JPH09500265A

JPH09500265A - キセノニンとしてデザインされたペプチドファミリー

Info

Publication number: JPH09500265A
Application number: JP7503310A
Authority: JP
Inventors: コルベ，ハンノ，ヴィ．，ジェイ．; ラスムッセン，ウラ，ビー．; クライル，ギュンター; アクステッター，ティルマン
Original assignee: トランスジーンソシエテアノニム
Priority date: 1993-06-29
Filing date: 1994-06-28
Publication date: 1997-01-14
Also published as: AU7128294A; WO1995001431A1; US20020111299A1; ES2157261T3; DE69427403T2; CA2166298A1; ATE201903T1; US6277822B1; DK0706567T3; DE69427403D1; PT706567E; US6077827A; AU696454B2

Abstract

(57)【要約】キセノニン（xenonin）としてデザインされたペプチドファミリーであって、対応するメンバーが、アフリカツメガエルの皮膚から分泌される物質から単離でき、大きな薬理学的特性を有しているペプチドファミリー。

Description

【発明の詳細な説明】キセノニンとしてデザインされたペプチドファミリー本発明は、キセノキシン（ｘｅｎｏｘｉｎ）として知られるペプチドファミリー、ペプチドファミリーの一部（ｍｅｍｂｅｒ）並びにそれらの製造方法及び対応するＤＮＡ配列に関する。本発明は、前記キセノキシンを含有する薬学的組成物、並びにそれらを含有するまたは抗キセノキシン抗体を含有する診断キットにも関する。様々な生物学的機能を有する多数のペプチドが既に両生類の皮膚または皮膚分泌物から単離されている（ブイ．エルスパーマー及びピー．メルチオッリ（Ｖ．ＥｒｓｐａｍｅｒａｎｄＰ．Ｍｅｌｃｈｉｏｒｒｉ），ＮｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，イー．イー．ミュラー及びマクレオド編（Ｅ．Ｅ．ＭｕｌｌｅｒａｎｄＭｃＬｅｏｄ，Ｅｄｓ．），（ＥｌｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓＢ．Ｖ．）２，（１９８３），ｐ３７；シー．エル．ベビンスら（Ｃ．Ｌ．Ｂｅｖｉｎｓｅｔａｌ．）；Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９；（１９９０）；ｐ３９５）。最初に、これらペプチドのいくつかがホ乳動物のホルモン及び神経伝達物質と非常に似ているまたは同一でさえあるということが見出された（ブイ．エルスパーマーら（Ｖ．Ｅｒｓｐａｍｅｒｅｔａｌ．），ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１，（１９８０），ｐ３９１）。従って、カエルの皮膚及び皮膚分泌物は、有利な薬理学的または抗生物質の性質を有するペプチドの供給源となるように保たれる。特に、アフリカ原産のカエルであるアフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）の皮膚は、種々のペプチドを大きな濃度で含有する。アフリカツメガエルの腺及び皮膚から分泌される物質中に見出されるこれらペプチドにより行われるであろう生物学的役割は、一部しか知られていない。一方では、分泌物は、分泌される物質が捕食者にとって有毒であるように見えるので保護的機能を有するかもしれない。もう一方で、分泌される物質は、バクテリア及び菌の成長を制限し、カエルの湿った皮膚上で抗生物質としてまたは傷が癒着する間闘争感染（ｃｏｍｂａｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）としてふるまうかもしれないペプチドを含有する。これら抗生物質ペプチドは、通常２１〜２６のアミノ酸を含有し、塩基性でありチロシンがない。異なる抗生物質ペプチドのアミノ酸配列の同一性は、しばしば非常に限られている。対照的に、これらペプチドは、共通してそれらの両親媒性のα −ヘリックス構造を有する。約２０アミノ酸のシグナル配列に関して、アミノ酸配列の同一性は、わずか５５％である。しかし、保存されたセグメントが、異なる抗生物質ペプチドのシグナル配列と共通であることがわかっている。さらに、それらは普通の成熟化酵素の反応部位と考えられているＮ末端Ａｒｇ−Ｘａａ −Ｖａｌ−Ａｒｇ配列をすべて共にする。アフリカツメガエルについて単離され、特定されたペプチドの他の例としては、コレストキニン／ガストリンペプチドファミリーの一部であるセルレイン（ｃａｅｒｕｌｅｉｎ）（アナスタシら（Ａｎａｓｔａｓｉｅｔａｌ．），Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８，（１９７０），ｐ２２１）；スパスモリシン（ｓｐａｓｍｏｌｙｓｉｎ）Ｉ及びII（ダブリュ．ホフマン（Ｗ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３（１６），（１９８８），ｐ７６８６）；甲状腺刺激ホルモン放出ペプチド（ケー．リヒターら（Ｋ．Ｒｉｃｈｔｅｒｅｔａｌ．），ＥＭＢＯＪ．３（３），（１９８４），ｐ６１７）及びキセノプシン（ケー．アラキら（Ｋ．Ａｒａｋｉｅｔａｌ．），Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｕｌｌ．２１（１２），（１９７３），ｐ２８０１）を挙げてもよい。これらペプチドの大部分は、特にホ乳類由来の類似のペプチドを含有するペプチドファミリーの一部である。ボンベシン及びカシニンは、例えば、ホ乳類においてガストリン放出ペプチド及びサブスタンスＫ（ｓｕｂｓｔａｎｃｅＫ）を各々同定するための参照として用いられてきた（シー．エル．ベヴィンス（Ｃ．Ｌ．Ｂｅｖｉｎｓｅｔａｌ），上記参照）。実際には、カエルの皮膚から分泌された物質は、大量のペプチドを含有しているが、ホ乳類において類似のペプチドは、たいてい少量しか存在しない。従って、カエルのペプチドは、有用なホ乳類のペプチドの同定の助けとなる。本発明は、キセノキシンと命名されており、貴重な薬学的性質、特に、神経毒性活性を示さないが貫膜イオンチャンネルの機能に影響する性質を有するペプチドの新しいファミリーに関する。さらに、これらペプチドは、アクチビン（ａｃｔｉｖｉｎ）の影響を破壊する有利な性質を有するだろうと考えられている。さらに詳細には、本発明は：ａ．少なくとも８のシステイン（Ｃｙｓ）を含有し、該システインはＣｙｓ¹とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷とＣｙｓ⁸ の組合せに従って４つのジスルフィド架橋を通して結合している；ｂ．Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に０〜３のアミノ酸、Ｃｙｓ¹とＣｙｓ²の間に９〜１４のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に３〜７のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１１〜１８のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜６のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に７〜１５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷の間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に３〜５のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０のアミノ酸を含有する；及びｃ．整合のあと、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下に同定されるアミノ酸配列の少なくとも４０％のアミノ酸と同一性を示すアミノ酸配列、またはこの配列から得られる断片（fragment）を含有することを特徴とするキセノキシンに関する。キセノキシンという用語は、記載された特徴を示す、小さな塩基性タンパクを示す。本発明の枠組みにおいては、システイン残基に対する指数として現れる数は、Ｎ−からＣ−末端方向における前記キセノキシン中の他のシステインとの相対的な位置を示している。従って、Ｃｙｓ¹は、本発明に記載のキセノキシン中のＮ−末端側上に現れる第一のシステインを示す。本発明は、中間のペプチドにも関し、該ペプチドは、折りたたみ構造をとっていないが、Ｃｙｓ¹とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷ とＣｙｓ⁸の組合せに従って４つのジスルフィド架橋を通して結合できる少なくとも８のシステインを含有する。従って、本発明は：ａ．少なくとも８のシステインを含有し、該システインは、ペプチドが折りたたまれたコンフォメーションを採用するときＣｙｓ¹とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の組合せに従って４つのジスルフィド架橋を通して結合している；ｂ．Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に０〜３のアミノ酸、Ｃｙｓ¹とＣｙｓ²の間に９〜１４のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に３〜７のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１１〜１８のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴ とＣｙｓ⁵の間に１〜６のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に７〜１５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷の間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に３〜５のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０のアミノ酸を含有する；及びｃ．