JPH11125635A - Stabilized lyophilization product containing sensitized metal colloid and production thereof - Google Patents
Stabilized lyophilization product containing sensitized metal colloid and production thereofInfo
- Publication number
- JPH11125635A JPH11125635A JP30801897A JP30801897A JPH11125635A JP H11125635 A JPH11125635 A JP H11125635A JP 30801897 A JP30801897 A JP 30801897A JP 30801897 A JP30801897 A JP 30801897A JP H11125635 A JPH11125635 A JP H11125635A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- metal colloid
- sensitized metal
- glutamic acid
- freeze
- sensitized
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Drying Of Solid Materials (AREA)
- Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Colloid Chemistry (AREA)
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は試薬として用いることの
できる、感作金属コロイド含有凍結乾燥物の安定化に関
し、特に、主として臨床検査の分野において、抗原抗体
反応を利用した免疫学的測定等の特異的結合反応を利用
した測定に用いられる感作金属コロイドにつき、その凍
結乾燥状態での安定化を改善する製造方法、及び該方法
により得られる安定化された感作金属コロイド含有凍結
乾燥物に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to the stabilization of a freeze-dried product containing a sensitized metal colloid which can be used as a reagent, and particularly to immunoassay utilizing an antigen-antibody reaction mainly in the field of clinical examination. For sensitizing metal colloid used for measurement utilizing specific binding reaction of lyophilized product, and a method for improving the stability in a lyophilized state, and a lyophilized product containing stabilized sensitized metal colloid obtained by the method About.
【０００２】[0002]
【従来の技術】抗原抗体反応を利用した免疫学的測定法
において、金属コロイドが広く用いられている。例え
ば、組織細胞化学的検査において細胞や組織の構成物質
を検出するためにその構成物質に対する抗体を感作させ
た金属コロイドで染色する方法がある。2. Description of the Related Art Metallurgical colloids are widely used in immunoassays utilizing antigen-antibody reactions. For example, there is a method of staining with a metal colloid sensitized with an antibody against the constituent substance in order to detect a constituent substance of a cell or tissue in a histocytochemical test.
【０００３】また、抗原と、これに対する抗体を感作さ
せた金属コロイドとの間で形成させた、抗原・抗体−金
属コロイドの免疫複合体を判定紙上で展開させ、これ
を、別の抗体を固定した領域で更なる複合体として補足
し該領域の金属コロイドによる着色を判定することによ
る、免疫クロマト法がある。更には、溶液中で抗体感作
金属コロイドと抗原とを反応させ、抗原を介して生じる
抗体−金属コロイドの凝集による溶液の色調変化から、
抗原の有無や量を判定する凝集比色法がある。[0003] Further, an antigen-antibody-metal colloid immune complex formed between an antigen and a metal colloid sensitized with an antibody against the antigen is developed on a judgment paper, and this is separated into another antibody. There is an immunochromatography method in which an immobilized area is supplemented as a further complex and coloration of the area by a metal colloid is determined. Further, the antibody-sensitized metal colloid is reacted with the antigen in the solution, and the color tone of the solution is changed by the aggregation of the antibody-metal colloid generated through the antigen.
There is an agglutination colorimetric method for determining the presence or absence and amount of an antigen.
【０００４】このように、これらの測定法においては、
測定対象に特異的に結合する物質で金属コロイドを感作
したものである感作金属コロイドが利用されている。金
属コロイドのうち、特に広く用いられているのは金コロ
イドである。Thus, in these measuring methods,
A sensitized metal colloid, which is obtained by sensitizing a metal colloid with a substance that specifically binds to a measurement target, is used. Among metal colloids, gold colloid is particularly widely used.
【０００５】金属コロイドを感作処理後分散させる溶液
の組成についての多くの報告がある。例えば、特開平９
−５３２７には、0.05％ポリエチレングリコ−ル（分子
量20,000）／ＰＢＳ溶液（実施例１）が；特開平２−１
４１６６５には、0.05Ｍリン酸ナトリウム−0.15Ｍ食塩
−0.05％，カ−ボワックス２０Ｍ（ｐＨ7.2）（実施例
３）が；特開平８−２７８３０５には、10ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ（ｐＨ7.1），0.3Ｍ Ｄ−マンニト−ル，0.05％ポ
リエチレングリコ−ル（分子量20,000），0.1％牛血清
アルブミン（実施例：金コロイド標識抗ヒトヘモグロビ
ンモノクロ−ナル抗体の調製）が；特公平７−４６１０
７には、20ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ8.2），150ｍＭ塩化
ナトリウム，１％牛血清アルブミン（実施例５，第10頁
第20欄第42〜43行）が；特開平７−３１８５６０には、
0.1Ｍトリス緩衝液（ｐＨ7.6），0.3％牛血清アルブミ
ン，0.25％ポリエチレングリコ−ル（6000），４％シュ
−クロ−ス，0.1％アジ化ナトリウム（実施例，第７頁
第12欄第11〜15行）が；そして特開平６−９４７１８に
は、10ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ6.4），１％牛血清アル
ブミン，0.05％アジ化ナトリウム（実施例１、第４頁第
５欄第９〜13行）等の組成が記載されている。There are many reports on the composition of solutions in which metal colloids are dispersed after sensitization. For example, JP-A-9
-5327 contains a 0.05% polyethylene glycol (molecular weight: 20,000) / PBS solution (Example 1);
41665 contains 0.05M sodium phosphate-0.15M salt-0.05%, carbowax 20M (pH 7.2) (Example 3); JP-A-8-278305 discloses 10 mM HEP.
ES (pH 7.1), 0.3M D-mannitol, 0.05% polyethylene glycol (molecular weight 20,000), 0.1% bovine serum albumin (Example: Preparation of colloidal gold-labeled anti-human hemoglobin monoclonal antibody); Tokiko 7-4610
No. 7, 20 mM Tris buffer (pH 8.2), 150 mM sodium chloride, 1% bovine serum albumin (Example 5, page 10, column 20, lines 42 to 43);
0.1 M Tris buffer (pH 7.6), 0.3% bovine serum albumin, 0.25% polyethylene glycol (6000), 4% sucrose, 0.1% sodium azide (Example, page 7, column 12) And JP-A-6-94718 discloses 10 mM phosphate buffer (pH 6.4), 1% bovine serum albumin, 0.05% sodium azide (Example 1, page 4, column 5, column 5). 9 to 13).
【０００６】一方、抗原抗体反応を利用した各種免疫学
的測定用試薬を凍結乾燥時に安定化する方法および、凍
結乾燥状態で安定化する方法についてもいくつかの報告
がある。On the other hand, there have been several reports on methods for stabilizing various immunological assay reagents utilizing an antigen-antibody reaction at the time of lyophilization and methods of stabilizing the reagents in a lyophilized state.
