【発明の詳細な説明】
【産業上の利用分野】本発明は医薬、特に抗腫瘍剤とし
て有用な新規ペプチド化合物及びその塩、並びにこれら
を有効成分とする医薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】微生物代謝産物由来の抗腫瘍物質は、す
でに数多く報告されており、マイトマイシンンＣ、ブレ
オマイシン、ネオカルチノスタチン、ダウノマイシン、
アドリアマイシン、アクチノマイシンＤなどが報告され
ている。しかしながら、本発明化合物または、本発明化
合物に類似する物質に関する報告はなされていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、優れ
た新規抗腫瘍化合物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物が
産生する抗腫瘍作用物質につき、鋭意探索、研究した結
果、ストレプトマイセス属に属する微生物が下記式
（Ｉ）によって示される新規なペプチド化合物又はその
塩を産生すること、該化合物が優れた抗腫瘍作用を有す
ることを知見して本発明を完成させるに至った。
【化２】
即ち、本発明は式（Ｉ）で示されるペプチド化合物又は
その塩に関する。また、本発明によれば、上記ペプチド
化合物（Ｉ）又はその塩を有効成分として含有する医
薬、特に抗腫瘍剤が提供される。
【０００５】（化合物）本発明化合物（Ｉ）は酸付加塩
を形成する。化合物（Ｉ）は通常の培養条件、単離条件
では遊離塩基として単離されるが、条件によってはその
酸付加塩として産生或いは単離することもできる。ま
た、遊離塩基を通常の造塩反応に付して酸付加塩を製造
することもできる。かかる塩としては具体的には塩酸、
臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸等の鉱
酸、炭酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロ
ン酸、コハク酸、フマール酸、マレイン酸、乳酸、リン
ゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンス
ルホン酸等の有機酸、アスパラギン酸、グルタミン酸な
どの酸性アミノ酸との酸付加塩が挙げられる。
【０００６】本発明化合物（Ｉ）は不斉炭素原子を有し
ており、光学異性体（ラセミ体、光学対掌体、光学活性
酸との酸付加塩にあってはジアステレオマー）が存在す
る。本発明にはこれらの光学異性体の分離されたもの及
びその混合物の全てが包含される。また、本発明化合物
は単離条件によっては、水和物、各種の溶媒和物として
単離されたり、結晶多形を有する場合も考えられ、本発
明の化合物としてはこれらの水和物、各種の溶媒和物、
全ての結晶形の化合物も包含される。
【０００７】（微生物）本発明化合物を生産する放線菌
ストレプトマイセス ノビリスは、公的保存機関から入
手可能であり、例えば理化学研究所の保存菌（ＪＣＭ４
２７４株）などの菌が使用できる。ストレプトマイセス
ノビリスの培養は一般微生物の培養方法に準じて行わ
れる。
【０００８】（生産方法）培養に用いられる培地として
は、ストレプトマイセス ノビリスが利用する栄養源を
含有する培地であればよく、合成培地、半合成培地また
は天然培地が用いられる。培地の組成は、例えば炭素源
としてはＬ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グル
コース、Ｄ−フラクトース、シュークロース、イノシト
ール、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニトー
ル、マンノース、メリビオース、ラクトース、Ｄ−ガラ
クトース、マルトース、トレハロース、サリシン、キサ
ンチン、キチン、デンプン、ブドウ糖、デキストリン、
グリセリン、植物油等が、窒素源としては肉エキス、ペ
プトン、グルテンミール、綿実粕、大豆粉、落花生粉、
魚粉、コーンスチーブリカー、乾燥酵母、酵母エキス、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、尿酸その他の有機、無機の窒素源が用いられる。ま
た、金属塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシ
ウム、カルシウム、亜鉛、鉄、コバルトなどの硫酸塩、
硝酸塩、炭酸塩、リン酸塩などが必要に応じて添加され
る。さらに、必要に応じてメチオニン、システイン、シ
スチン、チオ硫酸塩、オレイン酸メチル、ラード油、シ
リコン油、界面活性剤などの生成促進物質または消泡剤
を添加することもできる。
【０００９】培養法としては、液体培養法、特に深部攪
拌培養法が適している。培養温度は１５〜４０℃の範
囲、好ましくは２５〜３０℃で行われる。培地のｐＨは
４〜１０、好ましくは６〜８で行われる。培養期間は培
地の組成、温度条件に応じて適宜設定されるが、通常１
〜１４日程度である。培養物より本発明化合物を単離精
製するには通常の微生物の培養物より生理活性物質を単
離精製する方法が適用される。例えば、培養物を濾過に
より培養濾液と菌体に分け、菌体をアセトンなどで抽出
する。抽出物を培養濾液と併せて酢酸エチルなどで抽出
し、さらにシリカゲルによるカラムクロマトフィー、ゲ
ル濾過クロマトグラフィー、再結晶などにより本発明化
合物を得る。
【００１０】（効果）
〔HeLa S3細胞に対する増殖阻害作用〕DMSOにて適宜希
釈した試験化合物を含むDMSO溶液２μｌずつを９６穴プ
レートの各wellに添加し、10％牛胎児血清を含むMEM培
地で５〜７×104個／mlに調製したHeLa S3細胞を200 ml
ずつ分注し、CO2インキュベーター内で３７℃、３日間
培養した。その後、細胞増殖に対する作用をCell Count
ing Kit（同仁化学研究所製）を用いた方法により検討
した。すなわち、試験化合物を含む培地を除去後、培地
を100 mlずつ分注し、試薬A（WST-1 16.3mg、HEPES 23.