整合のあと、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下に特定されるアミノ酸配列の少なくとも４０％のアミノ酸と同一性を示す、アミノ酸配列またはこの配列から得られる断片を含むことを特徴とする塩基性のペプチドに関する。本発明の好ましいペプチドは、Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に二つのアミノ酸、Ｃｙｓ¹とＣｙｓ²の間に１０〜１３のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に４〜６のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１２〜１７のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に８〜１４のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷の間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に４のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に２のアミノ酸を含有する。本発明の好ましい他のペプチドは、整合のあと、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下に同定されるアミノ酸配列と少なくとも５０％、特に好ましくは、少なくとも６０％及び有利には少なくとも７０％の同一性を示す。本発明に記載の特に好ましいペプチドは：ａ．少なくとも８システイン（Ｃｙｓ）を含有し、該システインはＣｙｓ¹ とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の組合せに従って４つのジスルフィド架橋を通して結合している；ｂ．Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に０〜３のアミノ酸、Ｃｙｓ¹とＣｙｓ²の間に１３のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に６のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１２のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に１４のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷の間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に４のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０のアミノ酸；及びｃ．整合のあと、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下に同定されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を示すアミノ酸配列を有することを特徴とするキセノキシンである。本発明に記載のペプチドは、有利には、４２〜８６アミノ酸、好ましくは５１〜７５アミノ酸、特に好ましくは６２〜７５アミノ酸を含有する。本発明は、６６のアミノ酸のペプチドにも関し、該ペプチドは整合のあと、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下に同定されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％の同一性を示す。特に好ましいペプチドの例として、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下に同定されるキセノキシン−１、並びに番号ＳＥＱＩＤＮＯ：４の下に同定されるキセノキシン−２及び番号ＳＥＱＩＤＮＯ：５の下に同定されるキセノキシン−３が挙げられる。アミノ酸の同一性の程度を決定するために、システインは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下で示されるようなアミノ酸配列のシステインと同一の位置に存在するように、及び整合を最大限にするために挿入または欠失の最小の数が導入される方法で整列される。システインを含む、同一の位置に存在する同一のアミノ酸は、次いで同定される。アミノ酸の同一性は、パーセンテージで表され、以下の式（１）に従って計算される：（式中ｎは、同一のアミノ酸の数、６６は、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下で示される配列のアミノ酸の数、ｐは、導入された挿入または欠失の数）。本発明に記載のペプチドは、薬学的に許容できる非毒性の酸との付加塩の形態をとることができる。薬学的に許容できる酸の例としては、塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸及びスルホン酸及び例えば酢酸、乳酸、パルミチン酸、ステアリン酸、マレイン酸、酒石酸、アスコルビン酸、クエン酸等のカルボン酸のような有機酸が挙げられる。本発明に記載のペプチドは、遊離のカルボキシル基を含有しているので塩基との付加塩の形態でもよい。薬学的に許容できる塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウムまたはマグネシウム塩及び第４級アンモニウム誘導体が挙げられる。本発明のペプチドは、遊離のカルボキシル及びアミン基の両方を含有するので、内部塩または付加塩及び内部塩の結合した形態を取り得る。本発明に記載のキセノキシンファミリーは、両生類またはホ乳類の異なった種由来のペプチドを含有する。両生類の例としては、カエル上目（ｓｕ-ｐｅｒｏｒｄｅｒＳａｌｉｅｎｔａ）、カエル、ヒキガエル、アオガエル等のような無尾類（ａｎｕｒａｎｓ）；または、有尾目（ｏｒｄｅｒＣａｕｄａｔａ）、サンショウウオ、イモリ等のような有尾類（ｕｒｏｄｅｌｅｓ）；または代わりとして、裸ヘビ類（ｏｒｄｅｒＧｙｍｎｏｐｈｉｏｎａ）、ウナギ、ウツボ等のような無足類（ａｐｏｄａｌｓ）に属する種を示してもよい。ホ乳類の、特にマウス、ブタ、ヒト由来のキセノキシンを得ることも可能である。本発明に記載のキセノキシンは、特に貫膜イオンチャンネルの機能との相互作用及びアクチビンとの相互作用に基づくホ乳動物に共通の薬学的性質を有する。異なるキセノキシンのアミノ酸の同一性は、異種間または対立遺伝子のダイバージェンスにより変化する。変化は、しばしばペプチドの骨格構造を保存させ得る同類置換を有する。従って、好ましくは、本発明に記載のキセノキシンにおいて、相同位置における置換は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３の下で示される配列と比べて、その疎水性、荷電または空間的性質に関して同等の機能性を有するアミノ酸によって起こる。例えば、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン及びバリンの間の疎水性アミノ酸の群から；アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、セリン、スレオニン及びチロシンの非荷電極性アミノ酸の群から；アルギニン、ヒスチジン及びリシンの正に帯電したアミノ酸から；アスパラギン酸及びグルタミン酸の負に帯電したアミノ酸から；及びアラニン、グリシン及びセリンの同等な空間のアミノ酸の群から選択が行われる。ペプチドのシステイン間のジスルフィド架橋形成のような翻訳後修飾は、キセノキシンの折りたたみ構造を安定化させ、その結果それらの薬理学的活性を用いることができる。異なるスルフィド架橋は、ランダム型では形成しない。アミノ酸配列がコイルできるとき、連結するジスルフィド基は、折りたたまれたペプチドにおいて二つの隣り合うシステインに由来するものである。この理由のために、ペプチド骨格の構造は、ジスルフィド架橋の位置によって記載されてもよい。このために、折りたたまれたペプチドにおいてシステインの間に形成される結合は記載され、ペプチドの一次配列における異なった連続するシステイン間のアミノ酸の数の指示が与えられる。ゆえに、特にペプチド骨格に関して及びアミノ酸の同一性に関して同じファミリーのペプチド間に二つの側面の構造の類似性が存在する。従って、同じファミリーの二つのペプチドを比べると、顕著な不同（ｄｉｓｐａｒｉｔｙ）をもつアミノ酸配列を有すること、アミノ酸の同一性でさえ４０％であることが見出されるかもしれない。対照的に、ジスルフィド架橋の形成に関与するシステインの位置の同一性は、著しい。本発明に記載のキセノキシンは、完全な形態または断片の形態において、それらの活性を促進する為に、または例えば遅効性（ｒｅｔａｒｄ）又は保護形態のような有利な治療上の性質をそれに授けるよう意図された、さらに複雑な化学的または物理化学的構造に誘導されてもよい。本発明は、例えば非グリコシル化された非修飾のキセノキシンにも関する。しかし、保護の範囲は、例えばグリコシル化されたまたは脱グリコシル化された生成物若しくはポリエチレングリコールで修飾された生成物のような修飾されたキセノキシンも含む。本発明に記載のキセノキシンは、以下の方法に従って単離されてもよい。ａ．カエルの皮膚から分泌された物質は、硫酸アンモニウムまたは同等の沈殿剤を用いた沈殿により画分に分けられ、ｂ．硫酸アンモニウムにより３０％から７０％の間の飽和、好ましくは３０％から６０％の間、または同等の条件下において形成する沈殿は、ゲル浸透クロマトグラフィーに供され、そしてｃ．遅く溶出するペプチド画分が収集される。そのように望むのであれば、それにより得られたキセノキシンの混合物は、特にカチオン交換ＨＰＬＣ、次いで逆相ＨＰＬＣによって精製されてもよい。