JPH10216106A - 肌質の評価方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 肌質の客観かつ正確な評価方法の提供。 【解決手段】 肌質の評価対象部位の皮膚由来の角層試
料中のインターロイキン１（ＩＬ−１）およびインター
ロイキン１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）
の存在量の多寡を肌質の指標とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、肌質の評価方法お
よびスキンケア手段の有効性評価方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】肌質（または皮膚の状態）を的確に把握
することは、より健康な皮膚を維持するための的確なス
キンケアをするうえで重要である。そのため、化粧品に
よるスキンケアを実施するに際し、例えば、美容専門家
による問診等を通じて、化粧品の使用者の肌質、特に肌
の敏感度等が評価されてきた。また、このような問診で
は、必ずしも肌質の客観点な評価ができないことから、
各種の分析機器等を使用して、観察または測定されるパ
ラメーターにより皮膚の状態または機能を評価すること
も行われている。

【０００３】このようなパラメーターの代表的なものと
しては、皮膚表面の鋳型（ネガティブレプリカ）を適当
に拡大した皮膚表面形態、角層の電導度（コンダクタン
ス）測定による角層水分量、経皮水分損失（ＴＷＬ）の
算定値による角層のバリアー機能、不完全な角質細胞の
出現頻度による不全角化度、等が挙げられる［例えば、
新化粧品学、光井武夫編、南山堂発行（１９９３年１月
１２日）参照］。

【０００４】一方、皮膚科的な領域では、外界からの異
物の侵入を防ぐ皮膚の物理的なバリアーとしての機能に
加えて、皮膚が重要な免疫反応の場であることも解明さ
れてきている。例えば、炎症性皮膚疾患における炎症反
応は表皮角化細胞、湿潤してきた炎症細胞が産生するサ
イトカインによって仲介されることが明らかにされてき
ている。

【０００５】各種サイトカインの中で、インターロイキ
ン１（本明細書では、「ＩＬ−１」と略記する場合があ
る）は、表皮角化細胞を初めとする細胞が産生する炎症
惹起性サイトカインの代表として研究されてきた。この
ＩＬ−１は正常角層中に多量に含まれており、角層が破
壊されるような外的、内的な機転が働くとＩＬ−１が放
出され、一連の炎症反応の引き金を引く重要な役割を担
っているものとみなされている。生体の恒常性を維持す
るため生体は前記炎症反応を抑制する機構をいくつか持
っている。その一つとしてＩＬ−１がその受容体に結合
するのを抑制するＩＬ−１レセプターアンタゴニスト
（本明細書では、「ＩＬ−１ｒａ」と略記する場合があ
る）が挙げられている。また、本発明者の一部は、皮膚
の存在する身体の部位によって、それらの角層中のＩＬ
−１およびＩＬ−１ｒａの量比が有意に相違することを
明らかにした（T. Hirao ら、J. Invest. Dermatol.,１
０６：１１０２−１１０７，１９９６）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】上述のように、肌質を
ある程度客観的に評価するためのいくつかの方法が提案
されている。しかし、全く異なる観点から肌質を評価す
る手段に対する要望は依然として存在する。したがっ
て、本発明の目的は、従来の方法とは本質的に異なるパ
ラメーターに基づく肌質の評価方法を提供することにあ
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、皮膚、特
に角層の状態を細胞レベルで解明すべく検討を行ってき
た。その結果、角層中のＩＬ−１およびＩＬ−１ｒａの
存在量は、角層が由来する部位によって量比が有意に異
なる（上述の T. Hirao ら、参照）だけでなく、肌質を
も反映することを見い出した。

【０００８】したがって、上記課題は、本発明に従う肌
質の評価対象部位の皮膚由来の角層試料における、ＩＬ
−１およびＩＬ−１ｒａの存在量の多寡を肌質の指標と
することを特徴とする肌質の評価方法、を提供すること
により解決できる。

【０００９】また、本発明の好ましい態様としては、
（Ａ） 被験者の評価対象部位の皮膚由来の角層試料を
用意する工程、（Ｂ） 用意した角層試料中のＩＬ−１
およびＩＬ−１ｒａの存在量を測定する工程、（Ｃ）
前記存在量からＩＬ−１とＩＬ−１ｒａとの間の比率を
算出する工程、（Ｄ） 工程（Ｃ）で算出された比率
を、被験者以外の対応する角層試料について工程（Ａ）
〜（Ｃ）と同様の工程を介して得られた比率と比較する
工程、を含んでなる肌質の評価方法、を挙げることがで
きる。

