JPH1045602A - ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤またはインターロイキン−８産生阻害剤 - Google Patents
ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤またはインターロイキン−８産生阻害剤Info
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- JPH1045602A JPH1045602A JP20209896A JP20209896A JPH1045602A JP H1045602 A JPH1045602 A JP H1045602A JP 20209896 A JP20209896 A JP 20209896A JP 20209896 A JP20209896 A JP 20209896A JP H1045602 A JPH1045602 A JP H1045602A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヘリコバクター・ピロリによる胃粘膜障害の
第１段階である、菌の粘膜への接着を抑制するヘリコバ
クター・ピロリ接着阻害剤およびインターロイキン−８
産生阻害剤を提供することを目的とする。 【解決手段】 ガングリオシドを有効成分とする医薬。
第１段階である、菌の粘膜への接着を抑制するヘリコバ
クター・ピロリ接着阻害剤およびインターロイキン−８
産生阻害剤を提供することを目的とする。 【解決手段】 ガングリオシドを有効成分とする医薬。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヘリコバクター・
ピロリ胃粘膜感染に起因する胃疾患の改善に有効な治療
剤およびインターロイキン−８産生阻害剤に関する。
ピロリ胃粘膜感染に起因する胃疾患の改善に有効な治療
剤およびインターロイキン−８産生阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter
pylori）は、１９８２年胃内より発見されたグラム陰
性らせん桿菌であり、ヒトの慢性胃炎または萎縮性胃炎
の原因になっている。また、この菌は十二指腸潰瘍の発
生または胃潰瘍の再発の原因にもなっている。さらに最
近では、胃癌との関与も証明されつつあり、この菌はと
くに胃疾患と重要な関わりを有する。ヘリコバクター・
ピロリによる胃粘膜障害の機序としては、この菌が高い
ウレアーゼ活性を有することから、ウレアーゼにより産
生されたアンモニアによる障害作用が考えられている。
また、ヘリコバクター・ピロリが胃粘膜上皮細胞を刺激
してインターロイキン−８の産生を高め、好中球の遊走
が促され、長時間持続する炎症によって胃粘膜の萎縮が
引きおこされる。さらに、好中球から放出される次亜塩
素酸とヘリコバクター・ピロリの産生したアンモニアと
のあいだで、きわめて毒性の強いモノクロラミンが生
じ、障害が引きおこされる。そのほかにも、この菌自身
が有するcagA、vagAといったサイトトキシンによる障害
作用も考えられる。ヘリコバクター・ピロリによるこれ
らの障害の第１段階は、この菌が胃粘膜上皮細胞に接着
することにより開始される。
pylori）は、１９８２年胃内より発見されたグラム陰
性らせん桿菌であり、ヒトの慢性胃炎または萎縮性胃炎
の原因になっている。また、この菌は十二指腸潰瘍の発
生または胃潰瘍の再発の原因にもなっている。さらに最
近では、胃癌との関与も証明されつつあり、この菌はと
くに胃疾患と重要な関わりを有する。ヘリコバクター・
ピロリによる胃粘膜障害の機序としては、この菌が高い
ウレアーゼ活性を有することから、ウレアーゼにより産
生されたアンモニアによる障害作用が考えられている。
また、ヘリコバクター・ピロリが胃粘膜上皮細胞を刺激
してインターロイキン−８の産生を高め、好中球の遊走
が促され、長時間持続する炎症によって胃粘膜の萎縮が
引きおこされる。さらに、好中球から放出される次亜塩
素酸とヘリコバクター・ピロリの産生したアンモニアと
のあいだで、きわめて毒性の強いモノクロラミンが生
じ、障害が引きおこされる。そのほかにも、この菌自身
が有するcagA、vagAといったサイトトキシンによる障害
作用も考えられる。ヘリコバクター・ピロリによるこれ
らの障害の第１段階は、この菌が胃粘膜上皮細胞に接着
することにより開始される。
【０００３】現在のところ、ヘリコバクター・ピロリに
起因する胃疾患の治療には、たとえば、アモキシシリン
またはクラリスロマイシンなどの従来の抗生剤とプロト
ンポンプインヒビター（ＰＰＩ）のような酸分泌抑制剤
との併用による除菌治療が臨床試験として行なわれてい
る。しかしながら、この治療では抗生剤を通常の倍量投
与することになり、その結果下痢などの副作用を生じる
といった欠点がある。また、インターロイキン−８産生
阻害剤としては、抗潰瘍剤のムコスタ（大塚製薬
（株））にインターロイキン−８産生阻害作用（特開平
８−１２５７８号に記載）があり、ヘリコバクター・ピ
ロリの除菌剤として臨床試験が行なわれているが、現在
のところヘリコバクター・ピロリに起因するインターロ
イキン−８産生阻害剤は存在しない。そこで、前記欠点
を克服し、従来の治療剤よりもすぐれた治療効果を有す
る胃疾患治療剤が望まれていた。
起因する胃疾患の治療には、たとえば、アモキシシリン
またはクラリスロマイシンなどの従来の抗生剤とプロト
ンポンプインヒビター（ＰＰＩ）のような酸分泌抑制剤
との併用による除菌治療が臨床試験として行なわれてい
る。しかしながら、この治療では抗生剤を通常の倍量投