本発明の好ましい特徴によると、カエルの皮膚から分泌される物質は、アフリカツメガエル由来のものである。本発明に記載の方法によると、ペプチド画分は、硫酸アンモニウムによって有利に沈殿される。しかしながら、ポリエチレングリコール、エタノールまたは硫酸ナトリウムのような他の沈殿剤を使用してもよい。当業者は、一方ではタンパクを含まず、もう一方では分子量１０ｋＤａ、好ましくは８ｋＤａ以下のペプチドの無い沈殿を得るために必要とされる沈殿剤の飽和範囲を選択する。通常、ゲル浸透クロマトグラフィーは、分子がそれらの分子サイズによって分離されることを可能にする。本発明に記載の方法において、このクロマトグラフィーは、問題のペプチドから全ての大きな分子サイズの分子を除去し、カラムから遅く溶出する画分のみを収集することを可能にする。結果として、１０ｋＤａより大きい分画範囲を有する浸透ゲルの全てのタイプが用いられてもよい。市場においては、このようなタイプのゲルは、例えばセファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ２００（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）（ｐｈａｒｍａｃｉａ）、フラクトゲル（Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ）（Ｍｅｒｃｋ）またはトーヨーパール（Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）（ＴｏｓｏＨａａｓ）という名称で入手可能である。本発明に記載のペプチドを当業者に公知の合成方法によって化学的に合成することもできる。参照として、イー．ベイヤー（Ｅ．Ｂａｙｅｒ），Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０，（１９９１），Ｐ１１３が挙げられるであろう。本発明は、それらが由来する天然の細胞系以外の細胞系におけるキセノキシンの発現にも関する。このために、本発明は、前記キセノキシンをコードする単離されたＤＮＡ配列、並びに所望の細胞中でそれらの発現を提供する前記配列の発現のためのカセットにも関する。単離されたＤＮＡフラグメントは、それが由来する生物体の発現をコントロールする天然の領域のセットとはもはや関係しないＤＮＡを意味すると理解され、すなわち、以下に述べる実施例の場合は、アフリカツメガエルに由来する。本発明に記載のペプチドをコードする配列を含む単離されたＤＮＡ配列中、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の番号の下の配列同定表に記録され、より詳しくは、位置３９〜２９０のＳＥＱＩＤＮＯ：１の部分及び位置９３〜２９０のＳＥＱＩＤＮＯ：１の部分のＤＮＡについて特別に記載される。本発明は、本発明に記載のペプチドをコードする前記ＤＮＡ配列の発現のためのカセットに関する。そのような発現カセットは、特に、分離されたＤＮＡフラグメントを含有し、該フラグメントは、問題となっている宿主細胞中で、転写及び翻訳をさせる要素の制御下におかれる。これら制御要素は、本質的に翻訳開始及び終末コドンと共に、好適な転写プロモーターである。いくつかの場合、転写ターミネーター及びシグナルペプチドまたはプレ配列、任意にプロ配列が続く、を加えることも有利である。最も特別には真核細胞、特にサッカロマイセスセレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のような特に酵母中で機能的な、フォルミアテラノヴァエ（ＰｈｏｒｍｉａＴｅｒｒａｎｏｖａｅ）デフェンシンＡ（ｄｅｆｅｎｓｉｎＡ）のプロ配列が好ましい。本発明は、本発明に記載のＤＮＡフラグメントを含有する発現カセットによって形質転換された細胞にも関する。該発現カセットは、細胞のゲノムに組み込まれるか、若しくは例えばプラスミドまたはウィルスベクターのような適当な発現ベクターによって運ばれる。本発明は、特にベクターがウィルスまたは合成ベクター（例えばリポソームのような脂質混合物）の場合、ヒトまたは動物中にｉｎｓｉｔｕでキセノキシンを生成するために投与され得る発現ベクターの使用にも関する。最後に、本発明は、本発明に記載のペプチドの製造方法に関し、該方法は、本発明に記載の形質転換された細胞を培養すること、及び前記ペプチドを培養物より収集することにある。外来の遺伝子を原核または真核宿主細胞にクローニングさせること及びそれのそこでの発現を許容する技術は、当業者に公知である。該技術は、他のベクター及び他の宿主細胞が用いられてもよいという理解の下、以下の実施例において説明されるであろう。当業者は、全く明らかに、そこでＤＮＡフラグメントを発現するよう望まれる宿主に従って、及び発現カセットが挿入されるべきベクターに従って適当な転写プロモーターを選ぶことができる。本発明に記載のペプチドの好ましい製造方法によると、単離されたＤＮＡフラグメントは、合成されたペプチドの培養培地中への分泌を許容し、ジスルフィド架橋の形成を生じることを可能にする宿主細胞中で発現される。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのような原核生物の、サッカロマイセスセルビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のような下等真核生物若しくはヒトまたは動物または植物のような高等真核細胞生物の宿主細胞が挙げられる。本発明に記載のペプチドを宿主細胞の分泌系に向けるために、ペプチドの前駆体をコードする発現カセットで準備がなされる。該前駆体は、本質的に成熟形態の本発明に記載のペプチド、及びそのＮＨ₂−末端へのペプチド結合を介して結合したシグナルペプチドを含有する。シグナルペプチドは、通常主に疎水性で、分泌を促進する機能を有するアミノ酸配列を含む。輸送の工程中、該シグナルペプチドは、酵素、シグナルペプチダーゼにより開裂されるであろう。培養培地中に、または宿主ペリプラスム中に分泌される分子は、従って成熟ペプチドである。好ましく使用されるシグナルペプチドは、効果的に分泌される生成物をコードすると知られている遺伝子に由来する。例えば、ＳＵＣ２ペリプラズムインベルターゼ（アール．エー．スミスら（Ｒ．Ａ．Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．），Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９，（１９８５），ｐ１２１９；シー．エヌ．チャンら（Ｃ．Ｎ．Ｃｈａｎｇｅｔａｌ．），Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６，（１９８６），ｐ１８１２）のシグナルペプチド、並びにクルイベロマイセスラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ）の“キラー（ｋｉｌｌｅｒ）”トキシンシグナルペプチド（シー．バルダジら（Ｃ．Ｂａｌｄａｚｉｅｔａｌ．），ＥＭＢＯＪ．６，（１９８７），ｐ２２９）、またはサッカロマイセスセレビシアエ（エム．トクナガら（Ｍ．Ｔｏｋｕｎａｇａｅｔａｌ．），ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．１６，（１９８８），ｐ -７４９９）、の“キラー”毒素シグナルペプチドが挙げられる。しかし、基準として、サッカロマイセスセレビシアエ（ティー．アキシュテッターら（Ｔ．Ａｃｈｓｔｅｔｔｅｒｅｔａｌ．），Ｇｅｎｅ１１０，（１９９２）ｐ２５）由来で、以下の実施例で用いられるＢＧＬ２遺伝子のシグナルペプチドは、極めて良い結果を得ることが可能である。さらに、キセノキシンの天然のシグナルペプチドが使用されてもよい。いくつかの場合、得られるペプチドは、正しい構造を示さないかもしれず；例えばｐＨ条件及び尿素を用いる、溶解及び再生を必然的に伴う化学的方法によるその再配列を行うことが次に必要となるかもしれない。本発明は、公知の方法により得ることができる抗キセノキシンモノクローナルまたはポリクローナル抗体、並びに治療及びヒトまたは動物のキセノキシンを同定または定量する診断分野の両方におけるそれらの応用にも関する。用いる技術の選択は、幅広く、当業者の能力の範囲内である。ＥＬＩＳＡ、標識または代わりとして蛍光技術法が特に挙げられる。従って本発明は、キセノキシンまたは対応する抗体を用いる診断キットにも関する。本発明に記載のペプチドは、神経毒性活性を有さず、貫膜イオンチャンネル及びアクチビンの機能に影響できるそれらの性質ゆえに、ホ乳類において、特にヒトにおいて治療的な応用を有する。従って、本発明は： − 活性剤として少なくとも一つの本発明に記載のペプチドを含有する薬学的組成物； − 本発明に記載のペプチドの治療的使用；に関する。本発明の薬学的組成物は、特に、例えば、高血圧又は低血圧による心臓の不整脈(cardiac arrhythmias)、膵嚢胞性繊維炎(cystic fibrosis)の名前でより知られている膵臓の膵臓線維症(mucoviscidosis)のような遺伝子起源の線維嚢胞病(f ibrocystic diseases)、妊娠中のヒト絨毛性ゴナドトロピンの平衡異常に関連する障害、ホルモン類ＦＳＨ、ＳＴＨ及びＡＣＴＨ（英語でそれぞれ、濾胞刺激ホルモン（follicle stimulating hormone）、成長ホルモン（somatotropic hormo ne）及び副腎皮質ホルモン（adrenocorticotropic hormone））の分泌における平衡異常による障害等の疾患の予防又は治癒的な処置に関し、本発明の薬学的組成物は、赤血球生成を調節することもできる。本発明のペプチドを含む薬学的組成物は、その最終的な目的に最も適した経路、特に、経口、非経口（parenteral）又は直腸投与によって投与しても良い。経口投与に使用できる薬学的組成物は、例えば、（被覆又はその他の）錠剤、丸剤、糖衣錠、ゼラチンカプセル、水剤、シロップ剤等の形態で固体又は液体とすることができる。同様に、非経口投与において使用できる組成物は、このタイプの投与において知られている薬学的投与形態である、とりわけ筋肉注射、血管内、腹膜内又は皮下注射又は皮膚の或いは経粘膜（transmucosal）適用に適した、例えば、スプレー、軟膏などによる、例えば、水性又は油性溶液、懸濁液、エマルジョンなどである。