JPH0940657A - タキソールおよびタキサンテルペノイド類の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】キャラボクを原料とするタキソールおよびタキ
サンテルペノイド類の製造方法の提供。 【解決手段】日本産イチイ属キャラボクの葉、心材また
は皮をアルコール抽出し、ついでそのアルコール抽出液
の濃縮液を酢酸エチルエステルで抽出し、粗抽出物を得
るタキソールの製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、タキソールの製造方法
に関する。更に詳しくは、日本産イチイ属キャラボクを
原料とすることを特徴とするタキソールの製造方法に関
する。

【０００２】

【従来技術】イチイ属樹木（Taxus L．）は北半球に１
０種類が分布し、日本ではイチイ（オンコ）Taxus cusp
idata Sieb et Zucc.と低木のキャラボク（T.cuspidata
var.nana Hort.ex Rehder）が生育している。キャラボ
クは、主として本州日本海側に分布し、園芸用として庭
園に多く植えられている。これまでは、日本産イチイ成
分に関する研究は、高木のオンコを中心として行われて
きた。１９１３年に発表された上田の報告が最初のもの
であり、その後、近藤、天野は飛騨産高木イチイ葉を原
料としてアルカロイドを抽出し、これを欧州産アルカロ
イドと同一物質と推定し、「タキシン」と命名した。そ
の後、１９６０年頃より京都大学グループ、東北大中西
グループにより研究が行われ、「タキサン」骨格を有す
る数種のジテルペンが得られた。

【０００３】一方、１９７１年に構造決定されたタキソ
ールは北米産イチイ、太平洋イチイ（Taxus brevifoli
a）の樹皮から得られ、その化学構造の特異性に加え
て、有糸***の際に微小管を安定化し、その脱重合を抑
えることから新しいタイプの抗癌剤として注目されてき
た。特に、タキソールは白血病のみならず難治性卵巣癌
などにも有効で、その治療スペクトルの幅が広いことを
特徴とすることである。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上記のごとくタキソー
ルは、植物中の含量が少なく樹皮より僅か０．０１％の
収率で得られるのみである。そのため、合成へのアプロ
ーチが盛んである。

【０００５】現在世界で二つのグループにより全合成が
なされた（K.C.Nicolaou et.al.,Nature,第３６７巻、
第６３０頁、１９９４年、R.A.Holton et.al., J.Am.Ch
em.Soc.,第１１６巻、第１５９９頁、１９９４年）が、
実用的な方法とは必ずしも言えない。

【０００６】その他、前駆体の１０−デアセチルバカチ
ンＩＩＩなどからタキソールの半合成も行われている
（ザ ジャーナル オブ オーガニック ケミストリー
第５６巻、第６９３９頁、１９９１年）および組織培
養によるタキソールの生産方法としては特開平６−２９
２５８８号、特開平６−２９６４９３号に開示がある。
しかし、有効な市場への供給方法がないまま現在に至っ
ている。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、イチイ属
の樹木の成分を検討する過程において、宮城県の仙台
市、白石市内などの低木のキャラボク（Taxus cuspidat
a var. nana Hort. ex Rehder）の下枝などからタキソ
ールが収率良く得られることを見いだし、更にその知見
に基づき本発明を完成した。

【０００８】本発明は、キャラボクを原料とすることを
特徴とするタキソールの製造方法である。更に本発明の
キャラボクは宮城県産（宮城県から山形県山系）、鳥取
県産（大山産系、ダイセンキャラボク）、富山県産、岩
手県産または北海道産であることが好ましい。また、キ
ャラボクの葉、心材または皮をアルコール抽出し、つい
でそのアルコール抽出液の濃縮液を酢酸エチルエステル
で抽出し、粗抽出物を得ることにより、収率を著しく向
上させることができる。

