JPH0987294A - Production of glucoside - Google Patents
Production of glucosideInfo
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- JPH0987294A JPH0987294A JP7245803A JP24580395A JPH0987294A JP H0987294 A JPH0987294 A JP H0987294A JP 7245803 A JP7245803 A JP 7245803A JP 24580395 A JP24580395 A JP 24580395A JP H0987294 A JPH0987294 A JP H0987294A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、好熱性菌バチルス
ステアロサーモフィラス（Bacillus stearothermophi
lus ）由来のα−グルコシダーゼを利用した配糖体の製
造方法に関するものである。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a thermophilic bacterium, Bacillus stearothermophi.
lus) -derived α-glucosidase.
【０００２】[0002]
【従来の技術】配糖体の製造方法として、従来、α−グ
ルコシダーゼを用いて、マルトースをはじめとするマル
トオリゴ糖、アミロース、アミロペクチン又は各種デン
プン等のα−１、４結合を持つグルカンを糖供与体とし
て製造する方法が報告されている（特開平４−１１２７
９８号公報）が、この方法では、アルコール性水酸基を
有する化合物を糖受容体とすることは報告されているも
のの、フェノール性水酸基及びフラボノイド類縁化合物
を糖受容体とする配糖体の製造方法については、報告さ
れていない。2. Description of the Related Art Conventionally, as a method for producing glycosides, maltose and other maltooligosaccharides, amylose, amylopectin, various starches and other glucans having α-1,4 bonds have been conventionally used as sugar donors using α-glucosidase. A method for producing a body has been reported (Japanese Patent Laid-Open No. 4-1127).
98) discloses that a compound having an alcoholic hydroxyl group is used as a sugar acceptor in this method, but a method for producing a glycoside using a phenolic hydroxyl group and a flavonoid analog compound as a sugar acceptor is described. Has not been reported.
【０００３】また、アミラーゼの一種であるシクロデキ
ストリン生成酵素を用いて配糖体を製造する方法も報告
されている（日本農芸化学会誌Ｖｏｌ．６７、Ｎｏ．
５、１９９３、Ｐ９３）が、この方法では、アルコール
性水酸基を有する化合物の他に、フェノール性水酸基
や、フラボノイド類縁化合物の配糖体を製造することが
できるものの、反応組成物が複雑になるため、もう１段
酵素処理（グルコアミラーゼ処理）工程を経ねばなら
ず、操作工程及びコストの面から問題が多かった。A method for producing a glycoside using a cyclodextrin-forming enzyme, which is a type of amylase, has also been reported (Journal of Japan Society for Agricultural Chemistry, Vol.
5, 1993, P93), in this method, in addition to the compound having an alcoholic hydroxyl group, a phenolic hydroxyl group and a glycoside of a flavonoid-related compound can be produced, but the reaction composition becomes complicated. However, another step of enzyme treatment (glucoamylase treatment) has to be performed, and there have been many problems in terms of operating steps and costs.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、操作工程が
容易で、しかもアルコール性水酸基を有する化合物の他
に、フェノール性水酸基を有する化合物やフラボノイド
類縁化合物の配糖体を製造することのできる配糖体の製
造方法を提供することを目的とするものである。According to the present invention, a glycoside of a compound having a phenolic hydroxyl group or a flavonoid-related compound can be produced in addition to a compound having an alcoholic hydroxyl group, which can be easily operated. It is intended to provide a method for producing a glycoside.
【０００５】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、このよう
な課題を解決するために鋭意検討の結果、バチルスステ
アロサーモフィラス（Bacillus stearothermophilus ）
由来のα−グルコシダーゼが、水酸基を有する化合物に
対して広く糖転移能を有するということを見出し、本発
明に到達した。[Means for Solving the Problems] As a result of intensive studies to solve such problems, the present inventors have found that Bacillus stearothermophilus
The inventors have found that the derived α-glucosidase has a wide range of transglycosylation ability with respect to compounds having a hydroxyl group, and arrived at the present invention.
【０００６】すなわち、本発明は、水酸基を有する化合
物とα−１、４結合を持つグルカンにα−グルコシダー
ゼを作用させて配糖体を製造するに際し、α−グルコシ
ダーゼとしてバチルス ステアロサーモフィラス（Baci
llus stearothermophilus ）由来のα−グルコシダーゼ
を用いることを特徴とする配糖体の製造方法を要旨とす
るものである。That is, according to the present invention, when α-glucosidase is allowed to act on a compound having a hydroxyl group and a glucan having α-1,4 bond to produce a glycoside, Bacillus stearothermophilus (α-glucosidase is used as an α-glucosidase. Baci
llus stearothermophilus) -derived α-glucosidase is used as a gist.
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】本発明に用いられる水酸基を有す
る化合物としては、例えば、メタノール、エタノール、
１−プロパノール、１−フェニルエタノール、フェネチ
ルアルコール、ゲラニオール、アスコルビン酸、コウジ
酸、１−ブタノール、ベンジルアルコール、フェノキシ
エタノール、２−プロパノール、１−オクタノール、３
−オクタノール、シトロネロール等のアルコール性水酸
基を有する化合物や、ジメトキシフェノール、カテコー
ル、レゾルシノール、ヒドロキノン、バニリン、カテコ
ール、ピガノール、オイゲノール等のフェノール性水酸
基を有する化合物、ルチン、フラボノール、フラバノ
ン、フラボン等のフラボノイド類縁化合物等が挙げられ
る。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Examples of the compound having a hydroxyl group used in the present invention include methanol, ethanol,
1-propanol, 1-phenylethanol, phenethyl alcohol, geraniol, ascorbic acid, kojic acid, 1-butanol, benzyl alcohol, phenoxyethanol, 2-propanol, 1-octanol, 3
-Octanol, compounds having alcoholic hydroxyl groups such as citronellol, and compounds having phenolic hydroxyl groups such as dimethoxyphenol, catechol, resorcinol, hydroquinone, vanillin, catechol, piganol, eugenol, flavonoids such as rutin, flavonol, flavanone, flavone A compound etc. are mentioned.
【０００８】また、本発明に用いられるα−１、４結合
を持つグルカンとしては、例えば、マルトース等のマル
トオリゴ糖、アミロース、アミロペクチン、各種デンプ
ン等が挙げられる。Examples of the glucan having an α-1,4 bond used in the present invention include maltooligosaccharides such as maltose, amylose, amylopectin, and various starches.
【０００９】本発明に用いられるバチルス ステアロサ
ーモフィラス（Bacillus stearothermophilus ）由来の
α−グルコシダーゼとしては、市販の酵素を用いてもよ
く（例えば、シグマ社製、Ｇ３６５１）、また、α−グ
ルコシダーゼ産生能を有するバチルス ステアロサーモ
フィラス（Bacillus stearothermophilus ）に属する細
菌、例えばバチルス ステアロサーモフィラス（Bacill
us stearothermophilus ）ＵＫ５６３株（ＦＥＲＭ Ｐ
−７２７５）を培養することによって得られたものを用
いてもよい。As the α-glucosidase derived from Bacillus stearothermophilus used in the present invention, a commercially available enzyme may be used (eg, G3651 manufactured by Sigma), or α-glucosidase production Bacteria belonging to Bacillus stearothermophilus, such as Bacillus stearothermophilus
us stearothermophilus) UK563 strain (FERM P
-7275) may be used.
【００１０】以下、このバチルス ステアロサーモフィ
ラス（Bacillus stearothermophilus ）ＵＫ５６３株の
産生するα−グルコシダーゼの理化学的性質について説
明する。The physicochemical properties of the α-glucosidase produced by this Bacillus stearothermophilus UK563 strain will be described below.
【００１１】（１）作用 α−１、４結合を持つグルカンの存在下で、アルコール
性水酸基を有する化合物、フェノール性水酸基を有する
化合物又はフラボノイド類縁化合物等の水酸基に、α結
合で糖転移を行う。(1) Action In the presence of glucan having α-1,4 bond, sugar transfer is carried out by α bond to hydroxyl group of compound having alcoholic hydroxyl group, compound having phenolic hydroxyl group or flavonoid analogue compound. .
【００１２】（２）至適ｐＨ ａ．加水分解 ｐ−ニトロフェニル−α−グルコピラノシド（以下、Ｐ
ＮＰＧと略記する）を基質として各ｐＨのリン酸緩衝液
（ただし、ｐＨ６．０以下では酢酸緩衝液を、ＰＨ９．
０以上ではグリシン−ＮａＯＨ緩衝液を用いた）中で３
０℃で１５分間反応させた結果、図１に示すとおり、至
適ｐＨはｐＨ６．０であった。図１は、この酵素の加水
分解活性のｐＨによる変化を示すグラフであり、縦軸に
酵素活性を、横軸にｐＨを示している。なお、酵素活性
は測定値が最高値を示したとき（ｐＨ６．０）の活性を
１００とした相対活性で表した。(2) Optimum pH a. Hydrolyzed p-nitrophenyl-α-glucopyranoside (hereinafter P
NPG is used as a substrate, and a phosphate buffer solution of each pH (however, at pH 6.0 or less, an acetate buffer solution and a pH buffer solution of pH 9.
0 or more used glycine-NaOH buffer) 3
As a result of reacting at 0 ° C. for 15 minutes, the optimum pH was pH 6.0 as shown in FIG. FIG. 1 is a graph showing changes in the hydrolysis activity of this enzyme with pH, in which the vertical axis represents enzyme activity and the horizontal axis represents pH. The enzyme activity was expressed as a relative activity with the activity when the measured value showed the highest value (pH 6.0) as 100.
【００１３】ｂ．糖転移 マルトースを糖供与体、ヒドロキノンを糖受容体として
各ｐＨのリン酸緩衝液（ただし、ｐＨ６．０以下では酢
酸緩衝液を、ＰＨ９．０以上ではグリシン−ＮａＯＨ緩
衝液を用いた）中で、４０℃で３時間反応させた結果、
図２に示すとおり、至適ｐＨは９．０であった。図２
は、この酵素の糖転移活性のｐＨによる変化を示すグラ
フであり、縦軸に糖転移率を、横軸にｐＨを示してい
る。なお、糖転移率は測定値が最高値を示したとき（ｐ
Ｈ９．０）の転移率を１００とした相対転移率で表し
た。B. Sugar transfer In maltose as a sugar donor and hydroquinone as a sugar acceptor in a phosphate buffer at each pH (provided that an acetic acid buffer was used at pH 6.0 or lower, and a glycine-NaOH buffer was used at pH 9.0 or higher). As a result of reacting at 40 ° C for 3 hours,
As shown in FIG. 2, the optimum pH was 9.0. FIG.
Is a graph showing changes in the transglycosylation activity of this enzyme with pH, in which the vertical axis represents the transglycosylation rate and the horizontal axis represents the pH. The transglycosylation rate is the highest when the measured value shows the highest value (p
It was expressed as a relative transfer rate with the transfer rate of H9.0) as 100.
【００１４】（３）作用適温の範囲 ＰＮＰＧを基質として０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ８．０）中で各温度で１５分間反応させた結果、
図３に示すとおり、作用適温の範囲は３０〜６０℃であ
った。図３は、この酵素の活性に対する温度の影響を示
すグラフであり、縦軸に酵素活性を、横軸に温度を示し
ており、酵素活性は４０℃での測定値を１００とした相
対活性で表した。(3) Range of suitable temperature of action As a result of reacting for 15 minutes at each temperature in 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 8.0) using PNPG as a substrate,
As shown in FIG. 3, the optimum working temperature range was 30 to 60 ° C. FIG. 3 is a graph showing the influence of temperature on the activity of this enzyme, in which the vertical axis represents the enzyme activity and the horizontal axis represents the temperature. The enzyme activity is a relative activity with the measured value at 40 ° C. being 100. expressed.
【００１５】（４）温度による失活の条件 １００℃において２０分間処理することにより完全に失
活する。(4) Conditions for deactivation by temperature Complete deactivation is achieved by treating at 100 ° C. for 20 minutes.
【００１６】（５）分子量 ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動による測定で約５０、０００である。(5) Molecular weight It is about 50,000 as measured by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis.
【００１７】このような酵素は、上記のようなバチルス
ステアロサーモフィラス（Bacillus stearothermophi
lus ）を培養、精製することにより得ることができる。
培養に用いられる培地としては、炭素源としては、例え
ば、グルコース、シュークロース、フルクトース、澱粉
加水分解物、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液の糖類、酢酸、乳
酸等の有機酸類、さらに使用する細菌が資化しうるアル
コール類、油脂、脂肪酸及びグリセリン等が使用でき、
窒素源としては、例えば、硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、リン酸アンモニウム、アンモニア、アミノ
酸、ペプトン、肉エキス、酵母エキス等の無機又は有機
物が使用できる。さらに無機塩類として、例えば、カリ
ウム、コバルト等の各塩類や、必要に応じて微量金属
塩、コーンスティープリカー、ビタミン類、核酸等を使
用してもよく、細菌の一般的培地が使用できる。Such an enzyme is used in the Bacillus stearothermophi as described above.
It can be obtained by culturing and purifying lus).
As the medium used for the culture, as a carbon source, for example, glucose, sucrose, fructose, starch hydrolysates, molasses, sugars of sulfite waste liquor, acetic acid, organic acids such as lactic acid, and assimilated bacteria to be used. Available alcohols, fats, fatty acids, glycerin, etc. can be used,
As the nitrogen source, for example, inorganic or organic substances such as ammonium sulfate, ammonium chloride, ammonium phosphate, ammonia, amino acids, peptone, meat extract and yeast extract can be used. Further, as the inorganic salts, for example, salts such as potassium and cobalt, and if necessary, trace metal salts, corn steep liquor, vitamins, nucleic acids and the like may be used, and a general bacterial culture medium can be used.
【００１８】また、培養条件としては、これらの培地を
用いて、３０〜６５℃、好ましくは４５〜６０℃、最適
には５８℃で、２〜６時間、好気的に培養すればよい。The culture conditions may be aerobic culture using these media at 30 to 65 ° C., preferably 45 to 60 ° C., optimally 58 ° C. for 2 to 6 hours.
【００１９】本発明に用いられるα−グルコシダーゼ
は、このようにして得られた菌体の菌体破砕液を、ゲル
ろ過クロマトグラフィー、疏水性クロマトグラフィー、
アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマ
トグラフィー等の各種クロマトグラフィーを用いて精製
することにより得ることができる。The α-glucosidase used in the present invention is obtained by subjecting the cell disruption solution of the cells thus obtained to gel filtration chromatography, hydrophobic chromatography,
It can be obtained by purification using various chromatographies such as affinity chromatography and ion exchange chromatography.
【００２０】本発明において、水酸基を有する化合物と
α−１、４結合を持つグルカンにα−グルコシダーゼを
作用させる際の、反応液中の水酸基を有する化合物の濃
度としては、０．１〜５０重量％であることが好まし
く、特に好ましくは１〜１０重量％である。この場合、
水に難溶な基質に対しては基質が溶解するように、アセ
トン、アセトニトリル等の水混和性有機溶媒を適当量添
加してもよい。また、α−１、４結合を持つグルカンの
濃度としては、１〜８０重量％が好ましく、特にこのま
しくは１０〜５０重量％である。また、酵素の添加量と
しては、５〜３０Ｕ／ミリリットルとなるように添加す
ることが好ましく、特に１０〜２０Ｕ／ミリリットルと
なるように添加することが好ましい。In the present invention, when the α-glucosidase is allowed to act on the compound having a hydroxyl group and the glucan having an α-1,4 bond, the concentration of the compound having a hydroxyl group in the reaction solution is 0.1 to 50% by weight. %, Particularly preferably 1 to 10% by weight. in this case,
An appropriate amount of a water-miscible organic solvent such as acetone or acetonitrile may be added so that the substrate is soluble in a water-insoluble substrate. The concentration of the glucan having α-1,4 bond is preferably 1 to 80% by weight, particularly preferably 10 to 50% by weight. The amount of enzyme added is preferably 5 to 30 U / ml, and more preferably 10 to 20 U / ml.
【００２１】反応条件としては、３０〜６０℃、好まし
くは４０〜５０℃で、３〜２０時間反応させればよい。The reaction conditions are 30 to 60 ° C., preferably 40 to 50 ° C., and the reaction is carried out for 3 to 20 hours.
【００２２】このようにして得られた配糖体は、反応後
にグルコアミラーゼ処理等の後処理を行う必要は全くな
い。反応終了後は各種溶媒による抽出及び各種クロマト
グラフィーによる精製により、配糖体の精製標品を得る
ことができる。The glycoside thus obtained need not be subjected to any post-treatment such as glucoamylase treatment after the reaction. After completion of the reaction, a purified preparation of glycoside can be obtained by extraction with various solvents and purification by various chromatography.
【００２３】[0023]
【実施例】以下、本発明を実施例によって具体的に説明
する。なお、本発明におけるα−グルコシダーゼの活性
及び糖転移率は以下のようにして測定した。EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to examples. The activity of α-glucosidase and the transglycosylation rate in the present invention were measured as follows.
【００２４】（１）α−グルコシダーゼ活性の測定 α−グルコシダーゼ酵素液（又は蒸留水に凍結乾燥した
酵素を溶解したもの）を、１０ｍＭのリン酸緩衝溶液
（ｐＨ７．５）で０．００６〜０．０２２Ｕ／ミリリッ
トルとなるように希釈して、酵素溶液を調整した。(1) Measurement of α-glucosidase activity An α-glucosidase enzyme solution (or a lyophilized enzyme dissolved in distilled water) was added to 0.006 to 0 with a 10 mM phosphate buffer solution (pH 7.5). The enzyme solution was prepared by diluting to 0.222 U / ml.
【００２５】０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）
１．０ミリリットルに、２０ｍＭのＰＮＰＧ溶液０．５
ミリリットルを加え、３０℃で５分間インキュベーショ
ンした後、酵素溶液０．５ミリリットルを添加し、３０
℃で正確に１５分間インキュベーションした。その後、
０．２Ｍの炭酸ナトリウム溶液２．０ミリリットルを添
加し、４００ｎｍにおける吸光度（Ｃ）を測定した。ま
た、ブランクとして上記酵素溶液の代わりに精製水を用
いて同様の操作を行って４００ｎｍにおける吸光度（Ｃ
ｂ）を測定した。α−グルコシダーゼ活性（Ａ）は、以
下の式より算出した。0.1M phosphate buffer (pH 6.3)
0.5 ml of 20 mM PNPG solution in 1.0 ml
After adding milliliters and incubating at 30 ° C. for 5 minutes, 0.5 ml of enzyme solution was added,
Incubate at exactly 15 minutes at ° C. afterwards,
2.0 ml of 0.2 M sodium carbonate solution was added, and the absorbance (C) at 400 nm was measured. Further, as a blank, purified water was used instead of the above enzyme solution, and the same operation was performed to obtain the absorbance (C
b) was measured. The α-glucosidase activity (A) was calculated by the following formula.
【００２６】[0026]
【数１】 [Equation 1]
【００２７】なお、本発明においてα−グルコシダーゼ
活性の１Ｕは、上記反応系で３０℃で１分間に１μｍｏ
ｌのＰＮＰＧを加水分解できる酵素量と定義する。In the present invention, 1 U of α-glucosidase activity is 1 μmo per minute at 30 ° C. in the above reaction system.
It is defined as the amount of enzyme capable of hydrolyzing 1 PNPG.
【００２８】（２）糖転移率の測定 α−１、４結合を持つグルカン（糖供与体）と水酸基を
有する化合物（糖受容体）を含む８０ｍＭのほう酸緩衝
溶液（ｐＨ９）に、α−グルコシダーゼを添加し、反応
させた後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、Ｏ
ＤＳカラムＣ−１８（ミリポア社製）を用い、４０％の
メタノール溶液で溶出し２５４ｎｍの吸光度により検出
した）にて分析を行った。また、コントロールとして酵
素無添加の溶液を調製し、同様の条件で分析を行った。
糖転移率は、以下の式より算出した。(2) Measurement of transglycosylation rate An α-glucosidase was added to an 80 mM borate buffer solution (pH 9) containing a glucan (sugar donor) having an α-1,4 bond and a compound having a hydroxyl group (sugar acceptor). Was added and reacted, and then high performance liquid chromatography (HPLC, O
Using a DS column C-18 (manufactured by Millipore), elution was carried out with a 40% methanol solution and detection was carried out by absorbance at 254 nm). As a control, an enzyme-free solution was prepared and analyzed under the same conditions.
The glycosyl transfer rate was calculated by the following formula.
【００２９】[0029]
【数２】 [Equation 2]
【００３０】参考例１（α−グルコシダーゼの調製） 培地（グルコース ０．３５重量％、酵母エキス ０．
３重量％、ペプトン０．２重量％、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．
０４重量％、Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ０．０４重量
％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１重量％、ｐＨ７．
８）２０リットルに、バチルス ステアロサーモフィラ
ス（Bacillus stearothermophilus ）ＵＫ５６３（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−７２７５）を植菌し、５８℃で５時間培養を
行った後、培養液を遠心分離してバチルス ステアロサ
ーモフィラス（Bacillus stearothermophilus ）ＵＫ５
６３の湿菌体約６０ｇを得た。Reference Example 1 (Preparation of α-glucosidase) Medium (glucose 0.35% by weight, yeast extract 0.
3% by weight, peptone 0.2% by weight, KH 2 PO 4 0.
04 wt%, Na 2 HPO 4 · 12H 2 O0.04 wt%, MgSO 4 · 7H 2 O 0.1 wt%, pH 7.
8) Add 20 liters of Bacillus stearothermophilus UK563 (FE
RM P-7275) and culturing at 58 ° C. for 5 hours, and then centrifuging the culture broth to isolate Bacillus stearothermophilus UK5.
About 60 g of 63 wet cells were obtained.
【００３１】得られた湿菌体約６０ｇを２５ｍＭのリン
酸緩衝溶液（ｐＨ６）６００ミリリットルに懸濁した
後、フレンチプレンス（大日本製薬社製）で菌体を破砕
した。この菌体破砕液をＤＥＡＥ−セファロースカラム
クロマトグラフィー（２０ｃｍφ×１０ｃｍ、ファルマ
シア社製）にアプライし、２５ｍＭのリン酸緩衝溶液
（ｐＨ６）の０〜０．２ＭのＫＣｌ濃度勾配により溶出
を行った。得られた活性画分を限外ろ過膜（旭化成社
製）を用いて脱塩、濃縮を行った後、フェニルセファロ
ースカラムクロマトグラフィー（５ｃｍφ×１０ｃｍ、
ファルマシア社製）にアプライし、２５ｍＭのリン酸緩
衝液（ｐＨ６）の０．８〜０Ｍの硫安濃度勾配により溶
出を行った。得られた活性画分を限外ろ過膜（旭化成社
製）を用いて脱塩、濃縮を行った後、凍結乾燥させるこ
とによりα−グルコシダーゼの精製標品約２００ｍｇを
得た。このような方法で精製した酵素は、ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥで単一のバンドを示した。About 60 g of the obtained wet bacterial cells was suspended in 600 ml of a 25 mM phosphate buffer solution (pH 6), and the bacterial cells were crushed with French presence (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.). The disrupted cell suspension was applied to DEAE-Sepharose column chromatography (20 cmφ × 10 cm, manufactured by Pharmacia) and eluted with a 0 to 0.2 M KCl concentration gradient of a 25 mM phosphate buffer solution (pH 6). The obtained active fraction was desalted and concentrated using an ultrafiltration membrane (manufactured by Asahi Kasei), and then phenyl sepharose column chromatography (5 cmφ × 10 cm,
(Manufactured by Pharmacia) and eluted with a gradient of ammonium sulfate concentration of 25 mM phosphate buffer (pH 6) of 0.8 to 0 M. The obtained active fraction was desalted and concentrated using an ultrafiltration membrane (manufactured by Asahi Kasei Co., Ltd.) and then freeze-dried to obtain about 200 mg of a purified sample of α-glucosidase. The enzyme purified by such a method is SDS-PA.
GE showed a single band.
【００３２】実施例１ 糖受容体として、マルトース、ステビオシド、ヒドロキ
ノン、アスコルビン酸、コウジ酸、メタノール、エタノ
ール、１−プロパノール、１−ブタノール、ベンジルア
ルコール、フェネチルアルコール、フェノキシエタノー
ル、２−プロパノール、１−フェニルエタノール、ルチ
ン、バニリン、レゾルシノール、カテコール、ピロガノ
ール、ゲラニオール、１−オクタノール、３−オクタノ
ール、シトロネロール、オイゲノール、３，４−ジメト
キシフェノールを用いて、以下のようにして配糖体を製
造した。Example 1 As sugar acceptors, maltose, stevioside, hydroquinone, ascorbic acid, kojic acid, methanol, ethanol, 1-propanol, 1-butanol, benzyl alcohol, phenethyl alcohol, phenoxyethanol, 2-propanol, 1-phenyl Glycosides were produced as follows using ethanol, rutin, vanillin, resorcinol, catechol, pyroganol, geraniol, 1-octanol, 3-octanol, citronellol, eugenol and 3,4-dimethoxyphenol.
【００３３】マルトース１０重量％、糖受容体２重量％
（ステビオシドは１重量％）、参考例１で調製したα−
グルコシダーゼの１０Ｕ／ミリリットル溶液を含む反応
液１ミリリットルを４０℃で３時間反応させた。配糖体
が製造されているかどうかは、ＴＬＣを用いて確認し
た。その結果を表１に示す。Maltose 10% by weight, sugar acceptor 2% by weight
(1% by weight of stevioside), α-prepared in Reference Example 1
1 ml of a reaction solution containing a 10 U / ml solution of glucosidase was reacted at 40 ° C. for 3 hours. It was confirmed using TLC whether or not the glycoside was produced. Table 1 shows the results.
【００３４】[0034]
【表１】 [Table 1]
【００３５】表１からわかるように、本発明の方法によ
れば、アルコール性水酸基を有する化合物の他に、フェ
ノール性水酸基を有する化合物及びフラボノイド類縁化
合物においても配糖体を製造することができた。As can be seen from Table 1, according to the method of the present invention, glycosides could be produced not only with a compound having an alcoholic hydroxyl group but also with a compound having a phenolic hydroxyl group and a flavonoid analogue. .
【００３６】実施例２（フェネチルグルコシドの製造） ８０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ９）５００ミリリットル
にフェネチルアルコール１０ｇ及びマルトース５０ｇを
溶解し、この溶液に参考例１で調製したα−グルコシダ
ーゼを１０Ｕ／ミリリットルとなるように添加した。こ
の溶液を４０℃で１９時間反応させた後、１００℃で５
分間処理して反応を停止させた。この反応液の糖転移率
は３４％であった。Example 2 (Production of phenethyl glucoside) 10 g of phenethyl alcohol and 50 g of maltose were dissolved in 500 ml of 80 mM borate buffer (pH 9), and 10 U / ml of the α-glucosidase prepared in Reference Example 1 was dissolved in this solution. Was added. The solution was reacted at 40 ° C for 19 hours and then at 100 ° C for 5 hours.
The reaction was stopped by treatment for a minute. The transglycosylation ratio of this reaction solution was 34%.
【００３７】次に、得られた反応物中の未反応の原料を
クロロホルムにより抽出除去した。水層画分を５０ミリ
リットルのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学社製）
カラムに通液し、フェネチルグルコシドを吸着させ、蒸
留水１リットルでカラムを洗浄した後、５００ミリリッ
トルのメタノールでフェネチルグルコシドを溶出させ
た。得られたフェネチルグルコシド画分を減圧濃縮した
後、凍結乾燥することによりフェネチルグルコシドの粉
末５．６ｇを得た。Next, unreacted raw materials in the obtained reaction product were extracted and removed with chloroform. 50 ml of DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical)
After passing through the column to adsorb phenethyl glucoside and washing the column with 1 liter of distilled water, the phenethyl glucoside was eluted with 500 ml of methanol. The obtained phenethyl glucoside fraction was concentrated under reduced pressure and then freeze-dried to obtain 5.6 g of phenethyl glucoside powder.
【００３８】得られたフェネチルグルコシドをα−グル
コシダーゼ（東洋紡社製、ＡＧＨ−２１１）で処理した
後、ＨＰＬＣで分析を行ったところフェネチルグルコシ
ドのピークがなくなり、フェネチルアルコールのピーク
が増加したことから、このフェネチルグルコシドは、フ
ェネチルアルコールにグルコースがα結合した化合物で
あることがわかる。The obtained phenethyl glucoside was treated with α-glucosidase (Toyobo Co., Ltd., AGH-211) and analyzed by HPLC. As a result, the peak of phenethyl glucoside disappeared and the peak of phenethyl alcohol increased. It can be seen that this phenethyl glucoside is a compound in which glucose is α-bonded to phenethyl alcohol.
【００３９】実施例３（１−フェニルエチルグルコシド
の製造） ８０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ９）５００ミリリットル
に１−フェニルエタノール１０ｇ及びマルトース５０ｇ
を溶解し、この溶液に参考例１で調製したα−グルコシ
ダーゼを１０Ｕ／ミリリットルとなるように添加した。
この溶液を４０℃で１７時間反応させた後、１００℃で
５分間処理して反応を停止させた。この反応液の糖転移
率は１８％であった。Example 3 (Production of 1-phenylethyl glucoside) 10 g of 1-phenylethanol and 50 g of maltose were added to 500 ml of 80 mM borate buffer (pH 9).
Was dissolved, and the α-glucosidase prepared in Reference Example 1 was added to this solution at 10 U / ml.
This solution was reacted at 40 ° C. for 17 hours and then treated at 100 ° C. for 5 minutes to stop the reaction. The glycosyl transfer rate of this reaction solution was 18%.
【００４０】次に、得られた反応物中の未反応の原料を
クロロホルムにより抽出除去した。水層画分を５０ミリ
リットルのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学社製）
カラムに通液し、１−フェニルエチルグルコシドを吸着
させ、蒸留水１リットルでカラムを洗浄した後、５００
ミリリットルのメタノールで１−フェニルエチルグルコ
シドを溶出させた。得られた１−フェニルエチルグルコ
シド画分を減圧濃縮した後、凍結乾燥することにより１
−フェニルエチルグルコシドの粉末２．７ｇを得た。Next, unreacted raw materials in the obtained reaction product were extracted and removed with chloroform. 50 ml of DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical)
After passing through the column to adsorb 1-phenylethyl glucoside and washing the column with 1 liter of distilled water, 500
The 1-phenylethyl glucoside was eluted with milliliters of methanol. The obtained 1-phenylethyl glucoside fraction was concentrated under reduced pressure and then freeze-dried to give 1
2.7 g of powder of phenylethyl glucoside was obtained.
【００４１】得られた１−フェニルエチルグルコシドを
α−グルコシダーゼ（東洋紡社製、ＡＧＨ−２１１）で
処理した後、ＨＰＬＣで分析を行ったところ１−フェニ
ルエチルグルコシドのピークがなくなり、１−フェニル
エタノールのピークが増加したことから、この１−フェ
ニルエチルグルコシドは、１−フェニルエタノールにグ
ルコースがα結合した化合物であることがわかる。The obtained 1-phenylethyl glucoside was treated with α-glucosidase (Toyobo Co., Ltd., AGH-211) and analyzed by HPLC. The peak of 1-phenylethyl glucoside disappeared and 1-phenylethanol was obtained. It was found that the 1-phenylethyl glucoside was a compound in which glucose was α-bonded to 1-phenylethanol.
【００４２】実施例４（ヒドロキノングルコシドの製
造） ８０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ９）５００ミリリットル
にヒドロキノン１０ｇ及びマルトース５０ｇを溶解し、
この溶液に参考例１で調製したα−グルコシダーゼを１
０Ｕ／ミリリットルとなるように添加した。この溶液を
４０℃で３時間反応させた後、１００℃で５分間処理し
て反応を停止させた。この反応液の糖転移率は３０％で
あった。Example 4 (Production of hydroquinone glucoside) 10 g of hydroquinone and 50 g of maltose were dissolved in 500 ml of 80 mM borate buffer (pH 9),
To this solution, 1 part of α-glucosidase prepared in Reference Example 1 was added.
It was added at 0 U / ml. This solution was reacted at 40 ° C. for 3 hours and then treated at 100 ° C. for 5 minutes to stop the reaction. The glycosyl transfer rate of this reaction solution was 30%.
【００４３】次に、得られた反応物中の未反応の原料を
酢酸エチルにより抽出除去した。水層画分を５０ミリリ
ットルのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学社製）カ
ラムに通液し、ヒドロキノングルコシドを吸着させ、蒸
留水１リットルでカラムを洗浄した後、５００ミリリッ
トルのメタノールでヒドロキノングルコシドを溶出させ
た。得られたヒドロキノングルコシド画分を減圧濃縮し
た後、凍結乾燥することによりヒドロキノングルコシド
の粉末５．２ｇを得た。Next, unreacted raw materials in the obtained reaction product were extracted and removed with ethyl acetate. The aqueous layer fraction was passed through a 50 ml DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) column to adsorb hydroquinone glucoside, and after washing the column with 1 liter of distilled water, the hydroquinone glucoside was eluted with 500 ml of methanol. Let The obtained hydroquinone glucoside fraction was concentrated under reduced pressure and then freeze-dried to obtain 5.2 g of hydroquinone glucoside powder.
【００４４】得られたヒドロキノングルコシドをα−グ
ルコシダーゼ（東洋紡社製、ＡＧＨ−２１１）で処理し
た後、ＨＰＬＣで分析を行ったところヒドロキノングル
コシドのピークがなくなり、ヒドロキノンのピークが増
加したことから、このヒドロキノングルコシドは、ヒド
ロキノンにグルコースがα結合した化合物であることが
わかる。The obtained hydroquinone glucoside was treated with α-glucosidase (TOYOBO Co., Ltd., AGH-211) and analyzed by HPLC. As a result, the peak of hydroquinone glucoside disappeared and the peak of hydroquinone increased. It can be seen that hydroquinone glucoside is a compound in which glucose is α-bonded to hydroquinone.
【００４５】実施例５（ルチングルコシドの製造） ８０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ９）５００ミリリットル
にルチン１０ｇ及びマルトース５０ｇを溶解し、この溶
液に参考例１で調製したα−グルコシダーゼを１０Ｕ／
ミリリットルとなるように添加した。この溶液を４０℃
で１７時間反応させた後、１００℃で５分間処理して反
応を停止させた。この反応液の糖転移率は１２％であっ
た。Example 5 (Production of rutin glucoside) 10 g of rutin and 50 g of maltose were dissolved in 500 ml of 80 mM borate buffer (pH 9), and 10 U of the α-glucosidase prepared in Reference Example 1 was dissolved in this solution.
It was added so that it became milliliter. This solution at 40 ℃
After reacting for 17 hours at 100 ° C. for 5 minutes, the reaction was stopped. The glycosyl transfer rate of this reaction solution was 12%.
【００４６】次に、得られた反応物中の未反応の原料を
クロロホルムにより抽出除去した。水層画分を５０ミリ
リットルのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学社製）
カラムに通液し、ルチングルコシドを吸着させ、蒸留水
１リットルでカラムを洗浄した後、５００ミリリットル
のメタノールでルチングルコシドを溶出させた。得られ
たルチングルコシド画分を減圧濃縮した後、凍結乾燥す
ることによりルチングルコシドの粉末３．２ｇを得た。Next, unreacted raw materials in the obtained reaction product were extracted and removed with chloroform. 50 ml of DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical)
After passing through the column to adsorb rutin glucoside and washing the column with 1 liter of distilled water, rutin glucoside was eluted with 500 ml of methanol. The obtained rutin glucoside fraction was concentrated under reduced pressure and then freeze-dried to obtain 3.2 g of rutin glucoside powder.
【００４７】得られたルチングルコシドをα−グルコシ
ダーゼ（東洋紡社製、ＡＧＨ−２１１）で処理した後、
ＨＰＬＣで分析を行ったところルチングルコシドのピー
クがなくなり、ルチンのピークが増加したことから、こ
のルチングルコシドは、ルチンにグルコースがα結合し
た化合物であることがわかる。After treating the obtained rutin glucoside with α-glucosidase (manufactured by Toyobo Co., Ltd., AGH-211),
As a result of HPLC analysis, the peak of rutin glucoside disappeared and the peak of rutin increased, which indicates that this rutin glucoside is a compound in which glucose is α-bonded to rutin.
【００４８】実施例６（３、４−ジメトキシフェニルグ
ルコシドの製造） ８０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ９）５００ミリリットル
に３、４−ジメトキシフェノール１０ｇ及びマルトース
５０ｇを溶解し、この溶液に参考例１で調製したα−グ
ルコシダーゼを１０Ｕ／ミリリットルとなるように添加
した。この溶液を４０℃で３時間反応させた後、１００
℃で５分間処理して反応を停止させた。この反応液の糖
転移率は１２％であった。Example 6 (Production of 3,4-dimethoxyphenyl glucoside) 10 g of 3,4-dimethoxyphenol and 50 g of maltose were dissolved in 500 ml of 80 mM borate buffer (pH 9), and the solution was prepared in Reference Example 1. The α-glucosidase was added so as to be 10 U / ml. After reacting this solution at 40 ° C. for 3 hours, 100
The reaction was stopped by treating at 0 ° C for 5 minutes. The glycosyl transfer rate of this reaction solution was 12%.
【００４９】次に、得られた反応物中の未反応の原料を
酢酸エチルにより抽出除去した。水層画分を５０ミリリ
ットルのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学社製）カ
ラムに通液し、３、４−ジメトキシフェニルグルコシド
を吸着させ、蒸留水１リットルでカラムを洗浄した後、
５００ミリリットルのメタノールで３、４−ジメトキシ
フェニルグルコシドを溶出させた。得られた３、４−ジ
メトキシフェニルグルコシド画分を減圧濃縮した後、凍
結乾燥することにより３、４−ジメトキシフェニルグル
コシドの粉末１．８ｇを得た。Next, unreacted raw materials in the obtained reaction product were extracted and removed with ethyl acetate. The aqueous layer fraction was passed through a 50 ml DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) column to adsorb 3,4-dimethoxyphenylglucoside, and the column was washed with 1 liter of distilled water.
The 3,4-dimethoxyphenyl glucoside was eluted with 500 ml of methanol. The obtained 3,4-dimethoxyphenylglucoside fraction was concentrated under reduced pressure and then freeze-dried to obtain 1.8 g of powder of 3,4-dimethoxyphenylglucoside.
【００５０】得られた３、４−ジメトキシフェニルグル
コシドをα−グルコシダーゼ（東洋紡社製、ＡＧＨ−２
１１）で処理した後、ＨＰＬＣで分析を行ったところ
３、４−ジメトキシフェニルグルコシドのピークがなく
なり、３、４−ジメトキシフェノールのピークが増加し
たことから、この３、４−ジメトキシフェニルグルコシ
ドは、３、４−ジメトキシフェノールにグルコースがα
結合した化合物であることがわかる。The obtained 3,4-dimethoxyphenyl glucoside was converted into α-glucosidase (manufactured by Toyobo Co., Ltd., AGH-2).
After treatment with 11), when analyzed by HPLC, the peak of 3,4-dimethoxyphenylglucoside disappeared, and the peak of 3,4-dimethoxyphenol increased, so this 3,4-dimethoxyphenylglucoside was Glucose α in 3,4-dimethoxyphenol
It can be seen that it is a bound compound.
【００５１】実施例７（フェネチルグルコシドの製造） ８０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ９）５００ミリリットル
にフェネチルアルコール１０ｇ及びマルトース５０ｇを
溶解し、この溶液にバチルス ステアロサーモフィラス
（Bacillus stearothermophilus ）由来のα−グルコシ
ダーゼ（シグマ社製、Ｇ３６５１）を１０Ｕ／ミリリッ
トルとなるように添加した。この溶液を４０℃で１９時
間反応させた後、１００℃で５分間処理して反応を停止
させた。この反応液の糖転移率は３０％であった。Example 7 (Production of phenethyl glucoside) 10 g of phenethyl alcohol and 50 g of maltose were dissolved in 500 ml of 80 mM borate buffer (pH 9), and α-derived from Bacillus stearothermophilus was dissolved in this solution. Glucosidase (manufactured by Sigma, G3651) was added at 10 U / ml. This solution was reacted at 40 ° C. for 19 hours and then treated at 100 ° C. for 5 minutes to stop the reaction. The glycosyl transfer rate of this reaction solution was 30%.
【００５２】次に、得られた反応物中の未反応の原料を
クロロホルムにより抽出除去した。水層画分を５０ミリ
リットルのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学社製）
カラムに通液し、フェネチルグルコシドを吸着させ、蒸
留水１リットルでカラムを洗浄した後、５００ミリリッ
トルのメタノールでフェネチルグルコシドを溶出させ
た。得られたフェネチルグルコシド画分を減圧濃縮した
後、凍結乾燥することによりフェネチルグルコシドの粉
末５．６ｇを得た。Next, unreacted raw materials in the obtained reaction product were extracted and removed with chloroform. 50 ml of DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical)
After passing through the column to adsorb phenethyl glucoside and washing the column with 1 liter of distilled water, the phenethyl glucoside was eluted with 500 ml of methanol. The obtained phenethyl glucoside fraction was concentrated under reduced pressure and then freeze-dried to obtain 5.6 g of phenethyl glucoside powder.
【００５３】得られたフェネチルグルコシドをα−グル
コシダーゼ（東洋紡社製、ＡＧＨ−２１１）で処理した
後、ＨＰＬＣで分析を行ったところフェネチルグルコシ
ドのピークがなくなり、フェネチルアルコールのピーク
が増加したことから、このフェネチルグルコシドは、フ
ェネチルアルコールにグルコースがα結合した化合物で
あることを確認した。The obtained phenethyl glucoside was treated with α-glucosidase (Toyobo Co., Ltd., AGH-211) and analyzed by HPLC. As a result, the peak of phenethyl glucoside disappeared and the peak of phenethyl alcohol increased. It was confirmed that this phenethyl glucoside was a compound in which glucose was α-bonded to phenethyl alcohol.
【００５４】実施例８（ヒドロキノングルコシドの製
造） ８０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ９）５００ミリリットル
にヒドロキノン１０ｇ及びマルトース５０ｇを溶解し、
この溶液にバチルス ステアロサーモフィラス（Bacill
us stearothermophilus ）由来のα−グルコシダーゼ
（シグマ社製、Ｇ３６５１）を１０Ｕ／ミリリットルと
なるように添加した。この溶液を４０℃で３時間反応さ
せた後、１００℃で５分間処理して反応を停止させた。
この反応液の糖転移率は２８％であった。Example 8 (Production of hydroquinone glucoside) 10 g of hydroquinone and 50 g of maltose were dissolved in 500 ml of 80 mM borate buffer (pH 9),
Bacillus stearothermophilus (Bacill
us stearothermophilus) -derived α-glucosidase (manufactured by Sigma, G3651) was added at 10 U / ml. This solution was reacted at 40 ° C. for 3 hours and then treated at 100 ° C. for 5 minutes to stop the reaction.
The glycosyl transfer rate of this reaction solution was 28%.
【００５５】次に、得られた反応物中の未反応の原料を
クロロホルムにより抽出除去した。水層画分を５０ミリ
リットルのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学社製）
カラムに通液し、ヒドロキノングルコシドを吸着させ、
蒸留水１リットルでカラムを洗浄した後、５００ミリリ
ットルのメタノールでヒドロキノングルコシドを溶出さ
せた。得られたヒドロキノングルコシド画分を減圧濃縮
した後、凍結乾燥することによりヒドロキノングルコシ
ドの粉末４．６ｇを得た。Next, unreacted raw materials in the obtained reaction product were extracted and removed with chloroform. 50 ml of DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical)
Pass through the column to adsorb hydroquinone glucoside,
After washing the column with 1 liter of distilled water, hydroquinone glucoside was eluted with 500 ml of methanol. The obtained hydroquinone glucoside fraction was concentrated under reduced pressure and then freeze-dried to obtain 4.6 g of hydroquinone glucoside powder.
【００５６】得られたヒドロキノングルコシドをα−グ
ルコシダーゼ（東洋紡社製、ＡＧＨ−２１１）で処理し
た後、同様にＨＰＬＣで分析を行ったところヒドロキノ
ングルコシドのピークがなくなり、ヒドロキノンのピー
クが増加したことから、このヒドロキノングルコシド
は、ヒドロキノンにグルコースがα結合した化合物であ
ることがわかる。The obtained hydroquinone glucoside was treated with α-glucosidase (TOYOBO Co., Ltd., AGH-211) and analyzed by HPLC in the same manner. As a result, the hydroquinone glucoside peak disappeared and the hydroquinone peak increased. It is understood that this hydroquinone glucoside is a compound in which glucose is α-bonded to hydroquinone.
【００５７】[0057]
【発明の効果】本発明によれば、アルコール性水酸基を
有する化合物の他に、フェノール性水酸基を有する化合
物や、フラボノイド類縁化合物の配糖体を製造すること
ができる。INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, in addition to a compound having an alcoholic hydroxyl group, a compound having a phenolic hydroxyl group and a glycoside of a flavonoid analog compound can be produced.
【図１】バチルス ステアロサーモフィラス（Bacillus
stearothermophilus ）ＵＫ５６３（ＦＥＲＭ Ｐ−７
２７５）由来のα−グルコシダーゼの加水分解活性に及
ぼすｐＨの影響を示すグラフである。Figure 1: Bacillus stearothermophilus
stearothermophilus) UK563 (FERM P-7)
275) is a graph showing the effect of pH on the hydrolysis activity of α-glucosidase derived from (275).
【図２】バチルス ステアロサーモフィラス（Bacillus
stearothermophilus ）ＵＫ５６３（ＦＥＲＭ Ｐ−７
２７５）由来のα−グルコシダーゼの糖転移活性に及ぼ
すｐＨの影響を示すグラフである。Figure 2: Bacillus stearothermophilus
stearothermophilus) UK563 (FERM P-7)
275) is a graph showing the effect of pH on the transglycosylation activity of α-glucosidase derived from (275).
【図３】バチルス ステアロサーモフィラス（Bacillus
stearothermophilus ）ＵＫ５６３（ＦＥＲＭ Ｐ−７
２７５）由来のα−グルコシダーゼの活性に及ぼす温度
の影響を示すグラフである。Figure 3: Bacillus stearothermophilus
stearothermophilus) UK563 (FERM P-7)
275) is a graph showing the influence of temperature on the activity of α-glucosidase derived from (275).
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者 鈍宝 宗彦 京都府宇治市宇治小桜23番地 ユニチカ株 式会社中央研究所内 (72)発明者 中島 宏 京都府宇治市宇治小桜23番地 ユニチカ株 式会社中央研究所内─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification number Internal reference number FI technical display location C12R 1:07) (72) Inventor Munehiko Munetaka 23 Uji Kozakura, Uji city, Kyoto unitika stock company Central Research Institute (72) Inventor Hiroshi Nakajima 23 Uji Kozakura, Uji City, Kyoto Unitika Stock Company Central Research Laboratories
Claims (1)
を持つグルカンにα−グルコシダーゼを作用させて配糖
体を製造するに際し、α−グルコキシダーゼとしてバチ
ルス ステアロサーモフィラス（Bacillus stearotherm
ophilus ）由来のα−グルコシダーゼを用いることを特
徴とする配糖体の製造方法。1. When producing a glycoside by reacting a compound having a hydroxyl group and a glucan having an α-1,4 bond with α-glucosidase, Bacillus stearothermophilus (Bacillus stearotherm) is produced as an α-glucosidase.
(ophilus) -derived α-glucosidase is used.
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|---|---|---|---|
| JP24580395A JP3916682B2 (en) | 1995-09-25 | 1995-09-25 | Method for producing glycoside |
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|---|---|
| JPH0987294A true JPH0987294A (en) | 1997-03-31 |
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|---|---|
| JP (1) | JP3916682B2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1304591C (en) * | 2005-01-06 | 2007-03-14 | 清华大学 | Method for improving polarity of flavonoid glycoside |
| US7626006B2 (en) | 2004-05-22 | 2009-12-01 | Goldschmidt Gmbh | Process for preparing alkylglycosides |
-
1995
- 1995-09-25 JP JP24580395A patent/JP3916682B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7626006B2 (en) | 2004-05-22 | 2009-12-01 | Goldschmidt Gmbh | Process for preparing alkylglycosides |
| CN1304591C (en) * | 2005-01-06 | 2007-03-14 | 清华大学 | Method for improving polarity of flavonoid glycoside |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3916682B2 (en) | 2007-05-16 |
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