JPH09501835A

JPH09501835A - 微生物の検出及び計数法

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Publication number: JPH09501835A
Application number: JP7507261A
Authority: JP
Inventors: マイアー，ビアンカ; ザウアーマン，ゲルハルト; トラウペ，ベルント; ボルフ，フロリアン
Original assignee: Beiersdorf AG
Current assignee: Beiersdorf AG
Priority date: 1993-08-26
Filing date: 1994-08-17
Publication date: 1997-02-25
Also published as: EP0715655B1; ATE186073T1; DE59408865D1; EP0715655A1; DE4328689A1; US5789191A; WO1995006133A1

Abstract

(57)【要約】ヒト又は動物の皮膚上に存在する、個々の微生物及び／又は微生物の全体の群を検出するための、そして／又は選択的に定量するための美容学的又は皮膚科学的方法であって、ヒト又は動物の皮膚の微生物叢のサンプルが採取された後、このサンプルは脱抑制培地で処理され、このようにして調製されたサンプルは、微生物の特定の群に対しては好適な生育条件を示すがその他の微生物に対しては好ましくない生育条件を示す培地に添加され、その結果選択培養物が生成され、そしてこの選択培養物が十分長い期間培養され、そのため、それに対しその培地が好適な生育条件を示す微生物群のみが増殖する機会を有し、それと共に代謝生成物なかでもＣＯ₂が生成され、それは培地自体の中又はその目的のために提供されそして指示培地を含む試験容器中に収集され、そしてその代謝生成物の濃度は、培地及び／又は試験容器中の指示培地の交流（ＡＣ）抵抗の変化により説明され、そして、適切な基準設定の後、算術的方法により選択培地中の微生物数に関連付けられることを特徴とする方法。

Description

【発明の詳細な説明】微生物の検出及び計数法本発明は微生物、特にヒトの皮膚に集落形成する微生物を定性的に検出しそして定量的に計数する方法に関する。更に本発明は、それらの方法に使用するための物質に関する。微生物は原核微生物、すなわち実際的な細胞核を持たないもの及び真核微生物、すなわち細胞核を持つものに分類される。真核微生物は藻類、真菌及び原生動物を含む。原核微生物は細菌を含む。細菌は更に、真正細菌、フィラメント形成細菌、突起形成細菌（prosthecate）及び出芽細菌、放線菌、真正寄生菌、スピロヘータ、藍色細菌、古細菌及びその他に分類される。真正細菌は本質的に、球菌、すなわち球状の細菌(例えば、連鎖球菌)本質的に桿状の又は長い円筒状の非胞子形成菌［例えば、コリネフォルム菌、プロピオン酸菌、緑膿菌、腸内細菌］、胞子形成桿菌（例えば、バチルス菌及びクロストリジア菌）及び弯曲桿菌［例えば、スピリルム菌(spirilla)及びコレラ菌(vibrios )］に分類される。更に、真正細菌は前記の群に加えて、グラム陽性菌及びグラム陰性菌、すなわちその細胞壁が、アルコールで洗浄後ですらグラムテスト後に青く染色される細菌、あるいはその細胞壁が、アルコールにより再度無色に洗浄される細菌、に分類される。それらの細胞壁の構造の結果として、グラム陽性菌及びグラム陰性菌は異なった性状を有する；例えば、細胞壁の形成の過程で阻害するペニシリンは、主としてグラム陽性菌に対して致死的効果を有する（ある種のグラム陰性菌に対してもその効果を有するが）。一般的に微生物は、そしてなかでも細菌は、実際的に偏在性である。例えば、ミコバクテリア、連鎖球菌、ブドウ球菌及びプロピオン酸菌は主として健常なヒトの皮膚上に認めることができる。これもまた皮膚上に存在するコリネフォルム菌は最近、アポクリン腺からの汗の分解による、不快な体臭の発生の原因であることが判明した。真菌は、またmycota［mykes＝fungusのギリシャ語］又はmycobiontsとも称されるが、真核生物に含まれる。真核生物は、いわゆる原核生物の細胞（原核細胞）と対照的に、それらの細胞（真核細胞）が核膜及び核包膜により残りの細胞質から境界を定められている細胞核を有する生物である。その細胞核は染色体中に保存される遺伝情報を含有する。真菌の代表的なものは、例えば、酵母[原始子嚢菌綱(Protoascomycetes)]、糸状菌(moulds)［不整子嚢菌綱(Plectomycetes)］、藻菌類(mildew)［核菌綱(Pyre nomycetes)］、わたげ黴菌(downy mildew)［藻菌綱(Phycomycetes)］、及びもちろん直立真菌(upright fungi)［担子菌類(Basidiomycetes)］を包含する。担子菌類を含む真菌は植物有機体ではないが、それらは、植物有機体のように、細胞壁、細胞液で充満した液胞、及び顕微鏡で容易に見ることができる原形質の流れを有する。それらは光合成色素を含有せず、そしてＣ−従属栄養性である。それらは好気性の条件下で生育し、そして有機物質を酸化することによりエネルギーを得る。しかし、幾つかの代表的な真菌、例えば酵母類は通気嫌気性菌であり、発酵過程によりエネルギーを得ることができる。皮膚真菌症(dermatomycoses)は、ある種の真菌種、なかでも皮膚糸状菌が皮膚及び毛嚢に浸透する疾患である。皮膚糸状菌症の症状の例は、通常痒み又はアレルギー性湿疹を併発した庖疹、剥離、亀裂及びただれである。皮膚真菌症(dermatomycoses)は本質的に以下の４群：皮膚糸状菌症(dematophy toses)[例えば、表皮糸状菌症(epidematophytosis)、黄癬(favus)、小胞子菌症( microsporosis)及び白癬症(torichophytosis)]、酵母真菌症(yeast mycoses)[例えば、粃糠疹(pityriasis)、カンジダ感染症、分芽菌症(blastomycosis)、ブッセ・ブシュケ病(Busse-Buschkedisease)、酵母菌症(torulosis)、白砂毛症(pied ra alba)、無胞子酵母症(torulopsidosis)及び毛芽胞菌症(trichosprosis)］、かび真菌病(mould mycoses)［例えば、払子菌病(aspergillosis)、頭部分生胞子症(cephalosporidosis)、藻類糸状菌症(phycomycosis)及びスコプラリオプシス菌症(scopulariopsidosis)］、全身性真菌症［例えば、色素酵母菌症(chromomyc osis)、コクシジオイデス真菌症(coccidiomycosis)及びヒストプラズマ症］に分類されることができる。