【０００９】以下、本発明の製造方法を説明する。キャ
ラボクの樹木から葉、および最下段の下枝を採取し、材
および皮に分けアルコール抽出する。アルコールとして
は、メタノール、エタノール、イソプロパノールなどで
あるが、メタノールが好ましい。ついでその抽出液を活
性炭−セライト処理し、濃縮する。ついで酢酸エチルで
抽出し、酢酸エチル層を重曹水で抽出しカルボン酸区
分、希アルカリで抽出しフェノール区分、希塩酸で抽出
しアルカロイド区分と中性区分を分離する。中性区分を
活性炭を上層に敷いたシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーに付してベンゼン、酢酸エチルなどの有機溶媒を用
いて溶出分離することによってタキソールが得られる。
また必要に応じて分取薄層クロマトグラフィー（ＰＴＬ
Ｃ）などを用いることもできる。

【００１０】

【発明の効果】高木性イチイに比較して低木性のキャラ
ボクは、園芸用として容易に栽培し、繁殖することがで
き、特に葉からタキソールが得られたことにより木本体
を伐採することなく多量の葉を採取しタキソールを得る
ことが可能である。従来、北米産およびヨーロッパ産イ
チイ樹皮から低含量（０．０１％／乾燥重）で得られて
いたタキソールが、キャラボク下枝の樹皮から取れる
（０．０２％〜０．０３％／生樹皮重）とともに微量の
１０−デアセチルタキソールと１０−デアセチルバカチ
ンＩＩＩが得られる。

【００１１】さらに、生葉のメタノール抽出物から多量
のタキシニン、タキサンテルペノイド、タキサンアルカ
ロイドとともに１０−デアセチルバカチンＩＩＩ（２．
０ｇ／３．０Ｋｇ生葉）と微量のタキソールが分離され
た。これらの結果は、貴重なイチイ森林資源を伐採する
ことなしに、容易に栽培、繁殖の可能なキャラボク葉か
らタキソールおよび関連タキサンテルペノイド類が生産
できることを示している。また、キャラボクの葉および
種子は、容易にカルスに誘導できるので組織培養により
タキソール関連化合物の生産ができる。以下、本発明の
製造方法の効果を従来の製造方法と比較し説明する。

【００１２】１．産地による差異 イチイは、本州では亜高山帯に自生するが、北海道では
低地でも天然の樹林帯が見られる。北海道の高木イチイ
には、葉状がイチイ型（左右２列並び）とともにキャラ
ボク型（輪生状並び）が見られ、羽幌町焼尻島のイチイ
型にはタキソールは含まれていなかったが、キャラボク
型にはタキソール（樹皮中、０．０００５％）が含まれ
ていた。一方、富山県産高木性のイチイ樹皮にもタキソ
ールは含まれていなかったが、富山県産キャラボク樹皮
には０．０１４％のタキソールが含まれていた。さらに
北海道札幌市、定山渓、宮城県および岩手県のキャラボ
クには、タキソールがそれぞれ０．００１４％、０．０
２％、０．０３３％、０．００７％で含まれていた。

【００１３】

【表１】

【００１４】（ＨＰＬＣ分析） Column:Finepak SIL C18-5(4.6mm×250mm) 溶媒：MeOH:H₂O:CH₃CN(40:82:78),流量 1.0ml/min タキソールの保持時間ｔ_R:18min, 分析機器 JASCO Tri
roter。

【００１５】低木性のキャラボクは、日本海側（秋田県
〜鳥取県）の亜高山帯や深山に自生し、宮城県や岩手県
では庭園樹として良く植えられている。宮城県白石市内
のキャラボク樹皮から高い含量（０．０２％〜０．０３
％／生産）のタキソールとともに１０−デアセチルバカ
チンＩＩＩ（０．０１％以下）が分離された。仙台市内
キャラボクの葉からは１０−デアセチルバカチンＩＩＩ
（２．０ｇ／３．０Ｋｇ生葉）と微量のタキソール（Ｈ
ＰＬＣ分析、０．００２８％）が分離された。

【００１６】２．抽出方法による差異 Ｒ．Ｗ．ＭＩｌｌｅｒら（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，第
４６巻、第１４６９頁〜第１４７４頁、１９８１年）は
イチイ乾燥粉末のエタノール抽出液を水で希釈し、石油
エーテルで洗い油脂区分を除き、クロロホルムで抽出し
た。濃縮物をシリカゲル・カラムクロマトグラフィーに
よりクロロホルム：メタノール（９５：５）溶出区分を
ドロップカウンター・カレント（ＤＣＣ）による分離操
作によりタキソールを分離した。

