JPH0994040A - Immunodeficient mouse and its creation - Google Patents
Immunodeficient mouse and its creationInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫不全マウス及
びその作出方法に関する。この免疫不全マウスは、ヒト
リンパ球を移入し、HIV-1 を接種することによりHIV-1
感染モデルマウスとして利用することができる。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an immunodeficient mouse and a method for producing the same. This immunodeficient mouse was transferred with human lymphocytes and inoculated with HIV-1 to induce HIV-1
It can be used as an infection model mouse.
【０００２】[0002]
【従来の技術】医学の進歩には基礎的な実験が不可欠で
あり、動物実験はこのために必要欠くべからざる手段と
なっており、さらにその治療薬の開発など応用実験にも
重要な位置を占めている。近年、機能的なＴ細胞及びＢ
細胞を欠失した重度複合免疫不全のSCIDマウス（C.B-17
-scid ）が実用化されることによって異種組織の移植効
率が格段に上がってきており（SCID mice.(1991)Immuno
logical Reviews,No.124,Ed.Moller,G.M.,Munksgaard,C
openhagen ）、ヒトの細胞、組織を移植したマウス体内
でヒトの疾患を再現できるようになってきた。2. Description of the Related Art Basic experiments are indispensable for the advancement of medicine, and animal experiments have become an indispensable means for this purpose. Moreover, important points for applied experiments such as the development of therapeutic agents are required. is occupying. Recently, functional T cells and B
SCID mice with severe cell-deficient immunodeficiency (CB-17
-scid) has been put to practical use, and the transplantation efficiency of xenogeneic tissue has been significantly improved (SCID mice. (1991) Immuno
logical Reviews, No.124, Ed.Moller, GM, Munksgaard, C
openhagen), human cells and tissues can now reproduce human diseases in mice.
【０００３】AIDSの原因ウイルスであるHIV-1 はヒトの
CD４陽性細胞への感染により、ヒトの免疫機構を破壊す
る疾病であり、現在最も対策が急がれる感染症といえ
る。このHIV-1 の感染性の宿主特異性は高く、チンパン
ジーなどのヒトに近縁な霊長類に感染するにすぎない。
したがって、HIV-1 に感染し得るマウスを作出し、マウ
ス体内でAIDSを再現することは、AIDSの治療及び予防手
段を確立するために極めて重要である。HIV-1, the causative virus of AIDS, is human
It is a disease that destroys the human immune system due to infection with CD4-positive cells and can be said to be the most urgent infectious disease at present. This HIV-1 is highly infectious and host-specific and only infects human-related primates such as chimpanzees.
Therefore, creating a mouse that can be infected with HIV-1 and reproducing AIDS in the mouse is extremely important for establishing a therapeutic and preventive means for AIDS.
【０００４】現在まで、HIV-1 感染し得るマウスを作出
する方法としては、ヒト胎児の胸腺および肝臓をマウス
腎被膜下に移植するMcCune,J.M.らの方法（The SCID-hu
mouse:murine models for the analysis of human hem
atolymphoid differentiation and function.(1988)McC
une,J.M.,Namikawa,R.,Kaneshima,H.,Schultz,L.D.,Lib
erman,M.& Weissman,I.L.,Science 241,1632. Namikaw
a,R.,Kaneshima,H.,Lieberman,M.,Weissman,I.L.& McCu
ne,J.M.(1988)Infection of the SCID-hu mouse by HIV
-1.Science 242,1684. ）とヒト末梢血リンパ球を腹腔
に移植するMosier,D.E.らの方法（Mosier,D.E.,Gulizi
a,R.J.,Baird,S.M.& Wilson,D.B.(1988)Transfer of a
funtional human immune system to mice with severe
combined immunodeficiency.Nature 335,256. Mosier,
D.E.,Gulizia,R.J.,Baird,S.M.,Wilson,D.B.,Spector,
D.H,& Spector,S.A(1991)Human immunodeficiency viru
s infection of human-PBL-SCID mice.Science 251,79
1. ）が知られている。これらの方法により作出された
マウスにHIV-1 を接種すると、感染が認めらるが、その
感染率は必ずしも高いとは言い難い。Until now, as a method for producing a mouse capable of being infected with HIV-1, the method of McCune, JM et al. (The SCID-hu
mouse: murine models for the analysis of human hem
atolymphoid differentiation and function. (1988) McC
une, JM, Namikawa, R., Kaneshima, H., Schultz, LD, Lib
erman, M. & Weissman, IL, Science 241,1632. Namikaw
a, R., Kaneshima, H., Lieberman, M., Weissman, IL & McCu
ne, JM (1988) Infection of the SCID-hu mouse by HIV
-1.Science 242,1684.) And the method of Mosier, DE et al. For transplanting human peripheral blood lymphocytes into the abdominal cavity (Mosier, DE, Gulizi
a, RJ, Baird, SM & Wilson, DB (1988) Transfer of a
funtional human immune system to mice with severe
combined immunodeficiency.Nature 335,256. Mosier,
DE, Gulizia, RJ, Baird, SM, Wilson, DB, Spector,
DH, & Spector, SA (1991) Human immunodeficiency viru
s infection of human-PBL-SCID mice.Science 251,79