酵母群からの病原性又は条件付病原性細菌はカンジダ種（例えば、鵞口瘡カンジダ）及びピチロスポルム属の細菌を包含する。ピチロスポルム属、なかでも卵形ピチロスポルム菌は瘢風(pityriasis versicolor)、主として頭部脂漏（＝ふけ）として表れる油性脂漏及び乾性脂漏の形態の脂漏、脂漏性湿疹及びピチロスポルム毛嚢炎、のような皮膚疾患の原因である。ヒトの皮膚の全領域が皮膚真菌症に罹る可能性がある。皮膚真菌症はほとんど独占的に皮膚、毛髪及び爪に感染する。酵母菌症はまた粘膜及び内蔵を侵す可能性があり；全身的真菌症は全身の臓器系に一様に波及する。しかし、皮膚の細菌感染及び重感染はまた、特に免疫無防備状態の患者、例えばアトピー及び乾癬症患者、並びにまたその他の原因の疾患において、著しい精神的傷害をもたらす。重感染とは、それ自体は従来から皮膚に認められる、過剰な細菌数の出現を意味する。衣類、装身具又は履物の存在により湿度及び熱が蓄積する可能性がある、身体のこれらの部位は特に頻繁に感染する。このため、足の真菌症は最もよく知られそして最も広範に散逸している皮膚真菌症である。これに加え、手指の爪及び足指の爪の部位の真菌疾患は特に不快である。すべての個々の微生物集団が生育力があるとは限らない。栄養寒天又は栄養溶液中の懸濁物上に集落を形成する細菌は、生育している、すなわち再生している細胞である。計数室又は電気的「クールター(Coulter)計数器」は総細胞数の計数に使用されることができる。生育し得る細胞数を計数するために、例えば生育している細胞からできる集落を計数することができる。これを実施するために、希釈細胞懸濁液を使用することが必要である。当該技術分野の専門家にこれらの方法は非常に熟知されている。しかし臨床的分析及び診断、並びに医学的検査の意味におけるヒトの疾患皮膚の皮膚科学的分析及びまたそれ自体健常であるが美容上の、微生物学的に危険な変化を示す皮膚の美容学的検査を同様に包含することを目的とされる術語に対して、できるだけ短時間でそして患者に対してできるだけ少ない要求により、信頼できる方法で、細菌数を定性的に検出するかあるいは定量的に計数できるような方法は存在しない。この観点から、改善策を採ることが必要であった。更にこれに加えて、当該技術分野の状態の従来の計数法はその他の欠点、なかでも信頼性のない点、あるいは機器、労力及び／又は時間の大量の投資を要するという欠点を有した。従って、当該技術分野の状態のこれらの欠点を改善することが本発明の目的であった。なかでも、その目的は、それらの方法が簡明で早急な様相で再現性のある結果を提供するような、細菌数の定性的検出及び／又は定量的計数方法を提供することであった。更に、比較的容易に自動化できる方法を提供することが本発明の目的であった。本発明のもう一つの目的は、実際の計数方法を実施する前にサンプルが労力と時間を消耗する方法で処理されねばならないことのないように、簡単なサンプル採取法を確定する方法を提供することであった。更に、本発明のもう一つの目的は、可能なだけ広範な種類の細菌に、できる限り普遍的に適した方法を提供することであった。最後に、本発明の目的は、ヒトの皮膚の代表的な細菌叢に関して微生物の計数に特に適切な方法を提供することであった。これらすべての目的の達成は、ヒトもしくは動物の皮膚上に存在する個々の微生物、及び／又は微生物の全体的グループを検出しそして／又は選択的に定量化するための、美容学的又は皮膚科学的方法によりもたらされ、それらの方法は、ヒトもしくは動物の皮膚の微生物叢のサンプルを採取後、このサンプルを脱抑制培地(deinhibiting medium)で処理し、このようにして調製されたサンプルは、一定の微生物群に対して好適な生育条件を示すが、しかしその他の微生物に対しては好ましくない生育条件を示す培地に添加され、その結果として選択培地が生成されそして、この選択培地は十分長時間培養されると、それらに対してその培地が好適な生育条件を示すような微生物群のみが増殖する機会をもち、それと同時に代謝生成物特にＣＯ₂が生成され、それは培地自体中か又はその目的のために提供されそして指示培地(indicator medium)を含有する試験容器の中に収集され、そしてその代謝生成物の濃度は試験容器中の培地及び／又は指示培地の交流（ＡＣ）抵抗の変化により説明され、そして適当な基準設定後に、算術的方法により、選択培地中の微生物数と関連付けられることを特徴とする。微生物の代謝過程の分析の際に、ＡＣ抵抗計数（インピーダンス計数）を実施することは実はそれ自体は既知である。従って、例えばP.Jaksch[dmZ Lebensmit telindustrie und Milchwirtschaft 31,1991,pp.950-960：中の“Grundlagen de r Impedanztechnik und Erfahrungen beider Untersuchung roher und pasteuri sierter Milch（生乳及び殺菌牛乳の研究におけるインピーダンス法の基礎原理及び経験）”；dmZ Lebensmittelindustrie und Milchwirtschaft 32/33,1991,p p.992-996 indirekter Leitfahigkeitsmessung（間接的伝導度計数によるヨーグルト及びクリームチーズ中の酵母菌の検出）”］は、牛乳及び乳製品についての実験を報告している。しかし、皮膚科学又は美容学の分野で教育された専門家は、前記文献中で公表された方法により、本発明に従うような、本明細書に記載されている皮膚科学的及び／又は美容学的分析法に到達することはできなかった。なかでも、当該技術分野の専門家は、ヒトもしくは動物の皮膚の微生物叢の代表的なそして再現性のあるサンプルを採取すること、及びそれらを処理することは不可能であると考えざるを得なかったであろう。彼らにとっては食品のサンプルが比較的大量にそして著しく再現性をもつ量を入手可能な食品の技術者達は、皮膚からの微生物−これは更に彼にはまだ未知であるのだが−の代表的な量を分離することを試みねばならない皮膚科学者又は美容学者の条件とは単に完全に異なる条件下で研究している。直流の使用はテスト培地の電気分解的破壊及びその結果、計数されたパラメーターの制御不可能な変化を導くため、交流の使用が本発明には必須である。ある物質のＡＣ抵抗は次の個々の現象からなる：すなわちその物質のオームもしくは非反応性抵抗、誘導抵抗及び容量性(capacitative)抵抗である。