【００１７】本発明の方法は、イチイ植物体の生原料を
直接にメタノール抽出（３回行った。１回抽出では７０
％程度の抽出率であった。）し、濃縮液を酢酸エチルで
抽出する。酢酸エチル層を希アルカリ水溶液（１％以下
のＫＯＨあるいはＮａＯＨの食塩半飽和液）で数回（３
回程度）洗うと、分離操作に支障をきたすフェノール区
分をほぼ完全に除くことができる。有機溶媒を留去し、
残留物をシリカゲル・クロマトグラフィーによりベンゼ
ン（トルエン、ヘキサンなども使用できる。）：酢酸エ
チル（３：１〜１：１）により溶出すると極性の低いタ
キサンテルペノイドの後、タキソール区分が得られる。
クロロホルム：メタノール（９５：５）溶出すると１０
−デアセチルバカチンＩＩＩや１０−デアセチルタキソ
ールが得られる。

【００１８】このように、発明者の方法によりイチイ抽
出物から分離操作に支障をきたすフェノール区分を除く
と容易にタキソールなどのタキサン・テルペノイド類を
分離することができる。

【００１９】

【実施例】以下、実施例および比較例を挙げて本発明を
具体的に説明する。

【００２０】実施例１（樹皮抽出物） 白石市内で採取したキャラボク下枝から樹皮（１．０Ｋ
ｇ）を剥ぎ細断した。これをメタノールで抽出した。メ
タノール抽出液を活性炭処理し、濃縮した。濃縮液を酢
酸エチルに溶かし、カルボン酸区分（２．０ｇ）、フェ
ノール区分（９．１ｇ）およびアルカロイド区分（１．
０ｇ）を除いて中性区分（３．７ｇ）を得た。

【００２１】中性区分を活性炭を上層に敷いたシリカゲ
ル・カラムクロマトグラフィーにかけて、ベンゼン−酢
酸エチル（３：１）にて溶出した。初め、グリセリド
（２６９ｍｇ）、β−シトステロール（１３４ｍｇ）、
タキサンテルペノイドの物質Ａ

【００２２】

【化１】

【００２３】［４（２０），１１−タキサジエン−５
α，７β，９α，１０β，１３α−ペンタノール７，
９，１０，１３−テトラアセテート ５−シンナメー
ト、ｍｐ１７５〜１７６℃、〔α〕_D＋６２．５゜（Ｃ
ＨＣｌ₃）］およびタキシニンＥ（４：１の比）（２７
５ｍｇ）が溶出した。ベンゼン−酢酸エチル（１：１）
で溶出を続けるとタキソール区分（３９６ｍｇ）が得ら
れた。これをＴＬＣ（展開溶媒＝ヘキサン−酢酸エチ
ル、１：２）で精製し、７０％メタノールから再結晶す
るとタキソール（１８８〜２００ｍｇ）が得られた。
ｍｐ．２１４〜２１６℃ さらに、酢酸エチル−メタノール（４：１）で溶出する
と油状物質９６８ｍｇを得た。この油状物質（２００ｍ
ｇ）をＴＬＣ（クロロホルム−メタノール、９５：５）
で分取すると１３−デアセチルバカチンＶＩ（２６ｍ
ｇ）

【００２４】

【化２】

【００２５】ｍ．ｐ．２３３〜２３４℃（エタノールよ
り再結晶）、タキサニンＭ（４８ｍｇ）

【００２６】

【化３】

【００２７】無晶形物質 ［α］_D−２４°（メタノール）および１０−デアセチ
ルタキソール（３８ｍｇ）が得られた。

【００２８】実施例２（葉抽出物） 仙台市キャラボク生葉（３．０９Ｋｇ）のメタノール
（２０ｌｉｔ．）粗抽出物（６４．０ｇ）から中性区分
（３２．０ｇ）、カルボン酸区分（３．０ｇ）、フェノ
ール区分（６．５ｇ）、アルカロイド区分（２００ｍ
ｇ）を得た。

【００２９】中性区分を多量の酢酸エチルに溶解し放置
するとタキシニンの結晶３．１ｇが得られた。この中性
区分母液（１４．３ｇ）をシリカゲル・カラムクロマト
グラフィーにかけてヘキサン−酢酸エチル（２：１）に
て溶出するとさらにタキシニンの結晶（約２．０ｇ、
０．１７％／新鮮葉重）、ｍｐ２７０〜２７１℃（酢酸
エチルより再結晶）が得られた。

【００３０】さらに、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）
の溶出区分（２．０ｇ）をＴＬＣ（ベンゼン−エーテ
ル、１：１）で分取すると７，９，１０，１３−テトラ
アセトキシ−５−シンナモイロキシタキサ−４（２
０），１１−ジエン（１０６ｍｇ）、ｍｐ１７５〜１７
６℃（メタノールより再結晶）およびタキシニンＪ

【００３１】

【化４】

【００３２】〔６６ｍｇ、ｍｐ２６０〜２６５℃（酢酸
エチル−ヘキサンより再結晶）〕が得られた。

【００３３】さらに、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）
で溶出を続けると油状物質（３．２ｇ）を得た。この油
状物質をＴＬＣ（クロロホルム−メタノール、１０：
１）で分取するとタキソール（１５０ｍｇ）が得られ
た。

【００３４】最後に、クロロホルム−メタノール（５：
１）で溶出される区分（４．３ｇ）をＴＬＣ（ヘキサン
−酢酸エチル、１：２）で分取するとタキソール（４０
ｍｇ）と１０−デアセチルバカチンＩＩＩ（２．０
ｇ）、

【００３５】

【化５】

【００３６】ｍｐ．２２１〜２２３℃（エタノールより
再結晶）が得られた。

【００３７】アルカロイド区分（２００ｍｇ）を少量の
メタノールに溶かし、リンモリブデン酸液を加えると塩
が沈澱した。あるいは、β−レゾルシン酸のエーテル溶
液を加えると白色沈澱塩、ｍｐ１４２〜１４３℃（酢酸
エチルより再結晶）が得られた。これを希アルカリ処理
するとアルカロイド部が油状物質となった。これを酢酸
エチルに溶かしＴＬＣ（ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ＝１０：
１）で分取すると少量のタキシン

【００３８】

【化６】

【００３９】（ＨＰＬＣ分析、２．８ｍｇ／１００ｇ新
鮮葉重、０．０２８％）とアルカロイド（２’−デアセ
トキシアウストロスピカチン，2'-deacetoxyaustrospic
atine）

【００４０】

【化７】

【００４１】が結晶（約１００ｍｇ）ｍｐ１７５〜１７
６℃（イソプロピルエーテルより再結晶）、［α］_D ²³
＋８０．５°（ｃ＝０．６，ＣＨＣｌ₃）として単離さ
れた。

【００４２】実施例３ 富山県八尾市産キャラボク（メス株）の樹皮５１０ｇか
ら中性区分９７０ｍｇを得て、Ｆｉｎｅ ＳｉｌＣ_18-5
カラムを用いてＨＰＬＣ分析すると０．０１４％含量の
タキソールが認められた。同様にオス株樹皮３２０ｇか
ら中性区分１５３ｍｇを得てＨＰＬＣ分析したがタキソ
ールは含まれていなかった。

【００４３】実施例４ ダイセンキャラボク樹皮１．０ｋｇのメタノール抽出物
からアルカロイド含有する中性区分３．２３ｇを得て、
ＨＰＬＣ分析に供したところ、タキソール含量は０．０
０２８％であった。

【００４４】ダイセンキャラボク葉５．９ｋｇのメタノ
ール抽出物からアルカロイド含有中性区分１８．５３４
ｇを得た。この４．５４４ｇをシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーにより分離し、タキソール含有区分１．４
９６ｇを得た。後者をＨＰＬＣ分析に供したところ、葉
のタキソール含量は０．０００１５％の低濃度であっ
た。