与することになり、その結果下痢などの副作用を生じる
といった欠点がある。また、インターロイキン−８産生
阻害剤としては、抗潰瘍剤のムコスタ（大塚製薬
（株））にインターロイキン−８産生阻害作用（特開平
８−１２５７８号に記載）があり、ヘリコバクター・ピ
ロリの除菌剤として臨床試験が行なわれているが、現在
のところヘリコバクター・ピロリに起因するインターロ
イキン−８産生阻害剤は存在しない。そこで、前記欠点
を克服し、従来の治療剤よりもすぐれた治療効果を有す
る胃疾患治療剤が望まれていた。
【０００４】一方、ガングリオシドについては、ガング
リオシドを有効成分とする医薬は現在のところ存在しな
い。
リオシドを有効成分とする医薬は現在のところ存在しな
い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の一つの目的
は、ヘリコバクター・ピロリによる胃粘膜障害の第１段
階である、菌の粘膜への接着を抑えることにより胃粘膜
の障害を抑制するヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤を
提供することである。
は、ヘリコバクター・ピロリによる胃粘膜障害の第１段
階である、菌の粘膜への接着を抑えることにより胃粘膜
の障害を抑制するヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤を
提供することである。
【０００６】本発明のもう一つの目的は、インターロイ
キン−８産生を阻害することにより炎症の程度を軽減さ
せるインターロイキン−８産生阻害剤を提供することで
ある。
キン−８産生を阻害することにより炎症の程度を軽減さ
せるインターロイキン−８産生阻害剤を提供することで
ある。
【０００７】また、本発明のさらなる目的は、ヘリコバ
クター・ピロリに起因する胃疾患である胃潰瘍または胃
炎を治療するための治療剤を提供することである。
クター・ピロリに起因する胃疾患である胃潰瘍または胃
炎を治療するための治療剤を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは前記課題を
解決するために鋭意検討した結果、ガングリオシドを有
効成分とする治療剤がすぐれた効果を有することを見い
だし、本発明を完成するにいたった。
解決するために鋭意検討した結果、ガングリオシドを有
効成分とする治療剤がすぐれた効果を有することを見い
だし、本発明を完成するにいたった。
【０００９】本発明はガングリオシドを有効成分とする
医薬に関する。さらに本発明は、ガングリオシドを有効
成分とするヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤、ガング
リオシドを有効成分とするインターロイキン−８産生阻
害剤、ガングリオシドを有効成分とする抗潰瘍剤および
ガングリオシドを有効成分とする胃炎治療剤に関する。
医薬に関する。さらに本発明は、ガングリオシドを有効
成分とするヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤、ガング
リオシドを有効成分とするインターロイキン−８産生阻
害剤、ガングリオシドを有効成分とする抗潰瘍剤および
ガングリオシドを有効成分とする胃炎治療剤に関する。
【００１０】
【発明の実施の形態】ガングリオシドは、シアル酸を含
む糖脂質であり、親水性頭部としてシアル酸および単糖
からなる糖鎖を有し、また疎水性尾部としてスフィンゴ
塩基および脂肪酸からなるセラミドを有する。
む糖脂質であり、親水性頭部としてシアル酸および単糖
からなる糖鎖を有し、また疎水性尾部としてスフィンゴ
塩基および脂肪酸からなるセラミドを有する。
【００１１】本発明に用いられるガングリオシドは、と
くに限定されないが、なかでもＧD3、ＧD1a、ＧD1b、Ｇ
T1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロＧM1、Ｇ
M3、Ｏ−アセチル−ＧD3、ＧT1a、ＧD2、ＧM2、ＧM1bま
たはＧQ1bが好ましい。とくに、ＧD3、ＧD1a、ＧD1b、
ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロＧM1、
ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3またはＧT1aが好ましい。
くに限定されないが、なかでもＧD3、ＧD1a、ＧD1b、Ｇ
T1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロＧM1、Ｇ
M3、Ｏ−アセチル−ＧD3、ＧT1a、ＧD2、ＧM2、ＧM1bま
たはＧQ1bが好ましい。とくに、ＧD3、ＧD1a、ＧD1b、
ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロＧM1、
ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3またはＧT1aが好ましい。
【００１２】前記ガングリオシドの化学構造は、それぞ
れ表１に示すとおりである。
れ表１に示すとおりである。
【００１３】
【表１】
【００１４】
【表２】
【００１５】なお、表１に示した化学構造に用いられた
略号については、Galはガラクトース、GalNAcはＮ−ア
セチルガラクトサミン、Glcはグルコース、NeuAcはＮ−
アセチルノイラミン酸、Cerはセラミドを示す。
略号については、Galはガラクトース、GalNAcはＮ−ア
セチルガラクトサミン、Glcはグルコース、NeuAcはＮ−
アセチルノイラミン酸、Cerはセラミドを示す。
