JPH09257799A - 免疫学的梅毒診断試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 大量生産可能で、安定した抗原活性を持つ４
７ｋＤａ抗原が、安定性良く担体に担持され、従来方法
と同等以上の感度を有する免疫学的梅毒診断試薬を提供
する。 【解決手段】 カルボキシル基を有する不溶性担体
（例、スチレン−メタクリル酸共重合体ラテックス）
に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
カルボジイミド塩酸塩を用いてスペーサー（例、γ−ア
ミノ酪酸、ε−アミノカプロン酸）が共有結合されてお
り、該スペーサーに、遺伝子組換え手法を用いて得られ
た、梅毒トレポネーマの４７ｋＤａ抗原が、１−エチル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
塩酸塩を用いて共有結合されている不溶性担体からなる
免疫学的梅毒診断試薬。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、梅毒抗原が結合さ
れた不溶性担体を利用して、抗梅毒トレポネーマ抗体と
の抗原抗体反応に基づいて同抗体を測定する免疫学的梅
毒診断試薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】梅毒トレポネーマ（Treponema Pallidu
m）抗原を不溶性担体に担持させ、抗梅毒トレポネーマ
抗体との抗原抗体反応により生じた不溶性担体の凝集の
度合いを検出することにより該抗体を測定する免疫測定
法がある。このような測定方法としては、赤血球凝集反
応法、ラテックス凝集法が知られている。

【０００３】従来、これらの方法に用いられる梅毒トレ
ポネーマ抗原は梅毒菌体から抽出されたものが用いられ
ていた（特開平２−２３４０６３号公報）。しかし、梅
毒菌体はin vitroでの培養が現在の技術では不可能であ
り、in vivo であってもウサギ睾丸中での培養のみ可能
であるため、大量の抗原を得ることが困難であった。ま
た、菌体からの精製過程も煩雑であり、精製毎に診断試
薬作成に必要な抗原活性があるものが得られるとは限ら
なかった。

【０００４】また、梅毒トレポネーマの表面抗原タンパ
ク質には種々の分子量のものが存在することが知られて
おり、その一つである４７ｋＤａ抗原は病原体特異的で
あることが知られ、そのＤＮＡ配列、アミノ酸配列はす
でに公知であり（Infectionand Immunity 57(1),196-20
3(1989)) 、その遺伝子組換え手法を用いた生産方法が
提案されるとともに、得られた４７ｋＤａ抗原を用いて
抗梅毒トレポネーマ抗体を検出する方法も提案されてい
る（特表平２−５００４０３号公報）。この方法を使用
すれば、梅毒トレポネーマ抗原を大量に、且つ安定的に
得ることが可能と考えられる。しかし、特表平２−５０
０４０３号公報には、抗梅毒トレポネーマ抗体を検出す
る方法の詳細については、記載されていない。

【０００５】また、梅毒トレポネーマ抗原を不溶性担体
へ担持する方法には、従来、物理吸着法が用いられてき
たが、疎水性相互作用によって担持しているため、担持
に際して界面活性剤のような疎水性相互作用を弱める物
質が存在すると該抗原を担持しにくいという欠点があっ
た。また、該抗原が担持された不溶性担体を長期間保存
すると該抗原が担体から脱落していく可能性があるとい
う欠点があった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
を解決するものであり、その目的は、大量生産可能で、
安定した抗原活性を持つ４７ｋＤａ抗原が、安定性良く
担体に担持され、従来方法と同等以上の感度を有する免
疫学的梅毒診断試薬を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明の免疫学的梅毒診
断試薬は、活性基を有する不溶性担体の該活性基にスペ
ーサーが共有結合されており、該スペーサーに、遺伝子
組換え手法を用いて得られた、梅毒トレポネーマの４７
ｋＤａ抗原が共有結合されている不溶性担体からなるこ
とを特徴とする。