直腸投与においては、本発明の化合物を含む組成物は、一般に、坐剤の形態をとる。本発明の化合物は、また、過度に速く該ペプチドが分解するのを防ぐために、放出を調節された形態（controlled-release form）及び採用した投与経路に従って適当な保護形態で製造されてもよい。注射可能な溶液、注射可能な懸濁液、錠剤、滴剤、坐剤等の薬学的投与形態は、薬剤師によって一般に使用されている方法に従って調製される。該薬学的投与形態は、活性のあるペプチドを徐々に送達することができる組成物も包含する。本発明の化合物は、薬学的に許容される、毒性のない固体又は液体の賦形剤、及び適当であれば、分散剤、崩壊剤、安定化剤等を混合する。例えば、甘味剤、着色剤等をそこに加えても良い。薬学的組成物中における活性物質の割合は、患者及び投与方法に依存して、特に投与の頻度に従って、非常に広い範囲で変更することができる。以下の実施例は、本発明を限定することなく本発明を例示するものであり、図１から４はそこに引用されるものである。図１は、２種の異なった精製段階でのクマシーブルー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。（１）セファクリル（Sephacryl）Ｓ−３００でのゲル浸透クロマトグラフィー後集められたペプチド両分、（２）分子量マーカー、下から上にかけてリゾチーム（14300）、トリプシンインヒビター（21500）、炭酸脱水素酵素（30000）、オボアルブミン（46000）、ウシ血清アルブミン（69000）、ホスホリラーゼｂ（92500）及びミオシン（200000）、（３）以下の実施例１に記載の陽イオン交換及び逆相ＨＰＬＣで精製されたキセノキシン−１（xenoxin-1）。図２は、以下に記載の実施例１の条件下、硫酸アンモニウム沈殿とそれに続くゲル浸透クロマトグラフィーによって得られた、アフリカツメガエル（Xenopus laevis）の皮膚分泌物由来のペプチド画分の陽イオン交換ＨＰＬＣ後に得られる溶出グラフを示す。キセノキシン−１、キセノキシン−３及びキセノキシン−２を含む画分を連続した矢印で示す。図３Ａは、（ａ）キセノキシン−１と、（ｂ）一つ目の（one-eyed）コブラであるナジャナジャカオウティア（Naja naja kaouthia）、ナジャナジャシアメンシス（Naja naja siamensis）由来の細胞毒素（エス．イノウエら（Ｓ．Ｉｎｏｕｅｅｔａｌ．）、ＦＥＢＳＬｅｔｔ．218(1987)、17頁）及び（ｃ）黄色の唇の海のコブラ（yellow-lipped sea krait）であるラティカウダコルブリナ（Laticauda colubrina）の短い神経毒素ｄ（エヌ．タミヤら(N ．Tamiya et al.)、トキシコン(Toxicon)(Suppl．3)、(1983)、445頁）との整合（alignment）を示す。空所（−）を導入し、ジスルフィド架橋を示す。図３Ｂは、キセノキシン類、細胞毒素類及び短い神経毒素類、それぞれの３種のペプチドファミリーにおける一次配列（primary sequ ences）中の連続したシステイン間のアミノ酸の数を示す。図４は、キセノキシン−１とヒトアクチビン（activin）受容体の１１６残基のＮ’−末端結合部位の２７アミノ酸との整合を示す。実施例１：キセノキシン類の精製及び特徴 1.1 キセノキシン類の単離及び精製アフリカツメガエル（Xenopus laevis）（ヘルペトロジックインスティテュート(Herpetologic Institute)、デローバー(DeRover)、オランダ）を、通気された飼槽中でアフリカタケネズミ（ground pig）の肝臓と共に飼育する。３週間ごとに、該動物を緩和な電気ショック（１５Ｖ）にかけ、皮膚分泌物を、シー．モレイ（C．Mollay）ら、Eur．J．Biochem．，160，(1986)，31頁）に記載の方法に従って、０．９％ＮａＣｌ溶液中に集める。このように抽出された粘液を、等量のｎ−ブタノールで２回連続して抽出にかける。不溶性の両分を15,000rp m（ソルヴァル(Sorvall) RC-5B、SS34ローター）、１５分間の遠心分離によって除去する。その後、硫酸アンモニウムを上清に加え、３０％〜６０％飽和で沈殿した物質を回収する。この沈殿物を５０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ5.0に溶解、透析後、同バッファーで平衡化されたセファクリル（Sephacryl ）Ｓ−３００カラム（2.7cm × 120cm ファルマシア(Pharmacia)）を用いるゲル浸透クロマトグラフィーにかける。ペプチド画分を280nmで検出し、ブロードのピークの形で遅く溶出する。この遅れる画分のみ集め、凍結乾燥する。１０ｋＤａより大きな分子量の分子が排除されていることを証明するために、クマシーブルー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥを行う（図１参照）。凍結乾燥したペプチド画分を、５％アセトニトリルを含む２０ｍＭ酢酸アンモニウムｐＨ４．６５０ｍｌ中に溶解させ、15,000rpm（ソルヴァル RC-5B、SS 34ローター）、１５分間遠心分離する。上清を０．２２μｍミレックス（Millex ）GVフィルター（filter）（ミリポア(Millipore)）を通すことによって濾過し、５ｍｌのアリコット（aliquots）として−８０℃で凍結する。その溶液の５ｍｌアリコットを、９０ｍｌのＣＥ１バッファー（リン酸を用いてｐＨ3.0に調整した、２５％アセトニトリルを含む５ｍＭ１塩基性のリン酸カリウム）で希釈する。該溶液の伝導率を、ＣＥ１バッファーを用いて８ｍＳに調整し、必要ならば、そのｐＨをリン酸を用いて３．０に調整する。それによって得られる溶液を、３種のアリコットに分割し、続いて、以下のような条件で、２１５ｎｍでのＵＶ検出による陽イオン交換ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）による分離にかける： −アリコットを、ＨＰＬＣカラム（ポリ−スルホエチルアスパルタミド（po ly-sulfoethyl aspartamide）ＳＣＸ；9.4mm × 200mm；ザネクストグループ(The Next Group)）上に、流速1.6ｍｌ／分でのせ、； −カラムをＣＥ１バッファーで、２１５ｎｍでのベースラインが安定化するまで洗浄し、 −ＣＥ２バッファー（６００ｍＭ塩化カリウムを含むＣＥ１バッファー）の０〜１００％グラジエント（gradient）を４０分間かけて適用し、吸着された物質を溶出し、１．６ｍｌの画分に手動で集め； −カラムを１０分間ＣＥ２バッファーで洗浄し； −１００％ＣＥ２バッファー〜１００％ＣＥ１バッファーのグラジエントを５分間かけて適用し；及び −カラムを１５分間ＣＥ１バッファーで洗浄する。それぞれ、３３．３〜３５．５分後の３６２と３９２ｍＭ塩化カリウムの間で溶出されるキセノキシン−１、キセノキシン−３（３９８〜４１５ｍＭ、３５．９〜３７．１分）及びキセノキシン−２（４１５〜４３５ｍＭ、３７．１〜３８．６分）が、得られ、それぞれ、図２中のグラフ上連続した矢印で示す。その後、２０５ｎｍのＵＶ検出での逆相ＨＰＬＣ（ヒューレットパッカード（Hewlett Packard）１０９０Ａ）での分離段階を行う。この結果、陽イオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフィーから出てくる各々の画分を、ＲＰ１バッファー（０．１０％（v/v）トリフルオロ酢酸（TFA）を含むミリポア反応水調製システムによって脱イオン化された水（ミリＱ水（Milli Q water））で、流速１．５ｍｌ／分で平衡化されたヴイダック（Vydac）Ｃ₁₈ＨＰＬＣカラム上（10mm × 2 50mm；ヴイダックセパレーショングループ（Vydac Separation Group））に直接のせる。それぞれ、のせられた画分において、キセノキシン類を以下の手法によってカラムから溶出する。 −カラムを再安定化させるために１００％ＲＰ１バッファーを５分間； −１００％ＲＰ１バッファー〜７１．４％ＲＰ２バッファー（ミリＱ水／アセトニトリル／ＴＦＡが30:70:0.10 (v/v/v)）グラジエントを１００分間かけて適用する； −カラムを７１．４％ＲＰ２バッファーで１０分間洗浄する； −７１．４％ＲＰ２バッファー〜１００％ＲＰ１バッファーグラジエントを５分間かけて適用し、及び −カラムを１００％ＲＰ１バッファーで１５分間洗浄する。画分を手動で集め、脱塩し精製されたキセノキシン類をスピードヴァックコンセントレーター（Speed Vac Concentrator）（サヴァント(Savant)）を用いて濃縮し、−２０℃で貯蔵する。それによって、１５０匹のアフリカツメガエルからの皮膚分泌物１等量（equi valent）から、８００μｇのキセノキシン−１、６５０μｇのキセノキシン−２及び２００μｇのキセノキシン−３を得る。１．２キセノキシン類の特徴（characterization）１．２．１還元及びアルキル化実施例１．１に従って精製し、濃縮したキセノキシン類５０μｇを、アルキル化バッファー（２５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．５；６Ｍ塩化グアニジニウム（guanidinium chloride）；１ｍＭＥＤＴＡ）中に、２５０μｇ／ｍｌの濃度になるように溶解し、ボルテックスミキサー（vortex mixer ）でホモジナイズし、５分間超音波処理を行う。その後、５μｌの２０：８０（ v/v）のβ−メルカプトエタノールのミリＱ水液を加え、その混合物を、アルゴン下に置き３７℃で放置する。２時間後、１０μｌの４−ビニルピリジン（４ＶＰ；ヤンセン(Janssen)）を加え、該混合物を再度アルゴン下に置き、室温に放置する。２時間後、反応混合物を凍結し、消化又は脱塩に使用するまで−２０℃ に保存する。１．２．２クロストリパイン（ＣＬ）、トリプシン（Ｔ）又は臭化シアン（ＣＮＢｒ）消化クロストリパイン（シグマ(Sigma)）を、ＣＬバッファー（１００ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ７．