JPH11137285A - Production of ribitol - Google Patents

Production of ribitol

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JPH11137285A
JPH11137285A JP9329695A JP32969597A JPH11137285A JP H11137285 A JPH11137285 A JP H11137285A JP 9329695 A JP9329695 A JP 9329695A JP 32969597 A JP32969597 A JP 32969597A JP H11137285 A JPH11137285 A JP H11137285A
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JP
Japan
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ribitol
culture
trichosporonoides
valve
exchange resin
Prior art date
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Pending
Application number
JP9329695A
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Japanese (ja)
Inventor
Masayoshi Yamazaki
真良 山崎
Fumito Yamazaki
史人 山崎
Chikako Muranaka
智香子 村中
Toshimi Koseki
聡美 小関
Yoshiaki Tateno
芳明 立野
Naoki Okamoto
直記 岡本
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Towa Chemical Industry Co Ltd
Original Assignee
Towa Chemical Industry Co Ltd
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Publication date
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To industrially and advantageously obtain ribitol from a cheap and easily obtainable raw material by culturing a microorganism belonging to the genus Trichosporonoides in a culture medium containing a fermentable saccharide as a main source of carbon and taking the product from the resultant culture. SOLUTION: This method is conducted by aerobically culturing a microorganism (e.g. Trichosporonoides oedocephalis ATCC 16958 or the like) belonging to the genus Trichosporonoides in a culture medium containing a fermentable saccharide as a main source of carbon in a saccharide concentration of 10 to 45 wt.% at pH of 3 to 5.5 at 24 to 38 deg.C, feeding the obtained culture into a column packed with a strong acid cation exchange resin of any one of aluminum, manganese and iron types, and taking ribitol by a chromatography fractionation adapted to separate a ribitol fraction, thus obtaining the objective ribitol industrially and advantageously by using an easily obtainable and cheap raw material instead of an expensive ribose.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】[0001]

【発明の属する技術分野】TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION

【0002】本発明は、リビトールの製造方法に関し、
更に詳しくは、微生物を利用して醗酵法により工業的に
有利にリビトールを製造する方法に関する。
[0002] The present invention relates to a method for producing ribitol,
More particularly, the present invention relates to a method for industrially advantageously producing ribitol by a fermentation method using a microorganism.

【0003】[0003]

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】2. Description of the Related Art

【0004】リビトールは、洋種フクジュソウのAdonis
vernalis L.(キンポウゲ科)およびミシマサイコBupl
eurum falcatum L.(セリ科)の根に含まれる5単糖ア
ルコールの一種である。
[0004] Ribitol is a Western species of Adonis
vernalis L. (Ranunculaceae) and Mishimasaiko Bupl
eurum falcatum is a kind of pentasaccharide alcohol contained in the root of L. (Apiaceae).

【0005】このリビトールは、リボースを各種固体触
媒の存在下で接触水素還元することで得る事が出来る
が、その他にも、キャンジダ・ポリモルファ或いはトル
ロプシス・ハマダをリボースに接種し、醗酵する方法
(特公昭45−2071号)、リボースを主炭素源とす
る培地でコリネバクテリウム(Corynebacterium)に属
する菌株を培養する方法(特公昭49−12718号)
等で製造する事ができる。
[0005] This ribitol can be obtained by catalytic hydrogen reduction of ribose in the presence of various solid catalysts. Alternatively, ribitol can be obtained by inoculating Candida polymorpha or Torulopsis hamada to ribose and fermenting it. No. 45-2071), a method of culturing a strain belonging to Corynebacterium in a medium containing ribose as a main carbon source (Japanese Patent Publication No. 49-12718).
Etc. can be manufactured.

【0006】しかし、原料として使用されるリボースは
主としてプリンヌクレオチドの化学分解により製造され
るが、高価であり、実際の工業的なリビトールの製造原
料としては適切ではない。
[0006] However, ribose used as a raw material is produced mainly by chemical decomposition of purine nucleotides, but is expensive and is not suitable as a practical industrial raw material for producing ribitol.

【0007】この他にも、光合成を行う藻類に光線を照
射しながら培養することでリビトールを生成する方法
(特公昭44−16350号)が報告されているが、リ
ビトールが培養液中に蓄積するまでには長時間を必要と
し、その蓄積量も少なく、従って必ずしも満足のいく方
法ではなかった。
[0007] In addition, there has been reported a method of producing ribitol by irradiating algae for photosynthesis with irradiation of light (Japanese Patent Publication No. 44-16350). However, ribitol is accumulated in a culture solution. By the time, a long time was required, the amount of accumulation was small, and therefore, it was not always a satisfactory method.

【0008】本発明は、入手が容易で且つ安価な原料を
用いて、工業的にリビトールを製造する方法を見出すこ
とを目的としている。
An object of the present invention is to find a method for industrially producing ribitol using readily available and inexpensive raw materials.

