JPH10170508A - 血液濾過方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ヘマトクリット値によらず血液から溶血
をほとんど起こさず血漿や血清を安定して濾過できる血
液濾過方法を提供する。 【解決手段】 上記課題は、少なくともガラス繊維濾紙
と微多孔性膜が積層されている血液濾過材料を用いて血
液を吸引濾過するに際し、濾過の途中で一旦吸引を減速
あるいは停止し、その後吸引を再開することを特徴とす
る血液濾過方法によって解決される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は全血から血漿または
血清試料を調製する血液濾過方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】血液中の構成成分例えば代謝産物、蛋白
質、脂質、電解質、酵素、抗原、抗体などの種類や濃度
の測定は通常全血を遠心分離して得られる血漿または血
清を検体として行われている。ところが、遠心分離は手
間と時間がかかる。特に少数の検体を急いで処理したい
ときや、現場検査などには、電気を動力とし、遠心分離
機を必要とする遠心法は不向きである。そこで、濾過に
より全血から血漿を分離する方法が検討されてきた。

【０００３】この濾過方法には、ガラス繊維濾紙をカラ
ムに充填し、カラムの一方から全血を注入し、加圧や減
圧を行なって他方から血漿や血清を得るいくつかの方法
が公知化されている（特公昭４４−１４６７３号公報、
特開平２−２０８５６５号公報、特開平４−２０８８５
６号公報、特公平５−５２４６３号公報等）。これらは
いずれも定常的な加圧や減圧を行なって連続濾過するも
のである。

【０００４】しかし、全血から濾過により自動分析等に
よる測定に必要な量の血漿または血清を得る方法に関し
ては血糖など一部の項目を除いては、いまだ試行の段階
にあり、広く実用化されるに至っていない。

【０００５】そこで、本発明者らは先に、微量な血液で
あっても血漿や血清を効率よく分離しうる血液濾過ユニ
ットとして、濾材にガラス繊維濾紙と微多孔性膜を組み
合わせるとともに濾材の血漿出口側にシール部材を設け
て濾過材料の開口面積を狭めた血液濾過ユニットを完成
し、これを特許出願した（特願平８−７６９２号）。ま
た、その吸引側に血漿受槽を設けたものも既に開発した
（特願平８−９１６２１号）。これらも定常的な吸引を
行なって連続濾過するものである。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
血液濾過材料を用いた濾過では溶血が起こっており、特
にヘマトクリット値の大きな血液では溶血の量が大きく
なっていた。

【０００７】本発明の目的は、ヘマトクリット値によら
ず血液から溶血をほとんど起こさず血漿や血清を安定し
て濾過できる血液濾過方法を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するべく鋭意検討の結果、血液濾過時の溶血は主に
ガラス繊維濾紙内で血球がガラス繊維に引掛かって変形
し、濾過の進行に従ってこの変形がひどくなって終には
破壊されて溶血を起こしていることを見出した。そこで
さらに検討を進め、この対策として濾過の途中で一旦吸
引を止めると血球の形が元に戻って変形度が少なくな
り、濾過時の溶血が少なくなることを見出した。

【０００９】すなわち、本発明は、少なくともガラス繊
維濾紙と微多孔性膜が積層されている血液濾過材料を用
いて血液を吸引濾過するに際し、濾過の途中で一旦吸引
を減速あるいは停止することを特徴とする血液濾過方法
に関するものである。減速あるいは停止後に吸引を再開
してもよい。

【００１０】

【発明の実施の形態】ガラス繊維濾紙は密度が０．０２
〜０．３程度、好ましくは０．０５〜０．２程度、特に
好ましくは０．０７〜０．１５程度で、保留粒子径が
０．８〜９μｍ程度、特に１〜５μｍ程度のものが好ま
しい。ガラス繊維の表面を、特開平２−２０８５６５号
公報、同４−２０８８５６号公報に記載された様な方法
で、親水性高分子で処理することによって濾過をより速
やかに円滑に行なうことができる。また、ガラス繊維の
表面をレクチンで処理することもできる。ガラス繊維濾
紙は複数枚と積層して用いることができる。

