JPH1072590A - （ｎ−６）系ドコサペンタエン酸含有油脂ならびに該油脂の製造方法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 (ｎ-６)系ドコサペンタエン酸(ＤＰＡ)の含
有量が高い油脂、該油脂および(ｎ−６)系ＤＰＡの製造
方法、ならびに該油脂を添加した種々の食品、飼料およ
び餌料を提供する。 【解決手段】 (ｎ-６)系ＤＰＡの生産能を有するシゾ
キトリウム属ＳＲ２１株および該ＳＲ２１株と同一の種
に属するかもしくは実質的に同一の菌学的性質を有する
微生物を培養することによって、(ｎ-６)系ＤＰＡの含
有量が高い油脂を得ることができる。このようにして得
られた油脂は(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸(ＤＨＡ)を
も高い含有量で含むため、この油脂を種々の食品、飼料
または餌料に添加して、(ｎ-６)系ＤＰＡおよび／また
は(ｎ-３)系ＤＨＡを必要とする対象にこれら高度不飽
和脂肪酸を安定的かつ効率的に供給することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、(ｎ-６)系ドコサ
ペンタエン酸(ＤＰＡ)を含有する油脂、該油脂および
(ｎ-６)系ＤＰＡの製造方法、該油脂を添加した種々の
食品、飼料および餌料に関する。

【０００２】

【従来の技術】動物体内において、ドコサヘキサエン酸
(ＤＨＡ)やドコサペンタエン酸(ＤＰＡ)などの高度不飽
和脂肪酸は、種々の生理活性を有するものと考えられて
いる。これら高度不飽和脂肪酸は、その不飽和結合の位
置の相違により(ｎ-３)系および(ｎ-６)系に分けられる
ことが知られている。動物体内では(ｎ-３)系と(ｎ-６)
系の高度不飽和脂肪酸は別の代謝経路に属しており、動
物は両者を必須脂肪酸として要求する。

【０００３】(ｎ-３)系の高度不飽和脂肪酸には、例え
ばエイコサペンタエン酸[２０：５(n-３)]やドコサヘキ
サエン酸[２２：６(ｎ-３)]などが含まれ、これらは抗
炎症活性、抗血栓活性などの生理活性を有することが知
られており、機能性食品や医薬品の素材として注目され
ている。一方、(ｎ-６)系の高度不飽和脂肪酸には、例
えばγ-リノレン酸[１８：３(ｎ-６)]、ジホモ-γ-リノ
レン酸[２０：３(ｎ-６)]、アラキドン酸[２０：４(ｎ-
６)]などが含まれ、これらは局所ホルモンと呼ばれるプ
ロスタグランジン、ロイコトリエンなどのエイコサノイ
ドの１群あるいは２群への中間代謝物質として注目され
ている。

【０００４】動物体内においては、組織により変わる
が、(ｎ-３)系はドコサヘキサエン酸が、そして(ｎ-６)
系はアラキドン酸が最終代謝産物となっている。例え
ば、ヒト赤血球のリン脂質の脂肪酸組成は、(ｎ-３)系
はエイコサペンタエン酸０.７０％、ドコサペンタエン
酸２.０９％、ドコサヘキサエン酸４.３７％であり、一
方、(ｎ-６)系はリノール酸１２.６７％、ジホモ-γ-リ
ノレン酸０.６２％、アラキドン酸１６.９３％、ドコサ
ペンタエン酸０.８６％であり[Hardyら，Biochem.J., v
ol.274，p133 (1991)]、(ｎ-６)系のドコサペンタエン
酸は極めて少ない。

【０００５】(ｎ-３)系の最終代謝産物である(ｎ-３)系
ドコサヘキサエン酸(ＤＨＡ)は、動物の脳や網膜に特異
的に存在し、これら器官において何らかの機能を果たし
ていると考えられている。この(ｎ-３)系ＤＨＡは、青
魚に属する魚油に含まれ、特にイワシやマグロ由来の油
には２０％前後含まれている。近年、マグロの眼窩脂肪
などのＤＨＡを高濃度に含有する原料が発見され、また
脂肪酸の高度精製技術が発達したことなどから、ＤＨＡ
の生理活性機能の解明や実用化の研究が活発に進められ
ている。ＤＨＡの生理活性機能としてコレステロール低
下作用、抗血液凝固作用、制癌作用、さらには脳代謝系
に関連して記憶学習能力の向上、老人性痴呆症の予防、
アルツハイマー疾病の治療薬、稚魚の成長必須脂肪酸な
どが明らかとなり、また健康食品やベビーミルク等の素
材として使用されている。

【０００６】一方、動物体内で(ｎ-６)系ドコサペンタ
エン酸(ＤＰＡ)の組成が大きくなる場合は、(ｎ-３)系
必須脂肪酸の欠乏に対する代償と考えられる。例えば、
(ｎ-６)系が極めて多いサフラワー油を含む食餌を与え
続けた３世代目のラットの視神経脈絡膜叢の脂肪酸組成
は、(ｎ-３)系ＤＨＡが１／３に減少するが、その一方
で、(ｎ-６)系ＤＰＡが４倍になった[Homayounら，J.Ne
urochem., vol.51, p.45 (1988)]。さらに、ビタミンＡ
欠乏症ラットの肝臓ミクロソームにおいて(ｎ-６)系Ｄ
ＰＡ組成が正常値の０.９％から１０.５％へ急増するこ
と[Ｈammら，Ｂiochem.J., vol.245, p907 (1987)]、お
よび、(ｎ-３)系の少ないパーム油を与えたラットにお
いて(ｎ-３)系ＤＨＡが減少し、(ｎ-６)系ＤＰＡが増加
すること[Rebhungら，Biosci.Biotech.Biochem., vol.5
8, p314 (1994)]などが報告されている。

【０００７】このように、動物の脳や網膜において何ら
かの機能を果たしていると考えられる(ｎ-３)系ＤＨＡ
の代償として(ｎ-６)系ＤＰＡが生体内で作られること
は、(ｎ-６)系ＤＰＡが何らかの生理的役割を有してい
ることを示唆し、また、アラキドン酸のアンタゴニスト
としても期待できる。

【０００８】さらに、現在知られている(ｎ-６)系ＤＰ
Ａの利用法としては、精神安定剤を脳へ運びやすくする
基剤として使用すること(特開昭６１−２０４１３６
号)、ならびに、(ｎ-６)系の炭素数２２の不飽和脂肪酸
が正常値よりも減少している疾患、例えば、ウイルス、
特にワート(wart)ウイルスによる感染；白血病、乳癌お
よび他の種の癌；月経前症候群および良性胸部疾患；高
血圧、高脂血症および肥満症、ドライ・アイ(dry eye)
症候群；強皮症、リューマチ性関節炎、クローン病、潰
瘍性大腸炎および他の形の自己免疫および炎症性疾患；
不妊症；糖尿病；および精神***病およびアルコール中
毒(過度および禁酒の両方の影響を含む)を含む精神病的
疾患などの治療に(ｎ-６)系ＤＰＡを(ｎ-６)系ドコサテ
トラエン酸と組み合せて使用すること(特開昭６０−３
８３２４号)が挙げられる。

【０００９】この(ｎ-６)系ＤＰＡは、一般的に供給さ
れる油脂の中には全く存在せず、魚油の中に(ｎ-３)系
ＤＰＡとともにわずかに含まれているにすぎない。魚油
から(n-６)系ＤＰＡを分離濃縮する方法が特許出願され
ているが[特開平１-１８０８４９]、魚油中の(ｎ-６)系
ＤＰＡの含量が１％程度と微量であり、アラキドン酸、
エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などの構造
の類似した高度不飽和脂肪酸を多く含み、さらに(ｎ-
３)系ＤＰＡが(ｎ-６)系ＤＰＡより数倍高い含量で含ま
れるため、多段のクロマト処理が必要であるなど効率の
良い分離・濃縮が困難である。

【００１０】以上のように、魚油には注目すべき生理機
能を有する(ｎ-３)系ＤＨＡおよび(ｎ-６)系ＤＰＡが存
在するが、(ｎ-３)系ＤＨＡおよび特に(ｎ-６)系ＤＰＡ
を多量に含んでいる油脂は未だ知られていない。さら
に、魚油の場合、魚類の回遊性等から安定な供給源とな
りにくいことや、魚油特有の異臭があるなどの欠点があ
る。また、魚油にはアラキドン酸(ＡＡ)やエイコサペン
タエン酸(ＥＰＡ)などの高度不飽和脂肪酸も含まれるた
め、酸化され易く、安定した品質の油脂を得ることが困
難である。さらに、高純度の(ｎ-３)系ＤＨＡまたは(ｎ
-６)系ＤＰＡを得ようとする場合、その分離精製が困難
である。特に、乳児用ミルクに添加する場合、ＥＰＡの
含有割合が低いものが望ましいが、供給源が魚油の場合
にはＥＰＡのみを効率的に除去することは極めて困難で
ある。

【００１１】魚油以外の(ｎ-３)系ＤＨＡまたは(ｎ-６)
系ＤＰＡの供給源として、種々の微生物が候補に挙げら
れる。例えば、(ｎ-３)系ＤＨＡ生産能を有する微生物
として、深海から分離された細菌ビブリオ・マリナス(V
ibrio marinus)(ＡＴＣＣ １５３８１)や深海魚の腸内
から分離されたビブリオ属細菌、微細藻類であるシクロ
テラ・クリプティカ(Cyclotella cryptica)やクリプテ
コディニウム・コーニー(Crypthecodinium cohnii)(特
表平５−５０３４２５)、鞭毛菌類であるスラウストキ
トリウム・アウレウム(Thraustochytrium aureum)(ＡＴ
ＣＣ ３４３０４)[Kendrick，Lipids，vol.27，p15 (19
92)]やジャポノキトリウム・エスピー(Japonochytrium
sp.)(ＡＴＣＣ ２８２０７)(特開平１-１９９５８８)な
どが知られている。

【００１２】これら微生物のうち、微細藻類の一部、な
らびに鞭毛菌類であるスラウストキトリウム・アウレウ
ム(ＡＴＣＣ ３４３０４)やジャポノキトリウム・エス
ピー(ＡＴＣＣ ２８２０７)などにドコサペンタエン酸
が含まれることが知られているが、上記文献においてこ
れらは(ｎ-３)系であると報告されている。即ち、これ
ら微生物によって生産された油脂中に(ｎ-６)系ドコサ
ペンタエン酸が十分量で存在することは知られていな
い。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記の
ような(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸(ＤＰＡ)の含有量
の高い油脂を高生産する微生物を広く海洋性微生物に求
めた。

【００１４】

【課題を解決するための手段】この結果、本発明者ら
は、ある種の海洋性微生物(シゾキトリウム属に属する
新種)が(ｎ−６)系ＤＰＡの含有量の高い油脂を高生産
することを見い出した。また、この微生物が、(ｎ−６)
系ＤＰＡの含有量だけでなく、(ｎ-３)系ＤＨＡの含有
量も高く、かつＥＰＡの含有量の低い油脂、即ち、種々
の食品、飼料あるいは餌料への添加用に有用な脂肪酸組
成を有する油脂を高生産することを見い出した。

【００１５】即ち、本発明は、(ｎ-６)系ドコサペンタ
エン酸を生産する能力を有するシゾキトリウム属ＳＲ２
１株および該ＳＲ２１株と同一の種に属するかもしくは
実質的に同一の菌学的性質を有する微生物を培地中で培
養し、その培養物から油脂を採取することを特徴とす
る、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸含有油脂の製造方法
を提供する。また、本発明は、上記油脂から(ｎ-６)系
ドコサペンタエン酸を単離する工程をさらに包含するこ
とを特徴とする、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸の製造
方法を提供する。さらに本発明は、油脂中の全脂肪酸あ
たり、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸を５重量％以上、
(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸を２０重量％以上、およ
びエイコサペンタエン酸を２重量％以下の量で含有する
ことを特徴とする(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸含有油
脂を提供する。また本発明は、該油脂を添加した種々の
食品、飼料および餌料、ならびに、該油脂を種々の食
品、飼料および餌料のための添加物として利用する方法
を提供する。