【０００７】特開平２−１６１３５７には、抗体を結合
させたポリスチレン性マイクロプレ−トを、グルコ−
ス、フルクト−ス、サッカロ−ス、乳糖、デキストラン
又はポリビニルピロリドンを含む溶液で洗浄して凍結乾
燥することによる、マイクロプレート結合抗体の凍結乾
燥状態での安定化方法が；また、特開昭６１−１８９４
５４には、抗体結合マイクロプレートを、サッカロ−ス
及び/又はマンニト−ルを含む水溶液で洗浄した後に凍
結乾燥する方法による、マイクロプレ−トに結合した抗
体の凍結乾燥状態における安定化が、それぞれ開示され
ている。Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-161357 discloses a polystyrene microplate to which an antibody is bound,
A method for stabilizing a microplate-bound antibody in a lyophilized state by washing with a solution containing sucrose, fructose, saccharose, lactose, dextran or polyvinylpyrrolidone and freeze-drying; −1894
54, stabilization of the antibody bound to the microplate in a lyophilized state by a method of washing the antibody-bound microplate with an aqueous solution containing saccharose and / or mannitol and then freeze-drying, It has been disclosed.
【０００８】また、特開昭６２−２０９３６２には、抗
原又は抗体を感作させた赤血球あるいはラテックスの凍
結乾燥に際し、牛血清アルブミン、グルコ−ス、ラクト
−ス若しくはサッカロ−スの何れか、又は牛血清アルブ
ミンに加えてこれらの糖の何れかを含有させておくこと
により安定化させる方法が；特開昭６３−１０６５６２
には、ＩｇＭ抗体を感作させたヒツジ固定化赤血球を含
む逆受身赤血球凝集反応試薬の凍結乾燥に際し、牛血清
アルブミンおよびソルビト−ル、マルト−ス又はサッカ
ロ−スを添加しておくことにより凍結乾燥時の安定化を
図れることが、それぞれ開示されている。Japanese Patent Application Laid-Open No. Sho 62-209362 discloses that when lyophilizing red blood cells or latex sensitized with an antigen or antibody, any one of bovine serum albumin, glucose, lactose or saccharose, or A method of stabilizing by containing any of these sugars in addition to bovine serum albumin is disclosed in JP-A-63-106562.
For freeze-drying of a reverse passive hemagglutination reagent containing sheep immobilized red blood cells sensitized with an IgM antibody, bovine serum albumin and sorbitol, maltose or saccharose are added to freeze It is disclosed that stabilization during drying can be achieved.
【０００９】更には、特開平５−６５２３３には、Ｅ血
清型緑膿菌に反応性を示すヒトモノクロ−ナル抗体の凍
結乾燥製剤を作製するに際して、中性ゼラチンに加えて
更にグルコ−ス、サッカロ−ス、マンニト−ル、グリシ
ン又はアルギニンを含む溶液状態から凍結乾燥する方法
により、当該抗体が凍結乾燥処理に対して安定化できる
ことが開示されている。Furthermore, Japanese Patent Application Laid-Open No. 5-65233 discloses that a freeze-dried preparation of a human monoclonal antibody reactive to Pseudomonas aeruginosa E is prepared, in addition to neutral gelatin, glucose, It is disclosed that the antibody can be stabilized against freeze-drying by a method of freeze-drying from a solution containing saccharose, mannitol, glycine or arginine.
【００１０】[0010]
【発明が解決しようとする課題】上記のように、感作金
属コロイドを含んだ液状組成物の組成そのものを例示す
るに過ぎない文献や、遊離の抗体とマイクロプレート又
はラテックス若しくは赤血球との結合物についての凍結
乾燥時及び凍結乾燥状態での安定化に関する文献、並び
に、遊離の抗体のゼラチン等による凍結乾燥時安定化に
関する文献は幾つか見られるが、感作金属コロイドにつ
いては、これを凍結乾燥状態において安定化するような
製造方法も、安定化された凍結乾燥物も知られていな
い。As described above, the literature merely exemplifies the composition itself of a liquid composition containing a sensitized metal colloid, and a conjugate of a free antibody and a microplate or a latex or erythrocyte. There are several literatures on lyophilization and freeze-drying of, and literature on lyophilization of free antibody by gelatin, etc. Neither a production method that stabilizes in a state nor a stabilized freeze-dried product is known.
【００１１】一方、感作金属コロイド、特に抗体感作金
属コロイドにおいては、凍結乾燥状態での試薬としての
安定性が低く、低温で保存しない限り反応性が急速に低
下するという問題がある。従って、凍結乾燥状態で高い
安定性を維持できる感作金属コロイド試薬が従来より求
められていた。On the other hand, sensitized metal colloids, particularly antibody-sensitized metal colloids, have a problem that the stability as a reagent in a lyophilized state is low, and the reactivity rapidly decreases unless stored at a low temperature. Therefore, a sensitized metal colloid reagent capable of maintaining high stability in a lyophilized state has been conventionally required.
【００１２】本発明は、この問題を解消して、感作金属
コロイドを凍結乾燥状態で安定化できる製造方法、及
び、長期保存可能な感作金属コロイド含有凍結乾燥物を
提供することを目的とする。It is an object of the present invention to solve the above problems and to provide a production method capable of stabilizing a sensitized metal colloid in a lyophilized state and a lyophilized product containing the sensitized metal colloid which can be stored for a long time. I do.
【００１３】[0013]
【課題を解決するための手段】即ち、本発明は、第１
に、安定化させた感作金属コロイド含有凍結乾燥物の製
造方法であって、感作金属コロイド含有溶液の凍結乾燥
に際し、該溶液に、サッカロ−ス、トレハロ−ス、β−
シクロデキストリン、トレオニン、アスパラギン酸、ト
リプトファン、グルタミン酸、アスパラギン、ヒスチジ
ン、グルタミン酸−アルギニン、ロイシルグリシン、グ
リシルチロシン、フェニルアラニン及び塩化カルシウム
よりなる群より選ばれる物質の１種または２種以上を含
有させておくことを特徴とする方法を提供する。この方
法に従えば、従来の感作金属コロイド試薬に比して著し
く安定性の高い、より長期に亘って反応性を維持できる
試薬を得ることができる。That is, the present invention provides a first method.
A method for producing a stabilized lyophilized product containing a sensitized metal colloid, which comprises saccharose, trehalose, β-
Containing one or more substances selected from the group consisting of cyclodextrin, threonine, aspartic acid, tryptophan, glutamic acid, asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine, glycyltyrosine, phenylalanine and calcium chloride Providing a method characterized in that: According to this method, it is possible to obtain a reagent which is significantly more stable than conventional sensitized metal colloid reagents and can maintain reactivity for a longer period of time.