【0009】[0009]

【課題を解決するための手段】[Means for Solving the Problems]

【0010】本発明者等は、前記課題を解決するために
鋭意検討した結果、トリコスポロノイデス属に属する微
生物を、グルコース、フラクトース或いは蔗糖などの醗
酵性糖質を主炭素源とする培地で培養することでリビト
ールが生成し、更に、特定の培養条件ではリビトールが
高収率で生成することを見出し、本発明を完成するに至
った。
The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems. As a result, the present inventors have found that microorganisms belonging to the genus Trichosporonoides can be cultured in a medium containing fermentable sugars such as glucose, fructose or sucrose as a main carbon source. It has been found that culturing produces ribitol, and furthermore, it has been found that ribitol is produced at a high yield under specific culturing conditions, thereby completing the present invention.

【0011】即ち、本発明の課題を解決するための手段
は、下記の通りである。
That is, means for solving the problems of the present invention are as follows.

【0012】第1に、トリコスポロノイデス属に属する
微生物を、醗酵性糖質を主炭素源とする培地で培養し、
得られた培養物からリビトールを採取することを特徴と
するリビトールの製造方法。第2に、トリコスポロノイ
デス属に属する微生物が、トリコスポロノイデス・オエ
ドセファリスである上記第1に記載のリビトールの製造
方法。第3に、培養が、糖質濃度10〜45重量%、p
H3〜5.5、温度24〜38℃の範囲内で、好気的条
件で実施される上記第1または2に記載のリビトールの
製造方法。第4に、培養物からのリビトールの採取が、
培養物を陽イオン交換樹脂を充填した塔に供給してリビ
トール画分を分離するクロマト分画である上記第1〜3
の何れか一つに記載のリビトールの製造方法。第5に、
陽イオン交換樹脂が、アルミニウム形、マンガン形また
は鉄形の何れかの強酸性陽イオン交換樹脂である上記第
4に記載のリビトールの製造方法。
First, a microorganism belonging to the genus Trichosporonoides is cultured in a medium containing fermentable carbohydrate as a main carbon source.
A method for producing ribitol, comprising collecting ribitol from the obtained culture. Secondly, the method for producing ribitol according to the first aspect, wherein the microorganism belonging to the genus Trichosporonoides is Trichosporonoides oedespharis. Third, the cultures have carbohydrate concentrations of 10-45% by weight, p
The method for producing ribitol according to the first or second aspect, wherein the method is performed under aerobic conditions at a temperature of H3 to 5.5 and a temperature of 24 to 38 ° C. Fourth, harvesting ribitol from the culture
The first to third chromatographic fractions, in which the culture is supplied to a column filled with a cation exchange resin to separate a ribitol fraction,
The method for producing ribitol according to any one of the above. Fifth,
The method for producing ribitol according to the above item 4, wherein the cation exchange resin is a strongly acidic cation exchange resin in any of an aluminum form, a manganese form and an iron form.

【0013】本発明において用いられる微生物は、トリ
コスポロノイデス(Trichosporonoides)属に属し、且
つグルコース、フラクトース或いは蔗糖などの醗酵性糖
質からリビトールを生産する能力を有する微生物であれ
ば特に制限はない。
The microorganism used in the present invention is not particularly limited as long as it belongs to the genus Trichosporonoides and has the ability to produce ribitol from fermentable sugars such as glucose, fructose or sucrose. .

【0014】トリコスポロノイデス属に属する微生物と
しては、例えば、トリコスポロノイデス・オエドセファ
リス(Trichosporonoides oedocephalis)、トリコスポ
ロノイデス・メガキリエンシス(Trichosporonoides me
gachiliensis)等を上げることができ、特に、トリコス
ポロノイデス・オエドセファリスがリビトールの製造に
最も適している。
Examples of microorganisms belonging to the genus Trichosporonoides include, for example, Trichosporonoides oedocephalis and Trichosporonoides megachiriensis (Trichosporonoides me).
gachiliensis), and in particular, Trichosporonoides oeedespharis is most suitable for producing ribitol.

【0015】これら微生物の菌株はオランダ国BaarnのC
entral Bureau voor Schimmelcultures(CBS)や米国Mary
landのAmerican Type Culture Collection(ATCC)より容
易に入手可能であり、具体的には、例えばトリコスポロ
ノイデス・オエドセファリスは米国のATCCより“A
TCC 16958”として、またトリコスポロノイデ
ス・メガキリエンシスはオランダ国のCBSより“CB
S 191.92”として入手できる。
The strains of these microorganisms are C
entral Bureau voor Schimmelcultures (CBS) and Mary, USA
land is readily available from the American Type Culture Collection (ATCC); specifically, for example, Trichosporonoides oedespharis is available from the ATCC in the United States as "A
TCC 16958 ”and Trichosporonoides megachiriensis from the Dutch CBS“ CB
S 191.92 ".

