JPH11218507A - 電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状態判定法及び透析進行状況の判定法 - Google Patents
電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状態判定法及び透析進行状況の判定法Info
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- JPH11218507A JPH11218507A JP10036709A JP3670998A JPH11218507A JP H11218507 A JPH11218507 A JP H11218507A JP 10036709 A JP10036709 A JP 10036709A JP 3670998 A JP3670998 A JP 3670998A JP H11218507 A JPH11218507 A JP H11218507A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 短時間で正確に人の血漿の酸化還元状態の判
定を行うことの出来る方法を提供する。腎機能の評価
し、透析の必要性、透析時間の評価を予測判定すること
のできる電子スピン共鳴（ＥＳＲ）を用いた法を提供す
る。 【構成】 人の血漿を対象とし、スピントラップ剤のＰ
ＢＮを添加し、血漿中に生成するヒドロキシルラジカル
を捕捉し、これを安定なスピンアダクト（ＰＢＮ−Ｏ
Ｈ）に返還し、ＥＳＲで測定する。腎疾患の判定あるい
は診断、透析の必要性、透析終了のタイミング、透析機
材の有用性などの判定ができる。
定を行うことの出来る方法を提供する。腎機能の評価
し、透析の必要性、透析時間の評価を予測判定すること
のできる電子スピン共鳴（ＥＳＲ）を用いた法を提供す
る。 【構成】 人の血漿を対象とし、スピントラップ剤のＰ
ＢＮを添加し、血漿中に生成するヒドロキシルラジカル
を捕捉し、これを安定なスピンアダクト（ＰＢＮ−Ｏ
Ｈ）に返還し、ＥＳＲで測定する。腎疾患の判定あるい
は診断、透析の必要性、透析終了のタイミング、透析機
材の有用性などの判定ができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、電子スピン共鳴を用い
て人の血漿の酸化還元状態を短時間で正確に判定するこ
とのできる判定法及びそれに基づく透析の進行状況判定
法に関するものである。
て人の血漿の酸化還元状態を短時間で正確に判定するこ
とのできる判定法及びそれに基づく透析の進行状況判定
法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】人の血漿は、恒常性を保つ機能を備えて
いるが、体外に取り出されると、わずかな量の酸素が混
入することによって酸化反応が進行する。その酸化劣化
反応の詳細については抗酸化剤（ビタミンＣやＥ）の存
在もあり不明な点が多いが、酸化反応が進むと血漿中の
過酸化物値が上昇することが知られている。過酸化物の
量は酸化反応の指標となるといわれているが、過酸化物
値がどのような酸化過程を経て上昇するかについての報
告はない。一方、腎不全によって体内における過酸化物
の量の変化から活性酸素の生成量が変化すると報告され
ている。しかし、直接それを測定したとの報告はない。
いるが、体外に取り出されると、わずかな量の酸素が混
入することによって酸化反応が進行する。その酸化劣化
反応の詳細については抗酸化剤（ビタミンＣやＥ）の存
在もあり不明な点が多いが、酸化反応が進むと血漿中の
過酸化物値が上昇することが知られている。過酸化物の
量は酸化反応の指標となるといわれているが、過酸化物
値がどのような酸化過程を経て上昇するかについての報
告はない。一方、腎不全によって体内における過酸化物
の量の変化から活性酸素の生成量が変化すると報告され
ている。しかし、直接それを測定したとの報告はない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】腎不全の患者にとっ
て、透析の必要性の判定、あるいは、透析時の透析時間
の判断などはきわめて重要である。しかしながら、従来
