JPH10505325A - 治療剤としてのｔ細胞に対する抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は治療剤としてのＴ細胞に対する抗体に関連する。本発明の目的は、抗抗体の形成を回避しつつ免疫抑制抗体の効果を持続させるための臨床治療のための抗体を提供することである。この目的は、少なくとも２つの異なる群からなる抗体を提供することにより達成される。これらの抗体の群は異なる時間に適用され、そしてＢ群の少なくとも１つの抗体は、その重鎖の定常領域においてＡ群の１つの抗体と異なり、そして群Ａは、最初に１回または数回適用され、Ｔ細胞除去効果を有し、一方他の群Ｂ(これは異なる時間に適用される)は、Ｔ細胞除去効果および/またはＴ細胞抗原調節効果を有する。

Description

【発明の詳細な説明】 治療剤としてのＴ細胞に対する抗体 本発明は、延長された免疫抑制および腫瘍細胞除去のための治療剤としてのＴ 細胞に対する抗体に関する。 移植片拒絶は、免疫抑制剤(例えば、マウス、ラットまたはゴールデンハムス ターから産生される、ヒトＴリンパ球に対する免疫抑制モノクローナル抗体)を 用いて処置される。しかし、これらの効果は、別の動物種に由来する抗体タンパ ク質に対して患者が惹起する免疫反応により制限される。これにより、注射され た抗体の免疫抑制効果を阻害するいわゆる抗抗体(antiantibody)が生じる。従っ て、現在では、例えば、腎臓移植患者の拒絶急性発症(rejection crises)は、通 常、１回の単一の抗体治療のみによって処置される。別の拒絶発症が起こる場合 には、抗抗体の形成の可能性のため、この処置は通常反復されない。 今日まで、抗抗体の形成を回避しつつ、抗体の免疫抑制効果を延長させるため の適切な臨床的療法は存在しなかった。別のモノクローナル抗体を用いる繰り返 し処置はまた、おそらく加速された抗抗体の形成を導く[1]。患者はまた、遺伝 子工学法を適用してヒト化された(すなわち、実質的に、患者の「霊長類種」に 適応されたかまたは「種適応化」された)免疫抑制抗体に対する抗体を惹起する[ 2]。 実験的に、皮膚移植片の明確な生存時間の延長がマウスモデルにおいて見出さ れた。これはまさしくトレランス誘導と考えられた。これは、マウスＴ(L3T4＋L yt-2)細胞を指向するラット抗体のペアおよびそれに続く同一種および同一の細 胞結合特異性の抗体のペア(しかし、マウスの血流からのＴ細胞の除去の低さ(＝ 「非涸渇(non-depleting)」すなわち、抗体のペアを除去する))において第１の 抗体ペアと異なる高用量の注射後に観察された。本発明と異なり、記載される作 用の原理は、種が異なるFc領域を有する少なくとも２つの抗体の併用治療に基づ いていない[3]。皮膚移植片の延長された生存時間および抗抗体の形成の非存在 が、さらに、ラット抗マウスＴ(L3T4＝CD4＋リンパ球サブ集団)細胞抗体の注射 およびそれに続くハムスター抗マウスＴ(CD3)モノクローナル抗体の(Fab')2フラ グメントおよび非フラグメント化ハムスター抗マウスＴ(CD3)モノクローナル抗 体の注射の後にさらに見出された[4]。ここでもまた、記載される作用の原理は 、本発明のように全てのＴ細胞を指向する、種が異なる(species-different)Fc 領域を有する２つの抗体の併用治療に基づいておらず、むしろ第１の抗体により 達成されるCD4＋Ｔリンパ球サブ集団の抑制に基づいているが、これは十分では ない[5]。 危険性を有する異なる方法により、皮膚移植片の永続的なトレランスが、皮膚 移植片のドナーの骨髄の移植後の放射線で治療された(irradiated)マウスにおい て達成され得、かつ抗Ｔ細胞抗体が保護される[6]。 今日まで、従来のポリクローナルまたはモノクローナル免疫抑制抗体の場合、 患者における抗抗体の形成を明らかに妨げる適切な治療は存在しなかった。最近 遺伝子操作によりヒト化された抗体を用いる最初の臨床的実験(experience)は、 マウス免疫抑制抗マウスＴ細胞抗体を用いて示された[7]のと同様に、抗抗体が 形成され得ることを示す[2]。 