JPH1045789A - New physiologically active substance na16887, its production and use thereof - Google Patents
New physiologically active substance na16887, its production and use thereofInfo
- Publication number
- JPH1045789A JPH1045789A JP8215959A JP21595996A JPH1045789A JP H1045789 A JPH1045789 A JP H1045789A JP 8215959 A JP8215959 A JP 8215959A JP 21595996 A JP21595996 A JP 21595996A JP H1045789 A JPH1045789 A JP H1045789A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- active substance
- physiologically active
- reagent
- novel
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は新規生理活性物質Ｎ
Ａ１６８８７及びそれらの塩、その製造法、それを有効
成分とする医薬、制癌剤並びに抗菌剤、およびその生産
菌に関する。The present invention relates to a novel physiologically active substance N
A16887 and a salt thereof, a method for producing the same, a medicament, an anticancer agent and an antibacterial agent containing the same as an active ingredient, and a microorganism producing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】従来、制癌剤としては、アドリアマイシ
ン、アクチノマイシン等が使用されている。抗菌剤とし
てはストレプトマイシン、カナマイシン等が使用されて
いる。2. Description of the Related Art Conventionally, adriamycin, actinomycin and the like have been used as anticancer agents. Streptomycin, kanamycin and the like have been used as antibacterial agents.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】従来、使用されている
制癌剤および抗菌剤は効力、毒性などの点で不十分であ
り、また耐性などの問題もあり、新しい制癌剤および抗
菌剤が求められている。Conventionally, anticancer and antibacterial agents which have been used are insufficient in efficacy and toxicity, and there are also problems such as resistance. Therefore, new anticancer agents and antibacterial agents are required. .
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】そこで発明者らは微生物
の代謝産物について種々検索した結果、アクチノマジュ
ラ属に属する一菌株が新規生理活性物質ＮＡ１６８８７
を産生すること及び該生理活性物質が優れた制癌活性お
よび抗菌活性を有することを見出した。本発明は上記知
見に基づいて完成されたものである。即ち本発明は新規
生理活性物質ＮＡ１６８８７及びそれらの塩に関するも
のである。更に、本発明は、アクチノマジュラ属に属し
新規生理活性物質ＮＡ１６８８７を生産する能力を有す
る微生物を培養し、培養物中に新規生理活性物質ＮＡ１
６８８７を生産、蓄積せしめ、次いでこれを採取する事
を特徴とする新規生理活性物質ＮＡ１６８８７及びそれ
らの塩の製造法に関するものである。更に、本発明は、
新規生理活性物質ＮＡ１６８８７又はそれらの塩を有効
成分として含有する医薬に関するものである。更に、本
発明は、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７又はそれらの
塩を有効成分として含有する制癌剤に関するものであ
る。更に、本発明は、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７
又はそれらの塩を有効成分として含有する抗菌剤に関す
るものである。更に、本発明は、アクチノマジュラ属に
属し新規生理活性物質ＮＡ１６８８７を生産する能力を
有する「ＮＡ １６８８７」株（生命工学工業技術研究
所受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５４００) 又はその変異株
に関するものである。The inventors of the present invention have conducted various searches for metabolites of microorganisms and found that one strain belonging to the genus Actinomadura belongs to the novel physiologically active substance NA16887.
And that the bioactive substance has excellent anticancer and antibacterial activities. The present invention has been completed based on the above findings. That is, the present invention relates to a novel physiologically active substance NA16887 and salts thereof. Further, the present invention provides a method for culturing a microorganism belonging to the genus Actinomadura and having the ability to produce a novel physiologically active substance NA16887, and adding the novel physiologically active substance NA1 to the culture.
The present invention relates to a method for producing a novel physiologically active substance NA16887 and a salt thereof, characterized in that 68687 is produced, accumulated, and then collected. Further, the present invention provides
The present invention relates to a medicine containing a novel physiologically active substance NA16887 or a salt thereof as an active ingredient. Furthermore, the present invention relates to an anticancer drug containing the novel physiologically active substance NA16887 or a salt thereof as an active ingredient. Further, the present invention relates to a novel bioactive substance NA16887.
Or an antibacterial agent containing a salt thereof as an active ingredient. Furthermore, the present invention relates to a strain “NA 16887” belonging to the genus Actinomadura and capable of producing a novel physiologically active substance NA16887 (Accession No. FERM P-15400 of the Institute of Biotechnology and Industrial Technology) or a mutant thereof. .
【０００５】以下に新規生理活性物質ＮＡ１６８８７の
理化学的性質を示す。 １）外観：無色粉末 ２）融点：２３２〜２３８℃（decomp） ３）分子量：1563 ４）FAB-MS：1564[M+H] + 、1562[M-H] - ５）溶解性： 可溶：クロロホルム、メタノール、アセトン、ジメチル
スルホキシド 不溶：水、ヘキサン ６）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ク
ロロホルム−メタノール（６：１）の展開溶媒で０．５
を示す。 ７）紫外部吸収スペクトル：メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ８）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 １０）水素核磁気共鳴スペクトル（300MHz）：重水素化
ジメチルスルホキシド中で測定したスペクトルを図３に
示す。 １１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz ）：重水素化
ジメチルホルムアミド中で測定したスペクトルを図４に
示す。 １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、グリシン、
アラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、セリン、
トリプトファン（1:4:1:3:1:1:1) が存在する。 １３）呈色反応： 陽性：ヨウ素、ライドン−スミス試薬、ヴァン−ウルク
試薬、リンモリブデン試薬 陰性：ニンヒドリン 本発明の新規生理活性物質ＮＡ１６８８７はアルカリま
たは酸と塩を形成していてもよく、かかる塩としては、
ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；カルシウム
などのアルカリ土類金属等との塩があげられる。また、
酸としては塩酸や硫酸などの鉱酸のほか、酢酸、ギ酸や
クエン酸などの有機酸との塩があげられる。The physicochemical properties of the novel physiologically active substance NA16887 are shown below. 1) Appearance: colorless powder 2) Melting point: 232 to 238 ° C. (decomp) 3) Molecular weight: 1563 4) FAB-MS: 1564 [M + H] + , 1562 [MH] − 5) Solubility: Soluble: chloroform , Methanol, acetone, dimethyl sulfoxide Insoluble: water, hexane 6) Rf value by silica gel thin layer chromatography: 0.5 with a developing solvent of chloroform-methanol (6: 1).