は腎不全の症状を判定することは、各種検査値を医師が
総合的に判断して始めて可能となる極めて高度の判断技
術であった。また、透析時に透析の進行状況を的確に把
握し、透析の終了を正確に判断する方法は存在しなかっ
た。そのため、透析にあたっては、軽症の患者も重傷の
患者も必要十分な時間透析を続ける必要があった。
て、透析の必要性の判定、あるいは、透析時の透析時間
の判断などはきわめて重要である。しかしながら、従来
は腎不全の症状を判定することは、各種検査値を医師が
総合的に判断して始めて可能となる極めて高度の判断技
術であった。また、透析時に透析の進行状況を的確に把
握し、透析の終了を正確に判断する方法は存在しなかっ
た。そのため、透析にあたっては、軽症の患者も重傷の
患者も必要十分な時間透析を続ける必要があった。
【０００４】本発明は上述した問題点を解決しようとす
るもので、その第１の目的は、短時間で正確に血漿の酸
化還元状態を判定することのできる電子スピン共鳴（Ｅ
ＳＲ）を用いた人の血漿の酸化還元状態の判定法を提供
することにある。
るもので、その第１の目的は、短時間で正確に血漿の酸
化還元状態を判定することのできる電子スピン共鳴（Ｅ
ＳＲ）を用いた人の血漿の酸化還元状態の判定法を提供
することにある。
【０００５】また、本発明の第２の目的は、透析の進行
状況を短時間で正確に判定することのできるＥＳＲを用
いた透析の進行状況判定方法を提供することにある。
状況を短時間で正確に判定することのできるＥＳＲを用
いた透析の進行状況判定方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】この目的を達成するた
め、本発明の電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状
態判定法は、人の血漿を酸素存在下においた際に生成す
る活性酸素をスピントラップ剤によって捕捉し、生成し
たスピンアダクトの量を電子スピン共鳴装置を用いて測
定することを特徴としている。更に、本発明の電子スピ
ン共鳴を用いた透析進行状況の判定法は、透析患者の血
漿を酸素存在下においた際に生成する活性酸素をスピン
トラップ剤によって捕捉し、生成したスピンアダクトの
量を電子スピン共鳴装置を用いて測定することことを特
徴としている。
め、本発明の電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状
態判定法は、人の血漿を酸素存在下においた際に生成す
る活性酸素をスピントラップ剤によって捕捉し、生成し
たスピンアダクトの量を電子スピン共鳴装置を用いて測
定することを特徴としている。更に、本発明の電子スピ
ン共鳴を用いた透析進行状況の判定法は、透析患者の血
漿を酸素存在下においた際に生成する活性酸素をスピン
トラップ剤によって捕捉し、生成したスピンアダクトの
量を電子スピン共鳴装置を用いて測定することことを特
徴としている。
【作用】本発明者は、人の血漿中で酸化劣化を惹起する
と考えられる活性酸素の生成挙動を調べることにより、
その血漿の酸化還元状態を判定できることを見出した。
すなわち、人の血漿を酸素存在下で保存すると、活性酸
素が生成され、短時間で消去されて行くが、この血漿に
おける活性酸素の生成能と活性酸素の消去能（抗酸化
力）を評価することにより、循環器系の疾患特に腎機能
の不全を伴う疾患を予測判定できることを見出した。
と考えられる活性酸素の生成挙動を調べることにより、
その血漿の酸化還元状態を判定できることを見出した。
すなわち、人の血漿を酸素存在下で保存すると、活性酸
素が生成され、短時間で消去されて行くが、この血漿に
おける活性酸素の生成能と活性酸素の消去能（抗酸化
力）を評価することにより、循環器系の疾患特に腎機能
の不全を伴う疾患を予測判定できることを見出した。
【０００７】人の血漿中で生成される活性酸素は寿命が
短く、そのままではその量を測定することが困難である
が、スピントラップ剤を添加し、捕捉して生成したスピ
ンアダクトは安定で、その量をＥＳＲ装置によって測定
することができる。
短く、そのままではその量を測定することが困難である
が、スピントラップ剤を添加し、捕捉して生成したスピ
ンアダクトは安定で、その量をＥＳＲ装置によって測定
することができる。