【００１６】

【発明の実施の形態】以下において、本発明を詳しく説
明する。尚、本明細書中に記載した「油脂」、「脂
質」、および「オイル」なる用語は同じ意味で使用し
た。本発明において用いる海洋性微生物であるＳＲ２１
株は、ミクロネシア連邦のヤップ島沿岸の海水から分離
したものである。

【００１７】当初、このＳＲ２１株は、スラウストキト
リウム(Thraustochytrium)属の微生物であると考えられ
た。しかし、その菌学的性質を詳しく調べた結果、この
菌株はシゾキトリウム(Schizochytrium)属の新種と認め
られる微生物であることがわかった。このシゾキトリウ
ム属ＳＲ２１株の菌学的性質は下記の通りである。

【００１８】ＳＲ２１株の菌学的性質は、栄養培地およ
び海水中で培養することによって調べた。まず、人工海
水(トロピックマリン)１Ｌにグルコース２g、酵母エキ
ス０.２gおよびグルタミン酸ナトリウム０.５gを加えた
栄養培地を小シャーレに入れ、同じ培地によるＳＲ２１
株のフラスコ前培養液を１滴接種し、倒立顕微鏡により
細胞形態を追跡した。この場合、アメーバ状の不定形細
胞の放出が見られた。次に、同様の追跡をフィルター滅
菌した天然海水中で行った。この場合にはアメーバ状の
不定形細胞の放出が認められず、２***を繰り返した後
の栄養細胞塊のいくつかの細胞から、遊走子の放出が観
察された。また、２***をせずに１個の栄養細胞から直
接遊走子へと分化したものも観察された。

【００１９】遊走子放出が多く認められたサンプルにグ
ルタルアルデヒドを１０容量％加え、光学顕微鏡により
遊走子の観察を行った。図１は、ＳＲ２１株の遊走子の
形態を示す光学顕微鏡写真であり、２本の長さの異なる
鞭毛を示している。さらに酢酸ウランを用いたネガティ
ブ染色法により、鞭毛の電子顕微鏡観察を行った。図２
は、ＳＲ２１株の遊走子の鞭毛の構造を示す透過型電子
顕微鏡写真であり、鞭毛のマスチゴネマの基部、軸、お
よび頂毛からなる三部構造を示している。また、上記２
通りの倒立顕微鏡による細胞形態観察において、栄養細
胞が２***を繰り返し、細胞塊および原形質のネットワ
ークを形成するものが見られた。図３は、ＳＲ２１株の
栄養細胞塊と原形質とのネットワークを示す光学顕微鏡
写真である。

【００２０】ＳＲ２１株が寒天平板培地上で形成するコ
ロニーは、酵母のコロニーと同様の滑らかな黄土色を呈
する。また、このＳＲ２１株を液体培地で増殖させる
と、その初期に２本の長さの異なる鞭毛を持つ遊走子が
観察され(図１)、２本の鞭毛のうちの長鞭毛にある毛状
構造(マスチゴネマ)が基部、軸、頂毛の三部構造をとる
(図２)。これらのことから、ＳＲ２１株は、クロミスタ
界(Kingdom Chromista)、不等毛門(Phylum Heterokont
a)に属する。さらに原形質のネットワーク形成性、ゴル
ジ体由来の鱗片から、ＳＲ２１株は、ラビリンチュラ綱
(Class Labyrinthulea)ラビリンチュラ目(Order Labyri
nthulida)に属する。そして、栄養細胞が球形または楕
円形であること、および原形質のネットワーク中の滑走
運動がないことから、ＳＲ２１株がスラウストキトリウ
ム科(Family Thraustochytriidae)に属することは明ら
かである。

【００２１】さらに、ＳＲ２１株の栄養細胞は２***を
繰り返し、８〜３２個の栄養細胞塊を形成する。その
後、いくつかの細胞からアメーバ状の不定形細胞が放出
され、細胞塊から徐々に離れ、１〜２時間後に球形細胞
になる。この球形細胞はその後遊走子嚢として８ないし
１６個の遊走子へ分化する。その際、遊走子嚢の膜は観
察されない。さらに、２***をせずに１個の栄養細胞か
ら直接遊走子嚢へ分化したり、２***をして栄養細胞塊
となった後に不定形細胞を経ないで遊走子へ分化する細
胞もあり、複雑な生活環を有する。

【００２２】スラウストキトリウム科は、ポーター[D.P
orter, “Handbook of Protoctista", Jones and Bartl
ett Publishers (1990)]によれば７属３０種よりなる。
その後、コラロキトリウム(Corallochytrium)属[Raghuk
umar,S., Botanica Marina,30：83 (1987)]が加えら
れ、モス[Moss,S.T., “The Biology of Free-living H
eterotrophic Iagellates", Oxford University Press
(1991)]によれば８属３３種とされる。

【００２３】これらスラウストキトリウム科８属の特徴
は次の通りである。ラビリンチュロイデス(Labyrinthul
oides)属の栄養細胞は球状であるが、原形質ネットワー
ク上を不規則に滑走する。アプラノキトリウム(Aplanoc
hytrium)属は不動胞子、即ち鞭毛を持たない胞子によっ
て増殖する。アルソーニア(Althornia)属は原形質ネッ
トワークを形成せず、浮遊性である。ジャポノキトリウ
ム(Japonochytrium)属は細胞外に胞嚢(apophysis)を生
じる。ウルケニア(Ulkenia)属は遊走子嚢からアメーバ
状の不定形細胞が放出された後にそれが遊走子へ分化す
る。スラウストキトリウム(Thraustochytrium)属は１個
の遊走子から１個の栄養細胞となり、それが１個の遊走
子嚢を形成する。シゾキトリウム(Schizochytrium)属は
１個の遊走子が着生した後に２***を行い、複数個の栄
養細胞塊を形成し、それぞれが遊走子嚢となる。コラロ
キトリウム(Corallochytrium)属はコウラナメクジ状の
胞子を形成し、鞭毛を持った遊走子を形成しない。

【００２４】尚、上記８属のうちウルケニア属について
は、ゲルトナー[Gaertner,A., Veroff.Inst.Meeresfors
ch.Bremerh., 16：139 (1977)]は、遊走子嚢から裸の原
形質塊(アメーバ状の不定形細胞)が放出された後に遊走
子へ分化する形質を属の分類基準に用い、それまでスラ
ウストキトリウム属に分類されていたスラウストキトリ
ウム・ヴィサージェンス(Thraustochytrium visurgens
e)[Ulken,A., Veroff.Inst.Meeresforsch.Bremerh.,
9：289 (1965)]およびスラウストキトリウム・アモエボ
イダム(Thraustochytrium amoeboidum)[Bahnweg,O.およ
びSparrow,F.K.,Jr.Am.J.Bot., 61：754 (1974)]の２種
をウルケニア属に移し、それらにラグクーマーによる新
種ウルケニア・ミヌータ(Ulkenia minuta)[Raghukumar,
S., Veroff.Inst.Meeresforsch.Bremerh., 16：158 (19
77)]とさらに３種の新種を併せてウルケニア属６種とし
て新属ウルケニア属を提唱した。

【００２５】しかし、それ以後にウルケニア属の新しい
種について記載した論文はみられない。カーリング[Kar
ring,J.S., “Predominantly Holocarpic and Eucarpic
Simple Biflagellate Phycomycetes", J.Cramer (198
1)]は、ウルケニア属が独立した属として成立するかど
うかについては疑問としており、暫定的なものとして掲
げた。ただし、ポーターおよびモスの文献には前述の記
載がされている。

【００２６】ＳＲ２１株はアメーバ状の不定形細胞を形
成するので、その形質を重視するとウルケニア属に属す
るとも考えられる。しかし、ラグクーマーはスラウスト
キトリウム属のスラウストキトリウム・ストリアタム(T
hraustochytrium striatum)が、栄養培地ではバクテリ
アを捕食するアメーバ状の不定形細胞を形成することを
報告している[Raghukumar,S., Marine Biology, 113：1
65 (1992)]。さらに、ラグクーマーは、シゾキトリウム
属の新種としたシゾキトリウム・マングローヴァイ(Sch
izochytrium mangrovei)は栄養培地ではアメーバ状不定
形細胞を形成するが、海水に松花粉のみを添加した栄養
の希薄な培地で培養した場合はアメーバ状不定形細胞を
形成しないことを示した[Raghukumar,S., Trans.Br.Myc
ol.Soc.,80：627 (1988)]。

【００２７】そこでラグクーマーは、アメーバ状の不定
形細胞を形成するという形質が培地組成や培養条件によ
って影響を受けることから、基準となる培地を使ってこ
の形質を調査する必要があるとした。その基準培地とし
ては、従来から伝統的によく用いられており、また、こ
れまでの属や種の原記載の中で形態形質を観察する際に
用いられることの多かった前述の海水／松花粉培地を挙
げている。ウルケニア属に分類されている６種は全て、
この海水／松花粉培地中でアメーバ状不定形細胞を形成
することが知られている。一方、スラウストキトリウム
・ストリアタムとシゾキトリウム・マングローヴァイ
は、栄養培地では前述のようにアメーバ状不定形細胞を
形成するが、海水／松花粉培地ではアメーバ状不定形細
胞を形成しないことから、ウルケニア属に分類されてい
ない。以上に基づくと、ＳＲ２１株は栄養培地ではアメ
ーバ状不定形細胞を形成するが、海水のみの培地ではこ
れが観察されなかったので、ウルケニア属に分類するの
は適当ではないと思われる。

【００２８】一方、１個の遊走子が着生した後の栄養細
胞が２***を繰り返し、複数個の栄養細胞塊を形成し、
それぞれが遊走子嚢となる形質は、培地組成によらず安
定であり、ＳＲ２１株の生活環の中で常に観察される形
質である。この形質およびその他のＳＲ２１株で観察さ
れる性質は、ゴールドシュタインら[Goldstein,S.およ
びBelsky,M., Am.J.Bot., 51：72 (1964)]およびブーツ
ら[Booth,T.およびMiller,C.E., Can.J.Bot., 47：2051
(1969)]により報告されているシゾキトリウム属の記載
に矛盾することがない。よって、ＳＲ２１株はシゾキト
リウム属に分類するのが妥当であると判断される。

【００２９】現在、シゾキトリウム属微生物としては、
次の４種が文献に記載されている。シゾキトリウム・ア
グレガタム(Schizochytrium aggregatum)は、その栄養
細胞が、連続する***によって多数の細胞が互いに接着
した塊を形成する。その細胞塊のうち、３〜４個または
それ以上の細胞が遊走子嚢へ分化する。また、１個の遊
走子嚢は１６〜６４個の遊走子を形成する。さらに、２
個の細胞からは遊走子放出は見られないと記載されてい
る[Goldstein,S.およびBelsky,M., Am.J.Bot., 51：72
(1964)、Booth,T.およびMiller,C.B., Can.J.Bot., 4
7：2051 (1969)]。

【００３０】シゾキトリウム・ミヌータム(Schizochytr
ium minutum)は、シゾキトリウム・アグレガタムと同様
に栄養細胞の***の結果、４〜８個または数百の細胞塊
を形成し、各遊走子嚢から２個の遊走子を放出する。遊
走子は豆型であり、２本の鞭毛の長さは８.５μmと３.
０μm程度である[Gaertner,A., Veroff.Inst.Meerestor
sch.Bremer., 19：61 (1981)]。