【０００８】本発明に用いられる梅毒トレポネーマの４
７ｋＤａ抗原は遺伝子組換え手法を用いて、梅毒菌体遺
伝子からクローニングされたものであれば、そのクロー
ニング法はどのような方法でもよい。梅毒トレポネーマ
の４７ｋＤａ抗原を得るための方法の例を挙げると、４
７ｋＤａ抗原のＤＮＡ配列は、前述のように公知である
ので、例えば、ＰＣＲ法により４７ｋＤａ抗原に対する
ＤＮＡを増幅、精製し、これを適当な発現ベクターに組
み込む。このベクターを大腸菌に導入し、大腸菌に大量
生産させる方法が挙げられる。大腸菌から効率よく４７
ｋＤａ抗原を精製するには、ベクターとして特公平６−
８１５９６号公報に記載されているようなグルタチオン
−Ｓ−トランスフェラーゼ（以下、ＧＳＴという）遺伝
子を含むものを用いるのが好ましい。この方法を用いる
場合は、ＧＳＴ遺伝子の後に４７ｋＤａ抗原遺伝子を挿
入し、大腸菌にＧＳＴと４７ｋＤａ抗原の融合タンパク
質として生産させる。十分に生産させた後、菌体を破壊
し、リゼイドを固定グルタチオンカラムと接触させるこ
とにより融合タンパク質を分離する。次いで、この融合
タンパク質を開裂させて４７ｋＤａ抗原を得る。

【０００９】本発明に用いられる不溶性担体としては、
例えば、有機高分子粉末、微生物、血球、細胞膜片、プ
ラスチック製マイクロタイタープレート等が挙げられ、
スペーサーと共有結合を形成し得る活性基、例えば、カ
ルボキシル基、アミノ基、チオール基等を有しているこ
とが必要である。この場合、不溶性担体が上記の活性基
をもともと有しているときは、そのままでよいが、上記
活性基を有していないときは、不溶性担体に、例えば、
酸化、還元、修飾などの反応を行って上記活性基が導入
されたものでもよい。

【００１０】上記有機高分子粉末としては、例えば、不
溶性アガロース、セルロース、不溶性デキストラン等の
天然高分子粉末、ポリスチレン、スチレン−メタクリル
酸共重合体、スチレン−スチレンスルホン酸塩共重合
体、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合
体、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビ
ニル−アクリル酸エステル共重合体等の合成高分子粉末
等が挙げられ、特に合成高分子粉末を均一に懸濁させた
ラテックスが好ましい。

【００１１】上記ラテックスを用いる場合、スペーサー
と共有結合を形成し得る活性基としてはカルボキシル
基、アミノ基が好ましい。粒径は、０．１〜１．０μｍ
が好ましく、０．１〜０．５μｍがより好ましい。

【００１２】カルボキシル基を有するラテックスを用い
る場合、そのカルボキシル基の量は、表面荷電が０．０
３〜０．７５ｍｅｑＣＯＯ^- ／ｇが好ましく、０．０５
〜０．４０ｍｅｑＣＯＯ^- ／ｇがより好ましい。

【００１３】本発明に用いられるスペーサーとは、不溶
性担体と４７ｋＤａ抗原との間に介在して、不溶性担体
と４７ｋＤａ抗原とを結合させるものであり、不溶性担
体及び４７ｋＤａ抗原上の活性基と共有結合を生じるも
のである。このようなスペーサーとしては、スペーサー
と４７ｋＤａ抗原のカルボキシル基とが結合される場合
は、β−アミノアラニン、γ−アミノ酪酸、ε−アミノ
カプロン酸、グルタミン酸、ｐ−アミノベンゾエート等
のアミノ酸が好ましい。またスペーサーと４７ｋＤａ抗
原のアミノ基とが結合される場合は、ジアミノエタン、
ヘキサメチレンジアミン、ｐ−アミノアニリン等のジア
ミンが好ましい。本発明において、スペーサーとして特
に好ましいものは、４７ｋＤａ抗原がスペーサーを介し
て、より安定性良く担体に結合される点からγ−アミノ
酪酸、ε−アミノカプロン酸である。