【０００８】スピントラップ剤には、加熱しても比較的
安定なスピンアダクトを生成するＰＢＮ（α-phenyl-N-
t-buthylnitrone)等を使用することができる。また、ス
ピンアダクトの量は４-OXO-Tempoのような安定なラジカ
ルを標準物質として定量することができる。
安定なスピンアダクトを生成するＰＢＮ（α-phenyl-N-
t-buthylnitrone)等を使用することができる。また、ス
ピンアダクトの量は４-OXO-Tempoのような安定なラジカ
ルを標準物質として定量することができる。
【０００９】人の血漿の持つ活性酸素の生成能力と消去
能力の総合的な評価は、ＥＳＲ装置によって活性酸素の
生成挙動を調べることにより可能である。例えば、酸素
存在下、常温よりも高いある一定温度（例えば６０℃）
で一定保存時間（例えば２０分）後のスピンアダクト量
（活性酸素生成活性と定義する）を求めることにより評
価が可能である。また、生成の傾きから評価することが
でき、生成の傾きが少ないほど活性酸素生成活性は低
い。この活性酸素生成活性の値は、体内に抗酸化物値が
増加すると、すなわち活性酸素消去能力が高まると減少
する。健常人の血漿では、一定の活性酸素生成活性を示
すが、腎不全患者では生成活性が低下することが確認さ
れた。
能力の総合的な評価は、ＥＳＲ装置によって活性酸素の
生成挙動を調べることにより可能である。例えば、酸素
存在下、常温よりも高いある一定温度（例えば６０℃）
で一定保存時間（例えば２０分）後のスピンアダクト量
（活性酸素生成活性と定義する）を求めることにより評
価が可能である。また、生成の傾きから評価することが
でき、生成の傾きが少ないほど活性酸素生成活性は低
い。この活性酸素生成活性の値は、体内に抗酸化物値が
増加すると、すなわち活性酸素消去能力が高まると減少
する。健常人の血漿では、一定の活性酸素生成活性を示
すが、腎不全患者では生成活性が低下することが確認さ
れた。
【実施例】［実施例１］腎不全患者と健常人から血液を
ＥＤＴＡ採血し、血漿を分離した後、生理食塩水にて１
０倍に希釈し、検体とする。各検体を５本の試験管に３
００μｌずつ分取した後、各試験管にＰＢＮ（０．５Ｍ
エタノール）を１００μｌ加えて密閉下で６０℃に加熱
保存する。そして、０分、３０分、４０分、６０分、８
０分経過時に、1本ずつ取り出してＥＳＲ装置の空胴共
振器内に挿入してＥＳＲ測定を行った。試験管のサンプ
ル上部空間に存在する空気中の酸素との反応でサンプル
中に発生してくる活性酸素は、ＰＢＮによってトラップ
され、そのスピンアダクト量がＥＳＲ装置により測定さ
れる。濃度既知の標準試料についての信号強度を参照す
ることにより、定量測定が行われた。
ＥＤＴＡ採血し、血漿を分離した後、生理食塩水にて１
０倍に希釈し、検体とする。各検体を５本の試験管に３
００μｌずつ分取した後、各試験管にＰＢＮ（０．５Ｍ
エタノール）を１００μｌ加えて密閉下で６０℃に加熱
保存する。そして、０分、３０分、４０分、６０分、８
０分経過時に、1本ずつ取り出してＥＳＲ装置の空胴共
振器内に挿入してＥＳＲ測定を行った。試験管のサンプ
ル上部空間に存在する空気中の酸素との反応でサンプル
中に発生してくる活性酸素は、ＰＢＮによってトラップ
され、そのスピンアダクト量がＥＳＲ装置により測定さ
れる。濃度既知の標準試料についての信号強度を参照す
ることにより、定量測定が行われた。
【００１０】測定は、日本電子株式会社製電子スピン共
鳴装置ＪＥＳ−ＲＥ１Ｘを用い、 磁場：３３５０±１００Ｇauss 磁場変調：１００ｋＨz，１Ｇauss マイクロ波出力：５ｍＷ 増幅率：２×１０3 応答時間：１秒 掃引時間：８分 の条件で行った。図１ａは、ＰＢＮをトラップ剤とした
場合に人の血漿より得られるＥＳＲスペルトルを示す。
一方、図１ｂ，ｃ，ｄは、Fenton反応系、HPX−XOD反応
系、HPX−XOD反応系＋Fe2+について、ＰＢＮをトラップ
剤として測定したＥＳＲスペクトルをそれぞれ示す。Fe
nton反応系とHPX−XOD反応系＋Fe2+からはヒドロキシル
ラジカル由来のスペクトルが得られ、HPX−XOD反応系か
らはスーパーオキシドラジカル由来のスペクトルが得ら
れる。***したピークの間隔などの比較から、図１ａの