【００３１】また、シゾキトリウム・オクトスポラム(S
chizochytrium octosporum)は、１個の遊走子嚢から８
個の遊走子が放出される点でシゾキトリウム・ミヌータ
ムと異なっている[Raghukumar,S., Trans.Br.Mycol.So
c., 90：273 (1988)]。

【００３２】さらに、1987年にラグクーマーがゴア(イ
ンド)のマングローブの腐朽葉より分離したスラウスト
キトリウム科の微生物は、栄養細胞が連続する***によ
って細胞塊を形成することからシゾキトリウム属に分類
された。しかし、それまでに記載されていた上記３種の
遊走子はいずれも遊走子嚢という袋の中で形成されるの
に対して、この微生物では栄養細胞の連続的な２***に
より、４、６、８または１２個の細胞となり、それぞれ
の細胞が直接遊走子となる過程をとり、遊走子嚢の形態
をとらなかった。ラグクーマーはこの特徴に注目し、新
種シゾキトリウム・マングローヴァイ(Schizochytrium
mangrovei)を設けた[Raghukumar,S., Trans.Br.Mycol.S
oc., 90：627 (1988)]。

【００３３】ラグクーマーは同じ文献において、それま
で知られていたシゾキトリウム属の検索表を提案した
(表１)。

【表１】 表１．シゾキトリウム属の４種の検索表(ラグクーマーによる) １．着生した遊走子は繰り返し行われる２*** によって細胞塊を形成し、それぞれの細胞 は遊走子嚢に分化する ・・・・・・・ ２ １．着生した遊走子は繰り返し行われる２*** によって細胞塊を形成し、それぞれの細胞 は遊走子に分化する ・・・・・・・ Ｓ．ｍａｎｇｒｏ
ｖｅｉ ２．遊走子嚢の直径は１５〜２５μｍで遊走 子嚢は１６〜６４個の遊走子を形成する ・・・ Ｓ．ａｇｇｒｅｇ
ａｔｕｍ ２．遊走子嚢の直径は１４μｍ以下で遊走子 嚢は２または８個の遊走子を形成する ・・・・ ３ ３．遊走子嚢は８個の遊走子を形成する ・・・・ S.octosporum ３．遊走子嚢は２個の遊走子を形成する ・・・・ S.minutum

【００３４】表１に示した検索表および既知の４種を記
載した原報と、ＳＲ２１株の菌学的性質を比較してみ
る。まず、シゾキトリウム属ＳＲ２１株は、***した栄
養細胞が遊走子嚢の形態をとらずに、ひとつひとつの遊
走子になるシゾキトリウム・マングローヴァイとは異な
る。また、遊走子嚢の径が１４μm以下であって、各遊
走子嚢から２個の遊走子が形成される場合は、シゾキト
リウム・ミヌータムに、同じく８個の遊走子が形成され
る場合は、シゾキトリウム・オクトスポラムにそれぞれ
帰属されるが、ＳＲ２１株は８ないし１６個の遊走子へ
分化することからこれらのどちらとも異なる。さらに、
遊走子嚢の径が１５〜２５μmであって遊走子嚢から１
６ないし６４個の遊走子(ただし、記載のある原報には
多くのという表現のみ)が形成される場合は、シゾキト
リウム・アグレガタムとされるが、この種においてはア
メーバ状の不定形細胞は観察されていないため、ＳＲ２
１株はこれとも異なる。さらにＳＲ２１株では、２***
をしない栄養細胞または不定形細胞を経ないで遊走子へ
分化する細胞も見られる。以上のことから、ＳＲ２１株
はシゾキトリウム属の既存の４種には該当せず、シゾキ
トリウム属の新種であると認められた。

【００３５】尚、このシゾキトリウム属ＳＲ２１株は、
工業技術院生命工学工業技術研究所に「海生菌ＳＲ２１
菌株」の名称で平成７年３月６日付けで寄託され、受託
番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５０３４を取得している。さら
に、財団法人発酵研究所に平成７年３月１７日付けで寄
託され、受入番号ＩＦＯ ３２６９３を取得している。

【００３６】本発明のＤＰＡ含有油脂の製造方法に用い
る微生物は、前記ＦＥＲＭ ＢＰ−５０３４またはＩＦ
Ｏ ３２６９３に限らず、上述したシゾキトリウム属Ｓ
Ｒ２１株の菌学的性質に照らして該ＳＲ２１株と同一の
種に属するか、もしくは実質的に同一の菌学的性質を有
する菌株、例えば亜種に属すると認められる菌株であれ
ばいずれの菌株も使用することができる。シゾキトリウ
ム属ＳＲ２１株または該ＳＲ２１株と同一の種に属する
と認められる菌株を用いるのが好ましい。

【００３７】本発明において用いる微生物は、上述のよ
うに、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸を高水準で産生
し、さらに(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸をも高水準で
産生し、そしてエイコサペンタエン酸を低水準で産生す
る。本発明において用いる微生物は、このような高度不
飽和脂肪酸産生能を有するものであるならば、上述した
シゾキトリウム属ＳＲ２１株または該ＳＲ２１株と同一
の種に属するかもしくは実質的に同一の菌学的性質を有
する微生物(野性株)の変異株または組換え株であっても
よい。即ち、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸および／ま
たは(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸をさらに高水準で産
生するように設計された変異株および組換え株の使用は
全て本発明の範囲内にある。このような変異株または組
換え株には、同じ基質を用いて培養したときに、元の野
性株が産生する量と比べて、油脂中の(ｎ-６)系ドコサ
ペンタエン酸および／または(ｎ-３)系ドコサヘキサエ
ン酸の量が多くなるように、または総油脂量が多くなる
ように、あるいはその両方を意図して設計されたものが
含まれる。さらに、費用効果の優れた基質を効率よく用
いて、対応する野性型と同量の(ｎ-６)系ドコサペンタ
エン酸および／または(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸を
含有する油脂を産生するように設計された微生物も含ま
れる。

【００３８】本発明において用いる(ｎ-６)系ドコサペ
ンタエン酸および(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸を含有
する油脂を生産することができる微生物は、例えば、次
のようなスクリーニング法に従って選択することができ
る。即ち、採取した海水を０.４μmの滅菌フィルターを
用いて濾過および集菌し、このフィルターを９０％天然
海水、グルコース、酵母エキス、ペプトンよりなる寒天
培地上に張り付け、２０〜３０℃で培養する。この寒天
平板培地のフィルター上に形成したコロニーを、上記と
同じ組成の寒天培地上で培養し、得られた菌体をスパー
テルで採取し、常法に従って菌体から脂肪酸を直接メチ
ルエステル化し、その組成をガスクロマトグラフィーで
分析し、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸および(ｎ-３)系
ドコサヘキサエン酸を産生している菌株を選択する。さ
らに、菌体内に油脂を乾燥菌体あたり１０重量％以上、
好ましくは２０重量％以上の量で蓄積し、そして／また
は全脂肪酸中にエイコサペンタエン酸が２重量％以下、
好ましくは１重量％以下、より好ましくは０.５重量％
以下である菌株を選択することができる。

【００３９】シゾキトリウム属ＳＲ２１株は、乾燥菌体
あたり油脂を２０重量％以上蓄積することができる。ま
た、油脂中の全脂肪酸あたり、(ｎ-６)系ドコサペンタ
エン酸を６〜１１重量％、および(ｎ-３)系ドコサヘキ
サエン酸を２５〜４５重量％含有し、エイコサペンタエ
ン酸の含有割合は１重量％以下である。また、油脂中の
全(ｎ-３)系脂肪酸あたり、(ｎ-３)系ドコサヘキサエン
酸を９８重量％以上含有している。

【００４０】従って、本発明において用いるシゾキトリ
ウム属ＳＲ２１株と同一の種に属するかもしくは実質的
に同一の菌学的性質を有する菌株は、乾燥菌体あたり油
脂を１０重量％以上蓄積するのが好ましく、さらに好ま
しくは２０重量％以上、最も好ましくは３０重量％以上
蓄積する。また、油脂中の全脂肪酸あたりの(ｎ-６)系
ドコサペンタエン酸の含有量は、５重量％以上、好まし
くは６重量％以上、より好ましくは６〜１１重量％であ
る。また、油脂中の全脂肪酸あたりの(ｎ-３)系ドコサ
ヘキサエン酸の含有量は、２０重量％以上、好ましくは
２５重量％以上、より好ましくは２５〜４５重量％であ
る。また、油脂中のエイコサペンタエン酸の含有割合
は、２重量％以下、好ましくは１重量％以下、より好ま
しくは０.５重量％以下である。さらに、本発明の油脂
は、(ｎ-３)系脂肪酸中に(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸
を９０重量％以上、好ましくは９５重量％以上含有して
いる。

【００４１】本発明の油脂は、前述の微生物を、天然海
水または人工海水を用いて調製した適当な培地に接種
し、常法に従って培養を行うことにより得ることができ
る。培地に添加する炭素源としては、グルコース、フル
クトース、キシロース、サッカロース、マルトース、可
溶性デンプンなどの炭水化物の他、オレイン酸、大豆油
などの油脂類や、糖密、グリセロール、マンニトール、
酢酸ナトリウムなどが例示できるが、これらに限られる
ものではない。これらの炭素源を、例えば、培地１リッ
トル当たり２０〜１２０gの濃度で使用することができ
る。

【００４２】窒素源としてはペプトン、酵母エキス、麦
芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンスチープリカ
ーなどの天然窒素源の他に、グルタミン酸ナトリウム、
尿素などの有機窒素源、または酢酸アンモニウム、硫酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、
硫酸ナトリウムなどの無機窒素源などが例示できるが、
これらに限られるものではない。

【００４３】この他、必要に応じてリン酸カリウム、リ
ン酸二水素カリウムなどのリン酸塩、硫酸アンモニウ
ム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸
銅、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどの無機塩お
よびビタミン類も微量栄養源として使用できる。これら
の培地成分は微生物の成育を害しない濃度であれば特に
制限はない。

【００４４】培地を調製した後、適当な酸または塩基を
用いてpＨを４.０〜６.５の範囲に調整し、オートクレ
ーブにより殺菌する。菌の培養は、１０〜３５℃、好ま
しくは１７〜３０℃にて通常３〜７日間、通気撹拌培
養、振蘯培養あるいは静置培養などによって行う。

【００４５】また、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸およ
び／または(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸の産生を促進
するため、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸および／また
は(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸の前駆体を培地に添加
することができる。前駆体としては、テトラデカン、ヘ
キサデカン、オクタデカンなどの炭化水素、テトラデカ
ン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、オレイン酸な
どの脂肪酸、またはその塩(例えば、ナトリウム塩また
はカリウム塩)、脂肪酸エステル、または脂肪酸を構成
成分として含む油脂(例えば、オリーブ油、大豆油、綿
実油、ヤシ油)などを挙げることができるが、これらに
限られるものではない。

【００４６】本発明の油脂を商品化が可能な収率で産生
するための条件として、次のような条件が挙げられる。
シゾキトリウム属ＳＲ２１株の培養条件の検討により、
該ＳＲ２１株およびこれと同一の種に属するかもしくは
実質的に同一の菌学的性質を有する菌株は、天然海水も
しくは人工海水または２分の１濃度の天然海水もしくは
人工海水を含む培地において、pＨ３.５〜６.０、望ま
しくはpＨ４.０〜４.５で良好に生育することがわかっ
た。