Is shown. 7) Ultraviolet absorption spectrum: FIG. 1 shows a spectrum measured in methanol. 8) Infrared absorption spectrum: FIG. 2 shows a spectrum measured with a potassium bromide tablet. 10) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (300 MHz): FIG. 3 shows the spectrum measured in deuterated dimethyl sulfoxide. 11) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum (75 MHz): FIG. 4 shows the spectrum measured in deuterated dimethylformamide. 12) Amino acid analysis: As a result of amino acid analysis, glycine,
Alanine, valine, isoleucine, proline, serine,
Tryptophan (1: 4: 1: 3: 1: 1: 1) is present. 13) Color reaction: Positive: iodine, Rydon-Smith reagent, Van-Urk reagent, phosphomolybdenum reagent Negative: ninhydrin The novel physiologically active substance NA16887 of the present invention may form a salt with an alkali or an acid, and such a salt may be used. as,
Salts with alkali metals such as sodium and potassium; and alkaline earth metals such as calcium. Also,
Examples of the acid include mineral acids such as hydrochloric acid and sulfuric acid, and salts with organic acids such as acetic acid, formic acid and citric acid.
【０００６】[0006]
【発明の実施の形態】上記新規生理活性物質ＮＡ１６８
８７はアクチノマジュラ属に属するＮＡ１６８８７生産
菌を培養し、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７を生成蓄
積せしめ、この培養物より新規生理活性物質ＮＡ１６８
８７を採取することにより得られる。新規生理活性物質
ＮＡ１６８８７の生産菌の代表的な一例であるアクチノ
マジュラ エスピー（Actinomadura sp.）ＮＡ １６８
８７は次の菌学的性質を有する。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The above-mentioned novel physiologically active substance NA168
No. 87 cultivates a NA16887-producing bacterium belonging to the genus Actinomadura to produce and accumulate a new bioactive substance NA16887, and from this culture, obtains a new bioactive substance NA168
87 is obtained. Actinomadura sp. NA 168, which is a typical example of a bacterium producing a novel physiologically active substance NA16887.
87 has the following mycological properties:
【０００７】１．形態的性質 ２７℃で２週間培養後に観察した結果、顕微鏡下で分枝
した基中菌糸より気菌糸を形成する。その先端はループ
状あるいは、らせん状である。また、輪生枝の形成及び
遊走子も認められないが、偽胞子のうを認める。胞子表
面は平滑または粗面で、胞子は卵型で、大きさ0.6〜0.8
×1.0 〜1.2 μｍである。また、5個以上の連鎖をなし
て胞子が形成される。[0007] 1. Morphological properties As a result of observation after culturing at 27 ° C. for 2 weeks, aerial hyphae are formed from the basic mycelium branched under a microscope. Its tip is loop-shaped or spiral-shaped. In addition, the formation of rotifers and zoospores are not observed, but pseudospores are observed. Spore surface is smooth or rough, spores are ovoid, 0.6-0.8 in size
× 1.0 to 1.2 μm. In addition, spores are formed in a chain of 5 or more.
【０００８】２．各種培地における生育 各種培地での、２７℃、２週間培養後の生育状態を下記
表１に示す。[0008] 2. Growth in various media Table 1 below shows the growth status after culturing at 27 ° C for 2 weeks in various media.