8mg）と試薬B（0.2mM 1-Methoxy PMS溶液 5ml）を混合
した試薬溶液10 mlずつを添加し、CO2インキュベーター
内で３７℃、４時間反応させた。反応後、マイクロプレ
ートリーダーにより測定波長415 nm、参照波長630 nmで
測定し、非処理細胞と既知濃度の試験化合物で処理した
細胞の吸光度を比較することにより、細胞の増殖を５０
％阻害する試験化合物濃度（IC50）を求めた。結果を下
に示す。
【００１１】
【表１】
【００１２】本発明化合物又はその塩の１種又は２種以
上を有効成分として含有する製剤は，通常製剤化に用い
られる担体や賦形剤，その他の添加剤を用いて調製され
る。製剤用の担体や賦形剤としては，固体又は液体いず
れでも良く，例えば乳糖，ステアリン酸マグネシウム，
スターチ，タルク，ゼラチン，寒天，ペクチン，アラビ
アゴム，オリーブ油，ゴマ油，カカオバター，エチレン
グリコール等やその他常用のものが挙げられる。投与は
錠剤，丸剤，カプセル剤，顆粒剤，散剤，液剤等による
経口投与，あるいは静注，筋注等の注射剤，坐剤，経皮
等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。投
与量は症状，投与対象の年齢，性別等を考慮して個々の
場合に応じて適宜決定されるが，通常成人１人当たり，
１日につき１〜１，０００ｍｇ，好ましくは５０〜２０
０ｍｇの範囲で１日１回から数回に分け経口投与される
か又は成人１人当たり，１日につき１〜５００ｍｇの範
囲で，１日１回から数回に分け静脈内投与されるか，又
は，１日１時間〜２４時間の範囲で静脈内持続投与され
る。もちろん前記したように，投与量は種々の条件で変
動するので，上記投与量範囲より少ない量で十分な場合
もある。
【００１３】本発明による経口投与のための固体組成物
としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このよ
うな固体組成物においては、一つまたはそれ以上の活性
物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤、例えば乳
糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセル
ロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロ
リドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムと混合され
る。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添
加剤、例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤
や繊維素グルコール酸カルシウムのような崩壊剤、ラク
トースのような安定化剤、グルタミン酸又はアスパラギ
ン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又
は丸剤は必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロ
ピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース
フタレート等の糖衣又は胃溶性あるいは腸溶性物質のフ
ィルムで被膜してもよい。
【００１４】経口投与のための液体組成物は、薬剤的に
許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリ
キシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈
剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不
活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘
味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非
水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液
剤、懸濁剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩
水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤としては、例
えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、
オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコ
ール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成
物はさらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤
（例えば、ラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタ
ミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでいて
もよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通
す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。
また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無
菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもで
きる。
【００１５】
【実施例】実施例１
グルコース １０ｇ、ポテトスターチ ２０ｇ、ポリペプ
トン ５ｇ、酵母エキス５ｇ、炭酸カルシウム ４ｇ、蒸
留水１Ｌを含む培地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつ５
００ｍｌ容の三角フラスコに分注し、１２０℃で２０分
間滅菌した。ベネット寒天培地に良く生育させたストレ
プトマイセス ノビリス (Streptomyces nobilis) ＪＣ
Ｍ４２７４株をかき取って接種し、２８℃、２００回転
／分の条件で４日間振とう培養し、種培養液とした。次
にポテトスターチ ３０ｇ、酵母エキス １５ｇ、リン酸
二水素カリウム ０．５ｇ、硫酸マグネシウム七水和物
０．５ｇ、炭酸カルシウム ２ｇ、蒸留水 １Ｌを含む培
地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつ５００ｍｌ容三角フ
ラスコに２５本分注し、１２０℃、２０分間滅菌した。
この培地に前記種培養液を２ｍｌずつ接種し、２８℃、
２００回転／分の条件で８日間振とう培養した。培養物
を濾過により培養濾液と菌体に分け、菌体をアセトンで
抽出した。アセトン抽出物を濃縮し、培養濾液と併せて
酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を濃縮乾固
し、ヘキサンに溶解した後、ヘキサン相をメタノールで
抽出した。ヘキサン不溶物とメタノール抽出物を少量の
クロロホルムに溶解し、シリカゲルカラム（シリカゲル
６０、メルク）を用い、ヘキサン−酢酸エチル混合溶
液、クロロホルム−メタノール混合溶液（ステップワイ
ズ法）で展開、分画した。得られた溶出画分をＯＤＳカ
ラムを用い、メタノール−水混合溶液で展開、分画し
た。得られた溶出画分を濃縮後、少量のメタノールに溶
解して再結晶を行い、一部を逆相ＨＰＬＣカラム（ＰＥ
ＧＡＳＩＬ−ＯＤＳ、センシュー科学）による精製を行
うことにより本発明化合物 ７０ｍｇを得た。本発明化
合物の物理科学的性質は、以下に示す通りである。
【００１６】
性状：白色粉末
質量分析：positive ion FAB-MS m/z = 719[M+Na]+
negative ion FAB-MS m/z = 695 [M-H]-
高分解能MARDI-TOFMS found : m/z = 719.2059 [M+Na]+
calcd for : m/z = 719.2012 [M+Na]+
分子式：C34H32N8O7S
紫外吸収スペクトルλmax nm（ε)：261(31000), 273(3
1200), 287(32000), 322(8700,sh) in CH3CN
赤外吸収スペクトルνmax cm-1(KBr)：3470, 3390, 329
0, 1660, 1570, 1510, 111013
C NMRスペクトル(125Hz、DMSO-d6)：170.8, 170.2, 1
63.0, 160.3, 157.5, 155.5, 155.0, 154.1, 150.6, 14
1.5, 139.6, 139.4, 139.1, 135.6, 130.8, 130.0, 12
9.9, 129.1, 128.6(×2), 127.5(×2), 126.7, 122.2,
57.5, 57.1, 38.8, 35.2, 31.5, 25.6, 19.7, 17.4, 1
4.7, 12.11
H NMRスぺクトル(500Hz、DMSO-d6)：9.07(1H,s), 8.98
(1H,s), 8.89(1H,s), 8.67(1H,dd), 8.65(1H,s), 8.57
(1H,d),8.35(2H,d), 8.22(1H,d), 7.57(2H,t), 7.52(1
H,t), 5.05,4.19(2H,dd), 4.82(1H,dd), 4.60(1H,dd),
2.14(1H,m), 2.09(1H,m), 1.66,1.09(2H,m), 0.97(3H,
d), 0.95(3H,d), 0.93(3H,d), 0.91(3H,t)
溶解性：ジメチルスルホキシド、クロロホルム、アセト
ニトリルに可溶、水に難溶。
【００１７】 これらの物理科学的性状から以下の構造が
特定された。
【化３】
【００１８】
【発明の効果】本発明のペプチド化合物やその塩は、腫
瘍細胞増殖抑制作用を有し、抗腫瘍剤として有用であ
る。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to pharmaceuticals, especially as antitumor agents.
And useful novel peptide compounds and salts thereof, and these
The present invention relates to a medicine comprising, as an active ingredient.
[0002]
BACKGROUND OF THE INVENTION Antitumor substances derived from microbial metabolites
And mitomycin C,
Omycin, neocarzinostatin, daunomycin,
Adriamycin and actinomycin D were reported.
ing. However, the compound of the present invention or the compound of the present invention
There are no reports on substances similar to the compound.
[0003]
SUMMARY OF THE INVENTION The object of the present invention is to
Another object of the present invention is to provide a novel antitumor compound.
[0004]
Means for Solving the Problems The present inventors have found that microorganisms
As a result of intensive search and research on the produced antitumor agent,
As a result, the microorganism belonging to the genus Streptomyces has the following formula
Novel peptide compound represented by (I) or a compound thereof
Producing salt, the compound has excellent antitumor effect
This led to the completion of the present invention.
Embedded image
That is, the present invention provides a peptide compound represented by the formula (I) or
About its salt. Further, according to the present invention, the peptide
A medicine containing compound (I) or a salt thereof as an active ingredient
Drugs, especially antitumor agents, are provided.
(Compound) Compound (I) of the present invention is an acid addition salt
To form Compound (I) is prepared under the usual culture conditions and isolation conditions.
Is isolated as the free base, but depending on the conditions,
It can also be produced or isolated as an acid addition salt. Ma
The free base is subjected to the usual salt formation reaction to produce an acid addition salt.
You can also. As such salts, specifically, hydrochloric acid,
Minerals such as hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitric acid and phosphoric acid
Acid, carbonic acid, formic acid, acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malo
Acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, phosphorus
Goic acid, tartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid, ethanes
Organic acids such as sulfonic acid, aspartic acid, glutamic acid
The acid addition salt with any acidic amino acid is mentioned.
The compound (I) of the present invention has an asymmetric carbon atom.
Optical isomers (racemic, enantiomeric, optically active
Diastereomers) are present in acid addition salts with acids
You. In the present invention, these optical isomers are separated and
And all of the mixtures thereof. Also, the compound of the present invention
Is a hydrate or various solvates depending on isolation conditions.
It may be isolated or may have crystalline polymorphs.
As the light compounds, these hydrates, various solvates,
All crystalline forms of the compounds are also included.
(Microorganism) Actinomycetes producing the compound of the present invention
Streptomyces nobilis was purchased from a public preservation agency.
For example, it is possible to use the conserved bacteria of RIKEN (JCM4
274) can be used. Streptomyces
Cultivation of Nobilis is carried out according to the culture method of general microorganisms.
It is.
(Production method) As a medium used for culture
Is the source of nutrients used by Streptomyces nobilis
Any medium may be used as long as it contains a synthetic medium, a semi-synthetic medium or
Is a natural medium. The composition of the medium may be, for example, a carbon source.
L-arabinose, D-xylose, D-glu
Course, D-fructose, sucrose, inosito
, L-rhamnose, raffinose, D-mannito
Le, mannose, melibiose, lactose, D-gala
Kutose, maltose, trehalose, salicin, kisa
Starch, chitin, starch, glucose, dextrin,
Glycerin, vegetable oil, etc.
Puton, gluten meal, cottonseed meal, soybean flour, peanut flour,
Fish meal, corn steep liquor, dried yeast, yeast extract,
Ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium nitrate
, Uric acid and other organic and inorganic nitrogen sources are used. Ma
The metal salts include sodium, potassium and magnesium.
Sulfates such as um, calcium, zinc, iron and cobalt,
Nitrate, carbonate, phosphate, etc. are added as needed
You. In addition, methionine, cysteine,
Stin, thiosulfate, methyl oleate, lard oil,
Production promoting substances such as recon oil and surfactants or defoamers
Can also be added.
As a culture method, a liquid culture method, particularly,
The stirring culture method is suitable. The culture temperature is in the range of 15 to 40 ° C.
C., preferably at 25-30.degree. The pH of the medium
The reaction is performed in 4 to 10, preferably 6 to 8. The culture period is
It is set appropriately according to the composition of the ground and the temperature conditions.
About 14 days. Isolate the compound of the present invention from the culture
For production, a bioactive substance is simply isolated from a normal culture of microorganisms.
A method of separation and purification is applied. For example, to filter the culture
The cells are further separated into culture filtrate and cells, and the cells are extracted with acetone, etc.
I do. Extract is combined with the culture filtrate and extracted with ethyl acetate etc.
Column chromatography with silica gel, gel
Invention by filtration chromatography, recrystallization, etc.
Get the compound.