【００４７】培地に添加する炭素源および窒素源は、上
記のような通常用いられるものであってよい。窒素源は
有機窒素または無機窒素のいずれであってもよく、窒素
濃度として一定になるようにすれば、菌体の生育量、脂
質含量、ＤＨＡ、ＤＰＡの蓄積量に影響を与えずに有機
窒素と無機窒素の比率を変えることができる。これらを
通常の微生物培養に用いる濃度で添加して良好な生育が
得られる。リン酸塩を、通常の微生物培養に用いられる
濃度で用いて良好な生育を達成することができる。

【００４８】培地中の炭素源濃度とともに窒素源濃度も
同じ割合で増加させることにより、高濃度培養が可能で
ある。炭素源、窒素源の増加割合に応じて乾燥菌体量、
脂質量も増加し、ＤＨＡ、ＤＰＡの生産量も増加する。

【００４９】高濃度培養の際には、培養開始時に、炭素
源、例えばグルコースの濃度のみを増加させておき、窒
素源、例えばコーンスチープリカー／硫酸アンモニウム
については通常の量を添加し、グルコース消費量に応じ
て後から不足する量を添加する方法を用いることもでき
る。また、高濃度培養の際には、培養開始時に、炭素
源、窒素源を低い濃度にしておき、グルコースの消費に
応じて、後から、炭素源、窒素源を増加することもでき
る。

【００５０】上記条件での培養は通常の撹拌式発酵槽を
用いて実施できる。また、気泡塔型培養装置も用いるこ
ともできる。通気撹拌培養の条件としては通常の微生物
の培養条件を用いることができる。通気撹拌培養におい
ては、回転数を上昇させ、溶存酸素量を増加させるとフ
ラスコ培養に比べて、顕著な生育速度および菌体収量の
増加が観察される。培養初期においては、特に溶存酸素
量を高く維持することが生育速度の増加に重要である。

【００５１】このようにして、培養物中に(ｎ-６)系ド
コサペンタエン酸および(ｎ-３)系ドコサヘキサエン酸
含有油脂を蓄積した菌体を、培地１Ｌあたり１０g以
上、好ましくは２０g以上、更に好ましくは４０g以上の
高い濃度で生産させることができる。また、この油脂
は、培養中期以降、良好に菌体内に蓄積され、乾燥菌体
あたり３０重量％以上、好ましくは５０重量％以上、よ
り好ましくは６０重量％以上とすることができる。

【００５２】培養物から菌体を集める方法は、従来から
用いられている遠心分離法や濾過などの方法が使用でき
る。集められた菌体は、例えば、ダイノミルや超音波な
どにより破砕した後、クロロホルム、ヘキサン、メタノ
ール、エタノールなどによる溶媒抽出を行うことによ
り、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸および(ｎ-３)系ドコ
サヘキサエン酸含有油脂を得ることができる。乾燥菌体
１gあたり(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸および(ｎ-３)
系ドコサヘキサエン酸含有油脂は約０.３g以上が好まし
く、０.６g以上がさらに好ましい。

【００５３】本発明の油脂は、このようにしてシゾキト
リウム属ＳＲ２１菌株またはこれと同一の種に属するか
もしくは実質的に同一の菌学的性質を有する菌株から得
られる油脂であってもよい。本発明の油脂は、油脂中の
脂肪酸あたり、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸を５重量
％以上、好ましくは６重量％以上含有し、(ｎ-３)系ド
コサヘキサエン酸を２０重量％以上、好ましくは２５重
量％以上含有し、エイコサペンタエン酸を２重量％以
下、好ましくは１重量％以下、より好ましくは０.５重
量％以下の量で含有する。さらに本発明の油脂の脂質特
性は、通常は次の通りである。中性脂質の割合が極めて
高く、全脂質中の９０重量％以上を占める。中性脂質中
の脂肪酸組成は、パルミチン酸４５〜５５重量％、(ｎ-
３)系ドコサヘキサエン酸３３〜４３重量％、(ｎ-６)系
ドコサペンタエン酸７〜１０重量％、(ｎ-３)系エイコ
サペンタエン酸０〜１重量％、アラキドン酸０〜０.６
重量％、その他の脂肪酸１０〜２０重量％程度である。

【００５４】また得られる中性脂質は、約８５重量％以
上、好ましくは９０重量％以上がトリグリセリドであ
り、ジグリセリド、モノグリセリドはほとんど含まれて
いない。また、遊離ステロール、ステロールエステルが
２〜３％含まれている。また、上記脂肪酸組成を有する
油脂中のトリグリセリドの分子種は、主に１４:０−１
６:０−１６:０、１６:０−１６:０−１６:０、１４:０
−１６:０−２２:６、１６:０−１６:０−２２:５、１
６:０−１６:０−２２:６、１６:０−２２:５−２２:
６、１６:０−２２:６−２２:６である(脂肪酸残基の結
合位置は限定されない)。上記の「１４:０」なる記載
は、１４が脂肪酸の炭素数を、０が脂肪酸の持つ二重結
合の数を表すものであり、例えば、「１６:０」は炭素
数１６で二重結合を持たない脂肪酸を表す。

【００５５】また、該トリグリセリドには、(ｎ-３)系
ＤＨＡがグリセリンの２位のみに結合しているもの、ま
たは、(ｎ-３)系ＤＨＡがグリセリンの１および２位、
または１および３位に結合しているものが含まれてい
る。

【００５６】極性脂質としては、フォスファチジルコリ
ンが６０〜８０重量％で大部分を占め、他にフォスファ
チジルエタノールアミン５〜２０重量％、フォスファチ
ジルイノシトール２〜８重量％などを含む。また、上記
フォスファチジルコリンの分子種は、１６：０−２２：
６、１６：０−２２：５、２２：５−２２：６、２２：
６−２２：６など特徴的である。

【００５７】(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸含有油脂か
ら(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸を分離するには、混合
脂肪酸あるいは脂肪酸エステルの状態で、常法により、
例えば、尿素付加法、冷却分離法、カラムクロマトグラ
フィー法などにより濃縮採取することにより行う。ま
た、培養菌体などから採取した油脂からの(ｎ-６)系ド
コサペンタエン酸含有トリグリセリドの分離は、常法に
より、例えば冷却分離法、カラムクロマトグラフィー法
などにより行う。本発明のシゾキトリウム属ＳＲ２１株
を用いた場合、不飽和脂肪酸としてアラキドン酸、ＥＰ
Ａがほとんど含まれていないため、(ｎ-６)系ドコサペ
ンタエン酸の濃縮採取が容易に行え、高濃度生産には好
都合である。

【００５８】本発明の油脂は、種々の飼料、餌料または
食品などの製品において、(ｎ-６)系ＤＰＡおよび(ｎ-
３)系ＤＨＡの供給源として利用することができる。本
発明の油脂を製品に利用するにあたっては、培養菌体か
ら採取した油脂またはそれを精製して得られる油脂を使
用することもできるが、例えば、該油脂を菌体培養によ
って製造する途中の培養液もしくはその殺菌した培養
液、または培養終了時の培養液もしくはその殺菌した培
養液、またはそれぞれから集菌した培養菌体もしくはそ
の乾燥物、または培養液もしくは菌体から該油脂を採取
した後の該油脂を含有する残渣も使用することができ
る。

【００５９】本発明は、本発明の油脂を配合した動物用
飼料に関する。本発明の動物用飼料としては、ドッグフ
ードやキャットフードなどのペットフード、鶏などの家
禽のための飼料、豚や牛などの家畜のための飼料、養魚
用飼料などが挙げられる。(ｎ-６)系ＤＰＡおよび(ｎ-
３)系ＤＨＡを含有する油脂を産生、蓄積した微生物の
菌体または培養細胞は、油脂が菌体内に保護されている
ことによって酸化が防止され、また加熱殺菌にも安定で
あるため好ましい。また、微生物の培養菌体から(ｎ-
６)系ＤＰＡおよび(ｎ-３)系ＤＨＡを含有する油脂を抽
出した後の抽出残渣も本発明の動物飼料に使用すること
ができる。この抽出残渣は、(ｎ-６)系ＤＰＡや(ｎ-３)
系ＤＨＡの他に、蛋白質、灰分、炭水化物なども含んで
いるため好ましい。さらに本発明には、本発明の油脂を
配合した動物用飼料添加物も含まれる。

【００６０】さらに本発明は、本発明の油脂を産生、蓄
積した培養菌体または培養液を含んでなる微小餌料生物
用餌料に関する。従来、魚貝類や甲殻類の養殖におい
て、種苗(稚仔魚)生産には、微小餌料生物(シオミズツ
ボワムシ、ブラインシュリンプなどの動物プランクト
ン)が用いられており、稚仔魚の養殖には先ずこれらの
微小生物を養殖する必要がある。これらの微小生物を培
養する場合には、後にそれを餌料として摂取する稚仔魚
の栄養要求性を考えて微小餌料生物に与える餌料が決め
られる。本発明の油脂を含有する培養菌体または培養液
を微小餌料生物に与えることにより、(ｎ-６)系ＤＰＡ
および(ｎ-３)系ＤＨＡを含有し、稚仔魚の栄養要求性
を満足できる微小餌料生物が得られる。さらに本発明に
は、上記の微小餌料生物を含有する魚貝類用餌料も含ま
れる。

【００６１】さらに本発明は、本発明の油脂を、(ｎ-
６)系ＤＰＡおよび(ｎ-３)系ＤＨＡを強化した家禽卵の
生産に利用すること、ならびに(ｎ-６)系ＤＰＡおよび
(ｎ-３)系ＤＨＡを強化した卵黄油の製造に利用するこ
とに関する。本発明の(ｎ-６)系ＤＰＡおよび(ｎ-３)系
ＤＨＡを強化した家禽卵は、上述の動物用飼料を採卵用
家禽、特に鶏に与えて飼育することによって生産され
る。また、このような家禽卵、特に卵黄から常法に従っ
て油脂を抽出することによって、本発明の(ｎ-６)系Ｄ
ＰＡおよび(ｎ-３)系ＤＨＡを強化した卵黄油が得られ
る。また、この卵黄油を乳児用調製乳、未熟児用調製
乳、幼児用食品、妊産婦用食品に添加することも本発明
に含まれる。

【００６２】さらに本発明は、本発明の油脂を含有する
乳児用調製乳、未熟児用調製乳、幼児用食品、妊産婦用
食品に関する。特に育児用粉乳に関しては、その成分を
できるだけ人乳に近似させようとする試みが古くから行
われており、人乳中の主要成分である蛋白質、脂肪、糖
質などのそれぞれに関して人乳に類似化することが重要
課題となっている。特に脂肪に関しては本来母乳に含ま
れている高度不飽和脂肪酸が、従来の育児用粉乳に欠乏
していることが問題となっている。なお、母乳中の不飽
和脂肪酸の組成については、種々の報告があり、例え
ば、「INFORM」[Vol.6，No.8, pp.940-946 (1995年8
月)]にはアメリカ人、ヨーロッパ人およびアフリカ人の
母乳中の高度不飽和脂肪酸組成が、「JJPEN」[Vol.13，
No.9，pp.765-772 (1991)]には日本人の母乳の高度不飽
和脂肪酸組成が記載されている。

【００６３】最近ではアラキドン酸およびＤＨＡは同じ
く人乳中に含まれており、乳児の発育に役立つとの報告
がある[「Advances in Polyunsaturated Fatty Acid Re
search」, Elsevier Science Publishers，pp.261-264,
(1993)]。さらに、胎児の身長や脳の発育における重要
性が報告されている[Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90, 107
3-1077 (1993)、 Lancet, 344, 1319-1322 (1994)]。