【００１４】従ってまた本発明は、サッカロ−ス、トレ
ハロ−ス、β−シクロデキストリン、トレオニン、アス
パラギン酸、トリプトファン、グルタミン酸、アスパラ
ギン、ヒスチジン、グルタミン酸−アルギニン、ロイシ
ルグリシン、グリシルチロシン、フェニルアラニン、お
よび塩化カルシウムよりなる群より選ばれる物質の１種
または２種以上を含有すること特徴とする、感作金属コ
ロイド含有凍結乾燥物をも提供する。本発明の感作金属
コロイド含有凍結乾燥物は、従来より感作金属コロイド
を用いて行われている種々の検査、例えば組織化学的検
査や免疫クロマト法その他の免疫学的測定を含む検査に
おいて、より安定で取り扱い易い試薬として、従来の感
作金属コロイド試薬に代えて有利に使用することができ
る。Accordingly, the present invention also relates to saccharose, trehalose, β-cyclodextrin, threonine, aspartic acid, tryptophan, glutamic acid, asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine, glycyltyrosine, phenylalanine, and The present invention also provides a lyophilized product containing a sensitized metal colloid, which comprises one or more substances selected from the group consisting of calcium chloride. The lyophilized product containing the sensitized metal colloid of the present invention can be used in various tests conventionally performed using the sensitized metal colloid, for example, in tests including histochemical tests, immunochromatography, and other immunological measurements. As a more stable and easy-to-handle reagent, it can be advantageously used in place of the conventional sensitized metal colloid reagent.
【００１５】[0015]
【発明の実施の形態】本発明において金属コロイドとし
ては、特に限定されることなく金、銀、セレン、鉄等の
コロイドが挙げられるが、これらのうち金コロイドが一
般的に利用され易く、特に好ましい。例えば金コロイド
を用いる場合、市販品金コロイド試薬（例えば、メイチ
ェックヘモプレートオート：日本商事（株）製）をその
まま使用してもよく、また公知の方法、例えば塩化金酸
をクエン酸ナトリウムで還元する方法によって製造して
もよい。そのような製造方法としては、Frensの方法（N
ature Phys. Sci., 241:p.20 (1973))が知られている。
また一例として、具体的には、95℃の蒸留水500ｍＬに1
0％塩化金酸溶解液（HAuCl・４Ｈ2Ｏ）を撹拌しながら
加え、1分後に２％クエン酸ナトリウム溶液５ｍＬを加
え撹拌し冷却後例えば0.1Ｍ炭酸カリウム溶液でｐＨ7.0
等に調整することにより得られる（特開平８−２７８３
０５参照）。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION In the present invention, metal colloids include, but are not particularly limited to, colloids of gold, silver, selenium, iron and the like. Among these, gold colloids are easily used in general. preferable. For example, when gold colloid is used, a commercially available gold colloid reagent (for example, Meicheck Hemoplate Auto: manufactured by Nihon Shoji Co., Ltd.) may be used as it is, or a known method, for example, chloroauric acid may be replaced with sodium citrate. It may be produced by a reduction method. Such a manufacturing method includes the method of Frens (N
ature Phys. Sci., 241: p. 20 (1973)).
Also, as an example, specifically, 500 mL of distilled water at 95 ° C.
A 0% chloroauric acid solution (HAuCl.4H 2 O) is added with stirring. One minute later, 5 mL of a 2% sodium citrate solution is added and stirred.
Etc. (JP-A-8-2783).
05).
【００１６】金属コロイドを感作させる物質としては、
例えば抗体又は抗原が挙げられるが、これら以外にも、
測定対象に特異的に結合する性質を有する物質であれば
利用可能である。[0016] Substances that sensitize metal colloids include:
For example, antibodies or antigens, but in addition to these,
Any substance can be used as long as it has a property of specifically binding to the measurement target.
【００１７】また上記の安定化剤は、（１）サッカロ−
ス、トレハロ−ス及びβ−シクロデキストリンよりなる
群と、（２）トレオニン、アスパラギン酸、トリプトフ
ァン、グルタミン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グル
タミン酸−アルギニン、ロイシルグリシン及びグリシル
チロシン及びフェニルアラニンよりなる群と、そして
（３）塩化カルシウムよりなる群のうち、少なくとも２
つの群より選ばれた物質を併用することにより、更に優
れた効果をあらわす。Further, the above-mentioned stabilizing agent comprises (1) Saccharo-
(2) a group consisting of threonine, aspartic acid, tryptophan, glutamic acid, asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine and glycyltyrosine and phenylalanine; and (3) at least two of the group consisting of calcium chloride
Combined use of substances selected from the two groups provides even better effects.
【００１８】本発明において凍結乾燥に際して安定化剤
として用いられるサッカロ−ス、トレハロ−ス、β−シ
クロデキストリン、トレオニン、アスパラギン酸、グル
タミン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン酸−
アルギニン、ロイシルグリシン、グリシルチロシン又は
フェニルアラニンは、感作金属コロイド含有溶液に適宜
の濃度に含有させればよいが、好ましくは0.3 Ｗ／Ｖ％
以上の濃度に含有させる。感作金属コロイド含有溶液に
可溶である限り上記安定化剤は高い濃度に含有させても
よく、特に上限はないが、通常は、感作金属コロイド含
有溶液中に、例えば0.3〜２Ｗ／Ｖ％の濃度に含有させ
ればよく、更に好ましくは0.5〜１Ｗ／Ｖ％の濃度に含
有させればよい。In the present invention, saccharose, trehalose, β-cyclodextrin, threonine, aspartic acid, glutamic acid, asparagine, histidine, glutamic acid, which are used as stabilizers during freeze-drying.
Arginine, leucylglycine, glycyltyrosine or phenylalanine may be contained in the sensitized metal colloid-containing solution at an appropriate concentration, but preferably 0.3 W / V%.
It is contained in the above concentration. The stabilizer may be contained in a high concentration as long as it is soluble in the sensitizing metal colloid-containing solution, and there is no particular upper limit. Usually, the sensitizing metal colloid-containing solution contains, for example, 0.3 to 2 W / V. %, More preferably 0.5-1 W / V%.
【００１９】一方、トリプトファンは、上記安定化剤よ
り微量で有効であり、感作金属コロイド含有溶液中に0.
01Ｗ／Ｖ％以上の濃度に含有させれば優れた効果をあら
わす。感作金属コロイド含有溶液に可溶である限りこれ
より高い濃度に含有させてもよいが、通常好ましいトリ
プトファンの濃度範囲は0.01〜0.1Ｗ／Ｖ％であり、よ
り好ましくは0.05〜0.1Ｗ／Ｖ％である。On the other hand, tryptophan is more effective than the above stabilizer in a trace amount, and is contained in the sensitized metal colloid-containing solution at a concentration of 0.1%.
An excellent effect can be obtained if it is contained at a concentration of 01 W / V% or more. It may be contained at a higher concentration as long as it is soluble in the sensitized metal colloid-containing solution, but the preferred tryptophan concentration range is usually 0.01 to 0.1 W / V%, more preferably 0.05 to 0.1 W / V. %.
