 TAATTTTGGA GCCGCATCCA TGGTGTTCGC GAAGTATACG TTGTTGGCAG GCGAACTAAA 1140 ACAGAACAAG CTCCAATTGA CAGCCGTAAA TAAAGGGAGC TTAATCTCCG CATACAATCA 1200 ATGCTGACGG TCACTGATAA GGGGCTTATC GATATCGGAG AACGGCGGAA GTTGTTCCGA 1260 TCCCGTGCCT CGCTTAGCGG CCGATTAGGG CGGAGCGCGC ACAGCAGAAC ATTTTGGTGA 1320 GCCTTCAGCG ACACCGCCGG CCGTGAAAGG AACCCTTCGA CTCTCGACAA CCATCCCCAT 1380 CAGGCCTTTC GGCAATCTAT ATCAGTCGGT ATGTATATTG TTGCTGCTAT TTTTTGATGA 1440 AATATATTCG TGTCTAGGGA CTCCCGTTCA ACATCGAATC TTTTGATTTT TGATTTTCCA 1500 CCGCCCCGGC CATGTACTTC TGAAATCCAC GTCCCCTCCA CAAATCACGA AATCACCAAG 1560 CATCAGATTG CCACAGCAAG ATCTAACGCA TTCTTCTTCT ACAGACCGTC CTTCGAACAT 1620 AATCCGCCAA G 1631

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のグルコース存在下で発現するプロモー
ターの単離法を示す図である。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列番号：１乃至配列番号：６に示した塩
   基配列で示されるＤＮＡ。
2. 【請求項２】請求項１記載のＤＮＡとストリンジェント
   な条件下でハイブリダイズするＤＮＡ。
3. 【請求項３】アスペルギルス属由来である請求項１又は
   請求項２記載のプロモーター。
4. 【請求項４】アスペルギルス・オリゼ由来である請求項
   １又は請求項２記載のプロモーター。
5. 【請求項５】アスペルギルス・オリゼのアルコール・デ
   ヒドロゲナーゼＩ（alcohol dehydrogenase Ｉ）遺伝
   子、コプロポルヒィリノーゲンIIIオキシダーゼ（copro
   porphyrinogen III oxidase）遺伝子、ヘキソース・ト
   ランスポーター（hexose transporter）遺伝子、ヒスト
   ンH4.1（histon H4.1）遺伝子、40Sリボゾーム蛋白質S1
   7（40S ribosomal protein S17）遺伝子、40Sリボゾー
   ム蛋白質S28（40S ribosomal protein S28）遺伝子の何
   れかより選ばれた請求項４記載のプロモーター。