【００６４】そこで、人乳と調製粉乳の脂肪酸組成の大
きな違いであるアラキドン酸およびＤＨＡを調製粉乳に
添加しようとする動きがある。このようにＤＨＡを添加
する目的で、魚油添加の調製粉乳が上市されてきている
が、本来、母乳中には魚油に含まれるＥＰＡはほとんど
含まれていない。最近の研究によりＥＰＡは未熟児の成
育には不都合であることが明らかとなり[「Advances in
Polyunsaturated Fatty Acid Research」，Elsevier S
cience Publishers, pp.261-264,(1993)]、米国特許第
５３７４６５７号には、ＥＰＡが少ないＤＨＡ含有細胞
食用油とアラキドン酸含有細胞食用油を組み合わせた幼
児用調製乳添加用の油脂が開示されている。しかし、従
来知られている調製乳や調製乳添加用油脂において、本
来母乳に含まれている(ｎ-６)系ＤＰＡおよび(ｎ-３)系
ＤＨＡを含有する油脂を使用することは全く知られてい
なかった。

【００６５】本発明の油脂、例えばシゾキトリウム属Ｓ
Ｒ２１株またはこれと同一の種に属するかもしくは実質
的に同一の菌学的性質を有する菌株由来の油脂は、(ｎ-
６）系ＤＰＡ１重量部に対して（ｎ-３)系ＤＨＡを３〜
６重量部含有しており、ＥＰＡをほとんど含有していな
いため、さらに８５％以上がトリグリセリドであるた
め、母乳に類似した育児用調製乳を製造するのに適して
いる。

【００６６】さらに本発明は、本発明の油脂を配合した
栄養補助食品、老人用食品、健康食品などの食品に関す
る。本発明の食品は、(ｎ-６)系ＤＰＡおよび(ｎ-３)系
ＤＨＡを補うことを目的とし、健康維持などに用いられ
る。その形態は、固形または液状の食品または嗜好品の
いずれであってもよい。油脂を含む食品として、例え
ば、肉、魚、ナッツ等の天然食品、中華料理、ラーメ
ン、スープ等の調理時に油脂を加える食品、天ぷら、フ
ライ、油揚げ、チャーハン、ドーナッツ、かりん糖等の
熱媒体として油脂を用いた食品、バター、マーガリン、
マヨネーズ、ドレッシング、チョコレート、即席ラーメ
ン、キャラメル、ビスケット、クッキー、ケーキ、アイ
スクリーム等の油脂食品または加工時に油脂を加えた加
工食品、おかき、ハードビスケット、あんパン等の加工
仕上げ時に油脂を噴霧または塗布した食品等を挙げるこ
とができる。しかし、本発明の食品は油脂を含む食品に
限定されるわけではなく、例えば、パン、めん類、ごは
ん、菓子類(キャンデー、チューインガム、グミ、錠
菓、和菓子)、豆腐およびその加工品などの農産食品、
清酒、薬用酒、みりん、食酢、醤油、味噌などの発酵食
品、ヨーグルト、ハム、ベーコン、ソーセージなどの畜
産食品、かまぼこ、揚げ天、はんぺんなどの水産食品、
果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、
茶などの飲料等も挙げることができる。

【００６７】本発明の食品は、所定量の本発明の油脂
を、食品原料とともに配合し、一般の製造法により加工
製造することができる。その配合量は剤形、食品の形態
性状により異なり、特に限定されるものではないが、一
般には食品全量に対して０.００１〜５０重量％が好ま
しい。

【００６８】さらに本発明は、本発明の油脂を配合した
機能性食品(特定保健用食品を含む)に関する。本発明の
機能性食品は、(ｎ-６)系ＤＰＡおよび(ｎ-３)系ＤＨＡ
の有する生理活性機能を発揮することを目的とし、機能
低下した状態を健康な状態に戻し、維持するための、ま
たは機能低下を予防するための食品である。形態として
は医薬製剤の形態であってもよいし、また、例えば蛋白
質(蛋白質源としてはアミノ酸バランスのとれた栄養価
の高い乳蛋白質、大豆蛋白質、卵アルブミン等の蛋白質
が最も広く使用されるが、これらの分解物、卵白のオリ
ゴペプチド、大豆加水分解物等の他、アミノ酸単体の混
合物も使用される)、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン
類、乳化剤、香料等に本発明の油脂が配合された自然流
動食、半消化態栄養食および成分栄養食や、ドリンク
剤、経腸栄養剤等の加工形態を挙げることができるが、
前記の飲食品の形態であってもよい。

【００６９】本発明の機能性食品、栄養補助食品は、本
発明の油脂を用いて、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル
剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、
ドリンク剤、自然流動食、半消化態栄養食、成分栄養
食、経腸栄養剤等の形態を有する飲食品として製造する
ことができる。この際、本発明の油脂とともにいずれの
栄養成分あるいは機能性成分を配合してもよい。また、
医師の指示に基づく栄養士の管理下に、病院給食の調理
の際に任意の食品に本発明の油脂を加え、その場で調整
した食事を、(ｎ-６)系ＤＰＡおよび(ｎ-３)系ＤＨＡが
低下している患者に与えることもできる。

【００７０】さらに本発明は、本発明の油脂を、医薬品
単体の製造に利用することに関する。即ち、本発明の油
脂を出発原料として、(ｎ-６)系ＤＰＡもしくは(ｎ-３)
系ＤＨＡまたはこれらの誘導体を製造することに関す
る。(ｎ-６)系ＤＰＡもしくは(ｎ-３)系ＤＨＡまたはそ
れらの混合物は、遊離の形であっても、また薬剤として
許容されうる塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リ
チウム塩、または他のアルカリ金属塩、亜鉛塩、カルシ
ウム塩、マグネシウム塩のような他の金属の塩の形態
や、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、
低級アルコールのエステル、リン脂質、糖脂質、アミド
等の種々の形態であってもよい。ここで低級アルコール
とは炭素数６以下の一価アルコールを指し、メタノー
ル、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブ
タノール、ペンタノール、ヘキサノールなどを例示する
ことができる。

【００７１】さらに本発明は、本発明の油脂を含有する
化粧品に関する。本発明の化粧品は、常法に従い本発明
の油脂を、通常の化粧料として知られる種々の形態の基
剤に配合して調製することができる。化粧料の形態の例
としては、特に限定されないが、例えば、乳液、クリー
ム、化粧水、パック、分散液、洗浄料等の化粧品とする
ことができる。化粧料の基剤としては、化粧料の形態に
応じた基剤、例えば、精製水、低級アルコール類、多価
アルコール類、油脂類、界面活性剤、各種美容成分、紫
外線吸収剤、増粘剤、色素、防腐剤、香料等を用いるこ
とができる。

【００７２】さらに本発明は、本発明の油脂を含有する
洗浄剤に関する。本発明の洗浄剤としては、薬用あるい
は非薬用にかかわらず、身体を清浄に保つために一般に
用いられる石鹸、シャンプー、フェイシアルクリーム、
リンスなどが含まれ、さらに入浴剤なども含まれる。ま
た、食器などの日常の家庭で用いる器具などの洗剤であ
ってもよい。

【００７３】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。実施例１ シゾキトリウム属ＳＲ２１株による油脂の生
産(１) グルコース６０g、ポリペプトン２０g、酵母エキス１０
gおよび５０％濃度の人工海水１Ｌからなる培地(Ａ)、
またはグルコース９０g、ポリペプトン１０g、コーンス
チープリカー１０gおよび５０％濃度の人工海水１Ｌか
らなる培地(Ｂ)を用いて、ジャーファーメンター(培養
槽容量５Ｌ、培地量３Ｌ)での培養を行った。培養は、
培養温度２５℃、通気量０.５vvM、および撹拌速度２０
０rpmで行った。培養後、遠心分離法により菌体を集め
て凍結乾燥し、重量法により培地１Ｌ当たりの菌体量を
求めた。次いで、この乾燥菌体にクロロホルム／メタノ
ール(２:１、v／v)混合液を加え、ガラスビーズの存在
下でホモジナイズすることにより、菌体の破砕と油脂の
抽出を行った。抽出液をＦolch法により洗浄した後、溶
媒を留去して精製油脂を得、その重量を求めた。得られ
た精製油脂の脂肪酸組成を評価するため、油脂の一部に
ついて、油脂を１０％ＨＣlを含むメタノール溶液とジ
クロロメタンの等量混合液に溶解し、６０℃で２時間熱
処理することにより脂肪酸メチルエステルを調製し、油
脂の脂肪酸組成をガスクロマトグラフ法により分析し
た。ガスクロマトグラフィーの分離条件は次のようであ
る。分離条件 １）カラム：キャピラリーカラム、ＴＣ−７０ ＧＬサイエンス社(GL Science Co.,Ltd.)製 内径０.２５mm×長さ３０m ２）流 速：０.８ml／分、１００kＰa(カラム頭部圧
力) ３）キャリアーガス：窒素ガス(純度９９.９９９％) ４）カラム温度：昇温モード、１７０〜２２０℃(４℃
／分) ５）検 出：ＦＩＤ

【００７４】これらの結果を表２および表３に示す。

【表２】 表 ２ 実験No. 培地 培養日数 菌体量 全油脂量 油脂含有割合 (日) (g) (g) (重量％) *1) *1) *2) 301 (A) 7 35.0 8.7 24.8 302 (B) 14 39.6 21.2 53.5 *1) 培地１Ｌ当たりの量 *2) 乾燥菌体当たりの含有割合

【表３】 表３．脂肪酸組成(重量％) 実験 14:0 15:0 16:0 17:0 18:0 20:4 20:5 22:5 22:6 No. (AA) (EPA) (DPA) (DHA) 301 1.6 10.1 25.0 1.8 1.0 − 0.4 11.1 43.7 302 2.8 6.7 44.6 1.6 1.3 − 0.4 8.5 34.0

【００７５】以上の結果から、シゾキトリウム属ＳＲ２
１株は、実用的な培養法である通気撹拌培養でも良好な
増殖を示すとともに、油脂を効率よく蓄積することが示
された。また、高度不飽和脂肪酸としては、ドコサヘキ
サエン酸(ＤＨＡ)が極めて高い濃度で含有され、さらに
ドコサペンタエン酸(ＤＰＡ)も含有されているが、アラ
キドン酸(ＡＡ)およびエイコサペンタエン酸(ＥＰＡ)を
ほとんど含まないことが示された。この結果は、それら
脂肪酸を１０重量％前後含んでいる魚油とは大きく異な
っている。

【００７６】実施例２ 実施例１により得られた油脂に含まれるドコサヘキサエ
ン酸(ＤＨＡ)、エイコサペンタエン酸(ＥＰＡ)などの
(ｎ-３)系脂肪酸それぞれの含有割合と、全(ｎ-３)系脂
肪酸に対するＤＨＡの割合を表４に示す。

【表４】 表４．(ｎ-３)系脂肪酸組成(重量％) 実験 ＥＰＡ ＤＰＡ ＤＨＡ 全(ｎ-３)系脂肪酸に Ｎo. 対するＤＨＡの割合 301 ０.４ ０.２ ４３.７ ９８.６ 302 ０.４ ０.１ ３４.０ ９８.６

【００７７】表からわかるように、シゾキトリウム属Ｓ
Ｒ２１株より得られる油脂は魚油に多く含まれるＥＰＡ
の含有割合が１.０重量％以下であり、また、全(ｎ-３)
系脂肪酸に対するＤＨＡ含有割合が９８重量％以上であ
る。これらのことは、魚油がＥＰＡを１０重量％前後含
んでいることに比べると、該菌株がＤＨＡの濃縮、分離
および精製の操作を容易にする利点を持っていることを
示すものである。