【０００９】[0009]
【表１】 [Table 1]
【００１０】３．生理学的性質 1 生育適度範囲 ： ２７〜３２℃ 2 硝酸塩の還元 ： 陽性 3 ゼラチンの液化（単純ゼラチン培地上、２０℃）：
陽性 4 スタ−チの加水分解（スタ−チ・無機塩寒天培
地）： 陽性 5 脱脂牛乳の凝固 ： 陰性 6 脱脂牛乳のペプトン化 ： 陽性 7 メラニン様色素の生成 ： 陰性[0010] 3. Physiological properties 1 Moderate growth range: 27-32 ° C 2 Reduction of nitrate: Positive 3 Liquefaction of gelatin (at 20 ° C on simple gelatin medium):
Positive 4 Starch hydrolysis (starch / inorganic salt agar medium): Positive 5 Coagulation of skim milk: Negative 6 Peptoneization of skim milk: Positive 7 Melanin-like pigment formation: Negative
【００１１】４．炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリ
−ブ寒天培地上） Ｌ−アラビノ−ス − Ｄ−キシロ−ス ＋ Ｄ−グルコ−ス ＋ Ｄ−フラクト−ス ＋ シュクロ−ス ＋ イノシト−ル ＋ Ｌ−ラムノ−ス − ラフィノ−ス − Ｄ−マンニト−ル −4. Utilization of carbon source (on Prideham-Godrib agar medium) L-arabinose-D-xylose + D-glucose + D-fructoose + sucrose + inositol + L-rhamno -Surfinose-D-mannitol-
【００１２】５．細胞壁中のジアミノピメリン酸 meso−ジアミノピメリン酸である。以上を要約すると、
本菌株は細胞壁がmeso−ジアミノピメリン酸であり、ま
た、メナキノンの種類は、MK-9(H4) が主である。全菌
体中の還元糖中にマジュロースを含んでいる。気中菌糸
は白色系統で、気菌糸の先端はループ及びらせん状で、
数個の胞子鎖を形成し、メラニン様色素は生産しない。
各種培地中にほとんど色素を生産しない。また、基生菌
糸の色は淡黄色あるいはうす黄茶を呈する。炭素源とし
てはＤ−キシロース、Ｄ−グルコ−ス、Ｄ−フラクトー
ス、シュクロース、イノシトールを利用し、Ｌ−アラビ
ノ−ス、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニト
ールを利用しない。5. Diaminopimelic acid in the cell wall meso-diaminopimelic acid. To summarize the above,
In this strain, the cell wall is meso-diaminopimelic acid, and the main type of menaquinone is MK-9 (H 4 ). Majurose is contained in reducing sugars in all cells. The aerial hyphae is a white strain, the tip of the aerial hyphae is loop and spiral,
It forms several spore chains and does not produce melanin-like pigments.
Almost no pigment is produced in various media. The color of the underlying mycelium is pale yellow or light yellow brown. As a carbon source, D-xylose, D-glucose, D-fructose, sucrose, and inositol are used, and L-arabinose, L-rhamnose, raffinose, and D-mannitol are not used.
【００１３】以上の性質をもとにバ−ジ−ズ・マニュア
ル・オブ・システィマティック・バクテリオロジ−（Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology）第４巻、
1989年及び放線菌の同定実験法（日本放線菌研究会編，
1985年）に従って検索を行った結果、上記ＮＡ １６８
８７株はアクチノマジュラ属に属することが判明した。
よって、本菌をアクチノマジュラ・エスピー（Actinoma
dura sp.）ＮＡ １６８８７と命名した。該菌株は、工
業技術院生命工学工業技術研究所によって平成８年１月
２３日付で受託され、受託番号、ＦＥＲＭ Ｐ−１５４
００が付与されている。[0013] Based on the above properties, the version of the manual of the systematic bacterology (Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology) Volume 4,
1989 and Actinomycetes identification experiment method (Japan Actinomycetes Study Group,
1985), and as a result, the above NA 168
87 strains were found to belong to the genus Actinomadura.
Therefore, this bacterium was transferred to Actinoma sp.
dura sp.) NA 16887. The strain was deposited on January 23, 1996 by the National Institute of Bioscience and Human-Technology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, and deposited under the accession number FERM P-154.
00 is assigned.
【００１４】本発明に用いるアクチノマジュラ属に属す
る菌株は他のアクチノマジュラ属の菌株と同様、その性
状が変化しやすく、例えば、紫外線、エックス線および
薬品などを用いる人工的な変異手段で容易に変異しうる
ものであり、どの様な変異株であっても本発明の対象と
する生理活性物質ＮＡ１６８８７の生産能を有するもの
は、すべて本発明に使用する事ができる。The strain belonging to the genus Actinomadura used in the present invention, like other strains of the genus Actinomadura, is liable to change in properties, and can be easily changed by artificial mutation using, for example, ultraviolet rays, X-rays and drugs. Any of the mutants having the ability to produce the physiologically active substance NA16887 of the present invention can be used in the present invention.
【００１５】本発明によりＮＡ１６８８７を製造するに
は、まず前記菌株を放線菌が利用し得る栄養物を含有す
る培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から
放線菌の培養に利用されている公知のものが使用でき、
例えば炭素源としてはグルコース、フラクトース、グリ
セリン、シュークロース、デキストリン、ガラクトー
ス、有機酸などを単独かまたは組み合わせて用いること
ができる。In order to produce NA16887 according to the present invention, the above strain is first aerobically cultured in a medium containing nutrients that can be used by actinomycetes. As the nutrient source, known ones conventionally used for cultivation of actinomycetes can be used,
For example, glucose, fructose, glycerin, sucrose, dextrin, galactose, organic acids, and the like can be used alone or in combination as a carbon source.
【００１６】無機および有機窒素源としては塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、ソリュブル・ベジタ
ブル・プロテイン、オートミールなどを単独または組み
合わせて用いることができる。The inorganic and organic nitrogen sources include ammonium chloride, ammonium sulfate, urea, ammonium nitrate,
Sodium nitrate, peptone, meat extract, yeast extract, dried yeast, corn steep liquor, soy flour, cottonseed oil scum, casamino acid, bactosoytone, soluble vegetable protein, oatmeal and the like can be used alone or in combination.
【００１７】その他必要に応じて食塩、炭酸カルシウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩
化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができ
るほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や無機物を適当に添加することができる。培養法として
は液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適している。
培養温度は通常15℃〜37℃、好ましくは20℃〜33℃、pH
は弱酸性ないし微アルカリ性で培養を行うことが望まし
い。In addition, if necessary, inorganic salts such as salt, calcium carbonate, magnesium sulfate, copper sulfate, iron sulfate, zinc sulfate, manganese chloride, phosphate and the like can be added, and organic substances such as amino acids, vitamins, and nucleic acids can be added. And inorganic substances can be appropriately added. The most suitable culture method is a liquid culture method, particularly a submerged stirring culture method.