【００２０】また、塩化カルシウムも0.01Ｗ／Ｖ％以上
の濃度で効果をあらわす。感作金属コロイド含有溶液に
可溶である限りこれより高い濃度に含有させてもよく、
特に上限はないが、通常好ましい塩化カルシウムの濃度
範囲は0.01〜0.6Ｗ／Ｖ％であり、より好ましくは0.05
〜0.3Ｗ／Ｖ％である。Calcium chloride also exhibits an effect at a concentration of 0.01 W / V% or more. It may be contained at a higher concentration as long as it is soluble in the sensitized metal colloid-containing solution,
Although there is no particular upper limit, the normally preferred concentration range of calcium chloride is 0.01 to 0.6 W / V%, more preferably 0.05 to 0.6 W / V%.
0.30.3 W / V%.
【００２１】本発明の感作金属コロイド含有凍結乾燥物
としては、感作金属コロイド１重量部に対し：サッカロ
−ス、トレハロ−ス、β−シクロデキストリン、トレオ
ニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、
ヒスチジン、グルタミン酸−アルギニン、ロイシルグリ
シン、グリシルチロシン又はフェニルアラニンを含有す
る場合には、その含有量は４重量部以上であることが好
ましく、更に好ましくは４〜25重量部の範囲であればよ
い。The freeze-dried product containing the sensitized metal colloid of the present invention includes, per 1 part by weight of the sensitized metal colloid, saccharose, trehalose, β-cyclodextrin, threonine, aspartic acid, glutamic acid, asparagine,
When histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine, glycyltyrosine or phenylalanine is contained, the content is preferably at least 4 parts by weight, more preferably 4 to 25 parts by weight. .
【００２２】一方、本発明の感作金属コロイド含有凍結
乾燥物がトリプトファンを含有する場合には、その含有
量は、感作金属コロイド１重量部に対し0.1重量部以上
であることが好ましく、0.1〜１重量部の範囲であれば
更に好ましい。On the other hand, when the freeze-dried product containing a sensitized metal colloid of the present invention contains tryptophan, the content is preferably 0.1 part by weight or more per 1 part by weight of the sensitized metal colloid. More preferably, the content is in the range of 1 to 1 part by weight.
【００２３】また、本発明の感作金属コロイド含有凍結
乾燥物が塩化カルシウムを含有する場合には、その含有
量は、感作金属コロイド１重量部に対し0.1重量部以上
であることが好ましく、0.1〜８重量部の範囲であれば
更に好ましい。When the freeze-dried product containing a sensitized metal colloid of the present invention contains calcium chloride, the content is preferably at least 0.1 part by weight per 1 part by weight of the sensitized metal colloid. It is more preferable that the amount is in the range of 0.1 to 8 parts by weight.
【００２４】本発明の感作金属コロイド含有凍結乾燥物
は、感作金属コロイドに対し上記の安定化剤を上記の重
量比率で含有することにより、保存安定性が特に顕著に
改善されている。The freeze-dried product containing the sensitized metal colloid of the present invention has a particularly remarkably improved storage stability by containing the above-mentioned stabilizer in the above-mentioned weight ratio with respect to the sensitized metal colloid.
【００２５】本発明の方法により感作金属コロイド含有
溶液を凍結乾燥させるに際しては、溶液には、緩衝剤、
アルブミン、防腐剤等を適宜含有させてよい。従ってま
た、本発明の感作金属コロイド含有凍結乾燥物には、そ
れら緩衝剤、アルブミン、防腐剤等が適宜含まれていて
よい。When freeze-drying the sensitized metal colloid-containing solution by the method of the present invention, a buffer, a buffer,
Albumin, preservatives and the like may be appropriately contained. Therefore, the lyophilized product containing the sensitized metal colloid of the present invention may appropriately contain such buffers, albumin, preservatives and the like.
【００２６】緩衝剤としては、例えば、トリス（ヒドロ
キシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、２，２−ビス
（２−ヒドロキシメチル）−２，２’，２”−ニトリロ
トリエタノ−ル（Ｂｉｓ−ｔｒｉｓ）、２−（Ｎ−モル
フォリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ−（２−ア
セトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ−（２−アセ
トアミド）−２−アミノエタンスルフォン酸（ＡＣＥ
Ｓ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン
酸）（ＰＩＰＥＳ）、３−（Ｎ−モルフォリノ）−２−
ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、３−
（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰ
Ｓ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−ア
ミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、２−（４−（２−ヒ
ドロキシエチル）−１−ピペラジニル）エタンスルホン
酸（ＨＥＰＥＳ）、３−（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキ
シエチル）アミノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン
酸（ＤＩＰＳＯ）及びＮ−トリス（ヒドロキシメチル）
メチル−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン
酸（ＴＡＰＳＯ）等、グッド緩衝液の緩衝成分が挙げら
れるが、これらに限定されない。感作金属コロイド含有
溶液に緩衝剤を含有させる場合、溶液のｐＨは6.0〜9.0
の範囲に調整するのが特に好ましく、緩衝剤濃度は１〜
100ｍＭの範囲とするのが好ましい。As the buffer, for example, tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris), 2,2-bis (2-hydroxymethyl) -2,2 ′, 2 ″ -nitrilotriethanol (Bis-tris) , 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid (MES), N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA), N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid (ACE)
S), piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES), 3- (N-morpholino) -2-
Hydroxypropanesulfonic acid (MOPSO), 3-
(N-morpholino) propanesulfonic acid (MOP
S), N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES), 2- (4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl) ethanesulfonic acid (HEPES), 3- (N, N-bis (2-hydroxyethyl) amino) -2-hydroxypropanesulfonic acid (DIPSO) and N-tris (hydroxymethyl)
Examples include, but are not limited to, buffer components of Good's buffer, such as methyl-3-amino-2-hydroxypropanesulfonic acid (TAPSO). When a buffer is contained in the sensitized metal colloid-containing solution, the pH of the solution is 6.0 to 9.0.
It is particularly preferable to adjust the buffer concentration to a range of 1 to 3.
Preferably, it is in the range of 100 mM.
【００２７】アルブミンとしては、例えば牛血清アルブ
ミンが挙げられる。感作金属コロイド含有溶液にアルブ
ミンを含有させる場合、その好ましい使用濃度は、0.01
〜1.0Ｗ／Ｖ％の範囲である。Examples of albumin include bovine serum albumin. When albumin is contained in the sensitized metal colloid-containing solution, the preferred use concentration is 0.01
1.01.0 W / V%.
【００２８】防腐剤としては、例えばアジ化ナトリウム
が挙げられる。感作金属コロイド含有溶液にこれを含有
させる場合、その好ましい使用濃度は0.01〜0.5Ｗ／Ｖ
％の範囲である。The preservative includes, for example, sodium azide. When this is contained in the sensitized metal colloid-containing solution, its preferred use concentration is 0.01 to 0.5 W / V.
% Range.