化学療法(例えば、シクロホスファミドまたはブスルファン)との免疫抑制抗体 処置の併用は、化学療法薬剤の細胞特異性の欠如により、特に造血および移植組 織における副作用の危険を含む[3,8]。 本発明の目的は、抗抗体の形成を回避しつつ免疫抑制抗体の効果を延長させる ための臨床治療用の抗体を提供することである。 この目的は請求項１の特徴により達成される。 従属する請求項は本発明の有利な実施態様を記載する。 抗体の２つの群であるＡ、Ｂの各々はまた、１つのみのタイプの抗体または数 種類の抗体から構成され得る。Ａ群、Ｂ群はまた、モノクローナル抗体またはポ リクローナル抗体であり得る。分子生物学的手段を適用して部分的にまたは完全 にヒト化された抗Ｔ細胞抗体、および本明細書で記載される、非ヒト化抗体(ま たは異なる種から産生される少なくとも２つの抗Ｔ細胞抗体)を用いる連続処置 は、免疫抑制の延長および腫瘍細胞抑制を導く。これは動物で実験的に試験され た処置原理であり、そしていまだかつて記載されていない。 他の著者によりいまでかつて見出されておらず、そして/または公表されてい ない本発明の新規な治療原理は、免疫学の見地から全く自明でない。一般的に、 医学研究の分野の免疫学者または専門家は、例えばマウス由来の免疫抑制モノク ローナル抗体の遺伝子操作によるヒト化により、患者が抗Ｔ細胞抗体をより寛容 し得るように、患者の抗体免疫グロブリン構造に可能な限り抗Ｔ細胞抗体（これ は抗抗体の形成を引き起こす)を適応させる抗Ｔ細胞抗体の免疫原性の低減を研 究している。しかし、原理的にこの適応はおそらく完全ではあり得ず、そして抗 抗体形成の原因となる。なぜなら、免疫抑制抗体のＴ細胞結合(Ｖ)領域は非常に 可変性であり、その結果、患者の免疫機構が依然として免疫抑制抗体に対する抗 抗体を形成し得るからである。 本発明はむしろ対照的な実験、すなわち高度に種が異なる抗Ｔ細胞抗体を作製 することによる抗抗体の抑制に基づく。これらの抗体の１つまたは両方は、単独 で適用された場合には、抗体のレシピエントにおいて潜在的に免疫原性であり得 る。 以下のことを見出した。 a)皮膚移植片の生存時間は、基本的に、２つの異なるマウス抗マウスＴ細胞抗体 （または２つのラット抗マウスＴ細胞抗体）を次々に適用することではなく、互 いに種が異なるが必ずしも抗体のレシピエントに対して種が異ならない２つの抗 体が、明白な延長された免疫抑制を導くという事実により延長された。 b)２つの抗体は、それらがヒトおよびマウスのように互いに異なる場合でさえ効 果的である。 これらの考察、結果、および抗体の組み合わせにより、ただちに臨床的に試験 され得、そして任意のさらなる処置の危険性に患者を曝さないという利点をとり わけ提供する治療モデルが定められる。免疫抑制の延長は、器官移植片の拒絶急 性発症および骨髄移植による免疫合併症(immuno complication)に対してより好 ましい治療法あるだけでなく、予防的処置によりそれらを完全に防止するのを援 助するはずである。さらに、自己免疫疾患、全ての種のリウマチの慢性疾患およ び個々の腫瘍の病態に、新規の治療の展望が開け得る。例えば、マウスに移植さ れたマウスまたはヒトＴ細胞白血病の抑制における本発明者らにより実施された マウスモデル研究において、抗体注射に起因する延長された生存時間が示され ている。Ｔ細胞枯渇において、外来免疫コンピテント細胞が、キメラマウス（す なわち、骨髄を移植され、そして白血病を患うマウス）に導入され得る。この外 来免疫コンピテント細胞は、レシピエントにおける新生物細胞を攻撃する。さら に、b）以下に記載される異種血清タンパク質に対するトレランス誘導は、過敏 反応（例えば、破傷風）を起こさないと考えられる異なる種の抗体を用いる受動 的なワクチン接種を可能にする。 マウスの皮膚移植片モデルにおいて、遺伝子工学法によりヒト化されたモノク ローナル免疫抑制抗体は、その適用の前にモノクローナル免疫抑制マウス抗体の １回以上の注射が先に行われた場合、何倍も（by a multitude）延長されるマウ スＴリンパ球に対する移植片の生存時間を達成することが示され得る。このよう な先行する抗体注射は、移植片の延長の意図において、免疫抑制的である必要は なかった。