【００１１】表面を親水化されており血球分離能を有す
る微多孔性膜は、実質的に分析値に影響を与える程には
溶血することなく、全血から血球と血漿や血清を特異的
に分離するものである。この微多孔性膜は孔径がガラス
繊維濾紙の保留粒子径より小さくかつ０.２μｍ以上、
好ましくは０.３〜５μｍ程度、より好ましくは０．５
〜３μｍ程度のものが適当である。また、空隙率は高い
ものが好ましく、具体的には、空隙率が約４０％から約
９５％、好ましくは約５０％から約９５％、さらに好ま
しくは約７０％から約９５％の範囲のものが適当であ
る。微多孔性膜の例としてはポリスルホン膜、弗素含有
ポリマー膜等がある。

【００１２】弗素含有ポリマーの微多孔性膜としては、
特表昭６３−５０１５９４号公報（ＷＯ ８７／０２２
６７)に記載のポリテトラフルオロエチレンのフィブリ
ル（微細繊維）からなる微多孔性のマトリックス膜（微
多孔性層）、Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ（Ｗ.Ｌ.Ｇｏｒｅ ａｎ
ｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社製）、Ｚｉｔｅｘ（Ｎｏｒ
ｔｏｎ社製）、ポアフロン(住友電工社製）などがあ
る。その他に、ＵＳ ３２６８８７２(実施例３及び
４）、ＵＳ ３２６０４１３(実施例３及び４)、特開昭
５３−９２１９５(ＵＳ ４２０１５４８）等に記載のポ
リテトラフルオロエチレンの微多孔性膜、ＵＳ ３６４
９５０５に記載のポリビニリデンフルオリドの微多孔性
膜などがある。

【００１３】これらの弗素含有ポリマーの微多孔性膜の
作成に当たっては、１種もしくは２種以上の弗素含有ポ
リマーを混合しても良いし、弗素を含まない１種もしく
は２種以上のポリマーや繊維と混合し、製膜したもので
あつても良い。

【００１４】構造としては、延伸しないもの、１軸延伸
したもの、２軸延伸したもの、１層構成の非ラミネート
タイプ、２層構成のラミネートタイプ、例えば繊維等の
他の膜構造物にラミネートした膜等がある。

【００１５】フイブリル構造又は一軸延伸もしくは二軸
延伸した非ラミネートタイプの微多孔性膜は、延伸によ
り、空隙率が大きくかつ濾過長の短い微多孔膜が作られ
る。濾過長が短い微多孔膜では、血液中の有形成分（主
として赤血球）による目詰りが生じがたく、かつ血球と
血漿の分離に要する時間が短いので、定量分析精度が高
くなるという特徴がある。

【００１６】弗素含有ポリマーの微多孔性膜は特開昭５
７−６６３５９号公報(ＵＳ ４７８３３１５）に記載の
物理的活性化処理（好ましくはグロー放電処理又はコロ
ナ放電処理）を微多孔膜層の少なくとも片面に施すこと
により微多孔性膜の表面を親水化して、隣接する微多孔
性膜との部分接着に用いられる接着剤の接着力を強化す
ることができる。

【００１７】弗素含有ポリマーの微多孔性膜は、そのま
までは、表面張力が低く乾式分析要素の血球濾過層とし
て用いようとしても、水性液体試料ははじかれてしまっ
て、膜の表面や内部に拡散、浸透しないことは、周知の
事実である。本発明では、第１の手段として弗素含有ポ
リマーの微多孔性膜に親水性を付与し親水性を高める手
段として、弗素含有ポリマーの微多孔性膜の外部表面及
び内部の空隙の表面を実質的に親水化するに充分な量の
界面活性剤を弗素含有ポリマーの微多孔性膜に含浸させ
ることにより、前記の水性液体試料がはじかれる問題点
を解決した。

【００１８】水性液体試料がはじかれることなく膜の表
面や内部に拡散、浸透、移送されるに充分な親水性を弗
素含有ポリマーの微多孔性膜に付与するには、一般に、
弗素含有ポリマーの微多孔性膜の空隙体積の約０．０１
％から約１０％、好ましくは約０．１％から約５．０
％、更に好ましくは０．１％から１％の界面活性剤で微
多孔性膜の空隙の表面が被覆されることが必要である。
例えば、厚さが５０μｍの弗素含有ポリマーの微多孔性
膜の場合に、含浸される界面活性剤の量は、一般に０．
０５ｇ／ｍ²から２．５ｇ／ｍ²の範囲であることが好ま
しい。弗素含有ポリマーの微多孔性膜に界面活性剤を含
浸させる方法としては、界面活性剤の低沸点（沸点約５
０℃から約１２０℃の範囲が好ましい）の有機溶媒
（例、アルコール、エステル、ケトン）溶液に弗素含有
ポリマーの微多孔性膜を浸漬し、溶液を微多孔性膜の内
部空隙に実質的に充分に行きわたらせた後、微多孔性膜
を溶液から静かに引き上げ、風(温風が好ましい)を送り
乾燥させる方法が一般的である。

【００１９】弗素含有ポリマーの微多孔性膜を親水性化
処理に用いられる界面活性剤としては、非イオン性（ノ
ニオン性）、陰イオン性（アニオン性）、陽イオン性
（カチオン性）、両性いずれの界面活性剤をも用いるこ
とができる。

【００２０】これらの界面活性剤のうちでは、ノニオン
性界面活性剤が、赤血球を溶血させる作用が比較的低い
ので、全血を検体とするための多層分析要素においては
有利である。ノニオン性界面活性剤としては、アルキル
フェノキシポリエトキシエタノール、アルキルポリエー
テルアルコール、ポリエチレングリコールモノエステ
ル、ポリエチレングリコールジエステル、高級アルコー
ルエチレンオキシド付加物（縮合物）、多価アルコール
エステルエチレンオキシド付加物（縮合物）、高級脂肪
酸アルカノールアミドなどがある。

【００２１】ノニオン性界面活性剤の具体例として、次
のものがある。アルキルフェノキシポリエトキシエタノ
ールとしては、 イソオクチルフェノキシポリエトキシエタノール：（Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００：オキシエチレン単位平均９〜
１０含有） （Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−４５：オキシエチレン単位平均５
含有） ノニルフェノキシポリエトキシエタノール：(ＩＧＥＰ
ＡＬ ＣＯ−６３０：オキシエチレン単位平均９含有） (ＩＧＥＰＡＬ ＣＯ−７１０：オキシエチレン単位平均
１０〜１１含有） (ＬＥＮＥＸ６９８：オキシエチレン単位平均９含有）

【００２２】アルキルポリエーテルアルコールとして
は、 高級アルコール ポリオキシエチレンエーテル：（Ｔｒ
ｉｔｏｎ Ｘ−６７：ＣＡ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｏ．５
９０３０−１５−８）

【００２３】弗素含有ポリマーの微多孔性膜は、その多
孔性空間に水不溶化した１種又は２種以上の水溶性高分
子を設けることによって親水化したものであってもよ
い。水溶性高分子の例として、酸素を含む炭化水素には
ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキサイド、ポリ
エチレングリコール、メチルセルロース、エチルセルロ
ース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、窒素を含むものにはポリアクリルアミ
ド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアミン、ポリエ
チレンイミン、負電荷を有するものとしてポリアクリル
酸、ポリメタアクリル酸、ポリスチレンスルホン酸など
をあげることが出来る。不溶化は熱処理、アセタール化
処理、エステル化処理、重クロム酸カリによる化学反
応、電離性放射線による架橋反応等によって行えばよ
い。詳細は、特公昭５６−２０９４号公報及び特公昭５
６−１６１８７号公報に開示されている。

【００２４】ポリスルホンの微多孔性膜は、ポリスルホ
ンをジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルム
アミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロ
リドンあるいはこれらの混合溶媒等に溶解して製膜原液
を作製し、これを支持体上に、又は直接凝固液中に流延
し洗浄、乾燥して行うことにより製造することができ
る。詳細は特開昭６２−２７００６号公報に開示されて
いる。ポリスルホンの微多孔性膜は、そのほか特開昭５
６−１２６４０号公報、特開昭５６−８６９４１号公
報、特開昭５６−１５４０５１号公報等のも開示されて
おり、それらも使用することができる。ポリスルホンの
微多孔性膜も弗素含有ポリマーと同様界面活性剤を含有
させ、あるいは水不溶化した水溶性高分子を設けること
によって親水化することができる。

【００２５】その他の非繊維微多孔性膜としては、特公
昭５３−２１６７７号、米国特許１,４２１,３４１号等
に記載されたセルロースエステル類、例えば、セルロー
スアセテート、セルロースアセテート／ブチレート、硝
酸セルロースからなるブラッシュポリマー膜が好まし
い。６−ナイロン、６，６−ナイロン等のポリアミド、
ポリエチレン、ポリプロピレン等の微多孔性膜でもよ
い。その他、特公昭５３−２１６７７号、特開昭５５−
９０８５９号等に記載された、ポリマー小粒子、ガラス
粒子、けい藻土等が親水性または非吸水性ポリマーで結
合された連続空隙をもつ多孔性膜も利用できる。

【００２６】非繊維微多孔性膜の有効孔径は０.２〜１
０μｍ、好ましくは０.３〜５μｍ、特に有効なのは
０．５〜３μｍである。本発明で非繊維微多孔性膜の有
効孔径は、ＡＳＴＭ Ｆ３１６−７０に準拠した限界泡
圧法(バブルポイント法）により測定した孔径で示す。
非繊維微多孔性膜が相分離法により作られたいわゆるブ
ラッシュ・ポリマーから成るメンブランフィルターであ
る場合、厚さ方向の液体通過経路は、膜の製造の際の自
由表面側（即ち光沢面）で最も狭くなっているのが普通
で、液体通過経路の断面を円に近似したときの孔径は、
自由表面の近くで最も小さくなっている。容積の通過経
路における厚さ方向に関する最小孔径は、さらにフィル
ターの面方向について分布を持っており、その最大値が
粒子に対する濾過性能を決定する。通常、それは限界泡
圧法で測定される。

【００２７】上に述べたように、相分離法により作られ
たいわゆるブラッシュ・ポリマーから成るメンブランフ
ィルターでは、厚さ方向の液体通過経路は膜の製造の際
の自由表面側（即ち光沢面）で最も狭くなっている。本
発明の分析素子の非繊維微多孔性膜としてこの種の膜を
用いる場合には、出口側を、メンブランフィルターの光
沢面とすることが好ましい。

【００２８】本発明で使用される血液濾過材料には、ガ
ラス繊維濾紙と微多孔性膜に加えて第３の濾過材料を追
加することができる。この第３の濾過材料の例として
は、濾紙、不織布、織物生地（例えば平織生地）、編物
生地（例えば、トリコット編）等、繊維質多孔性層を挙
げることができる。これらのうち織物、編物等が好まし
い。織物等は特開昭５７−６６３５９号に記載されたよ
うなグロー放電処理をしてもよい。この第３の濾過材料
はガラス繊維濾紙と微多孔性膜の中間に配置することが
好ましい。

【００２９】好ましい微多孔性膜はポリスルホン膜、酢
酸セルローズ膜等であり、特に好ましいのはポリスルホ
ン膜である。本発明の血液濾過材料においてはガラス繊
維濾紙が血液供給側に配置され、微多孔性膜が吸引側に
配置される。最も好ましい血液濾過材料は血液供給側か
らガラス繊維濾紙、ポリスルホン膜をこの順に積層した
積層体である。

【００３０】本発明の濾過材料では、その表面のみで血
球をトラップする訳ではなく、ガラス繊維濾紙の厚さ方
向に浸透するに従って、初めは大きな血球成分、後には
小さな血球成分と徐々に空隙構造にからめ、厚さ方向に
全長にわたって血球を留め除去していく、いわゆる体積
濾過作用によるものと理解される。

【００３１】本方式により濾過し得る全血の量は、ガラ
ス繊維濾紙中に存在する空間体積と全血中の血球の体積
に大きく影響される。ガラス繊維濾紙の密度が高い（粒
子保持孔径が小さい）と赤血球がガラス繊維濾紙の表面
近傍にトラップされるので、表面からごく浅い領域でガ
ラス繊維濾紙中の空間が閉塞状態になってしまうことが
多い。従って、それ以上の濾過が進まず、結果として濾
過、回収し得る血漿量も少なくなる。この際、回収血漿
量を増やそうとして更に強い条件で吸引すると、血球の
破壊、すなわち溶血が起きてしまう。つまり表面濾過に
近いプロセスとなり、濾紙の空間体積利用効率は低い。

【００３２】これに対し、ガラス繊維濾紙の密度を低く
すると、血球は濾紙の深部（出口に近い領域）まで浸透
していき血漿が通過できる空間が増すので、濾紙全体の
空間体積が有効に利用され、回収される血漿の量も多く
なる。

【００３３】空間体積あるいは血漿濾過量に対応する指
標として、透水速度が有効である。透水速度は、入口と
出口をチューブに接続できるように絞った濾過ユニット
中に一定面積のガラス繊維濾紙を密閉保持し、一定量の
水を加えて一定圧力で加圧または減圧したときの、単位
面積あたりの濾過量を速度で表したものであり、ｍｌ／
ｓｅｃ等の単位を持つ。

【００３４】具体例としては、濾過ユニット中に直径２
０ｍｍのガラス繊維濾紙をセットし、その上に１００ｍ
ｌの注射筒をたてて６０ｍｌの水を入れて自然流下さ
せ、開始後１０秒と４０秒の間の３０秒間にガラス濾紙
中を通り抜けた水の量をもって透水量とし、これから単
位面積あたりの透水速度を算出する。

【００３５】血漿の濾過に特に適しているのは透水速度
が１．０〜１．３ｍｌ／ｓｅｃ程度のもので、例えば、
ワットマン社ＧＦ／Ｄ、東洋濾紙ＧＡ−１００、同ＧＡ
−２００等がある。さらに、市販のガラス繊維濾紙を熱
水中で再分散してナイロンネット上で再抄紙して低密度
濾紙（密度約０．０３）を作製することもでき、これは
良好な血漿濾過特性を示す。

【００３６】ガラス繊維濾紙の厚さは、回収すべき血漿
量とガラス繊維濾紙の密度（空隙率）及び面積から定め
られる。分析を乾式分析素子を用いて複数項目行なう場
合の血漿の必要量は１００〜５００μｌであり、ガラス
繊維濾紙の密度が０．０５〜０．２程度、面積が１〜５
ｃｍ²程度が実用的である。この場合ガラス繊維濾紙の
厚さは１〜１０ｍｍ程度、好ましくは２〜８ｍｍ程度、
より好ましくは４〜６ｍｍ程度である。このガラス繊維
濾紙は複数枚、例えば２〜１０枚程度、好ましくは２〜
６枚程度を積層して上記厚さとすることができる。

【００３７】微多孔性膜の厚さは０．０５〜０．３ｍｍ
程度、特に０．１〜０．２ｍｍ程度でよく、通常は１枚
の微多孔性膜を用いればよい。しかしながら、必要によ
り複数枚を用いることもできる。

【００３８】血液濾過材料は通常はホルダーに入れて使
用される。このホルダーには血液入口と濾過液出口が設
けられ、一般に血液濾過材料を収容する本体と、蓋体に
分けた態様で作製される。通常は、いずれにも少なくと
も１個の開口が設けられていて、一方は血液供給口とし
て、場合により更に加圧口として、他方は吸引口とし
て、場合により更に濾過された血漿または血清の排出口
として使用される。濾過された血漿または血清の排出口
を別に設けることもできる。ホルダーが四角形で蓋体を
側面に設けた場合には血液供給口と吸引口の両方を本体
に設けることができる。

【００３９】血液濾過材料収納部の容積は、収納すべき
ろ過材料の乾燥状態および検体（全血）を吸収し膨潤し
た時の総体積より大きい必要がある。ろ過材料の総体積
に対して収納部の容積が小さいと、ろ過が効率良く進行
しなかったり、溶血を起こしたりする。収納部の容積の
ろ過材料の乾燥時の総体積に対する比率はろ過材料の膨
潤の程度にもよるが、通常１０１％〜３００％、好まし
くは１１０％〜２００％、更に好ましくは１２０％〜１
５０％である。

【００４０】また、ろ過材料と収納部の壁面との間は密
着していることが必要であり、全血を吸引した時にろ過
材料を経由しない流路が出来ないように構成されている
必要があることは勿論である。

【００４１】濾過ユニットは、上記本体に蓋体が取付け
られると、これらの血液供給口と吸引口を除いて全体が
密閉構造になる。

【００４２】ホルダーの材料はプラスチックが好まし
い。例えば、メタアクリル酸エステル、ポリエチレン、
ポリプロピレン、ポリエステル、ナイロン、ポリカーボ
ネート等の透明あるいは不透明の樹脂が用いられる。

【００４３】上記本体と蓋体の取付方法は、接着剤を用
いた接合、融着等如何なる手段によってもよい。この
際、上記本体と蓋体のいずれの周縁が内側に位置しても
よく、あるいは突き合わせ状態であってもよい。また、
上記本体と蓋体をネジ様の手段で組立分解ができる構造
とすることもできる。

【００４４】血液濾過材料の形状に特に制限はないが、
製造が容易なように、円形とすることが望ましい。この
際、円の直径をホルダー本体の内径よりやや大きめと
し、濾過材料の側面から血漿が漏れることを防ぐことが
できる。一方、四角形にすれば作製した血液濾過材料の
切断ロスがなくなるので好ましい。

【００４５】本発明の血液濾過方法は、該ホルダーのガ
ラス繊維濾紙側の開口に血液を供給し、反対側の開口か
ら吸引して濾液である血漿または血清を採取する。血液
の供給量は血液濾過材料の体積の１．２〜５倍程度、好
ましくは２〜４倍程度が適当である。濾過に際しては血
液供給口側からの加圧をさらに行うことができる。この
吸引と加圧手段はいずれもシリンジを利用する方法が簡
便である。シリンジのピストンを移動させる距離はピス
トンの移動体積が濾過材料の体積の２〜５倍程度になる
ようにするのがよい。溶血は濾過速度にも依存するの
で、移動速度は１ｃｍ²当り５〜１００ｍｌ／ｍｉｎ程
度、好ましくは１０〜５０ｍｌ／ｍｉｎ程度が適当であ
る。

【００４６】本発明の血液濾過方法は、この濾過の途中
で一旦吸引を減速あるいは停止するところに特徴があ
る。この減速あるいは停止を行なう時期は溶血がはじま
る前であるが、この溶血の開始時期は濾過速度、ガラス
繊維濾過に蓄積された血球量（ガラス繊維濾紙の空隙体
積に対する割合）、等によって異なる。一般的には、吸
引した血液が濾過材料の吸引体積の５０％以上、好まし
くは８０％以上を満たした時に減速あるいは停止する。
更に、必要に応じて吸引を再度行っても良い。吸引の減
速は血球が自己の復元力で形状を回復できる程度まで行
なう必要があり、シリンジの移動速度では１ｃｍ²当り
１００ｍｌ／ｍｉｎ以下、好ましくは５０ｍｌ／ｍｉｎ
以下にする。減速又は停止を行なっている時間は１〜５
０秒程度、好ましくは１〜３０秒程度でよい。この減速
または停止を行なった後は必要に応じて吸引を再開して
も良いが、操作上は再吸引を行わない方が好ましい。減
速、吸引操作は１回に限定されるものではなく必要によ
り複数回行なうことができる。

【００４７】濾過で得た血漿や血清は常法に従って分析
が行なわれるが、本発明の濾過方法は特に乾式分析素子
を用いて複数項目を分析する場合に有効である。

【００４８】

【実施例】

[実施例１] (１) 血液濾過ユニットの作製 図１〜６に示す血液濾過ユニットを使用した。この濾過
ユニットは組み立てた状態の縦断面図である図１に示す
ようにホルダー本体１０と蓋体２０からなっている。

【００４９】ホルダー本体１０は全体が小径部を大径部
からなる２段の円筒形状をしており、上部が血漿受槽１
２と吸引側への接続部に、下部が血液濾過材料３０の収
容室１１になっている。収容室１１を形成する下部の内
径は１９．５ｍｍであり、深さは１０ｍｍである。その
うち３ｍｍの高さで蓋体上部が挿入されるので収容室１
１の高さは７ｍｍになる。ホルダー本体１０の下端は蓋
体２０と接続するためのフランジ１３が外方に形成され
ている。また、収容室１１の天面の図１の左端やや内方
寄りには血漿通路１４の入口が設けられ、天面は該入口
に向かって傾斜する浅い逆ロート状に形成されている。
天面周縁部と血漿入口の間の高低差は１ｍｍである。図
３に示すように天面には、血液濾過材料の密着を阻止す
る１２個の突起１５が略等間隔に形成されている。各突
起１５は短柱状で上端が同一平面に位置する高さに切り
揃えられ、各上端周縁は斜めに削取されている。