【００１６】前記ガングリオシドは、商業的に入手可能
であり、たとえば雪印乳業（株）、リサーチ・バイオケ
ミカルズ・インターナショナル（Research Biochemical
s International）社（米国）、イー・ワイ・ラボラト
リーズ（E・Y Laboratories）社（米国）、シグマ（Sigm
a）社（米国）、アドバンス・イムノ・ケミカル（Advan
ce Immuno Chemical）社（米国）などの市販品を用いれ
ばよい。
であり、たとえば雪印乳業（株）、リサーチ・バイオケ
ミカルズ・インターナショナル（Research Biochemical
s International）社（米国）、イー・ワイ・ラボラト
リーズ（E・Y Laboratories）社（米国）、シグマ（Sigm
a）社（米国）、アドバンス・イムノ・ケミカル（Advan
ce Immuno Chemical）社（米国）などの市販品を用いれ
ばよい。
【００１７】ヘリコバクター・ピロリの胃粘膜上皮細胞
への接着のメカニズムについては、胃粘膜上皮細胞の酸
性糖脂質であるスルファチドにヘリコバクター・ピロリ
が特異的に接着するのであろう、という説（東京大学、
菅野らによる）が有力であるが、未だ解明されていな
い。本発明でいうヘリコバクター・ピロリの接着とは、
広義には胃粘膜上皮細胞にヘリコバクター・ピロリが付
着することを意味する。
への接着のメカニズムについては、胃粘膜上皮細胞の酸
性糖脂質であるスルファチドにヘリコバクター・ピロリ
が特異的に接着するのであろう、という説（東京大学、
菅野らによる）が有力であるが、未だ解明されていな
い。本発明でいうヘリコバクター・ピロリの接着とは、
広義には胃粘膜上皮細胞にヘリコバクター・ピロリが付
着することを意味する。
【００１８】本発明の接着阻害剤、インターロイキン−
８産生阻害剤、抗潰瘍剤および胃炎治療剤は、それぞれ
一般的な医薬製剤の形態に調製される。前記製剤は、通
常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊
剤、表面活性剤および滑沢剤などの希釈剤あるいは賦形
剤を用いて通常の方法で調製される。これら医薬製剤
は、各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表
的なものとして、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳
剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤
など）、エアゾール剤またはシロップ剤などがあげられ
る。また、樹脂などに配合して徐放性を高めて使用する
こともできる。
８産生阻害剤、抗潰瘍剤および胃炎治療剤は、それぞれ
一般的な医薬製剤の形態に調製される。前記製剤は、通
常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊
剤、表面活性剤および滑沢剤などの希釈剤あるいは賦形
剤を用いて通常の方法で調製される。これら医薬製剤
は、各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表
的なものとして、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳
剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤
など）、エアゾール剤またはシロップ剤などがあげられ
る。また、樹脂などに配合して徐放性を高めて使用する
こともできる。
【００１９】本発明の医薬の投与方法は、特定の治療目
的のためにとくに選択されるばあいのほかは、とくに制
限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別そのほかの
条件、疾患の程度などに応じた方法で投与される。たと
えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒
剤、シロップ剤およびカプセル剤のばあいには経口投与
される。また、注射剤のばあいには単独であるいはブド
ウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与
され、さらには必要に応じて、単独で筋肉内、皮内、皮
下または腹腔内投与される。坐剤のばあいには、直腸内
投与される。
的のためにとくに選択されるばあいのほかは、とくに制
限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別そのほかの
条件、疾患の程度などに応じた方法で投与される。たと
えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒
剤、シロップ剤およびカプセル剤のばあいには経口投与
される。また、注射剤のばあいには単独であるいはブド
ウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与
され、さらには必要に応じて、単独で筋肉内、皮内、皮
下または腹腔内投与される。坐剤のばあいには、直腸内
投与される。
【００２０】所望の治療的効果を達成するためには、有
効成分の投与量は、用法、患者の年齢、性別およびその
ほかの条件、疾患の程度などにより適宜選択されるが、
通常、成人１日当り０．０１〜１０ｍｇの範囲にあり、
好ましくは０．１〜１ｍｇから選択される。単位投与形
態は１日１〜３回投与することができる。
効成分の投与量は、用法、患者の年齢、性別およびその
ほかの条件、疾患の程度などにより適宜選択されるが、