【００７８】参考例 既知微生物との比較 既知の微生物とシゾキトリウム属ＳＲ２１株とのＤＨＡ
およびＥＰＡ生産能の比較を行った。表５に、微生物と
してスラウストキトリウム・アウレウム(ＡＴＣＣ３４
３０４)を用いて培養を行ってＤＨＡの生産を行った場
合[P.Bajapai, P.K.BajapaiおよびO.P.Ward, Appl.Micr
obiol.Biotechnol. 35：706 (1991)、A.Kendricおよび
C.Ratledge, Lipids 27：15 (1992)、およびP.K.Bajapa
i,P.BajapaiおよびO.P.Ward, J.Am.Oil Chem.Soc., 6
8：509 (1991)を引用]、微生物としてジャポノキトリウ
ム sp.(ＡＴＣＣ２８２０７)を用いて培養を行ってＤＨ
Ａの生産を行った場合(特開平１−１９９５８８号公報
を引用)、および微生物としてシゾキトリウム・アグレ
ガタム(ＡＴＣＣ２８２０９)を用いて培養を行ってＤＨ
Ａの生産を行った場合[A.KendricおよびC.Ratledge, Li
pids 27：15 (1992)を引用]、ならびに、シゾキトリウ
ム属ＳＲ２１株を用いて培養を行ってＤＨＡの生産を行
った上記の実験Ｎo.３０１および３０２の、培地１Ｌ当
たりの菌体量、乾燥菌体当たりの油脂または脂肪酸含有
割合、全脂肪酸中のＤＨＡ含有割合、ＥＰＡ含有割合お
よび培地１Ｌ当たりのＤＨＡ量を示す。

【００７９】

【表５】 表５．既知微生物とのＤＨＡ生産能の比較 微生物 引用文献 菌体量 油脂また ＤＨＡ ＥＰＡ ＤＨＡ または は脂肪酸 含有 含有 量 実験No. 含有割合 割合 割合 (g) (重量％) (重量％) (重量％) (mg) *1) *2) *3) *3) *1) シ゛ャホ゜ノキトリウム sp.(ATCC28207) (a) 1.7 8.2 30.0 6.4 42 スラウストキトリウム・アウレウム (ATCC34304) (b) 5.0 20.2 51.0 記載なし 511スラウストキトリウム・アウレウム (ATCC34304) (c) 3.8 16.5 48.5 3.6 270スラウストキトリウム・アウレウム(ATCC34304) (d) 4.0 10.0 24.1 9.3 96 シソ゛キトリウム・アク゛レカ゛タム(ATCC28209) (d) 1.4 1.7 6.0 6.1 1 シソ゛キトリウム 属SR21株 No.301 35.0 24.8 43.7 0.4 3800 シソ゛キトリウム属SR21株 No.302 39.6 53.5 34.0 0.4 7200 *1) 培地１Ｌ当たりの量 *2) 乾燥菌体当たりの含有割合 (ＳＲ２１株：脂肪酸含有割合；他の菌株：油脂含有割合) *3) 全脂肪酸中の含有割合 (a) 特開平1-199588号公報 (b) P.K.Bajapai, P.BajapaiおよびO.P.Ward, J.Am.Oil Chem.Soc., 68：509 (1991) (c) P.Bajapai, P.K.BajapaiおよびO.P.Ward, Appl.Microbiol. Biotechnol. 35：706 (1991) (d) A.KendricおよびC.Ratledge, Lipids 27：15 (1992)

【００８０】表５に示したように、シゾキトリウムＳＲ
２１株を用いて培養を行うと既知の微生物と比較して培
地当たりの菌体量が非常に多く、ＳＲ２１株は増殖性が
優れるということがわかる。また、シゾキトリウムＳＲ
２１株は既知の微生物と比較して油脂の含有割合も非常
に高い。また、全脂肪酸中のＤＨＡ含有割合も３０重量
％と高いことから、培地１Ｌ当たりのＤＨＡ量は、従来
公知の微生物を用いた場合と比較して１０〜１００倍程
度と高い値となり、ＳＲ２１株はきわめて高いＤＨＡ生
産能を有することが明らかである。さらに、既知の微生
物によれば、ＥＰＡ含有割合が数重量％の油脂が得られ
るのに対し、シゾキトリウム属ＳＲ２１株によれば、Ｅ
ＰＡ含有割合が０.５重量％以下と極めて低い油脂が得
られることがわかる。

【００８１】実施例３ シゾキトリウム属ＳＲ２１株に
よる油脂の生産(２) グルコース６０g／Ｌ、コーンスチープリカー０.５g／
Ｌ、リン酸カリウム３g／Ｌ、硫酸アンモニウム２g／Ｌ
および５０％人工海水からなる培地を用いて、ジャーフ
ァーメンター(５Ｌ容量、培地量３Ｌ)により約６０時間
培養を行った。培養条件は、培養温度２８℃、通気量
１.０v.v.m.、撹拌速度３００rpm、１０％水酸化ナトリ
ウムによりpＨ４にコントロールして行った。培養終了
後、遠心分離により集菌し、凍結乾燥後に秤量すること
により、培地１Ｌあたり約２０gの乾燥菌体を得た。油
脂の抽出は、常法に従い、乾燥菌体にクロロホルム／メ
タノール(２:１、v／v)を混合し、ガラスビーズの存在
下でホモジナイズすることにより行った。６０gの乾燥
菌体より得られた粗抽出油脂は３６gであった。この粗
抽出油脂を、常法に従い、メチルエステル化し、ガスク
ロマトグラフィーにより脂肪酸組成を調べたところ表６
に示す組成であった。

【００８２】

【表６】 表６．粗抽出油脂中の脂肪酸組成 脂肪酸 14:0 15:0 16:0 17:0 18:0 20:4 20:5 22:5 22:6 n-6 n-3 AA EPA DPA DHA 含有割合(％) 2.3 5.8 44.6 2.0 1.4 0.6 0.8 8.4 34.0

【００８３】実施例４ ドコサペンタエン酸の単離およ
び同定 粗抽出脂肪酸の高度不飽和脂肪酸の濃度を上昇させるた
め、常法に従い、尿素付加を行って飽和脂肪酸を除去し
た。即ち、実施例３に示した方法で調製した粗抽出脂肪
酸約９gに尿素２０g、メタノール２００mlを加え、６０
℃で３時間加熱した後、１０℃まで徐冷した。析出した
尿素結晶を濾過後、非結晶溶液分を濃縮し、尿素非付加
物約４gを得た。この尿素非付加物の脂肪酸組成は、ド
コサペンタエン酸１７.７％、ドコサヘキサエン酸７７.
９％であり、その他の脂肪酸の混入率は５％以下であっ
た。上記処理によって得た尿素非付加物につき、液体ク
ロマトグラフィー(ＯＤＳカラム、移動相 アセトニトリ
ル：水＝９７.５：２.５、検出 ＵＶ)を行ってドコサペ
ンタエン酸を分取した。これにより、純度９９％以上の
ドコサペンタエン酸を約３.２g得た。

【００８４】また、ドコサペンタエン酸の二重結合位置
を決定するため、常法に従い、脂肪酸をピコニルエステ
ル誘導体にした後、ＧＣ／ＭＳで解析した。即ち、上記
で得られた尿素非付加脂肪酸２０μgにチオニルクロラ
イド１００μlを加え、１分間室温に放置した後、窒素
気流下で乾燥させた。これに１０％３-ピリジルカルボ
ニル１０μlを加え、１分間室温に放置した後、ＧＣ／
ＭＳで分析を行った。この結果、図４に示したように、
ＳＲ２１株が生産するドコサペンタエン酸(２２：５)
は、不飽和結合を△４,７,１０,１３,１６の位置に持つ
(ｎ-６)系不飽和脂肪酸であると同定された。

【００８５】実施例５ シゾキトリウム属ＳＲ２１株の
脂肪酸分析 粗抽出油脂は、実施例３により得られたものを用いた。
この粗抽出油脂を、常法に従い、ヘキサンと９０％メタ
ノールによる液／液分配により、中性脂質と極性脂質を
分離した。得られた脂質量はそれぞれ極性脂質１.８g、
中性脂質３２.９gであった。この脂質を加水分解後、メ
チルエステル化し、ガスクロマトグラフィーにより脂肪
酸組成を分析した。

【００８６】分析結果は下記の通りである。

【表７】 表７．粗抽出油脂中の極性／中性脂質組成 極性脂質(％) 中性脂質(％) １４:０ １.３ ３.２ １５:０ ０.６ １.０ １６:０ ３２.４ ４９.２ ２０:４(n-６) ０.２ ０.６ ２０:５(n-３) ０.６ ０.８ ２２:５(n-６) １０.６ ７.９ ２２:６(n-３) ５２.１ ３３.７

【００８７】実施例６ フォスファチジルコリンの脂肪
酸残基の分析 実施例５で得られた極性脂質中のフォスファチジルコリ
ンを、液体クロマトグラフィーにより分離および分取し
た。分離条件は次のようであった。 １）カラム：シリカゲルラム、タイプ；ＴＳＫゲル シ
リカ-６０、メーカー；東ソー株式会社、形状；直径２
０mm×長さ２５０mm ２）流 速：１０ml／分 ３）移動相(体積比)：アセトニトリル／メタノール／リ
ン酸＝９５.０／５.０／０.５ ４）カラム温度：２５℃ ５）検 出：示差屈折、２５℃

【００８８】分取したフォスファチジルコリンを液体ク
ロマトグラフィーにより分子種に分離し、それらを分取
した後、加水分解メチルエステル化してガスクロマトグ
ラフィー法で脂肪酸残基を決定した。液体クロマトグラ
フィーの分離条件は次のようであった。 １）カラム：ＯＤＳゲルカラム、タイプ；イナートジル
(Inertsil)ＯＤＳII、 メーカー；ＧＬサイエンス社(GL Science Co., Ltd.) 形状；直径４.６mm×長さ２５０ｍｍ ２）流 速：１ｍｌ／分 ３）移動相(体積比)：メタノール／Ｈ₂Ｏ＝９５.０／
５.０ ４）カラム温度：２５℃ ５）検 出：示差屈折、２５℃ また、ガスクロマトグラフィーの分離条件は次のようで
あった。 １）カラム：タイプ；キャピラリーカラム、ＴＣ-７
０、メーカー；ＧＬサイエンス社、形状；直径０.２５m
m×長さ３０m ２）流 速：０.８ml／分、１００kPa(カラム頭部圧力) ３）キャリアーガス：窒素ガス ４）カラム温度：昇温モード、１７０〜２２０℃(４℃
／分) ５）検 出：ＦＩＤ この結果、ＳＲ２１株のフォスファチジルコリンの分子
種は、主に１６：０−２２：６、１６：０−２２：５、
２２：５−２２：６、２２：６−２２：６であることが
わかった。

【００８９】実施例７ シゾキトリウム属ＳＲ２１株の
脂質分析 実施例５で得られた中性脂質と極性脂質を、常法に従
い、薄層クロマトグラフィーにより分析を行った。発色
は硫酸を用いて行い、得られるスポットの同定は各標準
脂質とのＲf値により決定した。中性脂質は９０％以上
がトリグリセリドであった。また、極性脂質は、大部分
がフォスファチジルコリン(６０〜８０重量％)であり、
次いでフォスファチジルエタノールアミン(５〜２０重
量％)、フォスファチジルイノシトール(２〜８重量％)
であった。 また中性脂質中のトリグリセリドを、常法に従い、液体
クロマトグラフィー(ＯＤＳカラム、移動相アセトン:ア
セトニトリル＝３:２、示差屈折検出計)により分子種を
分離し(図５)、分取後、加水分解メチルエステル化し、
ガスクロマトグラフィーにより脂肪酸残基を決定した。