人の血漿についてのスペクトルは、図１ｂ，ｄのヒドロ
キシルラジカル由来のスペクトルと一致することが確認
された。従って、人の血漿の場合に生成してくる活性酸
素はヒドロキシルラジカルであることが確かめられた。
図２は、上述したＥＳＲ測定により腎不全患者と健常者
について得られたスピンアダクト量の経時的な変化を示
す。この図より、腎不全患者と健常者の血漿を酸素存在
下で６０℃の温度に維持すると、両者とも直後からヒド
ロキシルラジカルが顕著に生成し始め、時間の経過とと
もにそのスピンアダクト量は直線的に増加することがわ
かる。そして、腎不全患者の場合は、健常者の場合に比
べ増加の傾きが顕著に小さく、２０分経過時のスピンア
ダクト量(先に定義した活性酸素生成活性値)も健常者に
比べて小さな値を取る。
鳴装置ＪＥＳ−ＲＥ１Ｘを用い、 磁場：３３５０±１００Ｇauss 磁場変調：１００ｋＨz，１Ｇauss マイクロ波出力：５ｍＷ 増幅率：２×１０3 応答時間：１秒 掃引時間：８分 の条件で行った。図１ａは、ＰＢＮをトラップ剤とした
場合に人の血漿より得られるＥＳＲスペルトルを示す。
一方、図１ｂ，ｃ，ｄは、Fenton反応系、HPX−XOD反応
系、HPX−XOD反応系＋Fe2+について、ＰＢＮをトラップ
剤として測定したＥＳＲスペクトルをそれぞれ示す。Fe
nton反応系とHPX−XOD反応系＋Fe2+からはヒドロキシル
ラジカル由来のスペクトルが得られ、HPX−XOD反応系か
らはスーパーオキシドラジカル由来のスペクトルが得ら
れる。***したピークの間隔などの比較から、図１ａの
人の血漿についてのスペクトルは、図１ｂ，ｄのヒドロ
キシルラジカル由来のスペクトルと一致することが確認
された。従って、人の血漿の場合に生成してくる活性酸
素はヒドロキシルラジカルであることが確かめられた。
図２は、上述したＥＳＲ測定により腎不全患者と健常者
について得られたスピンアダクト量の経時的な変化を示
す。この図より、腎不全患者と健常者の血漿を酸素存在
下で６０℃の温度に維持すると、両者とも直後からヒド
ロキシルラジカルが顕著に生成し始め、時間の経過とと
もにそのスピンアダクト量は直線的に増加することがわ
かる。そして、腎不全患者の場合は、健常者の場合に比
べ増加の傾きが顕著に小さく、２０分経過時のスピンア
ダクト量(先に定義した活性酸素生成活性値)も健常者に
比べて小さな値を取る。
【００１１】このことから、スピンアダクト量を経時的
に測定し、その増加の傾きを求めて適宜に選ばれた境界
値と比較すれば、健常者と腎不全患者との判別が可能で
あることが分かる。 ［実施例２］図３は、腎不全患者の透析前(before HD)
と後(after HD)の血漿(検体数n=15)及び健常者(検体数
n=11)について、図２と同様のＥＳＲ測定により求めら
れた活性酸素生成活性値(２０分経過時のスピンアダク
ト量)を示すグラフである。この図は、透析前に健常者
と大きな差があった腎不全患者の活性酸素生成活性値
が、透析後に健常人の値に近づき改善されていることを
示している。この結果は、血漿中の活性酸素生成能の高
い／低いの違いは、血漿中のヒドロキシルラジカル消去
活性物質の減少／上昇に対応することを示唆している。
透析を行なうとヒドロキシルラジカル消去活性物質が減
少して消去活性が低下し、ヒドロキシルラジカル生成能
が増すと理解することによって説明が可能である。人の
体内では、活性酸素を有効に利用しており、免疫能との
関連でも、一定量のヒドロキシルラジカル生成は不可欠
である。これらの測定及び検討結果から、透析中に、適
宜な時間間隔で患者の血液を採取し、活性酸素生成活性
値を測定し、その測定値を適宜に設定された境界値と比
較することにより、透析を終了するための判断材料とす
ることが出来ることが分かる。 ［実施例３］図４は、透析膜の異なる透析機材(ＣＬ−
ＥＥ及びその他)を用いて透析を行なった場合の血漿の
活性酸素生成活性を求めた結果である。右端は健常者の
値を示している。
に測定し、その増加の傾きを求めて適宜に選ばれた境界
値と比較すれば、健常者と腎不全患者との判別が可能で
あることが分かる。 ［実施例２］図３は、腎不全患者の透析前(before HD)
と後(after HD)の血漿(検体数n=15)及び健常者(検体数