【0016】本発明の炭素源としては、グルコース、フ
ラクトース、蔗糖等の糖質が採用できるが、グルコース
を炭素源とした場合がリビトールを生産する為の培養時
間が短く、更にリビトールへの転化率も高く好ましい。
これらの炭素源は、通常単独で使用されるが、2種以上
混合しても使用することができる。
As the carbon source of the present invention, carbohydrates such as glucose, fructose and sucrose can be employed. When glucose is used as the carbon source, the cultivation time for producing ribitol is short, and the conversion to ribitol is further reduced. Is also preferred.
These carbon sources are usually used alone, but may be used in combination of two or more.

【0017】炭素源としての糖の濃度は、10〜45重
量%、好ましくは30〜40重量%で実施される。
The concentration of sugar as a carbon source is 10 to 45% by weight, preferably 30 to 40% by weight.

【0018】炭素源である糖の濃度が10重量%より低
い場合には、醗酵後の精製工程での取扱い量が増え、大
きな処理設備が必要となり、更に精製した液の濃縮に多
くのエネルギーが必要となり、工業的に不利である。
When the concentration of the sugar as a carbon source is lower than 10% by weight, the amount of handling in the purification step after fermentation increases, a large treatment facility is required, and more energy is required for concentrating the purified liquid. Required and industrially disadvantageous.

【0019】また、炭素源である糖の濃度が45重量%
より高い場合には、糖が全て消費されるまでに多くの時
間がかかり、好ましくない。
The concentration of sugar as a carbon source is 45% by weight.
If it is higher, it takes much time until all the sugar is consumed, which is not preferable.

【0020】本発明での培養は、好気的条件で液体培地
を用いて実施され、特に通気撹拌で実施するのが好まし
い。
The cultivation in the present invention is carried out under aerobic conditions using a liquid medium, and is particularly preferably carried out with aeration and agitation.

【0021】培養時間は、培地の種類及び炭素源である
糖の濃度によっても異なるが、通常、5〜15日間程度
であり、例えば炭素源としての糖が全て消費されるまで
かリビトールの生成量が最大となった時点で培養を停止
する。
The cultivation time varies depending on the type of medium and the concentration of sugar as a carbon source, but is usually about 5 to 15 days, for example, until all of the sugar as a carbon source is consumed or the production amount of ribitol. The culture is stopped at the time when is maximum.

【0022】培養液中の炭素源としての糖及びリビトー
ルは、高速液体クロマトグラフィーにより容易にその量
を分析することができる。
The amounts of sugar and ribitol as a carbon source in the culture solution can be easily analyzed by high performance liquid chromatography.

【0023】本発明の培養は、pHを3〜5.5の範囲
に調整して実施される。
The cultivation of the present invention is carried out by adjusting the pH to the range of 3 to 5.5.

【0024】本発明の培養は、微生物が生育できる温度
範囲内、即ち24〜38℃で実施される。
The cultivation of the present invention is carried out within a temperature range in which microorganisms can grow, that is, at 24 to 38 ° C.

【0025】窒素源としては、微生物により利用可能な
酵母エキス、コーンスチープリカー、尿素等の窒素化合
物が用いられる。
As the nitrogen source, there can be used nitrogen compounds such as yeast extract, corn steep liquor and urea which can be used by microorganisms.

【0026】この他にも、必要により培養液には各種有
機物、無機物、消泡剤等を添加することができる。
In addition, various organic substances, inorganic substances, antifoaming agents and the like can be added to the culture solution, if necessary.

【0027】培養液中に生成したリビトールは、遠心分
離、濾過等により培養液から菌体を除去し、更に活性炭
処理やイオン交換樹脂等を使用して精製することによ
り、リビトール液として採取することができる。
The ribitol produced in the culture solution is collected as a ribitol solution by removing the cells from the culture solution by centrifugation, filtration, etc., and further purifying using activated carbon treatment or an ion exchange resin. Can be.

【0028】得られたリビトール液は、そのまま濃縮後
結晶化するか、または陽イオン交換樹脂を充填した充填
塔に通液し、各成分の樹脂に対する吸着性の差を利用し
たクロマト分画をすることでリビトールの含量を高めた
後に結晶化することでリビトール結晶を得ることができ
る。
The resulting ribitol solution is concentrated as it is and then crystallized, or passed through a packed column filled with a cation exchange resin, and subjected to chromatographic fractionation utilizing the difference in the adsorptivity of each component to the resin. By increasing the content of ribitol and then crystallization, ribitol crystals can be obtained.