オーム抵抗の逆数は伝導度と呼ばれる。流体溶液中で計数を実施する際、誘導効果は一般的に重要でない。インピーダンスとも呼ばれる、ＡＣ抵抗のＺは次のパラメーターＧ_o ＝培地の伝導度Ｇ_B ＝培地の伝導度に対する微生物の代謝活性の効果 Ω ＝交流電流の周波数Ｃ＝培地の容量性抵抗から：であると計算される。１／（Ｇ_o＋Ｇ_B）の術語は培地のオーム抵抗の逆数を意味する。変数Ｇ_Bは検出されるべき微生物の代謝活性に依存する；Ｇ_oは一定である。容量性抵抗に関連する術語１／（ΩＣ）は計数期間中は一定であるとみなすことができるので、選択されるべき計数条件下では、計数期間中のインピーダンスの変化はＧ_Bに依存するのみである。本発明による具体的な選択培地の選択により、各実施サイクルにおいて、その代謝活性がインピーダンスの変化をもたらす唯一の微生物種もしくは微生物属がそれぞれ確実に検出されるという事実により、適当な基準設定により、その数値が明白にこの微生物に関連するような、検出されるべき微生物の具体的数値を、あらゆる与えられた時点での微生物サンプルのインピーダンスの具体的な計数値に直接的に帰することができる。従って、定性的検出は選択培地の選択により達成される。サンプル中に存在する具体的な種の微生物数の計数は順次、その濃度が本発明によるインピーダンスの計数により確定されることができる、代謝生成物の濃度に相関する。本発明により使用されることができるインピーダンス計数機器それ自体に関して重要な制約はない。例えば、ドン・ウィトレイ科学会社(Don Whitley Scienti fic Limited)（シプレイ市、ウエストヨークシャー、英国）により製造されそしてＲＡＢＩＴ［＝rapid automated bacterial impedance technique（急速自動細菌インピーダンス法）］の名称で市販されている機器は要請を非常に満足に満たすことが判明した。ドイツ連邦共和国においては、これらの機器はマスト・ジアグノスチカ(Mast Diagnostica)社により発売されている。しかし、その他の製造業者、例えばマルトス(Malthus)社又はシラブ(Sylab)社により製造された機器もまた本発明に非常に良く適合する。原則的に２種の方法が微生物サンプルのインピーダンス計数に好都合であると判明した。その第一は、図１に描かれるようにそして、その中で２個の電極（Ａ，Ａ’）が選択培地（Ｂ）中に直接挿入され、そしてインピーダンスの変化が計数期間中を通してモニターされる、直接計数法である。図１は図式により、電圧計を表す、Ｖで表される計数機器並びに電流計を示す、Ａで表される機器を備えた、抵抗計数のための配線図を示す。総抵抗Ｚはオームの法則、Ｚ＝Ｕ／Ｉ（電圧／電流）に従って計算される。第二の計数法は、図２に図示されているが、特に、大量のＣＯ₂を生成する微生物の場合に好適である。この場合、微生物サンプルは容器（Ｃ）中の選択培地（Ｂ）中に存在する。この容器は大気空間により、微生物サンプル又はそのサンプル中で生成される予定の微生物集落により生成されるガス状の代謝生成物を捕捉する指示培地（Ｄ）に連結されている。容器（Ｃ）及び指示培地（Ｄ）は両者とも気密性に封印される容器（Ｅ）中に置かれている。計数電極（Ａ，Ａ’）はこの指示培地中に挿入されている。図１に関して述べられた事実が抵抗Ｚの計算に関して適用される。ＫＯＨ−寒天は特に好都合な指示培地であることが判明した。以下の計数法は特に適切であることが判明した：そのサンプルのインピーダンスの変化に対する一定の閾値において計数部位によって信号が発せられ、その閾値は通常１０⁵／mlの微生物濃度に対応し、そして間接法の場合にはおよそ−１０μS（マイクロシーメンス）に対応し、そして直接法の場合にはおよそ５μSに対応する。前記のマイナス記号は、指示培地（ＫＯＨ−寒天）の伝導度が、生成されるＣＯ₂の吸収の結果として減少する事実による。もし微生物培養物が、そのすべてが限界濃度未満にある個々の異なった濃度をもち、そして（適当な場合には選択的な）生育条件にさらされる場合、その限界濃度が個々のサンプル中で達せられ、そして信号が発せられる時間は、初期の個々の濃度の対数に比例する。その結果、もし実験構造物が既知の個々の濃度を有する既知の微生物の培養物で基準設定を行えば、未知の個々の濃度をもつ未知の微生物のサンプルは、選択培地の選択によりその微生物の性状が検査され、そして、前記の計数法を用いたインピーダンス計数機における検出により、その濃度につき分析されることができる。インピーダンス計数用の市販の機器は従来からこの方法により作動している。特にそれから微生物サンプルが採取されるべき対象がヒトの皮膚である場合には、ハルトマン(A.A.Hartmann)により、“Untersuchungern zu Unterschieden d er Keimzahlen der Residentflora benachbarter Hauta de（皮膚周辺領域の棲息菌叢の細菌数の差異に対する、使用された皮膚 (1983)（G.Braun社、Karlsruheにより出版）中に記載されたようなサンプル採取法を選ぶことは好都合であることが判明した。その内容が、本明細書で公表された説の好都合な要素であり、そして簡明さのためにそれが引用されている前記の論文中に、皮膚菌叢の分離のための以下の主要な方法：１．）洗剤による洗浄法（“ＤＷＭ”）２．）シアノアクリラート法（“ＣｙＡＭ”）３．）ウオーターピック法（“Ｓ＆Ｎ”）４．）水スプレー法（“Ｔｈｒａｎ”）が記載されそして／又は引用されている。洗剤洗浄法、特に下記に記載のような変法における洗浄法を利用することは特に好都合である：すなわち一定サイズの皮膚領域を、一定量の界面活性剤の水溶液で一定時間すすぎ洗いし、この水溶液は好都合には、５．０から８．０のｐＨに緩衝され、そして前記の皮膚領域は、好都合には、けずる道具、なかでも合成材料（例えばテフロン）でコートされたスパチュラで穏やかに圧力をかけながら、同時にけずり取る。原則的には、美容学的又は皮膚科学的に適切なすべての界面活性剤が、本発明により使用され得るが、しかし、適当な場合には、どちらかといえば、ある種の微生物の生育を阻止しそして、その他の微生物の生育に影響を与えないか、あるいはごく僅かな影響を与えるのみであるような物質を使用することが好都合である可能性がある。同様のことがｐＨの選択及び／又は緩衝剤自体に適用される：すなわち原則的には美容学的又は皮膚科学的に適切なすべての緩衝剤が本発明により使用され得るが、しかし適当な場合には、緩衝剤の選択により、その微生物サンプルにある程度の選択的圧力をかけることが好都合の可能性がある。