n=11)について、図２と同様のＥＳＲ測定により求めら
れた活性酸素生成活性値(２０分経過時のスピンアダク
ト量)を示すグラフである。この図は、透析前に健常者
と大きな差があった腎不全患者の活性酸素生成活性値
が、透析後に健常人の値に近づき改善されていることを
示している。この結果は、血漿中の活性酸素生成能の高
い／低いの違いは、血漿中のヒドロキシルラジカル消去
活性物質の減少／上昇に対応することを示唆している。
透析を行なうとヒドロキシルラジカル消去活性物質が減
少して消去活性が低下し、ヒドロキシルラジカル生成能
が増すと理解することによって説明が可能である。人の
体内では、活性酸素を有効に利用しており、免疫能との
関連でも、一定量のヒドロキシルラジカル生成は不可欠
である。これらの測定及び検討結果から、透析中に、適
宜な時間間隔で患者の血液を採取し、活性酸素生成活性
値を測定し、その測定値を適宜に設定された境界値と比
較することにより、透析を終了するための判断材料とす
ることが出来ることが分かる。 ［実施例３］図４は、透析膜の異なる透析機材(ＣＬ−
ＥＥ及びその他)を用いて透析を行なった場合の血漿の
活性酸素生成活性を求めた結果である。右端は健常者の
値を示している。
【００１２】この図から、使用する透析膜の違いにより
測定結果に明確な差が現れている。従って、このような
比較によって透析方法や透析機材などの評価が可能とな
る。
測定結果に明確な差が現れている。従って、このような
比較によって透析方法や透析機材などの評価が可能とな
る。
【００１３】
【発明の効果】以上詳述したように、本発明において
は、人の血漿中に生成されるヒドロキシルラジカルをＥ
ＳＲ測定で調べることにより、人の血漿の酸化還元状態
を判定することが出来、その結果に基づいて腎不全等の
判定あるいは診断をすることが出来る。また、本発明に
おいては、測定結果に基づいて透析治療の終了の判断を
行うことが出来、また、透析機材の評価も可能であり、
患者の負担の低減と同時に優れた機材の開発につながる
など、極めて大きな効果が得られる。
は、人の血漿中に生成されるヒドロキシルラジカルをＥ
ＳＲ測定で調べることにより、人の血漿の酸化還元状態
を判定することが出来、その結果に基づいて腎不全等の
判定あるいは診断をすることが出来る。また、本発明に
おいては、測定結果に基づいて透析治療の終了の判断を
行うことが出来、また、透析機材の評価も可能であり、
患者の負担の低減と同時に優れた機材の開発につながる
など、極めて大きな効果が得られる。
【図１】 図１ａ，ｂ，ｃ，ｄは人の血漿、Fenton反応
系、HPX−XOD反応系、HPX−XOD反応系＋Fe2+について、
それぞれＰＢＮをトラップ剤として測定したＥＳＲスペ
クトルを示す図である。
系、HPX−XOD反応系、HPX−XOD反応系＋Fe2+について、
それぞれＰＢＮをトラップ剤として測定したＥＳＲスペ
クトルを示す図である。
【図２】 健常者及び腎不全患者について、６０℃酸化
反応時間を横軸に、スピンアダクトの強度を縦軸として
表わしたグラフである。
反応時間を横軸に、スピンアダクトの強度を縦軸として
表わしたグラフである。
【図３】 腎不全患者の透析治療前後の血漿について、
６０℃酸化反応時間２０分におけるＰＢＮ−ＯＨスピン
アダクトの強度を求めた結果を示すグラフである。
６０℃酸化反応時間２０分におけるＰＢＮ−ＯＨスピン
アダクトの強度を求めた結果を示すグラフである。
【図４】 異なった透析膜を使用して透析を行った腎不
全患者の透析治療前後の血漿について、６０℃酸化反応
時間２０分におけるＰＢＮ−ＯＨスピンアダクトの強度
を求めた結果を示すグラフである。
全患者の透析治療前後の血漿について、６０℃酸化反応
時間２０分におけるＰＢＮ−ＯＨスピンアダクトの強度
を求めた結果を示すグラフである。
Claims (10)
- 【請求項１】 血漿を酸素存在下においた際に生成する
活性酸素をスピントラップ剤によって捕捉し、生成した
スピンアダクトの量を電子スピン共鳴装置を用いて測定
することを特徴とする電子スピン共鳴を用いた血漿の酸
化還元状態判定法。 - 【請求項２】 血漿を常温よりも高い所定温度に維持し
た状態で酸素存在下におくことを特徴とする請求項１記