【0029】本発明のクロマト分画で使用される陽イオ
ン交換樹脂は、市販のほとんどの樹脂が採用可能だが、
中でもスチレン−ジビニルベンゼンの架橋重合体にスル
ホン酸基が結合した強酸性陽イオン交換樹脂が市販され
ているので、これに常法によりアルミニウム、マグネシ
ウム、バリウム、マンガン、鉄、カリウム等のイオンを
チャージしたものが採用でき、特にアルミニウムイオ
ン、マンガンイオンまたは鉄イオンの何れかを強酸性陽
イオン交換樹脂にチャージしたアルミニウム形、マンガ
ン形または鉄形強酸性陽イオン交換樹脂がリビトールを
培養液中の他の成分から分離するのにすぐれている。
As the cation exchange resin used in the chromatographic fractionation of the present invention, most commercially available resins can be used.
Among them, a strongly acidic cation exchange resin in which a sulfonic acid group is bonded to a crosslinked polymer of styrene-divinylbenzene is commercially available, and charged with ions such as aluminum, magnesium, barium, manganese, iron, and potassium by a conventional method. In particular, aluminum, manganese, or iron-type strongly acidic cation exchange resin charged with aluminum ion, manganese ion, or iron ion to the strongly acidic cation exchange resin can be used to separate ribitol from the culture medium. Excellent for separating from the components of

【0030】また、本発明のクロマト分画は、回分式ま
たは擬似移動床式、単塔式または多塔式の何れもが採用
可能である。
The chromatographic fractionation of the present invention can be any of a batch type or a simulated moving bed type, a single column type or a multiple column type.

【0031】[0031]

【実施例】【Example】

【0032】以下に実施例をあげて更に具体的に本発明
の方法を説明するが、本発明の技術的範囲は以下の例に
制限されるものではない。また、以下の実施例におい
て、%は特に断らない限り重量%を表わすものとする。
Hereinafter, the method of the present invention will be described more specifically with reference to examples, but the technical scope of the present invention is not limited to the following examples. In the following examples,% represents% by weight unless otherwise specified.

【0033】[0033]

【実施例1】Embodiment 1

【0034】(前培養)無水結晶ブドウ糖200g/リ
ットル及びコーンスチープリカー15g/リットルを含
む培地100mlを500mlの坂口フラスコに入れ、
トリコスポロノイデス・オエドセファリス(ATCC
16958)の1白金耳を接種し、35℃で2日間振と
う培養を行い、前培養液を得た。
(Preculture) 100 ml of a medium containing 200 g / l of anhydrous crystalline glucose and 15 g / l of corn steep liquor was placed in a 500 ml Sakaguchi flask.
Trichosporonoides Oedes Separis (ATCC
16958) was inoculated and shake-cultured at 35 ° C. for 2 days to obtain a pre-culture solution.

【0035】(本培養)無水結晶ブドウ糖3kg、コー
ンスチープリカー225g、前培養液600ml(前培
養液6本)及び消泡剤4.5g(日本油脂(株)製、デ
ィスホーム CA−123)を含む培地15リットルを
30リットルの培養器に入れ、pH4.5、温度35
℃、回転数800rpm、通気量1.0vvmで8日間
培養を行った。この時、培養液中のグルコースは全て消
費されていた。培養液は、液体クロマトグラフィーを用
いて分析したところ、培養液1ml当たりリビトール5
7.4mg(収率28.7%)、エリスリトール38.
6mg(収率19.3%)、グリセリン4.6mg(収
率2.3%)を含有していた。次に遠心分離器を用いて
この培養液から菌体を分離した後、20gの活性炭(武
田薬品(株)製、白鷺)とともに温度50℃で1時間撹
拌後、活性炭を濾別し、濾液はカチオン交換樹脂(オル
ガノ(株)製、IR−120B)300ml及びアニオ
ン交換樹脂(オルガノ(株)製、IRA−410)50
0mlを充填したカラムに通液した後、濃度60%まで
濃縮し、リビトール含有液2510gを得た。
(Main culture) 3 kg of anhydrous crystalline glucose, 225 g of corn steep liquor, 600 ml of preculture liquid (six preculture liquids), and 4.5 g of antifoaming agent (Nippon Oil & Fats Co., Ltd., Deform CA-123) 15 liters of the culture medium into a 30 liter incubator, pH 4.5, temperature 35
Culturing was performed for 8 days at a temperature of 800 ° C., a rotation speed of 800 rpm, and an aeration rate of 1.0 vvm. At this time, all the glucose in the culture solution had been consumed. The culture solution was analyzed using liquid chromatography, and it was found that 5 ml of ribitol per 1 ml of the culture solution was used.
7.4 mg (28.7% yield), erythritol
It contained 6 mg (19.3% yield) and 4.6 mg glycerin (2.3% yield). Next, the cells were separated from the culture using a centrifugal separator, stirred with 50 g of activated carbon (manufactured by Takeda Pharmaceutical Co., Ltd., Shirasagi) at a temperature of 50 ° C. for 1 hour, and the activated carbon was filtered off. 300 ml of cation exchange resin (IR-120B, manufactured by Organo Co., Ltd.) and 50 anion exchange resin (IRA-410, manufactured by Organo Co., Ltd.)
After passing through a column filled with 0 ml, the solution was concentrated to a concentration of 60% to obtain 2510 g of a ribitol-containing solution.

【0036】(クロマト分画装置)本実施例で使用した
クロマト分画装置は、図1の概略図に示すように、1リ
ットルのジャケット付きガラス製の塔(内径3.6c
m、長さ105cm)6本A〜Fを直列に連結し、塔A
の上部に予熱器K及びバルブHを介して原料仕込みポン
プGを接続するとともに、予熱器K及びバルブJを介し
て水仕込みポンプIを接続したものである。また、該ク
ロマト分画装置は、塔Fの下部に、バルブN及びOを介
して、流出液受けタンクL及びMを取り付けると共に、
バルブOより先端側にバルブPを取り付けたものであ
る。尚、塔A〜Fの各塔には、強酸性陽イオン交換樹脂
(オルガノ(株)製、CR−1310)のアルミニウム
形を塔1本当たり1000ml充填した。
(Chromatographic Fractionation Apparatus) As shown in the schematic diagram of FIG. 1, the chromatographic fractionation apparatus used in this example is a 1-liter jacketed glass tower (with an inner diameter of 3.6 c).
m, 105cm in length) A to F are connected in series,
Is connected to a raw material charging pump G via a preheater K and a valve H, and to a water charging pump I via a preheater K and a valve J. In addition, the chromatographic fractionation apparatus attaches effluent receiving tanks L and M to the lower part of the column F via valves N and O,
The valve P is attached to the tip side of the valve O. Each of the towers A to F was filled with 1000 ml of an aluminum form of a strongly acidic cation exchange resin (CR-1310, manufactured by Organo Corporation) per one tower.

【0037】(クロマト分画)A〜Fの各塔を60℃に
保ちつつ、バルブH及びPを開き、バルブJ、N及びO
を閉じた状態で、前記濃度60%のリビトール含有液3
00mlを毎分50mlの速さで流した。次にバルブH
を閉じ、バルブJを開き、ポンプIから水を毎時50m
lの速さで供給した。バルブPの出口の濃度が0.2%
になった時点でバルブPを閉じ、バルブNを開いた。2
2分後、バルブNを閉じ、バルブOを開いた。バルブO
の出口の濃度が0.2%以下になった時点でバルブOを
閉じ、バルブPを開いた。この操作を繰り返した。タン
クL及びタンクMに得られた流出液の濃度、重量及び糖
組成は、表1の通りであった。
(Chromatographic fractionation) While maintaining the columns A to F at 60 ° C., the valves H and P were opened, and the valves J, N and O
Is closed, and the above-mentioned 60% concentration of ribitol-containing liquid 3
00 ml was flowed at a rate of 50 ml per minute. Next, valve H
Is closed, valve J is opened, and water is pumped 50 m / h from pump I.
Feed at a rate of 1. The concentration at the outlet of valve P is 0.2%
At this time, the valve P was closed and the valve N was opened. 2
Two minutes later, valve N was closed and valve O was opened. Valve O
When the concentration at the outlet of became 0.2% or less, the valve O was closed and the valve P was opened. This operation was repeated. Table 1 shows the concentrations, weights, and sugar compositions of the effluents obtained in the tanks L and M.

【0038】[0038]

【表1】 [Table 1]

【0039】(結晶化)タンクLの流出液を濃度77%
まで濃縮し、容量500mlの結晶化装置へ移し、温度
70℃から10時間かけて室温まで冷却した。途中60
℃にて少量の結晶リビトール粉末をシードとして加え
た。生成した結晶は遠心分離器を用いて分離し、少量の
水で水洗した。得られた結晶は、乾燥後、144gであ
った。この結晶は、融点が102.8℃、液体クロマト
グラフィー分析で純度が99.9%であり、液体クロマ
トグラフィー、ガスクロマトグラフィー、赤外線吸収ス
ペクトル及びNMRスペクトルの分析結果から、リビト
ールであることを確認した。
(Crystallization) The effluent of the tank L is made to have a concentration of 77%.
The solution was transferred to a crystallizer having a capacity of 500 ml, and cooled from room temperature to 70 ° C. over 10 hours. On the way 60
At 0 ° C., a small amount of crystalline ribitol powder was added as a seed. The generated crystals were separated using a centrifuge and washed with a small amount of water. The obtained crystals weighed 144 g after drying. This crystal had a melting point of 102.8 ° C., a purity of 99.9% by liquid chromatography analysis, and was confirmed to be ribitol by analysis of liquid chromatography, gas chromatography, infrared absorption spectrum and NMR spectrum. did.