【００５０】血漿通路１４の出口上部は半分に庇１６が
設けられこの庇の下面が円弧状に形成されていて流出す
る血漿の上方への噴出を阻止している。血漿受槽１２は
円筒状のホルダー本体１に２枚の側壁１７を血漿通路出
口をはさんで平行に設けて少量の血漿でも充分な液深が
得られるようにしている。ホルダー本体１０の上端は開
放されており、これがアナライザー（図示されていな
い。）に接続されて吸引口１８となる。吸引口１８の周
縁部は接続後の液密性を確実なものにするため丸められ
ている。

【００５１】蓋体２０は中央の浅いロート状円板部２１
とその外周に形成された短管２２とその下端外周に外方
に向かって形成されたフランジ２３と円板部２１の中心
から下方に延出するノズル状血液供給口２４からなって
いる。円板部２１の直径は１７ｍｍ、そのロート状部上
下の高低差１ｍｍ、短管部２２の高さは４．５ｍｍ、フ
ランジ２３の外径が２８ｍｍである。円板部２１の短管
部２２への接続位置を短管部２２の上縁より１ｍｍ下と
してその上部の突縁を血液濾過材料３の下面を蓋体のロ
ート状円板部２１上面から隔離させて空間２５を形成す
るスペーサー２６として機能させている。フランジ２３
の上面すなわちホルダー本体１０のフランジ１３と合わ
さる面にはリブ２７が形成されている。このリブ２７は
上下のフランジ１３、２３を超音波で融着接合する際に
超音波エネルギーを集め接着部の液密性を充分確保でき
るようにしたものである。

【００５２】上記の血液濾過材料収容室１１に直径１
９．７ｍｍの円板状に打ち抜いたガラス繊維濾紙（ワッ
トマンＧＦ／０）６枚を重ねて収納した。約８０ｇの力
で濾紙を収容室１１の底に圧入した。更にその上にポリ
スルホン製多孔質膜（富士写真フイルム製）をのせた。
各濾過膜は相互に軽く接触している程度でよい。

【００５３】この血液濾過ユニットに小型ペリスタルポ
ンプを接続した。

【００５４】(２) 採血および血液試料の調製 男子健常者から血液を採取し、ヘパリンを添加後プラス
チック製サンプルチューブに２ｍｌを分注した。その１
部を取ってヘマトクリット（Ｈｃｔ）を測ったところ４
５％であった。

【００５５】同じ血液を遠心分離し、血球成分と血漿成
分とを再混合してＨｃｔの異なる全血を再構成し、Ｈｃ
ｔが２０，３０，４０，５０，５５，６０％の血液試料
を調製した。

【００５６】(３) 血液の濾過 上記(１)にて組み立てた濾過ユニットの血液吸入口に長
さ４ｃｍのシリコーンチューブを接続し、その先端を上
記(２)で調製した血液試料の入ったサンプルチューブに
挿入し、ほぼ垂直に固定した。

【００５７】ペリスタルポンプの吸気速度を２．８ｍｌ
／ｓｅｃに設定し、１０秒間づつ２回吸引した。１回目
と２回目の吸引の間隔は約１秒間で行った。血漿が分離
され血漿貯溜槽中に溜まった。

【００５８】(４) 血漿の回収及び成分濃度の測定 吸気のためのジョイントをはずし、血漿貯溜槽中の血漿
をピペットでサンプルカップに測り取った。成分濃度を
日立７１５０血液自動測定機および富士ドライケム５５
００測定機にて測定した。

【００５９】(５) 結果 回収血漿量 全血のヘマトクリットと回収血漿量の関係は図７の通り
であった。低ヘマトクリット領域(２０〜３０％)では回
収血漿量が多く、高ヘマトクリット領域（５０〜６０
％）では少ないがいずれの場合も溶血のない、良好な血
漿が得られた。

【００６０】 図８，９には日立およびＦＤＣでの測
定結果をまとめた。各Ｈｃｔレベルの測定値を項目ごと
にＨｃｔ無調整検体（４５％）の値を１００％として相
対値で示した。図中の点線は参考の為に１００±５％の
範囲を示した。大部分の項目については日立、ＦＤＣと
もにＨｃｔ２０〜６０％の範囲で１００±５％の範囲に
入っており、本発明方法によって得られる血漿中の成分
濃度がＨｃｔによって影響を受けていないことを示して
いる。

【００６１】[比較例１]ヘマトクリットが５０％の血液
を用いて吸引時間を２０秒間連続とし、それ以外の条件
は実施例１と同じに設定して実施例１と同様の実験を行
った。

【００６２】回収血漿量は２８０μｌであった。

【００６３】血漿は淡いピンク色であり少量の溶血が生
じたことを示していた。

【００６４】溶血に比例し増加するＬＤＨ、Ｋの測定値
を日立７１５０およびＦＤＣ８００で測定したところそ
れぞれ１９６ＩＵ／Ｌおよび４．７ｍｅｑであった。

【００６５】一方、同じ血液を遠心分離して、同様に測
定したところＬＤＨが１７４ＩＵ／Ｌ、Ｋは４．１ｍｅ
ｑであり、溶血の影響が成分濃度の差として測定され
た。

【００６６】[実施例２]実施例１と同様の実験におい
て、吸引時間を１０秒に固定し、吸引終了後ただちに減
圧状態を解除せずにそのまま放置した場合の回収血漿量
がどのように増加するかシリンダー方式(Ｃ−２)、ペリ
スタル方式（Ｐ−３）２種類のポンプを用いて調べた。
検体としてはヘマトクリット５４％のヘパリン添加全血
を用いた。

【００６７】減圧の程度（大気圧との差）をｍｍＨｇで
測定した。結果を表１と表２に示すように、放置時の減
圧度は最高減圧度の１／２〜３／４程度であった。

【００６８】

【表１】

【００６９】

【表２】

【００７０】放置時間と回収血漿量の関係を図１０に示
した。放置時間が２０秒までは回収血漿量が確実に増加
した。回収血漿は溶血がなく、表３に示すように、Ｋ値
の顕著な増加も見られなかった。

【００７１】

【表３】

【００７２】

【発明の効果】本発明の血液濾過方法により、被検血液
のヘマトクリット値によらず、溶血を起こすことなく濾
過して検査必要量の血漿や血清を取得することができ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の実施例で使用した血液濾過ユニット
を組み立てた状態の縦断面図である。

【図２】 同上平面図である。

【図３】 上記血液濾過ユニットのホルダー本体の底面
図である。

【図４】 突起の形状を示す拡大部分断面図である。

【図５】 図１と直角に切断して血漿通路側を見たホル
ダー本体上部の縦断面図である。

【図６】 蓋体のフランジ部分の形状を示す拡大部分断
面図である。

【図７】 本発明の実施例で得られたヘマトクリット値
と回収血漿量の関係を示すグラフである。

【図８】 本発明の実施例で得られた血漿を用いて各種
の分析項目を測定し、遠心法で得られた血漿の測定値と
の比較を示す棒グラフである。

【図９】 上記の結果を各ヘマトクリット値ごとに示し
たグラフである。

【図１０】 吸引後の放置時間と回収血漿量の関係を示
すグラフである。

【符号の説明】

１０…ホルダー本体 １１…血液濾過材料収容室 １２…血漿受槽 １３…フランジ １４…血漿通路 １５…突起（密着阻止手段） １６…庇 １７…側壁 １８…吸引口 ２０…蓋体 ２１…円板部 ２２…短管部 ２３…フランジ ２４…血液供給口 ２５…空間 ２６…スペーサー ２７…リブ ３０…血液濾過材料

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくともガラス繊維濾紙と微多孔性膜
   が積層されている血液濾過材料を用いて血液を吸引濾過
   するに際し、濾過の途中で一旦吸引を減速あるいは停止
   し、その後吸引を再開することを特徴とする血液濾過方
   法
2. 【請求項２】 少なくともガラス繊維濾紙と微多孔性膜
   が積層されている血液濾過材料を用いて血液を吸引濾過
   するに際し、吸引後減圧状態を保ったまま濾過を進行さ
   せ、その後吸引を再開することなく気密を解除し濾過を
   停止させることを特徴とする血液濾過方法