載の電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状態判定
法。 - 【請求項３】 活性酸素はヒドロキシルラジカルである
請求項１または２記載の電子スピン共鳴を用いた血漿の
酸化還元状態判定法。 - 【請求項４】 生成したヒドロキシルラジカルのスピン
アダクトの量の経時変化を測定し、その変化の傾きを求
め、該傾きの程度から判定を行うことを特徴とする請求
項１ないし３のいずれかに記載の電子スピン共鳴を用い
た血漿の酸化還元状態判定法。 - 【請求項５】 生成したヒドロキシルラジカルのスピン
アダクトの測定開始所定時間後の量を求め、該求めた量
に基づいて判定を行うことを特徴とする請求項１ないし
３のいずれかに記載の電子スピン共鳴を用いた血漿の酸
化還元状態判定法。 - 【請求項６】 透析患者の血漿を酸素存在下においた際
に生成する活性酸素をスピントラップ剤によって捕捉
し、生成したスピンアダクトの量を電子スピン共鳴装置
を用いて測定することを特徴とする電子スピン共鳴を用
いた透析進行状況の判定法。 - 【請求項７】 血漿を常温よりも高い所定温度に維持し
た状態で酸素存在下におくことを特徴とする請求項６記
載の電子スピン共鳴を用いた透析の進行状況判定法。 - 【請求項８】 活性酸素はヒドロキシルラジカルである
請求項６または７記載の電子スピン共鳴を用いた透析進
行状況判定法。 - 【請求項９】 生成したヒドロキシルラジカルのスピン
アダクトの量の経時変化を測定し、その変化の傾きを求
め、該傾きの程度から判定を行うことを特徴とする請求
項６ないし８のいずれかに記載の電子スピン共鳴を用い
た透析進行状況判定法。 - 【請求項１０】 生成したヒドロキシルラジカルのスピ
ンアダクトの測定開始所定時間後の量を求め、該求めた
量に基づいて判定を行うことを特徴とする請求項６ない
し請求項８のいずれかに記載の電子スピン共鳴を用いた
透析進行状況判定法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10036709A JPH11218507A (ja) | 1998-02-03 | 1998-02-03 | 電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状態判定法及び透析進行状況の判定法 |
| US09/244,239 US6531320B1 (en) | 1998-02-03 | 1999-02-03 | Method of monitoring redox of blood plasma using ESR and method of estimating progress of dialysis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10036709A JPH11218507A (ja) | 1998-02-03 | 1998-02-03 | 電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状態判定法及び透析進行状況の判定法 |
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| JPH11218507A true JPH11218507A (ja) | 1999-08-10 |
Family
ID=12477306
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10036709A Pending JPH11218507A (ja) | 1998-02-03 | 1998-02-03 | 電子スピン共鳴を用いた血漿の酸化還元状態判定法及び透析進行状況の判定法 |
Country Status (2)
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1999
- 1999-02-03 US US09/244,239 patent/US6531320B1/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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