この抗体治療が、異種、ヒト血清タンパク質に対する完全なトレラン スを誘導し、そしてこのトレランスは免疫抑制治療の終了の５ヶ月後に依然とし て継続することが判明した。このように、免疫抑制効果の予測されない延長は、 異種抗体免疫グロブリンのトレランスにより処置マウスにおいて抗抗体が形成さ れなかったことを伴った。この現象の基礎をなす作用の原理は、併用される抗体 のFc領域における種に関連した差異に関して特に分析される。それらの種が互い に異なる場合には、抗Ｔ細胞抗体が分子生物学的に改変されていない場合にも効 果的であることを証明した。 抗体は、抗体結合部位を含むいわゆる可変領域、および抗体エフェクター機能 (例えば、この系からの抗体により占有される身体の細胞の除去)を仲介するいわ ゆる定常Fc領域を有する。定常Fc領域は、抗体のＨ鎖のいわゆる定常領域に位置 する。このように、２つの抗体は、例えば、ヒトＴリンパ球を結合する特異性に 関して類似し得る。しかし、同じ細胞結合特異性を有するこのような抗体は、そ れらが、異なる通常の動物種または分子生物学的に操作された動物種に由来する という事実に起因して、Fc領域において異なり得る。それらはまた、ヒトと齧歯 類との間に存在する程度の差異、および本発明に記載されるような差異が得られ るように抗体分泌細胞（例えば、ハイブリドーマまたはハイブリッドハイブリド ーマ）を作製する際に、分子生物学の方法を用いてFc領域においてインビトロ で改変され得る。 以下では、本発明は、３つの実施例に基づいて、そして図を用いて、より詳細 に記載される。 図１、２、および３はそれぞれ、実施例Ａ、Ｂ、およびＣの説明図の形態での 試験報告を示す。 図１（実施例Ａ）は、最大の免疫不適合性の齧歯類皮膚移植モデルにおいて測 定された約10倍に延長された免疫抑制を示す。これは、Fc領域不適合性抗体併用 処置により達成された。MmT1/T23抗体処置において、マウス抗マウスＴ細胞抗体 （MmT1[7]）の注射を最初に適用し、続いてT23抗体を１週間に２回適用した。T2 3抗体は、遺伝子工学によって達成されたマウスIGg1Fc領域のヒトIgG1 Fc領域へ の交換によりMmT1と異なる。MmT1の単回の投与は、（平均）皮膚生存期間を延長 しなかった。T23単独の週に２回の適用は、皮膚生存期間を16から24日に９日間 延長した。MmT1（最初に投与される）、それに続くT23（週に２回投与される） は、皮膚生存期間を90日より多くに延長した。同様の増加した免疫抑制はまた、 MmT5[7]によるMmT1の置換の後に達成される。MmT5[7]は、Ｔ細胞特異性において MmT1と異ならないが、抗体結合部位のミクロ構造において異なる（イディオタイ プ）。これは、Fc領域不適合性抗体併用治療において、抗体結合部位の類似およ び差異は、作用原理のための前提条件ではないが、Fc領域を取り込むＨ鎖の種に よる差異が前提条件であるという結論を生じる。 図２(実施例Ｂ)は、Thy-1特異性[9]およびさらに抗CD4および抗CD8(２つのＴ 細胞サブ集団、これらの抗体は、ともに全てのＴ細胞に結合する)のような特定 の臨床に関連する抗体特異性を有するラット抗マウスＴ細胞抗体もまた、MmT1/R mCD4+CD8併用における１回用量のMmT1のプレ注射により、皮膚移植片の平均生存 期間を延長することを示す。さらに、RmCD4+CD8/MmT1併用における、順序が逆転 した併用抗体処置もまた、MmT1の免疫抑制の延長を導くことが示される。何故な ら、ここでも、Fc領域の種による差異の前提条件が満たされるからである。抗CD 4＋CD8は、第１の抗体として活性であるので、これは、MmT1に限定されたプレ注 射された第１の抗体の効果を排除する。対照的に、これらの種によるFc領域の差 異の相乗的な抗体作用に関する前提条件は、(異なる時間での少なくとも２ つの抗体の適用は別として)繰り返し適用される。継続する抗体治療を伴う皮膚 移植片の生存は、さらなるＴ細胞枯渇および/またはＴ細胞レセプター調節（抗C D3）抗体が、第２の抗体に添加される場合、最終的には永続的になる。 図３(実施例Ｃ)は、ラット/マウスまたはマウス/ラットFc領域不適合性抗体併 用処置が、抗抗体形成の高度な抑制または抗抗体の形成の完全な欠如を導くこと を示すために実施例Ｂを用いる。