通常、成人１日当り０．０１〜１０ｍｇの範囲にあり、
好ましくは０．１〜１ｍｇから選択される。単位投与形
態は１日１〜３回投与することができる。
【００２１】また、マウスにＧD3を３０ｍｇ／ｋｇ投与
したが死亡例はなかった。
したが死亡例はなかった。
【００２２】本発明のヘリコバクター・ピロリ接着阻害
剤は、ヘリコバクター・ピロリの胃粘膜上皮細胞への接
着に起因する胃粘膜障害を抑制することを可能とする。
かかる胃粘膜障害としては、ヘリコバクター・ピロリの
接着刺激により胃粘膜上皮細胞から産生されるインター
ロイキン−８に起因する胃粘膜の萎縮、炎症などがあげ
られる。
剤は、ヘリコバクター・ピロリの胃粘膜上皮細胞への接
着に起因する胃粘膜障害を抑制することを可能とする。
かかる胃粘膜障害としては、ヘリコバクター・ピロリの
接着刺激により胃粘膜上皮細胞から産生されるインター
ロイキン−８に起因する胃粘膜の萎縮、炎症などがあげ
られる。
【００２３】本発明のインターロイキン−８産生阻害剤
は、ヘリコバクター・ピロリの感染にかかわらず急性ま
たは慢性炎症性疾患の予防または治療に有用であり、か
かる急性または慢性炎症性疾患の具体例としては、
（１）乾癬などの炎症性角化症、アトピー性皮フ炎、接
触性皮フ炎などの炎症性皮フ疾患、（２）慢性関節リウ
マチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ベーチェッ
ト病などの慢性炎症性疾患である自己免疫疾患、（３）
クローン病、潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、（４）
Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、アルコール性肝炎、薬物アレルギ
ー性肝炎などの炎症性肝疾患、（５）糸球体腎炎などの
炎症性腎疾患、（６）気管支炎などの炎症性呼吸器疾
患、（７）口内炎、（８）声帯炎および（９）人工臓器
または人工血管使用時に生じる炎症などがあげられる。
は、ヘリコバクター・ピロリの感染にかかわらず急性ま
たは慢性炎症性疾患の予防または治療に有用であり、か
かる急性または慢性炎症性疾患の具体例としては、
（１）乾癬などの炎症性角化症、アトピー性皮フ炎、接
触性皮フ炎などの炎症性皮フ疾患、（２）慢性関節リウ
マチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ベーチェッ
ト病などの慢性炎症性疾患である自己免疫疾患、（３）
クローン病、潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、（４）
Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、アルコール性肝炎、薬物アレルギ
ー性肝炎などの炎症性肝疾患、（５）糸球体腎炎などの
炎症性腎疾患、（６）気管支炎などの炎症性呼吸器疾
患、（７）口内炎、（８）声帯炎および（９）人工臓器
または人工血管使用時に生じる炎症などがあげられる。
【００２４】つぎに、試験例によって本発明の医薬の作
用効果を説明する。
用効果を説明する。
【００２５】［試験例］ 試験例１ ヘリコバクター・ピロリ接着阻害試験 使用細菌：ヘリコバクター・ピロリ標準株NCTC 11637 ３７℃、微好気性条件下、１０％馬脱繊血含有ブレイン
ハートインフュージョン寒天培地（日水製薬（株）より
入手）にて３〜４日間培養した。
ハートインフュージョン寒天培地（日水製薬（株）より
入手）にて３〜４日間培養した。
【００２６】使用細胞：ヒト胃癌細胞株ＭＫＮ４５（免
疫生物研究所（株）より入手） ３７℃、５％ＣＯ2条件下、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ
１６４０培地（日水製薬（株）より入手）にて培養し
た。
疫生物研究所（株）より入手） ３７℃、５％ＣＯ2条件下、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ
１６４０培地（日水製薬（株）より入手）にて培養し
た。
【００２７】使用ガングリオシド：ＧD1a、ＧD1b、Ｇ
T1b、ＧM1インナーエステルおよびＧM 1（リサーチ・バ
イオケミカルズ・インターナショナル社製）、ＧD3およ
びＧM3（雪印乳業（株）製）、アシアロＧM1（シグマ社
製）、Ｏ−アセチル−ＧD3（アドバンス・イムノケミカ
ル社製）およびＧT1a（イー・ワイ・ラボラトリーズ社
製） ヒト胃癌細胞株ＭＫＮ４５を、１０4〜１０5細胞／ウェ
ルとなるようにダルベッコ改変イーグル培地（日水製薬
（株）製）にて調製し９６ウェルマイクロタイタープレ
ートに接種した。これを３７℃、５％ＣＯ2条件下、２
日間培養したのち、ＲＰＭＩ１６４０培地と交換した。
またヘリコバクター・ピロリ１０7〜１０8ＣＦＵと１２
５、２５０または５００μｇ／ｍｌのガングリオシド溶
液とを混和した各溶液を３７℃で３０分間プレインキュ
ベーションした。このヘリコバクター・ピロリを含むガ
ングリオシド溶液１００μｌをそれぞれ各ウェルに添加
し、３７℃、５％ＣＯ2において４時間培養した。培養
上清は、試験例２で行なうインターロイキン−８産生量
の測定に用い、残ったプレートを接着阻害試験に用い
た。まず、各ウェルをＰＢＳにて洗浄し、ホルマリン液
にて１時間固定した。ＰＢＳにて洗浄後、マウスに免疫
して作製したヘリコバクター・ピロリ抗体１００μｌを
添加し、３７℃で１時間インキュベートした。これをＰ
ＢＳにて洗浄後、ペルオキシダーゼ標識マウスイムノグ
ロブリン（カッペル（CAPPEL）社製、米国）５０μｌを
