JPH09168385A - 新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途 - Google Patents
新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途Info
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- JPH09168385A JPH09168385A JP34963195A JP34963195A JPH09168385A JP H09168385 A JPH09168385 A JP H09168385A JP 34963195 A JP34963195 A JP 34963195A JP 34963195 A JP34963195 A JP 34963195A JP H09168385 A JPH09168385 A JP H09168385A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Alcoholic Beverages (AREA)
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法及びそ
の用途を提供する。 【構成】アスペルギルス（Aspergillus）属に属し、β
−グルコシダーゼを生産する能力を有する微生物から得
られ、広い基質特異性を有している。本酵素は食品用酵
素として有用である。
の用途を提供する。 【構成】アスペルギルス（Aspergillus）属に属し、β
−グルコシダーゼを生産する能力を有する微生物から得
られ、広い基質特異性を有している。本酵素は食品用酵
素として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なβ−グルコシダ
ーゼおよびその製造法に関する。更に詳細にはアスペル
ギルス（Aspergillus）属に属し、β−グルコシダーゼ
を生産する能力を有する微生物から得られ、β−1,4−
グルコシド結合を切断する活性を有する新規なβ−グル
コシダーゼ及びその製造法に関する。本発明のβ−グル
コシダーゼは食品用酵素等各種の用途に利用される。
ーゼおよびその製造法に関する。更に詳細にはアスペル
ギルス（Aspergillus）属に属し、β−グルコシダーゼ
を生産する能力を有する微生物から得られ、β−1,4−
グルコシド結合を切断する活性を有する新規なβ−グル
コシダーゼ及びその製造法に関する。本発明のβ−グル
コシダーゼは食品用酵素等各種の用途に利用される。
【０００２】
【従来の技術】β−グルコシダーゼとはβ−Ｄ−グルコ
ピラノシド結合に対して特異性を示す加水分解反応を触
媒する酵素の総称として用いられる。本酵素は広く細
菌、糸状菌、植物及び動物に分布し、起源により各種基
質に対する加水分解速度は著しく異なっている。例え
ば、ゲンチオビオースに特異性の高いときはゲンチオビ
アーゼと称したり、セロビオースに特異性が高い酵素は
セロビアーゼと称することもある。
ピラノシド結合に対して特異性を示す加水分解反応を触
媒する酵素の総称として用いられる。本酵素は広く細
菌、糸状菌、植物及び動物に分布し、起源により各種基
質に対する加水分解速度は著しく異なっている。例え
ば、ゲンチオビオースに特異性の高いときはゲンチオビ
アーゼと称したり、セロビオースに特異性が高い酵素は
セロビアーゼと称することもある。
【０００３】例えば、Candida属由来、Aspergillus属由
来、Thermoascus属由来、Botryodiplodia属由来及びSac
charomyces属由来のβ−グルコシダーゼはその各種性質
が比較検討されている［Enzyme Microb. Technol., ４
巻、73頁（1982）］。また、そのほかにもSaccharomyce
s属由来（特開昭63-28389）、Bacillus属由来（特開平
２-286083）の酵素が報告されている。
来、Thermoascus属由来、Botryodiplodia属由来及びSac
charomyces属由来のβ−グルコシダーゼはその各種性質
が比較検討されている［Enzyme Microb. Technol., ４
巻、73頁（1982）］。また、そのほかにもSaccharomyce
s属由来（特開昭63-28389）、Bacillus属由来（特開平
２-286083）の酵素が報告されている。
【０００４】更に、Aspergillus oryzae由来の酵素（表
３においてと示す）［J. Biochem., 85巻、335頁（19
79）］、Aspergillus niger由来の酵素（表３において
と示す）［Bios. Biot. Biochem., 57巻、12号、2172
頁（1993）］、Aspergillusniger由来の酵素（表３にお
いてと示す）［Methods in Enzymology, 160巻、575