【0040】[0040]

【実施例2】Embodiment 2

【0041】(本培養)無水結晶ブドウ糖1.5kg、
コーンスチープリカー112g、実施例1の(前培養)
と同様にして製造した前培養液600ml及び消泡剤
4.5g(日本油脂(株)製、ディスホーム CA−1
23)を含む培地15リットルを30リットルの培養器
に入れ、pH4.5、温度35℃、回転数800rp
m、通気量0.8vvmで8日間培養を行った。この
時、培養液中のグルコースは全て消費されていた。培養
液は、液体クロマトグラフィーを用いて分析したとこ
ろ、培養液1ml当たりリビトール29.5mg(収率
29.5%)、エリスリトール17.4mg(収率1
7.4%)、グリセリン1.7mg(収率1.7%)を
含有していた。次に遠心分離器を用いてこの培養液から
菌体を分離した後、20gの活性炭(武田薬品(株)
製、白鷺)とともに温度50℃で1時間撹拌後、活性炭
を濾別し、濾液はカチオン交換樹脂(オルガノ(株)
製、IR−120B)200ml及びアニオン交換樹脂
(オルガノ(株)製、IRA−410)300mlを充
填したカラムに通液した後、濃度60%まで濃縮し、リ
ビトール含有液1205gを得た。
(Main culture) 1.5 kg of anhydrous crystalline glucose,
Corn steep liquor 112g, Example 1 (pre-culture)
600 ml of a pre-culture liquid and 4.5 g of an antifoaming agent (manufactured by NOF CORPORATION, Deform CA-1)
15 liters of the medium containing 23) was placed in a 30 liter incubator, and the pH was 4.5, the temperature was 35 ° C., and the rotation speed was 800 rpm.
Culture was carried out for 8 days at a flow rate of 0.8 vvm. At this time, all the glucose in the culture solution had been consumed. The culture solution was analyzed using liquid chromatography. As a result, 29.5 mg of ribitol (yield 29.5%) and 17.4 mg of erythritol (1% yield) per ml of the culture solution were analyzed.
7.4%) and 1.7 mg of glycerin (1.7% yield). Next, cells were separated from the culture solution using a centrifugal separator, and then 20 g of activated carbon (Takeda Pharmaceutical Co., Ltd.)
After stirring for 1 hour at a temperature of 50 ° C. with Shirasagi), the activated carbon is filtered off, and the filtrate is a cation exchange resin (Organo Co., Ltd.)
(IRA-120B) and 300 ml of an anion exchange resin (IRA-410, manufactured by Organo Corporation), and then concentrated to a concentration of 60% to obtain 1205 g of a liquid containing ribitol.

【0042】(クロマト分画)強酸性陽イオン交換樹脂
がマンガン形である以外は、実施例1と同様のクロマト
分画装置を使用して、以下のクロマト分画を実施した。
A〜Fの各塔を60℃に保ちつつ、バルブH及びPを開
き、バルブJ、N及びOを閉じた状態で、前記濃度60
%のリビトール含有液300mlを毎分50mlの速さ
で流した。次にバルブHを閉じ、バルブJを開き、ポン
プIから水を毎時50mlの速さで供給した。バルブP
の出口の濃度が0.2%になった時点でバルブPを閉
じ、バルブNを開いた。20分後、バルブNを閉じ、バ
ルブOを開いた。バルブOの出口の濃度が0.2%以下
になった時点でバルブOを閉じ、バルブPを開いた。こ
の操作を繰り返した。タンクL及びタンクMに得られた
流出液の濃度、重量及び糖組成は、表2の通りであっ
た。
(Chromatographic fractionation) The following chromatographic fractionation was carried out using the same chromatographic fractionation apparatus as in Example 1 except that the strongly acidic cation exchange resin was in the manganese form.
While keeping the towers A to F at 60 ° C., the valves H and P were opened and the valves J, N and O were closed,
300 ml of a liquid containing 10% ribitol was flowed at a rate of 50 ml per minute. Next, the valve H was closed, the valve J was opened, and water was supplied from the pump I at a rate of 50 ml / h. Valve P
When the concentration at the outlet of was 0.2%, the valve P was closed and the valve N was opened. After 20 minutes, valve N was closed and valve O was opened. When the concentration at the outlet of the valve O became 0.2% or less, the valve O was closed and the valve P was opened. This operation was repeated. Table 2 shows the concentrations, weights, and sugar compositions of the effluents obtained in the tanks L and M.

【0043】[0043]

【表2】 [Table 2]

【0044】(結晶化)タンクLの流出液を濃度77%
まで濃縮し、容量500mlの結晶化装置へ移し、温度
70℃から10時間かけて室温まで冷却した。途中60
℃にて少量の結晶リビトール粉末をシードとして加え
た。生成した結晶は遠心分離器を用いて分離し、少量の
水で水洗した。得られた結晶は、乾燥後、82gであ
り、液体クロマトグラフィー分析による純度は100%
であった。
(Crystallization) The effluent of the tank L is made to have a concentration of 77%.
The solution was transferred to a crystallizer having a capacity of 500 ml, and cooled from room temperature to 70 ° C. over 10 hours. On the way 60
At 0 ° C., a small amount of crystalline ribitol powder was added as a seed. The generated crystals were separated using a centrifuge and washed with a small amount of water. The obtained crystals weigh 82 g after drying, and the purity by liquid chromatography analysis is 100%.
Met.