【００２９】測定対象に特異的に結合する活性物質で金
属コロイドを感作させるには、例えば The Journal of
Histochemistry and Cytochemistry, 30(7): p.691-696
(1982).に記載の方法が使用できる。即ち、溶液中にて
抗体等の活性物質をその等電点付近のｐＨにて金属コロ
イドと混合すればよい。必要に応じ適宜アルブミンやカ
ゼイン等を加えてもよく、遠心分離等により採取し、適
当な緩衝液に再度分散させる。In order to sensitize a metal colloid with an active substance that specifically binds to an object to be measured, for example, see The Journal of
Histochemistry and Cytochemistry, 30 (7): p.691-696
(1982). That is, an active substance such as an antibody may be mixed with a metal colloid in a solution at a pH near its isoelectric point. If necessary, albumin, casein and the like may be appropriately added, and the sample is collected by centrifugation or the like, and dispersed again in an appropriate buffer.
【００３０】[0030]
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれら実施例により特に制約を受
けるものではない。EXAMPLES The present invention will be described in more detail with reference to the following Examples, which should not be construed as limiting the present invention.
【００３１】（実施例１） （１）感作金属コロイド試薬の凍結乾燥物の作製：抗ヒ
トヘモグロビン抗体を感作した金コロイド試薬（メイチ
ェックヘモプレ−トオ−ト：日本商事（株）製）の凍結
乾燥品（６０ｍＬ用製品）を蒸留水２ｍＬに溶解させた
溶液と、表１の各安定化剤を蒸留水に溶解させた溶液
（但し、対照としては蒸留水のみを使用）とを、混合溶
液中の各安定化剤の濃度がそれぞれ表１に示す濃度とな
るように、１：１の比率で混合した。これらの混合溶液
0.4ｍＬを凍結乾燥用の10ｍＬバイアルに分注し、３日
間かけて凍結乾燥した後、バイアル内に窒素ガスを充填
し封栓し、４℃及び37℃にて１週間放置した。Example 1 (1) Preparation of Lyophilized Product of Sensitized Metal Colloid Reagent: Colloidal Gold Reagent Sensitized with Anti-Human Hemoglobin Antibody (May Check Hemoplate Auto: manufactured by Nihon Shoji Co., Ltd.) A) A solution obtained by dissolving a freeze-dried product (product for 60 mL) in 2 mL of distilled water and a solution obtained by dissolving each of the stabilizers in Table 1 in distilled water (however, only distilled water is used as a control). The mixture was mixed at a ratio of 1: 1 such that the concentration of each stabilizer in the mixed solution was as shown in Table 1. These mixed solutions
0.4 mL was dispensed into a 10 mL vial for freeze-drying, and after freeze-drying for 3 days, the vial was filled with nitrogen gas, sealed, and left at 4 ° C. and 37 ° C. for 1 week.
【００３２】[0032]
【表１】 （表１） ────────────────────────────── 安定化剤 濃度（％） 反応性残存率（％） ────────────────────────────── サッカロース 1.0 ７９ トレハロース 1.0 ７６ β−シクロテ゛キストリン 1.0 ５８ DL−トレオニン 1.0 ８４ L−アスハ゜ラキ゛ン酸ナトリウム 1.0 ９６ DL−トリフ゜トファン 0.1 ８６ L−ク゛ルタミン酸ナトリウム 1.0 ９５ 塩化カルシウム 0.3 ９５ DL−アスハ゜ラキ゛ン 1.0 ９１ L−ヒスチシ゛ン 1.0 ８５ L−ク゛ルタミン酸−L−アルキ゛ニン 1.0 ８８ L−ロイシルク゛リシン 1.0 ８８ ク゛リシル−L−チロシン 1.0 ８６ L−フェニルアラニン 1.0 ８８ ────────────────────────────── 対 照 − １６ ────────────────────────────── (Table 1) ────────────────────────────── Stabilizer concentration (%) Remaining reactivity ( %) ────────────────────────────── Saccharose 1.0 79 Trehalose 1.0 76 β-Cyclodextrin 1.0 58 DL-Threonine 1.0 84 L -Sodium asparadinate 1.0 96 DL-Triphytophan 0.186 L-Sodium quartamate 1.0 95 Calcium chloride 0.3 95 DL-Aspartaquidone 1.0 91 L-Histidine 1.0 85 L-Cultamic acid-L-Alkyninine 1.088 L-Leucylglycine 1.088 Glycil-L -Tyrosine 1.086 L-Phenylalanine 1.088 照 Control -16 − ───── ──────────────────
【００３３】（２）反応性の測定 ヒトヘモグロビンを、緩衝液Ａ（0.05Ｗ／Ｖ％牛血清ア
ルブミン、0.1Ｗ／Ｖ％アスパラギン、0.9Ｗ／Ｖ％塩化
ナトリウム、1.8Ｗ／Ｖ％ポリエチレングリコ−ル、0.0
5Ｗ／Ｖ％アジ化ナトリウム、を含む30ｍＭ ＭＥＳ緩
衝液 ｐＨ5.7）に溶解し、ヘモグロビン濃度０，50，1
00，200ｎｇ／ｍｌの溶液を調整し、−40℃で冷凍保存
したものを溶解して検体として使用した。(2) Measurement of Reactivity Human hemoglobin was prepared using buffer A (0.05 W / V% bovine serum albumin, 0.1 W / V% asparagine, 0.9 W / V% sodium chloride, 1.8 W / V% polyethyleneglycol). , 0.0
Dissolved in 30 mM MES buffer (pH 5.7) containing 5 W / V% sodium azide, and hemoglobin concentration of 0,50,1.
A 200,200 ng / ml solution was prepared, and a solution frozen at −40 ° C. was dissolved and used as a sample.
【００３４】上記（１）の、37℃または４℃で１週間放
置した凍結乾燥物を、0.1Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミン、
３Ｗ／Ｖ％マンニト−ル、0.05Ｗ／Ｖ％アジ化ナトリウ
ム、を含む５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液３ｍＬで溶解し
て、金コロイド試薬溶液とし、その反応性を以下の方法
により測定したThe lyophilized product (1) left at 37 ° C. or 4 ° C. for 1 week was subjected to 0.1 W / V% bovine serum albumin,
It was dissolved in 3 mL of 5 mM HEPES buffer containing 3 W / V% mannitol and 0.05 W / V% sodium azide to prepare a colloidal gold reagent solution, and the reactivity was measured by the following method.