Culture temperature is usually 15 ° C to 37 ° C, preferably 20 ° C to 33 ° C, pH
It is desirable that the culture be carried out under mildly acidic or slightly alkaline conditions.
【００１８】液体培養では通常３〜７日間培養を行うと
ＮＡ１６８８７物質が培養液中に生成蓄積される。培養
液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、ろ液
と菌体とに分離し、ろ液及び菌体より目的物を精製単離
する。ろ液及び菌体からの本物質の精製単離には一般に
微生物代謝産物を培養ろ液またはその菌体から単離する
ために、用いられる分離精製の方法が利用される。In liquid culture, NA16887 substances are usually produced and accumulated in the culture solution after culturing for 3 to 7 days. When the amount of production in the culture solution reaches the maximum, the culture is stopped, separated into a filtrate and cells, and the target substance is purified and isolated from the filtrate and cells. The purification and isolation of the substance from the filtrate and the cells generally employs a separation and purification method used to isolate a microbial metabolite from the culture filtrate or the cells.
【００１９】菌体からの分離精製の方法を例に挙げると
まず培養物をろ過法によりろ液と菌体とに分離する。菌
体を有機溶媒、例えばアセトンに浸漬し活性物質を抽出
する。活性物質を含む抽出液を減圧濃縮により有機溶媒
を溜去後、適当な溶媒、たとえば酢酸エチルで活性物質
を有機溶媒層に抽出することができる。As an example of a method for separation and purification from cells, a culture is first separated into a filtrate and cells by a filtration method. The cells are immersed in an organic solvent such as acetone to extract the active substance. After the organic solvent is distilled off from the extract containing the active substance by concentration under reduced pressure, the active substance can be extracted into the organic solvent layer with a suitable solvent, for example, ethyl acetate.
【００２０】上記の有機溶媒層を減圧濃縮し、ＮＡ１６
８８７を含む油状物質を得る。この粗物質はさらに脂溶
性物質の精製に通常用いられる公知の方法、例えば、
１）ゲル濾過剤として商品名Sephadex LH-20（Pharmaci
a Fine Chemicals AB ）または商品名Toyopearl HW-55F
（東ソー）を用い、溶出液としてメタノールまたはアセ
トン等の単一溶出やこれらの含水溶媒、あるいは酸性な
いしアルカリ性溶液を用いたゲルろ過クロマトグラフィ
ー； ２）吸着剤として商品名DIAION CHP-20 ( Mitsubishi C
hemical Industries）を用い、メタノールまたはアセト
ンの単一溶媒溶出やこれらの含水溶媒、または濃度勾配
溶出を用いた分配クロマトグラフィー； ３）吸着剤としてシリカゲルを用い各種有機溶媒の単独
またはこれらの適当な混合溶媒、さらに酢酸ないしギ酸
等の有機酸やトリエチルアミン等の有機アミンの添加さ
れた溶出溶媒を用いた吸着クロマトグラフィーによる精
製法； を単独あるいは組み合わせることにより精製する。精製
に好適な例として商品名DIAION CHP-20 を用いメタノー
ルを溶出溶媒としてクロマトグラフィーを行う。得られ
た活性画分を再び商品名DIAION CHP-20 で同じ条件でク
ロマトグラフィーを行う。得られた活性画分を商品名To
yopearl HW-55Fを用いてクロマトグラフィーを行い活性
画分を濃縮乾固してＮＡ１６８８７を無色粉末として得
ることができる。The above organic solvent layer is concentrated under reduced pressure,
An oil containing 887 is obtained. This crude substance can be further used in a known method commonly used for purifying a fat-soluble substance, for example,
1) Sephadex LH-20 (Pharmaci) as a gel filtration agent
a Fine Chemicals AB) or trade name Toyopearl HW-55F
(Tosoh), single-elution with methanol or acetone as eluent, or gel filtration chromatography using an aqueous or acidic or alkaline solution thereof; 2) DIAION CHP-20 (Mitsubishi C
Partitioning chromatography using methanol or acetone as a single solvent elution or a hydrated solvent thereof or a gradient elution using chemical industries); 3) Silica gel as an adsorbent, various organic solvents alone or an appropriate mixture thereof A purification method by adsorption chromatography using a solvent, and an elution solvent to which an organic acid such as acetic acid or formic acid or an organic amine such as triethylamine is added; Chromatography is performed using DIAION CHP-20 as a preferred example of purification using methanol as an eluent. The obtained active fraction is again subjected to chromatography under the same conditions under the trade name DIAION CHP-20. The obtained active fraction is trade name To
Chromatography is performed using yopearl HW-55F, and the active fraction is concentrated to dryness to obtain NA16887 as a colorless powder.
【００２１】本発明の新規生理活性物質ＮＡ１６８８７
及びそれらの塩は、制癌作用および抗菌作用を有するの
で、制癌剤および抗菌剤などの医薬として使用できる。
医薬品として使用する場合の製剤化のよび投与方法は従
来公知の種々の方法が適用できる。すなわち、投与方法
として注射、経口、直腸投与などが可能である。製剤形
態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、座剤などの
形態がとり得る。The novel physiologically active substance NA16887 of the present invention
And their salts have a carcinostatic action and an antibacterial action, and thus can be used as medicaments such as anticancer drugs and antibacterial agents.