５；１ｍＭ二塩化カルシウム、２．５ｍＭＤＴＴ）中、１ｍｇ／ｍｌの濃度で、３７℃で、２時間活性化する。実施例１．１に従って製造された（実施例１．２．１に従って４ＶＰでのアルキル化又はアルキル化されていない）キセノキシン１２μｇを、ＣＬバッファー中、１５０μｇ／ｍｌの濃度及びプロテアーゼ／基質重量比が１：１０で、３７℃、１６時間インキュベートする。その後８μｌの氷酢酸及び７０μｌのＲＰ１バッファー（上述）を添加する。それによって得られる溶液を用いて、以下の実施例１．２．３に記載するような逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによってペプチドマップを決定する。トリプシン（１ｍＭＨＣｌ中１ｍｇ／ｍｌ）（ベーリンガー(Boehringer)）を、ＴＲバッファー（１００ｍＭＮ−エチルモルホリン−ＨＣｌｐＨ８．３、０．１ｍＭ二塩化カルシウム）にて１０倍に希釈する。実施例１．１に従って製造された（４ＶＰでのアルキル化又はアルキル化されていない）キセノキシン２５μｇを、ＴＲバッファー中２４０μｇ／ｍｌの濃度及びプロテアーゼ／基質重量比が１：５〜１：１００の間で、３７℃、１６時間インキュベートする。その後、２μｌの純粋なＴＦＡバッファー及び１００μｌのＲＰ１バッファーを加え、それによって得られる溶液を用いて、実施例１．２．３に記載するような逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによってペプチドマップを決定する。７０％蟻酸中ＣＮＢｒ（ピアス(Pierce)）を１％（重量／容量）含む溶液４０ μｌを、実施例１．１に従って製造された（４ＶＰでアルキル化又はアルキル化されていない）キセノキシン２５μｇに加える。３００μｌのミリＱ水を加えた後、反応を１６時間続行する。反応混合物をスピードヴァックコンセントレーターを用いて乾燥させる。２５０μｌのＲＰ１バッファーを添加する。それによって得られる溶液を用いて、実施例１．２．３に記載するような逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによってペプチドマップを決定する。１．２．３逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによるペプチドマップの決定ペプチドマッピングを、２０５ｎｍでのＵＶ検出にてＨＰＬＣ１０９０Ａユニット（unit）（ヒューレットパッカード）を用いて逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって行う。完全なキセノキシン分子、その蛋白質分解断片及び４ＶＰでアルキル化されたそれら相当物を、１０ｍＭＴＦＡを含む10:90(v/v)アセトニトリル／ミリＱ水で平衡化されたスーパースファー（Superspher）１００Ｃ₁₈ＨＰＬＣカラム（4m m × 125mm；メルク(Merck)）上に、流速１ｍｌ／分でのせる。その後ペプチドを以下のプロトコールに従って溶出する： −カラムを１０ｍＭＴＦＡを含む10:90(v/v)アセトニトリル／ミリＱ水で１５分間洗浄し；及び −１０ｍＭＴＦＡを含む50:50(v/v)アセトニトリル／ミリＱ水への直線グラジエントを４０分かけて適用する。溶出画分を手動で集め、スピードヴァックコンセントレーターを用いて濃縮する。観察された保持時間を、以下の表Ｉ、II及びIII中に記録する。１．２．４アミノ酸配列の決定実施例１．２．３に従って得られるペプチドを、８０％蟻酸溶液中で溶解させ、Ｎ−末端配列の決定を、ＨＰＬＣフェニルチオカルバミックアミノ酸(phenyl- thiocarbamic amino acid)分析器に結合したタイプ４７７Ａプロテインシークエンサー（アプライドバイオシステムズインコーポレーティッド(Applied Biosy stems Inc.)）を用いて、標準的な手法に従って行う。シークエンシングの結果を以下の表Ｉ、II及びIII中に示す。１．２．５質量分析質量分析測定を、ＶＣＢｉｏＴｅｃｈＢｉｏＱ型質量分析計（ブイシーバイオテックリミテッド（ＶＣＢｉｏｔｅｃｈＬｔｄ．））を用いたＥＳＭＳ（電界噴霧質量分析法（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ））により行う。用いたプロトコールは、当業者に知られ、例えば、エイ．バンドルセラーら（Ａ．ＶａｎＤｏｒｓｓｅｌａｅｒｅｔａｌ．），Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｖｉｒｏｎ，ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍ，１９，（１９９０），ｐ６９２に記録されている。計算上の分子量を、以下に示したＣ、Ｈ、Ｎ、ＯおよびＳ元素の原子量の値すなわち、Ｃ＝１２．０１１，Ｈ＝１．００７９，Ｎ＝１４．００６７，Ｏ＝１５．９９９４およびＳ＝３２．０６に基づいた平均値として得る。結果を下の表IVに示す。実施例２：キセノキシン類をコードする相補的ＤＮＡのクローニング以下の実施例において詳述していない核酸操作及び分子クローニングの一般的手法に関しての詳細は、マニアティスら（Ｍａｎｉａｔｉｓｅｔａｌ．）による研究（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））が参照されよう。２．１．オリゴヌクレオチドプライマーの合成ＡＢＩ３８０Ｂオリゴヌクレオチドシンセサイザー（アプライドバイオシステムズインコーポレーティッド（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．））を用いて、製造業者推奨の標準的な手順に従い以下のオリゴヌクレオチドを０．２μｍｏｌ合成する。縮重塩基を国際生化学連合（ＩＵＢ）の１文字表記法に従い表す；Ｉはイノシンに対応する。ＯＴＧ３２７８（５’−ＡＴＧＴＣＧＡＣＣＡＲＧＡＲＴＧＹＧＣＩＡＡＲＧＡＲＧＡ−３’）、すなわち引き続くサブクローニング（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）を容易にするために５’末端のＳａｌＩ制限部位の付加を伴ったＱ−Ｅ−Ｃ−Ａ −Ｋ−Ｅ−Ｄセンス鎖；およびＯＴＧ３２７９（５’−ＡＴＡＡＧＣＴＴＣＡＣＡＴＲＴＴＩＣＣＹＴＣＲＣＡＲＣＡ−３’）、すなわち引き続くサブクローニング（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）を容易にするために５’末端のＨｉｎｄII I部位の付加を伴ったＣ−Ｃ−Ｅ−Ｇ−Ｎ−Ｍ−Ｃアンチセンス鎖。脱保護後、オリゴヌクレオチドを、ｐＨ６．９，１００ｍＭ酢酸／トリエチルアミン存在下で２０％乃至３０％アセトニトリルグラジエントを用いμ−ボンダパックＣ₁₈（μ−ＢｏｄａｐａｋＣ₁₈）（３．５ｍｍ×３００ｍｍ；ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ））上で精製した。オリゴヌクレオチドを、当業者によく知られた標準的な条件に従い脱トリチル化し、２３０ｎｍ乃至３４０ｎｍの紫外線スペクトルにより定量する。２．２．遺伝子増幅アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）のメッセンジャーＲＮＡを、ケー．リヒターら（Ｋ．Ｒｉｃｈｔｅｒ，ｅｔａｌ），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１，（１９８６），ｐ３６７６中に記述されている方法に従い得た後、縮重プライマーにより開始される逆転写を行う。このようにして、増幅の際に鋳型となるｃＤＮＡを得る。ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）による遺伝子増幅の段階を、実施例２．１に従って合成したオリゴヌクレオチドであるＯＴＧ３２７８（センス鎖）及びＯＴＧ３２７９（アンチセンス鎖）を２５０ｎｇ、さらに１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ，ｐＨ８．３、１０ｍＭの塩化カリウム、１．６ｍＭの塩化マグネシウム、１ｍＭのＤＴＴ、各々２００μＭのデオキシリボヌクレオシドトリフォスフェート（ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰ）（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ））及び２．５ユニットのアンプリタク（ＡｍｐｌｉＴａｑ）ＤＮＡポリメラーゼ（パーキンエルマーシータス（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓ））を含む５０μｌ中０．５μｇのｃＤＮＡで実行する。１ユニットを、３０分のインキュベートの間に１０ｎｍｏｌのＤＮＡを合成できる酵素量とし、以下のプロトコールに従い３０増幅サイクルを行う：開始５サイクル： − ９３℃、１分間（最初のサイクルでは３分間）での変性； − ５０℃、２分間でのプライマーのハイブリッド形成； − ２０秒につき１℃の温度上昇を伴い、７２℃、３０秒間で行う重合；残り２５サイクル： − ９３℃、１分間での変性； − ６０℃、１分間でのハイブリッド形成；および − ７２℃、４５秒間での重合。２．３．解析５μｌアリコートのＰＣＲ生産物は、アガロースゲル（１％）上の電気泳動で約１２０塩基対の幅広いバンドを示す。２．４．ＰＣＲｃＤＮＡのクローニング残りのＤＮＡを、制限酵素ＨｉｎｄIII及びＳａｌＩ（ギブコ−ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ））を用いての消化に供し、低融解温度アガロース（シグマアガロースタイプII（Ｓｉｇｍａａｇａｒｏｓｅｔｙｐｅ II））を用いてそのＤＮＡ断片を、その大きさに従い分離する。こうして分離されたＤＮＡを精製し、標準的な方法に従いＭ１３バクテリオファージでクローン化する。