1.) is known. Infection of mice produced by these methods with HIV-1 causes infection, but the infection rate is not necessarily high.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】上述の方法は、いずれ
も重度複合免疫マウスであるSCIDマウスを用いるもので
あるが、SCIDマウスに対するヒトリンパ球の定着率が必
ずしも高くないことが、HIV-1 に対する感染率を下げて
いる主たる要因の一つであると考えられている。本発明
は、このような事実を踏まえ、移入したヒトリンパ球の
生着性及び生存性の向上を図り、HIV-1 感染し得るマウ
スを効率的に作出する手段を提供することを目的とす
る。The above-mentioned methods all use SCID mice, which are severely complex-immunized mice. However, the fact that the colonization rate of human lymphocytes in SCID mice is not always high is high in HIV-1. It is considered to be one of the main factors that reduce the infection rate. On the basis of such a fact, the present invention aims to improve the engraftment and viability of transferred human lymphocytes, and to provide a means for efficiently producing a mouse that can be infected with HIV-1.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記課題
を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、マウスのNK活性を
減退させる抗体をマウスに投与することにより、移入し
たヒトリンパ球の生着性及び生存性が飛躍的に向上する
という知見を得た。また、各種突然変異体マウスを複合
させる交配方法により、ヒトリンパ球の生着性、生存性
およびHIV-1 感染動態が異なる一群の免疫不全マウスを
得られるという知見を得た。[Means for Solving the Problems] As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that the administration of an antibody that reduces NK activity of mice to mice produces live human lymphocytes. It was found that the wearability and viability are dramatically improved. Moreover, it was found that a group of immunodeficient mice having different engraftment and survival of human lymphocytes and HIV-1 infection kinetics can be obtained by a mating method in which various mutant mice are combined.
【０００７】以上の知見に基づき、本発明は完成され
た。即ち、本発明の第一は、マウスにNK活性を減退させ
る抗体を投与することを特徴とする免疫不全マウスの作
出方法である。また、本発明の第二は、一群の免疫不全
マウス系統：BALB/cA-Dh,scid 、BALB/cA-bg,scid 、BA
LB/cA-nu,scid 、NOD-scid、C57BL/6-RAG0/0及びBALB/c
A-RAG0 /0である。The present invention has been completed based on the above findings. That is, the first of the present invention is a method for producing an immunodeficient mouse, which comprises administering an antibody that reduces NK activity to the mouse. The second aspect of the present invention is a group of immunodeficient mouse strains: BALB / cA-Dh, scid, BALB / cA-bg, scid, BA
LB / cA-nu, scid, NOD-scid, C57BL / 6-RAG 0/0 and BALB / c
A-RAG is 0/0.
【０００８】以下、本発明を第一発明、第二発明に分け
て説明する。 （１）第一発明 本発明の方法は、マウスにNK活性を減退させる抗体を投
与することにより、免疫不全マウスを作出する。ここで
「NK活性を減退させる抗体」とは、NK細胞の持つ腫瘍細
胞やウイルス感染細胞に対する傷害機能を低下させる抗
体のことをいい、その作用機構はNK細胞に直接作用し、
NK細胞を消失させるか、又はNK細胞活性を遮断するもの
である。その具体例としては、抗IL-2R βモノクローナ
ル抗体であるTMβ1 、抗アンアロG-M1、抗NK1・1などを
挙げることができる。TMβ1 は、pharmingen（San Dieg
o ）、生化学工業（東京）より入手することができる。The present invention will be described below as divided into a first invention and a second invention. (1) First Invention The method of the present invention produces an immunodeficient mouse by administering an antibody that reduces NK activity to the mouse. Here, the "antibody that reduces NK activity" refers to an antibody that reduces the damaging function of NK cells against tumor cells and virus-infected cells, and its mechanism of action directly acts on NK cells,
It either eliminates NK cells or blocks NK cell activity. Specific examples thereof include anti-IL-2R β monoclonal antibody TMβ1, anti-analog G-M1, and anti-NK1.1. TMβ1 is a pharmingen (San Dieg
o), available from Seikagaku Corporation (Tokyo).
【０００９】抗体を投与するマウスは、どのようなマウ
スであってもよいが、後述するBALB/cA-Dh,scid 、BALB
/cA-bg,scid 、BALB/cA-nu,scid 、NOD-scid、C57BL/6-
RAG0 /0、又はBALB/cA-RAG0/0系統のマウスを用いると移
植したリンパ球の定着率やHIV-1 に対する感染性などが
相乗的に高まる場合があるので、それらのマウスを用い
るのが好ましい。The mouse to which the antibody is administered may be any mouse, but BALB / cA-Dh, scid, BALB described later may be used.
/ cA-bg, scid, BALB / cA-nu, scid, NOD-scid, C57BL / 6-
RAG 0/0, or because BALB / cA-RAG 0/0 such susceptibility to retention and HIV-1 in transplanted lymphocytes and using strains of mice in some cases increase the synergistic use their mouse Is preferred.