【００１０】かかる評価方法によれば、例えば上記工程
（Ｄ）の被験者以外の対応する角質試料からの比率が、
安定肌の複数人から得られる平均値（例えば、ＩＬ−１
ｒａ／ＩＬ−１の値）である場合、被験者の評価対象部
位の皮膚におけるＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の値が安定肌
の平均値より有意に高いときは、被験者の肌質は敏感肌
ないしは肌荒れが生じているものと評価できる。

【００１１】

【発明の具体的な態様】本発明にいう「肌質」とは、皮
膚の状態を指す美容用語であって、皮膚科領域でいう、
皮膚の正常、異常を指す概念を除く意味である。本明細
書では、具体的には、「肌質」とは所謂、安定肌、それ
に対する敏感肌ないしは肌荒れの生じている皮膚等の状
態を表示する概念として使用されている。また、本明細
書において「ＩＬ−１」は、ＩＬ−１αを表示する目的
で使用されている。

【００１２】本発明における評価対象部位は、その目的
上、非侵襲的な方法により角層試料が入手できる部位で
あれば、いかなる部位をも包含しうるが、典型的な部位
としては顔面の頬、額、手の甲などを挙げることができ
る。これらの部位の皮膚由来の角層試料は、非侵襲的な
方法として、該当技術分野で常用されているテープスト
リッピング、擦過等により採取された試料に由来するも
のを好ましく使用することができる。

【００１３】こうして用意した各試料におけるＩＬ−１
およびＩＬ−１ｒａの存在量は、各試料からそれ自体既
知の生化学的方法、たとえば凍結融解法、超音波破砕法
等を介して可溶性画分を調製する抽出方法によってＩＬ
−１またはＩＬ−１ｒａを抽出した後に、測定するのが
好ましい。

【００１４】ＩＬ−１の測定は、それ自体既知の、リン
パ球増殖反応等を指標としたバイオアッセイ法や、ＩＬ
−１に対する抗体との反応性に基づくエンザイムイムノ
アッセイ、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロッテ
ィング等の方法を用いることができる。ＩＬ−１ｒａの
測定は、リンパ球増殖反応の阻害等を指標としたバイオ
アッセイ法や、ＩＬ−１ｒａに対する抗体との反応性に
基づくエンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノアッセ
イ、ウエスタンブロッティング等の方法を用いて行うこ
とができる。いずれの方法によってもＩＬ−１の測定お
よびＩＬ−１ｒａの測定が可能であるが、操作の簡便
性、感度、設備等の点から、上記抗体を用いるエンザイ
ムイムノアッセイによる方法が好ましい。

【００１５】以上により評価対象部位の角層試料につい
て測定されたＩＬ−１およびＩＬ−１ｒａの値から、Ｉ
Ｌ−１／ＩＬ−１ｒａまたはＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の
比率を算出し、得られた値を、通常、安定肌を有するこ
とが知られているヒトの対応する角層試料について、予
め測定されたか、あるいは同時にまたはその後に測定し
て、同様に得られる値と比較する。後者の値は、複数人
のデータからの平均値を使用することが、客観的な評価
ができるので好ましい。

【００１６】本発明によれば、こうして比較した結果、
例えば評価対象の皮膚のＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の比率
が健全な肌質の皮膚のＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の比率よ
り有意に大きい場合には、前者の肌質は、肌荒れ、敏感
肌等の何等かの皮膚トラブルを有すると評価できる。

【００１７】以上の肌質の評価方法における評価対象部
位の値と健全な肌質（安定肌）を有する人からの値との
比較に代え、同一人において、一定のスキンケア手段が
施される前後の皮膚に由来する角層試料間におけるＩＬ
−１とＩＬ−１ｒａの存在量の比率の比較を行うことも
できる。この場合、例えばスキンケア手段が施された後
のＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の値が、それ以前のＩＬ−１
ｒａ／ＩＬ−１の値よりも有意に小さいときは、当該ス
キンケア手段は肌質の改善に有効であるものと評価でき
る。従って、本発明によれば、皮膚に対して施されたス
キンケア手段の評価方法も提供される。かかるスキンケ
ア手段としては、スキンケアクリーム、スキンケアロー
ション等の皮膚への施用を具体的なものとして挙げるこ
とができるが、それらに限定されない。