頁（1988）］、Aspergillus niger由来の酵素（表３に
おいてと示す）［Eur. J. Biochem., 206巻、651頁
（1992）］及びAspergillus niger由来の酵素（表３に
おいてと示す）［Appl. Biochem. Biotechnol., 39
巻、（1993）］等が報告されている。
３においてと示す）［J. Biochem., 85巻、335頁（19
79）］、Aspergillus niger由来の酵素（表３において
と示す）［Bios. Biot. Biochem., 57巻、12号、2172
頁（1993）］、Aspergillusniger由来の酵素（表３にお
いてと示す）［Methods in Enzymology, 160巻、575
頁（1988）］、Aspergillus niger由来の酵素（表３に
おいてと示す）［Eur. J. Biochem., 206巻、651頁
（1992）］及びAspergillus niger由来の酵素（表３に
おいてと示す）［Appl. Biochem. Biotechnol., 39
巻、（1993）］等が報告されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
のβ−グルコシダーゼは、その基質特異性において満足
できるものではなく、より広い基質に作用する新規なβ
−グルコシダーゼの開発が望まれていた。
のβ−グルコシダーゼは、その基質特異性において満足
できるものではなく、より広い基質に作用する新規なβ
−グルコシダーゼの開発が望まれていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】このような状況を鑑み、
本発明者らは鋭意検討を加えた結果、土壌より新たに採
取した微生物がより広い基質特異性を有する新規なβ−
グルコシダーゼを著量生産することを見い出し本発明を
完成した。
本発明者らは鋭意検討を加えた結果、土壌より新たに採
取した微生物がより広い基質特異性を有する新規なβ−
グルコシダーゼを著量生産することを見い出し本発明を
完成した。
【０００７】新たに土壌より採取した微生物の菌学的性
質を以下に記載する。
質を以下に記載する。
【０００８】各種培地における生育 ポテトデキストロース寒天斜面 生育良好。白色菌叢は旺盛で高く盛り上がる。黒色分生
子頭は疎ら綿毛状
子頭は疎ら綿毛状
【０００９】麦芽寒天平板（Blakeslee's） 生育はかなり速やか。白色菌糸は綿毛状で良く盛り上が
る。集落の周縁はやや極限的生育を示す。分生子柄は突
出して、高く長く気中へ伸長し、大小の分生子頭は黒褐
色で、全面を粗に覆う。裏面は白〜淡黄色。
る。集落の周縁はやや極限的生育を示す。分生子柄は突
出して、高く長く気中へ伸長し、大小の分生子頭は黒褐
色で、全面を粗に覆う。裏面は白〜淡黄色。
【００１０】チャペック寒天平板 菌糸の生育は始め悪いが、日を経て広く拡大的に成長す
る。菌叢は白色綿毛状で、分生子柄は突出して気中へ伸
長する。大小の分生子頭は黒色粗に全面を覆う。裏面は
白色。
る。菌叢は白色綿毛状で、分生子柄は突出して気中へ伸
長する。大小の分生子頭は黒色粗に全面を覆う。裏面は
白色。
【００１１】 形態 菌糸 ：有隔壁、無色、φ２〜４μm 分生子頭 ：分割、円盤状、黒褐色、φ100〜500μm 分生子柄 ：平滑、厚壁、淡褐色、φ６〜14、長さ１〜８mm 頂嚢 ：球状、大小様々（10〜80μm） ファイライド：二段、３×６、４×８μm（時に大型亜球、梨型あり） 分生子 ：球〜亜球型、φ３〜５μm、突起又は粗面、黒褐色 菌核 ：なし 閉子嚢核 ：なし
【００１２】ポテトデキストロース寒天培地、麦芽寒天
培地で共に菌叢は高く綿毛状。分生子頭は黒色でカラム
状に良く分割。比較的粗密なため下部の白色菌糸が目立
つ。分生子柄は長く、７〜８mmにも達する。フィアライ
ドは異常に大きく、直径が10〜20μm。しかも四角異形
のものも認める。以上の特徴から本菌株はアスペルギル
ス・プルベルレンタス（Aspergillus pulverulentus）
と同定され、アスペルギルス・プルベルレンタス YM-8
0と命名した。
培地で共に菌叢は高く綿毛状。分生子頭は黒色でカラム
状に良く分割。比較的粗密なため下部の白色菌糸が目立
つ。分生子柄は長く、７〜８mmにも達する。フィアライ
ドは異常に大きく、直径が10〜20μm。しかも四角異形
のものも認める。以上の特徴から本菌株はアスペルギル
ス・プルベルレンタス（Aspergillus pulverulentus）
と同定され、アスペルギルス・プルベルレンタス YM-8
0と命名した。
【００１３】参考文献 K. B. Raper, D. I. Fennel.(1965) "The Genus Aspergillus" p.293, 357 Williams & Wilkins Co.
【００１４】 J. C. Gilman.(1966) "A manual of Soil Fungi" p.214 The Iowa State Univercity
【００１５】井上憲政(1959) "応用黴学の理論と実際" p.61 技報堂（東京）
【００１６】友田宜孝(1957) "微生物工学講座-1" p.191 共立出版（東京）
【００１７】尚、本菌株は、通商産業省工業技術院生命
工学工業技術研究所に第15340号（FERM P-15340）とし
て寄託されている。
工学工業技術研究所に第15340号（FERM P-15340）とし
て寄託されている。
【００１８】本菌株を使用して新規なβ−グルコシダー
ゼを生産蓄積させる為の培養方法としては、液体培養
法、固体培養法の何れでもよいが、好ましくは固体培養
法が行われる。
ゼを生産蓄積させる為の培養方法としては、液体培養
法、固体培養法の何れでもよいが、好ましくは固体培養
法が行われる。
【００１９】例えば固体培養は、それ自体公知の方法で
行われる。菌体増殖に必要な成分を含む固体基質（例え
ば、小麦ふすま単独或いは小麦ふすまに種々の添加物、
例えば、きな粉、大豆粉、アンモニウム塩、硝酸塩、尿
素、グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリペプトン、コ
ーンスティープリカー、肉エキス、酵母エキス、蛋白質
加水分解物などの有機及び無機の窒素化合物などを添加
し、又、適当な無機塩類を加えることもできる）などに
水分を含有させたものを培養器に入れ、これに本菌株を
接種して該菌株の生育できる温度で培養すればよい。
行われる。菌体増殖に必要な成分を含む固体基質（例え
ば、小麦ふすま単独或いは小麦ふすまに種々の添加物、
例えば、きな粉、大豆粉、アンモニウム塩、硝酸塩、尿
素、グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリペプトン、コ
ーンスティープリカー、肉エキス、酵母エキス、蛋白質
加水分解物などの有機及び無機の窒素化合物などを添加
し、又、適当な無機塩類を加えることもできる）などに
水分を含有させたものを培養器に入れ、これに本菌株を
接種して該菌株の生育できる温度で培養すればよい。
【００２０】また、培養方法には特に制限はなく、静置
培養によってもよく、培養物を常時混合するような回転
培養や流動層培養などによっても行うことができるが、
設備投資の少ない培養装置としては静置培養が好まし
い。
培養によってもよく、培養物を常時混合するような回転
培養や流動層培養などによっても行うことができるが、
設備投資の少ない培養装置としては静置培養が好まし
い。
【００２１】本発明において、培養の形態は、例えば固
体培養で、培養温度は通常15から45℃、好ましくは25か
ら35℃程度で、１から20日間、好ましくは２から10日間
程度培養する。
体培養で、培養温度は通常15から45℃、好ましくは25か
ら35℃程度で、１から20日間、好ましくは２から10日間
程度培養する。
【００２２】ついで、このようにして得られた培養物よ
り水、生理食塩水、または、緩衝液などを用いて抽出を
おこない、固形分をのぞいて培養抽出液を得る。そし
て、このようにして得た培養抽出液からβ−グルコシダ
ーゼを単離し、本発明のβ−グルコシダーゼを得る。
り水、生理食塩水、または、緩衝液などを用いて抽出を
おこない、固形分をのぞいて培養抽出液を得る。そし
て、このようにして得た培養抽出液からβ−グルコシダ
ーゼを単離し、本発明のβ−グルコシダーゼを得る。
【００２３】まず、培養抽出液からβ−グルコシダーゼ
を単離精製するためには、例えば、限外ろ過濃縮、硫安
分画処理、有機溶媒分画処理、イオン交換クロマトグラ
フィー処理、疎水クロマトグラフィー処理、ゲルろ過処
理、分取ゲル電気泳動処理などのいずれかを必要に応じ
て組み合わせた処理を行い、必要ならば、脱水あるいは
乾燥を行い目的とする酵素を製造する。
を単離精製するためには、例えば、限外ろ過濃縮、硫安
分画処理、有機溶媒分画処理、イオン交換クロマトグラ
フィー処理、疎水クロマトグラフィー処理、ゲルろ過処
理、分取ゲル電気泳動処理などのいずれかを必要に応じ
て組み合わせた処理を行い、必要ならば、脱水あるいは
乾燥を行い目的とする酵素を製造する。
【００２４】また、液体培養の場合は、当該微生物が良
好に生育し、酵素を順調に生産するために必要な炭素
源、窒素源、無機塩、必要な栄養源等を含有する合成培
地又は天然培地を用いることができる。
好に生育し、酵素を順調に生産するために必要な炭素
源、窒素源、無機塩、必要な栄養源等を含有する合成培