【００９０】結果は下記の通りである。

【表８】 表８．中性脂質中のトリグリセリドの分析 ピーク 分子種 量比(％) Ｎo． １ １４:０−１６:０−１６:０ ３.４ ２ １６:０−１６:０−１６:０ ８.０ ３ １４:０−１６:０−２２:６ ４.０ ４ １６:０−１６:０−２２:５ ７.８ ５ １６:０−１６:０−２２:６ ２７.４ ６ １６:０−２２:５−２２:６ ８.４ ７ １６:０−２２:６−２２:６ １６.９ この７種類のトリグリセリドが、全トリグリセリド中の
７０重量％以上を占めた。このトリグリセリドの最大分
子種は、１６:０−１６:０−２２:６であり、全トリグ
リセリドの約２７重量％を占めていた。

【００９１】実施例８ トリグリセリドの脂肪酸残基結
合位置決定 実施例７で分画したトリグリセリド(分子種１６:０−１
６:０−２２:６)を、乾燥後、１,３位に特異的なリパー
ゼで処理し、得られる２−モノグリセリドをトリメチル
シリル化した後にＧＣ／ＭＳにより脂肪酸残基を決定し
た。リパーゼ処理は、５０mＭ酢酸緩衝液(pＨ５.５)２m
l、リパーゼ１０００単位、３５℃、３０分間行った。
反応終了後、エーテルにより抽出し、市販のトリメチル
シリル化剤を用いて、２−モノグリセリドをトリメチル
シリル化した。結果は図６に示したように、２２:６が
結合したモノグリセリドの分子量に相当するフラグメン
トピークが得られ、本トリグリセリドは２２:６の脂肪
酸残基がグリセロール骨格の２位に結合している、１
６:０−２２:６−１６:０であった。

【００９２】実施例９ 窒素濃度の影響 培地１Ｌ当たり、６０gのグルコース、３gのリン酸二水
素カリウム、０.５gのコーンスチープリカーを加えた２
分の１濃度の人工海水培地に表９に示す濃度で硫酸アン
モニウムを添加し、この培地３Ｌを５Ｌ容積のジャーフ
ァーメンターに入れた。この培地に、実施例３と同様に
調製した前培養液６０mlを添加し、培養を行った。培養
は２８℃、１v.v.m.、３００rpm、pＨ４.０の条件で行
った。グルコースの消費後に、培養液１００mlを採取し
て遠心分離法で菌体を集めた。この菌体を洗浄し、凍結
乾燥装置によって乾燥菌体を得た。この乾燥菌体の重量
を測定して、培地１Ｌ当たりの菌体量を求めた。次い
で、実施例３と同様の方法で培地１Ｌ当たりの菌体量、
培地１Ｌ当たり全脂肪酸含有割合、および培地１Ｌ当た
りのＤＨＡ量、ＤＰＡ量を求めた。その結果を表９に示
す。

【００９３】

【表９】 表９．分析結果 実験 (NH₄)₂SO₄ 菌体量 全脂肪 脂肪酸 DHA含有 DHA量 DPA含有 DPA量 No. 酸量 含有割合 割合 割合 (g) (g) (重量％) (重量％) (g) (重量％) (g) 401 0.5 6.5 4.8 74.5 31.4 1.5 7.9 0.38 402 1.0 8.6 6.0 69.8 32.0 1.9 8.0 0.48 403 2.0 15.3 9.1 59.6 35.0 3.2 8.8 0.81 404 3.0 20.5 10.7 52.2 35.8 3.8 8.9 0.90 硫酸アンモニウム濃度を２.０〜３.０g／Ｌとした場合
に良好な生育を示した。また、硫酸アンモニウム濃度を
０.５〜１.０g／Ｌとすると脂肪酸含有割合が７０％以
上に増加していた。

【００９４】実施例１０ 有機窒素源と無機窒素源の影
響 培地１Ｌ当たり、６０gのグルコース、３gのリン酸二水
素カリウム、０.５gのコーンスチープリカーを加えた２
分の１濃度の人工海水培地に、表１０に示す濃度で窒素
源の濃度を一定にして、有機窒素源としてコーンスチー
プリカー(ＣＳＬ)と無機窒素源として硫酸アンモニウム
の２つの割合を変えて添加した。この培地３Ｌを５Ｌ容
積のジャーファーメンターに入れ、実施例３と同様に調
製した前培養液６０mlを添加し、実施例３と同一の条件
で培養を行った。グルコースの消費後に、培養液１００
mlを採取して遠心分離法で菌体を集めた。この菌体を洗
浄し、凍結乾燥装置によって乾燥菌体を得た。この乾燥
菌体の重量を測定して、培地１Ｌ当たりの菌体量を求め
た結果を表１０に示す。次いで、実施例３と同様の方法
で培地１Ｌ当たりの菌体量、培地１Ｌ当たりの全脂肪酸
含有割合、および培地１Ｌ当たりのＤＨＡ量、ＤＰＡ量
を求めた。その結果を表１０に示す。

【００９５】

【表１０】 表１０．分析結果 実験 CSL 硫酸 菌体 全脂肪 脂肪酸 DHA含有 DHA DPA含有 DPA No. アンモニ 量 酸量 含有割 割合 量 割合 量 (g) ウム(g) (g) (g) 合(％) (重量％) (g) (重量％) (g) 501 0.7 2.0 21.0 14.8 70.5 31.8 4.7 8.1 1.2 502 2.0 1.7 20.0 13.7 68.5 31.7 4.3 7.3 1.0 503 3.3 1.3 23.2 14.5 62.4 30.7 4.5 6.9 1.0 504 5.3 0.7 21.0 13.7 68.5 29.9 4.3 8.0 1.1505 8.0 0 20.6 13.4 65.2 27.9 3.8 6.7 0.9 いずれの組成比においても良好な生育を示し、本菌は有
機窒素、無機窒素の区別なく消費して生育する。また、
ＤＨＡ、ＤＰＡの生産性にもあまり変化は見られない。

【００９６】実施例１１ 高濃度培養 培地１Ｌ当たり、３gのリン酸二水素カリウムを加えた
２分の１濃度の人工海水培地に、表１１に示す濃度でグ
ルコース、コーンスチープリカー、硫酸アンモニウムを
添加した。この培地３Ｌを５Ｌ容ジャーファーメンター
に入れ、実施例３に示す培養条件で培養を行った。グル
コースの消費後に、培養液１００mlを採取して遠心分離
法で菌体を集めた。この菌体を洗浄し、凍結乾燥装置に
よって乾燥菌体を得た。この乾燥菌体の重量を測定し
て、培地１Ｌ当たりの菌体量を求め、次いで、実施例３
と同様の方法で培地１Ｌ当たりの菌体量、培地１Ｌ当た
りの全脂肪酸量、乾燥菌体当たりの脂肪酸含有割合、全
脂肪酸中のＤＨＡ、ＤＰＡ含有割合、および培地１Ｌ当
たりのＤＨＡ、ＤＰＡ量を求めた。その結果を表１１に
示す。

【００９７】

【表１１】 表１１．分析結果 実験 グル CSL 硫酸 培養 乾燥 全脂 脂肪酸 DHA DHA DPA DPA No. コース 量 アンモニ 時間 菌体 肪酸 含有 含有 量 含有 量 量 ウム量 量 量 割合 割合 (g) 割合 (g) (g) (g) (時間) (g) (g) (重量％) (重量％) (重量％) 601 60 0.7 2.0 60 21.9 14.8 67.6 34.5 5.11 6.8 1.01 602 80 0.93 2.7 84 32.0 21.9 68.6 34.7 7.62 7.1 1.55 603 100 1.17 3.3 92 37.7 31.15 82.6 33.3 10.37 6.3 2.03 604 120 1.4 4.0 108 48.1 37.3 77.5 35.6 13.26 7.4 2.76605 150 1.75 5 120 59.2 41.6 70.3 37.3 15.52 8.2 3.43 これらの結果から、本菌は炭素源と窒素源濃度を増加さ
せることにより、グルコース濃度の増加に応じて、ＤＨ
Ａ、ＤＰＡの生産量も増加することが明らかとなった。

【００９８】実施例１２ 撹拌数の影響 実施例３と同一の培地組成および培養条件で、培養槽の
撹拌数を１００rpmおよび３００rpmにして培養を行っ
た。グルコース消費時間が、１００rpmでは１００時間
程度かかっていたのが、３００rpmでは約半分の５０〜
６０時間となった。一方、培地１Ｌ当たりの脂肪酸量、
ＤＨＡ量、ＤＰＡ量については３００ｒｐｍの方がわず
かに多かった（表１２)。

【表１２】 表１２．分析結果 回転数 菌体量 全脂肪 脂肪酸 DHA含 DHA量 DPA含 DPA量 酸量 含有割 有割合 有割合 (rpm) (g) (g) 合(％) (％) (g) (％) (g) 100 15.3 9.1 59.6 35.0 3.2 8.4 0.76 300 20.5 10.7 52.2 35.8 3.9 8.5 0.91

【００９９】実施例１３ 実施例１１に従って製造した培養液を集め、フィルター
プレスにて液を除去し乾燥させ、水分１０％含有の菌体
１０kgを得た。この菌体を常法に従いヘキサン抽出し、
ヘキサンを除去した後、５.９kgの油脂を得た。またヘ
キサン抽出後の菌体を乾燥させヘキサンを除去した後、
３.９kgの油抽出残菌体を得た。この油脂は、３５％の
ＤＨＡと８％のＤＰＡを含有していた。また油抽出残菌
体には、１.２％のＤＨＡと０.３％のＤＰＡを含有して
いた。

【０１００】実施例１４ イザブラウン種２００食日の採卵鶏１群５羽として２群
にわけた。１群は対照群として通常の飼料で２５日間飼
育した。残りの群は実験群として、実施例１３により得
られた油脂を毎日５gの量で通常の飼料に加え２５日間
飼育した。２５日目の卵３個分の卵の重量、卵黄重量、
ＤＨＡ濃度、ＤＰＡ濃度、卵黄の照り、卵黄の味を測定
した。結果を表１３に示す。油脂を加えて飼育すること
により、明らかに卵黄中のＤＨＡ、ＤＰＡ含有率は増加
した。また、照りがよく、とろける感じの卵黄を得るこ
とができた。

【表１３】 表１３ 実験群 対照群 卵の重量(３個分)g ２１３ ２１１ 卵黄重量 g ５５ ５２ ＤＨＡ(％) ３.５ １.５ ＤＰＡ(％) ０.８ 痕跡量 卵黄の照 照りが良い ざらざらした感じ 卵黄の味 とろける感じ 水っぽい

【０１０１】実施例１５ イザブラウン種２００食日の採卵鶏を２群にわけた。１
群は対照群として５羽を通常の飼料で２５日間飼育し
た。残りの群は実験群として３羽を、通常の飼料を対照
群より５０g減じ、その分を補うために実施例１３によ
り得られた油抽出残菌体５０gを加え２５日間飼育し
た。２５日目の卵３個分の卵の重量、卵黄重量、ＤＨＡ
濃度、ＤＰＡ濃度、卵黄の照り、卵黄の味を測定した。
結果を表１４に示す。油抽出残菌体を加えて飼育するこ
とにより、明らかに卵黄中のＤＨＡ、ＤＰＡ含有率は増
加した。また、照りがよく、とろける感じの卵黄を得る
ことができた。

【表１４】 表１４ 実験群 対照群 卵の重量(３個分)g ２１２ ２１１ 卵黄重量 g ５３ ５２ ＤＨＡ(％) ２.１ １.５ ＤＰＡ(％) ０.２ 痕跡量 卵黄の照 照りが良い ざらざらした感じ 卵黄の味 とろける感じ 水っぽい