添加し室温で１時間放置した。つぎに各ウェルを充分に
ＰＢＳにて洗浄したのち、ＴＭＢ ペルオキシダーゼ・
サブストレート・キット（TMBPeroxidase Substrate Ki
t、バイオ−ラッド（Bio-Rad）社製）を用いて発色を行
ない、４５０ｎｍの吸光度を測定した。
T1b、ＧM1インナーエステルおよびＧM 1（リサーチ・バ
イオケミカルズ・インターナショナル社製）、ＧD3およ
びＧM3（雪印乳業（株）製）、アシアロＧM1（シグマ社
製）、Ｏ−アセチル−ＧD3（アドバンス・イムノケミカ
ル社製）およびＧT1a（イー・ワイ・ラボラトリーズ社
製） ヒト胃癌細胞株ＭＫＮ４５を、１０4〜１０5細胞／ウェ
ルとなるようにダルベッコ改変イーグル培地（日水製薬
（株）製）にて調製し９６ウェルマイクロタイタープレ
ートに接種した。これを３７℃、５％ＣＯ2条件下、２
日間培養したのち、ＲＰＭＩ１６４０培地と交換した。
またヘリコバクター・ピロリ１０7〜１０8ＣＦＵと１２
５、２５０または５００μｇ／ｍｌのガングリオシド溶
液とを混和した各溶液を３７℃で３０分間プレインキュ
ベーションした。このヘリコバクター・ピロリを含むガ
ングリオシド溶液１００μｌをそれぞれ各ウェルに添加
し、３７℃、５％ＣＯ2において４時間培養した。培養
上清は、試験例２で行なうインターロイキン−８産生量
の測定に用い、残ったプレートを接着阻害試験に用い
た。まず、各ウェルをＰＢＳにて洗浄し、ホルマリン液
にて１時間固定した。ＰＢＳにて洗浄後、マウスに免疫
して作製したヘリコバクター・ピロリ抗体１００μｌを
添加し、３７℃で１時間インキュベートした。これをＰ
ＢＳにて洗浄後、ペルオキシダーゼ標識マウスイムノグ
ロブリン（カッペル（CAPPEL）社製、米国）５０μｌを
添加し室温で１時間放置した。つぎに各ウェルを充分に
ＰＢＳにて洗浄したのち、ＴＭＢ ペルオキシダーゼ・
サブストレート・キット（TMBPeroxidase Substrate Ki
t、バイオ−ラッド（Bio-Rad）社製）を用いて発色を行
ない、４５０ｎｍの吸光度を測定した。
【００２８】次式（Ｉ）により阻害率（％）を算出し
た。
た。
【００２９】
【数１】
【００３０】式中、ガングリオシドの吸光度とは、ヘリ
コバクター・ピロリを含むガングリオシド溶液をウェル
に添加したばあいの吸光度を示し、ヘリコバクター・ピ
ロリの吸光度とは、前記ヘリコバクター・ピロリを含む
ガングリオシド溶液の代わりにヘリコバクター・ピロリ
溶液（１０7〜１０8ＣＦＵ含有、ガングリオシドは含ま
ず）を用いたばあいの吸光度を示し、ＰＢＳの吸光度と
は、前記ヘリコバクター・ピロリを含むガングリオシド
溶液の代わりにＰＢＳを用いたばあいの吸光度を示す。
したがって、ガングリオシドの吸光度は、ＭＫＮ４５細
胞にガングリオシドとヘリコバクター・ピロリとを共に
添加したばあいのヘリコバクター・ピロリのＭＫＮ４５
細胞に対する接着の度合い、すなわちガングリオシドの
接着阻害の度合いを意味し、ヘリコバクター・ピロリの
吸光度は、ヘリコバクター・ピロリのＭＫＮ４５細胞に
対する接着の度合いを意味し、ＰＢＳの吸光度は、溶媒
（ＰＢＳ）による非特異的な接着の度合いを意味する。
コバクター・ピロリを含むガングリオシド溶液をウェル
に添加したばあいの吸光度を示し、ヘリコバクター・ピ
ロリの吸光度とは、前記ヘリコバクター・ピロリを含む
ガングリオシド溶液の代わりにヘリコバクター・ピロリ
溶液（１０7〜１０8ＣＦＵ含有、ガングリオシドは含ま
ず）を用いたばあいの吸光度を示し、ＰＢＳの吸光度と
は、前記ヘリコバクター・ピロリを含むガングリオシド
溶液の代わりにＰＢＳを用いたばあいの吸光度を示す。
したがって、ガングリオシドの吸光度は、ＭＫＮ４５細
胞にガングリオシドとヘリコバクター・ピロリとを共に
添加したばあいのヘリコバクター・ピロリのＭＫＮ４５
細胞に対する接着の度合い、すなわちガングリオシドの
接着阻害の度合いを意味し、ヘリコバクター・ピロリの
吸光度は、ヘリコバクター・ピロリのＭＫＮ４５細胞に
対する接着の度合いを意味し、ＰＢＳの吸光度は、溶媒
（ＰＢＳ）による非特異的な接着の度合いを意味する。
【００３１】結果を表２に示す。
【００３２】
【表３】
【００３３】表２に示すように、ガングリオシドは用量
依存的にヘリコバクター・ピロリのヒト胃癌細胞株ＭＫ
Ｎ４５細胞への接着を阻害した。
依存的にヘリコバクター・ピロリのヒト胃癌細胞株ＭＫ
Ｎ４５細胞への接着を阻害した。
【００３４】試験例２ インターロイキン−８産生量の測定 試験例１でえられたマイクロタイタープレートの培養上
清を遠心分離（１０，０００ｇ、１０分）し、その上清
を回収し、上清中のインターロイキン−８産生量をクウ
ォンティカイン・ヒューマン・エライザ・キット（Quan
tikine Human ELISA KIT、商品名、アール・アンド・デ
ー・システムズ（R&D systems）社製）を用いてＥＬＩ
ＳＡ法にて測定した。同時に、インターロイキン−８の
スタンダードの吸光度を測定し、各上清液はその吸光度
から培養上清液中のインターロイキン−８産生量（μｇ
／ｍｌ）に換算した。
清を遠心分離（１０，０００ｇ、１０分）し、その上清
を回収し、上清中のインターロイキン−８産生量をクウ
ォンティカイン・ヒューマン・エライザ・キット（Quan
tikine Human ELISA KIT、商品名、アール・アンド・デ
ー・システムズ（R&D systems）社製）を用いてＥＬＩ
ＳＡ法にて測定した。同時に、インターロイキン−８の
スタンダードの吸光度を測定し、各上清液はその吸光度
から培養上清液中のインターロイキン−８産生量（μｇ
／ｍｌ）に換算した。
【００３５】次式（II）により阻害率（％）を算出し