【００３５】検体25μｌ、緩衝液Ａ50μｌ、金コロイド
試薬溶液100μｌをマイクロプレ−ト上に添加し、15秒
間専用撹拌器で撹拌した。撹拌開始から60秒後と７分後
の吸光度差を、プレ−トリ−ダ−（主波長540ｎｍ副波
長700ｎｍ）を用いて測定した。60秒後の吸光度と７分
後の吸光度との差（変化）を検体（ヘモグロビン）に対
する金コロイド試薬溶液の反応性の指標とした。４℃に
て１週間放置した（１）の各凍結乾燥物を再溶解して得
られた金コロイド試薬溶液の反応性（吸光度変化）に対
する、37℃にて１週間放置した（１）の対応する凍結乾
燥物を再溶解して得られた金コロイド試薬溶液の反応性
（吸光度変化）の比率（％）を求め、これを反応性残存
率と定義し、37℃にて保存された凍結乾燥物の、温度に
対する安定性の指標として用いた。25 μl of the sample, 50 μl of the buffer solution A, and 100 μl of the colloidal gold reagent solution were added onto the microplate, and the mixture was stirred for 15 seconds with a dedicated stirrer. The difference in absorbance at 60 seconds and 7 minutes after the start of stirring was measured using a pre-treader (main wavelength: 540 nm; sub-wavelength: 700 nm). The difference (change) between the absorbance after 60 seconds and the absorbance after 7 minutes was used as an index of the reactivity of the gold colloid reagent solution to the sample (hemoglobin). Correspondence of (1) left for 1 week at 37 ° C. to the reactivity (absorbance change) of the gold colloid reagent solution obtained by re-dissolving each freeze-dried product of (1) left for 1 week at 4 ° C. The ratio (%) of the reactivity (absorbance change) of the gold colloid reagent solution obtained by re-dissolving the lyophilized product to be freeze-dried is determined, and this is defined as the remaining reactivity, and the lyophilized solution stored at 37 ° C is determined. It was used as an indicator of the stability of the material to temperature.
【００３６】各種安定化剤の効果は前記表１の右欄に示
した通りである。表より明らかなように、Ｌ−アスパラ
ギン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム及び塩
化カルシウムは、対照と比較して約６倍の反応性残存率
を示し、凍結乾燥物の温度に対する安定性をこれらの化
合物が著しく高めることが認められた。The effects of the various stabilizers are as shown in the right column of Table 1 above. As is clear from the table, sodium L-aspartate, sodium L-glutamate and calcium chloride exhibited an approximately 6-fold reactivity retention ratio as compared with the control, and the stability of the lyophilized product to temperature was reduced by these compounds. Was significantly increased.
【００３７】（実施例２）実施例１で用いた安定化剤の
うち、サッカロ−ス、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム及び塩化カルシウムを選
び、それらを組み合わせて感作金コロイド含有溶液を調
製すると共に、それら安定化剤の１種類のみを配合した
感作金コロイド含有溶液をも調製し、実施例１と同様の
方法で各金コロイド凍結乾燥物を作製・放置し、それら
凍結乾燥物の温度に対する安定性を同様の方法で求め
た。結果を次の表２に示す。Example 2 Among the stabilizers used in Example 1, saccharose, sodium L-aspartate,
Sodium L-glutamate and calcium chloride were selected and combined to prepare a sensitized gold colloid-containing solution, and also a sensitized gold colloid-containing solution containing only one of these stabilizers was prepared. Each gold colloid freeze-dried product was prepared and allowed to stand in the same manner as described above, and the temperature stability of the freeze-dried product was determined by the same method. The results are shown in Table 2 below.
【００３８】[0038]
【表２】 （表２） ────────────────────────────────── 安定化剤の組合わせ 反応性残存率（％） ────────────────────────────────── サッカロース 1.0％＋L-ク゛ルタミン酸ナトリウム 0.25％ ８７ サッカロース 0.5％＋L-ク゛ルタミン酸ナトリウム 0.5％ ８８ サッカロース 1.0％＋L-アスハ゜ラキ゛ン酸ナトリウム 0.25％ ９０ サッカロース 0.5％＋L-アスハ゜ラキ゛ン酸ナトリウム 0.5％ ７９ サッカロース 1.0％＋塩化カルシウム 0.02％ ８５ L-ク゛ルタミン酸ナトリウム 0.5％＋塩化カルシウム 0.02％ ８６ サッカロース 1.0％ ７２ サッカロース 0.5％ ６３ L-ク゛ルタミン酸ナトリウム 0.5％ ７３ L-ク゛ルタミン酸ナトリウム 0.25％ ５９ L-アスハ゜ラキ゛ン酸ナトリウム 0.5％ ７４ L-アスハ゜ラキ゛ン酸ナトリウム 0.25％ ５６ ────────────────────────────────── 対 照 １０ ────────────────────────────────── (Table 2) ────────────────────────────────── Combination of stabilizers Reactivity Residual rate (%) ────────────────────────────────── Saccharose 1.0% + Sodium L-coultamate 0.25% 87 Saccharose 0.5% + Sodium L-Cultamate 0.5% 88 Saccharose 1.0% + Sodium L-Asperaquidinate 0.25% 90 Saccharose 0.5% + Sodium L-Asperaquidate 0.5% 79 Saccharose 1.0% + Calcium Chloride 0.02% 85 L-Sodium Cultamate 0.5% + Calcium Chloride 0.02 % 86 Saccharose 1.0% 72 Saccharose 0.5% 63 L-Sodium glutamic acid 0.5% 73 L-Sodium chlorothamate 0.25% 59 L-Sodium asperakidate 0.5% 74 L-Sodium asparadionate 0.25% 56 ────────────────────────────────── Control 10 ──── ──────────────────────────────
【００３９】表２から明らかなように、安定化剤を組み
合わせて配合した処方は、安定化剤を単独で配合した対
応する処方と比較して、いずれも更に高い反応性残存率
を示した。このことは、これらの安定化剤が、組み合わ
せることによって一層効果的であることを示している。As is evident from Table 2, the formulations prepared by combining the stabilizers showed higher reactivity retention ratios than the corresponding formulations prepared by combining the stabilizers alone. This indicates that these stabilizers are more effective when combined.
【００４０】（実施例３）実施例１で用いた安定化剤の
一部について、安定化効果と安定化剤濃度との関係を調
べた。37℃及び４℃での放置期間が５日間であること以
外は、実施例１と同様の方法を用いた。結果を次の表３
に示す。(Example 3) The relationship between the stabilizing effect and the stabilizer concentration was examined for some of the stabilizers used in Example 1. A method similar to that of Example 1 was used, except that the standing period at 37 ° C. and 4 ° C. was 5 days. The results are shown in Table 3 below.