【００１８】

【実施例】以下、本発明を実施例を引用しながらさらに
具体的に説明する。

【００１９】（角層試料の用意および測定試料の調製
例）安定肌または肌荒れ、敏感肌等の皮膚トラブルを有
する被験者の顔面（頬）に粘着性セロハンテープを貼付
して直ちに剥離した。テープに付着した角層にリン酸緩
衝生理食塩液を加えて、超音波処理を施した後、遠心分
離により、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１ｒａを含む可溶性
タンパク質画分を得た。

【００２０】上記それぞれの試料に対する操作は、以
下、具体的に記載する共通の方法によって行った。

【００２１】角層の採取は、I. Horii ら、Br. J. Derm
atol., １２１：５８７−５９２（１９８９）に記載の
方法を若干改良して行った。まず、粘着性テープ片を試
料採取部によく貼付し、そのテープ片を剥がした。この
テープ片（２４ｍｍ×４５ｍｍ）を細断した後、ペニシ
リン、ストレプトマイシンおよび Fungizone（Gibco
製）を補足したダルベッコのリン酸緩衝生理食塩液に浸
漬し、抽出を行うまで−２０℃で貯蔵した。抽出は、前
記浸漬液をプローブを備えた超音波処理器（Astrason,
Heat Systems-Ultrasonics製）を用い、氷上で２分間処
理して行った。不溶物を、４℃で１０分間１４,０００
ｇの遠心により除去した。こうして、得られた上澄を以
下に実験に供した。

【００２２】（ＩＬ−１およびＩＬ−１ｒａの測定例）
上述の方法で調製した角層試料（上澄）中のＩＬ−１、
ＩＬ−１ｒａの測定は、それぞれＩＬ−１、ＩＬ−１ｒ
ａ測定用エンザイムイムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）キッ
ト（Ｒ＆Ｄ Systems社製）を用いて行った。

【００２３】試料中のＩＬ−１ｒａを測定する場合は、
上記上澄をキットに備えられている希釈液で１０倍希釈
した。ＥＬＩＳＡの結果は、吸光度を Titertek Multis
can（Labsytems 製）で測定した。

【００２４】採取される角層の量は、測定対象部位、皮
膚の状態により異なるため、測定試料中のタンパク質を
Bradford 法（MM. Bradford, Anal. Biochem.,７２：
２４８−２５４，１９７６）により測定し、タンパク質
量あたりのＩＬ−１あるいはＩＬ−１ｒａを算出し、角
層中ＩＬ−１値、ＩＬ−１ｒａ値とした。また、生物活
性の指標となるＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１比を算出した。

【００２５】（他の皮膚生理パラメーターの測定）角層
の電導度（コンダクタンス）測定による角層水分量は、
ＳＫＩＣＯＮ−１００（Ｉ．Ｂ．Ｓ．株式会社製）によ
り測定した。

【００２６】経表皮水分喪失量（Transepidermal Water
Loss：ＴＷＬ）は、エバポリメーターＥＰ１（ＳＥＲ
ＶＯ ＭＥＤ製）により測定した。角層ターンオーバー
は、Takahashi らの方法（文献：J. Soc. Cosmet. Che
m. Japan., Vol. 20(3), 144-200, 1986）に準じて、角
層細胞サイズにより測定した（角層細胞サイズは角層タ
ーンオーバーの亢進に伴って小さくなる)。なお、ＴＷ
Ｌおよび角層ターンオーバーは、肌荒れに伴って亢進す
ることが知られている皮膚生理パラメーターである。

【００２７】（複数被験者の角層試料中ＩＬ−１値、Ｉ
Ｌ−１ｒａ値、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の値と他の皮膚
生理パラメーターとの相関） （１） 各種皮膚状態の被験者（４１名）について、Ｉ
Ｌ−１、ＩＬ−１ｒａおよびＴＷＬを、それぞれ測定
し、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の値を縦軸に、そしてＴＷ
Ｌの値を横軸にとり、プロットしたグラフを図１に示
す。