このようにして得られたサンプルは次に、脱抑制培地で処理される。次いでそれは、栄養基質として選択培地と混合されることができ、そしてこれら２種の後者の操作の間に６時間までの時間を経過させることは完全に可能である。この脱抑制培地とはすすぎにより損傷を受けた細菌の修復を行う培地であると理解される。本発明により好適な脱抑制培地は下記の組成物：脳／心臓抽出物及びペプトン０から５０g/l Ｄ−（＊）−グルコース０から５ g/l ＮａＣｌ０から２０g/l Ｎａ₂ＨＰＯ₄＊Ｈ₂Ｏ０から１０g/l トウイーン８００から５０g/l レシチン０から５ g/l ヒスチジン０から５ g/l により特徴付けられる。これらの物質の混合物は好都合には蒸留水１．０リットルに溶解され、その溶液は加圧滅菌され、ｐＨを５．５から８．５に調整される。この検出法は検出された代謝生成物、好適にはＣＯ₂がテスト培地又は指示培地の抵抗を変化させるという事実に基づいている。ある種の微生物群に対しては好適な生育条件を示すが、その他の微生物群に対しては好適でない生育条件を示すような培地はまた、本発明の特に好都合な態様とみなされる。本発明に関連しては、これらの培地は選択培地と称される。本発明により好適な選択培地は、より詳細に以下に記載される。しかし、それら自体当該技術分野の状態に属するその他の選択培地もまた、この新規な方法の範囲内で使用することができる。個々の場合において、ある種の選択培地は、それ自体異なる幾つかの細菌に対する選択培地として使用されることができることは可能である。しかし、選択培地の明確性を回復するためにはその他の機序が存在するので、これは矛盾ではない、例えば連鎖球菌は主として口腔内に認められ、そしてそれにもかかわらず連鎖球菌及び腸内球菌に反応する選択培地が使用されることができる。この新規の選択培地は新規の皮膚科学的又は美容学的検出法のための組成物として非常に好都合に使用することができるが、それらの使用範囲はこれらの方法に限定されない。従って、これらの選択培地は例えば、その他の検出法あるいはまた微生物の培養のための方法に使用されることができる。この新規の選択培地は、微生物の栄養源として役立つ基礎培地、及びこれに加えて、ある種の微生物の生育を抑制しながら、その他の微生物、すなわち検出されるべき微生物に影響を与えないような１種類以上の物質、により特徴付けられる。ブドウ球菌：ブドウ球菌に対する新規の選択培地は、それに下記の成分：重量部ピルビン酸ナトリウム０．２から２０．０グリシン０．０５から５．０ＫＳＣＮ０．０５から５．０ＮａＨ₂ＰＯ₄ ０．０５から２．０Ｎａ₂ＨＰＯ₄ ０．０２から２．０ＬｉＣｌ０．１から１０．０アズトレオナム０から０．０１リノレン酸０から５０．０から選ばれる１種類の物質もしくは物質の混合物［本発明の応用の範囲内で、それぞれ選択剤(selector)もしくは選択剤類(selectors)と呼ばれる］が添加される、従来の基礎培地４０−５０重量部からなる。好都合には、選択剤類の下限は基礎培地の２重量部から５０重量部である。驚嘆すべきことには、リノレン酸を添加することにより、ブドウ球菌同士、なかでも黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌を識別することが可能である。表皮ブドウ球菌は、その生育が抑制される黄色ブドウ球菌と対照的に、リノレン酸の存在下で生育可能である。ブドウ球菌のための選択培地を調製するために好適な基礎培地は例えば下記の組成：重量部カゼインペプトン１０．０肉抽出物５．０酵母抽出物３．０グリセロール１０．０寒天１３．０を有する。しかし、当該技術分野の専門家は、微生物の生育を促進する基礎培地の組成について熟知しているので、この件に関してはこの時点で更に詳細に追及しないことにする。これは、本明細書に開示されているその他の基礎培地についても同様である。プロピオン酸菌：プロピオン酸菌のための新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部チオグリコール酸ナトリウム０．０５から５．０ＮａＣｌ０．１から１０．０Ｌ−システインＨＣｌ０．０５から５．０レザズリン０．００１から０．１０ＮａＨＣＯ₃ ０．０５から５．０ホスホマイシン０．０１から１．０から選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、従来の基礎培地３５−５０重量部からなる。選択剤類の下限は好都合には基礎培地の０．５重量部から５０重量部である。プロピオン酸菌のための選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部ペプトン１５．０酵母抽出物１０．０寒天１５．０を有する。嫌気性菌類：嫌気性菌類に対する新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部チオグリコール酸ナトリウム０．０５から５．０ＮａＣｌ０．１から１０．０Ｌ−システインＨＣｌ０．０５から５．０レザズリン０．００１から０．１０ＮａＨＣＯ₃ ０．０５から５．０。から選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、従来の基礎培地３５−５０重量部からなる。選択剤類の下限は好都合には基礎培地の０．５重量部から５０重量部である。嫌気性菌類に対する選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部ペプトン１５．０酵母抽出物１０．０寒天１５．０を有する。ピチロスポルム種(Pityrosporum spec.)：ピチロスポルム種に対する新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部モノステアリン酸グリセロール０．０５から５．０トウイーン８００．０５から５．０クロラムフェニコール０．０１から１．０ゲンタマイシン０．００５から０．５から選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、従来の基礎培地４０−９０重量部からなる。選択剤類の下限は好都合には基礎培地の０．１重量部から５０重量部である。ピチロスポルム種のための選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部ネオペプトン類１５．０酵母抽出物０．１寒天１８．０オリーブ油２０．０を有する。酵母類、例えばカンジダ属：酵母類、例えばカンジダ属酵母のための新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部亜硫酸ビスマス０．１から１０．ネオマイシン０．００５から０．５から選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、従来の基礎培地３０−５０重量部からなる。選択剤類の下限は好都合には基礎培地の０．０５重量部から５０重量部である。酵母類に対する選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部酵母抽出物１．０寒天１５．０グリココール１０．０グルコース１０．０を有する。糸状菌類及び皮膚糸状菌類：糸状菌類及び皮膚糸状菌類に対する新規の選択培地は、それに対し１０から１００重量部のＮａＣｌが添加される、従来の基礎培地２０−７５重量部からなる。腸内球菌類及び連鎖球菌類：腸内球菌類に対する、そしてまた連鎖球菌類[例えばストレプトコッカスムタンス(Streptococcus mutans)]に対する新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部クエン酸ナトリウム０．５から５０．０アジドナトリウム０．１から１０．０酢酸タリウム０．２から２０．０２，３，５−トリフェニルテトラゾール（又はその酸付加物）０．００１から０．１０から選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、従来の基礎培地３０−６０重量部からなる。選択剤類の下限は好都合には基礎培地の５重量部から５０重量部である。腸内球菌類、及びまた連鎖球菌類（例えばストレプトコッカスムタンス）に対する選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部カゼインペプトン１０．０寒天１５．０肉抽出物１０．０グルコース１０．０を有する。コリネフォルム菌(Coryneform)及びコリネバクテリウム菌(Corynebacterium)：コリネフォルム菌及びまたコリネバクテリウム菌に対する新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部フラゾリドン（アルドリッチ）０．５から５０．０アセトン０．５から５０．０トウイーン８００．１から１０．０牛の血清２．０から２００ホスホマイシン（シグマ化学）５．０から５００加圧滅菌水１０００にから選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、基礎培地３０−５０重量部からなる。コリネフォルム菌類及びまたコリネバクテリウムに対する選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部カゾー寒天４４．００g 酵母抽出物１．１０g 脱イオン水１０００．０mlにを有する。大腸菌群の細菌(coliform organisms)及び大腸菌(E.Coli)：大腸菌群の細菌及びまた大腸菌に対する新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部ＮａＣｌ０．１から１０．０ラクトース０．２から２０．０塩基性フクシン０．０２から２．０Ｎａ₂ＳＯ₃ ０．０５から５．０。から選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、従来の基礎培地３０−５０重量部からなる。選択剤類の下限は好都合には基礎培地の２重量部から４０重量部である。大腸菌型菌類及びまた大腸菌に対する選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部肉のペプトン１０．０寒天２０．０肉抽出物１０．０を有する。腸内菌類：グラム陽性菌及び大腸菌群の細菌の生育を完全に抑制する腸内菌類に対する新規の選択培地は、それに対し下記の成分：重量部クエン酸ナトリウム０．１から１０．０Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₃ ０．１から１０．０デオキシコール酸ナトリウム０．１から１０．０クエン酸鉄(III)アンモニウム０．０５から５．０中性赤０．００１から０．１。から選ばれる１種類以上の選択剤類が添加される、従来の基礎培地３０−５５重量部からなる。選択剤類の下限は好都合には基礎培地の５重量部から４０重量部である。腸内菌類に対する選択培地調製に好適な基礎培地は例えば、下記の組成：重量部ペプトン５．０寒天１３．０肉抽出物５．０ラクトース１０．０スクロース１０．０を有する。本発明によると、本方法を美容学的又は皮膚科学的検出法として利用することは特に好都合である。これに関連して、研究されるべき事実は皮膚の微生物叢の変化である。もちろん美容学的研究と皮膚科学的研究の境界は流動的である。まず最初に、本発明による美容学的検出の主要焦点は、絶対的又は相対的な細菌数の変化の計数にあり、その次の焦点は特定の細菌の検出にある。しかし、具体的な非病原性の細菌の存在の検出もまた、ある種の美容学的皮膚変化、例えば体臭（頭部、足及び腋臭）及び汚い皮膚の症例における、そして口腔の衛生及び微生物が関与するすべてのその他の美容学的皮膚変化の症例における、この新規の方法の好都合な態様である。本発明による皮膚科学的検出は、本質的に皮膚の微生物叢の病理学的変化の計数に存する。この場合にも、関連する微生物の存在及びまたその数値の両者が、本発明により好都合に計数され得る。好都合な新規の方法の実施例は下記の皮膚科学的兆候： − アトピー性湿疹 − 乾癬 − アクネ − 脂漏性皮膚炎 − 細菌による蜂巣炎 − 皮膚糸状菌症 − 病原性及び／又は非病原性のグラム陽性及び／又はグラム陰性菌による皮膚の重感染の検出のためのものである。下記の実施例は、本発明により使用され得る選択培地の好都合な態様を示す。実施例１ブドウ球菌に対する特に好都合な選択培地は下記の組成：カゼインペプトン１０．００g 肉抽出物５．００g 酵母抽出物３．００g グリセロール１０．００g ピルビン酸Ｎａ１０．００g グリシン０．５０g ＫＳＣＮ２．２５g ＮａＨ₂ＰＯ₄＊Ｈ₂Ｏ０．６０g Ｎａ₂ＨＰＯ₄＊２Ｈ₂Ｏ０．９０g ＬｉＣｌ２．００g 寒天１３．００g により特徴付けられる。これらの成分を水１１に溶解し、そしてその溶液を加圧滅菌しそしてｐＨを７．２に調整する。その溶液をおよそ５０℃に冷却した後、０．４５％のアジドナトリウム溶液１０mlを添加し、そしてその混合物を小さい寒天斜面管に注入する。この培地はブドウ球菌を選択する。コリネフオルム菌は全く生育を示さず、そしてミクロコッカス種は約４０時間後に認識できる程度にのみ生育し、これはブドウ球菌としての検出時間を優に越えている。実施例１ａブドウ球菌の、その他の特に好都合な、選択培地は下記の組成：カゼインペプトン８．５０ g 肝臓ペプトン２．００ g 酵母抽出物２．００ g ラクトアルブミン５．５０ g ピルビン酸Ｎａ１０．００ g グリシン０．５０ g ＮａＨ₂ＰＯ₄＊Ｈ₂Ｏ０．６０ g Ｎａ₂ＨＰＯ₄＊２Ｈ₂Ｏ０．９０ g ＬｉＣｌ５．００ g アズトレオナム０．００５g 寒天１３．００ g。により特徴付けられる。これらの成分を水１１に溶解し、そしてその溶液を加圧滅菌し、そしてｐＨを７．２に調整する。その溶液をおよそ５０℃に冷却した後、その混合物を小さい寒天斜面管に注入する。この培地はブドウ球菌を選択する。実施例１ｂ黄色ブドウ球菌に比較して、表皮ブドウ球菌に対する好都合な選択培地は下記の組成：カゼインペプトン８．５０ g 肝臓ペプトン２．００ g 酵母抽出物２．００ g ラクトアルブミン５．５０ g ピルビン酸Ｎａ１０．００ g グリシン０．５０ g ＮａＨ₂ＰＯ₄＊Ｈ₂Ｏ０．６０ g Ｎａ₂ＨＰＯ₄＊２Ｈ₂Ｏ０．９０ g ＬｉＣｌ５．００ g アズトレオナム０．００５g リノレン酸０．６０ g 寒天１３．００ g により特徴付けられる。これらの成分を水１１に溶解し、そしてその溶液を加圧滅菌しそしてｐＨを７．２に調整する。およそ５０℃に冷却した後、その混合物を小さい寒天斜面管に注入する。この培地において、黄色ブドウ球菌は４０時間の検出時間後ですら検出できない。実施例２プロピオン酸菌種に対する、特に好都合な選択培地は下記の組成：ペプトン１５．０ g 酵母抽出物１０．０ g チオグリコール酸ナトリウム０．５ g ＮａＣｌ２．５ g Ｌ−システインＨＣｌ０．５ g リザズリン０．００１g ＮａＨＣＯ₃ ０．４ g。により特徴付けられる。これらの物質の混合物を蒸留水１．０ｌに溶解しそしてその溶液を加圧滅菌する。その溶液を５０℃に冷却した後、培地１リットル当たりホスホマイシン１６０mgを添加し、ｐＨを７．２に調整する。実施例３嫌気性菌のための特に好都合な選択培地は下記の組成：ペプトン１５．０ g 酵母抽出物１０．０ g チオグリコール酸ナトリウム０．５ g ＮａＣｌ２．５ g Ｌ−システインＨＣｌ０．５ g リザズリン０．００１g ＮａＨＣＯ₃ ０．４ g により特徴付けられる。これらの物質の混合物を蒸留水１．０ｌに溶解しそしてその溶液を加圧滅菌する。ｐＨを７．２に調整する。実際の検出法が嫌気性条件下で実施される。実施例４ピチロスポルム種(Pityrosporum spec.)に対する特に好都合な選択培地は下記の組成：ネオペプトン１５．０g 酵母抽出物０．１g 寒天１８．０g オリーブ油２０．０g モノステアリン酸グリセロール２．５g トウイーン８０２．０g により特徴付けられる。これらの物質の混合物を蒸留水で１．０ｌにしそしてｐＨを６．０に調整する。次いでその培地を加圧滅菌する。まだ流体である培地をおよそ５０℃まで冷却させ、そして１リットル当たりクロラムフェニコール１００mg及びゲンタマイシン５０mgを添加する。次いでその培地を小さい寒天斜面管に注入する。実施例５酵母、なかでもカンジダ属の酵母に対する特に好都合な選択培地は下記の組成：酵母抽出物１．０g 寒天１５．０g グリココール１０．０g グルコース１０．０g 亜硫酸ビスマス７．０g により特徴付けられる。これらの物質の混合物を蒸留水１．０ｌに溶解しそしてその溶液を沸騰するまで加熱する。およそ５０℃まで冷却させた後、１リットル当たり硫酸ネオマイシン２．０mgを添加し次いでその培地を小さい寒天斜面管に注入する。実施例６腸内球菌及びまた連鎖球菌[例えばストレプトコッカスムタンス(Streptococc us mutans)]に対する特に好都合な選択培地は下記の組成：カゼインペプトン１０．０g 寒天１５．０g 肉抽出物１０．０g グルコース１０．０g。により特徴付けられる。基礎培地のための前記の物質の混合物を蒸留水１．０ｌに溶解しそしてその溶液を加圧滅菌する。冷却させた後、次の物質：クエン酸ナトリウム２０．０g、アジドナトリウム０．０２g、酢酸タリウム(III)５％の滅菌水溶液３０ml、及び塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムの１％滅菌水溶液１０．０ml、を添加する。生成する選択培地のｐＨを６．２に調整し、そしてその培地を小さい寒天斜面管に注入する。その培地は特に便中細菌の検出に非常に適している。虫歯の発生をもたらす連鎖球菌は、これらの細菌［なかでもストレプトコッカスムタンス(Streptococc us mutan)］に対して攻撃しそして歯の治療用組成物中に含有することができる抗微生物活性主成分と同様に著明に検出することができる。実施例７コリネフォルム菌及びまたコリネバリテリウム菌のための特に好都合な選択培地は下記の組成：混合物Ａカゾ−寒天４４．００g 酵母抽出物１．１０g 水１０００．０mlに。混合物を加圧滅菌し５０℃に冷却させる。混合物Ｂフラゾリドン（アルドリッチ）２２．００mg アセトン２２．００ml トウイーン８０５．５０ml 牛血清１００．００ml ホスホマイシン（シグマ化学社）１６８．００ml 加圧滅菌水１６．８０ml により特徴付けられる。フラゾリドンをアセトン２２mlに溶解し、そしてホスホマイシンを加圧滅菌水１６．８mlに溶解する。次いで混合物Ｂの成分をそれぞれ添加しそして生成混合物を混合物Ａと混合する。実施例８大腸菌群細菌及びまた大腸菌に対する特に好都合な選択培地は下記の組成：肉のペプトン１０．０ｇ寒天２０．００g 肉抽出物１０．００g ＮａＣｌ５．０g ラクトース１０．０g 塩基性フクシン０．５g Ｎａ₂ＳＯ₃ ２．０g により特徴付けられる。基礎培地のための前記の物質混合物を蒸留水１．０ｌに溶解し、そしてその溶液を加圧滅菌する。加圧滅菌後、その培地が赤みがかった色を有したら、赤みが消失するまで少量の亜硫酸ナトリウムを添加する。次いでその培地を小さい寒天斜面管に注入する。この選択培地は固化した直後に使用されねばならない。僅か数日後に、使用不可になったことを示す赤みがかった色に染まる。実施例９腸内細菌に対する特に好都合な選択培地は下記の組成：ペプトン５．０g 寒天１３．００g 肉抽出物５．０g ラクトース１０．０g スクロース１０．０g クエン酸ナトリウム６．０g Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₃ ４．０g デオキシコール酸ナトリウム３．０g クエン酸鉄(III)アンモニウム１．０g 中性赤０．０２g。により特徴付けられる。前記の物質混合物を蒸留水１．０ｌに溶解しそしてその溶液を沸騰するまで加熱する。