【００１０】抗体の投与方法は、マウスのNK活性を減退
させることができる方法であればどのような方法であっ
てもよいが、通常は腹腔内に注射することにより抗体を
投与する。この場合、投与する抗体の量は、マウスのNK
活性を減退させることができる範囲内であれば特に制限
はないが、１マウス当たり約１mgが好ましい。抗体の投
与時期についても特に制限はないが、ヒトリンパ球の移
入から１〜７日前に行うのが好ましい。 （２）第二発明 最初に各免疫不全マウスの作出方法について説明する。 ａ）BALB/cA-Dh,scidマウスは、BALB/cA-DhマウスとBAL
B/cA-scidマウスをCrossIntercross法によって交配して
作出する。ここでCross Intercross法とは、Ａ系統とＢ
系統の交配し、得られるＡＢ系統（F1）同士を交配し、
劣性の遺伝子型を持つ個体を得る方法である。なお、BA
LB/cA-Dhマウス、BALB/cA-scidマウス、BALB/cA-Dh,sci
dマウスは現在本出願人が所持しており、必要に応じて
いつでも分譲することができる。 ｂ）BALB/cA-bg,scidマウスは、BALB/cA-bgマウスとBAL
B/cA-scidマウスをCrossIntercross法によって交配して
作出する。なお、BALB/cA-bgマウス、BALB/cA-bg,scid
マウスは現在本出願人が所持しており、必要に応じてい
つでも分譲することができる。 ｃ）BALB/cA-nu,scid マウスは、BALB/cA-nuマウスとBA
LB/cA-scidマウスをCross Itercross法によって交配し
て作出する。なお、BALB/cA-nuマウスは日本クレア株式
会社から販売されている。また、BALB/cA-nu,scid マウ
スは現在本出願人が所持しており、必要に応じていつで
も分譲することができる。 ｄ）NOD-scidマウスは、NOD/Shi マウスとC,B-17-scid
マウスとのF1をNOD/Shiマウスに７回以上戻し交配する
ことによって作出する。なお、NOD/Shi マウス、C,B-17
-scid マウスは日本クレア株式会社から販売されてい
る。また、NOD-scidマウスは現在本出願人が所持してお
り、必要に応じていつでも分譲することができる。 ｅ）BALB/cA-RAG0/0マウスは、Inbreeding系統であるRA
G欠損マウスをBALB/cAマウスに７回以上戻し交配して作
出する。なお、BALB/cA マウスは日本クレア株式会社か
ら販売されている。また、BALB/cA-RAG0/0マウス、RAG
欠損マウスは現在本出願人が所持しており、必要に応じ
ていつでも分譲することができる。 ｆ）C57BL/6-RAG0/0マウスは、Inbreeding系統であるRA
G欠損マウスをC57BL/6Jマウスに７回以上戻し交配して
作出する。なお、C57BL/6Jマウスは日本クレア株式会社
から販売されている。また、C57BL/6-RAG0/0マウスは現
在本出願人が所持しており、必要に応じていつでも分譲
することができる。Any method can be used for administering the antibody, as long as it can reduce the NK activity of the mouse, but the antibody is usually administered by intraperitoneal injection. In this case, the amount of antibody
There is no particular limitation as long as the activity can be reduced, but about 1 mg per mouse is preferable. The administration timing of the antibody is not particularly limited, but it is preferably performed 1 to 7 days before the transfer of human lymphocytes. (2) Second Invention First, a method for producing each immunodeficient mouse will be described. a) BALB / cA-Dh, scid mice are BALB / cA-Dh mice and BAL
B / cA-scid mice are produced by crossing by the Cross Intercross method. Here, the Cross Intercross method is system A and system B
Cross the lines, cross the obtained AB lines (F1) with each other,
It is a method of obtaining an individual having a recessive genotype. BA
LB / cA-Dh mouse, BALB / cA-scid mouse, BALB / cA-Dh, sci
The applicant currently possesses the dmouse, and the mouse can be distributed at any time when necessary. b) BALB / cA-bg, scid mice are BALB / cA-bg mice and BAL
B / cA-scid mice are produced by crossing by the Cross Intercross method. BALB / cA-bg mouse, BALB / cA-bg, scid
The mouse is currently owned by the applicant and can be distributed at any time when necessary. c) BALB / cA-nu, scid mice are BALB / cA-nu mice and BA
LB / cA-scid mice are produced by crossing by the Cross Iter cross method. The BALB / cA-nu mouse is sold by CLEA Japan, Inc. Further, the BALB / cA-nu, scid mouse is currently possessed by the present applicant, and can be distributed at any time when necessary. d) NOD-scid mice are NOD / Shi mice and C, B-17-scid
It is generated by backcrossing F1 with mouse to NOD / Shi mouse 7 times or more. In addition, NOD / Shi mouse, C, B-17
-scid mice are sold by CLEA Japan, Inc. Further, the present applicant possesses the NOD-scid mouse, and the mouse can be distributed at any time when necessary. e) BALB / cA-RAG 0/0 mouse is an inbreeding strain RA
A G-deficient mouse is backcrossed with a BALB / cA mouse seven times or more to produce a mouse. BALB / cA mice are sold by CLEA Japan, Inc. In addition, BALB / cA-RAG 0/0 mouse, RAG
The defective mouse is currently possessed by the applicant and can be distributed at any time when necessary. f) C57BL / 6-RAG 0/0 mouse is an inbreeding strain RA
The G-deficient mouse is backcrossed with the C57BL / 6J mouse seven times or more to produce the mouse. The C57BL / 6J mouse is sold by CLEA Japan, Inc. The C57BL / 6-RAG 0/0 mouse is currently possessed by the present applicant, and can be distributed at any time if necessary.
【００１１】次に各免疫不全マウスの特徴について説明
する。 ａ）BALB/cA-Dh,scidマウスは、機能的なＴ細胞及びＢ
細胞をともに欠失し、かつ無脾臓のマウスである。ま
た、このマウス内でのヒトリンパ球の生着性、生存性は
あまりよくないが、このマウスにヒトリンパ球を移入し
て、HIV-1 に感染させた場合、ヒトCD4 細胞の減少が著
しい。 ｂ）BALB/cA-bg,scidマウスは、機能的なＴ細胞及びＢ
細胞をともに欠失し、かつNK活性が減退しているマウス
である。このマウス内でのヒトリンパ球の生着性、生存
性はよく、また、ヒトリンパ球を移入して、HIV-1 を接
種した場合の感染性もよい。 ｃ）BALB/cA-nu,scid マウスは、機能的なＴ細胞及びＢ
細胞をともに欠失し、かつ胸腺、被毛を欠失するマウス
である。このマウス内でのヒトリンパ球の生着性、生存
性はよいにもかかわらず、ヒトリンパ球を移入して、HI
V-1 を接種しても全く感染しない。 ｄ）NOD-scidマウスは、機能的なＴ細胞及びＢ細胞をと
もに欠失し、かつNK活性およびマクロファージ機能が減
退しているマウスである。このマウスに、ヒトリンパ球
を移入してHIV-1 感染させると、血液中にヒトの100 〜
1000倍のHIV-1 が認められ、Viremia のモデルとして用
いることができる。 ｅ）BALB/cA-RAG0/0マウスは、SCIDマウスと同様に機能
的なＴ細胞及びＢ細胞ともに欠失する。このマウス内で
のヒトリンパ球の生着性、生存性はよく、また、ヒトリ
ンパ球を移入して、HIV-1 を接種した場合の感染性もよ
い。 ｆ）C57BL/6-RAG0/0マウスは、SCIDマウスと同様に機能
的なＴ細胞及びＢ細胞ともに欠失する。また、SCIDマウ
スと異なり、リンパ節でのHIV-1 の増殖が観察される。Next, the characteristics of each immunodeficient mouse will be described. a) BALB / cA-Dh, scid mice have functional T cells and B
It is a mouse that has both cells deleted and is spleen-free. Moreover, although the engraftment and survival of human lymphocytes in this mouse are not so good, when human lymphocytes are transferred into this mouse and infected with HIV-1, the human CD4 cells are markedly reduced. b) BALB / cA-bg, scid mice have functional T cells and B
It is a mouse in which both cells are deleted and NK activity is decreased. The engraftment and survival of human lymphocytes in this mouse are good, and the infectivity of human lymphocytes transferred and inoculated with HIV-1 is also good. c) BALB / cA-nu, scid mice contain functional T cells and B
It is a mouse in which both cells are deleted and thymus and hair are deleted. Despite the good engraftment and survival of human lymphocytes in this mouse, human lymphocytes were transferred and HI
Even if V-1 is inoculated, no infection occurs. d) NOD-scid mice are mice in which both functional T cells and B cells are deleted and NK activity and macrophage function are diminished. When human lymphocytes were transferred into these mice and infected with HIV-1, 100 to 100 humans were found in the blood.
It has 1000 times higher HIV-1 and can be used as a model of Viremia. e) BALB / cA-RAG 0/0 mice lack both functional T and B cells similar to SCID mice. The engraftment and survival of human lymphocytes in this mouse are good, and the infectivity of human lymphocytes transferred and inoculated with HIV-1 is also good. f) C57BL / 6-RAG 0/0 mice lack both functional T and B cells similar to SCID mice. In addition, unlike SCID mice, HIV-1 proliferation in lymph nodes is observed.
【００１２】[0012]
〔実施例１〕C.B-17-scid マウス、C57BL/6-RAG0/0マウ
ス、NOD-scidマウスの３系統のマウス（いずれも週齢６
〜８以上）の腹腔内に抗IL-2R βモノクローナル抗体
（TMβ1 ）を注射した。[Example 1] Three strains of mice, CB-17-scid mouse, C57BL / 6-RAG 0/0 mouse, and NOD-scid mouse (all 6 weeks old
~ 8 or more) was intraperitoneally injected with an anti-IL-2R β monoclonal antibody (TMβ1).
【００１３】次いで、２人のドナー（ドナーYT、ドナー
RT）から採血した血液より、リンパ球分離液（Conray f
icoll 、セダレーン社又は大日本製薬（株）社製）を用
いて単核球分画を無菌的に採取し、RPMI-1640 培養液
（GIBCO BRL,Ca no.31800,USA）に浮遊させた。上記で
得られたヒト末梢血単核球１×107 個を、抗体の投与か
ら３日後にマウスの腹腔内に接種した。Next, two donors (donor YT, donor
From the blood collected from RT), the lymphocyte separation liquid (Conray f
The mononuclear cell fraction was aseptically collected using icoll, Sedalene or Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd., and suspended in RPMI-1640 culture solution (GIBCO BRL, Ca no. 31800, USA). 1 × 10 7 human peripheral blood mononuclear cells obtained above were inoculated intraperitoneally into a mouse 3 days after the administration of the antibody.
【００１４】ヒト末梢血単核球の接種から２週後に、フ
ローサイトメトリーを用いてマウスの腹水をRPMI-1640
培養液で十分洗浄することによって回収した全腹腔細胞
中のＴ細胞数を計測し、その数により、ヒトＴ細胞のマ
ウスへの定着率を判定した。また、対照としてTMβ1 投
与しないマウスのＴ細胞数も計測した。この結果を図１
に示す。Two weeks after the inoculation of human peripheral blood mononuclear cells, the ascites of the mouse was subjected to RPMI-1640 using flow cytometry.
The number of T cells in all the peritoneal cells collected by thorough washing with the culture medium was counted, and the colonization rate of human T cells in mice was determined by the number. In addition, as a control, the number of T cells in mice not administered with TMβ1 was also measured. This result is shown in Figure 1.
Shown in
【００１５】図１に示すように、TMβ1 をマウスに投与
することによりヒトＴ細胞のマウスへの定着率が上昇し
た。定着率の上昇はC57BL/6-RAG0/0マウス及びNOD-scid
マウスにおいて特に顕著であった。 〔実施例２〕BALB/cA-Dh,scid マウス（いずれも週齢６
〜８以上）の腹腔内にTMβ1 を注射した。As shown in FIG. 1, administration of TMβ1 to mice increased the colonization rate of human T cells in the mice. Increased retention rate is due to C57BL / 6-RAG 0/0 mice and NOD-scid
It was especially prominent in mice. [Example 2] BALB / cA-Dh, scid mice (all 6 weeks old
TMβ1 was intraperitoneally injected (.about.8 or more).
【００１６】次いで、ドナー（ドナーYT）から採血した
血液より、前記したリンパ球分離液を用いて単核球分画
を無菌的に採取し、前記したRPMI-1640 培養液に浮遊さ
せた。上記で得られたヒト末梢血単核球１×107 個を、
抗体の投与から３日後にマウスの腹腔内に接種した。ヒ
ト末梢血単核球の接種から２〜３週間後にNL-3及びJR-C
SFの２系統のHIV-1を接種し、更に接種から２〜３週間
後に、マウスを殺処分し、腹腔内をＰＢＳにて洗浄して
細胞を回収した。また、同様に脾臓、肝臓、肺臓、リン
パ節等も採取し、その細胞浮遊液を作製した。Then, a mononuclear cell fraction was aseptically collected from the blood collected from the donor (donor YT) using the above-mentioned lymphocyte separation liquid and suspended in the above-mentioned RPMI-1640 culture medium. 1 × 10 7 human peripheral blood mononuclear cells obtained above were
Three days after the administration of the antibody, the mice were inoculated intraperitoneally. NL-3 and JR-C 2-3 weeks after inoculation of human peripheral blood mononuclear cells
Two strains of SF-1 HIV-1 were inoculated, and 2-3 weeks after the inoculation, the mice were sacrificed, and the abdominal cavity was washed with PBS to collect cells. Similarly, spleen, liver, lung, lymph node, etc. were also collected to prepare a cell suspension thereof.
【００１７】各臓器より採取した細胞についてHIV-1-DN
A コピー数及びCD4 陽性細胞の破壊の有無について調べ
た。HIV-1-DNA コピー数の計測は、細胞、臓器より採取
したDNA あるいはRNA を用いて、PCR 法などにより行
い、CD4 陽性細胞の破壊の有無については、フローサイ
トメトリーを用いて行った。また、対照としてHIV-1 を
接種しないマウスについてもHIV-1-DNA コピー数及びCD
4 陽性細胞の破壊の有無について調べた。この結果を図
２に示す。HIV-1-DN for cells collected from each organ
A copy number and the presence or absence of destruction of CD4-positive cells were examined. The HIV-1-DNA copy number was measured by PCR or the like using DNA or RNA collected from cells or organs, and flow cytometry was used to determine the presence or absence of destruction of CD4-positive cells. In addition, as a control, mice not inoculated with HIV-1 also received HIV-1-DNA copy number and CD.
4 The presence or absence of destruction of positive cells was examined. The result is shown in FIG.
【００１８】図２に示すようにHIV-1 を接種した BALB/
cA-Dh,scidマウス中でHIV-1 の増殖が認められ、また、
CD4 陽性細胞は破壊されていた。 〔実施例３〕BALB/cA-nu,scid マウス及びBALB/cA-nu,s
cid マウスの２系統のマウス（いずれも週齢６〜８以
上）の腹腔内にTMβ1 を注射した。BALB / inoculated with HIV-1 as shown in FIG.
HIV-1 proliferation was observed in cA-Dh, scid mice.
CD4 positive cells were destroyed. [Example 3] BALB / cA-nu, scid mouse and BALB / cA-nu, s
TMβ1 was intraperitoneally injected into two strains of cid mice (both 6 to 8 weeks old).
【００１９】次いで、ドナー（ドナーYT）から採血した
血液より、前記したリンパ球分離液を用いて単核球分画
を無菌的に採取し、前記したRPMI-1640 培養液に浮遊さ
せた。上記で得られたヒト末梢血単核球１×107 個を、
抗体の投与から３日後にマウスの腹腔内に接種した。ヒ
ト末梢血単核球の接種から２〜３週間後にNL-3及びJR-C
SFの２系統のHIV-1を接種し、更に接種から２〜３週間
後に、マウスを殺処分し、腹腔内をＰＢＳにて洗浄して
細胞を回収した。また、同様に脾臓、肝臓、肺臓、リン
パ節等も採取し、その細胞浮遊液を作製した。得られた
各臓器由来の全細胞当たりのヒト細胞数を計測し、その
数により、ヒト細胞のマウスへの定着率を判定した。こ
の結果を図３に示す。Then, a mononuclear cell fraction was aseptically collected from the blood collected from the donor (donor YT) using the above-mentioned lymphocyte separation liquid and suspended in the above-mentioned RPMI-1640 culture medium. 1 × 10 7 human peripheral blood mononuclear cells obtained above were
Three days after the administration of the antibody, the mice were inoculated intraperitoneally. NL-3 and JR-C 2-3 weeks after inoculation of human peripheral blood mononuclear cells
Two strains of SF-1 HIV-1 were inoculated, and 2-3 weeks after the inoculation, the mice were sacrificed, and the abdominal cavity was washed with PBS to collect cells. Similarly, spleen, liver, lung, lymph node, etc. were also collected to prepare a cell suspension thereof. The number of human cells per total cell derived from each obtained organ was measured, and the number of human cells colonized in the mouse was determined by the number. The result is shown in FIG.
【００２０】図３に示すように、BALB/cA-nu,scid マウ
ス及びBALB/cA-nu,scid マウスのいずれの系統も高い定
着率を示した。また、各細胞浮遊液におけるHIV-1-DNA
コピー数についても計測した。HIV-1-DNA コピー数の計
測は実施例２と同様にして行った。この結果を図４に示
す。図４に示すように、BALB/cA-nu,scid マウスではHI
V-1 の増殖が認められたが、BALB/cA-nu,scid マウスで
はHIV-1 の増殖は認められなかった。 〔実施例４〕NOD-SCID系統に属する♯３、♯４、Ｎ４の
３個体のマウス（いずれも週齢６〜８以上）の腹腔内に
TMβ1 を注射した。As shown in FIG. 3, both the BALB / cA-nu, scid mouse and the BALB / cA-nu, scid mouse strains showed a high colonization rate. In addition, HIV-1-DNA in each cell suspension was
The copy number was also measured. The HIV-1-DNA copy number was measured in the same manner as in Example 2. The result is shown in FIG. As shown in Fig. 4, HI was observed in BALB / cA-nu, scid mice.
V-1 proliferation was observed, but HIV-1 proliferation was not observed in BALB / cA-nu, scid mice. [Example 4] Three mice, # 3, # 4, and N4 belonging to the NOD-SCID strain (all 6 to 8 years old) were intraperitoneally injected.
TMβ1 was injected.
【００２１】次いで、ドナー（ドナーRT）から採血した
血液より、前記したリンパ球分離液によって単核球分画
を無菌的に採取し、前記したRPMI-1640 培養液に浮遊さ
せた。上記で得られたヒト末梢血単核球１×107 個を、
抗体の投与から３日後にマウスの腹腔内に接種した。ヒ
ト末梢血単核球の接種から２〜３週間後にHIV-1 （NL-
3）を接種し、更に接種から２〜３週間後に、マウスを
殺処分し、腹水及び血漿を採取し、それらに含まれるHI
V gag p24 抗原の量を測定した。HIV gag p24 抗原量の
測定はp24 ELISA キット（Cellar product,Baffuro）に
より行った。また、CD4 陽性細胞の破壊の有無について
も調べた。CD4 陽性細胞の破壊の有無は実施例２と同様
にして行った。この結果を表１に示す。Then, a mononuclear cell fraction was aseptically collected from the blood collected from the donor (donor RT) by the above-mentioned lymphocyte separation liquid and suspended in the above-mentioned RPMI-1640 culture medium. 1 × 10 7 human peripheral blood mononuclear cells obtained above were
Three days after the administration of the antibody, the mice were inoculated intraperitoneally. Two to three weeks after the inoculation of human peripheral blood mononuclear cells, HIV-1 (NL-
3) was inoculated, and 2-3 weeks after the inoculation, the mice were sacrificed, and ascites and plasma were collected.
The amount of V gag p24 antigen was measured. The HIV gag p24 antigen amount was measured by the p24 ELISA kit (Cellar product, Baffuro). Moreover, the presence or absence of destruction of CD4 positive cells was also examined. Whether or not the CD4 + cells were destroyed was determined in the same manner as in Example 2. Table 1 shows the results.
【００２２】[0022]
【表１】 NOD-SCIDマウスにおけるHIV gag p24 抗原量 ────────────────────────────────── マウス番号 HIV gag p24 抗原量（ng/ml ） CD4陽性細胞の破壊 腹水 血漿 ────────────────────────────────── ♯３ 0.85 290 ＋＋＋ ♯４ 0 0.355 ＋ Ｎ４ 2.2 250 ＋＋＋ ────────────────────────────────── 表１に示すように、マウス番号♯４ではHIV gag p24 抗
原がほとんど確認できなかったが、マウス番号♯３及び
Ｎ４ではヒトの血液の100 〜1000倍のHIV gagp24 抗原
が含まれていた。また、マウス番号♯３及びＮ４では C
D4陽性細胞の破壊も顕著であった。 〔実施例５〕C57BL/6-RAG0/0系統に属するＭ０、Ｍ２、
Ｘ０、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ８の６個体のマウス（いずれも週
齢６〜８以上）の腹腔内にTMβ1 を注射した。[Table 1] HIV gag p24 antigen amount in NOD-SCID mice ────────────────────────────────── Mouse number HIV gag p24 Antigen level (ng / ml) Destruction of CD4 positive cells Ascites Plasma ───────────────────────────────── ─ # 3 0.85 290 ++++ # 4 0 0.355 + N4 2.2 250 +++ ────────────────────────────────── Table As shown in 1, the HIV gag p24 antigen was scarcely confirmed in mouse number # 4, but mouse numbers # 3 and N4 contained 100 to 1000 times as much HIV gagp24 antigen as human blood. Also, in mouse numbers # 3 and N4, C
D4 positive cell destruction was also significant. [Example 5] M0, M2 belonging to C57BL / 6-RAG 0/0 strain,
TMβ1 was intraperitoneally injected into 6 mice of X0, X2, X3, and X8 (all 6 to 8 years old).
【００２３】次いで、ドナー（ドナーRT）から採血した
血液より、前記したリンパ球分離液用いて単核球分画を
無菌的に採取し、前記したRPMI-1640 培養液に浮遊させ
た。上記で得られたヒト末梢血単核球１×107 個を、抗
体の投与から３日後にマウスの腹腔内に接種した。ヒト
末梢血単核球の接種から２〜３週間後にＸ０、Ｘ２、Ｘ
３、Ｘ８の４個体にHIV-1 （NFN-SX）を接種した。Ｍ
０、Ｍ２の２個体にはHIV-1 を接種しなかった。Then, a mononuclear cell fraction was aseptically collected from the blood collected from the donor (donor RT) using the above-mentioned lymphocyte separation liquid and suspended in the above-mentioned RPMI-1640 culture medium. 1 × 10 7 human peripheral blood mononuclear cells obtained above were inoculated intraperitoneally into a mouse 3 days after the administration of the antibody. 2-3 weeks after inoculation of human peripheral blood mononuclear cells, X0, X2, X
HIV-1 (NFN-SX) was inoculated to 4 individuals of 3 and X8. M
Two individuals, 0 and M2, were not inoculated with HIV-1.
【００２４】以上の６個体のマウスを殺処分し、腹水及
びリンパ節、胸腺を採取し、細胞中に含まれるHIV-1-DN
A 及びHIV-1-RNA のコピー数を計測した。コピー数の計
測は実施例２と同様にして行った。なお、殺処分はＸ０
とＭ０はHIV-1 接種から１週間後、Ｘ２、Ｘ３、Ｍ２は
接種から２週間後、Ｘ８は接種から３週間後に行った。
この結果を図５に示す。The above 6 mice were killed, and ascites, lymph nodes and thymus were collected, and HIV-1-DN contained in the cells.
The copy numbers of A and HIV-1-RNA were measured. The copy number was measured in the same manner as in Example 2. In addition, slaughter is X0
And M0 were 1 week after the inoculation of HIV-1, X2, X3 and M2 were 2 weeks after the inoculation, and X8 was 3 weeks after the inoculation.
The result is shown in FIG.
【００２５】図５に示すように、HIV-1 を接種した個体
では、いずれもHIV-1 の増殖が認めれた。また、この系
統ではウイルスを接種した腹腔内のみならず、リンパ節
や胸腺においてもHIV-1 の増殖が認められた。As shown in FIG. 5, HIV-1 proliferation was observed in all the individuals inoculated with HIV-1. In addition, HIV-1 proliferation was observed not only in the virus-inoculated abdominal cavity but also in lymph nodes and thymus in this strain.
【００２６】[0026]
【発明の効果】本発明は、マウス体内でのヒトリンパ球
の生着性及び生存性を向上させる技術、並びにHIV-1 感
染モデルマウスとして好適な性質を有する一群の免疫不
全マウス系統を提供する。これらを利用することによ
り、HIV-1 感染モデルマウスを効率的に作出することが
可能となる。INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention provides a technique for improving the engraftment and survival of human lymphocytes in the body of a mouse, and a group of immunodeficient mouse strains having suitable properties as a model mouse for HIV-1 infection. By utilizing these, it becomes possible to efficiently generate HIV-1 infected model mice.
【図１】 TMβ1 処理と腹水中のヒトＴ細胞数との関係
を示す図FIG. 1 shows the relationship between TMβ1 treatment and the number of human T cells in ascites.
【図２】 BALB/cA-Dh,scid におけるHIV-1 の増殖率を
示す図FIG. 2 is a diagram showing the proliferation rate of HIV-1 in BALB / cA-Dh, scid.
【図３】 BALB/cA-nu,scid ならびにBALB/cA-bg,scid
におけるヒト細胞の定着率を示す図FIG. 3 BALB / cA-nu, scid and BALB / cA-bg, scid
Of human cell colonization rate in
【図４】 BALB/cA-nu,scid ならびにBALB/cA-bg,scid
におけるHIV-1 増殖率を示す図FIG. 4 BALB / cA-nu, scid and BALB / cA-bg, scid
Of HIV-1 proliferation rate in Japan
【図５】 C57BL/6-RAG0/0におけるHIV-1 増殖率を示す
図FIG. 5 shows HIV-1 proliferation rate in C57BL / 6-RAG 0/0 .