同様のことが実施例Ａに適用される。 抗抗体はまた、例えば、ウサギリンパ球、ラットリンパ球、またはウマリンパ 球の免疫化の後に生じるポリクローナル抗体での処置においても生じる。ここで もまた、いわゆる２重特異性抗体(すなわち、２つの異なる結合部位を有する抗 体)または低分子化合物(例えば、DNP、TNPハプテン)の導入により化学的に改変 された抗Ｔ細胞抗体あるいは遺伝子工学(例えば、細菌において調製された抗体 および抗体フラグメント)による抗Ｔ細胞抗体の場合と同様に、ポリクローナル 抗体の種の差異(例えばウサギ/ラット)が、マウスにおいて延長された免疫抑制 を導くことが理解され得る。ここでもまた、連続的に注射された抗Ｔ細胞抗体は 、抗抗体の形成を中和し得、種が異なるポリクローナル抗体または２重特異性抗 体または化学的に改変された抗体または分子生物学的に改変された抗体を形成す る。前提条件は、常に、種の差異または化学化合物の導入(結合)のどちらかに起 因する、連続的に適用される抗体または抗体群の強い差異である。 最後に、タンパク質過敏性またはプレ感作患者における、抗体を用いた受動的 な免疫化の場合、所望されない免疫反応がまた起こり得る。ここで、予防処置は 、Fc-領域不適合性抗体併用治療により抗抗体の形成を防止する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．Ｔ細胞に対する少なくとも２つの異なる抗体の群であるＡ、Ｂを別々に含む 、延長された免疫抑制および腫瘍細胞除去のための薬剤であって、ここでＢ群の 少なくとも１つの抗体のタイプは、重鎖の定常領域においてＡ群の少なくとも１ つの抗体のタイプと異なる種であり、従って異なる動物種に属し、そしてここで 最初に１回または数回適用されるＡ群は、Ｔ細胞除去効果を有し、一方、異なる 時間に適用される他方のＢ群は、Ｔ細胞除去効果および/またはＴ細胞抗原調節 効果を有する、薬剤。 ２．Ｂ群の１つの抗体のタイプが二重特異性であることを特徴とする、請求項１ に記載の薬剤。 ３．１つの動物種がヒトであることを特徴とする、請求項１または２に記載の薬 剤。 ４．Ａ群、Ｂ群の１方の１つの抗体のタイプが、その重鎖の定常領域において、 遺伝子工学により他方の群の１つの抗体のタイプに比べて改変されていることを 特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の薬剤。 ５．前記抗体がヒト化されていることを特徴とする、請求項４に記載の薬剤。 ６．Ａ群、Ｂ群の一方の１つの抗体のタイプが、その重鎖の定常領域において、 化学的化合物の導入により、他方の群の１つの抗体のタイプと比べて改変されて いる(例えばDNP-ハプテン化されている)ことを特徴とする、請求項１〜５のいず れかに記載の薬剤。 ７．Ａ群、Ｂ群の少なくとも一方がポリクローナル抗体を含むことを特徴とする 、請求項１〜６のいずれかに記載の薬剤。 ８．Ａ群、Ｂ群の少なくとも一方がモノクローナル抗体を含むことを特徴とする 、請求項１〜６のいずれかに記載の薬剤。 ９．Ｔ細胞に対する少なくとも２つの異なる抗体の群であるＡ、Ｂの使用であっ て、ここでＢ群の少なくとも１つの抗体のタイプは、その重鎖の定常領域におい てＡ群の少なくとも１つの抗体のタイプと種が異なり、そしてここでＡ群はＴ細 胞除去効果を有し、一方、他方のＢ群はＴ細胞除去効果および/またはＴ細胞抗 原調節効果を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の薬剤を調製するための、 使用。 １０．延長された免疫抑制のための方法であって、請求項１〜８のいずれかに記 載の薬剤が、前記Ａ群の抗体が最初に１回または数回適用され、次いで前記Ｂ群 の抗体が一定の時間の後にさらに適用されるように患者に投与されることを特徴 とする、方法。 １１．腫瘍細胞を除去するための方法であって、請求項１〜８にいずれかに記載 の薬剤が、前記Ａ群の抗体が最初に１回または数回適用され、次いで前記Ｂ群の 抗体が一定の時間の後にさらに適用されるように患者に投与されることを特徴と する、方法。