Shown in
【００４１】[0041]
【表３】 ────────────────────────────── 安定化剤 濃度（％） 反応性残存率（％） ────────────────────────────── サッカロース 0.1 ９ 0.5 ７５ 1.0 ９０ ────────────────────────────── トレハロース 0.3 ３２ 0.5 ６０ 1.0 ９０ ────────────────────────────── β−シクロテ゛キストリン 0.1 ５ 0.5 ４３ 1.0 ７０ ────────────────────────────── DL−トレオニン 0.3 ７９ 0.5 ８８ 1.0 ８９ ────────────────────────────── L−アスハ゜ラキ゛ン酸ナトリウム 0.3 ５８ 0.5 ５６ 1.0 ８２ ────────────────────────────── DL−トリフ゜トファン 0.01 ６８ 0.05 ８１ 0.1 ８５ ────────────────────────────── L−ク゛ルタミン酸ナトリウム 0.3 ５８ 0.5 ７７ 1.0 ８１ ────────────────────────────── L−ク゛ルタミン酸−L−アルキ゛ニン 0.3 ７４ 0.5 ７４ 1.0 ９２ ────────────────────────────── ク゛リシル−L−チロシン 0.3 ６８ 0.5 １００ 1.0 １００ ────────────────────────────── 塩化カルシウム 0.01 ３２ 0.05 ８０ 0.10 ９０ 0.30 １００ ────────────────────────────── 対 照 − ６ ────────────────────────────── [Table 3] 安定 Stabilizer concentration (%) Remaining reactivity rate (%) ── ──────────────────────────── Saccharose 0.1 9 0.5 75 1.0 90 ─────────────── ─────────────── Trehalose 0.3 32 0.5 60 1.0 90 ──────────────────────────── ── β-cyclodextrin 0.1 5 0.5 43 1.0 70 ────────────────────────────── DL-threonine 0.3 79 0.5 88 1.0 89 ナ ト リ ウ ム Sodium L-asparadionate 0.3 58 0.5 56 1.0 82 ──────── ─────────────────── ── DL-triphtophan 0.01 68 0.05 81 0.1 85 ナ ト リ ウ ム Sodium L-chlorotamate 0.3 58 0.5 77 1.0 81 ────────────────────────────── L-coultamic acid-L-alkydnin 0.3 74 0.5 74 1.0 92 ────── ────────────────────────Quilisyl-L-tyrosine 0.3 68 0.5 100 1.0 100 ───────────────カ ル シ ウ ム Calcium chloride 0.01 32 0.05 80 0.10 90 0.30 100 ───────────────────────── ───── Control -6 ──────────────────────────────
【００４２】表３より、各安定化剤は濃度の上昇ととも
に効果が高まることが明らかである。対照の反応性残存
率６％と対比するとき、ＤＬ−トリプトファンと塩化カ
ルシウムとは、何れも極めて低濃度（0.01Ｗ／Ｖ％）か
ら既に効果を表していることがわかる。これら以外の物
質も、何れも0.3Ｗ／Ｖ％以上で顕著な効果のあること
が示されており、濃度の上昇に伴って反応性残存率が上
昇しており、グリシル−Ｌ−チロシン及び塩化カルシウ
ムに至っては反応性残存率は100％に達している。From Table 3, it is clear that the effect of each stabilizer increases as the concentration increases. It can be seen that both DL-tryptophan and calcium chloride are already effective at very low concentrations (0.01 W / V%) when compared to the control reactivity remaining rate of 6%. Substances other than these have been shown to have a remarkable effect at 0.3 W / V% or more, and the residual reactivity increases as the concentration increases, and glycyl-L-tyrosine and chloride For calcium, the residual reactivity reaches 100%.
【００４３】[0043]
【発明の効果】本発明によれば、感作金属コロイドの凍
結乾燥状態での安定性を著しく高めることができるた
め、より長期の保管期間に亘って感作金属コロイド試薬
を使用できるようになり、感作金属コロイド試薬を用い
た臨床検査分野において、試薬の使用期間の延長や測定
精度の向上が可能となる。According to the present invention, since the stability of the sensitized metal colloid in the freeze-dried state can be remarkably enhanced, the sensitized metal colloid reagent can be used over a longer storage period. In the field of clinical testing using a sensitized metal colloid reagent, the use period of the reagent can be extended and the measurement accuracy can be improved.
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/543 ５０１ Ｇ０１Ｎ 33/543 ５０１Ｋ // Ａ６１Ｋ 9/19 Ａ６１Ｋ 9/14 Ｄ Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification symbol FI G01N 33/543 501 G01N 33/543 501K // A61K 9/19 A61K 9/14 D
Claims (13)
燥物の製造方法であって、感作金属コロイド含有溶液の
凍結乾燥に際し、該溶液に、サッカロ−ス、トレハロ−
ス、β−シクロデキストリン、トレオニン、アスパラギ
ン酸、トリプトファン、グルタミン酸、アスパラギン、
ヒスチジン、グルタミン酸−アルギニン、ロイシルグリ
シン、グリシルチロシン、フェニルアラニン及び塩化カ
ルシウムよりなる群より選ばれる物質の１種または２種
以上を含有させておくことを特徴とする方法。1. A method for producing a stabilized freeze-dried product containing a sensitized metal colloid, which comprises adding saccharose and trehalose to a freeze-dried solution containing a sensitized metal colloid.
, Β-cyclodextrin, threonine, aspartic acid, tryptophan, glutamic acid, asparagine,
A method characterized by containing one or more substances selected from the group consisting of histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine, glycyltyrosine, phenylalanine and calcium chloride.
特徴とする、請求項１の方法。2. The method according to claim 1, wherein said metal colloid is gold colloid.
ドであることを特徴とする、請求項１又は２の方法。3. The method according to claim 1, wherein the sensitized metal colloid is an antibody-sensitized metal colloid.
あることを特徴とする請求項３の方法。4. The method according to claim 3, wherein said antibody is an antibody against human hemoglobin.
−シクロデキストリン、 （２）トレオニン、アスパラギン酸、トリプトファン、
グルタミン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン
酸−アルギニン、ロイシルグリシン及びグリシルチロシ
ン及びフェニルアラニン、並びに （３）塩化カルシウム、よりなる３つの群の物質のう
ち、少なくとも２つの群より選ばれた物質を含有させて
おくことを特徴とする、請求項１乃至４の何れかの方
法。5. Saccharose, trehalose and β
-Cyclodextrin, (2) threonine, aspartic acid, tryptophan,
Glutamic acid, asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine and glycyltyrosine and phenylalanine, and (3) calcium chloride, containing at least two substances selected from the group consisting of: The method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that:
トリン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、
アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン酸−アルギニ
ン、ロイシルグリシン、グリシルチロシン若しくはフェ
ニルアラニンの含有濃度が少なくとも0.3Ｗ／Ｖ％であ
るか、 （Ｂ）トリプトファンの含有濃度が少なくとも0.01Ｗ／
Ｖ％であるか、又は （Ｃ）塩化カルシウムの含有濃度が少なくとも0.01Ｗ／
Ｖ％であることを特徴とする、請求項１乃至５の何れか
の方法。6. The method according to claim 1, wherein (A) saccharose, trehalose, β-cyclodextrin, threonine, aspartic acid, glutamic acid,
The content of asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine, glycyltyrosine or phenylalanine is at least 0.3 W / V%, or (B) the content of tryptophan is at least 0.01 W / V
V% or (C) the content of calcium chloride is at least 0.01 W /
The method according to any one of claims 1 to 5, wherein V% is V%.
９の範囲にあることを特徴とする、請求項１乃至６の何
れかの方法。7. The solution containing a sensitized metal colloid having a pH of 6 to 6.
The method according to any of claims 1 to 6, wherein the method is in the range of 9.