た。
た。
【００３６】
【数２】
【００３７】式中、ガングリオシドの産生量とは、ヘリ
コバクター・ピロリを含むガングリオシド溶液をウェル
に添加したばあいのＭＫＮ４５細胞からのインターロイ
キン−８産生量を示し、ヘリコバクター・ピロリの産生
量とは、前記ヘリコバクター・ピロリを含むガングリオ
シド溶液の代わりにヘリコバクター・ピロリ溶液（１０
7〜１０8ＣＦＵ含有、ガングリオシドは含まず）を用い
たばあいのインターロイキン−８産生量を示し、ＰＢＳ
の産生量とは、前記ヘリコバクター・ピロリを含むガン
グリオシド溶液の代わりにＰＢＳを用いたばあいのイン
ターロイキン−８産生量を示す。したがって、ガングリ
オシドの産生量は、ＭＫＮ４５細胞にガングリオシドと
ヘリコバクター・ピロリとを共に添付したばあいのＭＫ
Ｎ４５細胞からのインターロイキン−８産生量、すなわ
ちガングリオシドのインターロイキン−８産生阻害の度
合いを意味し、ヘリコバクター・ピロリの産生量は、ヘ
リコバクター・ピロリの刺激によるＭＫＮ４５細胞から
のインターロイキン−８産生量を意味し、ＰＢＳの産生
量は、ＰＢＳの刺激によるＭＫＮ４５細胞からのインタ
ーロイキン−８産生量を意味する。
コバクター・ピロリを含むガングリオシド溶液をウェル
に添加したばあいのＭＫＮ４５細胞からのインターロイ
キン−８産生量を示し、ヘリコバクター・ピロリの産生
量とは、前記ヘリコバクター・ピロリを含むガングリオ
シド溶液の代わりにヘリコバクター・ピロリ溶液（１０
7〜１０8ＣＦＵ含有、ガングリオシドは含まず）を用い
たばあいのインターロイキン−８産生量を示し、ＰＢＳ
の産生量とは、前記ヘリコバクター・ピロリを含むガン
グリオシド溶液の代わりにＰＢＳを用いたばあいのイン
ターロイキン−８産生量を示す。したがって、ガングリ
オシドの産生量は、ＭＫＮ４５細胞にガングリオシドと
ヘリコバクター・ピロリとを共に添付したばあいのＭＫ
Ｎ４５細胞からのインターロイキン−８産生量、すなわ
ちガングリオシドのインターロイキン−８産生阻害の度
合いを意味し、ヘリコバクター・ピロリの産生量は、ヘ
リコバクター・ピロリの刺激によるＭＫＮ４５細胞から
のインターロイキン−８産生量を意味し、ＰＢＳの産生
量は、ＰＢＳの刺激によるＭＫＮ４５細胞からのインタ
ーロイキン−８産生量を意味する。
【００３８】結果を表３に示す。
【００３９】
【表４】
【００４０】表３に示すように、ガングリオシドは用量
依存的にヒト胃癌細胞株ＭＫＮ４５からのインターロイ
キン−８産生を抑制した。
依存的にヒト胃癌細胞株ＭＫＮ４５からのインターロイ
キン−８産生を抑制した。
【００４１】試験例３ インターロイキン−８産生阻害試験 使用細胞：ヒト胃癌細胞株ＭＫＮ４５ １０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地にて培養した。
【００４２】使用ガングリオシド：ＧD3 ヒト胃癌細胞株ＭＫＮ４５を１０4〜１０5細胞／ウェル
となるようにダルベッコ改変イーグル培地にて調製し９
６ウェルマイクロタイタープレートに接種し、試験例１
と同様に培養した。２日後培地を交換し、３０分間プレ
インキュベーションした１２５，２５０および５００μ
ｇ／ｍｌの各ＧD3溶液１００μｌを各ウェルに添加し、
３７℃、５％ＣＯ2において４時間培養した。マイクロ
タイタープレートの培養上清を遠心分離（１０，０００
ｇ、１０分）し、その上清を回収し、上清中のインター
ロイキン−８産生量を試験例２と同様にクウォンティカ
イン・ヒューマン・エリーザ・キットを用いてＥＬＩＳ
Ａ法にて測定した。同時に、インターロイキン−８のス
タンダードの吸光度を測定し、各上清液はその吸光度か
ら培養上清液中のインターロイキン−８産生量（μｇ／
ｍｌ）に換算した。
となるようにダルベッコ改変イーグル培地にて調製し９
６ウェルマイクロタイタープレートに接種し、試験例１
と同様に培養した。２日後培地を交換し、３０分間プレ
インキュベーションした１２５，２５０および５００μ
ｇ／ｍｌの各ＧD3溶液１００μｌを各ウェルに添加し、
３７℃、５％ＣＯ2において４時間培養した。マイクロ
タイタープレートの培養上清を遠心分離（１０，０００
ｇ、１０分）し、その上清を回収し、上清中のインター
ロイキン−８産生量を試験例２と同様にクウォンティカ
イン・ヒューマン・エリーザ・キットを用いてＥＬＩＳ
Ａ法にて測定した。同時に、インターロイキン−８のス
タンダードの吸光度を測定し、各上清液はその吸光度か
ら培養上清液中のインターロイキン−８産生量（μｇ／
ｍｌ）に換算した。
【００４３】次式（III）により阻害率（％）を産出し
た。
た。
【００４４】
【数３】
【００４５】式中、ＧD3による産生量とは、ＧD3溶液を
ウェルに添加したばあいのインターロイキン−８産生量
を示し、ＰＢＳによる産生量とは、前記ＧD3溶液の代わ
りにＰＢＳを用いたばあいのインターロイキン−８産生
量を示す。したがって、ＧD3による産生量はＧD3の刺激
によるＭＫＮ４５細胞からのインターロイキン−８産生
量を意味し、ＰＢＳによる産生量は、ＰＢＳの刺激によ
るＭＫＮ４５細胞からのインターロイキン−８産生量を
意味する。
ウェルに添加したばあいのインターロイキン−８産生量
を示し、ＰＢＳによる産生量とは、前記ＧD3溶液の代わ
りにＰＢＳを用いたばあいのインターロイキン−８産生
量を示す。したがって、ＧD3による産生量はＧD3の刺激
によるＭＫＮ４５細胞からのインターロイキン−８産生
量を意味し、ＰＢＳによる産生量は、ＰＢＳの刺激によ
るＭＫＮ４５細胞からのインターロイキン−８産生量を
意味する。
【００４６】結果を表４に示す。
【００４７】
【表５】