【００１４】本発明の免疫学的梅毒診断試薬を製造する
には、例えば、活性基を有する不溶性担体に１−エチル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
塩酸塩（以下、ＥＤＣという）をカップリング剤として
用いて、γ−アミノ酪酸又はε−アミノカプロン酸など
のスペーサーを共有結合し、次に、更にＥＤＣをカップ
リング剤として用いてスペーサーに４７ｋＤａ抗原を共
有結合する方法が挙げられる。上記カップリング剤はＥ
ＤＣに限定されるわけではなく、水溶性カルボジイミド
であればいずれも使用可能であり、例えば、１−シクロ
ヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミ
ドメト−ｐ−トルエンスルホン酸塩、１−エチル−３−
（３−ジエチルアミノプロピル）カルボジイミド過塩素
酸塩等が挙げられるが、溶解度、反応性等の点からＥＤ
Ｃを用いることが好ましい。

【００１５】上記ＥＤＣによるカップリング反応の反応
温度は、低くなると十分に反応が進行しなくなり、高く
なると４７ｋＤａ抗原が変性し抗原性を失う恐れがある
ので、０℃〜４０℃が好ましい。

【００１６】本発明の免疫学的梅毒診断試薬は、検体と
混合されて使用されることにより、検体中の抗梅毒トレ
ポネーマ抗体との抗原抗体反応に基づいて同抗体を測定
することができる。

【００１７】上記の抗原抗体反応に際しては、検体を、
ｐＨ５．０〜９．０の緩衝液を用いて希釈してもよい。
上記の検体の希釈液としては、例えば、リン酸緩衝液、
グリシン緩衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、ク
エン酸緩衝液、トリス緩衝液などが挙げられる。

【００１８】上記検体希釈液には、測定感度の向上、及
び抗原抗体反応の促進を目的として種々の添加剤を添加
することができる。上記添加剤としては、例えば、特開
平２−１７３５６７号公報に記載されたメチルセルロー
ス、エチルセルロース等のアルキル化多糖類、特開平５
−１８０８３８号公報に記載されたプルラン、ポリビニ
ルピロリドン等が挙げられる。

【００１９】また、上記検体希釈液には、非特異反応抑
制を目的として牛血清アルブミン、卵性アルブミン等を
添加することもできる。

【００２０】本発明の免疫学的梅毒診断試薬によって、
抗梅毒トレポネーマ抗体を測定する際の測定系として
は、例えば、前記不溶性担体と抗梅毒トレポネーマ抗体
との反応による前記不溶性担体の凝集の程度を測定する
ものが挙げられ、特に、不溶性担体としてラテックスを
用いるラテックス凝集反応系が好ましい。

【００２１】上記反応により生じた凝集を測定する方法
としては、凝集の程度を光学的に観察する方法あるいは
目視により観察する方法などが挙げられる。

【００２２】具体的には、光学的に観察する方法におい
ては、検体を検体希釈液で希釈した液に、梅毒トレポネ
ーマの４７ｋＤａ抗原が担持された不溶性担体（免疫学
的梅毒診断試薬）を含有する液（通常、リン酸緩衝液、
グリシン緩衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、ク
エン酸緩衝液、トリス緩衝液など）を混合した後、該混
合液の散乱光強度、吸光度又は透過光強度を測定する。
測定の波長は３００〜２４００ｎｍが使用でき、測定方
法は公知の方法に従い、用いる不溶性担体の粒径、濃
度、反応時間によって散乱光強度、吸光度、又は透過光
強度の増加もしくは減少を測定する。またこれらの方法
は単独で用いられても併用されてもよい。

【００２３】目視により観察する方法においては、通
常、検体と上記抗原が担持された不溶性担体を含む液を
判定板上で混合し、揺り動かした後、凝集の有無を判定
する。判定には単に肉眼で判定する以外に、ビデオカメ
ラで撮影し画像処理を施すことによって判定することも
できる。

【００２４】前記抗原抗体反応は通常の条件で行われ、
反応媒体としては、例えば、上記のように、リン酸緩衝
液、クエン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液等
が用いられる。反応時のｐＨは、４．５〜１０．０が好
ましく、さらに好ましくは５．８〜８．０である。反応
時の温度は、０〜５０℃が好ましく、さらに好ましくは
２０〜４０℃である。反応時間は適宜決められる。

【００２５】

【発明の実施の形態】本発明を実施例及び比較例につき
説明する。 参考例１ 梅毒トレポネーマの４７ｋＤａ抗原の調製 トレポネーマパリダム（Treponema Pallidum）継代ウサ
ギ睾丸の破砕物（常磐化学社製）より、トレポネーマパ
リダム菌体を抽出し、ゲノムＤＮＡを抽出した。すでに
４７ｋＤａ抗原のＤＮＡ配列は既知であるので、それを
もとにＤＮＡ合成装置を用いてプライマーを作成した。
前記で抽出されたゲノムＤＮＡを鋳型とし、上記のプラ
イマーを用いて、ＰＣＲ法により４７ｋＤａ抗原のＤＮ
Ａ断片を得た。次に、ＧＳＴとの融合タンパク質を発現
するために作られたベクターｐＧＥＸ−４Ｔ−３（ファ
ルマシア社製）に、上記のＤＮＡ断片を挿入し、ｐＧＥ
Ｘ−４Ｔ−３−４７ｋと命名した。

【００２６】次に、ｐＧＥＸ−４Ｔ−３−４７ｋを大腸
菌に導入し、培養した。培養液にイソプロピル−β−
（−）−チオガラクトピラノシドを加えることにより、
４７ｋＤａ抗原とＧＳＴの融合タンパク質の発現を誘導
した。十分に融合タンパク質が発現した大腸菌を超音波
処理により菌体を破砕し、遠心分離により細胞膜、核な
どを除いた上清に、グルタチオンセファロース４Ｂ（フ
ァルマシア社製）を加え、一晩放置し、融合タンパク質
をグルタチオンセファロース４Ｂに吸着させた。遠心分
離により融合タンパク質が吸着したグルタチオンセファ
ロース４Ｂを回収し、これをカラムに充填した。数回洗
浄の後、グルタチオン溶液を流すことにより融合タンパ
ク質がグルタチオンセファロース４Ｂから遊離し溶出し
た。こうして精製された４７ｋＤａ抗原−ＧＳＴ融合タ
ンパク質溶液にトロンビン溶液を添加し、４７ｋＤａ抗
原とＧＳＴの結合を切断した。この結果、４７ｋＤａ抗
原、ＧＳＴ及びトロンビンを含む溶液が得られた。この
溶液をグルタチオンセファロース４Ｂカラムに流すこと
によりＧＳＴを除去した。さらにヘパリンセファロース
ＣＬ−６Ｂ（ファルマシア社製）を充填したカラムに流
すことにより、トロンビンを除去し、４７ｋＤａ抗原を
得た。

【００２７】実施例１ （１）ラテックスへのスペーサーの結合 スチレン−メタクリル酸共重合体ラテックス（カルボキ
シル基０．２５ｍｅｑＣＯＯ^- ／ｇ、粒径０．４μｍ、
積水化学工業社製）を５％（ｗ／ｖ）含有する水懸濁液
１５０μｌに対し、ｐＨ５．０のリン酸緩衝液（以下、
ＰＢ緩衝液という）にＥＤＣを１５％（ｗ／ｖ）の割合
で溶解した溶液を１ｍｌ加え、室温で５時間攪拌した。
遠心分離により未反応のＥＤＣを除去し、ＰＢ緩衝液で
２回洗浄後、１ｍｌのｐＨ９．０のホウ酸緩衝液（以
下、ＢＢ緩衝液という）に懸濁した。この懸濁液に、Ｂ
Ｂ緩衝液にγ−アミノ酪酸を１０％（ｗ／ｖ）の割合で
溶解した溶液を１ｍｌ加え、室温で２４時間攪拌した。
遠心分離により未反応のγ−アミノ酪酸を除去し、ＢＢ
緩衝液で２回洗浄後、１ｍｌのＰＢ緩衝液に懸濁して、
ラテックスのカルボキシル基とγ−アミノ酪酸のアミノ
基が共有結合された、スペーサー結合ラテックスを得
た。

【００２８】（２）４７ｋＤａ抗原の結合 上記スペーサー結合ラテックス１ｍｌに、ＰＢ緩衝液に
ＥＤＣを３０％（ｗ／ｖ）の割合で溶解した溶液を１ｍ
ｌ加え、室温で５時間攪拌した。遠心分離により未反応
のＥＤＣを除去し、ＰＢ緩衝液で２回洗浄後、２ｍｌの
ＢＢ緩衝液に懸濁した。この懸濁液に、リン酸緩衝液
（ｐＨ７．２）に参考例１で調製した４７ｋＤａ抗原が
５００μｇ／ｍｌになるように溶解された溶液を１００
μｌ加え、室温で２４時間攪拌した。遠心分離により未
反応の４７ｋＤａ抗原を除去し、ＢＢ緩衝液で２回洗浄
後、ウシ血清アルブミン（以下、ウシ血清アルブミンを
ＢＳＡという）を１％（ｗ／ｖ）含有するＰＢＳ緩衝液
（０．９重量％塩化ナトリウム−リン酸緩衝液、ｐＨ
７．４。以下で用いられるＰＢＳ緩衝液も、全て同様の
組成である）の２ｍｌに懸濁し、室温で１時間攪拌し、
ブロッキング（非特異的反応を防ぐために、ラテックス
表面にＢＳＡを吸着させること）を行った。次に、遠心
分離により未反応のＢＳＡを除去し、ＢＳＡを１％（ｗ
／ｖ）含有するＰＢＳ緩衝液４ｍｌに懸濁し、梅毒トレ
ポネーマ抗原結合ラテックス（本発明の免疫学的梅毒診
断試薬）液を得た。

【００２９】（３）感度の測定 得られた梅毒トレポネーマ抗原結合ラテックス液の感度
を以下のようにして測定した。生化学自動分析装置（日
立７０５０形、日立製作所社製）により、０、５０、１
００、２５０、５００各タイターユニット（以下、Ｔ．
Ｕ．と略す）の標準梅毒トレポネーマ陽性血清を検体と
して測定した。測定条件は、温度３７℃、波長５７０ｎ
ｍとした。測定方法は、上記検体２０μｌを分注後、直
ちに検体希釈液（梅毒診断用試薬「メディエースＴＰＬ
Ａ」（積水化学工業社製）に含まれているものを用い
た。）３５０μｌを添加・混合し、次いで上記（２）で
得られた梅毒トレポネーマ抗原結合ラテックス液５０μ
ｌを添加・混合した。反応量は、上記ラテックス液添加
後８０秒から３２０秒の間の吸光度変化量とした。各検
体について、測定された吸光度変化量（△Ｏ．Ｄ．）を
１００００倍した値を図１に示した。なお、測定の繰り
返し数は３とし、図１にはその平均値を示した。

【００３０】実施例２ 実施例１におけるγ−アミノ酪酸を、ε−アミノカプロ
ン酸に代えたことの他は実施例１と同様にして、免疫学
的梅毒診断試薬を作製し、実施例１と同様にして、感度
の測定を行い、結果を図１に示した。

【００３１】比較例１ 実施例１における５００μｇ／ｍｌの４７ｋＤａ抗原を
１００μｌ用いたことに代えて、梅毒トレポネーマを接
種、培養したウサギ睾丸から精製した梅毒トレポネーマ
抗原が１００μｇ／ｍｌ濃度でリン酸緩衝液（ｐＨ７．
２）に溶解された溶液を１００μｌ用いたことの他は実
施例１と同様にして、梅毒トレポネーマ抗原結合ラテッ
クス液を作製し、実施例１と同様にして、感度の測定を
行い、結果を図１に示した。

【００３２】比較例２ この比較例では、４７ｋＤａ抗原をスペーサーを使用せ
ずに、ラテックスに、直接、共有結合させて免疫学的梅
毒診断試薬を作製し、その感度の測定を行った。 （１）抗原のラテックスへの直接結合 スチレン−メタクリル酸共重合体ラテックス（カルボキ
シル基０．２５ｍｅｑＣＯＯ^- ／ｇ、粒径０．４μｍ、
積水化学工業社製）を５％（ｗ／ｖ）含有する水懸濁液
１５０μｌに対し、８５０μｌのＰＢ緩衝液を加え攪拌
した。この液に、ＰＢ緩衝液にＥＤＣを３０％（ｗ／
ｖ）の割合で溶解した溶液を１ｍｌ加え、室温で５時間
攪拌した。遠心分離により未反応のＥＤＣを除去し、Ｐ
Ｂ緩衝液で２回洗浄後、２ｍｌのＢＢ緩衝液に懸濁し
た。この懸濁液に、リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）に参考
例１で調製した４７ｋＤａ抗原が５００μｇ／ｍｌにな
るように溶解された溶液を１００μｌ加え、室温で２４
時間攪拌した。遠心分離により未反応の４７ｋＤａ抗原
を除去し、ＢＢ緩衝液で２回洗浄後、ＢＳＡを１％（ｗ
／ｖ）含有するＰＢＳ緩衝液の２ｍｌに懸濁し、室温で
１時間攪拌し、ブロッキングを行った。次に、遠心分離
により未反応のＢＳＡを除去し、ＢＳＡを０．５％（ｗ
／ｖ）含有するＰＢＳ緩衝液４ｍｌに懸濁し、梅毒トレ
ポネーマ抗原結合ラテックス液を得た。

【００３３】（２）感度の測定 上記（１）で得られた梅毒トレポネーマ抗原結合ラテッ
クス液を使用したことの他は、実施例１の（３）と同様
にして、感度の測定を行い、結果を図１に示した。

【００３４】比較例３ この比較例では、４７ｋＤａ抗原をラテックスに物理的
吸着により結合させて梅毒トレポネーマ抗原結合ラテッ
クス液を作製し、その感度の測定を行った。 （１）物理的吸着による４７ｋＤａ抗原のラテックスへ
の担持 参考例１で調製した４７ｋＤａ抗原を５００μｇ／ｍｌ
で含有する０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１００
μｌを、スチレン−メタクリル酸共重合体ラテックス
（固形分１０％（ｗ／ｖ）の水懸濁液、カルボキシル基
０．２５ｍｅｑＣＯＯ^- ／ｇ固形分、粒径０．４μｍ、
積水化学工業社製）１００μｌに添加し、４℃で１時間
攪拌した。次いでＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含有する０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍｌを添加し、１．
５時間攪拌した。この液を１０℃で３０分間、１８００
０ｒｐｍで遠心分離した。得られた沈殿物に、ＢＳＡを
０．２５％（ｗ／ｖ）含有する０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７．４）５ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁さ
せ、梅毒トレポネーマ抗原担持ラテックス液を調製し
た。

【００３５】（２）感度の測定 上記（１）で得られた梅毒トレポネーマ抗原担持ラテッ
クス液を使用したことの他は、実施例１の（３）と同様
にして、感度の測定を行い、結果を図１に示した。

【００３６】以下の実施例３及び比較例４においては、
梅毒トレポネーマ抗原結合ラテックス液（実施例３）及
び梅毒トレポネーマ抗原担持ラテックス液（比較例４）
の界面活性剤共存時の安定性を試験した。 実施例３ 実施例１の（１）、（２）に従って調製した梅毒トレポ
ネーマ抗原結合ラテックス液２ｍｌに、界面活性剤とし
てトライトンＸー１００（ナカライテスク社製）を１重
量％含むＰＢＳ溶液を１ｍｌ加え、室温で３時間激しく
攪拌した。遠心分離によりトライトンＸー１００を除去
後、ＰＢＳで２回洗浄した後、ＢＳＡを０．５（ｗ／
ｖ）％含有するＰＢＳ２ｍｌに懸濁した。得られた梅毒
トレポネーマ抗原結合ラテックス液を使用したことの他
は、実施例１の（３）と同様にして、感度の測定を行
い、結果を図２に示した。

【００３７】比較例４ 実施例３の梅毒トレポネーマ抗原結合ラテックス液２ｍ
ｌの代わりに、比較例３の（１）に従って調製した梅毒
トレポネーマ抗原担持ラテックス液２ｍｌを用いたこと
の他は、実施例３と同様にしてトライトンＸー１００処
理梅毒トレポネーマ抗原担持ラテックス液を得、実施例
３と同様にして感度の測定を行い、結果を図２に示し
た。

【００３８】なお、図２には、界面活性剤処理をしない
場合と比較するために、実施例１及び比較例３で得られ
た感度測定の結果も示した。

【００３９】

【発明の効果】請求項１記載の免疫学的梅毒診断試薬の
構成は上記の通りであり、スペーサーを介して、不溶性
担体と遺伝子組換え手法を用いて得られた梅毒トレポネ
ーマの４７ｋＤａ抗原がそれぞれ共有結合されているの
で、大量生産可能で、安定した抗原活性を持つ４７ｋＤ
ａ抗原が、安定性良く担体に担持され、従来方法と同等
以上の感度を有する免疫学的梅毒診断試薬を提供する。
また、界面活性剤が存在しても感度が低下しない免疫学
的梅毒診断試薬を提供する。請求項２記載の免疫学的梅
毒診断試薬の構成は上記の通りであり、請求項１記載の
免疫学的梅毒診断試薬において、スペーサーがγ−アミ
ノ酪酸又はε−アミノカプロン酸であるので、４７ｋＤ
ａ抗原が、より安定性良く担体に担持され、より安定な
免疫学的梅毒診断試薬を提供する。

【００４０】請求項３記載の免疫学的梅毒診断試薬の構
成は上記の通りであり、請求項１又は２記載の免疫学的
梅毒診断試薬において、活性基がカルボキシル基である
ので、４７ｋＤａ抗原が、より安定性良く担体に担持さ
れ、より安定な免疫学的梅毒診断試薬を提供する。請求
項４記載の免疫学的梅毒診断試薬の構成は上記の通りで
あり、請求項１、２又は３記載の免疫学的梅毒診断試薬
において、不溶性担体とスペーサー及びスペーサーと梅
毒トレポネーマの４７ｋＤａ抗原との、それぞれの共有
結合に用いる化合物が、１−エチル−３−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩であるので、
４７ｋＤａ抗原が、より安定性良く担体に担持され、よ
り安定な免疫学的梅毒診断試薬を提供する。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１、２及び比較例１〜３の感度測定の結
果を示すグラフである。

【図２】実施例１、３及び比較例３、４の感度測定の結
果を示すグラフである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 活性基を有する不溶性担体の該活性基に
   スペーサーが共有結合されており、該スペーサーに、遺
   伝子組換え手法を用いて得られた、梅毒トレポネーマの
   ４７ｋＤａ抗原が共有結合されている不溶性担体からな
   ることを特徴とする免疫学的梅毒診断試薬。
2. 【請求項２】 スペーサーがγ−アミノ酪酸又はε−ア
   ミノカプロン酸である請求項１記載の免疫学的梅毒診断
   試薬。
3. 【請求項３】 活性基がカルボキシル基である請求項１
   又は２記載の免疫学的梅毒診断試薬。
4. 【請求項４】 不溶性担体とスペーサー及びスペーサー
   と梅毒トレポネーマの４７ｋＤａ抗原との、それぞれの
   共有結合に用いる化合物が、１−エチル−３−（３−ジ
   メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩である請
   求項１、２又は３記載の免疫学的梅毒診断試薬。