【0045】[0045]

【実施例3】Embodiment 3

【0046】リビトール製造原料が結晶フラクトースで
ある以外は実施例1と同様の方法で培養を行った。得ら
れた培養液は、その1ml当たりリビトール45.0m
g(収率22.5%)、エリスリトール45.2mg
(収率22.6%)、グリセリン0.8mg(収率0.
4%)を含有していた。次に遠心分離器を用いてこの培
養液から菌体を分離した後、20gの活性炭(武田薬品
(株)製、白鷺)とともに温度50℃で1時間撹拌後、
活性炭を濾別し、濾液はカチオン交換樹脂(オルガノ
(株)製、IR−120B)300ml及びアニオン交
換樹脂(オルガノ(株)製、IRA−410)500m
lを充填したカラムに通液した後、濃度60%まで濃縮
し、リビトール含有液2268gを得た。
Cultivation was carried out in the same manner as in Example 1 except that the raw material for producing ribitol was crystalline fructose. The obtained culture solution contained 45.0 m of ribitol per ml.
g (yield 22.5%), erythritol 45.2 mg
(Yield 22.6%), glycerin 0.8 mg (yield 0. 2%).
4%). Next, the cells were separated from the culture using a centrifugal separator, and stirred with 50 g of activated carbon (manufactured by Takeda Pharmaceutical Co., Ltd., Shirasagi) at a temperature of 50 ° C. for 1 hour.
The activated carbon was filtered off, and the filtrate was 300 ml of cation exchange resin (IR-120B, manufactured by Organo Co., Ltd.) and 500 m of anion exchange resin (IRA-410, manufactured by Organo Co., Ltd.)
After passing through a column filled with 1, the mixture was concentrated to a concentration of 60% to obtain 2268 g of a ribitol-containing liquid.

【0047】(クロマト分画)強酸性陽イオン交換樹脂
が鉄形である以外は、実施例1と同様のクロマト分画装
置を使用して、以下のクロマト分画を実施した。A〜F
の各塔を60℃に保ちつつ、バルブH及びPを開き、バ
ルブJ、N及びOを閉じた状態で、前記濃度60%のリ
ビトール含有液300mlを毎分50mlの速さで流し
た。次にバルブHを閉じ、バルブJを開き、ポンプIか
ら水を毎時50mlの速さで供給した。バルブPの出口
の濃度が0.2%になった時点でバルブPを閉じ、バル
ブNを開いた。22分後、バルブNを閉じ、バルブOを
開いた。バルブOの出口の濃度が0.2%以下になった
時点でバルブOを閉じ、バルブPを開いた。この操作を
繰り返した。タンクL及びタンクMに得られた流出液の
濃度、重量及び糖組成は、表3の通りであった。
(Chromatographic fractionation) The following chromatographic fractionation was carried out using the same chromatographic fractionation apparatus as in Example 1 except that the strongly acidic cation exchange resin was in the iron form. AF
While maintaining the temperature of each column at 60 ° C., the valves H and P were opened, and the valves J, N and O were closed, and 300 ml of the above-mentioned 60% concentration of ribitol-containing liquid was flowed at a rate of 50 ml per minute. Next, the valve H was closed, the valve J was opened, and water was supplied from the pump I at a rate of 50 ml / h. When the concentration at the outlet of the valve P became 0.2%, the valve P was closed and the valve N was opened. After 22 minutes, valve N was closed and valve O was opened. When the concentration at the outlet of the valve O became 0.2% or less, the valve O was closed and the valve P was opened. This operation was repeated. Table 3 shows the concentrations, weights, and sugar compositions of the effluents obtained in the tanks L and M.

【0048】[0048]

【表3】 [Table 3]

【0049】(結晶化)タンクLの流出液を濃度77%
まで濃縮し、容量500mlの結晶化装置へ移し、温度
70℃から10時間かけて室温まで冷却した。途中60
℃にて少量の結晶リビトール粉末をシードとして加え
た。生成した結晶は遠心分離器を用いて分離し、少量の
水で水洗した。得られた結晶は、乾燥後、104gであ
り、液体クロマトグラフィー分析による純度は99.9
%であった。
(Crystallization) The effluent of the tank L is made to have a concentration of 77%.
The solution was transferred to a crystallizer having a capacity of 500 ml, and cooled from room temperature to 70 ° C. over 10 hours. On the way 60
At 0 ° C., a small amount of crystalline ribitol powder was added as a seed. The generated crystals were separated using a centrifuge and washed with a small amount of water. The obtained crystals weigh 104 g after drying and have a purity of 99.9 according to liquid chromatography analysis.
%Met.