デキストリン、トレオニン、アスパラギン酸、トリプト
ファン、グルタミン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グ
ルタミン酸−アルギニン、ロイシルグリシン、グリシル
チロシン、フェニルアラニン、および塩化カルシウムよ
りなる群より選ばれる物質の１種または２種以上を含有
すること特徴とする、感作金属コロイド含有凍結乾燥
物。8. A composition comprising saccharose, trehalose, β-cyclodextrin, threonine, aspartic acid, tryptophan, glutamic acid, asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine, glycyltyrosine, phenylalanine, and calcium chloride. A lyophilized product containing a sensitized metal colloid, comprising one or more substances selected from the group.
特徴とする、請求項８の凍結乾燥物。9. The freeze-dried product according to claim 8, wherein said metal colloid is gold colloid.
イドであることを特徴とする請求項８又は９の凍結乾燥
物。10. The freeze-dried product according to claim 8, wherein the sensitized metal colloid is an antibody-sensitized metal colloid.
であることを特徴とする、請求項１０の凍結乾燥物。11. The lyophilizate according to claim 10, wherein said antibody is an antibody against human hemoglobin.
β−シクロデキストリン、 （２）トレオニン、アスパラギン酸、トリプトファン、
グルタミン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン
酸−アルギニン、ロイシルグリシン及びグリシルチロシ
ン及びフェニルアラニン、並びに （３）塩化カルシウム、よりなる３つの群の物質のう
ち、少なくとも２つの群より選ばれた物質を含有するこ
とを特徴とする、請求項８乃至１１の何れかの凍結乾燥
物。(12) Saccharose, trehalose and β-cyclodextrin, (2) threonine, aspartic acid, tryptophan,
Glutamate, asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine and glycyltyrosine and phenylalanine, and (3) calcium chloride, containing at least two substances selected from the group consisting of three substances. The freeze-dried product according to any one of claims 8 to 11, characterized in that:
であって、該感作金属コロイド１重量部に対し： （Ａ）サッカロ−ス、トレハロ−ス、β−シクロデキス
トリン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、
アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン酸−アルギニ
ン、ロイシルグリシン、グリシルチロシン若しくはフェ
ニルアラニンの含有量が少なくとも４重量部であるか、 （Ｂ）トリプトファンの含有量が少なくとも0.1重量部
であるか、又は （Ｃ）塩化カルシウムの含有量が少なくとも0.1重量部
であることを特徴とする、凍結乾燥物。13. The freeze-dried product according to claim 8, wherein 1 part by weight of the sensitized metal colloid is: (A) saccharose, trehalose, β-cyclodextrin, threonine, Aspartic acid, glutamic acid,
The content of asparagine, histidine, glutamic acid-arginine, leucylglycine, glycyltyrosine or phenylalanine is at least 4 parts by weight; (B) the content of tryptophan is at least 0.1 part by weight; or (C) chloride A freeze-dried product having a calcium content of at least 0.1 part by weight.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30801897A JP3872880B2 (en) | 1997-10-21 | 1997-10-21 | Stabilized lyophilized product containing sensitized metal colloid and method for producing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30801897A JP3872880B2 (en) | 1997-10-21 | 1997-10-21 | Stabilized lyophilized product containing sensitized metal colloid and method for producing the same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11125635A true JPH11125635A (en) | 1999-05-11 |
| JP3872880B2 JP3872880B2 (en) | 2007-01-24 |
Family
ID=17975901
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30801897A Expired - Lifetime JP3872880B2 (en) | 1997-10-21 | 1997-10-21 | Stabilized lyophilized product containing sensitized metal colloid and method for producing the same |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3872880B2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003006989A1 (en) * | 2001-07-12 | 2003-01-23 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method of quantifying denatured lipoprotein, reagents for quantifying denatured lipoprotein, method of detecting circulatory disease and reagents for detecting circulatory disease |
| JP2011515685A (en) * | 2008-03-26 | 2011-05-19 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Method for long-term storage of substrate-bound beads |
| WO2013141122A1 (en) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | 田中貴金属工業株式会社 | Immunochromatography detection method |
-
1997
- 1997-10-21 JP JP30801897A patent/JP3872880B2/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003006989A1 (en) * | 2001-07-12 | 2003-01-23 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method of quantifying denatured lipoprotein, reagents for quantifying denatured lipoprotein, method of detecting circulatory disease and reagents for detecting circulatory disease |
| JP2011515685A (en) * | 2008-03-26 | 2011-05-19 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Method for long-term storage of substrate-bound beads |
| WO2013141122A1 (en) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | 田中貴金属工業株式会社 | Immunochromatography detection method |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3872880B2 (en) | 2007-01-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101807912B1 (en) | Immunochromatography detection method | |
| CN106814193B (en) | Neutrophil gelatinase-associated lipocalin reagent box for detecting content | |
| KR101298433B1 (en) | Method of assaying antigen and kit to be used therein | |
| Schlatter et al. | The difference interferometer: application as a direct affinity sensor | |
| JP2703163B2 (en) | Multivalent dextran reagent used for sedimentation test | |
| WO2010007857A1 (en) | Method for stabilizing microparticles having reactive substance bound thereto, and reagent containing the microparticles | |
| JP4106111B2 (en) | Calibration / control formulations for immunoassays | |
| US6800608B2 (en) | Homogeneous assay of vancomycin using a stable particle-vancomycin conjugate, a novel rate enhancer, and a novel dose response modulator | |
| JPH06300761A (en) | Reagent and method for immunonephelometry | |
| JPS60149972A (en) | Stabilization of enzyme labelled antibody | |
| JP3872880B2 (en) | Stabilized lyophilized product containing sensitized metal colloid and method for producing the same | |
| JPH06104064B2 (en) | Stabilized enzyme conjugate composition | |
| US5342788A (en) | Method and standard solution for the determination of thyroxine (T4) or triiodothyronine (T3) | |
| JP4033534B2 (en) | Method for stabilizing human hemoglobin | |
| JPS62209362A (en) | Composition for immune agglutination | |
| JPS61224987A (en) | Stabilization of activity of peroxidase in solution | |
| JPH049665A (en) | Method for measuring lung disease marker protein and kit for this method | |
| JP3993670B2 (en) | Method for stabilizing sensitized metal colloid reagent solution and stable solution containing sensitized metal colloid reagent | |
| JP3471198B2 (en) | Reagent for turbidimetric determination of immunological latex | |
| JPH0384461A (en) | Immunological agglutination reagent and production thereof | |
| JP7436838B2 (en) | Method for measuring hemoglobin A1c using antibody-dendrimer complex | |
| JPH0666800A (en) | Separating method for complex | |
| JP3348573B2 (en) | Reagent and method for stabilizing human hemoglobin | |
| JP3836429B2 (en) | Specified stoichiometric conjugate | |
| JP2542787B2 (en) | Method for measuring thyroxine (T4) or triiodothyronine (T3) and standard solution therefor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041019 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20051214 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051220 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060216 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060530 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060707 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20061017 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20061023 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101027 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111027 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111027 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121027 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121027 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131027 Year of fee payment: 7 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |