JPH0956396A - Production of optically active 3-methyl-2-phenylbutylamine - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To readily and efficiently obtain the subject compound for optical resolution by acting a specific microorganism, etc., having asymmetric hydrolyzability of amide to a racemic modification or an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having low optical purity. SOLUTION: A racemic modification of the formula (R is a lower alkyl) or an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having low optical purity (e.g.; 3-methyl-2-phenylbutylamine acetamide) is acted with a microorganism belonging to genus Rhodococcus (e.g.; Rhodococcus erythropolis IAM 1474), genus Nocardia (e.g.; Nocardia asteroides IFO 3384), genus Cellulomonas (e.g.; Cellulomonas fimi IAM 12107), genus Gordona (e.g.; Gordona terra JCM 3206) or an enzyme derived from a microorganism of genus Serratia or genus Candida respectively capable of asymmetrically hydrolyzing the amide compound to obtain the objective 3-methyl-phenylbutylamine having high optical purity.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、ラセミ体または光
学純度の低い３−メチル−２−フェニルブチルアミンの
アミド化合物に微生物処理を加えて光学純度の高い３−
メチル−２−フェニルブチルアミンを得る方法に関す
る。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a racemic compound or an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having a low optical purity, which is treated with a microorganism to give a compound having a high optical purity.
It relates to a method for obtaining methyl-2-phenylbutylamine.

【０００２】[0002]

【従来の技術】光学純度の高い３−メチル−２−フェニ
ルブチルアミンは、医薬などに利用される各種光学活性
な生理活性化合物(光学活性イブプロフェンや光学活性
ケトプロフェンなど)を得るための分割剤として重要で
ある。この光学純度の高い３−メチル−２−フェニルブ
チルアミンを得る方法としては、ラセミ体の３−メチル
−２−フェニルブチルアミンを光学活性なマンデル酸で
分割する方法が知られている(特開昭６１−１７２８５
３)。しかし、この方法では、光学純度の高い前記化合
物を簡便かつ効率よく得ることができない。2. Description of the Related Art 3-Methyl-2-phenylbutylamine with high optical purity is important as a resolving agent for obtaining various optically active physiologically active compounds (optically active ibuprofen, optically active ketoprofen, etc.) used in medicine and the like. Is. As a method for obtaining 3-methyl-2-phenylbutylamine having a high optical purity, a method is known in which racemic 3-methyl-2-phenylbutylamine is resolved with an optically active mandelic acid (JP-A-61-61). -17285
3). However, this method cannot simply and efficiently obtain the compound having high optical purity.

【０００３】[0003]

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、光学純度の高い３−メチル−２−フェニルブチルア
ミンを、簡便かつ効率よく工業的に製造し得る方法を提
供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION Accordingly, an object of the present invention is to provide a method capable of producing 3-methyl-2-phenylbutylamine having high optical purity conveniently and efficiently industrially.

【０００４】[0004]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために種々検討した結果、ラセミ体または光
学純度の低い３−メチル−２−フェニルブチルアミンの
アミド化合物に特定の微生物またはその調製物を作用さ
せることによって該アミド化合物を選択的に効率よく不
斉加水分解することができ、光学純度の高い光学活性３
−メチル−２−フェニルブチルアミンが容易に得られる
ことを見い出し、本発明を完成するに至った。Means for Solving the Problems As a result of various studies for solving the above problems, the present inventors have found that a specific microorganism or a racemic compound or an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having a low optical purity can be used. The amide compound can be selectively and efficiently asymmetrically hydrolyzed by allowing the preparation to act, and thus the optically active compound with high optical purity 3
The inventors have found that -methyl-2-phenylbutylamine can be easily obtained, and completed the present invention.

【０００５】即ち、本発明は、式：That is, the present invention has the formula:

【化２】 [式中、Ｒは低級アルキル基である]で示されるラセミ体
または光学純度の低い３−メチル−２−フェニルブチル
アミンのアミド化合物に、該アミド化合物を不斉的に加
水分解する能力を有するロドコッカス属、ノカルディア
属、セルロモナス属、ゴルドナ属、セラチア属もしくは
キャンディダ属の微生物、またはその調製物を作用させ
ることを特徴とする、光学純度の高い３−メチル−２−
フェニルブチルアミンの製造方法を提供するものであ
る。Embedded image Rhodococcus having the ability to asymmetrically hydrolyze a racemic compound represented by the formula: wherein R is a lower alkyl group or an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having low optical purity. High-purity 3-methyl-2-, characterized in that a microorganism of the genus, Nocardia, Cellulomonas, Gordona, Serratia or Candida or a preparation thereof is allowed to act.
A method for producing phenylbutylamine is provided.

【０００６】[0006]

【発明の実施の形態】本発明実施の際に用いるラセミ体
または光学純度の低い３−メチル−２−フェニルブチル
アミンのアミド化合物は、上記一般式(Ｉ)で表される。
この式において、Ｒで表される低級アルキル基は不斉加
水分解を損なわない直鎖または分岐鎖のＣ₁〜Ｃ₄アルキ
ル基であり、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソ
プロピル、ブチル、イソブチル基などが挙げられる。３
−メチル−２−フェニルブチルアミンのアミド化合物と
しては、ラセミ体を使用するのが普通であるが、(Ｓ)−
体または(Ｒ)−体の一方に富む光学純度の低い混合物を
使用することもできる。これら３−メチル−２−フェニ
ルブチルアミンのアミド化合物は、特開昭６１−１７２
８５３号公報に記載の方法によって３−メチル−２−フ
ェニルブチルアミンを調製し、次いで、常法によって該
アミンをアミド化することにより製造することができ
る。即ち、ベンジルシアニドとイソプロピルブロミド
を、トリエチルベンジルアンモニウムクロリドの存在下
に５０(w／v)％水酸化ナトリウム水溶液中で反応させ
て、２−フェニルイソブチルシアニドを得る。この化合
物に水素化アルミニウムリチウムを作用させて還元する
ことにより、３−メチル−２−フェニルブチルアミンを
得る。次いで、該アミンと脂肪族カルボン酸をＮ,Ｎ'−
ジシクロヘキシルカルボジイミドを用いて脱水縮合させ
るか、または、該アミンを脂肪族カルボン酸無水物と反
応させることにより、３−メチル−２−フェニルブチル
アミンのアミド化合物を得ることができる。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The racemic compound or the amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having low optical purity used in the practice of the present invention is represented by the above general formula (I).
In this formula, the lower alkyl group represented by R is a linear or branched C ₁ -C ₄ alkyl group that does not impair asymmetric hydrolysis, and examples thereof include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl and isobutyl groups. And so on. 3
As the amide compound of -methyl-2-phenylbutylamine, it is usual to use a racemate, but (S)-
It is also possible to use low optical purity mixtures enriched in either the body or the (R) -body. These amide compounds of 3-methyl-2-phenylbutylamine are disclosed in JP-A-61-172.
It can be produced by preparing 3-methyl-2-phenylbutylamine by the method described in Japanese Patent No. 853 and then amidating the amine by a conventional method. That is, benzyl cyanide and isopropyl bromide are reacted in the presence of triethylbenzylammonium chloride in a 50 (w / v)% sodium hydroxide aqueous solution to obtain 2-phenylisobutylcyanide. This compound is treated with lithium aluminum hydride for reduction to obtain 3-methyl-2-phenylbutylamine. Then, the amine and the aliphatic carboxylic acid are mixed with N, N'-
An amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine can be obtained by dehydration condensation using dicyclohexylcarbodiimide or by reacting the amine with an aliphatic carboxylic acid anhydride.

【０００７】本発明方法において使用する微生物または
その調製物は、３−メチル−２−フェニルブチルアミン
のアミド化合物を不斉的に加水分解する能力を有する微
生物またはその調製物である。このような微生物および
調製物としては、ロドコッカス(Ｒhodococcus)属、ノカ
ルディア(Ｎocardia)属、セルロモナス(Ｃellulomonas)
属、ゴルドナ(Ｇordona)属、セラチア(Ｓerratia)属お
よびキャンディダ(Ｃandida)属の微生物およびそれから
導かれる調製物が挙げられる。The microorganism or its preparation used in the method of the present invention is a microorganism having the ability to asymmetrically hydrolyze an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine or a preparation thereof. Such microorganisms and preparations include Rhodococcus spp., Nocardia spp., Cellulomonas spp .
Genus Gordona (Gordona) genus Serratia (Serratia) genus and Candida (Candida) microorganisms and preparations derived therefrom may be mentioned.

【０００８】これら微生物の具体例としては、ロドコッ
カス・エリスロポリス(Ｒhodococcus erythropolis)Ｉ
ＡＭ １４７４、ロドコッカス・エリスロポリスＩＡＭ
１５０３、ロドコッカス・エリスロポリスＩＡＭ １２
１２２、ロドコッカス・エリスロポリスＩＡＭ １４４
０、ロドコッカス・エリスロポリスＩＦＯ ３３８４、
ノカルディア・アステロイデス(Ｎocardia asteroides)
ＩＦＯ ３３８４、ノカルディア・ミニマ(Ｎ. minima)
ＩＡＭ ０３７４、ノカルディア・シュードスポラウギ
フェラ(Ｎ．pseudosporaugifera)ＩＡＭ ０５０１、ノ
カルディア・シュードスポラウギフェラＩＡＭ ０５０
２、ノカルディア・シュードスポラウギフェラＩＡＭ
０５０３、ノカルディア・フスカ(Ｎ．fusca)ＩＦＯ １
４３４０、ノカルディア・サルムニカラー亜種アウラウ
ティアカ(Ｎ．sulmunicolar ssp．aurautiaca)ＩＦＯ
１４４２６、セルロモナス・フィミ(Ｃellulomonas fim
i)ＩＡＭ １２１０７、ゴルドナ・テッラ(Ｇordona ter
ra)ＪＣＭ ３２０６などが挙げられる。これら微生物
は、東京大学応用微生物研究所微生物微細藻類総合セン
ター(ＩＡＭ)、(財)発酵研究所(ＩＦＯ)、または理化学
研究所微生物系統保存施設(ＪＣＭ)から入手することが
できる。Specific examples of these microorganisms include Rhodococcus erythropolis I
AM 1474, Rhodococcus erythropolis IAM
1503, Rhodococcus erythropolis IAM 12
122, Rhodococcus erythropolis IAM 144
0, Rhodococcus erythropolis IFO 3384,
Nocardia asteroides
IFO 3384, Nocardia Minima
IAM 0374, Nocardia Pseudosporaugifera IAM 0501, Nocardia Pseudosporaugifera IAM 050
2. Nocardia Pseudospora guifera IAM
0503 Nocardia fusca (N.fusca) IFO 1
4340, Nocardia salmunicolor subspecies Aurautiaca IFO ( N. sulmunicolar ssp. Aurautiaca )
14426, Cellulomonas fim
i) IAM 12107, Gordona Terra (Gordona ter
ra ) JCM 3206 and the like. These microorganisms can be obtained from the Center for Applied Microorganisms, Institute for Applied Microorganisms (IAM), the Institute for Fermentation (IFO), or the Institute for Physiological Sciences (JCM), RIKEN.

【０００９】また、これら微生物から導かれる調製物と
しては、微生物の培養物、微生物を適当に処理すること
によって得られる加水分解酵素を含む調製物、粗製酵素
あるいは精製酵素などを挙げることができる。このよう
な酵素調製物の具体例としては、ＳＭエステラーゼ[セ
ラチア・マルセセンス(Ｓerratia marcecens)由来；ナ
ガセ生化学工業社製]あるいはリパーゼＯＦ[キャンディ
ダ・ルゴサ(Ｃandida rugosa)由来；名糖産業社製]など
を挙げることができる。Examples of preparations derived from these microorganisms include cultures of microorganisms, preparations containing hydrolases obtained by appropriate treatment of microorganisms, crude enzymes or purified enzymes. Specific examples of such enzyme preparations include SM esterase [derived from Serratia marcecens ; manufactured by Nagase Seikagaku] or lipase OF [derived from Candida rugosa ; manufactured by Meito Sangyo. ] Etc. can be mentioned.

【００１０】上記微生物は、通常用いられる固体培地、
液体培地のどちらを用いて培養してもよいが、液体培地
で培養するのが好ましい。培養培地は、微生物の生育お
よび増殖に要求される通常の炭素源、窒素源および無機
物を含有する。炭素源としては、例えばグリセロール、
デンプン、スクロースまたはグルコースを用いることが
できる。窒素源としては、酵母エキス、カゼイン、コー
ンスチープリカー、ペプトン、肉エキスなどの天然窒素
源や硫安、塩安、尿素などの無機窒素化合物を用いるこ
とができる。無機物としては、塩化カリウム、塩化カル
シウム、硫酸マグネシウムなどの無機塩を用いることが
できる。培地中の炭素源、窒素源および無機物の濃度
は、それぞれ１〜２０％、１〜２０％および１〜１００
０ppmの範囲であってよく、培養時間は１６〜４８時間
程度である。静置培養、通気撹拌培養または振盪培養の
いずれの方法を用いることもできる。The above-mentioned microorganism is a commonly used solid medium,
Either liquid medium may be used for culturing, but liquid medium is preferable. The culture medium contains the usual carbon sources, nitrogen sources and minerals required for the growth and growth of microorganisms. As the carbon source, for example, glycerol,
Starch, sucrose or glucose can be used. As the nitrogen source, natural nitrogen sources such as yeast extract, casein, corn steep liquor, peptone and meat extract, and inorganic nitrogen compounds such as ammonium sulfate, ammonium salt and urea can be used. As the inorganic substance, an inorganic salt such as potassium chloride, calcium chloride or magnesium sulfate can be used. The concentrations of carbon source, nitrogen source and inorganic substances in the medium are 1 to 20%, 1 to 20% and 1 to 100, respectively.
It may be in the range of 0 ppm, and the culture time is about 16 to 48 hours. Any of static culture, aeration and agitation culture, or shaking culture can be used.

【００１１】本発明方法においては、前記のロドコッカ
ス属、ノカルディア属、セルロモナス属、ゴルドナ属、
セラチア属またはキャンディダ属に属する微生物であっ
て、ラセミ体または光学純度の低い３−メチル−２−フ
ェニルブチルアミンのアミド化合物を加水分解し、光学
純度の高い３−メチル−２−フェニルブチルアミンを反
応液中に残す能力を有する微生物を用いるが、この能力
を有するものであればこれら微生物に人為的変異処理を
行うことによって得られる微生物菌株を用いることもで
きる。また、この微生物菌株の菌体処理物を粗酵素とし
て用いることや精製酵素を用いることも可能である。In the method of the present invention, the above-mentioned Rhodococcus, Nocardia, Cellulomonas, Gordona,
A microorganism belonging to the genus Serratia or Candida, which hydrolyzes a racemic compound or an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having low optical purity, and reacts with 3-methyl-2-phenylbutylamine having high optical purity A microorganism having the ability to remain in the liquid is used, but a microorganism strain obtained by subjecting these microorganisms to artificial mutation treatment can also be used as long as they have this ability. It is also possible to use a treated product of this microbial strain as a crude enzyme or a purified enzyme.

【００１２】本発明の方法は、ラセミ体または光学純度
の低い３−メチル−２−フェニルブチルアミンアミド化
合物を含有する水または緩衝液に、前記の微生物または
その調製物を添加し、撹拌することにより実施する。反
応液のpＨは４〜１０、好ましくは６〜８である。反応
温度は１０℃〜５０℃、好ましくは２０℃〜４０℃であ
る。反応に用いる微生物の量に特に限定はないが、基質
３−メチル−２−フェニルブチルアミンアミド化合物に
対し、５０〜５００g／基質モルの範囲が好ましい。ま
た、微生物調製物を用いる場合には、調製物中に含まれ
る酵素に換算して、１０〜１００mg酵素／基質モルの範
囲内となるように調製物を添加するのが好ましい。反応
時間は、用いる微生物またはその調製物の量、反応温
度、反応pＨなどにより変動するが、通常は１〜２４時
間程度で完了する。The method of the present invention comprises adding the above-mentioned microorganism or its preparation to water or a buffer solution containing a racemic compound or a 3-methyl-2-phenylbutylamine amide compound having low optical purity and stirring the mixture. carry out. The pH of the reaction solution is 4 to 10, preferably 6 to 8. The reaction temperature is 10 ° C to 50 ° C, preferably 20 ° C to 40 ° C. The amount of microorganisms used in the reaction is not particularly limited, but is preferably in the range of 50 to 500 g / substrate mole with respect to the substrate 3-methyl-2-phenylbutylamine amide compound. When a microbial preparation is used, it is preferable to add the preparation so as to be within the range of 10 to 100 mg enzyme / mol of substrate in terms of the enzyme contained in the preparation. The reaction time varies depending on the amount of the microorganism used or its preparation, the reaction temperature, the reaction pH, etc., but is usually completed in about 1 to 24 hours.

【００１３】反応終了後、生成した３−メチル−２−フ
ェニルブチルアミンと未反応の３−メチル−２−フェニ
ルブチルアミンアミド化合物を溶媒抽出法、結晶析出
法、カラムクロマトグラフ法などの通常用いられる分離
操作で分取する。After completion of the reaction, the produced 3-methyl-2-phenylbutylamine and the unreacted 3-methyl-2-phenylbutylamine amide compound are separated by a solvent extraction method, a crystal precipitation method, a column chromatography method or the like which is usually used. Collect by operation.

【００１４】溶媒抽出法では、反応液を硫酸や塩酸など
で酸性にし、未反応の３−メチル−２−フェニルブチル
アミンアミド化合物をトルエンなどの有機溶媒を用いて
抽出除去する。次いで、水層に残留する光学活性な３−
メチル−２−フェニルブチルアミンを回収する。In the solvent extraction method, the reaction solution is acidified with sulfuric acid or hydrochloric acid and the unreacted 3-methyl-2-phenylbutylamine amide compound is extracted and removed using an organic solvent such as toluene. Then, the optically active 3-residue remaining in the aqueous layer
Methyl-2-phenylbutylamine is recovered.

【００１５】[0015]

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく
説明するが、これら実施例は単なる例示であって、本発
明の範囲を制限するものではない。なお、実施例におけ
る反応液中の３−メチル−２−フェニルブチルアミンお
よび３−メチル−２−フェニルブチルアミンアミド化合
物の定量および光学純度の測定は、以下の分析条件下、
高速液体クロマトグラフィーにより行った。高速液体クロマトグラフィー分析条件 使用装置：ウォーターズ(Ｗaters)社製 ＬＣモジュール
１ 高速液体クロマトグラフィー； カラム ：キラルセル(Ｃhiralcel)ＯＤ-Ｒ ６.０φ×
１５０mm(ダイセル社製)； 溶離液 ：２Ｍ過塩素酸ナトリウム：アセトニトリル
(５５：４５)； 温度 ：室温； 流速 ：０.５ml／分； 検出器 ：ＵＶ ２１０nm。EXAMPLES The present invention will be described in more detail with reference to examples below, but these examples are merely illustrative and do not limit the scope of the present invention. In addition, the quantification of 3-methyl-2-phenylbutylamine and 3-methyl-2-phenylbutylamine amide compounds in the reaction liquid and the measurement of the optical purity in Examples were measured under the following analysis conditions:
Performed by high performance liquid chromatography. High Performance Liquid Chromatography Analytical condition used apparatus: LC module 1 manufactured by Waters Company; High Performance Liquid Chromatography; Column: Chiralcel OD-R 6.0φ ×
150 mm (manufactured by Daicel); Eluent: 2M sodium perchlorate: acetonitrile
(55:45); Temperature: room temperature; Flow rate: 0.5 ml / min; Detector: UV 210 nm.

【００１６】実施例１ 微生物の培養 ５００ml容三角フラスコに下記組成の培地１００mlを取
り、予め同培地で前培養しておいたロドコッカス・エリ
スロポリスＩＡＭ １４７４、ロドコッカス・エリスロ
ポリスＩＡＭ １５０３、ロドコッカス・エリスロポリ
スＩＡＭ １２１２２、ロドコッカス・エリスロポリス
ＩＡＭ １４４０、ロドコッカス・エリスロポリスＩＦ
Ｏ ３３８４、ノカルディア・アステロイデスＩＦＯ ３
３８４、ノカルディア・ミニマＩＡＭ ０３７４、ノカ
ルディア・シュードスポラウギフェラＩＡＭ ０５０
１、ノカルディア・シュードスポラウギフェラＩＡＭ
０５０２、ノカルディア・シュードスポラウギフェラＩ
ＡＭ ０５０３、ノカルディア・フスカＩＦＯ １４３４
０、ノカルディア・サルムニカラー亜種アウラウティア
カＩＦＯ １４４２６、セルロモナス・フィミＩＡＭ １
２１０７およびゴルドナ・テッラＪＣＭ ３２０６の培
養液１mlを接種し、２８℃で２日間、ロータリーシェー
カー(１６０rpm)で振盪培養を行った。培養終了後、Ｏ
Ｄ₆₆₀が５〜１５の菌体培養液を得た。 Example 1 Culture of Microorganisms 100 ml of a medium having the following composition was placed in a 500 ml Erlenmeyer flask, and Rhodococcus erythropolis IAM 1474, Rhodococcus erythropolis IAM 1503, Rhodococcus erythropolis which had been pre-cultured in the same medium in advance. IAM 12122, Rhodococcus erythropolis IAM 1440, Rhodococcus erythropolis IF
O 3384, Nocardia Asteroides IFO 3
384, Nocardia Minima IAM 0374, Nocardia Pseudospora guifera IAM 050
1. Nocardia Pseudospora guifera IAM
0502, Nocardia Pseudospora guifera I
AM 0503, Nocardia Fusca IFO 1434
0, Nocardia salmunicolor subspecies Aurautiaca IFO 14426, Cellulomonas fimi IAM 1
1 ml of a culture solution of 2107 and Gordona terra JCM 3206 was inoculated, and shaking culture was carried out at 28 ° C. for 2 days on a rotary shaker (160 rpm). After culture,
A cell culture solution having D ₆₆₀ of 5 to 15 was obtained.

【表１】 表１．培地組成 成 分 量 グリセロール １０ ｇ 肉エキス ３ ｇ 酵母エキス ３ g ポリペプトン ２ g Ｎ-アセチル-１-メチル-３-フェニルプロピルアミン １.５ g ＫＨ₂ＰＯ₄ １ g Ｋ₂ＨＰＯ₄ １ g ＭgＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.３ g 水 １０００ ml ＮaＯＨまたはＨＣl水溶液でpＨ７.０に調整する。[Table 1] Table 1. Medium composition Component Glycerol 10 g Meat extract 3 g Yeast extract 3 g Polypeptone 2 g N-Acetyl-1-methyl-3-phenylpropylamine 1.5 g KH ₂ PO ₄ 1 g K ₂ HPO ₄ 1 g MgSO ₄ · 7H ₂ O 0.3 g water 1000 ml Adjust pH to 7.0 with aqueous NaOH or HCl.

【００１７】実施例２ 光学活性３−メチル−２−フェ
ニルブチルアミンの調製(その１) ２００mＭリン酸カリウム緩衝液(pＨ７.０)５mlを入れ
たバイアル瓶に、１００mＭの濃度になるように３−メ
チル−２−フェニルブチルアミンアセトアミドを加え
た。次いで、実施例１で得たロドコッカス・エリスロポ
リスＩＡＭ １４７４の菌体培養液５mlを加え、３０℃
で１６時間撹拌した。反応終了後、反応液にメタノール
５mlを加え、遠心分離機で菌体を除いた。遠心上清液を
高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、光学純
度９５％の(Ｓ)−３−メチル−２−フェニルブチルアミ
ンアセトアミドが収率２５％で得られた。 Example 2 Preparation of Optically Active 3-Methyl-2-phenylbutylamine (Part 1) A vial containing 5 ml of 200 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) was adjusted to a concentration of 100 mM. Methyl-2-phenylbutylamine acetamide was added. Then, 5 ml of the cell culture solution of Rhodococcus erythropolis IAM 1474 obtained in Example 1 was added, and the temperature was raised to 30 ° C.
It was stirred for 16 hours. After completion of the reaction, 5 ml of methanol was added to the reaction solution and the cells were removed by a centrifuge. When the centrifugal supernatant was analyzed by high performance liquid chromatography, (S) -3-methyl-2-phenylbutylamineacetamide with an optical purity of 95% was obtained in a yield of 25%.

【００１８】実施例３ 光学活性３−メチル−２−フェ
ニルブチルアミンの調製(その２) 上記実施例２の方法に従い、各種３−メチル−２−フェ
ニルブチルアミンのアシル化合物を、各種微生物または
微生物調製物で処理し、光学活性な３−メチル−２−フ
ェニルブチルアミンを得た。得られた光学活性３−メチ
ル−２−フェニルブチルアミンの収率と光学純度を下記
表２に示す。 Example 3 Preparation of Optically Active 3-Methyl-2-phenylbutylamine (Part 2) According to the method of Example 2 above, various acyl compounds of 3-methyl-2-phenylbutylamine were added to various microorganisms or microbial preparations. To give optically active 3-methyl-2-phenylbutylamine. The yield and optical purity of the obtained optically active 3-methyl-2-phenylbutylamine are shown in Table 2 below.

【表２】 PBA-Ac PBA-Pr PBA-Bu 収率 光学純度 収率 光学純度 収率 光学純度 (%) (%ee) (%) (%ee) (%) (%ee) R.erythropolis IAM 1474 25 95 S 23 93 S 24 87 SR.erythropolis IAM 1503 22 94 S 24 92 S 20 90 SR.erythropolis IAM 12122 23 93 S 21 90 S 25 89 SR.erythropolis IAM 1440 20 92 S 19 90 S 20 87 SR.erythropolis IFO 3384 18 91 S 20 85 S 19 88 SN.asteroides IFO 3384 12 81 S 18 74 S 18 72 SN.pseudosporaugifera IAM 0501 15 76 R 14 72 R 16 70 RN.pseudosporaugifera IAM 0502 14 72 R 15 73 R 14 74 RN.pseudosporaugifera IAM 0503 16 70 R 15 70 R 12 74 RN.fusca IFO 14340 22 76 S 16 74 S 20 73 SN.sulmunicolar ssp.aurautiaca IFO 14426 21 74 R 23 65 R 24 72 RGordona terra JCM 3206 14 70 R 18 67 R 17 69 RCellulomonas fimi IAM 12107 19 82 S 15 83 S 17 80 S ＳＭエステラーゼ 2 72 R 10 71 R 12 69 RリパーゼＯＦ 4 78 R 9 70 R 13 72 R 表中：ＰＢＡ−Ａc＝３−メチル−２−フェニルブチルアミンアセトアミド； ＰＢＡ−Ｐr＝３−メチル−２−フェニルブチルアミンプロピオアミド； ＰＢＡ−Ｂu＝３−メチル−２−フェニルブチルアミンブチロアミド； ％ｅｅ＝エナンチオマー過剰率(％)。[Table 2] PBA-Ac PBA-Pr PBA-Bu Yield Optical purity Yield Optical purity Yield Optical purity (%) (% ee) (%) (% ee) (%) (% ee) R. erythropolis IAM 1474 25 95 S 23 93 S 24 87 S R.erythropolis IAM 1503 22 94 S 24 92 S 20 90 S R.erythropolis IAM 12122 23 93 S 21 90 S 25 89 S R.erythropolis IAM 1440 20 92 S 19 90 S 20 87 S R. erythropolis IFO 3384 18 91 S 20 85 S 19 88 S N.asteroides IFO 3384 12 81 S 18 74 S 18 72 S N.pseudosporaugifera IAM 0501 15 76 R 14 72 R 16 70 R N.pseudosporaugifera IAM 0502 14 72 R 15 73 R 14 74 R N. pseudosporaugifera IAM 0503 16 70 R 15 70 R 12 74 R N.fusca IFO 14340 22 76 S 16 74 S 20 73 S N. sulmunicolar ssp.aurautiaca IFO 14426 21 74 R 23 65 R 24 72 R Gordona terra JCM 3206 14 70 R 18 67 R 17 69 R Cellulomonas fimi IAM 12107 19 82 S 15 83 S 17 80 S SM esterase 2 72 R 10 71 R 12 69 R lipase OF 4 78 R 9 70 R 13 72 R In the table: PBA-Ac = 3-methyl-2-phenylbutylamine acetamide; PBA-Pr = 3-methyl-2- E cycloalkenyl tributylamine propionitrile amides; PBA-Bu = 3- methyl-2-phenylbutyl amine butyronitrile amide;% ee = enantiomeric excess (%).

【００１９】[0019]

【発明の効果】以上に説明したように、本発明の方法を
用いると、光学純度の高い３−メチル−２−フェニルブ
チルアミンを簡便かつ効率的に製造することができ、本
方法は工業的に極めて有利である。As described above, by using the method of the present invention, 3-methyl-2-phenylbutylamine having high optical purity can be simply and efficiently produced. It is extremely advantageous.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:425） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:72） ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code Internal reference number FI technical display location (C12P 41/00 C12R 1: 425) (C12P 41/00 C12R 1:72)

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 式： 【化１】 [式中、Ｒは低級アルキル基である]で示されるラセミ体
または光学純度の低い３−メチル−２−フェニルブチル
アミンのアミド化合物に、該アミド化合物を不斉的に加
水分解する能力を有するロドコッカス属、ノカルディア
属、セルロモナス属、ゴルドナ属、セラチア属もしくは
キャンディダ属の微生物またはその調製物を作用させる
ことを特徴とする、光学純度の高い３−メチル−２−フ
ェニルブチルアミンの製造方法。1. The formula: Rhodococcus having the ability to asymmetrically hydrolyze a racemic compound represented by the formula: wherein R is a lower alkyl group or an amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine having low optical purity. A method for producing 3-methyl-2-phenylbutylamine having high optical purity, which comprises allowing a microorganism of the genus, Nocardia, Cellulomonas, Gordona, Serratia or Candida to act, or a preparation thereof. 【請求項２】 アミド化合物を不斉的に加水分解する能
力を有する微生物またはその調製物が、ロドコッカス・
エリスロポリスＩＡＭ １４７４、ロドコッカス・エリ
スロポリスＩＡＭ １５０３、ロドコッカス・エリスロ
ポリスＩＡＭ１２１２２、ロドコッカス・エリスロポリ
スＩＡＭ １４４０、ロドコッカス・エリスロポリスＩ
ＦＯ ３３８４、ノカルディア・アステロイデスＩＦＯ
３３８４、ノカルディア・ミニマＩＡＭ ０３７４、ノ
カルディア・シュードスポラウギフェラＩＡＭ ０５０
１、ノカルディア・シュードスポラウギフェラＩＡＭ
０５０２、ノカルディア・シュードスポラウギフェラＩ
ＡＭ ０５０３、ノカルディア・フスカＩＦＯ １４３４
０、ノカルディア・サルムニカラー亜種アウラウティア
カＩＦＯ １４４２６、セルロモナス・フィミＩＡＭ １
２１０７およびゴルドナ・テッラＪＣＭ ３２０６から
なる群から選択された１種類以上の微生物、またはＳＭ
エステラーゼ(セラチア・マルセセンス由来)もしくはリ
パーゼＯＦ(キャンディダ・ルゴサ由来)である請求項１
に記載の方法。2. A microorganism having the ability to asymmetrically hydrolyze an amide compound or its preparation is Rhodococcus.
Erythropolis IAM 1474, Rhodococcus erythropolis IAM 1503, Rhodococcus erythropolis IAM 12122, Rhodococcus erythropolis IAM 1440, Rhodococcus erythropolis I
FO 3384, Nocardia Asteroides IFO
3384, Nocardia Minima IAM 0374, Nocardia Pseudospora guifera IAM 050
1. Nocardia Pseudospora guifera IAM
0502, Nocardia Pseudospora guifera I
AM 0503, Nocardia Fusca IFO 1434
0, Nocardia salmunicolor subspecies Aurautiaca IFO 14426, Cellulomonas fimi IAM 1
2107 and one or more microorganisms selected from the group consisting of Gordona terra JCM 3206, or SM
An esterase (derived from Serratia marcescens) or a lipase OF (derived from Candida rugosa).
The method described in. 【請求項３】 ３−メチル−２−フェニルブチルアミン
のアミド化合物が、Ｒがメチル、エチルまたはプロピル
である式（Ｉ)で示される化合物である請求項１または
２に記載の方法。3. The method according to claim 1 or 2, wherein the amide compound of 3-methyl-2-phenylbutylamine is a compound represented by the formula (I) in which R is methyl, ethyl or propyl.