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 伊藤 守 神奈川県川崎市宮前区平２丁目23番 13− 205号 (72)発明者 山本 直樹 東京都渋谷区恵比寿南３丁目11番17−501 号 (72)発明者 小柳 義夫 千葉県浦安市入船６丁目１番801号 (72)発明者 田中 勇悦 神奈川県座間市入谷４丁目3000番地の７ エクセル入谷305号 (72)発明者 宮坂 昌之 大阪府吹田市円山町30番３−315号 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Mamoru Ito 2-23-13-205, Taira, Miyamae-ku, Kawasaki City, Kanagawa Prefecture (72) Naoki Yamamoto 3-11-17-501, Ebisu Minami, Shibuya-ku, Tokyo (72) Inventor Yoshio Koyanagi, 6-1,801 Irifune, Urayasu City, Chiba Prefecture (72) Inventor, Yuetsu Tanaka, Excel No. 305, 7th Excel, 4th 3000, Iriya, Zama City, Kanagawa Prefecture (72) Masayuki Miyasaka Suita, Osaka Prefecture City Maruyama Town No. 3-315
Claims (8)
することを特徴とする免疫不全マウスの作出方法。1. A method for producing an immunodeficient mouse, which comprises administering an antibody that reduces NK activity to the mouse.
疫不全マウス。2. An immunodeficient mouse produced by the method according to claim 1.
し、かつ脾臓を持たないことを特徴とする免疫不全マウ
ス系統BALB/cA-Dh,scid 。3. An immunodeficient mouse strain BALB / cA-Dh, scid, which is deficient in both functional T cells and B cells and has no spleen.
し、かつNK活性が健常なマウスよりも低下していること
を特徴とする免疫不全マウス系統BALB/cA-bg,scid 。4. An immunodeficient mouse strain BALB / cA-bg, scid, characterized in that both functional T cells and B cells are deleted and NK activity is lower than that in healthy mice.
し、かつ胸腺、被毛を欠失していることを特徴とする免
疫不全マウス系統BALB/cA-nu,scid 。5. An immunodeficient mouse strain BALB / cA-nu, scid, which is deficient in both functional T cells and B cells and in thymus and hair.
し、かつNK活性及びマクロファージ機能が健常なマウス
よりも低下していることを特徴とする免疫不全マウス系
統NOD-scid。6. An immunodeficient mouse strain NOD-scid, which has both functional T cells and B cells deleted and has reduced NK activity and macrophage function as compared with healthy mice.
していることを特徴とする免疫不全マウス系統C57BL/6-
RAG0/0。7. An immunodeficient mouse strain C57BL / 6- characterized in that both functional T cells and B cells are deleted.
RAG 0/0 .
していることを特徴とする免疫不全マウス系統BALB/cA-
RAG0/0。8. An immunodeficient mouse strain BALB / cA- characterized in that both functional T cells and B cells are deleted.
RAG 0/0 .
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25351095A JPH0994040A (en) | 1995-09-29 | 1995-09-29 | Immunodeficient mouse and its creation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25351095A JPH0994040A (en) | 1995-09-29 | 1995-09-29 | Immunodeficient mouse and its creation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0994040A true JPH0994040A (en) | 1997-04-08 |
Family
ID=17252383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25351095A Pending JPH0994040A (en) | 1995-09-29 | 1995-09-29 | Immunodeficient mouse and its creation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0994040A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002043477A1 (en) * | 2000-12-01 | 2002-06-06 | Central Institute For Experimental Animals | Method of constructing mouse suitable for the take, differentiation and proliferation of heterogenous cells, mouse constructed by this method and use of the mouse |
| JP2005509136A (en) * | 2001-04-03 | 2005-04-07 | エイ ティ アンド ティ ワイヤレス サービシズ インコーポレイテッド | Mobile station location estimation method and apparatus |
| WO2011125948A1 (en) | 2010-04-02 | 2011-10-13 | 独立行政法人理化学研究所 | Method for preparing es cells |
-
1995
- 1995-09-29 JP JP25351095A patent/JPH0994040A/en active Pending
Cited By (5)
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| WO2002043477A1 (en) * | 2000-12-01 | 2002-06-06 | Central Institute For Experimental Animals | Method of constructing mouse suitable for the take, differentiation and proliferation of heterogenous cells, mouse constructed by this method and use of the mouse |
| US7145055B2 (en) | 2000-12-01 | 2006-12-05 | Central Institute For Experimental Animals | Method of producing a mouse suitable for the engraftment, differentiation and proliferation of heterologous cells, mouse produced by this method and use of the mouse |
| US8541033B2 (en) | 2000-12-01 | 2013-09-24 | Central Institute For Experimental Animals | Production of human antibodies using NOD/SCID/γcnull mice |
| JP2005509136A (en) * | 2001-04-03 | 2005-04-07 | エイ ティ アンド ティ ワイヤレス サービシズ インコーポレイテッド | Mobile station location estimation method and apparatus |
| WO2011125948A1 (en) | 2010-04-02 | 2011-10-13 | 独立行政法人理化学研究所 | Method for preparing es cells |
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