【００４８】表４に示すようにＧD3は、ヘリコバクター
・ピロリを作用させないばあいでも、用量依存的にヒト
胃癌細胞株ＭＫＮ４５からのインターロイキン−８産生
を阻害した。
・ピロリを作用させないばあいでも、用量依存的にヒト
胃癌細胞株ＭＫＮ４５からのインターロイキン−８産生
を阻害した。
【００４９】
【実施例】以下に実施例をあげて本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定される
ものではない。
に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定される
ものではない。
【００５０】実施例１ 下記の処方にしたがって有効成分０．２ｍｇを含有する
混合成分をカプセルに充填してカプセル剤を調製した。
混合成分をカプセルに充填してカプセル剤を調製した。
【００５１】 （成分） （ｍｇ） ＧD3 ０．２ ラクトース １００ コーンスターチ ６０ 結晶セルロース １８ ステアリン酸マグネシウム ２
【００５２】
【発明の効果】本発明によれば、ヘリコバクター・ピロ
リによる胃粘膜障害の第１段階である菌の粘膜への接着
を阻害すること、さらにインターロイキン−８産生を阻
害することが可能である。
リによる胃粘膜障害の第１段階である菌の粘膜への接着
を阻害すること、さらにインターロイキン−８産生を阻
害することが可能である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/70 ＡＣＫ Ａ６１Ｋ 31/70 ＡＣＫ ＡＣＬ ＡＣＬ ＡＣＳ ＡＣＳ ＡＣＶ ＡＣＶ ＡＤＡ ＡＤＡ ＡＥＤ ＡＥＤ
Claims (13)
- 【請求項１】 ガングリオシドを有効成分とする医薬。
- 【請求項２】 ガングリオシドを有効成分とする請求項
１記載のヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤。 - 【請求項３】 ガングリオシドが、ＧD3、ＧD1a、
ＧD1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロ
ＧM1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3、ＧT1a、ＧD2、
ＧM2、ＧM1bおよびＧQ1bからなる群より選ばれる請求項
２記載のヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤。 - 【請求項４】 ガングリオシドが、ＧD3、ＧD1a、
ＧD1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロ
ＧM1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3およびＧT1aからなる
群より選ばれる請求項２記載のヘリコバクター・ピロリ
接着阻害剤。 - 【請求項５】 ガングリオシドを有効成分とする請求項
１記載のインターロイキン−８産生阻害剤。 - 【請求項６】 ガングリオシドが、ＧD3、ＧD1a、
ＧD1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロ
ＧM1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3、ＧT1a、ＧD2、
ＧM2、ＧM1bおよびＧQ1bからなる群より選ばれる請求項
５記載のインターロイキン−８産生阻害剤。 - 【請求項７】 ガングリオシドが、ＧD3、ＧD1a、
ＧD1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロ
ＧM1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3およびＧT1aからなる
群より選ばれる請求項５記載のインターロイキン−８産
生阻害剤。 - 【請求項８】 ガングリオシドを有効成分とする請求項
１記載の抗潰瘍剤。 - 【請求項９】 ガングリオシドが、ＧD3、ＧD1a、
ＧD1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロ
ＧM1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3、ＧT1a、ＧD2、
ＧM2、ＧM1bおよびＧQ1bからなる群より選ばれる請求項
８記載の抗潰瘍剤。 - 【請求項１０】 ガングリオシドが、ＧD3、ＧD1a、Ｇ
D1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロＧ
M1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3およびＧＴ１ａからなる
群より選ばれる請求項８記載の抗潰瘍剤。 - 【請求項１１】 ガングリオシドを有効成分とする請求
項１記載の胃炎治療剤。 - 【請求項１２】 ガングリオシドが、ＧＤ３、ＧD1a、
ＧD1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロ
ＧM1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3、ＧT1a、ＧD2、
ＧM2、ＧM1bおよびＧQ1bからなる群より選ばれる請求項
１１記載の胃炎治療剤。 - 【請求項１３】 ガングリオシドが、ＧD3、ＧD1a、Ｇ
D1b、ＧT1b、ＧM1、ＧM1インナーエステル、アシアロＧ
M1、ＧM3、Ｏ−アセチル−ＧD3およびＧT1aからなる群
より選ばれる請求項１１記載の胃炎治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20209896A JPH1045602A (ja) | 1996-07-31 | 1996-07-31 | ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤またはインターロイキン−８産生阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20209896A JPH1045602A (ja) | 1996-07-31 | 1996-07-31 | ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤またはインターロイキン−８産生阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1045602A true JPH1045602A (ja) | 1998-02-17 |
Family
ID=16451939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20209896A Pending JPH1045602A (ja) | 1996-07-31 | 1996-07-31 | ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤またはインターロイキン−８産生阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1045602A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001043751A1 (en) * | 1999-12-15 | 2001-06-21 | A+ Science Invest Ab | Novel helicobacter pylori-binding substances and use thereof |
| WO2002056893A1 (en) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Biotie Therapies Corp. | Novel receptors for $i(helicobacter pylori) and use thereof |
| JP2005526711A (ja) * | 2002-01-18 | 2005-09-08 | バイオティ セラピィーズ コープ | ヘリコバクターピロリに対する新規結合エピトープおよびその用途 |
| JP2007055921A (ja) * | 2005-08-23 | 2007-03-08 | Nagasaki Univ | ヘリコバクター・ピロリの空胞化毒素に対する結合剤 |
| JP2007057334A (ja) * | 2005-08-23 | 2007-03-08 | Nagasaki Univ | ヘリコバクター・ピロリの空胞化毒素の検出試薬および検出方法 |
| JP2012139226A (ja) * | 2003-12-04 | 2012-07-26 | Protaffin Biotechnologie Ag | Ｇａｇ結合蛋白質 |
-
1996
- 1996-07-31 JP JP20209896A patent/JPH1045602A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001043751A1 (en) * | 1999-12-15 | 2001-06-21 | A+ Science Invest Ab | Novel helicobacter pylori-binding substances and use thereof |
| JP2003517015A (ja) * | 1999-12-15 | 2003-05-20 | アープラス シエンセ インベステ アーベー | ヘリコバクターピロリ結合性新規物質およびその用途 |
| CN100389773C (zh) * | 1999-12-15 | 2008-05-28 | A+科学投资公司 | 新的能结合幽门螺杆菌的物质及其用途 |
| WO2002056893A1 (en) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Biotie Therapies Corp. | Novel receptors for $i(helicobacter pylori) and use thereof |
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| JP2007057334A (ja) * | 2005-08-23 | 2007-03-08 | Nagasaki Univ | ヘリコバクター・ピロリの空胞化毒素の検出試薬および検出方法 |
| JP4677525B2 (ja) * | 2005-08-23 | 2011-04-27 | 国立大学法人 長崎大学 | ヘリコバクター・ピロリの空胞化毒素の検出試薬および検出方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070828 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20071029 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20080401 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |