JPH09318631A - Method of quantifying rheumatic factor - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To make more linear a detection line obtained from RF concentration and a latex coagulation degree in a rheumatic factor quantifying method for causing a latex coagulation reaction by mixing a sample and latex particles sensing human γ-globulin, measuring an optical intensity and quantifying rheumatic factor in the sample. SOLUTION: Mixed liquid is made by mixing a sample and latex particles sensing human γ-globulin, a latex coagulation reaction is produced by causing at least one kind of a water soluble compound selected from the group of tri- alkyl amine, its salt and fourth class ammonium salt and polyvinyl pyrrolidone or dextran to coexist in the mixed liquid, an optical intensity is measured and a rheumatic factor in the sample is quantified based on this measured value.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、ラテックス凝集反
応を利用したリウマチ因子の定量法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for quantifying rheumatoid factor utilizing a latex agglutination reaction.

【０００２】[0002]

【従来の技術】リウマチ因子（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ
Ｆａｃｔｏｒ；以下、ＲＦという）は、慢性関節リウマ
チ（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）患者
の血清中に高率で出現する自己抗体の一種と考えられて
おり、血清中のＲＦ値がリウマチ診断、治療の指標にな
っている。このＲＦの測定法は、羊赤血球を用いる受身
血球凝集反応を利用したＲＦ・ＨＡ法、抗原−抗体反応
による凝集を測定する免疫比濁法（ＴＩＡ法）、ラテッ
クス粒子を用いたラテックス免疫比濁法などがある。2. Description of the Related Art Rheumatoid
Factor; hereinafter referred to as RF) is considered to be a type of autoantibody that appears at a high rate in the serum of patients with rheumatoid arthritis (Rheumatoid Arthritis), and the RF value in the serum serves as an index for diagnosis and treatment of rheumatism. ing. The RF is measured by RF / HA method using passive hemagglutination reaction using sheep red blood cells, immunoturbidimetric method (TIA method) for measuring aggregation by antigen-antibody reaction, latex immunoturbidity method using latex particles. There is a law.

【０００３】上記ラテックス免疫比濁法とは、ＲＦを含
む試料とヒトγ−グロブリンを感作したラテックス粒子
とを混合することにより、抗原−抗体反応によるラテッ
クス粒子の架橋による凝集反応を起こさせて、その凝集
の程度を測定することによりＲＦを測定する方法であ
る。この凝集の程度は、試料中のＲＦの濃度の上昇によ
り増大するので、この凝集を自動分析装置などにより光
学的に吸光度などを測定することによりＲＦを簡便に定
量できる。The latex immunoturbidimetric method is a method in which a sample containing RF and latex particles sensitized with human γ-globulin are mixed to cause an agglutination reaction due to cross-linking of latex particles due to an antigen-antibody reaction. The method is to measure RF by measuring the degree of aggregation. Since the degree of this aggregation increases with an increase in the concentration of RF in the sample, RF can be easily quantified by optically measuring the absorbance or the like of this aggregation with an automatic analyzer or the like.

【０００４】上記の定量に際して、試料中のＲＦの濃度
とラテックス凝集度（例えば、吸光度によって測定され
る値）が、正確に比例関係にあれば、両者の関係をグラ
フに表すと直線となり、ＲＦの濃度とラテックス凝集度
とから得られる検量線の作成が容易となり、また、定量
精度も高くなる。しかしながら、ラテックスの凝集特性
により、一般には、この関係は直線から乖離し、例え
ば、Ｓ字曲線（例えば、図１の比較例１参照。ＲＦの濃
度が低いところでは、ラテックス凝集度が仮想される直
線よりも低くなり、ＲＦの濃度が高いところでは、ラテ
ックス凝集度が仮想される直線よりも高くなり、全体と
してＳ字に似た曲線となるが、この曲線のことをいう）
になるなどして、定量精度も悪くなる。In the above-mentioned quantification, if the RF concentration in the sample and the latex agglutination degree (for example, the value measured by the absorbance) are in an exact proportional relationship, the relationship between them becomes a straight line and the RF It becomes easy to create a calibration curve that is obtained from the concentration and the degree of latex agglutination, and the quantification accuracy is also improved. However, in general, this relationship deviates from a straight line due to the agglomeration characteristics of the latex, and for example, an S-shaped curve (for example, see Comparative Example 1 in FIG. 1. At a low RF concentration, the latex agglutination degree is assumed. It becomes lower than the straight line, and at a high RF concentration, the degree of latex agglutination becomes higher than the hypothetical straight line, and it becomes a curve similar to S shape as a whole, but this curve is referred to.)
As a result, the accuracy of quantification also deteriorates.

【０００５】特公平６−６８４９２号公報には、この直
線性を高めるために、試料及びヒトγ−グロブリンを感
作したラテックス粒子を混合して混合液とし、該混合液
中にトリアルキルアミン、その塩及び第４級アンモニウ
ム塩からなる群より選ばれる少なくとも一種の水溶性化
合物並びにポリエチレングリコールを共存させて抗原−
抗体反応によるラテックス凝集反応を起こさせて、光学
的強度を測定し、この測定値から試料中のリウマチ因子
を定量することが提案されている。しかしながら、この
方法を用いても、この関係がＳ字曲線となることがあ
り、直線性が十分とはいえない。In Japanese Patent Publication No. 6-68492, in order to improve the linearity, a sample and latex particles sensitized with human γ-globulin are mixed into a mixed solution, and a trialkylamine is added to the mixed solution. At least one water-soluble compound selected from the group consisting of a salt thereof and a quaternary ammonium salt and polyethylene glycol are allowed to coexist with the antigen-
It has been proposed to cause a latex agglutination reaction by an antibody reaction, measure the optical intensity, and quantify the rheumatoid factor in the sample from the measured value. However, even if this method is used, this relationship may be an S-shaped curve, and linearity is not sufficient.

【０００６】[0006]

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記問題を解
決するものであり、試料及びヒトγ−グロブリンを感作
したラテックス粒子を混合して混合液とし、抗原−抗体
反応によるラテックス凝集反応を起こさせて、光学的強
度を測定し、この測定値から試料中のリウマチ因子を定
量するリウマチ因子定量法における、ＲＦの濃度とラテ
ックス凝集度とから得られる検量線がより直線状となる
リウマチ因子定量法を提供することを目的とする。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention is intended to solve the above-mentioned problems, in which a sample and latex particles sensitized with human γ-globulin are mixed to prepare a mixed solution, and a latex agglutination reaction by an antigen-antibody reaction is carried out. The rheumatoid factor in which the calibration curve obtained from the RF concentration and the latex agglutination degree is more linear in the rheumatoid factor quantification method in which the rheumatoid factor in the sample is quantified The purpose is to provide a quantitative method.

【０００７】[0007]

【課題を解決するための手段】本発明のリウマチ因子定
量法は、試料及びヒトγ−グロブリンを感作したラテッ
クス粒子を混合して混合液とし、該混合液中にトリアル
キルアミン、その塩及び第４級アンモニウム塩からなる
群より選ばれる少なくとも一種の水溶性化合物並びにポ
リビニルピロリドン及び／又はデキストランを共存させ
て抗原−抗体反応によるラテックス凝集反応を起こさせ
て、光学的強度を測定し、この測定値から試料中のリウ
マチ因子を定量することを特徴とする。Means for Solving the Problems The method for quantifying rheumatoid factor of the present invention comprises mixing a sample and latex particles sensitized with human γ-globulin into a mixed solution, and adding trialkylamine, a salt thereof and At least one water-soluble compound selected from the group consisting of quaternary ammonium salts and polyvinylpyrrolidone and / or dextran are allowed to coexist to cause a latex agglutination reaction due to an antigen-antibody reaction, and the optical intensity is measured. It is characterized in that the rheumatoid factor in the sample is quantified from the value.

【０００８】上記試料としては、血清等が挙げられる。Examples of the sample include serum and the like.

【０００９】上記ラテックス粒子としては、診断試薬用
のラテックス粒子として公知のもののいずれも使用可能
であり、例えば、有機高分子からなるラテックス粒子が
挙げられる。上記有機高分子の種類としては、例えば、
ポリスチレン、スチレン−スチレンスルホン酸塩共重合
体、メタクリル酸重合体、アクリル酸重合体、アクリロ
ニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、塩化ビニル
−アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル−アクリル
酸エステル共重合体等が挙げられる。As the latex particles, any of known latex particles for diagnostic reagents can be used, and examples thereof include latex particles made of an organic polymer. The types of the organic polymer include, for example,
Polystyrene, styrene-styrene sulfonate copolymer, methacrylic acid polymer, acrylic acid polymer, acrylonitrile-butadiene-styrene copolymer, vinyl chloride-acrylic acid ester copolymer, vinyl acetate-acrylic acid ester copolymer Etc.

【００１０】上記ラテックス粒子の平均粒径は、自動分
析装置の種類などにより、適宜選択されるが、通常０．
０３〜１．０μｍが好ましく、０．０５〜０．５μｍが
より好ましい。The average particle size of the above-mentioned latex particles is appropriately selected depending on the type of automatic analyzer and the like.
03-1.0 μm is preferable, and 0.05-0.5 μm is more preferable.

【００１１】本発明で用いられる、ヒトγ−グロブリン
を感作したラテックス粒子は、上記ラテックス粒子にヒ
トγ−グロブリンを物理的又は化学的に吸着させて得ら
れる。The latex particles sensitized with human γ-globulin used in the present invention are obtained by physically or chemically adsorbing human γ-globulin to the above-mentioned latex particles.

【００１２】上記のヒトγ−グロブリンを感作したラテ
ックス粒子の上記凝集反応時の反応液中の濃度は、適宜
の濃度が選ばれるが、通常０．０１〜０．１重量％が好
ましく、０．０１〜０．０７重量％がより好ましい。The concentration of the latex particles sensitized with human γ-globulin in the reaction solution at the time of the agglutination reaction is selected as appropriate, but is usually 0.01 to 0.1% by weight, preferably 0. More preferably, 0.01 to 0.07% by weight.

【００１３】上記の水溶性化合物としては、トリアルキ
ルアミン、その塩及び第４級アンモニウム塩からなる群
より選ばれる少なくとも一種である。上記トリアルキル
アミンとしては、例えば、トリエチルアミン、トリアル
キルアミンの塩としては、例えば、トリエチルアミン塩
酸塩、第４級アンモニウム塩としては、例えば、塩化コ
リン、臭化コリン、塩化アセチルコリン、臭化アセチル
コリン、塩酸ベタインが挙げられる。これらは、１種又
は２種以上で使用される。The above water-soluble compound is at least one selected from the group consisting of trialkylamines, salts thereof and quaternary ammonium salts. Examples of the trialkylamine include triethylamine and trialkylamine salts such as triethylamine hydrochloride, and quaternary ammonium salts such as choline chloride, choline bromide, acetylcholine chloride, acetylcholine bromide and hydrochloric acid. Betaine is an example. These are used alone or in combination of two or more.

【００１４】上記水溶性化合物の上記凝集反応の反応液
中の濃度は、低くなると添加効果が小さくなり、高くな
ると測定感度が低くなるので、０．１〜１０重量％が好
ましい。The concentration of the water-soluble compound in the reaction solution of the agglutination reaction is preferably 0.1 to 10% by weight because the effect of addition decreases as the concentration decreases and the measurement sensitivity decreases as the concentration increases.

【００１５】上記ポリビニルピロリドンとしては、通
常、平均分子量が１万以上のものが好ましく、平均分子
量が大きくなるとラテックス凝集反応促進効果が大きく
なる。又、ポリビニルピロリドンの上記凝集反応の反応
液中の濃度は、低くなるとラテックス凝集反応促進効果
が認められなくなり、高くなるとラテックス粒子の自己
凝集反応、非特異凝集反応などが起こり易くなるので、
通常０．０５〜３．０重量％が好ましく、０．０５〜
１．０重量％がより好ましい。As the above-mentioned polyvinylpyrrolidone, those having an average molecular weight of 10,000 or more are usually preferred, and the latex aggregation reaction promoting effect is enhanced as the average molecular weight is increased. Further, the concentration of the polyvinylpyrrolidone in the reaction solution of the agglutination reaction becomes low when the latex agglutination reaction promoting effect is not observed, and when the concentration is high, the self-aggregation reaction of latex particles and the non-specific agglutination reaction are likely to occur.
Usually, 0.05 to 3.0% by weight is preferable, and 0.05 to 3.0
1.0% by weight is more preferable.

【００１６】上記デキストランとしては、通常、平均分
子量が１万以上のものが好ましく、平均分子量が大きく
なるとラテックス凝集反応促進効果が大きくなる。又、
デキストランの上記凝集反応の反応液中の濃度は、低く
なるとラテックス凝集反応促進効果が認められなくな
り、高くなるとラテックス粒子の自己凝集反応、非特異
凝集反応などが起こり易くなるので、通常０．１〜３．
０重量％が好ましく、０．２〜１．０重量％がより好ま
しい。As the above-mentioned dextran, those having an average molecular weight of 10,000 or more are usually preferable, and the latex agglutination reaction accelerating effect increases when the average molecular weight increases. or,
When the concentration of dextran in the reaction solution of the agglutination reaction is low, the latex agglutination reaction promoting effect is not observed, and when it is high, latex particles are likely to undergo self-aggregation reaction, non-specific agglutination reaction, etc. 3.
0 wt% is preferable, and 0.2 to 1.0 wt% is more preferable.

【００１７】上記混合液は、試料、ヒトγ−グロブリン
を感作したラテックス粒子、ラテックス粒子の懸濁媒体
及び、必要に応じてヒトγ−グロブリンを感作したラテ
ックス粒子の反応性や混合液のｐＨなどを調整する目的
で反応に添加される緩衝液からなり、更に、水溶性化合
物並びにポリビニルピロリドン及び／又はデキストラン
が共存される。The above-mentioned mixed solution comprises a sample, latex particles sensitized with human γ-globulin, a suspension medium of latex particles, and, if necessary, reactivity of the latex particles sensitized with human γ-globulin or a mixed solution. It consists of a buffer solution added to the reaction for the purpose of adjusting the pH and the like, and further contains a water-soluble compound and polyvinylpyrrolidone and / or dextran.

【００１８】本発明において、ヒトγ−グロブリンを感
作したラテックス粒子、水溶性化合物、並びにポリビニ
ルピロリドン及び／又はデキストランは、適当な媒体に
分散又は溶解して、試薬として使用することが好まし
い。この場合、試薬の構成としては次の形態が考えられ
る。 ヒトγ−グロブリン感作ラテックス粒子、ポリビニル
ピロリドン（及び／又はデキストラン）及び水溶性化合
物を共に同一の媒体に分散又は溶解させた試薬（１液型
のラテックス試薬）。 ヒトγ−グロブリン感作ラテックス粒子を媒体に分散
させた試薬（ラテックス試薬）と、ポリビニルピロリド
ン（及び／又はデキストラン）及び水溶性化合物を共に
同一の媒体に溶解させた試薬とからなる２液型の試薬。 ヒトγ−グロブリン感作ラテックス粒子及び水溶性化
合物を共に同一の媒体に分散又は溶解させた試薬（ラテ
ックス試薬）と、ポリビニルピロリドン（及び／又はデ
キストラン）を媒体に溶解させた試薬とからなる２液型
の試薬。 ヒトγ−グロブリン感作ラテックス粒子及びポリビニ
ルピロリドン（及び／又はデキストラン）を共に同一の
媒体に分散又は溶解させた試薬（ラテックス試薬）と、
水溶性化合物を媒体に溶解させた試薬とからなる２液型
の試薬。 ヒトγ−グロブリン感作ラテックス粒子を媒体に分散
させた試薬（ラテックス試薬）と、水溶性化合物を媒体
に溶解させた試薬と、ポリビニルピロリドン（及び／又
はデキストラン）を媒体に溶解させた試薬とからなる３
液型の試薬。 これらのうち、構成、、が好ましい。In the present invention, the human γ-globulin-sensitized latex particles, water-soluble compound, and polyvinylpyrrolidone and / or dextran are preferably dispersed or dissolved in an appropriate medium and used as reagents. In this case, the reagent may have the following forms. A reagent in which human γ-globulin-sensitized latex particles, polyvinylpyrrolidone (and / or dextran) and a water-soluble compound are both dispersed or dissolved in the same medium (one-pack type latex reagent). Two-component type consisting of a reagent in which human γ-globulin-sensitized latex particles are dispersed in a medium (latex reagent) and a reagent in which polyvinylpyrrolidone (and / or dextran) and a water-soluble compound are both dissolved in the same medium reagent. Two liquids consisting of a reagent (latex reagent) in which both human γ-globulin-sensitized latex particles and a water-soluble compound are dispersed or dissolved in the same medium, and a reagent in which polyvinylpyrrolidone (and / or dextran) is dissolved in the medium Type of reagents. A reagent (latex reagent) in which both human γ-globulin-sensitized latex particles and polyvinylpyrrolidone (and / or dextran) are dispersed or dissolved in the same medium,
A two-component type reagent comprising a water-soluble compound dissolved in a medium. From a reagent in which human γ-globulin-sensitized latex particles are dispersed in a medium (latex reagent), a reagent in which a water-soluble compound is dissolved in a medium, and a reagent in which polyvinylpyrrolidone (and / or dextran) is dissolved in a medium Become 3
Liquid type reagent. Of these, the configuration is preferable.

【００１９】上記の分散又は溶解に用いられる媒体とし
ては、緩衝液が好ましく、該緩衝液としては、リン酸緩
衝液、リン酸−クエン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリ
ス−塩酸緩衝液などが好ましく、ｐＨは６〜９が好まし
い。また、適宜、牛血清アルブミン（以下ＢＳＡとい
う）、塩濃度調整のための塩化ナトリウム等の塩、粘度
調整のための糖類等を添加することができる。The medium used for the above-mentioned dispersion or dissolution is preferably a buffer solution, and examples of the buffer solution include a phosphate buffer solution, a phosphate-citrate buffer solution, a glycine buffer solution and a Tris-hydrochloric acid buffer solution. The pH is preferably 6-9. In addition, bovine serum albumin (hereinafter referred to as BSA), salts such as sodium chloride for adjusting salt concentration, sugars for adjusting viscosity, and the like can be added as appropriate.

【００２０】本発明において、試料、ヒトγ−グロブリ
ン感作ラテックス粒子、水溶性化合物並びにポリビニル
ピロリドン及び／又はデキストランは、適宜の順序で混
合される。In the present invention, the sample, human γ-globulin-sensitized latex particles, water-soluble compound and polyvinylpyrrolidone and / or dextran are mixed in an appropriate order.

【００２１】本発明における抗原−抗体反応の反応温度
は、４〜５０℃が好ましく、２５〜３７℃がより好まし
い。反応時間は短くなると反応が不十分となり、長くな
ると短時間で測定できるという利点が失われるので、１
０秒〜１５分が好ましい。The reaction temperature of the antigen-antibody reaction in the present invention is preferably 4 to 50 ° C, more preferably 25 to 37 ° C. If the reaction time becomes short, the reaction becomes insufficient, and if it becomes long, the advantage of measuring in a short time is lost.
0 second to 15 minutes is preferable.

【００２２】本発明において、抗原−抗体反応によるラ
テックス凝集反応は、光学的強度によって測定される。
上記光学的強度としては、散乱光強度、吸光度又は粒子
数のいずれでも良い。測定波長は、一般に３００〜１０
００ｎｍが好ましい。In the present invention, the latex agglutination reaction due to the antigen-antibody reaction is measured by optical intensity.
The optical intensity may be any of scattered light intensity, absorbance or the number of particles. The measurement wavelength is generally 300 to 10
00 nm is preferred.

【００２３】ＲＦの定量は、ＲＦ既知量の試料（例え
ば、ＲＦ標準血清とその希釈系列）について、前記の測
定を行い、その測定値とＲＦ量とから検量線を作成して
おき、ＲＦ未知量の試料について同一条件で測定した測
定値から該検量線によって対応するＲＦ量を求めること
によって行う。For the quantification of RF, the above-mentioned measurement is performed on a sample having a known RF amount (for example, RF standard serum and its dilution series), and a calibration curve is prepared from the measured value and the RF amount. The amount of the sample is measured under the same conditions, and the corresponding RF amount is obtained from the calibration curve.

【００２４】[0024]

【発明の実施の形態】本発明の実施例につき説明する。 （実施例１、２及び比較例１）ヒトγ−グロブリン感作
ラテックス粒子及び水溶性化合物を共に同一の媒体に分
散又は溶解させた試薬をラテックス試薬、ポリビニルピ
ロリドン又はポリエチレングリコールを溶解させた試薬
緩衝液をラテックス希釈液とする２液型試薬で、ＲＦ陽
性血清希釈列を測定し、反応性を確認した。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Embodiments of the present invention will be described. (Examples 1 and 2 and Comparative Example 1) Human γ-globulin-sensitized latex particles and a water-soluble compound are both dispersed or dissolved in the same medium, and a reagent buffer is prepared by dissolving a latex reagent, polyvinylpyrrolidone or polyethylene glycol. An RF-positive serum dilution series was measured with a two-pack type reagent in which the solution was a latex diluent, and the reactivity was confirmed.

【００２５】具体的には以下のようにして行った。 ラテックス試薬の調製 粒径約０．１５μｍのポリスチレンラテックス粒子（積
水化学工業社製）１ｇに、ヒトγ−グロブリン（ＵＳＢ
社製）を０．２ｇの割合で吸着させ、塩化コリン（ナカ
ライテスク社製）を０．１Ｍ、ＢＳＡ（マイルス社製）
を１重量％及び塩化ナトリウムを０．１５Ｍの濃度で含
有する０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）中にラテ
ックス粒子濃度５．０ｇ／ｌとなるように懸濁させてラ
テックス試薬を得た。Specifically, it was carried out as follows. Preparation of latex reagent 1 g of polystyrene latex particles (manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.) having a particle size of about 0.15 μm was added to human γ-globulin (USB
0.2 g of choline chloride (manufactured by Nacalai Tesque) and BSA (manufactured by Miles)
Is suspended in 0.05M phosphate buffer (pH 6.5) containing 1% by weight of sodium chloride and 0.15M of sodium chloride to a latex particle concentration of 5.0 g / l to obtain a latex reagent. It was

【００２６】ラテックス希釈液の調製 ＢＳＡを１重量％及び塩化ナトリウムを０．１５Ｍの濃
度で含有する０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）中
に、ポリビニルピロリドン２００００（ＢＡＳＦ社製）
を０．４重量％で溶解したもの（実施例１で使用）、ポ
リビニルピロリドン１０００００（ＢＡＳＦ社製）を
０．１重量％で溶解したもの（実施例２で使用）又はポ
リエチレングリコール６０００（和光純薬社製）を０．
９重量％で溶解したもの（比較例１で使用）を用いた。Preparation of latex diluent Polyvinylpyrrolidone 20000 (manufactured by BASF) in 0.05M phosphate buffer (pH 6.5) containing 1% by weight of BSA and 0.15M of sodium chloride.
Dissolved in 0.4 wt% (used in Example 1), polyvinylpyrrolidone 100000 (manufactured by BASF) dissolved in 0.1 wt% (used in Example 2) or polyethylene glycol 6000 (Wako Pure) Yakusha).
The one dissolved in 9% by weight (used in Comparative Example 1) was used.

【００２７】試料の調製 ＲＦ陽性血清（ＩＩＣ社製、約１２０ＩＵ／ｍｌ）を、
生理食塩水により希釈し１／５（約２４ＩＵ／ｍｌ）か
ら５／５（希釈せず。約１２０ＩＵ／ｍｌ）までの５段
階希釈系列を作成した。なお、１／５、２／５、３／
５、４／５、及び５／５に希釈したものを、それぞれＲ
Ｆ希釈率０．２、０．４、０．６、０．８及び１．０と
いうことにする。また、別に、ＲＦ濃度０．０ＩＵ／ｍ
ｌのための試料として生理食塩水単独のものを用意し
た。Preparation of Sample RF positive serum (manufactured by IIC, about 120 IU / ml) was added to
Diluted with physiological saline to make a 5-step dilution series from 1/5 (about 24 IU / ml) to 5/5 (not diluted. About 120 IU / ml). In addition, 1/5, 2/5, 3 /
Diluted to 5, 4/5, and 5/5, respectively, R
The F dilution ratios will be 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 and 1.0. Also, separately, RF concentration 0.0IU / m
As a sample for 1, a physiological saline solution alone was prepared.

【００２８】測定方法 測定には、日立７１５０型自動分析装置（日立製作所社
製）を用いた。以下にその手順を示す。まず、上記装置
の反応セルに水のみを添加し、波長５７０ｎｍにおける
その吸光度を測定した。得られた測定値を、以下、水ブ
ランク値という。次に、上記装置の別の反応セルに試料
３μｌを添加し、このセルに第１試薬（上記のラテック
ス希釈液）３５０μｌを添加し混合した。このセルに上
記第１試薬の添加から５分後に第２試薬（上記のラテッ
クス試薬）を５０μｌ添加し混合した。上記第２試薬の
添加の５分後に混合液の波長５７０ｎｍにおける吸光度
を測定した。得られた測定値から上記水ブランク値を差
し引いた値を反応した試料の吸光度とした。なお、上記
の反応温度は３７℃で行った。Measurement method A Hitachi 7150 type automatic analyzer (manufactured by Hitachi, Ltd.) was used for the measurement. The procedure is described below. First, only water was added to the reaction cell of the above apparatus, and the absorbance at a wavelength of 570 nm was measured. The obtained measured value is hereinafter referred to as a water blank value. Next, 3 μl of the sample was added to another reaction cell of the above apparatus, and 350 μl of the first reagent (the above latex diluent) was added to and mixed with this cell. Five minutes after the addition of the first reagent, 50 μl of the second reagent (the above latex reagent) was added to and mixed with the cell. Five minutes after the addition of the second reagent, the absorbance of the mixed solution at a wavelength of 570 nm was measured. The value obtained by subtracting the water blank value from the obtained measured value was defined as the absorbance of the reacted sample. The reaction temperature was 37 ° C.

【００２９】測定結果 上記の測定方法に従い、上記に示した各希釈系列の試
料を用い、上記に記したラテックス試薬と、に記し
たラテックス希釈液を用いて、反応した試料の吸光度を
測定した。得られた試料の吸光度を１００００倍した値
と、試料のＲＦ希釈率との関係を示す検量線を図１に示
した。図１より、本発明の定量法によると直線性の高い
検量線が得られることが分かった。これに対して比較例
１の従来法では、検量線はＳ字曲線となった。Measurement Results According to the above-mentioned measurement method, the absorbance of the reacted sample was measured using the above-mentioned dilution series samples and the latex reagent described above and the latex diluent described in the above. A calibration curve showing the relationship between the value obtained by multiplying the absorbance of the obtained sample by 10000 and the RF dilution rate of the sample is shown in FIG. From FIG. 1, it was found that a highly linear calibration curve can be obtained by the quantification method of the present invention. On the other hand, in the conventional method of Comparative Example 1, the calibration curve was an S-shaped curve.