【００４５】実施例５ 岩手県産キャラボク樹皮（メス株）８７１ｇのメタノー
ル抽出物からアルカロイド含有中性区分６．１ｇを得
た。これをＨＰＬＣ分析に供したところ、タキソール含
量は０．００７％であった。

【００４６】一方、オス株樹皮５３０ｇのメタノール抽
出物からアルカロイド含有中性区分１．８ｇを得た。こ
れをＨＰＬＣ分析に供したところ、タキソールは認めら
れなかった。

【００４７】実施例６ 定山渓産キャラボク樹皮（１９９ｇ）からタキサンアル
カロイド（１７０ｍｇ）と中性区分（９７０ｍｇ）を得
て、ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）分離する
とタキソールが得られた。

【００４８】ＨＰＬＣ分析するとタキソール含量は０．
０２％であった。

【００４９】定山渓産キャラボク葉（小枝付、２．４８
ｋｇ）のメタノール抽出（１回）物から中性区分５．８
８ｇを得て、ＨＰＬＣ分析するとタキソール含量は０．
０００５％であった。

【００５０】実施例７ 焼尻島産キャラボク樹皮（６４１ｇ）のメタノール抽出
物から中性区分（３．９ｇ）を得た。この３．１ｇをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離するとグ
リセリド区分（４６９ｍｇ）、４（２０），１１−タキ
サジエン−５α，７β，９α，１３α−ペンタノール，
７，９，１０，１３，−テトラアセテート，５−シンナ
メート

【００５１】

【化８】

【００５２】区分（３０２ｍｇ）を得た。

【００５３】さらに得られるタキソール含有区分をＴＬ
Ｃにより分離するとタキサジフィン（ｔａｘａｇｉｆｉ
ｎ）

【００５４】

【化９】

【００５５】ｍ．ｐ．２６５〜２６７℃ ［α］_D＋
７．５゜（Ｍｅ０Ｈ）とタキソール（０．００３％含
量）を得た。

【００５６】比較例１ 富山県産高木イチイの樹皮（２．４９Ｋｇ）をメタノー
ルで抽出し、抽出液を活性炭処理、濃縮した。濃縮液を
酢酸エチルにて抽出すると粗抽出物（８２ｇ）が得られ
た。粗抽出物（６５ｇ）の酢酸エチル溶液を食塩半飽和
の０．５％ＮａＯＨ液で洗いカルボン酸およびフェノー
ル区分を除き、５％メタノールを含有する５％ＨＣｌで
３回抽出するとアルカロイド区分（３７０ｍｇ）と中性
区分（１４．９ｇ）が得られた。これを活性炭を上層し
たシルカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ベンゼ
ン−酢酸エチル（１：１）で溶出すると、始めにβ−シ
トステロール、タキシニン、タキサンテルペノイドＡお
よびＢが得られた。さらに、ベンゼン−酢酸エチル
（１：１）で溶出しタキソール対応区分を得た。この区
分を更にＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）で分
取しタキソールＲｆ値相当区分（９０ｍｇ）を得た。

【００５７】¹Ｈ−ＮＭＲ分析したがタキソールは含ま
れていなかった。

【００５８】比較例２ 札幌市内イチイ樹皮（６５０ｇ）より実施例１と同様に
して中性区分（２．２２ｇ）を得て、ＴＬＣ分析すると
微量のタキソールの存在が認められた。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 31/335 ＡＤＵ Ａ６１Ｋ 31/335 ＡＤＵ

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】キャラボクを原料とすることを特徴とする
   タキソールの製造方法。イド類の製造方法。
2. 【請求項２】キャラボクを原料とすることを特徴とする
   タキサンテルペノイド類の製造方法。
3. 【請求項３】キャラボクが宮城県産、富山県産、岩手県
   産、北海道産または鳥取県産であることを特徴とする請
   求項１記載のタキソールの製造方法。
4. 【請求項４】キャラボクの葉、心材または皮をアルコー
   ル抽出し、ついでそのアルコール抽出液の濃縮液を酢酸
   エチルエステルで抽出し、粗抽出物を得ることを特徴と
   する請求項１記載のタキソールの製造方法。