Various known methods can be applied to the preparation and administration method when used as a pharmaceutical. That is, injection, oral, rectal administration and the like can be used as an administration method. The preparation may take the form of injections, powders, granules, tablets, suppositories and the like.
【００２２】製剤化の際に新規生理活性物質ＮＡ１６８
８７及びそれらの塩に悪影響を与えない限り、医薬用に
用いられる種々の補助剤、すなわち、担体やその他の助
剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳化剤が必要に
応じて使用されうる。製剤に於いて、新規生理活性物質
ＮＡ１６８８７及びそれらの塩の含量は製剤形態等によ
り広範囲にかえることが可能であり、一般には新規生理
活性物質ＮＡ１６８８７を0.01〜100%（重量）、好まし
くは、0.10〜70% （重量）含有し、残りは通常医薬用に
使用される担体その他補助剤からなる。[0022] In preparation, a new physiologically active substance NA168
Various adjuvants used for medicine, that is, carriers and other adjuvants such as stabilizers, preservatives, soothing agents, and emulsifiers are used as needed unless they adversely affect 87 and their salts. sell. In the preparation, the content of the novel physiologically active substance NA16887 and a salt thereof can be varied widely depending on the form of the preparation and the like. In general, the novel physiologically active substance NA16887 is added in an amount of 0.01 to 100% (weight), preferably 0.10%. 7070% (by weight), the balance consisting of carriers and other auxiliaries normally used for medicine.
【００２３】新規生理活性物質ＮＡ１６８８７及びそれ
らの塩の投与量は症状等により異なるが、成人１人１日
当たり0.01〜800mg 程度である。連投を必要とする場合
には１日当たり使用量を抑えることが望ましい。The dosage of the novel physiologically active substance NA16887 and salts thereof varies depending on the symptoms and the like, but is about 0.01 to 800 mg per adult per day. If continuous throwing is required, it is desirable to reduce the daily usage.
【００２４】[0024]
【実施例】以下本発明の実施例及び試験例を示すが、こ
れは単なる一例示であって何等本発明を限定するもので
はなく、種々の変法が可能である。EXAMPLES Examples and test examples of the present invention will be described below, but these are merely examples and do not limit the present invention in any way, and various modifications are possible.
【００２５】（１）発酵 ロータリー型振盪機用500ml 容三角フラスコに可溶性澱
粉（関東化学社製）2.0%、グルコース0.5%、イーストエ
キストラクト0.5%、アジプロンE3（味の素社製）0.5%、
炭酸カルシウム0.2%、リン酸一水素二カリウム0.05％、
硫酸マグネシウム・７水和物0.05％、の培地（pH 7.2）
100ml を分注し、120 ℃、20分間オートクレーブ滅菌し
た。これに新規生理活性物質生産菌ＮＡ １６８８７株
（FERM P-15400）の1 白金耳を接種し、25℃、220 回転
／分、４日間振盪し種培養とした。(1) Fermentation In a 500 ml Erlenmeyer flask for a rotary shaker, 2.0% soluble starch (manufactured by Kanto Kagaku), 0.5% glucose, 0.5% yeast extract, 0.5% adipron E3 (manufactured by Ajinomoto),
0.2% calcium carbonate, 0.05% dipotassium hydrogen phosphate,
Medium of magnesium sulfate heptahydrate 0.05% (pH 7.2)
100 ml was dispensed and autoclaved at 120 ° C for 20 minutes. One platinum loop of a new physiologically active substance-producing bacterium, NA 16887 (FERM P-15400) was inoculated into this, and shaked at 25 ° C., 220 rpm for 4 days to obtain seed culture.
【００２６】本培養はロータリー型振盪機用500ml 容三
角フラスコにグルコース1.0%、ガラクトース1.0%、コー
ンスチィープリカー1.0%、デキストリン（赤玉 No.3）
2.0%、ファーマメディア1.0%、炭酸カルシウム0.2%、硫
酸マグネシウム・７水和物0.05％、塩化コバルト・６水
和物0.0001％の培地（pH 7.0）100ml を分注し、120
℃、20分間オートクレーブ滅菌したフラスコに前記種培
養液１mlを移植し、25℃、220 回転／分の条件下で５日
振盪培養を行った。培養液を遠心ろ過し、ろ液と菌体と
に分別した。The main culture was carried out in a 500 ml Erlenmeyer flask for a rotary shaker with 1.0% glucose, 1.0% galactose, 1.0% corn steep liquor, dextrin (Akadama No. 3).
Dispense 100 ml of a medium (pH 7.0) containing 2.0%, Pharmamedia 1.0%, calcium carbonate 0.2%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05%, and cobalt chloride hexahydrate 0.0001%.
One ml of the seed culture was transferred to a flask autoclaved at 20 ° C. for 20 minutes, and cultured with shaking at 25 ° C. and 220 rpm for 5 days. The culture solution was subjected to centrifugal filtration, and separated into a filtrate and cells.