【００３０】（実施例３、４及び比較例２）上記実施例
１のラテックス試薬の調製の項における、０．１Ｍ塩
化コリンの代わりに、０．１２Ｍ塩化アセチルコリン
（ナカライテスク社製）としたこと、及びラテックス
希釈液の調製の項における、ポリビニルピロリドン２０
０００を０．４重量％で溶解したものの代わりに、ポリ
ビニルピロリドン２００００（ＢＡＳＦ社製）を０．８
重量％で溶解したもの（実施例３で使用）、ポリビニル
ピロリドン１０００００（ＢＡＳＦ社製）を０．３重量
％で溶解したもの（実施例４で使用）又はポリエチレン
グリコール６０００（和光純薬社製）を０．９重量％で
溶解したもの（比較例２で使用）としたことの他は、実
施例１と同様にして、上記実施例１のに示した各希釈
系列の試料を用い、反応した試料の吸光度を測定した。
得られた試料の吸光度を１００００倍した値と、試料の
ＲＦ希釈率との関係を示す検量線を図２に示した。図２
より、本発明の定量法によると直線性の高い検量線が得
られることが分かった。これに対して比較例２の従来法
では、検量線はＳ字曲線となった。(Examples 3, 4 and Comparative Example 2) 0.12M acetylcholine chloride (manufactured by Nacalai Tesque) was used instead of 0.1M choline chloride in the section of the preparation of the latex reagent of Example 1 above. And polyvinylpyrrolidone 20 in the section of preparation of latex diluent
Of polyvinylpyrrolidone 20000 (manufactured by BASF) instead of the solution of 000 dissolved in 0.4% by weight.
Dissolved in wt% (used in Example 3), polyvinylpyrrolidone 100000 (manufactured by BASF) dissolved in 0.3 wt% (used in Example 4) or polyethylene glycol 6000 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) Was dissolved in 0.9% by weight (used in Comparative Example 2), and the reaction was carried out in the same manner as in Example 1 using the samples of the respective dilution series shown in Example 1 above. The absorbance of the sample was measured.
A calibration curve showing the relationship between the value obtained by multiplying the absorbance of the obtained sample by 10000 and the RF dilution rate of the sample is shown in FIG. FIG.
From this, it was found that a highly linear calibration curve can be obtained by the quantification method of the present invention. On the other hand, in the conventional method of Comparative Example 2, the calibration curve was an S-shaped curve.

【００３１】（実施例５、６及び比較例３）上記実施例
１のラテックス希釈液の調製の項における、ポリビニ
ルピロリドン２００００を０．４重量％で溶解したもの
の代わりに、デキストラン２００００（和光純薬社製）
を０．８重量％で溶解したもの（実施例５で使用）、デ
キストラン２０００００（和光純薬社製）を０．３重量
％で溶解したもの（実施例６で使用）又はポリエチレン
グリコール６０００（和光純薬社製）を０．９重量％で
溶解したもの（比較例３で使用）としたことの他は、実
施例１と同様にして、上記実施例１のに示した各希釈
系列の試料を用い、反応した試料の吸光度を測定した。
得られた試料の吸光度を１００００倍した値と、試料の
ＲＦ希釈率との関係を示す検量線を図３に示した。図３
より、本発明の定量法によると直線性の高い検量線が得
られることが分かった。これに対して比較例３の従来法
では、検量線はＳ字曲線となった。(Examples 5 and 6 and Comparative Example 3) Dextran 20000 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used in place of the polyvinylpyrrolidone 20000 dissolved in 0.4% by weight in the preparation of the latex diluted solution of Example 1 above. (Made by the company)
Dissolved in 0.8 wt% (used in Example 5), dextran 200,000 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) dissolved in 0.3 wt% (used in Example 6) or polyethylene glycol 6000 (sum Kojun Pure Chemical Co., Ltd.) was dissolved in 0.9% by weight (used in Comparative Example 3), except that each sample of each dilution series shown in the above-mentioned Example 1 was used in the same manner as in Example 1. Was used to measure the absorbance of the reacted sample.
A calibration curve showing the relationship between the value obtained by multiplying the absorbance of the obtained sample by 10000 and the RF dilution rate of the sample is shown in FIG. FIG.
From this, it was found that a highly linear calibration curve can be obtained by the quantification method of the present invention. On the other hand, in the conventional method of Comparative Example 3, the calibration curve was an S-shaped curve.