こうしてクローン化されたＰＣＲｃＤＮＡ断片を、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）皮膚のｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング用プローブとして用いる。２．５．アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）皮膚のｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング ³²Ｐでラベルされたプローブを、実施例２．４．に従い調製されたクローンから、ＰＣＲｃＤＮＡ断片ＰＣＲ１を用いて調製する。ＰＣＲ１挿入断片の配列は、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：２８中に記載の配列に示されている。ＰＣＲ１を、ランダムプライマー法（ｒａｎｄｏｍｐｒｉｍｅｒｍｅｔｈｏｄ）（ベーリンガーマンハイム（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ））に従いα［³²Ｐ］ｄＡＴＰ（アメルシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））でラベルする。スクリーニングのために、クヒラーら（Ｋｕｃｈｌｅｒｅｔａｌ．），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，（１９９０），ｐ１１７３１，に従い発現ベクターλｇｔ１１中に構築されたアフリカツメガエル皮膚のｃＤＮＡライブラリーを用いる。約２×１０⁴プラークのファージを含んだディッシュを調製し、ＢＡ８５ニトロセルロースフィルター（シュライハー＆シール（Ｓｃｈｌｅその後、ブロットされたフィルターを、５５℃で、２×ＳＥＴ（塩化ナトリウム−ＥＤＴＡ−トリス−ＨＣｌ）、１０×デンハート溶液（Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ ｓｓｏｌｕｔｉｏｎ）及び０．１％ＳＤＳ中の³²ＰでラベルされたＰＣＲ１プローブでハイブリダイズする。陽性のクローンを、続く二つのスクリーニングに用いる。２．６．ｃＤＮＡクローンの配列決定陽性ファージのＤＮＡを単離し、ｃＤＮＡ挿入断片を、標準的な方法に従いＭ１３ＴＧ１３０ベクターにサブクローニングする（キエニィら（Ｋｉｅｎｙｅｔａｌ．），Ｇｅｎｅ２６，（１９８３），ｐ９１）。これらのｃＤＮＡ挿入断片の配列決定を、サンガーらの酵素的方法（Ｓａｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７４，（１９７７），ｐ５４６３）に従いシークエナーゼキット（ＳｅｑｕｅｎａｓｅＫｉｔ）（ユーエスバイオケミカルコーポレーション（ＵＳＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｏｒｐ．））を用いて行う。４６２塩基対からなるｃＤＮＡ断片を有する一つのクローンのヌクレオチド配列を決定した。この配列は、番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載された配列中に示され、８４個のアミノ酸を含むプレーキセノキシン−１（ｐｒｅ−ｘｅｎｏｘｉｎ−１）をコードするオープンリーディングフレーム（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ）を含む。ｃＤＮＡ配列から論理的に推理されるプレ−キセノキシン−１ペプチドは、ＡＴＧコドン（ｐ３９−４１）でコード化された開始メチオニンから始まり、成熟キセノキシン−１配列の前にある１８アミノ酸のシグナルペプチドが続く。推測される成熟キセノキシン−１のアミノ酸配列は、実施例１．１に従い精製されるキセノキシン−１のエドマン分解により決定され番号ＳＥＱＩＤＮＯ：３中で記載される配列に示した完全なアミノ酸配列と正確に一致する。ポリアデニル化シグナルＡＡＴＡＡＡが、３’末端上流の１２塩基対に生じる。２．７．ペプチド配列の解析キセノキシンの配列を、ＤＮＡスターソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲｓｏｆｔｗａｒｅ）のプロスキャン，バージョン６．０．（ＰＲＯＳＣＡＮ，Ｖｅｒ．６．０．）（ＤＮＡスターインコーポレーテッド（ＤＮＡＳＴＡＲＩｎｃ））を用い、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ／ＰＩＲ／ＧＢＴＲＡＮ公開の２４データバンクと比較した。この調査のみが、ペプチド骨格に関して構造的な類似性を有するペプチドファミリーの同定が可能であるが、アミノ酸の同定に関しては可能ではない。図３Ａに図示するように、細胞毒素（ｃｙｔｏｔｏｘｉｎ）ファミリーの代表的なものとの同一性はわずか２５．９％であり、短い神経毒素（ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ）との同一性はわずか２１．３％であるが、ジスルフィド架橋の組合せ（ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）は同じである。システインを除くと、Ａｓｎ⁵、Ｔｈｒ¹⁴及びＡｓｎ⁷¹のみが３種のペプチドファミリーに保存される。細胞毒素や短い神経毒素に共通のＧｌｙ²⁰、Ｐｒｏ⁵⁰及びＬｙｓ⁵¹は、キセノキシンと比較すると非同類置換である。キセノキシンでは、Ａｒｇ⁴¹及びＧｌｙ⁴²が欠如している。システイン間のアミノ酸の数に関しては、図３Ｂが参照されよう。３つのファミリーについて、その数は、Ｎ末端側からＣｙｓ³まで及びＣｙｓ⁶からＣ末端側までは同等である。対照的にキセノキシンではＣｙｓ³とＣｙｓ⁴の間の残基数はより小さく、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間およびＣｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間ではより大きい。図４に図示するように、Ｃｙｓ⁴からＣｙｓ⁸を含むキセノキシン（Ｃｙｓ³⁷からＡｓｎ⁶⁵、２９残基）のＣ末端部分は、ヒトアクチビン受容体の２７アミノ酸（ＣｙＳ⁸⁵からＡｓｎ¹¹¹）とアミノ酸の５０％の同一性を占める。キセノキシンのＮ末端側においては、システインに関してさえ配列同一性が見られない。実施例３：組換えキセノキシンの調製３．１．キセノキシン発現用ベクターの構築本発明によるキセノキシンは、遺伝子工学技術によって、特にサッカロマイセスセレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）酵母を宿主細胞として用いて得られる。この目的のため、９３位の塩基から２９０位の塩基にわたり、バクテリオファージＭ１３ＴＧ１３１（エム．ピー．キエニィら（Ｍ．Ｐ．Ｋｉｅｎｙｅｔａｌ．），Ｇｅｎｅ２６，（１９８３），ｐ９１）中でクローン化された番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１として同定される成熟キセノキシン−１をコードするＤＮＡ断片を合成する。サッカロマイセスセレビシアエによる合成及び分泌を可能にするキセノキシン−１発現用プラスミドを、酵母による異種タンパク分泌に有用なシグナルペプチドを記載した国際特許出願ＰＣＴ／ＦＲ９０／００３０６に従い構築する。上記の国際特許出願の実施例１．Ｅ．に記載のバクテリオファージＭ１３ＴＧ３８４６の１０４５塩基対のＳｐｈＩ−ＳｍａＩ断片を、ＳｐｈＩ及びＳｍａＩで予め消化したベクターＭ１３ＴＧ３８６９（同出願の実施例１．Ｄ．に記載）へ導入する。こうしてＭ１３ＴＧ４８０３ベクターを得、このベクターは以下のものを運ぶ： − ＡＴＧコドンが次にくるＭＦα１遺伝子プロモーター、 − XII配列（ＰＣＴ／ＦＲ／９０／００３０６参照）、 − Ｌｙｓ−Ａｒｇをコードするコドンが次にくるＭＦα１遺伝子の突然変異 ”プロ”（”ｐｒｏ”）配列、 − ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７をコードする配列。ｒＨＶ２Ｌｙｓ４７をコードする配列をキセノキシン−１をコードする配列に置換するために、ＨｉｎｄIII部位を、ＭＦα１遺伝子の突然変異”プロ”をコードする配列に、該国際出願の実施例３．Ｂ．に従って導入する。キセノキシン−１をコードする配列を運ぶＨｉｎｄIII−ＢａｍＨＩ断片を、次にｒＨＶ２Ｌｙｓ４７をコードする配列を除くためにＨｉｎｄIIIおよびＢａｍＨＩで前処理したこのベクターに導入する。Ｍ１３ＴＧ４８０３のＳｐｈＩ−ＳａｌＩ断片を、キセノキシン−１発現用ベクターを得るため、ＳｐｈＩとＳａｌＩ部位が開かれたプラスミドｐＴＧ３８２３（国際出願の実施例１．Ｂ．参照）に導入する。キセノキシン−１発現用ベクターは、以下のものを含む： − プロモーターの欠失を伴うＵＲＡ３遺伝子配列（ＵＲＡ３−ｄ）、 − ＡＴＧが次にくるＭＦα１遺伝子プロモーター、 − シグナルペプチドとしてのXII配列、 − Ｌｙｓ−Ａｒｇをコードするコドンが次にくるＭＦα１遺伝子の突然変異 ”プロ”配列、 − キセノキシン−１をコードする配列、 − 酵母ＰＧＫをコードする遺伝子の転写ターミネーター、 − 大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中での複製および選択を可能にするｐＢＲ３２２の断片、 − 酵母中での有糸***等分配（ｍｉｔｏｔｉｃｅｑｕｉｐａｒｔｉｔｏｎ）および複製に必要な構造的要素を有する２μプラスミドの断片。サッカロマイセスセレビシアエ株を形質転換し、当該株を既知条件下で培養する。３．２．ｐＴＧ８７０９の構築並びに培養培地へ分泌される成熟キセノキシン− １の解析５’末端にＥａｇＩ部位及び３’末端にＳａｌＩ部位を備えた成熟キセノキシン−１をコードする配列をＰＣＲで増幅する。Ｍ１３ＴＧ４４１４あるいはｐＴＧ４４１４（コルベら（Ｋｏｌｂｅｅｔａｌ．），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８，（１９９３）ｐ．１６４５８）を鋳型として用い、以下のプライマーを用いた：およびこのようにして生成した断片を、Ｍ１３ＴＧ８７０３を得るため、ＥａｇＩ及びＳａｌＩで前消化したＭ１３ＴＧ９８００に組込む。ベクターＭ１３ＴＧ９８００は、関心のあるタンパクの発現に必要な要素を挿入されたＭ１３ＴＧ１３１由来である。すなわち： − ＡＴＧコドンが次にくるＭＦα１遺伝子プロモーター（イノクチら（Ｉｎｏｋｕｃｈｉｅｔａｌ．）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７（１９８７）ｐ．３１８５）、 − ＢＧＬ２（β−グルカナーゼ２；クレブルとターナー（ＫｌｅｂｌａｎｄＴａｎｎｅｒ），Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１７１（１９８９）ｐ．６２５９）プレ配列、 − その３’末端にＥａｇＩ部位がサイレントに導入された（３’末端のＬｙｓ−Ａｒｇ残基をコードするコドンに先行するコドンを包含する）デフェンシンＡ（ｄｅｆｅｎｓｉｎＡ）のプロ配列（ディマルクら（Ｄｉｍａｒｃｑｅｔａｌ．），ＥＭＢＯＪ．９（１９９０）ｐ．２５０７）。 − 関心のあるＤＮＡ配列挿入用制限部位。Ｍ１３ＴＧ８７０３から単離され成熟キセノキシン−１発現用カセットを運ぶＳｐｈＩ−ＳａｌＩ断片を、ｐＴＧ８７０９を得るため、ｐＴＧ４８１２の同一の部位間に導入する。ベクターｐＴＧ４８１２はｐＴＧ３８２８由来であるが、それに加えて２μ部分とｐＢＲ３２２部分との接合部に挿入された酵母のＫＥＸ２遺伝子の発現用カセットを含有する。ｐＴＧ８７０９をサッカロマイセスセレビシアエ株中で形質転換させる。ＴＧＹ４７．１（ＭＡＴα，ｐｒａ１，ｐｒｂ１，ｐｒｃ１，ｃｐｓ１，ｕｒａ３− ｄｅｌｔａ５，ｌｅｕ２−３，ｌｅｕ２−１１２，ｈｉｓ）及び後者由来であるがロイシン（Ｌｅｕ⁺）に原栄養性（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｈｙ）を示すＴＧＹ７３．４を例として述べることができる。形質転換体ＴＧＹ７３．４／ｐＴＧ８７０９を選択し、２８℃で最小選択培地（アミノ酸を除いた０．６７％ＹＮＢ（イーストニトロゲンベース（ＹｅａｓｔＮｉｔｒｏｇｅｎＢａｓｅ））を含窒素塩基、１％カザアミノ酸、２％グルコース及び２％バクトアガー（ｂａｃｔｏａｇａｒ））中で培養する。培養６０時間後、培養上清を、慣用技術に従いＹＭ２メンブレンを用いた限外濾過／遠心分離により濃縮する。濃縮物をポリアクリルアミドゲル上の変性電気泳動（ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）（１５．３％ポリアクリルアミド）電気泳動にかける。タンパク質をＰＶＤＦメンブレン上に転移し、予期される分子量（約７ｋＤａ）に対応した物質を、Ｎ末端アミノ酸の配列決定に供する。成熟キセノキシン−１と予期されるＮ末端配列に対応した配列を主要な成分として読みとる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年７月２１日【補正内容】請求の範囲１．以下のアミノ酸配列を含むことを特徴とするペプチド又はその配列由来の断片であって、そのアミノ酸配列が：ａ．少なくとも８個のシステイン（Ｃｙｓ）を含有し、それらがＣｙｓ¹ とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の組合せによる、４個のジスルフィド架橋で結合し；ｂ．Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に０〜３個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に９〜１４個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に３〜７個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１１〜１８個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜６個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に７〜１５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に３〜５個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０個のアミノ酸を含有し；及びｃ．番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列と、整合後、少なくとも４０％のアミノ酸の同一性を示す、ペプチド。２．以下のアミノ酸配列を含むことを特徴とするペプチド又はその配列の断片であって、そのアミノ酸配列が：ａ．少なくとも８個のシステインを含有し、該ペプチドがその折りたたまれた構造を採用したときに、Ｃｙｓ¹とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の組合せによる、４個のジスルフィド架橋で結合し；ｂ．Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に０〜３個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に９〜１４個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に３〜７個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１１〜１８個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜６個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に７〜１５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に３〜５個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０個のアミノ酸を含有し；及びｃ．番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列と、整合後、少なくとも４０％のアミノ酸の同一性を示す、ペプチド。３．請求項１又は２に記載のペプチドであって、該アミノ酸配列が、Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に２個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に１０〜１３個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に４〜６個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１２〜１７個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜５個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に８〜１４のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に４個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に２個のアミノ酸を含有することを特徴とするペプチド。４．請求項１から３のいずれかに記載のペプチドであって、該アミノ酸配列が、番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ配列と、少なくとも５０％、及び好ましくは少なくとも６０％のアミノ酸の同一性を示すことを特徴とするペプチド。５．該アミノ酸の同一性が、少なくとも７０％であることを特徴とする請求項４に記載のペプチド。６．請求項１又は２に記載のペプチドであって、該ペプチドが、Ｃｙｓ¹のＮ− 末端側に０〜３個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に１３個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に６個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１２個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に５個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に１４のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に４個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０個のアミノ酸を含有し、番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列と、整合後、少なくとも８０％、及び好ましくは９０％のアミノ酸の同一性を示すアミノ酸配列を包含することを特徴とするペプチド。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 9637−4ＢＣ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 9358−4Ｂ 21/08 21/08 9281−4ＢＣ１２Ｎ 5/00 Ｂ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＥＤ 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＥＤ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:865） (31)優先権主張番号９４４０００６２．９ (32)優先日 1994年１月11日 (33)優先権主張国欧州特許機構（ＥＰ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者アクステッター，ティルマンドイツ国ディー―77704 オーバーキルヒウーラントベーク 11

Claims