地又は天然培地を用いることができる。
【００２５】例えば、炭素源としては、澱粉又はその組
成画分、焙焼デキストリン、加工澱粉、澱粉誘導体、物
理処理澱粉及びα−澱粉等の炭水化物が使用できる。具
体例としては、可溶性澱粉、トウモロコシ澱粉、馬鈴薯
澱粉、甘藷澱粉、デキストリン、アミロペクチン、アミ
ロース等があげられる。
成画分、焙焼デキストリン、加工澱粉、澱粉誘導体、物
理処理澱粉及びα−澱粉等の炭水化物が使用できる。具
体例としては、可溶性澱粉、トウモロコシ澱粉、馬鈴薯
澱粉、甘藷澱粉、デキストリン、アミロペクチン、アミ
ロース等があげられる。
【００２６】窒素源としては、ポリペプトン、カゼイ
ン、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー或
いは大豆又は大豆粕などの抽出物等の有機窒素源物質、
硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機塩窒素
化合物、グルタミン酸等のアミノ酸類が挙げられる。
ン、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー或
いは大豆又は大豆粕などの抽出物等の有機窒素源物質、
硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機塩窒素
化合物、グルタミン酸等のアミノ酸類が挙げられる。
【００２７】そして無機塩類としては、塩化第一鉄、塩
化第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄等の鉄イオン含有化
合物、リン酸カリウム塩、リン酸ナトリウム塩等のリン
酸塩、硫酸マグネシウム等のマグネシウム塩、塩化カル
シウム等のカルシウム塩、炭酸ナトリウム等のナトリウ
ム塩等が用いられる。
化第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄等の鉄イオン含有化
合物、リン酸カリウム塩、リン酸ナトリウム塩等のリン
酸塩、硫酸マグネシウム等のマグネシウム塩、塩化カル
シウム等のカルシウム塩、炭酸ナトリウム等のナトリウ
ム塩等が用いられる。
【００２８】培養は、振盪培養若しくは、通気攪拌培養
等の好気的条件下に於いて、培地をpH４〜８の範囲、好
ましくはpH６〜７の範囲に調整し、温度20〜35℃の範
囲、好ましくは、25〜30℃で実施し、通常１〜５日間培
養するのが望ましいが、この条件以外であっても微生物
が生育し、目的とする酵素を生成する条件であれば特に
制限されない。
等の好気的条件下に於いて、培地をpH４〜８の範囲、好
ましくはpH６〜７の範囲に調整し、温度20〜35℃の範
囲、好ましくは、25〜30℃で実施し、通常１〜５日間培
養するのが望ましいが、この条件以外であっても微生物
が生育し、目的とする酵素を生成する条件であれば特に
制限されない。
【００２９】ついで、これらの粗酵素液を限外ろ過膜で
脱塩、濃縮した後、硫安塩析又は有機溶媒沈降等により
酵素を回収する。その後、上述したようにして精製し、
高純度の新規なβ−グルコシダーゼ標品を得ることがで
きる。このようにして得られた新規なβ−グルコシダー
ゼの酵素化学的性質について以下に述べる。
脱塩、濃縮した後、硫安塩析又は有機溶媒沈降等により
酵素を回収する。その後、上述したようにして精製し、
高純度の新規なβ−グルコシダーゼ標品を得ることがで
きる。このようにして得られた新規なβ−グルコシダー
ゼの酵素化学的性質について以下に述べる。
【００３０】 活性測定法：10mMのp−ニトロフェニ
ル−β−Ｄ−グルコシド（以下、PNPGと略す）0.5mlに5
0mMマッキルバイン緩衝液（pH4.0）0.4mlを加え、酵素
液0.1mlを添加して、50℃で15分間反応する。反応後、1
00mMの炭酸ナトリウム液４mlを加えて反応を停止した
後、遊離したp−ニトロフェノール量を波長420nmで比色
定量する。１分間当たり、１μmolに相当するp−ニトロ
フェノールを生成する酵素量を１単位とする。
ル−β−Ｄ−グルコシド（以下、PNPGと略す）0.5mlに5
0mMマッキルバイン緩衝液（pH4.0）0.4mlを加え、酵素
液0.1mlを添加して、50℃で15分間反応する。反応後、1
00mMの炭酸ナトリウム液４mlを加えて反応を停止した
後、遊離したp−ニトロフェノール量を波長420nmで比色
定量する。１分間当たり、１μmolに相当するp−ニトロ
フェノールを生成する酵素量を１単位とする。
【００３１】 基質特異性：各種基質を使用して活性
測定法に準じて測定した。10mM濃度の各種基質に対する
相対活性を表１にまとめて表示する。
測定法に準じて測定した。10mM濃度の各種基質に対する
相対活性を表１にまとめて表示する。
【００３２】
【表１】
【００３３】表より明らかなように、セロビオース、ゲ
ンチオビオース、ヘリシン、フェニール β−グルコシ
ド、アルブチン、ソホロース等に良く作用し、サリシン
やフロリジンにも作用することが判る。
ンチオビオース、ヘリシン、フェニール β−グルコシ
ド、アルブチン、ソホロース等に良く作用し、サリシン
やフロリジンにも作用することが判る。
【００３４】 至適pH ：10mM PNPGを基質とし
て、各種pHの緩衝液（50mM マッキルバイン緩衝液及び
トリス-塩酸緩衝液）を用いて50℃、30分間反応した。
その結果、至適pHは約4.0付近にある。（図１）
て、各種pHの緩衝液（50mM マッキルバイン緩衝液及び
トリス-塩酸緩衝液）を用いて50℃、30分間反応した。
その結果、至適pHは約4.0付近にある。（図１）
【００３５】 至適温度 ：10mM PNPGを基質とし
て、50mM マッキルバイン緩衝液（pH4.0）を用いて各温
度で30分間反応した。その結果、至適温度は約60℃付近
にある。（図２）
て、50mM マッキルバイン緩衝液（pH4.0）を用いて各温
度で30分間反応した。その結果、至適温度は約60℃付近
にある。（図２）
【００３６】 pH安定性 ：10mM PNPGを基質とし
て、酵素液を50mM マッキルバイン緩衝液（pH３〜７）
を用いて40℃、60分間処理した後反応した。その結果、
pH安定性はpH３〜７付近にある。（図３）
て、酵素液を50mM マッキルバイン緩衝液（pH３〜７）
を用いて40℃、60分間処理した後反応した。その結果、
pH安定性はpH３〜７付近にある。（図３）
【００３７】 熱安定性 ：10mM PNPGを基質とし
て、酵素を50mM マッキルバイン緩衝液（pH4.0）に溶解
し、各温度で10分間処理した後反応した。その結果、熱
安定性は約60℃まで安定である。（図４）
て、酵素を50mM マッキルバイン緩衝液（pH4.0）に溶解
し、各温度で10分間処理した後反応した。その結果、熱
安定性は約60℃まで安定である。（図４）
【００３８】 分子量 ：約118,000（SDS-PAGE）
【００３９】 等電点 ：約4.5±0.1
【００４０】 阻害剤 ：各種阻害剤（1mM）を含
む10mM PNPGを基質として活性測定法に従って反応し
た。その結果を表２に示す。
む10mM PNPGを基質として活性測定法に従って反応し
た。その結果を表２に示す。
【００４１】
【表２】
【００４２】表より明らかなようにNa+,K+,Mn2+,Al3+,F
e2+,Mg2+,Zn2+,Ba2+,Cd2+,Cu2+,Ni2+,Co2+,Ca2+,EDTA,
Ｎ−エチルマレイミド,モノヨード酢酸で実質的に阻害
されず、SDS,Hg2+,Ag+,pCMBで強く阻害され、Sn2+,Fe3+
でも阻害される。
e2+,Mg2+,Zn2+,Ba2+,Cd2+,Cu2+,Ni2+,Co2+,Ca2+,EDTA,
Ｎ−エチルマレイミド,モノヨード酢酸で実質的に阻害
されず、SDS,Hg2+,Ag+,pCMBで強く阻害され、Sn2+,Fe3+
でも阻害される。
【００４３】本発明のβ−グルコシダーゼを従来より知
られている酵素と比較する。その結果を表３に示す。
られている酵素と比較する。その結果を表３に示す。
【００４４】
【表３】
【００４５】表より明らかなように、本発明のβ−グル
コシダーゼは従来より知られている酵素とは明らかに異
なり新規なβ−グルコシダーゼであると言える。
コシダーゼは従来より知られている酵素とは明らかに異
なり新規なβ−グルコシダーゼであると言える。
【００４６】更に、本発明の新規なβ−グルコシダーゼ
の用途について記載する。本発明の酵素は、上述したよ
うにβ-1,4-結合持つオリゴ糖や配糖体を分解する作用
を持つため、各種の食品に応用する際に有用である。例
えば、焼酎醸造に於ける醗酵歩合の向上、製パンにおけ
る酵素の利用、各種果汁の清澄化にペクチナーゼと併用
する等、広く利用することができる。これらの場合の利
用方法については、通常の方法が適用できる。
の用途について記載する。本発明の酵素は、上述したよ
うにβ-1,4-結合持つオリゴ糖や配糖体を分解する作用
を持つため、各種の食品に応用する際に有用である。例
えば、焼酎醸造に於ける醗酵歩合の向上、製パンにおけ
る酵素の利用、各種果汁の清澄化にペクチナーゼと併用
する等、広く利用することができる。これらの場合の利
用方法については、通常の方法が適用できる。
【００４７】以下、実施例により本発明を詳述する。な
お、本発明はこれらに限定されるものではない。
お、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４８】
実施例１ アスペルギルス・プルベルレンタス YM-80
の培養 下記の組成の種培地100ml（pH4.7）を用いてアスペルギ
ルス・プルベルレンタス YM-80（FERM P-15340）を接
種し、30℃で２日間培養した。
の培養 下記の組成の種培地100ml（pH4.7）を用いてアスペルギ
ルス・プルベルレンタス YM-80（FERM P-15340）を接
種し、30℃で２日間培養した。
【００４９】
【００５０】次いで、下記組成の培地に培養した種培地
20mlを接種し、29℃に４日間培養した。 培養後、500mlの水を添加し、ろ過して粗酵素液とし
た。
20mlを接種し、29℃に４日間培養した。 培養後、500mlの水を添加し、ろ過して粗酵素液とし
た。
【００５１】実施例２ 酵素の精製 実施例１で得られた粗酵素液（400ml）を限外濾過膜濃
縮後、40％飽和となるように固形硫安を添加、塩析し
た。次いで塩析沈殿物を脱塩後、10mMのリン酸緩衝液
（pH7.0）に溶解し、DEAE−Toyopearl 650Mカラムによ
り不純蛋白質を吸着分離した。
縮後、40％飽和となるように固形硫安を添加、塩析し
た。次いで塩析沈殿物を脱塩後、10mMのリン酸緩衝液
（pH7.0）に溶解し、DEAE−Toyopearl 650Mカラムによ
り不純蛋白質を吸着分離した。
【００５２】非吸着画分をDEAE−Toyopearl 650Mカラム
（pH8.5）に流し、吸着した活性画分を食塩濃度を直線
的に上げて溶出した。溶出活性画分に硫安を２Ｍ添加溶
解し、同様の硫安を含む緩衝液で平衡化したButyl−Toy
opearl 650Mカラムに流し、吸着した活性画分を硫安濃
度を直線的に低下させて流出した。最後に、溶出活性画
分はSepacryl 200Sカラムによるゲル濾過で精製し、単
一の精製酵素を得た。本精製酵素を用いて、前述したと
おりの酵素化学的性質を明らかにした。
（pH8.5）に流し、吸着した活性画分を食塩濃度を直線
的に上げて溶出した。溶出活性画分に硫安を２Ｍ添加溶
解し、同様の硫安を含む緩衝液で平衡化したButyl−Toy
opearl 650Mカラムに流し、吸着した活性画分を硫安濃
度を直線的に低下させて流出した。最後に、溶出活性画
分はSepacryl 200Sカラムによるゲル濾過で精製し、単
一の精製酵素を得た。本精製酵素を用いて、前述したと
おりの酵素化学的性質を明らかにした。
【００５３】実施例３ 麦焼酎醸造の醗酵に及ぼす効果 一次仕込みとして、ビーカーに焼酎白麹25ｇ、くみ水30
mlに前培養した、協会焼酎２号酵母を１×109ケ添加
し、25℃で６日間発酵させた。
mlに前培養した、協会焼酎２号酵母を１×109ケ添加
し、25℃で６日間発酵させた。
【００５４】二次仕込みとして、掛原料50ｇ及び本発明
のβ−グルコシダーゼを含むくみ水90mlを加え、25℃で
15日間発酵させた。
のβ−グルコシダーゼを含むくみ水90mlを加え、25℃で
15日間発酵させた。
【００５５】東洋濾紙No.5Cでろ過後、ろ液について各
種分析を行った。その結果を各３ロットの平均値で表３
に示す。
種分析を行った。その結果を各３ロットの平均値で表３
に示す。
【００５６】
【表４】
【００５７】本発明のβ−グルコシダーゼを添加使用す
ることにより、焼酎発酵歩合が向上することが明らかと
なった。
ることにより、焼酎発酵歩合が向上することが明らかと
なった。
【００５８】実施例４ 製パンへの応用 小麦粉100g、食塩1.5g、ショートニング３g、イースト
２g、ブロム酸カリ1.5mgと適当量の水を用いてストレー
ト・ドウ法での最適水吸収量、最適攪拌時間を用いて28
℃で２時間生地発酵した。ガス抜きや型入れは機械的に
行い、焼成は218℃で24分行った。なお、しょ糖の添加
量は適宜変化させて、本発明の酵素による効果を調べ
た。その結果、ドウ組成に本発明のβ−グルコシダーゼ
を添加することによって、特にしょ糖の添加量が少ない
場合において、本発明の酵素を使用することによって、
ガス生成量及びローフ容積への効果が著しかった。
２g、ブロム酸カリ1.5mgと適当量の水を用いてストレー
ト・ドウ法での最適水吸収量、最適攪拌時間を用いて28
℃で２時間生地発酵した。ガス抜きや型入れは機械的に
行い、焼成は218℃で24分行った。なお、しょ糖の添加
量は適宜変化させて、本発明の酵素による効果を調べ
た。その結果、ドウ組成に本発明のβ−グルコシダーゼ
を添加することによって、特にしょ糖の添加量が少ない
場合において、本発明の酵素を使用することによって、
ガス生成量及びローフ容積への効果が著しかった。
【００５９】実施例５ オリゴ糖の製造 グルコース １ｇに、pH4.0、50mMマッキルバイン緩衝
液0.5ml及び本発明のβ−グルコシダーゼ溶液0.5mlを添
加し、50℃で８時間反応させた。反応後、100℃に５分
間放置した後、室温に冷却した。
液0.5ml及び本発明のβ−グルコシダーゼ溶液0.5mlを添
加し、50℃で８時間反応させた。反応後、100℃に５分
間放置した後、室温に冷却した。
【００６０】生成したオリゴ糖をトヨパールHW-40Sカラ
ムで精製し、生成オリゴ糖量を測定した。その結果を表
４に示す。
ムで精製し、生成オリゴ糖量を測定した。その結果を表
４に示す。
【００６１】
【表５】
【００６２】
【発明の効果】本発明により、広い基質特異性を有する
新規なβ−グルコシダーゼが提供される。本発明の新規
なβ−グルコシダーゼは、各種食品業界において、有効
に利用される。
新規なβ−グルコシダーゼが提供される。本発明の新規
なβ−グルコシダーゼは、各種食品業界において、有効
に利用される。
【図１】本発明の新規なβ−グルコシダーゼの至適pHを
示す図である。
示す図である。
図中で黒丸はマッキルバイン緩衝液を使用した場合を示
し、三角はトリス−塩酸緩衝液を使用した場合を示す。
し、三角はトリス−塩酸緩衝液を使用した場合を示す。
【図２】本発明の新規なβ−グルコシダーゼの至適温度
を示す図である。
を示す図である。
【図３】本発明の新規なβ−グルコシダーゼのpH安定性
を示す図である。
を示す図である。
【図４】本発明の新規なβ−グルコシダーゼの熱安定性
を示す図である。
を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:66）
Claims (4)
- 【請求項１】下記の酵素化学的性質を有する新規なβ−
グルコシダーゼ。 作用 ：多糖類、オリゴ糖類及び配糖体類に作
用し、グルコースを遊離する。 基質特異性：セロオリゴ糖、ゲンチオビオース、ヘ
リシン、サリシン、フェニル−β−グルコシド、ソホロ
ース、アルブチンに作用し、フロリジンにも作用する
が、ステビオシドには実質的に作用しない。 至適pH ：約4.0付近 至適温度 ：約60℃付近 pH安定性 ：pH３〜７付近（40℃、60分） 熱安定性 ：60℃,60分間（pH5.0） 分子量 ：約118,000（SDS-PAGE） - 【請求項２】アスペルギルス・プルベルレンタス ＹＭ
−８０を栄養培地に培養し、以下の酵素化学的性質を有
する新規なβ−グルコシダーゼを生産蓄積せしめ、これ
を採取することを特徴とする新規なアミラーゼの製造
法。 作用 ：多糖類、オリゴ糖類及び配糖体類に作
用し、グルコースを遊離する。 基質特異性：セロオリゴ糖、ゲンチオビオース、ヘ
リシン、サリシン、フェニル−β−グルコシド、ソホロ
ース、アルブチンに作用し、フロリジンにも作用する
が、ステビオシドには実質的に作用しない。 至適pH ：約4.0付近 至適温度 ：約60℃付近 pH安定性 ：pH３〜７付近（40℃、60分） 熱安定性 ：60℃,60分間（pH5.0） 分子量 ：約118,000（SDS-PAGE） - 【請求項３】請求項１記載の新規なβ−グルコシダーゼ
を含んでなる食品用酵素剤。 - 【請求項４】請求項１記載の新規なβ−グルコシダーゼ
を用いて麦焼酎の醪発酵を促進する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34963195A JP3761236B2 (ja) | 1995-12-20 | 1995-12-20 | 新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34963195A JP3761236B2 (ja) | 1995-12-20 | 1995-12-20 | 新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09168385A true JPH09168385A (ja) | 1997-06-30 |
| JP3761236B2 JP3761236B2 (ja) | 2006-03-29 |
Family
ID=18405047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34963195A Expired - Fee Related JP3761236B2 (ja) | 1995-12-20 | 1995-12-20 | 新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3761236B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1355621A1 (en) * | 2001-01-10 | 2003-10-29 | Cotde, Inc. | Skin whitening composition containing arbutin and glucosidase as active ingredients |
| JP2005503811A (ja) * | 2001-09-21 | 2005-02-10 | ジェネンコー・インターナショナル・インク | ｂｇｌ３β−グルコシダーゼ及びそれをエンコードする核酸 |
| JP2013536680A (ja) * | 2010-09-01 | 2013-09-26 | ビオメリュー | Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを検出および／または同定するための、β−グルコシダーゼ活性化剤の使用 |
| CN110809408A (zh) * | 2017-06-30 | 2020-02-18 | 科纳根公司 | 通过β-葡糖苷酶水解甜菊醇糖苷 |
| CN111500560A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-07 | 江南大学 | 一种噬热β-葡萄糖苷酶的制备及应用 |
| CN111593034A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-08-28 | 江南大学 | 利用β-1,6-葡聚糖酶制备低聚龙胆糖的方法及其应用 |
-
1995
- 1995-12-20 JP JP34963195A patent/JP3761236B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1355621A1 (en) * | 2001-01-10 | 2003-10-29 | Cotde, Inc. | Skin whitening composition containing arbutin and glucosidase as active ingredients |
| JP2004517857A (ja) * | 2001-01-10 | 2004-06-17 | コデ インコーポレイティッド | アルブチンとグルコシダーゼを有効成分として含有する美白剤 |
| EP1355621A4 (en) * | 2001-01-10 | 2004-07-21 | Cotde Inc | WHITENING COMPOSITION CONTAINING ARBUTINE AND GLUCOSIDASE AS ACTIVE INGREDIENTS |
| JP2005503811A (ja) * | 2001-09-21 | 2005-02-10 | ジェネンコー・インターナショナル・インク | ｂｇｌ３β−グルコシダーゼ及びそれをエンコードする核酸 |
| JP2013536680A (ja) * | 2010-09-01 | 2013-09-26 | ビオメリュー | Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅを検出および／または同定するための、β−グルコシダーゼ活性化剤の使用 |
| CN110809408A (zh) * | 2017-06-30 | 2020-02-18 | 科纳根公司 | 通过β-葡糖苷酶水解甜菊醇糖苷 |
| CN111500560A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-07 | 江南大学 | 一种噬热β-葡萄糖苷酶的制备及应用 |
| CN111593034A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-08-28 | 江南大学 | 利用β-1,6-葡聚糖酶制备低聚龙胆糖的方法及其应用 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3761236B2 (ja) | 2006-03-29 |
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