【００３２】（実施例７、８及び比較例４）上記実施例
３のラテックス希釈液の調製の項における、ポリビニ
ルピロリドン２００００を０．８重量％で溶解したもの
の代わりに、デキストラン２００００（和光純薬社製）
を０．８重量％で溶解したもの（実施例７で使用）、デ
キストラン２０００００（和光純薬社製）を０．３重量
％で溶解したもの（実施例８で使用）又はポリエチレン
グリコール６０００（和光純薬社製）を０．９重量％で
溶解したもの（比較例４で使用）としたことの他は、実
施例３と同様にして、上記実施例１のに示した各希釈
系列の試料を用い、反応した試料の吸光度を測定した。
得られた試料の吸光度を１００００倍した値と、試料の
ＲＦ希釈率との関係を示す検量線を図４に示した。図４
より、本発明の定量法によると直線性の高い検量線が得
られることが分かった。これに対して比較例４の従来法
では、検量線はＳ字曲線となった。(Examples 7 and 8 and Comparative Example 4) Dextran 20000 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used instead of polyvinyl pyrrolidone 20000 dissolved in 0.8% by weight in the section of the preparation of the latex diluted solution of Example 3 above. (Made by the company)
Dissolved in 0.8 wt% (used in Example 7), dextran 200,000 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) dissolved in 0.3 wt% (used in Example 8) or polyethylene glycol 6000 (sum Kojun Pure Chemical Co., Ltd.) was dissolved in 0.9% by weight (used in Comparative Example 4) except that it was a sample of each dilution series shown in the above-mentioned Example 1 in the same manner as in Example 3. Was used to measure the absorbance of the reacted sample.
A calibration curve showing the relationship between the value obtained by multiplying the absorbance of the obtained sample by 10000 and the RF dilution rate of the sample is shown in FIG. FIG.
From this, it was found that a highly linear calibration curve can be obtained by the quantification method of the present invention. On the other hand, in the conventional method of Comparative Example 4, the calibration curve was an S-shaped curve.

【００３３】[0033]

【発明の効果】本発明の構成は上記の通りであり、本発
明によれば、試料及びヒトγ−グロブリンを感作したラ
テックス粒子を混合して混合液とし、抗原−抗体反応に
よるラテックス凝集反応を起こさせて、光学的強度を測
定し、この測定値から試料中のリウマチ因子を定量する
リウマチ因子定量法における、ＲＦの濃度とラテックス
凝集度とから得られる検量線がより直線状となり、検量
線の作成が容易となり、定量精度も向上する。The constitution of the present invention is as described above. According to the present invention, a latex agglutination reaction by an antigen-antibody reaction is carried out by mixing a sample and latex particles sensitized with human γ-globulin into a mixed solution. Then, the optical intensity is measured, and in the rheumatoid factor quantification method for quantifying the rheumatoid factor in the sample from this measured value, the calibration curve obtained from the RF concentration and the latex agglutination degree becomes more linear, and The line can be created easily and the quantitative accuracy is improved.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】実施例１、２及び比較例１の、反応した試料の
吸光度を１００００倍した値と、試料のＲＦ希釈率との
関係を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the relationship between a value obtained by multiplying the absorbance of a reacted sample by 10000 and the RF dilution rate of the sample in Examples 1 and 2 and Comparative Example 1.

【図２】実施例３、４及び比較例２の、反応した試料の
吸光度を１００００倍した値と、試料のＲＦ希釈率との
関係を示すグラフである。FIG. 2 is a graph showing the relationship between the value obtained by multiplying the absorbance of the reacted sample by 10,000 times and the RF dilution ratio of the sample in Examples 3 and 4 and Comparative Example 2.

【図３】実施例５、６及び比較例３の、反応した試料の
吸光度を１００００倍した値と、試料のＲＦ希釈率との
関係を示すグラフである。FIG. 3 is a graph showing the relationship between the value obtained by multiplying the absorbance of the reacted sample by 10,000 times and the RF dilution rate of the sample in Examples 5 and 6 and Comparative Example 3.

【図４】実施例７、８及び比較例４の、反応した試料の
吸光度を１００００倍した値と、試料のＲＦ希釈率との
関係を示すグラフである。FIG. 4 is a graph showing the relationship between the value obtained by multiplying the absorbance of the reacted sample by 10000 and the RF dilution rate of the sample in Examples 7 and 8 and Comparative Example 4.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 試料及びヒトγ−グロブリンを感作した
ラテックス粒子を混合して混合液とし、該混合液中にト
リアルキルアミン、その塩及び第４級アンモニウム塩か
らなる群より選ばれる少なくとも一種の水溶性化合物並
びにポリビニルピロリドン及び／又はデキストランを共
存させて抗原−抗体反応によるラテックス凝集反応を起
こさせて、光学的強度を測定し、この測定値から試料中
のリウマチ因子を定量することを特徴とするリウマチ因
子の定量法。1. A sample and latex particles sensitized with human γ-globulin are mixed to prepare a mixed solution, and at least one selected from the group consisting of trialkylamine, a salt thereof and a quaternary ammonium salt is contained in the mixed solution. Water-soluble compound and polyvinylpyrrolidone and / or dextran are allowed to coexist to cause a latex agglutination reaction by an antigen-antibody reaction, the optical intensity is measured, and the rheumatoid factor in the sample is quantified from the measured value. Quantitative method for rheumatoid factor.