【００２８】このグラフから、相関係数の有意性の検定
を行ったところ、Ｐ＜０.０１で有意であることが判明
した（なお、ｙ＝４２.３２９ｘ−１１９.７０２ｒ＝
０.４４０）。すなわち、顔面角層試料中のＴＷＬ値と
ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の比率とは有意な相関性を示
す。このことから、本発明に従う、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ
−１の比率は、角層のバリア機能の指標となりうること
が理解できる。

【００２９】（２） 各種皮膚状態の被験者（６３名）
について、ＩＬ−１、ＩＬ−１ｒａおよび角層サイズを
測定し、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の値を縦軸に、そして
角層サイズを横軸にとり、プロットしたグラフを図２に
示す。

【００３０】このグラフから、相関係数の有意性の検定
を行ったところ、ｐ＜０.０５で有意であることが判明
した（なお、ｙ＝−９８.４６２ｘ＋１１３６.８８７ｒ
＝−０.２５１）。すなわち、角層サイズと角層中のＩ
Ｌ−１ｒａ／ＩＬ−１の値との間には負の有意な相関性
があることを示す。具体的には、角層サイズが小さくな
ると角層中のＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１の値は大きくなる
ことが理解できる。

【００３１】（被験者の角層試料中のＩＬ−１ｒａ／Ｉ
Ｌ−１の値と問診による肌の敏感度との相関）被験者
（３３名）を自己申告に基づいて敏感肌群と安定肌群に
グループ分けし、それぞれのグループに属する被験者の
頬の角層水分量、ＴＷＬおよび角層試料中のＩＬ−１お
よびＩＬ−１ｒａを測定し、それぞれのパラメーターの
平均値を求めた。結果を下記表Ｉに示す。

【００３２】

【表１】

【００３３】

【発明の効果】本発明に従えば、非侵襲的方法により採
取できる角層試料中のＩＬ−１およびＩＬ−１ｒａを測
定し、それらの測定値から算定された比率により、被験
者の肌質を客観、かつ正確に評価できる方法が提供され
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】各種被験者の角層試料中のＩＬ−１ｒａ／ＩＬ
−１の値と、ＴＷＬの値との間の関連性を示すグラフで
ある。

【図２】各種被験者の角層試料中のＩＬ−１ｒａ／ＩＬ
−１の値と、角層サイズとの間の関連性を示すグラフで
ある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 市川 秀之 神奈川県横浜市港北区新羽町1050 株式会 社資生堂第一リサーチセンター内 (72)発明者 平尾 哲二 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株 式会社アドバンストスキンリサーチ研究所 内 (72)発明者 横山 智子 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株 式会社アドバンストスキンリサーチ研究所 内 (72)発明者 佐藤 悦久 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株 式会社アドバンストスキンリサーチ研究所 内

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 肌質の評価対象部位の皮膚由来の角層試
   料における、インターロイキン１（ＩＬ−１）およびイ
   ンターロイキン１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１
   ｒａ）の存在量の多寡を肌質の指標とすることを特徴と
   する肌質の評価方法。
2. 【請求項２】 （Ａ） 被験者の評価対象部位の皮膚由
   来の角層試料を用意する工程、 （Ｂ） 用意した角層試料中のＩＬ−１およびＩＬ−１
   ｒａの存在量を測定する工程、 （Ｃ） 前記存在量からＩＬ−１とＩＬ−１ｒａとの間
   の比率を算出する工程、 （Ｄ） 工程（Ｃ）で算出された比率を、被験者以外の
   対応する角層試料について工程（Ａ）〜（Ｃ）と同様の
   工程を介して得られた比率と比較する工程、を含んでな
   る請求項１記載の評価方法。
3. 【請求項３】 前記工程（Ｄ）の被験者以外の対応する
   角層試料からの比率が、安定肌を有する複数人から得ら
   れる平均値である請求項２記載の評価方法。
4. 【請求項４】 評価対象部位の皮膚に由来する角層試料
   が、テープストリッピングもしくは擦過を介して採取さ
   れた試料に由来する請求項２または３記載の評価方法。
5. 【請求項５】 請求項１記載の肌質の評価方法を、一定
   のスキンケア手段が施される前後の皮膚に由来する角層
   試料に対して実施し、両角層試料中のＩＬ−１とＩＬ−
   １ｒａの存在量の比率を比較し、それらの差異を前記ス
   キンケア手段の有効性の指標とすることを特徴とするス
   キンケア手段の有効性評価方法。