【００２７】（２）精製 新規生理活性物質ＮＡ１６８８７の活性画分の精製は抗
腫瘍活性を指標に次の通り行った。１０リットルの培養
液から得られた菌体をアセトン３リットルで２回抽出し
た。これを濃縮後、抽出液を酢酸エチル抽出を行い有機
層を水洗、無水硫酸ナトリウムで脱水処理後、濃縮し
た。粗抽出物を商品名DIAION CHP-20 に吸着しメタノー
ルで溶出を行い、活性画分を得た。活性画分を再び同じ
カラム、同じ条件で精製を行い活性画分を商品名Toyope
arl HW-55Fを用い、溶出液にメタノールを用いて精製を
行い新規生理活性物質ＮＡ１６８８７（17.8mg）の無色
粉末を得た。尚、培養液から得られたろ液についても、
上記酢酸エチル抽出以降の操作と同様にして目的の新規
生理活性物質を得ることができる。この新規生理活性物
質ＮＡ１６８８７について、赤外部吸収スペクトル、水
素核磁気共鳴スペクトル及び炭素核磁気共鳴スペクトル
を測定し、図１〜図４に示すスペクトルを得た。また、
この新規生理活性物質は、前記した通りの理化学的性質
を示した。(2) Purification The active fraction of the novel physiologically active substance NA16887 was purified using the antitumor activity as an index as follows. The cells obtained from the 10 liter culture were extracted twice with 3 liters of acetone. After concentration, the extract was extracted with ethyl acetate, the organic layer was washed with water, dehydrated with anhydrous sodium sulfate, and concentrated. The crude extract was adsorbed on DIAION CHP-20 (trade name) and eluted with methanol to obtain an active fraction. The active fraction is purified again under the same column and under the same conditions, and the active fraction is trade name Toyope
Purification was carried out using arl HW-55F and methanol as an eluent to obtain a colorless powder of a novel physiologically active substance NA16887 (17.8 mg). In addition, also about the filtrate obtained from the culture solution,
The desired new physiologically active substance can be obtained in the same manner as the above-mentioned operation after the extraction with ethyl acetate. The infrared absorption spectrum, hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum and carbon nuclear magnetic resonance spectrum of this novel physiologically active substance NA16887 were measured, and the spectra shown in FIGS. 1 to 4 were obtained. Also,
This novel physiologically active substance exhibited the physicochemical properties as described above.
【００２８】試験例１細胞増殖抑制活性の測定（ヒト卵巣癌細胞） 新規生理活性物質ＮＡ１６８８７のヒト卵巣癌細胞（A2
780 ）に対する増殖抑制活性を検討した。ヒト卵巣癌細
胞を 2×104 個/ml の割合で96穴テストプレートに 200
μl 接種し、37℃、5% CO 2 インキュベーター内で24時
間培養した後、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７を種々
の濃度で培養液に添加した。添加72時間後、生細胞数を
MTT 法（「癌と化学療法」（1980年）７号、P.1952〜19
58「制癌剤感受性テストSDI の改良法」斉藤和子その
他）により測定し、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７の
種々の濃度におけるヒト卵巣癌細胞の増殖抑制率を求め
た。結果を表２に示した。Test Example 1 Measurement of Cell Growth Inhibitory Activity (Human Ovarian Cancer Cell) Human ovarian cancer cell (A2
780). Human ovarian cancer cells were placed in a 96-well test plate at a rate of 2 × 10 4 cells / ml.
After inoculating μl and culturing in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 24 hours, a novel physiologically active substance NA16887 was added to the culture at various concentrations. 72 hours after the addition, the number of viable cells is counted.
MTT method ("Cancer and Chemotherapy" (1980) No. 7, P.1952-19
58, "Improvement method of anti-cancer drug susceptibility test SDI" by Kazuko Saito and others), and the growth inhibition rate of human ovarian cancer cells at various concentrations of the novel physiologically active substance NA16887 was determined. The results are shown in Table 2.
【００２９】[0029]
【表２】 ──────────────────────── 化合物 ヒト卵巣癌細胞 IC 50（μＭ) ──────────────────────── NA16887 0.03 ────────────────────────[Table 2] Compound Human ovarian cancer cell IC 50 (μM) ──────────── NA16887 0.03 ────────────────────────
【００３０】試験例２細胞増殖抑制活性の測定（ヒト大腸癌細胞） 新規生理活性物質ＮＡ１６８８７のヒト大腸癌細胞（SW
480 ）に対する増殖抑制活性を検討した。ヒト大腸癌細
胞を 10.0 ×104 個/ml の割合で96穴テストプレートに
200μl接種し、37℃、5% CO 2 インキュベーター内で2
4時間培養した後、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７を
種々の濃度で培養液に添加した。添加72時間後、生細胞
数をMTT 法により測定し、新規生理活性物質ＮＡ１６８
８７の種々の濃度におけるヒト大腸癌細胞の増殖抑制率
を求めた。結果を表３に示した。Test Example 2 Measurement of Cell Proliferation Inhibitory Activity (Human Colorectal Cancer Cells)
480). Human colon cancer cells at a density of 10.0 × 10 4 cells / ml in a 96-well test plate
Inoculate 200 μl and incubate 2 at 37 ° C, 5% CO 2 incubator
After culturing for 4 hours, the novel physiologically active substance NA16887 was added to the culture at various concentrations. 72 hours after the addition, the number of viable cells was measured by the MTT method, and a new bioactive substance NA168 was detected.
The growth inhibition rate of human colon cancer cells at 87 different concentrations was determined. The results are shown in Table 3.
【００３１】[0031]
【表３】 ──────────────────────── 化合物 ヒト大腸癌細胞 IC 50（μＭ) ──────────────────────── NA16887 0.05 ────────────────────────[Table 3] Compound Human colorectal cancer cell IC 50 (μM) ──────────── NA16887 0.05 ────────────────────────
【００３２】試験例３抗細菌活性の測定 新規生理活性物質ＮＡ１６８８７の抗細菌活性をペーパ
ーディスク−寒天拡散法によって検討した。新規生理活
性物質ＮＡ１６８８７を100 μｇ／ｍｌのメタノール溶
液に調製した。この溶液に直径８mmのペーパーディスク
を浸漬し取り出した。ペーパーディスクの溶媒が風乾し
た後、予め作成しておいた被検菌の懸濁液を含む寒天培
地上にペーパーディスクを置いた。３７℃、２４時間イ
ンキュベート後、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７によ
る生育阻止円の直径を計測した。それらの結果を表４に
示した。Test Example 3 Measurement of Antibacterial Activity The antibacterial activity of the novel physiologically active substance NA16887 was examined by a paper disk-agar diffusion method. A new physiologically active substance NA16887 was prepared in a methanol solution of 100 μg / ml. A paper disk having a diameter of 8 mm was immersed in the solution and taken out. After the solvent of the paper disk was air-dried, the paper disk was placed on an agar medium containing a suspension of a test bacterium prepared in advance. After incubation at 37 ° C. for 24 hours, the diameter of the growth inhibition circle by the novel physiologically active substance NA16887 was measured. Table 4 shows the results.
【００３３】[0033]
【表４】 ────────────────────────── 微生物 阻止円 (mm) ────────────────────────── Bacillus subtillis IFO-3007 １２ Staphylococcus aureus FAD 209 １１ ──────────────────────────[Table 4] 微生物 Microbial inhibition circle (mm) ────────────── ──────────── Bacillus subtillis IFO-3007 12 Staphylococcus aureus FAD 209 11 ──────────────────────────
【００３４】[0034]
【発明の効果】これらの表２、表３および表４に示した
様に、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７はヒト卵巣癌細
胞（A2780 ）およびヒト大腸癌細胞（SW480 ）に対して
強い増殖抑制活性を有し、制癌効果を示す。また細菌
（Bacillus subtillis, Staphylococcus aureus ）に対
して生育阻害活性を有し、抗菌効果を示す。上記のよう
に新規生理活性物質ＮＡ１６８８７は、制癌作用および
抗菌作用を有するので、制癌剤、抗菌剤などの医薬とし
て使用できる。As shown in Tables 2, 3 and 4, the novel physiologically active substance NA16887 has a strong growth inhibitory activity against human ovarian cancer cells (A2780) and human colon cancer cells (SW480). And has an anticancer effect. In addition, it has growth inhibitory activity against bacteria ( Bacillus subtillis , Staphylococcus aureus ) and exhibits an antibacterial effect. As described above, the novel physiologically active substance NA16887 has an anticancer effect and an antibacterial effect, and can be used as a drug such as an anticancer agent and an antibacterial agent.
【図１】ＮＡ１６８８７のメタノール中で測定した紫外
部吸収スペクトルFIG. 1. Ultraviolet absorption spectrum of NA16887 measured in methanol
【図２】ＮＡ１６８８７の臭化カリウム錠剤で測定した
赤外部吸収スペクトルFIG. 2: Infrared absorption spectrum measured with potassium bromide tablet of NA16887
【図３】ＮＡ１６８８７の重水素化ジメチルスルホキシ
ド中（300MHz）で測定した水素核磁気共鳴スペクトルFIG. 3. Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum of NA16887 measured in deuterated dimethyl sulfoxide (300 MHz)
【図４】ＮＡ１６８８７の重水素化ジメチルホルムアミ
ド中（75MHz ）で測定した炭素核磁気共鳴スペクトルFIG. 4: Carbon nuclear magnetic resonance spectrum of NA16887 measured in deuterated dimethylformamide (75 MHz).
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:03） (Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｒ 1:03） ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Agency reference number FI Technical display location // (C12N 1/20 C12R 1:03) (C12P 1/06 C12R 1:03)
Claims (6)
質ＮＡ１６８８７ １）外観：無色粉末 ２）融点：２３２〜２３８℃（decomp） ３）分子量：1563 ４）FAB-MS：1564[M+H] + 、1562[M-H] - ５）溶解性： 可溶：クロロホルム、メタノール、アセトン、ジメチル
スルホキシド 不溶：水、ヘキサン ６）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ク
ロロホルム−メタノール（６：１）の展開溶媒で０．５
を示す。 ７）紫外部吸収スペクトル：メタノール中で測定したス
ペクトルを図１に示す。 ８）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図２に示す。 １０）水素核磁気共鳴スペクトル（300MHz）：重水素化
ジメチルスルホキシド中で測定したスペクトルを図３に
示す。 １１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz ）：重水素化
ジメチルホルムアミド中で測定したスペクトルを図４に
示す。 １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、グリシン、
アラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、セリン、
トリプトファン（1:4:1:3:1:1:1 ）が存在する。 １３）呈色反応： 陽性：ヨウ素、ライドン−スミス試薬、ヴァン−ウルク
試薬、リンモリブデン試薬 陰性：ニンヒドリン1. New physiologically active substance NA16887 having the following physicochemical properties: 1) Appearance: colorless powder 2) Melting point: 232 to 238 ° C. (decomp) 3) Molecular weight: 1563 4) FAB-MS: 1564 [M + H ] +, 1562 [MH] - 5) solubility: soluble: chloroform, methanol, acetone, dimethyl sulfoxide insoluble: water, hexane 6) silica gel thin layer Rf value by chromatography: -: deployment 1) chloroform-methanol (6 0.5 in solvent
Is shown. 7) Ultraviolet absorption spectrum: FIG. 1 shows a spectrum measured in methanol. 8) Infrared absorption spectrum: FIG. 2 shows a spectrum measured with a potassium bromide tablet. 10) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (300 MHz): FIG. 3 shows the spectrum measured in deuterated dimethyl sulfoxide. 11) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum (75 MHz): FIG. 4 shows the spectrum measured in deuterated dimethylformamide. 12) Amino acid analysis: As a result of amino acid analysis, glycine,
Alanine, valine, isoleucine, proline, serine,
Tryptophan (1: 4: 1: 3: 1: 1: 1) is present. 13) Color reaction: Positive: iodine, Rydon-Smith reagent, Van-Urk reagent, phosphomolybdenum reagent Negative: ninhydrin
し、新規生理活性物質ＮＡ１６８８７を生産する能力を
有する微生物を培養し、培養物中に新規生理活性物質Ｎ
Ａ１６８８７を生産、蓄積せしめ、次いでこれを採取す
る事を特徴とする新規生理活性物質ＮＡ１６８８７及び
その塩の製造法。2. A microorganism belonging to the genus Actinomadura, which has the ability to produce a novel bioactive substance NA16887, is cultured, and a novel bioactive substance N is contained in the culture.
A method for producing a novel physiologically active substance NA16887 and a salt thereof, which comprises producing and accumulating A16887, and then collecting it.
塩を有効成分として含有する医薬。3. A medicament comprising the novel physiologically active substance NA16887 or a salt thereof as an active ingredient.
塩を有効成分として含有する制癌剤。4. An anticancer agent comprising the novel physiologically active substance NA16887 or a salt thereof as an active ingredient.
塩を有効成分として含有する抗菌剤。5. An antibacterial agent containing the novel physiologically active substance NA16887 or a salt thereof as an active ingredient.
し新規生理活性物質ＮＡ１６８８７を生産する能力を有
する「ＮＡ １６８８７」株（生命工学工業技術研究所
受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５４００) 又はその変異株。6. An "NA 16887" strain belonging to the genus Actinomadura and capable of producing a novel physiologically active substance NA16887 (Accession No. FERM P-15400, Institute of Biotechnology and Industrial Technology) or a mutant thereof.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8215959A JPH1045789A (en) | 1996-07-30 | 1996-07-30 | New physiologically active substance na16887, its production and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8215959A JPH1045789A (en) | 1996-07-30 | 1996-07-30 | New physiologically active substance na16887, its production and use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1045789A true JPH1045789A (en) | 1998-02-17 |
Family
ID=16681084
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8215959A Pending JPH1045789A (en) | 1996-07-30 | 1996-07-30 | New physiologically active substance na16887, its production and use thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1045789A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110283761A (en) * | 2019-08-01 | 2019-09-27 | 哈尔滨天齐人类第二基因组技术开发应用科技有限责任公司 | One plant has the active bacillus CCPM7647 of powerful anticancer and its application |
-
1996
- 1996-07-30 JP JP8215959A patent/JPH1045789A/en active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110283761A (en) * | 2019-08-01 | 2019-09-27 | 哈尔滨天齐人类第二基因组技术开发应用科技有限责任公司 | One plant has the active bacillus CCPM7647 of powerful anticancer and its application |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR0135600B1 (en) | Anticancer antibiotic mi43-37f11 | |
| JPH1045789A (en) | New physiologically active substance na16887, its production and use thereof | |
| WO1997001575A1 (en) | Substance wf16616, process for production thereof, and use thereof | |
| JPH10234396A (en) | Production of new antitumor agent and soyasapogenol b | |
| US4902781A (en) | Novel tripetide derivatives | |
| EP0399444B1 (en) | New carcinostatic or antitumor antibiotic, conagenin, and production and uses thereof | |
| JPH041179A (en) | Antitumor substance be-14106 | |
| JPH10147594A (en) | Antitumor substances be-43547s | |
| JP2594085B2 (en) | SF2575, a new antitumor antibiotic, and method for producing the same | |
| JPH08239379A (en) | Kr 2827 derivative as new substance, its production and use | |
| JP2718002B2 (en) | New strain Streptomyces lavendofolia DKRS and method for producing aclacinomycin A, B, Y and aglycone using the same | |
| JP3726920B2 (en) | Novel bioactive substances NA22598A1, A2, A3, A4 and A5, production method thereof and use thereof | |
| JPH05194571A (en) | New antibiotic nk374186a, nk374186b, nk374186b3 and nk374186c3, their production and their use | |
| JP2000086627A (en) | Antibacterial substance be-54476 and its production | |
| JPS623789A (en) | Antibiotic substance tokimycin a and production thereof | |
| JP2001046092A (en) | New physiologically active substance nk34944, its production and use thereof | |
| JPH11106344A (en) | New bioactive substance nf06307, its preparation and use | |
| WO1992022562A1 (en) | Substances wb2663, production thereof and use | |
| JPH0764851B2 (en) | Reveromycin B, C, and D, production method thereof, and antitumor agent and antifungal agent | |
| JPH0892119A (en) | Antitumor agent | |
| JPH1121263A (en) | Antitumor substance be-45985s | |
| JPH01265893A (en) | Novel substance k3619, use and production thereof | |
| JPH08176157A (en) | New physiologically active substance epostatin, its production and use | |
| JPH02221292A (en) | New substance 02-3, its use and production thereof | |
| JPH0259596A (en) | Novel substance, utilization and production thereof |