寒天が溶解後、その混合物を小さい寒天斜面管に注入しそして固化させる。この培地はまた臨床的診断において、例えばサルモネラ菌、赤痢菌、ビブリオ菌及び病原性エルジニア菌の検出のために使用することができる。実施例１０糸状菌に対して特に好都合な選択培地は下記の組成：麦芽抽出物２０．０g ＮａＣｌ７５．０g 寒天１５．０g。により特徴付けられる。これらの物質の混合物を蒸留水１．０ｌに溶解しそしてその溶液を加圧滅菌し小さい寒天斜面管に注入する。この培地はまた皮膚糸状菌の培養にそして、これらの細菌に対するテスト物質の抗糸状菌作用の検出に適する。実施例１１脱抑制培地脳／心臓抽出物及びペプトン２７．５g Ｄ−（＊）−グルコース２．０g ＮａＣｌ５．０g Ｎａ₂ＨＰＯ₄＊Ｈ₂Ｏ２．５g トウイーン８０３０．０g レシチン３．０g ヒスチジン１．０g これらの物質の混合物を蒸留水１．０lに溶解し，そしてその溶液を加圧滅菌しそしてｐＨを７．４に調整する。実験Ｉ：（１）参照菌株を使用し、そして広域タイプの分離物を使用した、ブドウ球菌に対するインピーダンス法の基準設定表皮ブドウ球菌ＤＳＭ２００４４が参照菌株として使用された。３４種の異なった細菌数からなる基準列が希釈により調製され、そしてインピーダンス法はこの基準列を使用して基準設定を実施された。最小細菌濃度（ＣＦＵ）は−１０μSの閾値に達するための２２時間２４分に対応して、３．３＊１０¹／mlであった；最高濃度は、−１０μSの閾値に達するための３時間１２分に対応して、１．３＊１０⁷／mlであった。ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）＝ｍＴ＋ｃ式中、ｍ＝−０．２５５ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）／ｈｒｃ＝７．０７０ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）の関係を有する直線状の基準が得られた。直線回帰(linear regression)の相関係数は−０．９４２であった。腋窩部から分離されたブドウ球菌の混合物が、広域タイプの分離物として使用された。５１種の異なった細菌数からなる希釈列が調製され、そしてインピーダンス法の基準設定のために使用された。ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）＝ｍＴ＋ｃ式中、ｍ＝−０．２０４ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）／ｈｒｃ＝７．８６０ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）の関係を有する直線の基準が得られた。直線回帰の相関係数は−０．９１７であった。（２）皮膚からの微生物の分離法及び間接的なインピーダンス計数による皮膚のブドウ球菌の検出及び定量方法ヒトの皮膚（例えば腋窩の）の一領域のすべての微生物叢は、テフロンコートした金属のスパチュラで穏やかにこすり取りながら、界面活性剤として０．１％トリトンＸ−１００を含有する０．０７５モルのリン酸緩衝剤（ｐＨ＝７．９）１mlで１分間にわたり３．８cm²の領域を洗浄することにより分離される。生成されたサンプルは実施例１１による脱抑制培地５００μlで処理される。このようにして調製されたサンプル各１００μlは実施例１による選択培地２．４mlで処理され、そして細菌数は間接的な検出法を使用した計数器で計数される。この方法により１０の異なったテスト検体の例において、皮膚１cm²あたり１０²と１０⁷個の間のブドウ球菌を問題なく検出することができた。ドン・ウィトレイ科学会社(Don Whitley Scientific Ltd.)から発売のＲＡＢＩＴが検出機器として使用された。実験II：（１）参照菌株を使用した、コリネフォルム菌に対するインピーダンス法の基準設定コリネバクテリウム種(Corynebacterium spec.)が広域タイプの菌株として使用された。５１種の異なった細菌数からなる基準列が希釈により調製され、そしてインピーダンス法はこの基準列を使用して基準設定された。最小細菌濃度（ＣＦＵ）は、−１０μSの閾値に達するための５１時間４８分に対応して、２．０＊１０²／mlであった；最高濃度は、−１０μSの閾値に達するための１０時間２４分に対応して、９．８＊１０⁶／mlであった。ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）＝ｍＴ＋ｃ式中、ｍ＝−０．０８５ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）／ｈｒｃ＝７．３８０ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｍｌ）の関係を有する直線の基準が得られた。直線回帰の相関係数は−０．８８３であった。（２）皮膚からの微生物の分離法及び間接的なインピーダンス計数によるコリネフォルム菌の検出及び定量方法ヒトの皮膚（例えば腋窩の）の一領域のすべての微生物叢が、テフロンコートした金属スパチュラで穏やかにこすり取りながら、界面活性剤として０．１％トリトンＸ−１００を含有する０．０７５モルのリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．９）１ mlで１分間にわたり３．８cm²の領域を洗浄することにより分離される。生成されたサンプルは実施例１１による脱抑制培地５００μlで処理される。このようにして調製されたサンプル各１００μlは実施例７による選択培地２．４mlで処理され、そして細菌数は、間接的検出法を使用した計数器で計数される。この方法により、１０の異なったテスト対象の例において、皮膚１cm²当たり１０²と１０⁷個の間のコリネフォルム菌又はコリネバクテリウム菌を問題なく検出することができた。ドン・ウィトレイ科学会社(Don Whitley Scientific Ltd.)から発売のＲＡＢＩＴが検出機器として使用された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者トラウペ，ベルントドイツ連邦共和国デー―22457ハンブルク・クラウス―ナンネ―シユトラーセ61 (72)発明者ボルフ，フロリアンドイツ連邦共和国デー―20251ハンブルク・フズマーシユトラーセ２

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒト又は動物の皮膚上に存在する、個々の微生物及び／又は微生物の全体の群を検出するためのそして／又は選択的に定量するための美容学的又は皮膚科学的方法であって、ヒト又は動物の皮膚の微生物叢のサンプルを採取した後、このサンプルを脱抑制培地で処理し、このようにして調製したサンプルを、特定の微生物の群に対しては好適な生育条件を示すがその他の微生物に対しては好ましくない生育条件を示す培地に添加し、その結果選択培養物を生成し、そしてこの選択培養物を十分長い期間インキュベーションして、それに対しその培地が好適な生育条件を示す微生物群のみが増殖する機会を有し、それと共に、代謝生成物、なかでもＣＯ₂が産生し、それを培地自体の中、又はその目的のために提供されそして指示媒体を含む試験容器中のどちらかに収集し、そしてその代謝産物の濃度を培地及び／又は試験容器中の指示培地の交流（ＡＣ）抵抗の変化により推測し、そして適切な基準設定の後、算術的方法により選択培地中の微生物数と関連付けられることを特徴とする方法。２．ヒトの微生物叢のサンプルの採取が、一定量の界面活性剤水溶液で、一定時間内に、一定のサイズの皮膚領域を濯ぎ落とすことにより実施され、この界面活性剤水溶液は好都合には５．０から８．０のｐＨに緩衝されており、そして前記の皮膚領域は好都合には、こすり落とす道具、なかでも合成材料（例えばテフロン）でコートされたスパチュラで、穏やかな圧力を加えながら同時にこすり落とされることを特徴とする、請求の範囲第１項による方法。３．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらがブドウ球菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地４０−５０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）はピルビン酸ナトリウム、グリシン、ＫＳＣＮ、ＮａＨ₂ＰＯ₄、Ｎａ₂ＨＰＯ₄、ＬｉＣｌ、アズトレオナム及びリノレン酸の群から選ばれることを特徴とする選択培地。４．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらがプロピオン酸菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地３５−５０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）がチオグリコール酸ナトリウム、ＮａＣｌ、Ｌ−システインＨＣｌ、レザズリン、ＮａＨＣＯ₃及びホスホマイシンの群から選ばれることを特徴とする選択培地。５．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらが嫌気性菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地３５−５０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）がチオグリコール酸ナトリウム、ＮａＣｌ、Ｌ−システインＨＣｌ、レザズリン及びＮａＨＣＯ₃の群から選ばれることを特徴とする選択培地。６．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらがピチロスポルム種菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地４０−９０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）がモノステアリン酸グリセロール、トウイーン８０、クロラムフェニコール及びゲンタマイシンの群から選ばれることを特徴とする選択培地。７．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらが酵母なかでもカンジダ属酵母に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地３０−５０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）が亜硫酸ビスマス及びネオマイシンの群から選ばれることを特徴とする選択培地。８．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらが糸状菌又は皮膚糸状菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地２０−７５重量部と更にその上に選択剤としてのＮａＣｌからなることを特徴とする選択培地。９．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらが腸内球菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地３０−６０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）がクエン酸ナトリウム、アジドナトリウム、酢酸タリウム及び２，３，５−トリフェニルテトラゾールの群から選ばれることを特徴とする選択培地。１０．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらが大腸菌群微生物及びまた大腸菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地３０−６０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）がＮａＣｌ、ラクトース、塩基性フクシン及びＮａ₂ＳＯ₃の群から選ばれることを特徴とする選択培地。１１．培地がある種の微生物の群に対しては好ましい生育条件を示すがその他の微生物の群に対しては好ましくない生育条件を示す、請求の範囲第１項による方法のための選択培地であって、それらが腸内細菌に対する選択培地であり、そして従来の基礎培地３０−６０重量部と更にその上に１種類の選択剤もしくは数種類の選択剤類からなり、その選択剤（類）がクエン酸ナトリウム、Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₃ 、デオキシコール酸ナトリウム、クエン酸鉄(III)アンモニウム及び中性赤の群から選ばれることを特徴とする選択培地。１２．下記の皮膚科学的兆候：： − アトピー性湿疹 − 乾癬 − アクネ − 脂漏性皮膚炎 − 細菌により惹起された蜂巣炎 − 皮膚糸状菌症 − 病原性及び／又は非病原性のグラム陽性及び／又はグラム陰性菌による皮膚の重感染を検出するための、請求の範囲第１項又は第２項による美容学的又は皮膚科学的方法。