【０１０２】実施例１６ (n-６)系ドコサペンタエン酸
およびＤＨＡ含有ミルクの調製 粉末ミルク用原料１００gに、実施例１４で得られた卵
黄から常法に従って抽出した(n-６)系ドコサペンタエン
酸およびＤＨＡ含有卵黄油[(n-６)系ドコサペンタエン
酸０.８、ＤＨＡ３.５％含有]６gを混合することにより
(n-６)系ドコサペンタエン酸およびＤＨＡ含有ミルクを
調製した。このミルクの全脂肪酸に対する(n-６)系ドコ
サペンタエン酸の割合は０.１９％、ＤＨＡの割合は０.
８４％となり、従来の調製乳に不足していた(n-６)系ド
コサペンタエン酸およびＤＨＡを母乳に近づけることが
できた。

【０１０３】実施例１７ (ｎ-６)系ドコサペンタエン
酸およびＤＨＡ含有ミルクの調製 実施例５で得られた粗抽出油脂を、常法に従い、ヘキサ
ンと９０％メタノールによる液／液分配により、中性脂
質と極性脂質とに分離し、(ｎ-６)系ドコサペンタエン
酸およびＤＨＡを含有する中性脂質[(ｎ-６)系ドコサペ
ンタエン酸７.９、ＤＨＡ３３.７％含有]を得た。この
油０.６gを、粉末ミルク用原料１００gに混合すること
により(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸およびＤＨＡ含有
ミルクを調製した。このミルクの全脂肪酸に対する(ｎ-
６)系ドコサペンタエン酸の割合は０.１９％、ＤＨＡの
割合は０.８０％となり、従来の調製乳に不足していた
(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸およびＤＨＡを母乳に近
づけることができた。

【０１０４】実施例１８ (ｎ-６)系ドコサペンタエン
酸およびＤＨＡ含有セプセルの調製

【表１５】 表１５．カプセル ゼラチン ７０.０％ グリセリン ２２.９％ パラオキシ安息香酸メチル ０.１５％ パラオキシ安息香酸プロピル ０.５１％水 適量 計 １００％ 上記成分からなるソフトカプセル剤皮の中に、実施例１
１で得られた(ｎ-６）系ドコサペンタエン酸およびＤＨ
Ａ含有微生物オイル３００ｍｇを常法により充填し、ソ
フトカプセル剤を得た。

【０１０５】実施例１９ (ｎ-６)系ドコサペンタエン
酸およびＤＨＡ含有飲料の調製 容器中に市販のプレーンヨーグルト５０gと実施例１１
で得られた(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸およびＤＨＡ
含有微生物オイル５０％とβ−シクロデキストリン１g
を入れ、これを約３分間撹拌して乳化させ、Ｗ／Ｏ／
Ｗ、Ｏ／Ｗ／Ｏ型などが混在するエマルジョンを得た。

【０１０６】実施例２０ ＤＨＡとＤＰＡを含有する微
小餌料生物用餌料の製造 実施例３に従って製造した培養液を集め、フィルタープ
レスにて液を除去し菌体を得た。得られた菌体を１０５
℃で３時間、加熱乾燥し、コーヒーミルにより、パウダ
ー化した。得られたパウダーまたはコントロールとして
パン酵母を用いて、ワムシ、およびブラインシュリンプ
の培養を行った。培養方法は、海水２００Ｌを３００Ｌ
の水槽に入れ、通気条件下、２３℃で、ワムシは１mlあ
たり１００個体、ブラインシュリンプは１mlあたり２０
個体放養し、餌料として、それぞれ１g／１０⁶個ワムシ
１日、１g／１０⁵個ブラインシュリンプ１日になるよう
に上記の菌体パウダーまたはパン酵母を与えた。ワムシ
またはブラインシュリンプにこれらを摂取して生育し、
３日目にサンプリングして構成脂肪酸組成を調べた結
果、表１６および表１７のようになった。

【０１０７】結果が示す通り、ワムシにおいてもブライ
ンシュリンプにおいても、ＤＨＡ、ＤＰＡの蓄積がパン
酵母より好成績であった。

【表１６】 表１６．ワムシ 脂肪酸組成（％） ＤＨＡ ＤＰＡ コントロール（パン酵母） ０ ０ 試 験 （ＳＲ２１株） ２６ ５

【表１７】 表１７．ブラインシュリンプ 脂肪酸組成（％） ＤＨＡ ＤＰＡ コントロール（パン酵母） ０ ０ 試 験 （ＳＲ２１株） ２３ ４

【０１０８】

【発明の効果】本発明において用いる海洋性微生物は、
増殖性および油脂蓄積性に優れ、(ｎ-３)系ＤＨＡおよ
び(ｎ-６)系ＤＰＡの生産能が高く、かつＥＰＡの生産
が極めて少ない。従って、この微生物を用いて、(ｎ-
３)系ＤＨＡおよび(ｎ-６)系ＤＰＡの含有量が高く、か
つＥＰＡの含有量が低い油脂を高収率で製造することが
できる。また、この油脂から純度の高い(ｎ-３)系ＤＨ
Ａまたは(ｎ-６)系ＤＰＡを分離することもできる。ま
た、本発明の油脂は、種々の生理活性を有する(ｎ-３)
系ＤＨＡとともに(ｎ-６)系ＤＰＡを高濃度で含有する
ため、該油脂を種々の食品、飼料および餌料に添加し
て、(ｎ-３)系ＤＨＡおよび(ｎ-６)系ＤＰＡを必要とす
る対象にこれら高度不飽和脂肪酸を安定的かつ効率的に
供給することができる。特に、動物用飼料または動物用
飼料添加物、微小餌料生物用餌料では、ＤＨＡおよびＤ
ＰＡを含有する培養菌体の抽出残渣なども使用できるた
め、非常に経済的である。また、上記の動物用飼料を家
禽に与えることによって、今までになかったＤＨＡおよ
びＤＰＡを強化した家禽卵または卵黄油を得ることがで
きる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 シゾキトリウム属ＳＲ２１株の遊走子の形態
を示す光学顕微鏡写真である。

【図２】 シゾキトリウム属ＳＲ２１株の遊走子の鞭毛
の形態を示す透過型電子顕微鏡写真である。

【図３】 シゾキトリウム属ＳＲ２１株の栄養細胞塊と
原形質のネットワークの形態を示す光学顕微鏡写真であ
る。

【図４】 シゾキトリウム属ＳＲ２１株由来の(ｎ-６)
系ドコサペンタエン酸のＧＣ／ＭＳスペクトルを測定し
た結果を示すチャートである。

【図５】 シゾキトリウム属ＳＲ２１株由来の中性油脂
中のトリグリセリドを液体クロマトグラフィーにより分
離した結果を示すチャートである。

【図６】 シゾキトリウム属ＳＲ２１株由来のトリグリ
セリド(分子種１６：０−１６：０−２２：６)をリパー
ゼ処理し、次いでトリメチルシリル化した後にＧＣ／Ｍ
Ｓで測定した結果を示すチャートである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ２３Ｌ 1/30 Ａ２３Ｌ 1/30 Ｚ 2/52 Ａ６１Ｋ 31/23 ＡＤＤ Ａ６１Ｋ 31/23 ＡＤＤ 35/74 Ｇ 35/74 Ｃ１１Ｂ 15/00 Ｃ１１Ｂ 15/00 Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｐ 7/64 2115−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 57/12 // Ｃ０７Ｃ 57/12 Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:90） (72)発明者 横地 俊弘 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 中原 東郎 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 東原 孝規 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 田中 悟広 兵庫県宍粟郡一宮町公文400 (72)発明者 矢口 敏昭 茨城県つくば市稲荷前23番６号 パークヒ ル105号

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 油脂中の全脂肪酸あたり、(ｎ-６)系ド
   コサペンタエン酸を５重量％以上、(ｎ-３)系ドコサヘ
   キサエン酸を２０重量％以上、およびエイコサペンタエ
   ン酸を２重量％以下の量で含有することを特徴とする
   (ｎ-６)系ドコサペンタエン酸含有油脂。
2. 【請求項２】 油脂中の全脂肪酸あたり、(ｎ-６)系ド
   コサペンタエン酸を６重量％以上、(ｎ-３)系ドコサヘ
   キサエン酸を２５重量％以上、およびエイコサペンタエ
   ン酸を１重量％以下の量で含有することを特徴とする請
   求項１に記載の油脂。
3. 【請求項３】 油脂中の中性脂質の割合が９０重量％以
   上であることを特徴とする請求項１または２に記載の油
   脂。
4. 【請求項４】 中性脂質の８５重量％以上がトリグリセ
   リドであることを特徴とする請求項３に記載の油脂。
5. 【請求項５】 油脂が、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸
   の生産能を有するシゾキトリウム属ＳＲ２１株(ＦＥＲ
   Ｍ ＢＰ−５０３４)または該ＳＲ２１株と同一の種に属
   するかもしくは実質的に同一の菌学的性質を有する微生
   物を培地中で培養し、その培養物から採取することによ
   って得られる油脂である請求項１〜４のいずれかに記載
   の油脂。
6. 【請求項６】 培養する微生物がシゾキトリウム属ＳＲ
   ２１株または該ＳＲ２１株と同一の種に属すると認めら
   れる微生物である請求項５に記載の油脂。
7. 【請求項７】 培養する微生物がシゾキトリウム属ＳＲ
   ２１株である請求項６に記載の油脂。
8. 【請求項８】 油脂が、微生物の培養物から採取するこ
   とによって得られる油脂を精製して得られる油脂である
   請求項５〜７のいずれかに記載の油脂。
9. 【請求項９】 油脂が、菌体培養によって油脂を製造す
   る途中の培養液もしくはその殺菌した培養液、または培
   養終了時の培養液もしくはその殺菌した培養液、または
   それぞれから集菌した培養菌体もしくはその乾燥物、ま
   たは培養液もしくは菌体から該油脂を採取した後の残渣
   に含まれるものであることを特徴とする請求項５〜７の
   いずれかに記載の油脂。
10. 【請求項１０】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有することを特徴とする栄養補助食品。
11. 【請求項１１】 油脂をゼラチンカプセルに封入して成
    ることを特徴とする請求項１０に記載の栄養補助食品。
12. 【請求項１２】 栄養補助食品が、ドリンク剤または顆
    粒剤もしくは錠剤の形態を有する飲食品であることを特
    徴とする請求項１０に記載の栄養補助食品。
13. 【請求項１３】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する乳児用調製乳。
14. 【請求項１４】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する未熟児用調製乳。
15. 【請求項１５】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する幼児用食品。
16. 【請求項１６】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する妊産婦用食品。
17. 【請求項１７】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する老人用食品。
18. 【請求項１８】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する経腸栄養剤。
19. 【請求項１９】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する動物用飼料。
20. 【請求項２０】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する動物用飼料添加物。
21. 【請求項２１】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を含有する微小餌料生物用餌料。
22. 【請求項２２】 請求項１〜９のいずれかに記載の油脂
    を与えて飼育することにより得られる家禽卵。
23. 【請求項２３】 (ｎ-６)系ドコサペンタエン酸の生産
    能を有するシゾキトリウム属ＳＲ２１株(ＦＥＲＭ ＢＰ
    −５０３４)または該ＳＲ２１株と同一の種に属するか
    もしくは実質的に同一の菌学的性質を有する微生物を培
    地中で培養し、培養物から油脂を採取することを特徴と
    する、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸含有油脂の製造方
    法。
24. 【請求項２４】 培養する微生物がシゾキトリウム属Ｓ
    Ｒ２１株または該ＳＲ２１株と同一の種に属すると認め
    られる微生物である請求項２３に記載の製造方法。
25. 【請求項２５】 培養する微生物がシゾキトリウム属Ｓ
    Ｒ２１株である請求項２４に記載の製造方法。
26. 【請求項２６】 請求項２３〜２５のいずれかに記載の
    方法によって得た(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸含有油
    脂から(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸を単離することを
    特徴とする、(ｎ-６)系ドコサペンタエン酸の製造方法。