【特許請求の範囲】１．以下のアミノ酸配列を含むことを特徴とするペプチド及びその配列由来の断片であって、そのアミノ酸配列が：ａ．少なくとも８個のシステイン（Ｃｙｓ）を含有し、それらがＣｙｓ¹ とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の組合せによる、４個のジスルフィド架橋で結合し；ｂ．Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に０〜３個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に９〜１４個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に３〜７個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１１〜１８個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜６個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に７〜１５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に３〜５個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０個のアミノ酸を含有し；及びｃ．番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列と、整合後、少なくとも４０％のアミノ酸の同一性を示す、ペプチド。２．以下のアミノ酸配列を含むことを特徴とするペプチド又はその配列由来の断片であって、そのアミノ酸配列が：ａ．少なくとも８個のシステインを含有し、該ペプチドがその折りたたまれた構造を採用したときに、Ｃｙｓ¹とＣｙｓ³、Ｃｙｓ²とＣｙｓ⁴、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶及びＣｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の組合せによる、４個のジスルフィド架橋で結合し；ｂ．Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に０〜３個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に９〜１４個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に３〜７個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１１〜１８個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜６個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に７〜１５のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に３〜５個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０個のアミノ酸を含有し；及びｃ．番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列と、整合後、少なくとも４０％のアミノ酸の同一性を示す、ペプチド。３．請求項１又は２に記載のペプチドであって、該アミノ酸配列が、Ｃｙｓ¹のＮ−末端側に２個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に１０〜１３個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に４〜６個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１２〜１７個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に１〜５個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶の間に８〜１４のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷とＣｙｓ⁸の間に４個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に２個のアミノ酸を含有することを特徴とするペプチド。４．請求項１から３のいずれかに記載のペプチドであって、該アミノ酸配列が、番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ配列と、少なくとも５０％、及び好ましくは少なくとも６０％のアミノ酸の同一性を示すことを特徴とするペプチド。５．該アミノ酸の同一性が、少なくとも７０％であることを特徴とする請求項４に記載のペプチド。６．請求項１又は２に記載のペプチドであって、該ペプチドが、Ｃｙｓ¹のＮ− 末端側に０〜３個のアミノ酸、Ｃｙｓ¹及びＣｙｓ²の間に１３個のアミノ酸、Ｃｙｓ²とＣｙｓ³の間に６個のアミノ酸、Ｃｙｓ³とＣｙｓ⁴の間に１２個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁴とＣｙｓ⁵の間に５個のアミノ酸、Ｃｙｓ⁵とＣｙｓ⁶ の間に１４のアミノ酸、Ｃｙｓ⁶とＣｙｓ⁷との間にはアミノ酸はなく、Ｃｙｓ⁷ とＣｙｓ⁸の間に４個のアミノ酸及びＣｙｓ⁸のＣ−末端側に０〜１０個のアミノ酸を含有し、番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列と、整合後、少なくとも８０％、及び好ましくは９０％のアミノ酸の同一性を示すアミノ酸配列を包含することを特徴とするペプチド。７．アミノ酸の同一性が、少なくとも番号SEQ ID NO:4又はSEQ ID NO:5で定義される配列であることを特徴とする請求項６に記載のペプチド。８．アミノ酸の同一性が、番号SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列と少なくとも９５％であることを特徴とする請求項６に記載のペプチド。９．該アミノ酸配列が番号SEQ ID NO:3で定義される配列を包含することを特徴とする請求項８に記載のペプチド。 10．請求項１〜９のいずれかに記載のペプチドの製造方法であって、カエル、好ましくはアフリカツメガエル（Xenopus laevis）の皮膚から分泌される物質から該ペプチドを単離するために、ａ．カエル皮膚によって分泌される物質を硫酸アンモニウム又は同等な沈殿剤を用いての沈殿によって画分に分け、ｂ．硫酸アンモニウムの３０％〜７０％、好ましくは、３０％〜６０％飽和、又は同等の条件下で形成される沈殿物をゲル浸透クロマトグラフィーにかけ、及びｃ．遅れて溶出するペプチド画分、及び、必要ならば、ｄ．このペプチド画分を、陽イオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフィーにかけ、任意に、逆相クロマトグラフィーにより続けられることを特徴とする方法。 11．請求項１〜９のいずれかに記載のペプチドをコードする配列を含むことを特徴とする単離されたＤＮＡ断片。 12．請求項１〜９のいずれかに記載のペプチドの前駆体をコードする配列を含むことを特徴とする請求項１１に記載のＤＮＡ断片。 13．該配列が、番号SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4又はSEQ ID NO:5で示されるアミノ酸配列をコードすることを特徴とする請求項１１に記載のＤＮＡ断片。 14．番号SEQ ID NO:1で示され、位置９３の塩基〜位置２９０の塩基にわたるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むことを特徴とする請求項１１に記載のＤＮＡ断片。 15．番号SEQ ID NO:1で示され、位置３９の核酸〜位置２９０の核酸にわたるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むことを特徴とする請求項１２に記載のＤＮＡ断片。 16．請求項１１〜１５のいずれかに記載の単離されたＤＮＡ断片の発現カセットであって、該ＤＮＡ断片が問題の形質転換細胞における転写及び／又は翻訳を許容する要素の支配下におかれていることを特徴とする発現カセット。 17．請求項１６に記載の発現カセットであって、加えて、プレ配列（pre sequen ce）及びプロ配列（pro sequence）、特にフォルミアテラノヴァエ（Phormia terranovae）のデフェンシン（defensin）Ａのプロ配列を含む発現カセット。 18．請求項１２に記載のＤＮＡ断片を含むことを特徴とする請求項１６又は１７に記載の発現カセット。 19．請求項１６から１８のいずれかの記載の発現カセットで形質転換された細胞であって、該発現カセットが形質転換細胞のゲノム中に組み込まれるか又は発現ベクターによって運ばれることを特徴とする細胞。 20．サッカロミセスセレビシアエ（S．cerevisiae）及び大腸菌（E．coli）からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１９に記載の形質転換された細胞。 21．該細胞がほ乳類起源のものであることを特徴とする請求項１９に記載の形質転換された細胞。 22．請求項１〜９のいずれかに記載のペプチドの製造方法であって、請求項１９〜２１のいずれかに記載の形質転換された細胞を適当な培地上で培養し該ペプチドを該培養物から回収することを特徴とする方法。 23．ヒト又は家畜への使用のための薬学的組成物であって、活性のある物質として、少なくとも、請求項１〜９のいずれかに記載のペプチドの１種、請求項１６〜１８のいずれかに記載の発現カセットを含むベクターの１種又は請求項１９〜２１のいずれかに記載の形質転換された細胞の１種を含むことを特徴とする組成物。 24．請求項１〜９のいずれかに記載のペプチドを認識することを特徴とするモノクローナル又はポリクローナル抗体。 25．請求項１〜９のいずれかに記載のペプチド又は請求項２４に記載の抗体を含む診断キット。