(Effect)
[Proliferation inhibitory effect on HeLa S3 cells] Dilute appropriately with DMSO
2 μl each of the DMSO solution containing the diluted test compound
MEM medium containing 10% fetal calf serum
5-7 × 10 on the groundFour200 ml of HeLa S3 cells
Aliquots, COTwo37 ° C for 3 days in an incubator
Cultured. Then, the effect on cell proliferation was measured using Cell Count.
Investigation by the method using ing Kit (manufactured by Dojindo Laboratories)
did. That is, after removing the medium containing the test compound,
In 100 ml each, and reagent A (WST-1 16.3 mg, HEPES 23.
8mg) and Reagent B (5ml of 0.2mM 1-Methoxy PMS solution)
10 ml each of the reagent solutionTwoIncubator
The reaction was carried out at 37 ° C. for 4 hours. After the reaction,
At a measurement wavelength of 415 nm and a reference wavelength of 630 nm
Measured and treated with untreated cells and test compound at known concentration
By comparing the absorbance of the cells, the growth of the cells was reduced by 50%.
% Test compound concentration (IC50). Lower result
Shown in
[0011]
[Table 1]
One or more of the compounds of the present invention or salts thereof
Preparations containing the above as an active ingredient are usually used for formulation.
Is prepared using carriers, excipients and other additives
You. No solid or liquid carrier or excipient
Such as lactose, magnesium stearate,
Starch, talc, gelatin, agar, pectin, arabi
Agum, olive oil, sesame oil, cocoa butter, ethylene
Glycols and the like can be used. Dosing
Tablets, pills, capsules, granules, powders, liquids, etc.
Oral administration, injections such as intravenous injection and intramuscular injection, suppositories, transdermal
And the like. Throw
Dosage may vary depending on the condition, age, sex, etc.
It is determined as appropriate depending on the case, but usually per adult,
1 to 1,000 mg, preferably 50 to 20 per day
It is orally administered once or several times a day in the range of 0mg
Or 1 to 500 mg per adult per day
Can be administered intravenously once to several times a day, or
Is administered intravenously for 1 hour to 24 hours per day
You. Of course, as mentioned above, the dosage varies under various conditions.
If the dose is less than the above dose range
There is also.
[0013] A solid composition for oral administration according to the present invention.
Examples thereof include tablets, powders, granules and the like. This
In such solid compositions, one or more activities
The substance is at least one inert diluent, for example milk
Sugar, mannitol, glucose, hydroxypropyl cell
Loin, microcrystalline cellulose, starch, polyvinyl pyro
Ridone, mixed with magnesium metasilicate aluminate
You. The composition is prepared according to a conventional method using additives other than the inert diluent.
Additives, eg lubricants such as magnesium stearate
Disintegrants such as calcium carbonate
Stabilizers such as toose, glutamic acid or asparagine
A solubilizing agent such as an acid may be contained. Tablets
Pills require sucrose, gelatin, hydroxypro
Pill cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose
Sugar coatings such as phthalate or gastric or enteric coatings
It may be coated with a film.
[0014] Liquid compositions for oral administration are pharmaceutically acceptable.
Acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups,
Inactive dilution commonly used, including xyl agent
Agents, such as purified water and ethanol. This composition is not
In addition to the active diluent, adjuvants such as wetting agents and suspending agents,
Flavoring agents, flavoring agents, fragrances and preservatives may be contained.
As an injection for parenteral administration, sterile aqueous or non-sterile
Aqueous solutions, suspensions, and emulsions are included. Aqueous solution
Preparations and suspensions include, for example, distilled water for injection and physiological saline.
Contains water. Examples of non-aqueous solutions and suspensions include
For example, propylene glycol, polyethylene glycol,
Vegetable oils like olive oil, alcohol like ethanol
And polysorbate 80. Such composition
The products are further preservatives, wetting agents, emulsifiers, dispersants, stabilizers
(Eg, lactose), solubilizers (eg, gluta
Contains adjuvants like minic acid, aspartic acid)
Is also good. These are passed through, for example, a bacteria retention filter.
It is sterilized by filtration, blending of a bactericide or irradiation.
They also produce sterile solid compositions which are sterile before use.
It can be used by dissolving in sterile water or sterile injection solvent.
Wear.