【0050】[0050]

【実施例4】Embodiment 4

【0051】リビトール製造原料が砂糖である以外は実
施例1と同様の方法で培養を行った。得られた培養液1
ml当たりには、リビトール49.0mg(収率24.
5%)、エリスリトール45.2mg(収率22.6
%)、グリセリン1.4mg(収率0.7%)を含有し
ていた。
Cultivation was carried out in the same manner as in Example 1 except that the raw material for producing ribitol was sugar. Obtained culture solution 1
49.0 mg of ribitol per ml (yield 24.
5%), 45.2 mg of erythritol (yield 22.6)
%) And 1.4 mg of glycerin (yield 0.7%).

【0052】[0052]

【実施例5】Embodiment 5

【0053】トリコスポロノイデス属に属する微生物と
してトリコスポロノイデス・メガキリエンシス(CBS1
91.92)を用い、本培養を11日間行った以外は、
実施例1と同様の方法で培養を行った。得られた培養液
1ml当たりには、リビトール22.6mg(収率1
1.3%)、エリスリトール48.6mg(収率24.
3%)、グリセリン4.8mg(収率2.4%)を含有
していた。
As a microorganism belonging to the genus Trichosporonoides, Trichosporonoides megachiliensis (CBS1)
91.92), except that the main culture was performed for 11 days.
Culture was performed in the same manner as in Example 1. 22.6 mg of ribitol (yield 1
1.3%) and 48.6 mg of erythritol (yield 24.
3%) and 4.8 mg of glycerin (2.4% yield).

【0054】[0054]

【発明の効果】【The invention's effect】

【0055】本発明を実施することにより、入手が容易
で且つ安価な原料から、工業的にリビトールを製造する
ことができる。
By practicing the present invention, ribitol can be industrially produced from easily available and inexpensive raw materials.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図1】クロマト分画装置の概略図FIG. 1 is a schematic diagram of a chromatographic fractionation apparatus.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

A〜F 塔 G 原料仕込みポンプ H バルブ I 水仕込みポンプ J バルブ K 予熱器 L 流出液受けタンク M 流出液受けタンク N バルブ O バルブ P バルブ A to F tower G Raw material charging pump H valve I Water charging pump J valve K Preheater L Outflow liquid receiving tank M Outflow liquid receiving tank N valve O valve P valve

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 立野 芳明 静岡県富士市厚原1333−55 (72)発明者 岡本 直記 千葉県松戸市小根本186−2 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (72) Inventor Yoshiaki Tateno 1333-55, Atsuhara, Fuji City, Shizuoka Prefecture (72) Inventor Naoki Okamoto 186-2 Onemoto, Matsudo City, Chiba Prefecture

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 トリコスポロノイデス属に属する微生物
を、醗酵性糖質を主炭素源とする培地で培養し、得られ
た培養物からリビトールを採取することを特徴とするリ
ビトールの製造方法。
1. A method for producing ribitol, comprising culturing a microorganism belonging to the genus Trichosporonoides in a medium containing fermentable carbohydrate as a main carbon source, and collecting ribitol from the obtained culture.
【請求項2】 トリコスポロノイデス属に属する微生物
が、トリコスポロノイデス・オエドセファリスである請
求項1に記載のリビトールの製造方法。
2. The method for producing ribitol according to claim 1, wherein the microorganism belonging to the genus Trichosporonoides is Trichosporonoides oeedespharis.
【請求項3】 培養が、糖質濃度10〜45重量%、p
H3〜5.5、温度24〜38℃の範囲内で、好気的条
件で実施される請求項1または2に記載のリビトールの
製造方法。
3. The method according to claim 1, wherein the culturing is carried out at a carbohydrate concentration of 10 to 45% by weight,
The method for producing ribitol according to claim 1, wherein the method is performed under aerobic conditions at a temperature of H3 to 5.5 and a temperature of 24 to 38 ° C.
【請求項4】 培養物からのリビトールの採取が、培養
物を陽イオン交換樹脂を充填した塔に供給してリビトー
ル画分を分離するクロマト分画である請求項1〜3の何
れか一つに記載のリビトールの製造方法。
4. The method according to claim 1, wherein the collection of ribitol from the culture is a chromatography fraction in which the culture is supplied to a column packed with a cation exchange resin to separate a ribitol fraction. The method for producing ribitol according to the above.
【請求項5】 陽イオン交換樹脂が、アルミニウム形、
マンガン形または鉄形の何れかの強酸性陽イオン交換樹
脂である請求項4に記載のリビトールの製造方法。
5. The cation exchange resin is in the form of aluminum,
The method for producing ribitol according to claim 4, which is a strongly acidic cation exchange resin in either a manganese form or an iron form.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999061648A1 (en) 1998-05-27 1999-12-02 Mitsubishi Chemical Corporation Process for producing l-ribose
WO2020243190A1 (en) * 2019-05-28 2020-12-03 The Charlotte Mecklenburg Hospital Authority D/B/A Atrium Health Compositions and methods of making ribitol

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WO1999061648A1 (en) 1998-05-27 1999-12-02 Mitsubishi Chemical Corporation Process for producing l-ribose
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