JPH10300750A - 酵素免疫測定方法及び試験片 - Google Patents
酵素免疫測定方法及び試験片Info
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- JPH10300750A JPH10300750A JP9118646A JP11864697A JPH10300750A JP H10300750 A JPH10300750 A JP H10300750A JP 9118646 A JP9118646 A JP 9118646A JP 11864697 A JP11864697 A JP 11864697A JP H10300750 A JPH10300750 A JP H10300750A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 毛細管現象によって輸液可能な展開器材を用
いる免疫測定において、検出ゾーンでの発色を測定時間
経過後は発色反応が停止し、その時刻以降は検出ゾーン
の発色に変化のない酵素免疫測定試験片の提供。 【解決手段】 展開器材の一端に展開液供給ゾーンを設
け、該展開器材に酵素標識試薬ゾーン、検体点着ゾーン
及び検出ゾーンを設け、輸液方向で酵素標識ゾーンの上
流側に基質と酵素阻害剤とを添加した酵素免疫測定用試
験片を用いて検体中の抗原又は抗体を免疫測定する。
いる免疫測定において、検出ゾーンでの発色を測定時間
経過後は発色反応が停止し、その時刻以降は検出ゾーン
の発色に変化のない酵素免疫測定試験片の提供。 【解決手段】 展開器材の一端に展開液供給ゾーンを設
け、該展開器材に酵素標識試薬ゾーン、検体点着ゾーン
及び検出ゾーンを設け、輸液方向で酵素標識ゾーンの上
流側に基質と酵素阻害剤とを添加した酵素免疫測定用試
験片を用いて検体中の抗原又は抗体を免疫測定する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、展開器材の検出ゾ
ーンおいて、酵素と基質との反応による発色を酵素阻害
剤を添加して判定時間経過後は抑制した酵素免疫測定方
法、及び酵素阻害剤を添加した酵素免疫測定用試験片に
関する。
ーンおいて、酵素と基質との反応による発色を酵素阻害
剤を添加して判定時間経過後は抑制した酵素免疫測定方
法、及び酵素阻害剤を添加した酵素免疫測定用試験片に
関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、免疫反応を利用し検体中の生体成
分、薬物等の測定対象物を簡便に測定する方法として、
酵素を標識物質として用い毛細管現象によって輸液可能
な展開器材を用いる測定法が知られている（例えば特開
昭６１−１４５４５９号、特開昭６３−５０１５９５号
等参照）。この展開器材からなる試験片では、免疫反応
物質を固定した試験片の検出ゾーンに免疫反応によって
結合した酵素の活性を基質と反応させて測定し、所定時
間後の検出ゾーンの発色量から検体中の測定対象物を測
定することが行われている。
分、薬物等の測定対象物を簡便に測定する方法として、
酵素を標識物質として用い毛細管現象によって輸液可能
な展開器材を用いる測定法が知られている（例えば特開
昭６１−１４５４５９号、特開昭６３−５０１５９５号
等参照）。この展開器材からなる試験片では、免疫反応
物質を固定した試験片の検出ゾーンに免疫反応によって
結合した酵素の活性を基質と反応させて測定し、所定時
間後の検出ゾーンの発色量から検体中の測定対象物を測
定することが行われている。
【０００３】一方、免疫測定用試験片において、検出ゾ
ーン以外の部位では基質と標識酵素との反応によって生
ずるシグナル（発色又は発光）を防止するためにシグナ
ル防止試薬を展開器材中に添加し、展開中に酵素と基質
との反応を阻害して検出ゾーンに展開液が到達するまで
はシグナルの生成を抑えた試験片が知られている（特開
平１−５０３４３９号、特開平５−１４９９５１号参
照）。この試験片を用いる測定は、展開器材の検出ゾー
ンから輸液方向の上流側の展開器材にシグナル防止試薬
ゾーンを設け、さらに所望によりシグナル開始ゾーンを
設けることにより検出ゾーンまではシグナルの発生を抑
制することによって高感度な測定と多項目の測定を行う
ことを可能にしたものである。
ーン以外の部位では基質と標識酵素との反応によって生
ずるシグナル（発色又は発光）を防止するためにシグナ
ル防止試薬を展開器材中に添加し、展開中に酵素と基質
との反応を阻害して検出ゾーンに展開液が到達するまで
はシグナルの生成を抑えた試験片が知られている（特開
平１−５０３４３９号、特開平５−１４９９５１号参
照）。この試験片を用いる測定は、展開器材の検出ゾー
ンから輸液方向の上流側の展開器材にシグナル防止試薬
ゾーンを設け、さらに所望によりシグナル開始ゾーンを
設けることにより検出ゾーンまではシグナルの発生を抑
制することによって高感度な測定と多項目の測定を行う
ことを可能にしたものである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記シ
グナル防止試薬を添加した測定法では、試験片に展開液
を供給して測定を開始し、検出ゾーンに至るまでの酵素
と基質との反応によるシグナル生成を抑制することは行
われるが、所定時間後の検出ゾーンで起こるシグナル生
成反応を抑制するものではなかった。
グナル防止試薬を添加した測定法では、試験片に展開液
を供給して測定を開始し、検出ゾーンに至るまでの酵素
と基質との反応によるシグナル生成を抑制することは行
われるが、所定時間後の検出ゾーンで起こるシグナル生
成反応を抑制するものではなかった。
【０００５】一方、発色基質による測定法では、所定時
間酵素と基質とを反応させたのち、目視又は色差計を用
いて検出ゾーンでの発色を測定し、測定対象物の測定結
果を得ることができる。殊に測定対象物の陰性又は陽性
の判定を発色濃度の差により結果を得ようとする場合に
は、測定時間の経過とともにその発色量が増加し、経時
的に陰性から陽性に変化することが起こるため、測定者
は検出ゾーンにおける判定の実施時刻を厳密に管理する
必要があった。
間酵素と基質とを反応させたのち、目視又は色差計を用
いて検出ゾーンでの発色を測定し、測定対象物の測定結
果を得ることができる。殊に測定対象物の陰性又は陽性
の判定を発色濃度の差により結果を得ようとする場合に
は、測定時間の経過とともにその発色量が増加し、経時
的に陰性から陽性に変化することが起こるため、測定者
は検出ゾーンにおける判定の実施時刻を厳密に管理する
必要があった。
【０００６】そこで、判定実施時刻の経過後であっても
常に一定の測定結果を得るために、所定の測定時刻で発
色反応が停止し、その時刻以降は検出ゾーンの発色に変
化のない免疫測定法が求められていた。
常に一定の測定結果を得るために、所定の測定時刻で発
色反応が停止し、その時刻以降は検出ゾーンの発色に変
化のない免疫測定法が求められていた。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意研究し
た結果、測定時刻以降には発色が停止する酵素免疫測定
法を見出し本発明を完成するに至った。
た結果、測定時刻以降には発色が停止する酵素免疫測定
法を見出し本発明を完成するに至った。
【０００８】本発明は、展開器材に設けた検出ゾーンに
おいて、酵素と基質との反応による発色を酵素阻害剤を
添加して判定時間経過後は抑制した酵素免疫測定方法を
提供する。
おいて、酵素と基質との反応による発色を酵素阻害剤を
添加して判定時間経過後は抑制した酵素免疫測定方法を
提供する。
【０００９】また、本発明は、毛細管現象によって輸液
可能な展開器材の一端に展開液を供給する展開液ゾーン
を設け、該展開器材に酵素標識試薬ゾーン、検体点着ゾ
ーン及び検出ゾーンを設け、輸液方向で酵素標識ゾーン
の上流側に基質と酵素阻害剤を添加した酵素免疫測定用
試験片を提供する。
可能な展開器材の一端に展開液を供給する展開液ゾーン
を設け、該展開器材に酵素標識試薬ゾーン、検体点着ゾ
ーン及び検出ゾーンを設け、輸液方向で酵素標識ゾーン
の上流側に基質と酵素阻害剤を添加した酵素免疫測定用
試験片を提供する。
【００１０】本発明の酵素阻害剤を添加した酵素免疫測
定方法を実施するための免疫測定用試験片の好ましい態
様を図１に模式的に示す。図１に示すように本発明の試
験片１は、展開器材２から構成されている。展開器材２
は従来と同様に毛細管現象によって輸液可能な吸水性の
材料で構成される。この好ましい材料としては、例えば
セルロース、ニトロセルロース等のセルロース又はセル
ロース誘導体、ガラス繊維等により構成されたろ紙、多
孔質膜等である。この展開器材の大きさには制限はない
が、例えば幅３ｍｍ〜１０ｍｍ、長さ３０ｍｍ〜１００
ｍｍ程度のストリップ状であり、厚さが１００μｍ〜１
ｍｍ程度のものが取扱いが容易であり、好ましい。
定方法を実施するための免疫測定用試験片の好ましい態
様を図１に模式的に示す。図１に示すように本発明の試
験片１は、展開器材２から構成されている。展開器材２
は従来と同様に毛細管現象によって輸液可能な吸水性の
材料で構成される。この好ましい材料としては、例えば
セルロース、ニトロセルロース等のセルロース又はセル
ロース誘導体、ガラス繊維等により構成されたろ紙、多
孔質膜等である。この展開器材の大きさには制限はない
が、例えば幅３ｍｍ〜１０ｍｍ、長さ３０ｍｍ〜１００
ｍｍ程度のストリップ状であり、厚さが１００μｍ〜１
ｍｍ程度のものが取扱いが容易であり、好ましい。
【００１１】展開器材２の両端には、展開液供給ゾーン
３の展開液供給パットと展開液を吸収するための吸水パ
ット１０とが設けられている。これらは、吸水性の前記
展開器材と同じ材料の他、例えばスポンジ、吸水性の不
織布等を挙げることができる。これらの展開液供給ゾー
ン３と吸水パット１０は通常前記展開器材２よりも厚く
形成されるが、このことは必須ではない。また展開液供
給パットと吸水パットは前記展開器材の形態を変形させ
て製造することもできる。
３の展開液供給パットと展開液を吸収するための吸水パ
ット１０とが設けられている。これらは、吸水性の前記
展開器材と同じ材料の他、例えばスポンジ、吸水性の不
織布等を挙げることができる。これらの展開液供給ゾー
ン３と吸水パット１０は通常前記展開器材２よりも厚く
形成されるが、このことは必須ではない。また展開液供
給パットと吸水パットは前記展開器材の形態を変形させ
て製造することもできる。
【００１２】本発明は酵素阻害剤を含有した免疫測定用
試験片１を用いて免疫測定を行うことができる。この酵
素阻害剤は、前記免疫測定用試験片１において展開液の
輸液方向で酵素標識試薬ゾーン８の上流側に酵素阻害剤
を添加することができ、展開液５と展開液供給ゾーン３
のいずれか一方又は両方に含有させることができる。こ
の酵素阻害剤としては、酵素標識試薬の酵素と基質との
反応を阻害する試薬であればよく、酵素標識試薬に用い
る酵素に対応して選択することができる。酵素阻害剤
は、酵素の基質結合に基質の代わりに結合し、酵素活性
を可逆的に阻害する拮抗型酵素阻害剤又は酵素の基質結
合部位とは異なる部位で酵素と結合し、酵素分子の構造
を変化させることによって阻害をする非拮抗型酵素阻害
剤である。
試験片１を用いて免疫測定を行うことができる。この酵
素阻害剤は、前記免疫測定用試験片１において展開液の
輸液方向で酵素標識試薬ゾーン８の上流側に酵素阻害剤
を添加することができ、展開液５と展開液供給ゾーン３
のいずれか一方又は両方に含有させることができる。こ
の酵素阻害剤としては、酵素標識試薬の酵素と基質との
反応を阻害する試薬であればよく、酵素標識試薬に用い
る酵素に対応して選択することができる。酵素阻害剤
は、酵素の基質結合に基質の代わりに結合し、酵素活性
を可逆的に阻害する拮抗型酵素阻害剤又は酵素の基質結
合部位とは異なる部位で酵素と結合し、酵素分子の構造
を変化させることによって阻害をする非拮抗型酵素阻害
剤である。
【００１３】酵素としては、例えばアルカリ性ホスファ
ターゼ等のホスファターゼ、パーオキシダーゼ、β−ガ
ラクトシダーゼを用いることができる。アルカリ性ホス
ファターゼを用いる場合には、酵素阻害剤としては例え
ばリン酸、リン酸塩（リン酸ナトリウム、リン酸カリウ
ム等）、リン酸モノエステル、ナフトールリン酸、グリ
セロールリン酸、フェニルホスフェート、ホスフォエタ
ノールアミン、ホスフォリルコリン、フェナンスロリ
ン、グリコースリン酸等のリン酸化合物、エチレンジア
ミン四酢酸、エチレングリコースビス四酢酸等のキレー
ト化合物を挙げることができる。パーオキシダーゼを用
いる場合には、アスコルビン酸等の還元剤、アジ化ナト
リウム、アジ化カリウム等のアジ化化合物を挙げること
ができる。更にβ−ガラクトシダーゼを用いる場合に
は、酵素阻害剤としては、ラクトース等を挙げることが
できる。また、さらにいずれの酵素の場合においても、
所定時間後の検出ゾーンでの酵素の至適ｐＨをずらすた
めに、酸又は塩基等を酵素阻害剤として使用することも
できる。
ターゼ等のホスファターゼ、パーオキシダーゼ、β−ガ
ラクトシダーゼを用いることができる。アルカリ性ホス
ファターゼを用いる場合には、酵素阻害剤としては例え
ばリン酸、リン酸塩（リン酸ナトリウム、リン酸カリウ
ム等）、リン酸モノエステル、ナフトールリン酸、グリ
セロールリン酸、フェニルホスフェート、ホスフォエタ
ノールアミン、ホスフォリルコリン、フェナンスロリ
ン、グリコースリン酸等のリン酸化合物、エチレンジア
ミン四酢酸、エチレングリコースビス四酢酸等のキレー
ト化合物を挙げることができる。パーオキシダーゼを用
いる場合には、アスコルビン酸等の還元剤、アジ化ナト
リウム、アジ化カリウム等のアジ化化合物を挙げること
ができる。更にβ−ガラクトシダーゼを用いる場合に
は、酵素阻害剤としては、ラクトース等を挙げることが
できる。また、さらにいずれの酵素の場合においても、
所定時間後の検出ゾーンでの酵素の至適ｐＨをずらすた
めに、酸又は塩基等を酵素阻害剤として使用することも
できる。
【００１４】酵素阻害剤を展開液供給ゾーン３に添加す
る場合には、この展開液供給ゾーンの一部又は全部に前
記酵素阻害剤を添加して乾燥させて酵素阻害剤ゾーンを
設けることができる。この酵素阻害剤は拮抗型酵素阻害
剤の場合には基質濃度、Ｋｄ値等によって最適条件が決
定され添加する阻害剤の量が決定される。さらに非拮抗
型酵素阻害剤の場合には酵素の至適金属イオン濃度と展
開液の金属イオン濃度等によって最適条件が決定され
る。
る場合には、この展開液供給ゾーンの一部又は全部に前
記酵素阻害剤を添加して乾燥させて酵素阻害剤ゾーンを
設けることができる。この酵素阻害剤は拮抗型酵素阻害
剤の場合には基質濃度、Ｋｄ値等によって最適条件が決
定され添加する阻害剤の量が決定される。さらに非拮抗
型酵素阻害剤の場合には酵素の至適金属イオン濃度と展
開液の金属イオン濃度等によって最適条件が決定され
る。
【００１５】酵素阻害剤を展開液供給ゾーン３に添加す
る場合には検出ゾーンでの酵素反応の抑制が一過性であ
るのに対し、酵素阻害剤を展開液５に添加する場合には
検出ゾーンでの酵素反応の抑制が持続的である。さら
に、展開液供給ゾーン３と展開液５の両方に添加する場
合には、酵素反応の抑制がほぼ完全に停止し、判定を行
う所定時間以降の発色を停止させることができる。これ
ら酵素阻害剤の添加位置は以上のゾーンから任意に選択
することができる。
る場合には検出ゾーンでの酵素反応の抑制が一過性であ
るのに対し、酵素阻害剤を展開液５に添加する場合には
検出ゾーンでの酵素反応の抑制が持続的である。さら
に、展開液供給ゾーン３と展開液５の両方に添加する場
合には、酵素反応の抑制がほぼ完全に停止し、判定を行
う所定時間以降の発色を停止させることができる。これ
ら酵素阻害剤の添加位置は以上のゾーンから任意に選択
することができる。
【００１６】さらに免疫測定用試験片１には、検体点着
ゾーン７が設けられている。検体点着ゾーン７には、タ
ンパク質の非特異的吸着を防止するために展開器材をブ
ロッキングした後、検出すべき抗原又は抗体と反応する
抗体、抗原等の免疫反応物質が酵素標識された標識試薬
が点着され、乾燥状態で含有されている。検体点着ゾー
ン７は標識試薬パットで構成された標識試薬ゾーン８と
することにより、多量の標識試薬を含有させることがで
き、さらにより多量の検体液を添加することが可能にな
り、測定感度が向上するので好ましい。
ゾーン７が設けられている。検体点着ゾーン７には、タ
ンパク質の非特異的吸着を防止するために展開器材をブ
ロッキングした後、検出すべき抗原又は抗体と反応する
抗体、抗原等の免疫反応物質が酵素標識された標識試薬
が点着され、乾燥状態で含有されている。検体点着ゾー
ン７は標識試薬パットで構成された標識試薬ゾーン８と
することにより、多量の標識試薬を含有させることがで
き、さらにより多量の検体液を添加することが可能にな
り、測定感度が向上するので好ましい。
【００１７】標識試薬パットの材質は、吸水性のあるも
のであれば特に限定されず、例えばポリビニルアルコー
ル（ＰＶＡ）、セルロース、ニトロセルロース等の多孔
質の合成又は天然の高分子化合物からなる材料を単独又
は組み合わせて構成されたスポンジ、吸水性不織布、ろ
紙等を挙げることができる。標識試薬パットの大きさ
は、特に限定されないが、通常縦、横３ｍｍ〜１０ｍｍ
程度で厚さが０．５ｍｍ〜４ｍｍ程度である。標識試薬
パットに含有される標識試薬の量は、展開器材２に直接
点着、乾燥する場合よりも多くすることができ、また各
測定対象物により異なるが、通常乾燥重量で０．０１μ
ｇ〜５μｇ程度である。
のであれば特に限定されず、例えばポリビニルアルコー
ル（ＰＶＡ）、セルロース、ニトロセルロース等の多孔
質の合成又は天然の高分子化合物からなる材料を単独又
は組み合わせて構成されたスポンジ、吸水性不織布、ろ
紙等を挙げることができる。標識試薬パットの大きさ
は、特に限定されないが、通常縦、横３ｍｍ〜１０ｍｍ
程度で厚さが０．５ｍｍ〜４ｍｍ程度である。標識試薬
パットに含有される標識試薬の量は、展開器材２に直接
点着、乾燥する場合よりも多くすることができ、また各
測定対象物により異なるが、通常乾燥重量で０．０１μ
ｇ〜５μｇ程度である。
【００１８】検体点着ゾーン７は、上記のように標識試
薬ゾーン８に設けられる他、展開液の輸液方向で吸水ゾ
ーン１０の上流側で標識試薬ゾーンの上流側、または標
識試薬ゾーン８の下流側で検出ゾーンの上流側の展開器
材２上に設けることもできる。
薬ゾーン８に設けられる他、展開液の輸液方向で吸水ゾ
ーン１０の上流側で標識試薬ゾーンの上流側、または標
識試薬ゾーン８の下流側で検出ゾーンの上流側の展開器
材２上に設けることもできる。
【００１９】また検出ゾーン９は展開液の輸液方向で吸
水ゾーン１０の上流側で且つ検体点着ゾーン７の下流側
である。検出ゾーン９は、検体中の検出すべき抗原又は
抗体と反応する抗体、抗原等の免疫反応物質を展開器材
２に化学結合、物理吸着等の方法により固定化すること
により設けることができる。また、検出すべき抗原又は
抗体と反応する抗体又は抗原をあらかじめ不溶性の担体
に共有結合等の化学結合、物理吸着等の方法により結合
させ、これを展開器材に含有させてもよい。この不溶性
担体としては、ゼラチン、アラビアゴム及びヘキサメタ
リン酸ナトリウムからなる混合液を不溶化して得られる
粒子（特公昭６３−２９２２３）、ポリスチレンラテッ
クス、各種動物赤血球、ガラス繊維等である。
水ゾーン１０の上流側で且つ検体点着ゾーン７の下流側
である。検出ゾーン９は、検体中の検出すべき抗原又は
抗体と反応する抗体、抗原等の免疫反応物質を展開器材
２に化学結合、物理吸着等の方法により固定化すること
により設けることができる。また、検出すべき抗原又は
抗体と反応する抗体又は抗原をあらかじめ不溶性の担体
に共有結合等の化学結合、物理吸着等の方法により結合
させ、これを展開器材に含有させてもよい。この不溶性
担体としては、ゼラチン、アラビアゴム及びヘキサメタ
リン酸ナトリウムからなる混合液を不溶化して得られる
粒子（特公昭６３−２９２２３）、ポリスチレンラテッ
クス、各種動物赤血球、ガラス繊維等である。
【００２０】本発明の免疫測定用試験片では、使用する
酵素に応じ基質を選択することができる。この基質とし
ては、アルカリ性ホスファターゼを用いる場合には例え
ば５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸二ナ
トリウム（ＢＣＩＰ）、５−ブロム−６−クロロ−３−
インドリルリン酸二ナトリウム等であり、パーオキシダ
ーゼを用いる場合には、例えば１，２−フェニレンジア
ミン、３，３’，５，５’−テトラメチルベンチジン、
２，２’−アジノビス−３−エチルベンゾチアゾリン−
６−スルホン酸（ＡＢＴＳ）等、β−ガラクトシダーゼ
を用いる場合には、例えば５−ブロモ−４−クロロ−３
−インドリル−β−ガラクトピラノシド、５−ブロモ−
６−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド
等を挙げることができる。
酵素に応じ基質を選択することができる。この基質とし
ては、アルカリ性ホスファターゼを用いる場合には例え
ば５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸二ナ
トリウム（ＢＣＩＰ）、５−ブロム−６−クロロ−３−
インドリルリン酸二ナトリウム等であり、パーオキシダ
ーゼを用いる場合には、例えば１，２−フェニレンジア
ミン、３，３’，５，５’−テトラメチルベンチジン、
２，２’−アジノビス−３−エチルベンゾチアゾリン−
６−スルホン酸（ＡＢＴＳ）等、β−ガラクトシダーゼ
を用いる場合には、例えば５−ブロモ−４−クロロ−３
−インドリル−β−ガラクトピラノシド、５−ブロモ−
６−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド
等を挙げることができる。
【００２１】この基質は、前記酵素阻害剤と同様に、前
記免疫測定用試験片１において展開液の輸液方向で酵素
標識試薬ゾーン８の上流側に基質を添加することがで
き、展開液５、展開器材２及び展開液供給パッド３のい
ずれか一箇所に含有させることができる。基質は展開器
材２又は展開液供給ゾーン３に基質ゾーンを設け、点着
した基質を乾燥させることにより基質ゾーンを形成する
ことが感度の高い測定を行うためには好ましい。
記免疫測定用試験片１において展開液の輸液方向で酵素
標識試薬ゾーン８の上流側に基質を添加することがで
き、展開液５、展開器材２及び展開液供給パッド３のい
ずれか一箇所に含有させることができる。基質は展開器
材２又は展開液供給ゾーン３に基質ゾーンを設け、点着
した基質を乾燥させることにより基質ゾーンを形成する
ことが感度の高い測定を行うためには好ましい。
【００２２】本発明の試験片を用いる測定では、まず検
体６を検体点着ゾーン７加えると共に展開液供給ゾーン
３に展開液５を供給する。この展開液５は展開液供給ゾ
ーン３の上部又は下部に展開液槽４を設け、該展開液槽
と展開液供給ゾーンとを金属箔又はプラスチックフィル
ムのような容易に破断可能な薄い膜で隔て収容してお
き、使用時にこの膜を指の力で破断することにより展開
液と展開液供給ゾーンとを接触させることが簡便な測定
を行うためには好ましい。このように測定を実施するた
め、本発明の免疫測定用試験片１は前記展開液槽ととも
にプラスチック製のケース等に入れて用いるとができ
る。この展開液には、酢酸緩衝液、ほう酸緩衝液、トリ
ス−塩酸緩衝液、ジエタノールアミン緩衝液等の各種緩
衝液を用いることができる。
体６を検体点着ゾーン７加えると共に展開液供給ゾーン
３に展開液５を供給する。この展開液５は展開液供給ゾ
ーン３の上部又は下部に展開液槽４を設け、該展開液槽
と展開液供給ゾーンとを金属箔又はプラスチックフィル
ムのような容易に破断可能な薄い膜で隔て収容してお
き、使用時にこの膜を指の力で破断することにより展開
液と展開液供給ゾーンとを接触させることが簡便な測定
を行うためには好ましい。このように測定を実施するた
め、本発明の免疫測定用試験片１は前記展開液槽ととも
にプラスチック製のケース等に入れて用いるとができ
る。この展開液には、酢酸緩衝液、ほう酸緩衝液、トリ
ス−塩酸緩衝液、ジエタノールアミン緩衝液等の各種緩
衝液を用いることができる。
【００２３】検体点着ゾーン５に加えられた検体は酵素
標識試薬ゾーン８の試薬と反応し、展開液供給ゾーンか
ら流れてくる展開液に流されると共に、輸液方向の下流
側の検出ゾーン９に到達する。検体中の抗原又は抗体が
検出ゾーン９に固定化されている抗原又は抗体にトラッ
プされそこに留まると、検体中の抗原又は抗体は酵素標
識試薬と結合しているため、酵素標識試薬が検出ライン
に留まる。次いで検出ゾーン９にトラップされた酵素は
展開液中の基質と反応し、検出ゾーン９での発色が起こ
るが、同時に展開液に含まれる酵素阻害剤により、酵素
反応が阻害され、所定時間後には、発色が停止する。従
って、検体液中に検出すべき抗原又は抗体が含まれてい
る場合には、検出ゾーン９で発色が観察される。なお、
展開液及びトラップされなかった他の成分は吸収パッド
１０に吸収される。検体液中に検出すべき抗原又は抗体
が含まれない場合には、標識試薬が検出ゾーン９にトラ
ップされないので、そのまま吸収パッド１０に吸収され
てしまい、検出ゾーン９の発色は観察されない。このよ
うに、検出ゾーン９が発色するか否かにより検体中に検
出すべき抗原又は抗体が含まれているか否かを知ること
ができる。尚前記酵素標識試薬と前記基質の一部は検出
ゾーンに到達する前に反応して発色しつつ移動しても構
わないが、検出ゾーンでは展開液中に免疫測定を行うた
めに十分な基質量を含有している。この場合、形成され
た発色体のうち、前記検出ゾーンにトラップされなかっ
たものは前記吸収パッド１０に吸収される。
標識試薬ゾーン８の試薬と反応し、展開液供給ゾーンか
ら流れてくる展開液に流されると共に、輸液方向の下流
側の検出ゾーン９に到達する。検体中の抗原又は抗体が
検出ゾーン９に固定化されている抗原又は抗体にトラッ
プされそこに留まると、検体中の抗原又は抗体は酵素標
識試薬と結合しているため、酵素標識試薬が検出ライン
に留まる。次いで検出ゾーン９にトラップされた酵素は
展開液中の基質と反応し、検出ゾーン９での発色が起こ
るが、同時に展開液に含まれる酵素阻害剤により、酵素
反応が阻害され、所定時間後には、発色が停止する。従
って、検体液中に検出すべき抗原又は抗体が含まれてい
る場合には、検出ゾーン９で発色が観察される。なお、
展開液及びトラップされなかった他の成分は吸収パッド
１０に吸収される。検体液中に検出すべき抗原又は抗体
が含まれない場合には、標識試薬が検出ゾーン９にトラ
ップされないので、そのまま吸収パッド１０に吸収され
てしまい、検出ゾーン９の発色は観察されない。このよ
うに、検出ゾーン９が発色するか否かにより検体中に検
出すべき抗原又は抗体が含まれているか否かを知ること
ができる。尚前記酵素標識試薬と前記基質の一部は検出
ゾーンに到達する前に反応して発色しつつ移動しても構
わないが、検出ゾーンでは展開液中に免疫測定を行うた
めに十分な基質量を含有している。この場合、形成され
た発色体のうち、前記検出ゾーンにトラップされなかっ
たものは前記吸収パッド１０に吸収される。
【００２４】尚、上記説明では、酵素標識試薬及び検出
ゾーンに固定化する免疫反応物質を抗原又は抗体とした
が、本願明細書で言う「抗体又は抗原」は、抗原抗体反
応（免疫反応）が可能であり、免疫複合体を形成するも
のであればよく、例えばポリクローナル抗体、モノクロ
ーナル抗体、これら抗体の断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ’）2 等）、ハプテン等も包含する意味で用い
る。
ゾーンに固定化する免疫反応物質を抗原又は抗体とした
が、本願明細書で言う「抗体又は抗原」は、抗原抗体反
応（免疫反応）が可能であり、免疫複合体を形成するも
のであればよく、例えばポリクローナル抗体、モノクロ
ーナル抗体、これら抗体の断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ’）2 等）、ハプテン等も包含する意味で用い
る。
【００２５】本発明の測定対象物は、生体内に存在する
物質、薬剤等であり、例えばテオフィリン、フェニトイ
ン、バルプロ酸等の薬剤、サイロキシン、エストロゲ
ン、エラストラジオール等の低分子ホルモン、ＣＥＡ、
ＡＦＰ、便中ヘモグロビン（ＦＯＢＴ）等の癌マーカ
ー、ヒト免疫不全ウイルス、（ＨＩＶ）、ヒト成人Ｔ細
胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈ
ＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）等のウイルス、甲
状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、インスリン等の高分子ホ
ルモン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６等のサイトカイ
ン、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ等の各種グロースファクター、更
に前記ウイルスの適当なＤＮＡ、ＲＮＡ等、ＣＲＰ等の
炎症に関連するタンパク質等の抗原、及びこれら抗原に
対する抗体である。前記抗原、抗体等の測定に用いられ
る検体としては、例えば全血、血清、血漿、尿、リンパ
液等の体液、便抽出液等を挙げることができる。
物質、薬剤等であり、例えばテオフィリン、フェニトイ
ン、バルプロ酸等の薬剤、サイロキシン、エストロゲ
ン、エラストラジオール等の低分子ホルモン、ＣＥＡ、
ＡＦＰ、便中ヘモグロビン（ＦＯＢＴ）等の癌マーカ
ー、ヒト免疫不全ウイルス、（ＨＩＶ）、ヒト成人Ｔ細
胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈ
ＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）等のウイルス、甲
状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、インスリン等の高分子ホ
ルモン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６等のサイトカイ
ン、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ等の各種グロースファクター、更
に前記ウイルスの適当なＤＮＡ、ＲＮＡ等、ＣＲＰ等の
炎症に関連するタンパク質等の抗原、及びこれら抗原に
対する抗体である。前記抗原、抗体等の測定に用いられ
る検体としては、例えば全血、血清、血漿、尿、リンパ
液等の体液、便抽出液等を挙げることができる。
【００２６】
【実施例】以下、本発明を参考例及び実施例によりさら
に詳細に説明する。
に詳細に説明する。
【００２７】参考例１ ウサギ抗ヘモグロビンポリクロ
ーナル抗体（Ｆａｂ’）の作製 濃度１ｍｇ／ｍｌのウサギ抗ヘモグロビンポリクローナ
ル抗体（２００ｍＭ酢酸ソーダ緩衝液（ｐＨ４．２））
２ｍｌにペプシン（ベーリンガーマンハイム，コード：
１０８０５７）４０μｇを加え３７℃、１０時間インキ
ュベートした。ｐＨを７．０にあわせて予め０．１Ｍリ
ン酸ソーダ、１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ緩衝液（ｐＨ
７．０）で平衡化したスーパーデックスＧ−２００ゲル
ろ過カラム（ファルマシア，１６／６０）でＦ（ａ
ｂ’）2 、分子量１０万の画分を６００μｇ得た。この
Ｆ（ａｂ’）2 画分６００μｇに２−メルカプトエタノ
ールアミンを加え１０ｍＭとして３７℃、２時間インキ
ュベートし未反応の２−メルカプトエタノールアミンを
除きＦａｂ’画分５００μｇを得た。
ーナル抗体（Ｆａｂ’）の作製 濃度１ｍｇ／ｍｌのウサギ抗ヘモグロビンポリクローナ
ル抗体（２００ｍＭ酢酸ソーダ緩衝液（ｐＨ４．２））
２ｍｌにペプシン（ベーリンガーマンハイム，コード：
１０８０５７）４０μｇを加え３７℃、１０時間インキ
ュベートした。ｐＨを７．０にあわせて予め０．１Ｍリ
ン酸ソーダ、１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ緩衝液（ｐＨ
７．０）で平衡化したスーパーデックスＧ−２００ゲル
ろ過カラム（ファルマシア，１６／６０）でＦ（ａ
ｂ’）2 、分子量１０万の画分を６００μｇ得た。この
Ｆ（ａｂ’）2 画分６００μｇに２−メルカプトエタノ
ールアミンを加え１０ｍＭとして３７℃、２時間インキ
ュベートし未反応の２−メルカプトエタノールアミンを
除きＦａｂ’画分５００μｇを得た。
【００２８】参考例２ マレイミド化アルカリ性ホスフ
ァターゼの作製 ウシ小腸アルカリ性ホスファターゼ（オリエンタル酵
母）２．０ｍｇ（０．１Ｍリン酸ソーダ緩衝液（ｐＨ
７．０）に、ＤＭＦに溶解したＮ−スクシンイミジル−
４−マレイミド酪酸（ＧＭＢＳ，同仁化学）１０ｍｇ／
ｍｌを１６μｌ混合し、２５℃１時間インキュベート
し、未反応のＧＭＢＳを除きマレイミド化アルカリ性ホ
スファターゼ１４８０μｇを得た。
ァターゼの作製 ウシ小腸アルカリ性ホスファターゼ（オリエンタル酵
母）２．０ｍｇ（０．１Ｍリン酸ソーダ緩衝液（ｐＨ
７．０）に、ＤＭＦに溶解したＮ−スクシンイミジル−
４−マレイミド酪酸（ＧＭＢＳ，同仁化学）１０ｍｇ／
ｍｌを１６μｌ混合し、２５℃１時間インキュベート
し、未反応のＧＭＢＳを除きマレイミド化アルカリ性ホ
スファターゼ１４８０μｇを得た。
【００２９】参考例３ アルカリ性ホスファターゼ標識
ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体の製造 参考例１で作製したウサギ抗ヘモグロビンポリクローナ
ル抗体Ｆａｂ’画分５００μｇと参考例２で作製したマ
レイミド化アルカリ性ホスファターゼ１４００μｇを加
え２５℃２時間インキュベートした。スパーデックスＧ
−２００ゲルろ過カラム（ファルマシア，１６／６０）
によって平均分子量１９万の画分を４００μｇ得た。
ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体の製造 参考例１で作製したウサギ抗ヘモグロビンポリクローナ
ル抗体Ｆａｂ’画分５００μｇと参考例２で作製したマ
レイミド化アルカリ性ホスファターゼ１４００μｇを加
え２５℃２時間インキュベートした。スパーデックスＧ
−２００ゲルろ過カラム（ファルマシア，１６／６０）
によって平均分子量１９万の画分を４００μｇ得た。
【００３０】実施例１ ＦＯＢＴ測定用試験片 図２に示すように幅５ｍｍ、長さ５０ｍｍのセルロース
膜（ミリポア社製）の展開器材１２に上端から１５ｍｍ
の位置にウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体を塗
布装置で１．３３μｇをライン状に点着後乾燥して検出
ゾーン９を作製した。参考例３で製造したアルカリ性ホ
スファターゼ標識ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル
抗体溶液３００ｎｇを幅５ｍｍ、長さ５ｍｍに切ったポ
リビニルアルコール（ＰＶＡ）シートに点着し乾燥した
パットをマトリックスの上端から２５ｍｍの位置に置き
標識試薬ゾーン１８と検体点着ゾーン１７とした。吸収
パット２０として展開器材１２の上端１０ｍｍの位置に
幅１０ｍｍ、長さ２０ｍｍ、厚さ１ｍｍのろ紙（ミリポ
ア社製）を付設した。展開液１５には０．１ＭＣＨＥＳ
／ＮａＯＨ（ｐＨ１０．０）、１ｍＭＭｇＣｌ2 を添加
した。展開液槽１４には展開液１５を入れアルミシール
し分析開始まで密封した。展開器材１２の下端１０ｍｍ
の位置に、幅５ｍｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア社
製）のろ紙の上端に５−ブロモ−４−クロロ−３−イン
ドリルリン酸二ナトリウム（ＢＣＩＰ）１００μｇを添
加し乾燥させて基質ゾーン１３ａを設けた展開液供給ゾ
ーンを付設して免疫測定用試験片１１とした。この際、
以下の４種類の試験片を作製した。
膜（ミリポア社製）の展開器材１２に上端から１５ｍｍ
の位置にウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル抗体を塗
布装置で１．３３μｇをライン状に点着後乾燥して検出
ゾーン９を作製した。参考例３で製造したアルカリ性ホ
スファターゼ標識ウサギ抗ヘモグロビンポリクローナル
抗体溶液３００ｎｇを幅５ｍｍ、長さ５ｍｍに切ったポ
リビニルアルコール（ＰＶＡ）シートに点着し乾燥した
パットをマトリックスの上端から２５ｍｍの位置に置き
標識試薬ゾーン１８と検体点着ゾーン１７とした。吸収
パット２０として展開器材１２の上端１０ｍｍの位置に
幅１０ｍｍ、長さ２０ｍｍ、厚さ１ｍｍのろ紙（ミリポ
ア社製）を付設した。展開液１５には０．１ＭＣＨＥＳ
／ＮａＯＨ（ｐＨ１０．０）、１ｍＭＭｇＣｌ2 を添加
した。展開液槽１４には展開液１５を入れアルミシール
し分析開始まで密封した。展開器材１２の下端１０ｍｍ
の位置に、幅５ｍｍ、長さ２０ｍｍのろ紙（ミリポア社
製）のろ紙の上端に５−ブロモ−４−クロロ−３−イン
ドリルリン酸二ナトリウム（ＢＣＩＰ）１００μｇを添
加し乾燥させて基質ゾーン１３ａを設けた展開液供給ゾ
ーンを付設して免疫測定用試験片１１とした。この際、
以下の４種類の試験片を作製した。
【００３１】（１） 試験片（展開液＋）：展開液１５
に０．１ＭＣＨＥＳ／ＮａＯＨ（ｐＨ１０．０）４ｍＭ
リン酸１Ｎａ、１ｍＭＭｇＣｌ2 を加えた試験片 （２） 試験片（ろ紙＋）：展開液供給ゾーン１３の上
端にはＢＣＩＰとともに５０ｍＭリン酸Ｎａを添加し乾
燥させた試験片 （３） 試験片（展開液＋ろ紙＋）：展開液１５及び展
開液供給ゾーン１３にリン酸１Ｎａをそれぞれ４ｍＭ、
５０ｍＭ添加した試験片 （４） 試験片（展開液−ろ紙−）：展開液１５及び展
開液ゾーン１３にリン酸１Ｎａを添加しない試験片（比
較例）
に０．１ＭＣＨＥＳ／ＮａＯＨ（ｐＨ１０．０）４ｍＭ
リン酸１Ｎａ、１ｍＭＭｇＣｌ2 を加えた試験片 （２） 試験片（ろ紙＋）：展開液供給ゾーン１３の上
端にはＢＣＩＰとともに５０ｍＭリン酸Ｎａを添加し乾
燥させた試験片 （３） 試験片（展開液＋ろ紙＋）：展開液１５及び展
開液供給ゾーン１３にリン酸１Ｎａをそれぞれ４ｍＭ、
５０ｍＭ添加した試験片 （４） 試験片（展開液−ろ紙−）：展開液１５及び展
開液ゾーン１３にリン酸１Ｎａを添加しない試験片（比
較例）
【００３２】実施例２ ＦＯＢＴの測定 実施例１で作製した（１）〜（４）の４種類の試験片を
用いてＦＯＢＴの分析を行った。まず、室温にてヘモグ
ロビン２０ｎｇ／ｍｌ（陽性スタンダード）又は５ｎｇ
／ｍｌ（陰性スタンダード）である便抽出液２５μｌを
検体点着ゾーン１７に添加後、展開液槽１４のアルミシ
ールを破り展開液１５と展開液ゾーン１３を接触させる
ことにより測定を開始した。陽性スタンダード及び陰性
スタンダードの検出ゾーン１９の呈色の目視判定による
検出時間を測定するとともに、経時ごとにデジタルカメ
ラＲＤ−１７５（ミノルタ社製）にて写真撮影し画像処
理ソフトＥＤＡＳ（コスモバイオ社製）にて検出ゾーン
１９の呈色を測定した。
用いてＦＯＢＴの分析を行った。まず、室温にてヘモグ
ロビン２０ｎｇ／ｍｌ（陽性スタンダード）又は５ｎｇ
／ｍｌ（陰性スタンダード）である便抽出液２５μｌを
検体点着ゾーン１７に添加後、展開液槽１４のアルミシ
ールを破り展開液１５と展開液ゾーン１３を接触させる
ことにより測定を開始した。陽性スタンダード及び陰性
スタンダードの検出ゾーン１９の呈色の目視判定による
検出時間を測定するとともに、経時ごとにデジタルカメ
ラＲＤ−１７５（ミノルタ社製）にて写真撮影し画像処
理ソフトＥＤＡＳ（コスモバイオ社製）にて検出ゾーン
１９の呈色を測定した。
【００３３】実施例１の４種の試験片によるＦＯＢＴの
陽性スタンダード及び陰性スタンダードの検出ゾーン１
９の呈色の目視判定による検出時間を表１及び図３に示
す。また、実施例２の陽性及び陰性スタンダードの検出
ゾーン１９の呈色の時間依存性曲線をそれぞれ図４及び
図５に示す。
陽性スタンダード及び陰性スタンダードの検出ゾーン１
９の呈色の目視判定による検出時間を表１及び図３に示
す。また、実施例２の陽性及び陰性スタンダードの検出
ゾーン１９の呈色の時間依存性曲線をそれぞれ図４及び
図５に示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】図３に示すように試験片（展開液−ろ紙
−）（比較例）では陽性スタンダードと陰性スタンダー
ドの検出時間差が４１秒であったことに比較して、試験
片（展開液槽＋）や試験片（ろ紙＋）では陽性スタンダ
ードと陰性スタンダードの検出時間差がそれぞれ２０８
秒、３０６秒、試験片（展開液＋ろ紙＋）では陰性スタ
ンダードの呈色は１５分まで−判定であった。また、図
４及び５においては、試験片（展開液−ろ紙−）（比較
例）では経時ごとに呈色が増加していくのに対し、試験
片（展開液＋）や試験片（ろ紙＋）では時間経時ごとに
呈色の増加を抑制していた。さらに試験片（展開液＋ろ
紙＋）では陰性陽性判定時間以降の呈色がほぼ停止して
いることが確認された。
−）（比較例）では陽性スタンダードと陰性スタンダー
ドの検出時間差が４１秒であったことに比較して、試験
片（展開液槽＋）や試験片（ろ紙＋）では陽性スタンダ
ードと陰性スタンダードの検出時間差がそれぞれ２０８
秒、３０６秒、試験片（展開液＋ろ紙＋）では陰性スタ
ンダードの呈色は１５分まで−判定であった。また、図
４及び５においては、試験片（展開液−ろ紙−）（比較
例）では経時ごとに呈色が増加していくのに対し、試験
片（展開液＋）や試験片（ろ紙＋）では時間経時ごとに
呈色の増加を抑制していた。さらに試験片（展開液＋ろ
紙＋）では陰性陽性判定時間以降の呈色がほぼ停止して
いることが確認された。
【００３６】
【発明の効果】本発明の試験片を用いた酵素免疫測定方
法は、従来の測定法に比べ検出ゾーンでの発色が判定時
間以降で変化することが少ないため、所定の判定時間後
であっても判定を行うことができる。例えばＦＯＢＴの
分析においては陰性、陽性判定時間（８分）以降の発色
をほぼ停止するとによって、８分以降はいつでも判定を
行うことができる。従って本発明の方法では測定対象物
の陰性又は陽性の判定を発色の濃度差により結果を得る
測定に有効であり、時間の管理を行わずに簡便に測定を
実施することが可能となった。
法は、従来の測定法に比べ検出ゾーンでの発色が判定時
間以降で変化することが少ないため、所定の判定時間後
であっても判定を行うことができる。例えばＦＯＢＴの
分析においては陰性、陽性判定時間（８分）以降の発色
をほぼ停止するとによって、８分以降はいつでも判定を
行うことができる。従って本発明の方法では測定対象物
の陰性又は陽性の判定を発色の濃度差により結果を得る
測定に有効であり、時間の管理を行わずに簡便に測定を
実施することが可能となった。
【図１】本発明の試験片の好ましい態様の一例の断面図
である。
である。
【図２】本発明の実施例の試験片の断面図である。
【図３】本発明の試験片を用いたＦＯＢＴの陽性スタン
ダード（ヘモグロビン２０ｎｇ／ｍｌ）と陰性スタンダ
ード（ヘモグロビン５ｎｇ／ｍｌ）検体の検出時間を示
す表である。
ダード（ヘモグロビン２０ｎｇ／ｍｌ）と陰性スタンダ
ード（ヘモグロビン５ｎｇ／ｍｌ）検体の検出時間を示
す表である。
【図４】本発明の試験片を用いてＦＯＢＴの陽性スタン
ダード（ヘモグロビン２０ｎｇ／ｍｌ）検体を測定した
呈色の時間依存性曲線を示す図である。縦軸はMaximumI
ntensity とMean Background との差をプロットした。
ダード（ヘモグロビン２０ｎｇ／ｍｌ）検体を測定した
呈色の時間依存性曲線を示す図である。縦軸はMaximumI
ntensity とMean Background との差をプロットした。
【図５】本発明の試験片を用いてＦＯＢＴの陰性スタン
ダード（ヘモグロビン５ｎｇ／ｍｌ）検体を測定した呈
色の時間依存性曲線を示す図である。縦軸はMaximum In
tensity とMean Background との差をプロットした。
ダード（ヘモグロビン５ｎｇ／ｍｌ）検体を測定した呈
色の時間依存性曲線を示す図である。縦軸はMaximum In
tensity とMean Background との差をプロットした。
１ 免疫測定用試験片 ２ 展開器材 ３ 展開液供給ゾーン ４ 展開液槽 ６ 検体 ７ 検体点着ゾーン ８ 標識試薬ゾーン ９ 検出ゾーン １０ 吸水パット １３ 展開液供給ゾーン １３ａ 基質ゾーン １７ 検体点着ゾーン １８ 標識試薬ゾーン １９ 検出ゾーン
Claims (14)
- 【請求項１】 展開器材の検出ゾーンにおいて、酵素と
基質との反応による発色を酵素阻害剤を添加して判定時
間経過後は抑制することを特徴とする酵素免疫測定方
法。 - 【請求項２】 酵素がホスファターゼであり、酵素阻害
剤がリン酸化合物又はキレート化合物である請求項１記
載の測定方法。 - 【請求項３】 リン酸化合物がリン酸、リン酸塩、リン
酸モノエステル、ナフトールリン酸、グリセロールリン
酸、フェニルホスフェート、ホスフォエタノールアミ
ン、ホスフォリルコリン、フェナンスロリン又はグリコ
ースリン酸である請求項２記載の測定方法。 - 【請求項４】 キレート化合物がエチレンジアミン四酢
酸又はエチレングリコースビス四酢酸である請求項２記
載の測定方法。 - 【請求項５】 酵素がパーオキシダーゼであり、酵素阻
害剤が還元性化合物又はアジ化合物である請求項１記載
の測定方法。 - 【請求項６】 酵素がβ−ガラクトシダーゼであり、酵
素阻害剤ガラクトースである請求項１記載の測定方法。 - 【請求項７】 毛細管現象によって輸液可能な展開器材
の一端に展開液供給ゾーンを設け、該展開器材に酵素標
識試薬ゾーン、検体点着ゾーン及び検出ゾーンを設け、
輸液方向で酵素標識ゾーンの上流側に基質と酵素阻害剤
とを添加した酵素免疫測定用試験片。 - 【請求項８】 酵素阻害剤を展開液に添加した請求項７
記載の試験片。 - 【請求項９】 酵素標識ゾーンの上流側の展開器材に酵
素阻害剤ゾーンを設けた請求項８記載の試験片。 - 【請求項１０】 酵素がホスファターゼであり、酵素阻
害剤がリン酸化合物又はキレート化合物である請求項７
ないし９記載の試験片。 - 【請求項１１】 リン酸化合物がリン酸、リン酸塩、リ
ン酸モノエステル、ナフトールリン酸、グリセロールリ
ン酸、フェニルホスフェート、ホスフォエタノールアミ
ン、ホスフォリルコリン、フェナンスロリン又はグリコ
ースリン酸である請求項１０記載の試験片。 - 【請求項１２】 キレート化合物がエチレンジアミン四
酢酸又はエチレングリコースビス四酢酸である請求項１
０記載の試験片。 - 【請求項１３】 酵素がパーオキシダーゼであり、酵素
阻害剤が還元性化合物又はアジ化合物である請求項７な
いし９のいずれか１項記載の試験片。 - 【請求項１４】 酵素がβ−ガラクトシダーゼであり、
酵素阻害剤がガラクトースである請求項７ないし９記載
の試験片。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11864697A JP3334558B2 (ja) | 1997-04-23 | 1997-04-23 | 酵素免疫測定方法及び試験片 |
| US09/017,214 US6221625B1 (en) | 1997-04-23 | 1998-02-02 | Enzyme-labeled immunoassay and device therefor |
| ES98107362T ES2180092T3 (es) | 1997-04-23 | 1998-04-22 | Inmunoensayo marcado con una enzima y dispositivo para ello. |
| DE69806841T DE69806841T2 (de) | 1997-04-23 | 1998-04-22 | Enzym-markierter Immunoassay und Behelf hierfür |
| AT98107362T ATE221659T1 (de) | 1997-04-23 | 1998-04-22 | Enzym-markierter immunoassay und behelf hierfür |
| EP98107362A EP0874240B1 (en) | 1997-04-23 | 1998-04-22 | Enzyme-labeled immunoassay and device therefor |
| US09/778,864 US20010005585A1 (en) | 1997-04-23 | 2001-02-08 | Enzyme-labeled immunoassay and device therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11864697A JP3334558B2 (ja) | 1997-04-23 | 1997-04-23 | 酵素免疫測定方法及び試験片 |
Publications (2)
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