[0015]
Embodiment 1
Glucose 10g, potato starch 20g, polypep
Ton 5g, yeast extract 5g, calcium carbonate 4g, steam
5 ml of a medium (pH 7.0) containing 1 L of distilled water
Dispense into a 00 ml Erlenmeyer flask and at 120 ° C for 20 minutes
For a while. Strain well grown on Bennett agar
Streptomyces nobilis JC
M4274 strain was scraped and inoculated, 28 ° C, 200 rotations
The mixture was shake-cultured for 4 days under the conditions of / min to obtain a seed culture solution. Next
To potato starch 30g, yeast extract 15g, phosphoric acid
Potassium dihydrogen 0.5g, magnesium sulfate heptahydrate
A medium containing 0.5 g, calcium carbonate 2 g, and distilled water 1 L
The ground (pH 7.0) is filled in a 500ml triangular
Twenty-five tubes were dispensed into Lasco and sterilized at 120 ° C. for 20 minutes.
This medium was inoculated with 2 ml of the seed culture at 28 ° C.
Shaking culture was performed at 200 rpm for 8 days. Culture
Is separated into a culture filtrate and cells by filtration, and the cells are treated with acetone.
Extracted. Concentrate the acetone extract and combine with the culture filtrate
Extracted with ethyl acetate. Concentrate the ethyl acetate extract to dryness
After dissolving in hexane, the hexane phase is
Extracted. Remove a small amount of hexane insolubles and methanol extract
Dissolve in chloroform and use a silica gel column (silica gel)
Hexane-ethyl acetate mixed solution
Liquid, chloroform-methanol mixed solution (Step
Method and fractionation. The obtained eluted fraction is
Using a ram, develop and fractionate with a methanol-water mixed solution.
Was. The eluted fraction obtained is concentrated and then dissolved in a small amount of methanol.
Recrystallization was performed, and a part was subjected to a reverse phase HPLC column (PE
GASIL-ODS, Senshu Science)
Thus, 70 mg of the compound of the present invention was obtained. Invention
The physical science properties of the compound are as shown below.
[0016]
Properties: white powder
Mass spectrometry: positive ion FAB-MS m / z = 719 [M + Na]+
negative ion FAB-MS m / z = 695 [M-H]-
High resolution MARDI-TOFMS found: m / z = 719.2059 [M + Na]+
calcd for: m / z = 719.2012 [M + Na]+
Molecular formula: C34H32N8O7S
UV absorption spectrum λmax nm (ε): 261 (31000), 273 (3
1200), 287 (32000), 322 (8700, sh) in CHThreeCN
Infrared absorption spectrum νmax cm-1(KBr): 3470, 3390, 329
0, 1660, 1570, 1510, 111013
C NMR spectrum (125 Hz, DMSO-d6): 170.8, 170.2, 1
63.0, 160.3, 157.5, 155.5, 155.0, 154.1, 150.6, 14
1.5, 139.6, 139.4, 139.1, 135.6, 130.8, 130.0, 12
9.9, 129.1, 128.6 (× 2), 127.5 (× 2), 126.7, 122.2,
57.5, 57.1, 38.8, 35.2, 31.5, 25.6, 19.7, 17.4, 1
4.7, 12.11
H NMR spectrum (500Hz, DMSO-d6): 9.07 (1H, s), 8.98
(1H, s), 8.89 (1H, s), 8.67 (1H, dd), 8.65 (1H, s), 8.57
(1H, d), 8.35 (2H, d), 8.22 (1H, d), 7.57 (2H, t), 7.52 (1
H, t), 5.05,4.19 (2H, dd), 4.82 (1H, dd), 4.60 (1H, dd),
2.14 (1H, m), 2.09 (1H, m), 1.66,1.09 (2H, m), 0.97 (3H,
d), 0.95 (3H, d), 0.93 (3H, d), 0.91 (3H, t)
Solubility: dimethyl sulfoxide, chloroform, aceto
Soluble in nitrile, poorly soluble in water.
[0017] From these physical properties, the following structure
Identified.
Embedded image
[0018]
The peptide compound of the present invention or a salt thereof is useful for
Has an inhibitory effect on tumor cell growth and is useful as an antitumor agent
You.
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(51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(72)発明者 平本 昌志
茨城県つくば市御幸が丘21 山之内製薬株
式会社内──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code FIC12R 1: 645) (72) Inventor Masashi Hiramoto 21 Miyukigaoka, Tsukuba, Ibaraki Pref. Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd.